CN1272113A - 作为抗病毒剂的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及D－和L－来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物。在一个实施方案中,本发明涉及D－和L－来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物,它们选自具有下列通式的化合物组:(β－D),(β－L),(α－L)以及(α－D),其中R2,R4,R5,R6和R7各自独立,可以相同或不同,它们独立的选自:－H,－F,－Cl,－Br,－I,－NO2,－N(R8)2,－OR8,－SR12,以及－CF3,其中R8独立地为－H或具有1—6个碳原子的烷基,且R12独立地为－H或具有1—10个碳原子的烃基基团;R9,R10和R11各自独立,可以相同或不同,为H或保护的羟基基团;它们的异头和光学异构体;以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。本发明还涉及使用这些化合物的抗病毒组合物,应用这些化合物治疗病毒感染的方法,以及这些化合物在制备用于治疗病毒感染药物方面的用途。

Description

作为抗病毒剂的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物
本发明涉及苯并咪唑核苷同类物和它们作为抗病毒剂的用途。更具体讲，本发明涉及苯并咪唑核苷同类物，其中的糖基基团为来苏呋喃糖基及其衍生物。本发明还涉及制备这类苯并咪唑核苷同类物及其衍生物的方法、包这些化合物的组合物，并涉及这些化合物在抗病毒治疗中的用途。
在整篇申请中，包含(但不限于)出版物、专利以及发表的专利说明书的各种参考文献可通过统一的引证参考。在本专利申请中，将这些公开的参考文献(例如出版物、专利以及发表的专利说明书)融入本公开中，可以更全面地说明本发明所涉及的领域情况。
疱疹病毒家族(Herpesviridae)的成员共有同一种病毒结构。典型的疱疹病毒含有(a)线形的双股DNA，(b)十二面体的衣壳，直径大约为100-120nm，其中含有162个壳粒，(c)无定型的，有时是不对称的物质，其包围在衣壳之外，被称作为皮，以及(d)在其表面上含有病毒糖蛋白刺突的包裹物。
疱疹病毒家族中人类致病菌的主要实例包括疱疹单体病毒(HSV)1，2，以及猕猴(Cercopithecine)疱疹病毒1(B-病毒)；水痘-带状疱疹(其可以引起水痘和带状疱疹)；Epstein-Barr病毒(EBV，其可以引起单核增生)；淋巴隐病毒；人类疱疹病毒6(HHV6)；人类疱疹病毒7(HHV7)以及与卡波济有关的疱疹病毒(KHV)；或人类疱疹病毒8(HHV8)。人类巨细胞病毒(HCMV)，也叫作人类疱疹病毒在免疫抑制个体(参见Alford，C.A.；Britt，W.J.在Roizman，B.；Whitley，R.J.；Lopez，C.等人主编的人类疱疹病毒一书中所著的“巨细胞病毒”，Raven Press，New York，1993 pp.227-255)以及新生儿(参见Alford，C.A；Stagno，S.；Pass，R.F.；Brit，W.J.所著的“骨髓移植中先天性和产期巨细胞病毒感染”，Rev.Infect.Dis.1990，12，s793-s804以及Gallant，J.E.；Moore，R.D.；Richman，D.D.；Keruly，J.；Chaisson，R，E所著的“用Zidovudine治疗的晚期免疫缺损病毒疾病的患者其巨细胞病毒疾病的发病率及自然病史”，J.Infect.Dis.1992，166，1223-1227)中是一种首要的机会致病菌病原体。
动物病原体包括感染的牛鼻气管炎病毒，牛乳头炎病毒，猕猴(Cercopithecine)疱疹病毒1(B-病毒)，它们均为单一病毒；假性狂犬病毒(猪PRV)，马鼻肺炎以及Coital疹病毒(水痘病毒)；狒狒疱疹病毒，Pongine(黑猩猩)疱疹病毒(淋巴隐病毒)；Marek’病病毒(家禽)，火鸡疱疹病毒；疱疹病毒发育不全以及疱疹病毒saimiri(弹状病毒)；等等。可以参见Murphy等人在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“病毒分类学”，1991，RavenPress，New York，P.9-36；Watson等人所著的基因的分子生物学，第四版，1987，Benjamin/Cummings Publ.Co.，Menlo Park，CA，p.904，933。
疱疹病毒基因组(其通常为120至230kb长)可以编码50-200个不同的蛋白质。它们包括涉及核酸代谢的酶的大量排列(例如胸腺嘧啶激酶，胸苷酸酯合成酶，dUTP酶，核糖核苷酸还原酶等)，以及DNA合成酶(例如DNA聚合酶，解旋酶，引发酶)。
在疱疹病毒中，线性的基因组以重复的序列为特征，在各种类型的疱疹病毒中，它们在数量、长度以及序列上进行变化。例如在Epstein-Barr病毒中，基因组的末端具有大量的已鉴定序列的短的(500个碱对)重复以及由3-kb序列的半打重复组成的内部序列。在疱疹单体病毒1和2以及HCMV中，来自两个终端的序列部分以颠倒的方向重复，并且在内部并列排列，将基因组分成两个组分，每个组分中含有其侧面连接有颠倒的重复序列的唯一序列。在这种情况下，这两个组分(长的L臂以及短的S臂)可以彼此转换。从病毒或受感染细胞中提取的DNA由四个等摩尔的群体组成，两个组分的相对方向有所不同。可以参见Watson等人，1987，p935；Roiaman在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹病毒：概述”，1991，Raven Press，New York，P.841-847；Roiaman等人在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹单体病毒及其复制”，199 1，Raven Press，New York，P.849-895。
为了引发感染，病毒需要首先附着在宿主细胞受体上，附着后病毒的包围层与浆膜快速融合。脱包裹的壳粒转移至细胞核的核心，在那里DNA释放到核中并迅速分布。下一步在严格的调控下，开始进行疱疹病毒基因的转录和翻译。有三类基因是已知的，称为α、β和γ(或称为立即，早或晚)。诱导β基因的表达需要α基因的表达；β基因的表达可以诱导γ基因的表达并使α基因的表达停止；γ基因的表达又使β基因的表达停止。因此在复制过程中，疱疹病毒基因的表达有三个明显的波。令人感兴趣的是，上述过程似乎是循环的，感染后不久，至少需要一个病毒蛋白(γ基因产物)去诱导基因的表达。此产物携带病毒进入并帮助开始进入循环。见Watson等人，1987，p935-936；Roiaman在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹单体病毒及其复制”，1991，Raven Press，New York，P.849-895。
一些疱疹病毒，例如HSV-1和HSV-2具有很宽的宿主细胞范围，有效地复合并迅速地破坏被感染的细胞。其它疱疹病毒(例如EBV，HHV6)的宿主细胞范围较窄，或者对于HCMV来说，复制得很慢。可以参见Roiaman在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹单体病毒及其复制”，1991，Raven Press，New York，P.849-895。
疱疹病毒在细胞核中进行复制，其中的核被取代、解聚并变成碎片，宿主染色体的结构上出现空白，其将导致染色体的破坏。宿主蛋白的合成降低得非常迅速(对于大多数疱疹病毒来说，但HCMV是个例外)，宿主核糖体RNA的合成也有所降低，宿主蛋白的糖基化作用停止。子代的生成不可改变地伴随着受感染细胞不可逆的破坏。可以参见Roiaman在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹单体病毒及其复制”，1991，Raven Press，New York，P.849-895。
疱疹病毒可以引起各种疾病症状和复杂的临床症状。对于第一次感染的成年人来说，其症状一般非常严重。疱疹病毒可以引起复发感染，与这些复发感染有关的能力丧失即是很明显的健康问题。最常见的疱疹疾病的复发表现在口面部以及生殖器区域，在美国，复发的疱疹角膜炎是引起失明的首要原因。伴有高几率的复发发作的疱疹生殖器感染，因其频繁地被识别以及其与显著的发病率有关而引起人们的关注。Cohen等人，美国专利申请No.4,709,011,1987年11月24日批准。
在研究由HSV诱导的疾病的分子基础时，研究目标的终点—疾病—与中枢神经系统(CNS)的破坏是同义的。然而，为了能在靶器官上广泛分布，病毒首先在外周部位进行繁殖。在实验系统中，产生HSV表现型的疾病的模型下，神经毒力是以下因素的结果(i)外周繁殖；(ii)CNS的入侵；(iii)CNS的生长。病毒毒力的位点可以归因于HSV基因组上的几个部位，但特别位于tk基因范围内或包围在其周围，并位于L部分的一端。然而，几乎任何HSV基因组的突变或缺失都将导致病毒毒力的降低。可以参见Roiaman在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“疱疹单体病毒及其复制”，1991，RavenPress，New York，P.849-895。
在EBV和HCMV的情况下，急性疱疹病毒通常与感染的单核增生有关。在HCMV感染的潜伏状态下，单细胞是受牵连细胞的主要候选者，感染的单核增生可以通过输血从血清阳性的个体转移到血清阴性的个体上。血清阴性的个体也可以通过血清阳性供给者所提供的细胞或器官的移植受到感染。可以参见Ahmed等人在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“病毒持续性”，1991，Raven Press，NewYork，P.241-265；Stinski在Fields等人所主编的基础病毒学一书中所著的“巨细胞病毒及其复制”，1991，Raven Press，New York，P.929-950。
在畜牧业中，具有经济重要性的疱疹病毒是牛疱疹病毒-1(BHV-1)，其与各种临床疾病的表现有关，包括鼻气管炎，外阴阴道炎，流产，结膜炎，脑炎以及一般性的系统感染。参见Gibbs等人，1977，牛疱疹病毒I：牛疱疹病毒-I。Vet.Bull.(London)47：317-343。
假性狂犬疱疹病毒(PRV)，又称为Aujeszky’s疾病病毒(ADV)是一种除了马之外所有家养动物的主要疾病，其可以引起严重的损害，尤其是对猪和牲畜。猪是ADV的天然宿主。动物通过鼻途径感染，最初的病毒在上呼吸道和消化道的粘膜处进行繁殖后，其通过神经向脑扩散。感染由急性发展到亚临床性，这主要取决于病毒的毒力以及猪的年龄。象其它疱疹病毒一样，PRV可以诱导潜伏的感染，也就是指神经组织的感染。可以参见Berns等人，美国专利申请No.4,680,176，1987年7月14日批准。
目前，用于治疗HCMV的药物中，只有三个通过了FDA：更昔洛韦(参见Crumpacker，C.S.更昔洛韦，New England J.Med.1996，335，721-729)，膦甲酸钠(参见Chrisp，P；Clissold，S.P.在药物杂志中所著的“膦甲酸钠，其抗病毒活性综述，在患有巨细胞病毒视网膜炎的免疫损害患者体内的药代动力学及治疗用途”，1991，41，104-129)，cidofivir(参见Hitchcock，M.J.；Jaffe，H.S.；Martin，J.C.；Stagg，R.J.在Antiviral Chem.&Chemother中所著的“一种具有强抗疱疹病毒活性的新制剂”，1996，7：115-127。(b)Lalezari，，J.P.；Drew，W.L.；Glutzer，E.；James，C.；Miner，D.；Flaherty，J.；Fisher，P.E.；Cundy，K.；Hannigan J.；Martin，J.C.；Jaffe，H.S.在J.infect.Dis.中所著的(S)-1-[3-羟基-2-(膦酰基甲氧基)丙基]胞嘧啶(Cidofivir)：“新颖抗病毒核苷酸同类物的I/II期研究结果”，1995，171，788-796)。所有这些药物均可产生副作用，例如肾动能失调(膦甲酸钠和cidofivir)以及粒细胞减少(更昔洛韦)。另外，由于其较强的耐药性以及较差的口服利用率，需要寻找更有效且更具选择性的药物(参见Field A.K.；Biron K.K.在Clin.Microbiol.Rev.中所著的“修改的“无辜的结尾”：疱疹病毒对抗病毒药物的耐药性”，1994，7，1-13)。
寻找新的抗疱疹病毒药物的发明者们的近来研究集中在卤代苯并咪唑核苷同类物上。1954年，第一篇有关这类化合物的合成和抗病毒评价的报告(参见Tamm，I.；Folkers，K.；Shunk，C.H.；Horsfall，F.L.Jr在J.Exp.Med.中所著的“苯并咪唑N-甙类对流感病毒繁殖的抑制，1954，99，227-250)报道了5，6-二氯-1-(β-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(DRB)，将其作为这一系列中最具活性的抗病毒化合物。不幸的是，随后发现DRB影响多数细胞过程，因此其活性很难与之细胞毒性相分开(参见Bucknall，R.A.在J.Gen.Virol.一书中所著的“取代苯并咪唑对病毒生长和宿主细胞核酸代谢的作用”，1967，1，89-99。(b)Tamm，I.；Sehgal P.B.在Adv.Virus Res.一书中所著的“卤代苯并咪唑核苷及细胞和病毒的RNA合成”，1978；22：187-258)。
“DRB”
1-(β-D-核糖呋喃糖基)-
5，6-二氯苯并咪唑
Figure A9880851700141
在杂环上带有修饰的几种DRB的合成已有报道(参见Townsend，L.B.；Revankar，G.R.在Chem Reviews，1970；70：389-438中所著的“苯并咪唑核苷，核苷酸及有关的衍生物”，)。已发现在这些化合物中，2-取代-5，6-二氯-苯并咪唑核糖核苷的作用是最强的(参见Townsend，L.B.；Devivar，R.V.；Turk，S.T.；Nassiri，MR.；Drach，J.C.在J.Med.Chem.，1995，38，4098-4105中所著的“一些2，5，6-三氯-1-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑的设计、合成以及抗病毒活性”；Zou，R.；Ayres K.R.；Drach，J.C.；Townsend，在J.Med.Chem.，1996，39，3477-3482中所著的“某些二取代的苯并咪唑核糖核苷的合成和抗病毒活性”；Zou R.；Drach，J.C.；Townsend，L.B.，在J.Med.Chem.，1997，40，811-818中所著的“作为治疗人类巨细胞病毒感染有效制剂的2-氯-5，6-二卤代-1-β-D-核糖呋喃糖基苯并咪唑的设计、合成和抗病毒活性评价”；Zou R；Drach，J.C.；Townsend，L.B.在J.Med.Chem.，1997，40，802-810中所著的“作为治疗人类巨细胞病毒感染有效制剂的2-取代-4，5-二氯-和4，6-二氯-1-β-D-核糖呋喃糖基苯并咪唑的设计、合成和抗病毒活性评价”)。例如，已证明2，5，6-三氯-1-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑(TCRB)以及2-溴-5，6-二氯-1-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑(BDCRB)是HCMV的有效抑制剂，此活性与之毒性几乎没有联系(参见Townsend，L.B.；Devivar，R.V.；Turk，S.T.；Nassiri，M.R.；Drach，J.C.在J.Med.Chem.，1995，38，4098-4105中所著的“一些2，5，6-三氯-1-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑的设计、合成以及抗病毒活性”)。
1-(β-D-核糖呋喃糖基)-
2，5，6-三氯苯并咪唑
“BDCRB”1-(β-D-核糖呋喃糖基)-2-溴-5，6-二氯苯并咪唑
Figure A9880851700152
另外，已经制备了几种2-烷硫基及2-苄硫基同类物(参见Devivar，R.V.；Kawashima，E；Revankar，G.R.；Breitenbach，J.M.；Kreske，E.D.；Drach，J.C.；Townsend，L.B.在J.Med.Chem.，1994，37，2942-2948中所著的“一些2-(烷硫基)-以及2-(苄硫基)-5，6-二氯-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑的设计、合成以及抗病毒活性”)。
除了这些D-碳水合物衍生物外，已经对几种碳环化合物(参见Townsend，L.B.；Drach，J.C.；Good，S.S.；Daluge，S.M.；Martin，M.C.发表于7/9/96美国专利申请5,534,535中的“治疗用核苷”)和L-碳水合物(参见Koszalka，G.W.；Chamberlain，SD；Daluge，S.M.；Boyd，F.L.；Tidwell，J.H.；Martin，M.T.；Harvey，R.J.；Frick，L.W.；Perkins，D.G.；Wang，L.H.；Drach，J.C.；Townsend，L.B.；Biron，K.K.在XII国际圆桌会议：核苷、和核苷酸以它们的生物应用，La Jolla，CA，1996年9月上发表的“用于治疗人类巨细胞病毒感染的苯并咪唑”)衍生物进行了合成和评价。
1-(B-L-核糖呋喃糖基)-
2-异丙氨基-5，6-二氯苯并咪唑
Figure A9880851700161
本发明涉及一类新的苯并咪唑核苷同类物，其中的糖基为来苏呋喃糖基及其衍生物。
本发明的一个方面涉及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。在一种实施方案中，本发明涉及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物，它们的异头和光学异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物，它们选自具有下列通式的化合物组：
其中R2，R4，R5，R6和R7各自独立，可以相同或不同，它们独立的选自：-H，-F，-Cl，-Bt，-I，-NO2，-N(R8)2，-OR8，-SR12，以及-CF3，其中R8独立地为-H或具有1-6个碳原子的烷基(包括甲基、乙基、丙基、异丙基以及环丙基)，且R12独立地为-H或具有1-10个碳原子的烃基基团(包括脂肪、脂环和芳香基团，包括烷基、芳基、芳烷基、烷芳基基团)；R9，R10和R11各自独立，可以相同或不同，为H或保护的羟基基团(例如酰基)。
在一种实施方案中，本发明涉及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物，它们的异头和光学异构体；它们的化学保护形式；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物，其中R2选自：-H，-F，-Cl，-Br，-I，-N(R8)2；R4和R7各均为-H；R5和R6各自独立，可以相同或不同，选自-H，-F，-Cl，-Br和-I。
在一种实施方案中，本发明涉及α-D-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。在一种实施方案中，本发明涉及β-D-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。在一种实施方案中，本发明涉及α-L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。在一种实施方案中，本发明涉及β-L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。
在一种实施方案中，本发明涉及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物，它们选自：
1-(来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-溴-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-苄硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；
它们的异头、光学和构型异构体；
它们的化学保护形式；以及
它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
本发明不包括的化合物有1-(5’-脱氧-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑，1-(5’-脱氧-来苏呋喃糖基)-2-溴-5，6-二氯-苯并咪唑，以及1-(5’-脱氧-来苏呋喃糖基)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑。
本发明的另一个方面涉及含有生理上可接受的载体以及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物的组合物。在一个方面中，载体可以是本领域内所定义的制药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面涉及通过使病毒与本发明D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物进行接触，来抑制病毒的复制和繁殖。
本发明的另一个方面涉及治疗和/或预防病毒感染的方法，其包括单独或与制药学上可接受的载体一起给予被感染的宿主治疗有效剂量的本发明抗病毒来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物。
本发明的另一个方面涉及治疗和/或预防肝炎病毒感染的方法，例如肝炎B和肝炎C，其包括使病毒与有效剂量的单独的或与制药学上可接受的载体在一起的本发明抗病毒来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物进行接触。
本发明的另一个方面涉及D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物在制备用于治疗病毒感染药物方面的用途。
本发明的另一个方面涉及制备D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物的方法。
将可以看到，本发明一个方面优选的特征和特性也适用于本发明的其它任意方面。A、本发明的抗病毒化合物
总的来说，本发明抗病毒化合物为苯并咪唑核苷同类物，其包括经1-位与糖基基团Q相连的苯并咪唑基团
Figure A9880851700201
这里的术语“糖基基团”指以环状形式存在的糖基基团，例如那些衍生自呋喃糖(5-元环)的基团。糖基基团的例子包括苏型呋喃糖基(来自苏糖，四碳糖)；核糖呋喃糖基(来自核糖，五碳糖)；阿拉伯糖呋喃糖基(来自阿拉伯糖，五碳糖)；木糖呋喃糖基(来自木糖，五碳糖)以及来苏糖呋喃糖基(来自来苏糖，五碳糖)。下列结构式将说明这些糖的例子。
β-D-苏-呋喃糖基 
Figure A9880851700202
β-D-核糖呋喃糖基 
Figure A9880851700203
β-D-阿拉伯糖呋喃糖基
Figure A9880851700204
β-D-木糖呋喃糖基 
Figure A9880851700205
β-D-来苏糖呋喃糖基
更具体讲，本发明化合物包括经1-位与来苏呋喃糖基基团(或其衍生物)的1’-位相连的苯并咪唑基团。来苏呋喃糖基的特征是2’-OH，3’-OH以及4’-CH2OH位于呋喃糖基平面的同侧。在这种情况下，由于化合物对在4’-碳上的构型不同，来苏呋喃糖基和核糖呋喃糖基通常归属于4’-差向异构体，。
如下所述，这里的术语“苯并咪唑”涉及可被R2，R4，R5，R6和R7取代基分别在2-，4-，5-，6-，7-位上进行一或多个取代的苯并咪唑-1-基基团。
Figure A9880851700211
苯并咪唑取代基R2，R4，R5，R6和R7的实例包含-H，卤素，例如-F，-Cl，-Br，-I，-NO2，-NR2，其中的R为-H或具有1-6个碳原子的烷基基团，-SR，其中的R为-H或具有1-10个碳原子的烃基基团，以及-CF3。
苯并咪唑基团的实例包括卤代苯并咪唑，例如卤代-，二卤代-，三卤代-，四卤代-以及五卤代苯并咪唑，其包括(但不限于)2，5，6-三卤代苯并咪唑(例如，2，5，6-三氯苯并咪唑，2-溴-5，6-二氯苯并咪唑)，2，4，6-三卤代苯并咪唑(例如，2，4，6-三氯苯并咪唑，2-溴-4，6-二氯苯并咪唑)，2，4，5，6-四卤代苯并咪唑(例如，2，4，5，6-四氯苯并咪唑，2-溴-4，5，6-三氯苯并咪唑)。其它苯并咪唑基团的实例包含2-取代-4，5-二卤代苯并咪唑(例如2-氨基-4，5-二氯苯并咪唑，2-异丙氨基-4，5-二氯苯并咪唑，2-甲氧基-4，5-二氯苯并咪唑，2-三氟甲基-4，5-二氯苯并咪唑)。一些苯并咪唑化合物以及它们的制备方法在本领域内是已知的，例如参见美国专利中请No.5,248,672和5,360,795。
在本发明的一个实施方案中，苯并咪唑基团为5，6-二氯苯并咪唑基团。在本发明的另一个实施方案中，苯并咪唑基团为2，5，6-三氯苯并咪唑基团。在本发明的另一个实施方案中，苯并咪唑基团为2-取代-5，6-二氯苯并咪唑基团，其中的2-取代基为氨基基团(即-NH2)，取代的氨基(例如-NHR，-N(R)2，其中的R为具有1-6个碳原子的烷基基团)，卤素基团(例如-F，-Cl，-Br，-I)，巯基基团(即-SH)，或硫醚基团(即-SR，其中的R为具有1-10个碳原子的烃基基团)。
在本发明化合物的实例包括下列化合物、它们的异头物(即α-和β-)和光学(即D-和L-)异构体以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
1-(来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-溴-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-苄硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；
这里所用的“制药学上可以接受的盐类和前药衍生物”涉及任意制药学上可以接受的盐、酯、醚、酯的盐类、溶剂化物，例如乙醇化物或本发明化合物的其它衍生物，它们在给予患者后，可以提供(直接或间接)本发明化合物或者是其活性代谢物或残基。特别优选的衍生物和前药是这样一些化合物，它们在给予哺乳动物后(例如通过口服给予化合物更容易吸收入血)可以增加本发明化合物的生物利用度，或可以提高母体化合物向生物空间(例如大脑或淋巴系统)的转运。
本发明化合物的盐类衍生自无机或有机酸和碱。实例包括有盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸，磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、甲苯-对-磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸以及苯磺酸。其它酸，例如草酸，尽管其本身是制药学上不可接受的，但可以用于盐类的制备，这些盐类是获得本发明化合物及其制药学上可接受的酸加成盐时有用的中间体。碱的实例包括碱金属(例如钠)氢氧化物，碱土金属(例如镁)氢氧化物，氨以及式NW4 +(其中W为C1-4烷基)的化合物。
盐类的实例包括：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天门冬酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐，樟脑磺酸盐、环戊丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、氟庚酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，草酸盐，棕榈酸盐，果胶酸盐，过硫酸盐，苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫代氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。盐的其它例子包括本发明化合物阴离子与合适阳离子如Na+，NH4 +和NW4 +(W为C1-4烷基)所成的盐。
本发明化合物的酯包括对2’，3’-和/或5’-羟基基团进行酯化后得到的羧酸酯(即-O-C(＝O)R)，其中的R选自(1)直链或支链烷基(例如正丙基、叔丁基或正丁基)，烷氧烷基(例如甲氧烷基)，芳烷基(例如苄基)，芳氧烷基(例如苯氧甲基)，芳基(例如被卤素、C1-4烷基或C1-4烷氧基或氨基任意取代的苯基)；(2)磺酸酯，例如烷基磺酸酯(例如甲磺酸酯)或芳烷基磺酸酯；(3)氨基酸酯(例如L-颉氨酸酯或L-异亮氨酸酯)；(4)磷酸酯以及(5)单-，二-或三-磷酸酯。采用C1-20醇或其反应性衍生物，或用2，3-二(C6-24)酰基甘油，可以使磷酸酯进一步酯化。在这类酯中，除非另有说明，任何存在的烷基优选含有1-18个碳原子，尤其是1-16个碳原子，更特定地是含有1-4个碳原子。这类酯中存在的任何环烷基基团优选含有3-6个碳原子。这类酯中存在的任何芳基基团优选含有苯基基团。本发明中来苏呋喃糖基前药衍生物的实例包括那些被化学保护的羟基基团(例如用O-乙酰基基团)，例如2’-O-乙酰基来苏呋喃糖基；3’-O-乙酰基来苏呋喃糖基；5’-O-乙酰基来苏呋喃糖基；2’，3’-二-O-乙酰基来苏呋喃糖基以及2’，3’，5’-三-O-乙酰基来苏呋喃糖基。
本发明化合物的酯包括甲酯，乙酯、丙酯、丁酯、异丁酯以及仲丁酯。B、使用本发明抗病毒化合物的方法
本发明的一个方面涉及通过使病毒与有效剂量的可以抑制病毒复制和/或繁殖的化合物进行接触，在体外、或体内抑制病毒复制和/或繁殖的方法。当这一接触是在体外进行时，这些化合物可以用于筛选其它抗病毒化合物，这些化合物既可以单独使用，也可以与本发明中所公开的化合物联合使用。通过给予被感染的宿主治疗有效量的本发明来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物，其也可以用来治疗和/或预防病毒感染。在一种实施方案中，这类方法包括给予受感染的宿主制药学上可接受的载体和治疗有效剂量的本发明抗病毒来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物组成的组合物。
术语“治疗有效剂量”包括预防有效剂量，并且是指当采用单独治疗或与其它制剂一起联合使用时，该剂量在治疗或预防患者病毒感染方面是有效的。这里所用的术语“治疗”是指缓解患者某种具体的失调症状或指改善与具体失调有关的可确定的测定(指标)，或降低宿主中病毒的效价。当宿主接受治疗后，通过观察病毒载量的降低或与病毒感染有关的症状缓解，本领域内的专家即可以决定(剂量合适与否)。术语“预防有效剂量”是指该剂量对于预防宿主病毒感染是有效的。在这里使用的术语“宿主”是指哺乳动物，例如小鼠、牛、大鼠或人类患者。
术语“生理上可接受的载体”是指可以与本发明化合物一起给予患者的载体或辅助剂，且其不破坏化合物的药理学活性，而且当以足够运载有效剂量的抗病毒化合物的量给予患者时，它是无毒的。合适的载体的实例包括液相载体，例如无菌或水溶液以及下文中所描述的那些液体。
如下所述，本发明化合物是一种强的抗病毒药物，其对于抵抗DNA病毒，例如疱疹型病毒(如HCMV，HBV以及HSV-1)特别有效，当与载体合用时，其可以提供抑制在体外或体内抑制病毒复制和繁殖的组合物。然而应该明白，尽管没有明确地说明，本发明化合物对于其它病毒，例如HHV-6和HIV也具有抑制作用。测定抵抗这些病毒效力的方法将在下文中提供。另外，本发明化合物对于RNA病毒也有抑制作用。
本发明化合物可以与其它用于抑制上述病毒复制和繁殖以及有关病症的治疗剂一起使用。根据本发明，联合治疗包括给予至少一种本发明化合物以及至少一种其它制药学上的活性成分。活性成分以及制药学上的活性制剂可以同时给予，它们或存在于同一个药物组合物中，或存在于不同的药物组合物中，或者也可以以任意顺序先后进行给药。为了获得所需的联合治疗效果，可以对活性成分和制药学上活性制剂的量以及给药的相对时间进行选择。优选的联合治疗包括给予一种本发明化合物以及下文中提到的试剂之一。术语“可操作的结合”包括本发明化合物与本发明其它化合物或本发明之外的其它化合物(例如更昔洛韦，AZT以及膦甲酸)任何化学上可配伍的结合，只要该结合不消除本发明化合的抗病毒活性。
其它活性成分的实例包括可以有效治疗病毒感染和有关病症的制剂，它们有(1-α，2-β，3-α)-9-[2，3-双(羟甲基)环丁基]胍[(-)BHCG，SQ-34514]，氧杂环丁酰(oxetanocin)-G(3，4-双(羟甲基)-2-氧杂环丁酰基]胍)，无环核苷(例如阿昔洛维，伐昔洛韦，泛昔洛韦，更昔洛韦，喷昔洛韦)，无环核苷磷酸酯(例如，(S)-1-(3-羟基-2-膦酰基甲氧丙基)胞嘧啶(HPMPC)，核糖核酸还原酶抑制剂，例如2-乙酰基吡啶5-[(氯代苯胺基)硫代羰基]硫代碳腙(thiocarbonohydrazone)，3’-叠氮基-3’-脱氧胸腺嘧啶，其它2’，3’-二脱氧核苷，例如2’，3’-二脱氧胞苷，2’，3’-二脱氧腺苷，2’，3’-二脱氧肌苷，2’，3’-二脱氢胸腺嘧啶，蛋白酶抑制剂，例如瑞头那韦(ritonovir)，印地那韦(indinavir)，141W94，那夫那韦(nelfinavir)，塞醌那韦(sanquinavir)，以及3S--[3R*(1S*，2R*)]-[3-[[(4-氨基苯基)磺酰基](2-甲基丙基)-氨基]-2-羟基-1-苯基甲基)丙基]氨甲酸，四氢-3-呋喃基醚(141W94)，氧硫杂双戊烷核苷同类物，例如(-)-顺-1-(2-羟基甲基)-1，3-氧硫杂双戊烷5-基)-胞嘧啶(拉米夫定)或顺-1-(2-羟基甲基)-1，3-氧硫杂双戊烷5-基)-5-氟胞嘧啶(FTC)，3’-脱氧-3’-氟胸腺嘧啶，，5-氯-2’，3’-二脱氧3-’氟尿苷，(-)-顺-4-[2-氨基-6-(环丙基氨基)-9H-嘌呤-9-基]-2-环戊烷-1-甲醇，利巴韦林，9-[4-羟基-2-(羟甲基)丁-1-基]-胍(H2G)，tat抑制剂，例如7-氯-5-(2-吡啶基)-3H-1，4-苯并二氮杂草-2-(H)酮(Ro5-3335)，7-氯-1，3-二氢-5-(1H-吡咯-2-基)-3H-1，4-苯并二氮杂草-2-胺(Ro24-7429)，干扰素，例如(α-干扰素)，肾分泌抑制剂，例如丙磺舒，核苷转运抑制剂，例如双嘧啶氨醇(潘生丁)；己酮可可碱，N-乙酰基半胱氨酸(NAC)，前半胱氨酸，α-天花粉蛋白，膦酰甲酸，以及免疫调节剂，例如白介素II或胸腺素，粒细胞巨噬细胞菌落刺激因素，促红细胞生成素，可溶性CD4以及它们的基因工程衍生物，或非核苷反转转录抑制剂，例如奈韦拉平(BI-RG-587)，洛韦胺(α-APA)，地拉夫定(delavuridine)(BHAP)以及膦酰甲酸。
本发明化合物也可以用于治疗已经接受抗病毒药物齐多夫定(AZT)和/或3TC治疗的AIDS患者的HCMV以及HSV-1感染。与更昔洛韦和AZT的合用相比，本发明化合物与AZT的合用具有毒性较小的优势。在培养的人类细胞中，本发明化合物与AZT合用比起两个药物单独使用可以产生较小的细胞毒性(即拮抗作用)。相反，在培养的人类细胞中，更昔洛韦与AZT合用比起两个药物单独使用可以产生更大的细胞毒性。
本发明还提供了通过使细胞或细胞群在合适的条件下与有效剂量的本发明化合物进行接触，降低或抑制在被病毒感染的细胞或细胞群中病毒复制和繁殖的方法，从而使得病毒的复制和繁殖被抑制。当病毒复制和繁殖被降低或抑制时，通过观察病毒滴度的降低或将接受处理的感染细胞与未接受处理的感染细胞相比较其存活率提高时，本领域内专家可以容易地测定得到结果。分析病毒滴度的方法对于本领域内的专家来说是已知的，并将在下文中举例说明。应该很容易理解，通过抑制和降低病毒的复制和繁殖，病毒的感染性也随之受到抑制和降低，细胞更适合于进行抗病毒感染处理。有关的病理因素也得到治疗。在一种实施方案中，对疱疹型病毒，例如HCMV，肝炎病毒(例如肝炎B病毒(HBV)，或HSV-1感染)进行了治疗和预防。
为了达到本发明的目的，“细胞”包括(但不限于)哺乳动物的细胞，例如小鼠细胞、牛细胞、大鼠细胞、北美土拨鼠细胞、猴细胞或人类细胞。可用本发明化合物、组合物以及本发明方法有效治疗的病毒包括DNA和RNA病毒，尤其是疱疹型病毒。疱疹型病毒或疱疹病毒家族的实例为单一疱疹病毒1(HSV-1)，单一疱疹病毒2(HSV-2)，水痘-带状疱疹(VZV)，Epstein-Barr病毒(EBV)，人类巨细胞病毒(HCMV)，人类疱疹病毒6(HHV-6)；人类疱疹病毒7(HHV-7)以及人类疱疹病毒8(HHV8)。本发明化合物特别适合于治疗HCMV和HSV-1感染以及有关的病理特征(如再狭窄)。它们还适合于与失调(例如肝细胞癌)有关的肝炎的治疗(参见美国专利No.5,679,342)。
本领域内专家可以容易地决定有效剂量，剂量可以根据受感染的细胞、病毒以及治疗的目的进行变化。例如在细胞培养中使用这些药物时，很重要的一点是药物的用量对细胞不产生毒性。
“合适的条件”包括体外或体内。当在体外实施这种方法时，用有效抗病毒剂量的化合物培养细胞，进行接触，可以有效地抑制细胞或细胞培养中的病毒复制和繁殖。化合物可以直接加入培养介质或在加入细胞之前与载体混合。在体外，该方法对于抑制实验室细胞培养状态下的病毒复制、繁殖以及由此带来的感染特别有用。体内在病毒再次侵入患者之前，这些化合物可以抑制血液和血浆中病毒的复制和繁殖。
在体外，上述化合物和方法的使用还提供了一种有效的筛选新颖药物或化合物的生物分析法，这些药物或化合物可以提供相似的或更强的抗病毒活性。使用下面所提供的方法，在与测试本发明化合物相同的条件下对这些药物进行测试。可以将受试药物的抗病毒活性和细胞毒性与本发明组中的化合物进行比较。
尽管如下所示，化合物对于HCMV和HSV-1的抗病毒作用特别显著，通过使用这里所描述的方法以及其它本领域内专家所熟知的方法，这些化合物也可以有效地抑制其它病毒，这亦在本发明的范围之内。其它象这里所定义的可被治疗的且包括在本发明范围之内的病毒包括疱疹家族的全部成员，以及人类免疫缺陷病毒(HIV)和肝炎病毒，例如肝炎B病毒(HBV)。测定本发明中任意化合物抵抗HBV效力的方法对于本领域内的专家来说是熟知的；例如可以参见Daluge在美国专利No.5,399,580中所示的方法。
可以象这里所定义的可被治疗的肝炎病毒家族中另一个成员是肝炎C病毒(HCV)。Houghton等人在美国专利No.5,679,342中所发表的文章详细地描述了应用被HCV感染的外体细胞系统筛选最具活性的抗HCV化合物的方法。简而言之，该方法包括：(a)提供含有本发明受试化合物的组合物；(b)提供能够被HCV感染的外体细胞系统；(c)提供含有感染HCV的生物样品；(d)在缺乏(a)、允许细胞系统中的HCV感染的条件下，将组合物(a)和(c)与细胞系统一起培养；且(e)在培养后检测对病毒感染的抑制。正如美国专利No.5,679,342中所公开的，优选的细胞系统包括肝细胞，巨噬细胞，更优选的是Kupffer巨噬细胞和B淋巴细胞。衍生自肝原始器官的细胞系也适合用于上述分析。我们也可以采用上述说明的分析方法测试化合物对病毒复制的抑制，即在缺乏(a)、允许细胞系中的HCV复制的条件下，将组合物(a)和(b)一起培养，并在培养后检测对病毒复制的抑制。
本领域内另一个熟知的测试化合物抵抗HCV病毒的方法是解旋酶抑制分析法，例如Lain等人(1991)在核酸研究，69：1720-1726中以及Kim等人(1995)在Biochem.Biophys.，Res.Comm.160-166中所描述的。
当在体内(例如人类患者)应用该方法时，可以将化合物加到制药学上可接受的载体中去，系统地或局部地给予患者，例如人类患者或哺乳动物，如小鼠、大鼠、北美土拨鼠或猴。
组合物也可以给予对病毒感染(例如HCMV、HSV-1或疱疹病毒感染)敏感或处于其危险之中的对象和个体。因此，本发明还提供了抑制患者体内病毒复制、繁殖和/或病毒感染的预防性措施，即在合适的条件下给予患者预防有效剂量的化合物或组合物，使得病毒的复制、繁殖或感染得到抑制。“预防有效剂量”是指能够抑制受到病毒入侵的患者体内的病毒感染、复制和繁殖，并且不对接受治疗的细胞和患者产生毒性的量。
应该明白，通过预防或抑制患者或个体体内病毒的繁殖、感染和复制，本发明组合物和方法还提供了治疗、预防或减轻与病毒感染有关的症状或失调的方法，例如疾病包括：失明，单核增生，再狭窄(HCMV)；水痘，带状疱疹(水痘-带状疱疹病毒)；感染的单核增生，腺，感冒以及Burkittis Lymphoma(Epstein-Barr病毒)；感冒疮(疱疹单一病毒1)；生殖器疱疹(疱疹单一病毒2)；婴儿蔷薇疹(人类疱疹病毒6，人类疱疹病毒7)；卡波济肉瘤(人类疱疹病毒8)。因此本发明还提供了减轻、预防或治疗与病毒感染有关的失调或症状的方法，例如HCMV、HSV-1和疱疹病毒感染，例如再狭窄，机会致病菌感染(例如视网膜感染，胃肠道感染，肺炎，CNS感染或肝损伤)以及子宫感染，其方法是在合适的条件下给予患者预防有效剂量的本发明化合物，使得失调或症状有所减轻、得到预防或治疗。
再狭窄是指血管狭窄，其可以发生在血管壁损伤后，例如由气球血管成形术或其它外科手术引起的损伤，其特点是在受损血管壁上，平滑肌细胞过度繁殖。血管成形术后的再狭窄(RFA)发生在用气球血管成形术治疗冠状动脉疾病的患者身上。
通常认为，在许多患有RFA的病人中，患者的病毒感染，尤其是CMV和/或HHV-6感染在所治疗的冠状血管平滑肌细胞的繁殖中起着关键性作用。
在一系列外科手术后可以发生再狭窄，例如移植手术、静脉移植、冠状分流移植术等，最常见的是在下列血管成形术之后。
血管成形术是一种外科技术，其中外周出现动脉粥样硬化狭窄，用压缩和/或撕扯血管壁上的斑、典型的是借助于压缩气球导管等方法，将肾和冠状脉管系统打开。不幸的是，在20-50％的病例中，特别是在那些涉及冠状脉管系统的病例中，在几个月之内，被治疗的血管出现了再狭窄，因此不得不重新进行手术。除了气球导管方法之外，为了降低或预防血管成形术之后的再狭窄，人们还发展了象脉冲激光和旋转切割等方法，但很少获得成功。此外，人们还尝试了一些药物(包括抗凝剂和血管舒张药)，但也都以失望而告终或得到类似的结果。
无论是体内还是体外的研究工作结果均提供了强有力的证据，其表明再狭窄是一种多因素综合作用的过程。几种细胞激动剂和生长因子一起作用，刺激血管平滑肌细胞(SMC)的迁移和复制以及外细胞基质物质的生成。另外，生长抑制剂可以抑制SMC’s的繁殖以及外细胞基质物质的生成。因此，本发明化合物可以用于预防或治疗敏感对象或患者的再狭窄。
在整个治疗过程中，体内给药可以以单剂量连续或间隔地进行给药。确定最有效的手段和给药剂量的方法对于那些本领域内的专家来说是已知的，其可以根据所采用的组合物、目标病毒、治疗目的、接受治疗的靶细胞以及接受治疗对象而变化。根据剂量水平以及主治医生所选择的方式，可以进行单或多次给药。在下文中可以发现合适的剂量组合物和给予化合物的方法。
本发明化合物均显示出抵抗HCMV、疱疹病毒感染以及HSV-1病毒的活性，并带有可以接受的细胞毒性。可以想见，显示出相对高的抗病毒活性/细胞毒性(即较好的选择性)的本发明化合物是优选的。另外，本发明的抗病毒治疗所包括病毒感染治疗以及在某些情况下需要的预防性治疗，例如对于免疫损伤的患者，如骨髓和器官移植患者以及对HCMV、疱疹病毒或HSV-1感染特别敏感的HIV隐性携带患者。
本发明化合物和组合物可以用于药物的制备，并可以按照常规的方法，通过给药用于人类和其它动物的抗病毒治疗，例如给予药物组合物中活性成分。
药物组合物可经局部，口服，鼻内，非肠道或吸入治疗进行给药，可以采取片剂，锭剂，颗粒剂，胶囊，丸剂，安瓿，栓剂或气溶胶等剂型。也可以采用处于水性或非水稀释剂、糖浆剂、颗粒或粉末中的活性成分的软膏剂，凝胶剂，膏剂，霜剂，喷雾剂，洗剂，悬浮剂，溶液和乳剂等剂型。除了本发明化合物之外，药物组合物还可含有其它药物活性化合物或多种本发明化合物。
更具体讲，本发明通式的化合物在这里被指定为活性成分并可以通过任何合适的途径给药用于治疗，包括口服，直肠，鼻腔，局部(包括透皮，气溶胶，颊以及舌下)，阴道，非肠道(包括皮下，肌内，静脉内以及皮内)和肺部给药。比较可取的是，根据患者的情况和年龄以及所治疗病毒的类型和感染的性质来选择给药途径。
通常，用于上述病毒感染(例如HCMV和HSV-1)的合适的剂量范围为约0.1-250mg/kg患者体重/天，优选的范围为约1-100mg/kg患者体重/天，最优选的范围为约5-20mg/kg患者体重/天。除非另有说明，所有活性成分的重量均以具有本发明通式的母体化合物的盐或酯来计算，重量将成比例的增加。优选的是，在一天当中，将所需剂量分成2，3，4，5，6或更多的亚剂量，以适当的时间间隔进行给药。这些亚剂量可以单位剂型进行给药，例如每个单位剂型中含有约10-1000mg活性成分，优选的是含有约20-500mg活性成分，最优选的是含有约100-400mg活性成分。比较可取的是，可以根据病毒感染的类型和严重程度来选择合适的本发明化合物和组合物的剂量，在患者与患者之间也可以有所不同。在决定合适的剂量时，需要兼顾本发明抗病毒治疗中的治疗作用和任何危险的或具有破坏性的副作用之间的关系。
理想地，给予活性成分后应获得约2μM-100μM活性化合物的血浆浓度峰值，优选的是约5μM-70μM，最优选的是约1μM-50μM。例如通过静脉注射约0.1-5％活性成分的溶液(选择地溶于盐水)或经口服给药(例如含有约0.1-250mg/kg活性成分的片剂、胶囊或糖浆剂)可以获得上述结果。通过持续地输液提供约0.01-5.0mg/kg/小时的活性成分，或通过间歇性地按照约0.4-15mg/kg的量输入活性成分，可以保持所需的血液水平。
人们期待这种有效的合用能够提供治疗上的联合，与治疗化合物或药物单独使用时相比，其所要求的每一种抗病毒剂的总量很低，因此降低了副作用，例如细胞毒性。
虽然活性成分可以单独给予，优选的还是以药物组合物进行给药，组合物中含有至少一种如上所述的活性成分以及一或多种制药学上可以接受的载体和选择的其它治疗剂。每一种载体必须是“可以接受的”，其含义是可与组合物中的其它成分合用，并且不对患者产生损害。
组合物包括那些适合口服、直肠、鼻腔，局部(包括皮透、颊和舌下)、阴道、非肠道(包括皮下、肌内、静脉和皮内)以及肺部给药的剂型。组合物可以方便地以单位剂量的形式提供，并可以用制药领域内任何已知的方法来制备。这类方法包括将活性成分与含有一或多种附加成分的载体进行混合的步骤。通常，通过统一并适宜地将活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者一起进行混合来制备组合物，如有所需，可以使产品成型。
适合于口腔给药的本发明组合物可以独立的单位提供，例如胶囊剂、扁囊剂或片剂，其中每一个含有预定量的活性成分；还有粉末剂或颗粒剂；处于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分还可以团快、(干)药糖剂或膏剂形式提供。
通过任意地与一种或多种附加成分进行压片或模制可以制备片剂。使处于自由流动状态(例如粉末或颗粒)下的活性成分任意地与粘合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如淀粉羟乙酸钠、交联的聚乙烯吡咯烷酮、交联的羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂进行混合，在合适的机器中压片，可以制备得到压缩的片剂。将粉末状的化合物用惰性液体稀释剂进行湿润，在一个合适的机器中模制，可以制备得到模制的片剂。片剂可以任意地进行包衣或刻痕，并可以使用各种比例的羟丙基甲基纤维素进行组合物，使得其中的活性成分可以慢速或控制释放，从而提供所需的释放模型。可以任意地提供采用肠包衣形式的片剂，其在肠道部分释放而不是在胃中。
适合口腔局部给药的组合物包括活性成分处于调香基质(通常是蔗糖和金合欢或黄耆胶)中的锭剂、活性成分处于惰性基质(例如明胶和甘油，或蔗糖和金合欢)中的锭剂；还包括活性成分处于合适的液体载体中的口腔洗剂。
本发明中用于局部给药的药物组合物可以配制成软膏剂、霜剂、悬浮剂、洗剂、粉末剂、溶液、膏剂、凝胶剂、喷雾剂、气溶胶或油剂。另外，组合物也可以包括贴剂或敷料，例如绷带或浸渍有活性成分和选择性的一或多种赋形剂或稀释剂的粘着膏剂。
对于眼部或其它外部组织(例如嘴和皮肤)的感染，组合物优选的是采用含有活性成分的局部软膏或霜剂，活性成分的量约为0.075-20％w/w，优选的是约为0.2-25％w/w，更约为0.5-10％w/w。当组合物为软膏剂时，活性成分可与石蜡或可与水混溶的软膏基质一起使用。另外也可以将活性成分与水包油性的霜剂基质一起配成霜剂。
如有所需，霜剂基质的水相可以包括至少约30％(w/w)的多羟基醇，即具有两或多个羟基基团的醇，例如丙二醇，丁-1，3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油以及聚乙二醇和它们的混合物。局部组合物可以根据需要包括可以增加活性成分通过皮肤或其它受作用区域吸收或渗透的化合物。这类皮透增强剂的实例包括二甲基亚砜以及有关的同类物。
本发明乳剂的油相可以用已知的方法并用已知的成分构成。尽管此相可以仅仅含有乳化剂(也被称为净化剂)，根据需要，其也可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪和油两者均有的混合物。优选地，其中既包含亲水性的乳化剂中也包含亲脂性的乳化剂，后者用作稳定剂。该乳剂较好的是既包括油又包括脂肪。总之，带有或不带有稳定剂的乳化剂构成了所谓的乳化蜡，该蜡与油和/或脂肪构成了所谓的乳化剂软膏基质，其形成了霜剂组合物的油性分散相。
适合用于本发明组合物净化剂和乳剂稳定剂包括Tween60，鲸蜡硬脂醇，肉豆蔻醇，单硬脂酸甘油酯以及十二烷基硫酸钠。
由于活性化合物在大多数可用于药物乳剂组合物的油状物中的溶解度都非常低，因此用于本发明组合物的油或脂肪的选择是基于能够获得所需的化妆性质。因此优选的霜剂应该是一种非油脂，非染色并可以洗掉的产品，其具有合适的稠度，可以避免与管或其它容器分开。可以采用直链或支链，单-或二元烷基酯，例如二异己二酸酯，硬脂酸异鲸蜡酯，椰子脂肪酸的丙二醇二酯，肉豆蔻酸异丙酯，油酸癸酯，棕榈酸异丙酯，，硬脂酸丁酯，棕榈酸2-乙基己酯或支链酯的混合物(被称为Crodamol CAP)。最后三个是优选的酯。根据所需的性质，这些酯可以单独使用也可以合并使用。另外，也可以使用高熔点的液体(例如白软石蜡和/或液体石蜡)或其它矿物油。
适合于眼部局部给药的组合物还包括眼滴剂，其中的活性成分溶于或悬浮于合适的载体中，尤其是活性成分的水性溶液剂。优选地，这类组合物中的活性成分的浓度约为0.5至20％，优选地是约0.5-10％，特别优选的是约1.5％(w/w)。
适合于阴道给药的组合物可以以含有除活性成分之外的本领域内合适载体的阴道栓、塞子、霜剂、凝胶、膏剂、泡沫剂或喷雾剂组合物的形式提供。
适合于鼻腔给药的组合物(其中的载体为固体)包括颗粒直径范围约为20-500微米的粗颗粒粉末，其采用鼻吸剂的形式给药，即从一个紧紧地罩住鼻子的装有粉末的容器中通过鼻通道迅速地吸入。合适用于给药的组合物(其中的载体为液体)包括活性成分的水或油性溶液，例如鼻喷雾剂，鼻滴剂或通过喷雾器给药的气溶胶剂。
适合于非肠道给药的组合物包括水性或非水性的等渗无菌注射溶液，其可以含有抗氧剂，缓冲剂，制菌剂以及溶质，它们使得组合物与接受治疗的患者的血液等渗；该组合物还包括水性或非水性的无菌悬浮液(其中包含悬浮剂和增稠剂)以及脂质体或其它微粒系统(化合物进攻的靶子为血液成分或一或多个器官)。组合物可以密封容器的单位剂量或多剂量形式提供，例如安瓿或小瓶，并可以储存于冷冻干燥的(冷冻干燥)条件下，仅需要在使用前加入无菌液体载体，例如注射用水即可。从前面详细描述的无菌粉末、颗粒和片剂可以制备得到临时注射溶液和悬浮液。
如上述例举的，优选的单位剂量组合物是那些含有活性成分的每日剂量或单位，每日亚剂量或其合适部分的组合物。
应该明白的是，除了上述特别提及的成分之外，根据所需组合物的类型，本发明的组合物还可以包含其它本领域内常规的试剂，例如那些适合于口服给药的制剂进一步包括甜味剂、增稠剂以及芳香剂。
具本发明通式的化合物可以兽用组合物的形式提供，例如它们可以通过本领域内常规的方法来制备。C、制备本发明抗病毒化合物的方法
已有显示，采用修饰的Vorbruggen方法，从1，2，3，5，-四-O-乙酰基-糖苷可以制得2，3，5-O-吡喃葡糖基核苷化合物。(参见Vorbruggen，H；Krolikiewicz，K；Bennua，B在Chem.Ber.1981，114：1234-55中所著的“用甲基甲硅烷基三氟甲酸盐和作为催化剂的高氯酸盐合成核苷”)。在大多数情况下，1’-杂环基团和2’-O-乙酰基基团的主要异头构型是反式(参见Baker，B.R.；Joseph，J.P.；Schaub，R.E.；Williams，J.H.在J.Org.Chem.1954，19，1786-1792中所著的“嘌呤霉素合成研究，V.6-二甲基氨基-9-(2’-乙酰氨基-β-L-吡喃葡糖基)嘌呤”)。按照这种方法，在类似的缩合反应中，可以合成四-O-乙酰-D-来苏呋喃糖基(化合物2b)和四-O-乙酰-L-来苏呋喃糖基(化合物2a)作为糖基供给体。
从市场上购得的D-木糖起始，采用Guthrie和Smith所提供的方法，分三步可以制得四-O-乙酰-D-来苏呋喃糖基(化合物2b)(参见Koszalka，G.W.；Chamberlain，SD；Daluge，S.M.；Boyd，F.L.；Tidwell，J.H.；Martin，M.T.；Harvey，R.J.；Frick，L.W.；Perkins，D.G.；Wang，L.H.；Drach，J.C.；Townsend，L.B.；Biron，K.K.在XII国际圆桌会议：核苷、和核苷酸以它们的生物应用，La Jolla，CA，1996年9月上发表的“用于治疗人类巨细胞病毒感染的苯并咪唑”)。在按照所报道的方法实施此合成后，经1H-NMR测定相应地得到3∶1的呋喃糖和吡喃糖异构体混合物。为了优化条件，使能够获得更多的呋喃糖异构体，在此方法的第一步中可以使用Dowex-50酸性离子交换树脂和酰氯代替硫酸。经1H-NMR测定，在三步反应中使用这些新的条件替代原有的条件，可以获得呋喃糖/吡喃糖混合物的比例为1.5∶1(dowex)以及5∶1(酰氯)。由于在任何情况下均形成吡喃糖，采用硫酸或酰氯条件就可以了。在进行硅胶层析之后，大约可以获得总产率为50％化合物2b的异头物混合物。
采用制备TCRB同样的方法(参见Townsend，L.B.；Devivar，R.V.；Turk，S.T.；Nassiri，MR.；Drach，J.C.在J.Med.Chem.，1995，38，4098-4105中所著的“某些2，5，6-三氯-1-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑的设计、合成以及抗病毒活性”以及Kawashima，E.；Gopata，P.K.；Devivar，R.V.；Townsend，L.B.在核酸化学；第四部分；Townsend，L.B.；Tipson，R.S.；Eds，；John Wiley和Son：New York，1991，P24-26中所著的“2，5，6-三氯-苯并咪唑”)，在干燥的乙腈中，可以用双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(BSA，参见Vorbruggen，H；Hofle，在Chem.Bet.1981，114，1256-1268中所著的“关于核苷合成的机制”)对2，5，6-三氯-苯并咪唑(TCB，化合物1，参见Kawashima，E.；Gopata，P.K.；Devivar，R.v.；Townsend，L.B.在核酸化学；第四部分；Townsend，L.B.；Tipson，R.S.；Eds，；John Wiley和Son：New York，1991，P24-26中所著的“2，5，6-三氯-苯并咪唑”)进行甲硅烷基化。然后在三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(TMSOTf)的存在下，用化合物2b进行糖基化，得到化合物3b，1-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-α-D-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑。用同样的方法，可以制备得到化合物3a，1-(2’，3’，5’-三-O-乙酰基-α-L-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑。
在碱性条件下，化合物3b的去保护得到了1-(α-D-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑(化合物4b)。相似地，化合物3a的去保护得到了1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑(化合物4a)
Figure A9880851700392
正如先前所报道的(参见Harrison，D.；Ralph，J.T.在J.Chem.Soc.1965，236-239中所著的“2-氯代苯并咪唑的亲核取代反应，第一部分，苯并咪唑啉-2-酮以及2-烷氧基苯并咪唑的形成”)，1-取代-2，5，6-三氯苯并咪唑的2-氯取代基可以方便地被各种亲核试剂所取代。按照这种方法，在二氯甲烷中用无水溴化氢处理化合物3b，然后在碱性条件下进行去保护，得到2-溴-5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物5b)。相似地，对化合物3a进行处理，可以得到2-溴-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物5a)。
Figure A9880851700401
另外，在密封的容器中用33％甲基胺/乙醇对化合物3b进行处理，可以一步得到甲氨基衍生物，1-(α-D-来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物6b)。用同样的方法，可从3a得到化合物6a，1-(α-L-来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑。
在乙醇中，用合适的伯胺对去保护的核苷化合物4b进行处理，可以很方便地制备得到异丙氨基衍生物，1-(α-D-来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物7b)以及环丙氨基衍生物，1-(α-D-来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物8b)。用同样的方式，从化合物4a可以制备得到1-(α-L-来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物7a)及1-(α-L-来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物8a)。
另外，在乙醇/硫脲混合物中将化合物4b加热回流19小时，可以制备得到2-硫代衍生物，1-(α-D-来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物9b)。用相似的方式，可以制备得到1-(α-L-来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑(化合物9a)。
Figure A9880851700412
从市场上购得的5，6-二氯苯并咪唑-2-硫酮(化合物10)开始也可以制备得到化合物9b(参见Devivar，R.V.；Kawashima，E；Revankar，G.R.；Breitenbach，J.M.；Kreske，E.D.；Drach，J.C.；Townsend，L.B.在J.Med.Chem.，1994，37，2942-2948中所著的“某些2-(烷硫基)-以及2-(苄硫基)-5，6-二氯-(β-D-核糖呋喃糖基)苯并咪唑的设计、合成以及抗病毒活性”)，在干燥的乙腈中，用BSA对上述起始物进行甲硅烷化，然后在TMSOTf存在下，用化合物2b进行糖基化，去保护后得到化合物9b。这一结果肯定地说明，糖基化的部位发生在N-1位，而不是在2-位硫代基团上。用相似的方式可以制备得到化合物9a。
Figure A9880851700421
最后，在乙腈/水中，用NH4OH处理化合物9b，接着用溴苄或碘甲烷进行烷基化，相应地可以得到2-苄硫基-5，6-二氯1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物11b)以及5，6-二氯1-(α-D-来苏呋喃糖基)-2-(甲硫基)苯并咪唑(化合物12b)。用相似的方式，从化合物9a可以制备得到2-苄硫基-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物11a)以及5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2-(甲硫基)苯并咪唑(化合物12a)。
Figure A9880851700422
在另一个方法中，可按照下法制备β-L-同类物，首先用水合肼、吡啶和乙酸形成2，5，6-三氯-1-(3’，5’-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖呋喃糖基)苯并咪唑(化合物13)。然后使化合物13与无水三氟甲磺酸和吡啶在二氯甲烷中进行反应，得到2，3’-O-环-5，6-二氯-1-(β-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物14)。随后，在乙醇中使化合物14与异丙胺进行反应，得到2-异丙氨基-5，6-二氯-1-(β-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物15)。
Figure A9880851700431
根据Baker’s规则，指定每个化合物的异头构型(参见Baker，B.R.；Joseph，J.P.；Schaub，R.E.；Williams，J.H.在J.Org.Chem.1954，19，1786-1792中所著的“嘌呤霉素合成研究，V.6-二甲基氨基-9-(2’-乙酰氨基-β-L-葡糖吡喃糖基)嘌呤”)，并可用NOE实验进行证实(参见Rosemeyer，H.；Toth，G.；Seela，F.在核苷，核苷酸，1989，8，587，597中所著的“借助NOE差异光谱学所进行的D-核-、阿-、2’-脱氧核-以及2，3-二脱氧核糖核苷酸的异头指定”)。
于是，在一实施方案中，本发明涉及本发明中D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物的制备方法，所述的方法包括以下步骤：
(a)使式(II)化合物与式(II I)化合物进行反应，
Figure A9880851700441
其中R2选自-Cl，-Br和＝S，且R9，R10或R11各自独立，可以相同或不同，并且为-H或羟基保护基团；且，
(b)随后进行一或多个下列步骤：
  (i)从产品(a)上去除一或多个羟基保护基团，如果存在；
  (ii)使产品(a)与HX进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (iii)使产品(a)与R8NH2进行反应，其中的为-H或具有1-6个碳原子的直链、支链或环状烷基基团；
  (iv)使产品(a)与H2NCSNH2进行反应；
  (v)使产品(a)与C6H5CH2X进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (vi)使产品(b)(iv)与C6H5CH2X进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (vii)使产品(a)与CH3I进行反应；并且
  (viii)使产品(b)(iv)与CH3I进行反应。
通用化学方法
熔点用Thomas-Hoover仪器测定，末校正。色谱使用硅胶，SilicAR40-63微米，230-400目(Mallinckrodt)。薄层层析(TCL)在预制的SilicAR7GF板上进行(Analtech，Newark，DE)。TCL板在下列溶剂系统中展开：系统1(2％MeOH/CHCl3，v/v)，系统2(10％MeOH/CHCl3，v/v)，系统3(35％EtOAc/己烷，v/v)，系统4(25％EtOAc/己烷，v/v)，系统5(5％MeOH/CHCl3，v/v)，系统6(15％MeOH/CHCl3，v/v)，系统7(20％EtOAc/己烷，v/v)，系统8(50％EtOAc/己烷，v/v)。化合物用UV光(254nm)进行照射使之可见化，或用10％的甲磺酸进行处理，接着再于一个热板上炭化。除非另有说明，蒸发在减压条件下进行(水抽吸器)，浴温不超过45℃。1H-NMR光谱用Bruker200、300、360或500MHz的仪器记录。化学位移用相对于标准化合物的位移，每百万中所占部分来表示，溶剂为DMSO-d6(d＝2.50)。除了化合物6a，所有的1H-NMR的测定结果是通过同核去偶联实验得到的，其被指定为COSY实验。除非另有说明，微量分析结果(总结于表I)由Michigan大学化学系提供，它们为理论值的±0.4％。除非另有说明，所有的原料均由市场上购得。
实施例
下列实施例中描述了本发明中的几个抗病毒化合物，其目的在于说明本发明，而不是限制本发明。
                         化合物3a
1-(2，3，5-三-O-乙酰基-α-L-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑
将500ml配备有克莱森接管和搅拌器的圆底烧瓶排空，并用氩气进行冲洗。将2，5，6-三氯苯并咪唑(参见Kawashima，E.；Gupta，P.K.；Devivar，R.V.；Townsend，L.B.2，5，6-三氯苯并咪唑。在核酸化学第四部分中；Townsend，L.B.，Tipson，R.S.，Eds.John Wiley和Sons：New York，1991，p24-26)(化合物1，1.74g，7.85mmol)悬浮于无水CH3CN(100ml)中，经注射器向其中滴加双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(1.94mL，8.84mmol)，在此阶段，杂环溶解成为溶液。在搅拌下，将溶于CH3CN(50ml)中的1，2，3，5-四-O-乙酰基-L-木糖呋喃糖(参见Kam，B.L.；Barascut，J.-L.；lmbach，J.-L.四-O-乙酰基-D-戊醛呋喃糖的合成和分离的通用方法及其N.M.R.分光镜研究，碳氢化合物研究，1979，69，135-142)(化合物2a，3.25g，10.2mmol)加入上述溶液中，然后立即加入TMSOTf(1.8mL，9.3mmol)。20小时后，减压蒸除溶剂，得到黄色残余物。将此残余物溶于乙酸乙酯(100ml)中，依次用水，碳酸氢钠(饱和)以及盐水(1×75ml)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，得到黄色油状物。此油状物用柱层析(3×25cm，溶剂系统3)进行层析，合并合适的组分，得到2.59g(67％)化合物3a，其为黄色玻璃状物。此玻璃状物无需纯化即可用于随后的反应。Rf＝0.80(溶剂系统1)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.19(s，1H)，8.00(s，1H)，6.28(d，1H，J＝7.9Hz)，5.97(m，1H)，5.74(m，1H)，5.17(m，1H)，4.26(m，2H)，2.19(s，3H)，2.03(s，3H)，1.96(s，3H).CHN的理论HRMS值：M+，478.0101。实测值：478.0098(M+)。
                     化合物3b
1-(2，3，5-三-O-乙酰基-α-D-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑
操作方法与化合物3a中所述方法一致，除了用化合物2b替代化合物2a。TCL(在溶剂系统3中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物3a中得到的一致。产量：3.40g(88％)，其为黄色玻璃状物。CHN的理论HRMS值：M+，478.0101。实测值：478.0085(M+)。
                    化合物4a
     1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑
将化合物3a(303mg，0.65mmol)加到100ml的圆底烧瓶中，然后将其溶于50mL乙醇和水的等摩尔(v/v)混合物中。搅拌下，向其中加入无水碳酸钠(212mg，2.0mmol)，混合物于室温下再搅拌3小时。加入乙酸(2ml)，减压蒸除溶剂。将生成的固体溶于乙酸乙酯中，依次用水，碳酸氢钠(饱和)以及盐水(均为1×50ml)洗涤。收集有机层，硫酸镁干燥，减压蒸除溶剂，真空干燥下得到205mg(89％)化合物4a，其为白色泡沫状物。Rf＝0.30(溶剂系统2)。MP：184-185℃。1H NMR(DMSO-d6)δ7.98(s，1H)，7.92(s，1H)，5.64(d，1H，J＝9.3Hz)，5.49(d，1H，J＝3.2Hz，D2O可变的)，5.40(d，1H，J＝3.8Hz，D2O可变的)，5.27(d，1H，J＝6.5Hz，D2O可变的)，4.25(m，1H)，4.02(d，1H，J＝11.6Hz)，3.92(m，1H)，3.79(d，1H，J＝12.4Hz)，3.71(m，1H).C12H11O4N2Cl3的理论HRMS值：M+，351.9784。实测值：351.9782(M+)。元素分析(C12H11O4N2Cl3)C，H，N。
               化合物4b
1-(α-D-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑
操作方法与化合物4a中所述方法一致，除了用化合物3b(632mg，1.07mmol)，替代化合物3a。TCL(在溶剂系统1和2中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物4a中得到的一致。产率：175mg(76％)，其为白色泡沫状物。MP：175-176℃。C12H11O4N2Cl3的理论HRMS值：M+，351.9784。实测值：351.9773(M+)。元素分析(C12H11O4N2Cl3.H2O)C，H，N。
                 化合物5a
    2-溴-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
将化合物3a(460mg，0.96mmol)和二氯甲烷(50ml)加到一个三颈圆底烧瓶中。室温搅拌下，使无水溴化氢慢慢通入到溶液中，维持40分钟。然后停止通气90分钟，继续进行通气，此时有白色结晶形成。135分钟后再次停止通气，混合物继续搅拌3小时。这时慢慢加入碳酸氢钠(饱和，50ml)，盐水(50ml)，硫酸镁干燥。蒸除溶剂，减压下与乙醚共蒸发，得到一黄色玻璃状物。Rf＝0.80(溶剂系统1)。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.18(s，1H)，8.01(s，1H)，6.25(d，1H，J＝7.8Hz)，5.97(m，1H)，5.74(m，1H)，5.17(m，1H)，4.26(m，2H)，2.19(s，3H)，2.03(s，3H)，1.97(s，3H).搅拌下将此黄色玻璃状物溶于乙醇、甲醇和水的混合物(1∶1∶1)(50ml)中。向其中加入碳酸钠(380mg，3.6mmol)。100分钟后，加入冰乙酸(0.5ml)，减压蒸除醇类物质。再加25ml冷水，过滤混合物。生成的固体用甲醇/水进行重结晶，减压下，于78℃进行干燥2天，得到194mg(64％)化合物5a，其为白色结晶。Rf＝0.06(溶剂系统5)。Rf＝0.30(溶剂系统1)。MP：178-179℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.00(s，1H)，7.91(s，1H)，5.96(d，1H，J＝8.1Hz)，5.58(d，1H，J＝6.6Hz，D2O可变的)，5.29(d，1H，J＝4.3Hz，D2O可变的)，4.71(m，2H)，4.59(m，1H)，4.19(m，1H)，3.65(m，2H).C12H11O4N2Cl2Br的理论HRMS值：M+，395.9279。实测值：395.9273(M+)。元素分析(C12H11O4N2Cl2Br)C，H，N。
                  化合物5b
    2-溴-5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
操作方法与化合物5a中所述方法一致，除了用化合物3b替代化合物3a。TCL(在溶剂系统1中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物5a中得到的一致。产率：255mg(84％，两步)，其为白色结晶。MP：177-179℃。C12H11O4N2Cl3的理论HRMS值：M+，395.9279。实测值：395.9261(M+)。元素分析(C12H11O4N2Cl2Br)C，H，N。
                   化合物6a
5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2-(甲氨基)苯并咪唑
将化合物3a(480mg，1.00mmol)和33％的甲胺/无水乙醇(25ml)加到一个250ml的压力瓶中。密封容器，室温下将混合物搅拌16小时。蒸除溶剂，减压下与己烷及乙醚共蒸发。残留的固体用甲醇和水的混合物重结晶两次，减压下于78℃干燥，得到259mg(72％)化合物6a，其为白色固体。Rf＝0.09(溶剂系统1)。MP：131-132℃。1HNMR(DMSO-d6)：δ7.40(s，1H)，7.36(s，1H)，6.81(m，1H，D2O可变的)，5.73(d，1H，J＝8.1Hz)，5.27(d，1H，J＝4.4Hz，D2O可变的able)，5.24(d，1H，J＝4.3Hz，D2O可变的)，4.66(t，1H，J＝5.6，D2O可变的)，4.57(m，1H)，4.44(m，1H)，4.16(m，1H)，3.63(m，2H)，2.88(d，3H，J＝4.40Hz).元素分析(C13H15O4N3Cl2)C，H，N。
                   化合物6b
5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)-2-(甲氨基)苯并咪唑
操作方法与化合物6a中所述方法一致，除了用化合物3b替代化合物3a。TCL(在溶剂系统1中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物6a中得到的一致。产量：223mg(62％)，其为白色固体。MP：126-128℃。元素分析(C13H15O4N3Cl2)C，H，N。
                   化合物7a
5，6-二氯-2-异丙氨基-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
将1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯苯并咪唑(化合物4a，300mg，0.85mmol)溶于乙醇(5ml)中，然后加入异丙胺(10ml)。密封烧瓶，混合物于70℃下搅拌两天。减压下蒸发混合物，进行硅胶层析(3×25cm)，用溶剂系统5进行洗脱。减压下蒸发溶剂后，生成的固体在10ml苯中搅拌12小时，过滤收集。减压下于78℃干燥固体两天，得到202mg(63％)分析纯化合物7a。MP：198-201℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.40(s，1H)，7.32(5，1H)，6.57(bs，1H，D2O可变的)，5.79(m，1H)，5.28(m，1H，D2O可变的)，5.21(m，1H，D2O可变的)，4.67(bs，2H，D2O可变的)，4.54(m，1H)，4.42(m，1H)，4.17(m，1H)，4.03(m，1H)，3.68和3.59(m，2H)，1.21(b5，6H).元素分析(C15H19O4N3Cl2)C，H，N。
             化合物7b
5，6-二氯-2-异丙氨基-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
操作方法与化合物7a中所述方法一致，除了用化合物4b(274mg，0.77mmol)替代化合物4a。TCL(在溶剂系统1中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物7a中得到的一致。产量：205mg(64％)，其为白色固体。MP：201-202℃。元素分析(C15H19O4N3Cl2)C，H，N。
                      化合物8a
    2-环丙氨基-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
操作方法与化合物7a中所述方法一致，除了用环丙胺替代异丙胺，并采用化合物4a(300mg，0.80mmol)。产量：299mg(65％)，其为白色固体。MP：184-186℃。1HNMR(DMSO-d6)：δ7.47(s，1H)，7.36(s，1H)，7.05(bs，1H，D2O可变的)，5.72(m，1H)，5.24(m，1H，D2O可变的)，5.17(m，1H，D2O可变的)，4.65(bs，2H，D2O可变的)，4.53(m，1H)，4.42(m，1H)，4.15(m，1H)，3.66和3.57(m，2H)，0.86(m，2H)，0.57(m，1H)，0.50(m，1H).元素分析(C15H17O4N3Cl2)C，H，N。
                     化合物8b
2-环丙氨基-5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
操作方法与化合物7a中所述方法一致，除了用环丙胺替代异丙胺，并采用化合物4b(248mg。0.66mmol)替代化合物4a。TCL(在溶剂系统1中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物8a中得到的一致。产量：247mg(67％)，其为白色固体。MP：183-185℃。元素分析(C15H17O4N3Cl2)C，H，N。
                  化合物9a
5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑-2-硫酮
方法A：将500ml配备有克莱森接管和搅拌器的圆底烧瓶排空，并用氩气进行冲洗。将无水5，6-二氯苯并咪唑-2-硫酮(化合物10，1.53g，7.0mmol)悬浮于CH3CN(80ml)中。经注射器向其中滴加双(三甲基甲硅烷基)乙酰胺(1.95mL，7.9mmol)，加热混合物直至杂环溶解(30-40C)。搅拌下，将溶于CH3CN(40ml)中的化合物2a(参见Kam，B.L.；Barascut，J.-L.；lmbach，J.-L.四-O-乙酰基-D-戊醛呋喃糖的合成和分离的通用方法及其N.M.R.分光镜研究，碳氢化合物研究，1979，69，135-142)(2.5g，7.9mmol)加入到上述溶液中，然后立即加入TMSOTf(1.5mL，7.9mmol)。24小时后，减压蒸除溶剂，残余物进行硅胶层析(3×25cm)，先用溶剂系统4洗脱，然后再用溶剂系统3洗脱。分别得到化合物10(40mg)以及保护的核苷(2.84g，87％，以消耗的杂环计算)。Rf＝0.45(化合物10，溶剂系统3)。1H NMR(DMSO-d6)：δ13.33(bs，1H)，7.93(s，1H)，7.41(s，1H)，6.75(d，1H，J＝8.3Hz)，6.13(m，1H)，5.74(m，1H)，5.13(m，1H)，4.23(m，2H)，2.19(s，3H)，2.03(s，3H)，1.94(s，3H).
将保护的核苷(2.75g，5.66mmol)加到200ml的圆底烧瓶中，然后将其溶于50mL92％的乙醇/水(v/v)混合物中。搅拌下，向其中加入无水碳酸钠(4.0g，37mmol)，混合物于室温下再搅拌24小时。加入乙酸(2ml)，减压蒸除乙醇。将生成的混合物用275ml冷水溶解，并用EtOAc(15×50ml)提取。减压蒸除溶剂，生成的固体用甲醇重结晶，78℃下减压干燥两天，得到1.48g(74％)化合物9a，其为白色结晶。Rf＝0.27(溶剂系统2)。MP：235-236℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ13.15(bs，1H，D2O可变的，NH)，7.62(s，1H，H7或H4)，7.40(s，1H，H4或H7)，6.46(d，1H，J＝8.2Hz，H1′)，5.31(d，1H，J＝6.7Hz，D2O可变的，2′-OH)，5.15(d，1H，J＝3.8Hz，D2O可变的，3′-OH)，4.81(m，1H，H2′)，4.67(t，1 H.J＝4.1，5′-OH)，4.67(m，1H，H4′)，4.50(m，1H，H3′)，3.61(m，2H，H5′a和H5′b).元素分析(C12H12O4N2Cl2S)C，H，N。
方法B：将化合物4a(42mg，0.12mmol)，硫脲(36mg，0.48mmol)以及无水乙醇(2ml)加到10ml圆底烧瓶中。室温下混合物加热回流19小时，减压蒸发溶剂，生成的残余物用5ml水研磨。放置3小时后，滤集固体，6O℃下减压干燥48小时，得到30mg(71％)白色产品。TCL(在溶剂系统2中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物9a中得到的一致(方法A)。MP：234-236℃。
                   化合物9b
5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑-2-硫酮
操作方法与化合物9a中所述方法(方法A)一致，除了用化合物2b(参见Kam，B.L.；Barascut，J.-L.；lmbach，J.-L.四-O-乙酰基-D-戊醛呋喃糖的合成和分离的通用方法及其N.M.R.分光镜研究，碳氢化合物研究，1979，69，135-142)替代化合物2a。TCL(在溶剂系统2中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物9a中(方法A和B)得到的一致。第一步的产率：91％(以消耗的杂环计算)，第二步的产量为20g。如9a一样用甲醇重结晶并干燥制备分析样品。MP：234-236℃。元素分析(C12H12O4N2Cl2S)C，H，N。
                  化合物11a
2-苄硫基-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
将化合物9a(351mg，1.0mmol)，水(25ml)以及CH3CN(15ml)加到100ml圆底烧瓶中。向此悬浮液中滴加12滴浓氨水。加入溴苄(0.12ml，1.0mmol)，混合物于室温下搅拌16小时，减压蒸除过量的乙腈，水层用EtOAc(2×40ml)提取。合并有机提取物，硫酸镁干燥，蒸发溶剂，得到410mg(93％)白色固体。接着用甲醇/水重结晶，78℃下减压干燥两天，得到361mg(82％)化合物11a，其为白色结晶。MP：210-212℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.89(s，1H)，7.78(s，1H)，7.37(m，5H)，5.80(d，1H，J＝7.9Hz)，5.51(d，1H，J＝7.3Hz，D2O可变的)，5.26(d，1H，J＝4.2Hz，D2O可变的)，4.67(t，1H，J＝5.7)，4.62(m，3H)，4.50(m，1H)，4.15(m，1H)，3.60(m，2H).元素分析(C19H18O4N2Cl2S)C，H，N。
                   化合物11b
2-苄硫基-5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
操作方法与化合物11a中所述方法一致，除了用化合物9b替代化合物9a。TCL(在溶剂系统1和2中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物11a中得到的一致。产量：207mg(47％)，其为白色结晶。MP：196-198℃。元素分析(C19H18O4N2Cl2S)C，H，N。
                      化合物12a
5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)-2-(甲硫基)苯并咪唑
操作方法与化合物11a中所述方法一致，除了用碘甲烷(0.06ml，1.0mmol)替代溴苄。产量：305mg(84％)化合物12a，其为白色结晶。MP：210-212℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.86(s，1H)，7.77(s，1H)，5.80(d，1H，J＝8.1Hz)，5.52(d，1H，J＝7.1Hz，D2O可变的)，5.28(d，1H，J＝3.6Hz，D2O可变的)，4.70(t，1H，J＝5.6，D2O可变的)，4.63(m，1H，H3′)，4.52(m，1H)，4.17(m，1H)，3.63(m，2H).元素分析(C13H14O4N2Cl2S)C，H，N。
                 化合物12b
5，6-二氯-1-(α-D-来苏呋喃糖基)-2-(甲硫基)苯并咪唑
操作方法与化合物11b中所述方法一致，除了用碘甲烷(0.06ml，1.0mmol)替代溴苄。TCL(在溶剂系统1中有共同的斑点)以及质子光谱与化合物12a中得到的一致。产量：142mg(39％)，其为白色结晶。MP：204-206℃。元素分析(C13H14O4N2Cl2S)C，H，N。
                   化合物14
2，3’-O-环-5，6-5氯-1-(β-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
将三氟甲磺酸酐(三氟甲磺酸酐，0.37ml，2.2mmol)的二氯甲烷溶液(4.5ml)加到2，5，6-三氯-1-(3’，5’-二-O-苯甲酰基-β-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物13，820mg，1.5mmol)的二氯甲烷(7.5ml)和吡啶(0.75ml)的混合溶液中。反应混合物于0℃下搅拌，并用TLC检测。30分钟后，加水(1.5ml)，使混合物的温度上升至40℃。再搅拌15小时，用二氯甲烷(10ml)和水(10ml)稀释。有机提取物用水(5ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸发至于。残余物进行硅胶层析纯化(2.5×15cm，洗脱液：甲醇(0-2％)/二氯甲烷梯度溶液)，得到一主要的化合物(Rf：0.40，590mg)，其为泡沫状。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.9-7.5(m，12H，苯基，H-4和H-7)，6.61(d，1H，H-1′，J＝5.4Hz)，6.27(t，1H，H-2′，J＝5.5Hz)，5.88(t，1H，H-3′，J＝5.5Hz)，4.9(m，1H，H-4′)，4.6-4.5(m，1H，H-5′)，4.3-4.2(m，1H，H-5″).
将此泡沫状物溶于乙醇和水(9∶1，v/v，20ml)中，加入碳酸钠(0.45g，4.2mmol)。混合物搅拌4天，加入乙酸(1ml)，混合物蒸发至干。向残渣中加入水(10ml)和乙酸乙酯(20ml)。有机提取物用水(2×5ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸发至干。将残余物悬浮于沸腾的二氯甲烷(10ml)中，加入甲醇，直至残余物完全溶解。由此溶液中结晶得到化合物14(200mg，43％)。MP：255-257℃(分解)。Rf：0.18。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.96和7.62(2s，2H，H-4和H-7)，6.36(d，1H，OH-2′，J＝2.9Hz)，6.18(d，1H，H-1′，J＝4.0Hz)，5.04(t，1H，H-3′，J＝2.9Hz)，5.01(t，1H，OH-5′)，J＝5.4Hz)，4.7(m，1H，H-2′)，4.4(m，1H，H-4′)，3.5-3.4(m，1H，H-5′)，3.4-3.3(m，1H，H-5″).元素分析(C12H10Cl2N2O4)C，H，N。
                   化合物15
2-异丙基氨基-5，6-二氯-1-(β-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑
将化合物14(150mg，0.47mmol)溶于乙醇(3.3ml)中。加入异丙胺(2.0ml，24mmol)，密封烧瓶，混合物于70℃下搅拌1周。然后用TCL检查反应情况。由于仅有部分发生了反应，在80℃下再搅拌1周。将混合物蒸发至干，残余物溶于乙酸乙酯(20ml)和水(5ml)中。有机提取物用水(2×5ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液蒸发至干。残余物进行硅胶层析纯化(2.5×15cm，洗脱液：甲醇(6％)/二氯甲烷)。将含有主要斑点(Rf：0.24)的组分蒸发至干。将生成的固体悬浮于沸腾的二氯甲烷(5ml)中，加入甲醇，直至残余物完全溶解。由此溶液中结晶得到化合物15(127mg，71％)。Rf：0.24。MP：197-199℃。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.60和7.31(2s，2H，H-4和H-7)，7.21(d，1H，NH，J＝7.1Hz)，6.02(d，1H，H-1′，J＝6.6Hz)，5.84(bs，1H，OH-3′，J＝2.9Hz)，5.32(d，1H，OH-2′)，J＝5.9Hz)，4.85(t，1H，OH-5′，J＝4.9Hz)，4.4(m，1H，H-2′)，4.2(bs，1H，H-3′)，4.0-3.9(m，1H，CH(CH3)2)，3.7-3.7(m，3H，H-4′，H-5′和H-5″)，1.18(d，6H，CH(CH(CH3)2，J＝6.4Hz).元素分析(C15H19Cl2N3O4)C，H，N。
                               表1微量分析结果：理论值和实测值
  化合物                 理论值                  实测值
    C     H     N     C     H     N
 4a   40.76   3.14   7.92   40.78     3.28   7.75
 4b·H2O   39.20   3.60   7.07   38.79     3.80   7.54
 5a   36.21   2.79   7.04   36.30     2.89   7.03
 5b   36.21   2.79   7.04   36.34     3.07   6.69
 6a   44.84   4.34   12.07   44.92     4.51   11.91
 6b   44.84   4.34   12.07   44.98     4.27   12.08
 7a   47.89   5.09   11.17   47.82     5.24   10.82
 7b   47.89   5.09   11.17   47.79     5.02   10.90
 8a   48.14   4.58   11.23   48.49     4.62   10.90
 8b   48.14   4.58   11.23   47.83     4.62   10.90
 9a   41.04   3.44   7.98   41.02     3.52   8.11
 9b   41.04   3.44   7.98   40.66     3.48   7.90
 11a   51.71   4.11   6.35   51.36     4.05   6.11
 11b   51.71   4.11   6.35   52.00     4.19   6.45
 12a   42.75   3.86   7.67   42.90     4.04   7.61
 12b   42.75   3.86   7.67   42.67     3.88   7.51
 14   45.45   3.18   8.83   45.08     3.15   8.74
 15   47.89   5.09   11.17   47.91     5.08   11.02
D、抗病毒活性和细胞毒性分析
细胞培养方法
KB、BSC-1以及HFF细胞的常规生长和培养在单层培养基中进行，其使用带有Hanks盐[MEM(H)]或Earle盐[MEM(E)]的最低限度的必需介质(MEM)，上述两种盐由10％的小牛血清或10％胎儿牛血清(HFF细胞)来补充。碳酸氢钠的浓度是可以变化的，以满足缓冲容量的需要。按照常规的方法，采用0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA/HEPES缓冲盐溶液，使细胞在1∶2至1∶10的稀释液中进行培养。(参见Shipman，C.，Jr.；Smith，S.H.；Carlson，R.H.；Drach，J.C.在Antimicrob.Agents Chemother.1976，9，120-127中所著的“阿糖呋喃基腺嘌呤和阿糖呋喃基次黄嘌呤在疱疹单一病毒感染的KB细胞中的抗病毒活性，I，在同步悬浮培养基中对病毒DNA合成的选择性抑制”)。
病毒学方法
按照前述方法，采用感染的HFF细胞，按照多重性感染(m.o.i.)＜0.01斑形成单位(p.f.u.)/细胞的水平，制备备用HCMV(参见Turk，S.R.；Shipman，C.，Jr.；Nassiri，M.R.；Genzingler，G.；Krawczyk，，S.H.；Towmsend，L.B.；Drach，J.C.在Antimicrob.Agents Chemother.1987，31，544-550中所著的“作为人类巨细胞病毒抑制剂的吡咯[2，3-d]嘧啶核苷”)。按照前述方法，采用感染的KB细胞(ATCC)，按照m.o.i.＜0.1的水平，制备高效价的HSV-1储备液(参见Turk，S.R.；Shipman，C.，Jr.；Nassiri，M.R.；Genzingler，G.；Krawczyk，S.H.；Towmsend，L.B.；Drach，J.C.在Antimicrob.Agents Chemother.1987，31，544-550中所著的“作为人类巨细胞病毒抑制剂的吡咯[2，3-d]嘧啶核苷”)。按照如前所述方法，用HFF细胞单层培养基(用于HCMV的)和BSC-1细胞单层培养基(用于HSV-1的)测定病毒的效价(参见Prichard，M.N.；Turk，S.R.；Coleman，L.A.；Engelhardt，S.L.；Shipman，C.，Jr.；Drach，J.C.在J.Virol.Methods 1990，28，101-106中所著的“用于评价抗人类巨细胞病毒和疱疹单一病毒化合物的微效价病毒产量降低分析”)。简而言之，按照前述方法，在96-池组(cluster)的培养皿中接种HFF或BSC-1细胞，并在37℃下培养过夜。次日接种HCMV或HSV-1，并将96-池培养皿的其余11列进行连续稀释(1∶3)。病毒吸收后，用新鲜介质代替接种物，接种HCMV的培养皿培养7天，接种HSV-1的培养皿培养2-3天。在放大20倍的情况下，于具有5-20个斑/池稀释程度的池中，进行斑计数。根据下列公式计算病毒的效价：效价(p.f.u./ml)＝斑数目×5×3n；其中的n代表用于感染的病毒的第n次稀释，其中池中的斑是计数的池的。
HCMV斑降低分析
按照如前所述方法，用大约100p.f.u.HCMV/cm2细胞薄层感染24-池组(cluster)的培养皿中的HFF细胞。病毒吸收后，选择4-8个浓度，将溶于生长介质中的化合物加到双份的池中。培养皿在37℃下培养7-10天，将细胞薄层固定，用结晶紫染色，并用前述方法，借助显微镜进行斑计数。以各种药物浓度存在下斑数量降低的百分比与没有药物存在下的斑数量进行比较，来计算药物的作用。
HCMV产量分析
按照如前所述方法，将HFF细胞接种于96-池组(cluster)的培养皿中，培养过夜，移出介质，如其它文献中所报道的，在培养皿中用HCMV(m.o.i.0.5-1 p.f.u./细胞)进行接种(参见Pri chard，M.N.；Turk，S.R.；Coleman，L.A.；Engelhardt，S.L.；Shipman，C.，Jr.；Drach，J.C.在J.Virol.Methods 1990，28，101-106中所著的“用于评价抗人类巨细胞病毒和疱疹单一病毒化合物的微效价病毒产量降低分析”)。病毒吸收后，用0.2ml含有化合物的新鲜介质代替接种物。留出最前排的12个池不动，作为病毒对照。在第二排中的每个池中加入0.1ml含有受试化合物的介质，其中受试化合物的浓度是所需最终浓度的3倍。通过反复地移液操作将这12个池中的内容物进行混合，然后沿其余池按1∶3的比例连续进行稀释。以这种方式，在一个培养皿上可以测定6个浓度为100mm至0.14mM的化合物(各两份)。培养皿在37℃下培养7天，经历一次冷冻和解冻的循环；将取自指定列8个池中的等分试样转移到一个新鲜的HFF细胞96-池单层培养皿的第一列中。将内容物进行混合，然后按照1∶3的比例在第二个培养皿的其余11列中连续进行稀释。用这种方式，将原有的初级培养皿的每一列在另外一个培养皿上进行稀释。对培养皿进行培养和斑计数，并按照前述方法计算效价。
HSV-1  ELISA
采用ELISA来检查HSV-1(参见Prichard，M.N.；Shipman，C.，Jr.在抗病毒研究，1990，14，181-206中所著的“分析药物与药物相互作用的三维模型”)。在每池中含有200μl MEM(E)+10％小牛血清的96-池组的培养皿中按照10,000BSC-1/每池的数量进行接种。37℃培养过夜后，选择药物浓度(各四份)，加入浓度为100p.f.u./池的HSV-1。37℃下培养3天后，移去介质，阻断培养，淋洗，加入与兔子抗-HSV-1抗体结合的马萝匐过氧化酶。在除去含有溶液的抗体之后，淋洗培养基，每个池中加入150μl四甲基联苯胺作为底物。用硫酸终止反应，在450和570nm处读取吸收。以各种药物浓度存在下吸收降低的百分比与没有药物存在下得到的病毒吸收进行比较，来计算药物的作用。
HHV-6(ELISA)
在共价胺培养皿中(Costar，Cambridge，MA)进行酶联免疫吸附剂分析(ELISA)。加入高双功能(homobifunctional)交联剂—双(硫代琥珀酰亚胺基)辛二酸酯活化培养皿，然后用PBS进行洗涤。用HHV-6感染由150μl HSB2细胞悬浮液组成的样品，在另一个培养皿上事先与药物一起进行培养后溶于Triton X-100的包衣缓冲液中。将培养皿罩住，在37℃并5％CO2下培养1小时。这些结合条件使得抗原与交联剂的游离末端的共价接合更为方便。共价结合后，倾析出抗原溶液，在HEPES缓冲盐水(参见Shipman，C.，Jr.在Proc.Soc.Exp.Biol.1969，130，305-310中所著的“对作为组织培养缓冲剂的4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)的评价”)中，用0.05％Tween 20(HBS-T)将培养皿洗涤6次，每次洗涤浸泡3分钟。阻断培养皿上未结合的部位，倾析出阻断剂，加入稀释的初级单克隆抗体，尤其是针对HHV-6(GS)的。将培养皿罩住，在37℃下培养1小时。再次洗涤培养皿，再次加入阻断剂，向每个池中加入马萝匐过氧化酶标记的兔子抗小鼠抗体。培养皿在37℃下培养1小时。如前所述，再次进行洗涤，在室温下用TMB-Turbo(Pierce，Rockford，IL)培养30分钟。用2M的硫酸终止反应。在450/570nm处测定每池中的吸收。
HIV-1
该实验测定在由RT活性量的HIV-1 IIIB菌株感染的CEM细胞(ATCC)上清液中HIV的存在。逆转录酶(RT)用作HIV-1的标记物。细胞在几个浓度(一半log10稀释)且以1或100μM起始的受试化合物存在下生长，感染和培养。操作和RT分析可以按照Kucera，L.S.，Lyer.，N.，Puckett，S.H.，Buckheit，R.W.，Jr.，Weatbrook，L.，Toyer，B.R.，White，E.L.，Germany-Decker，J.M.，Shannon，W.M.，Chen，R.C.S.，Nassiri，M.R.S.，Shipmen，C.Jr.，Townsend，L.B.，Drach，J.C.在AIDSRes.Human Retroviruses 1993，9，307-314中所著的“Triciribine和Triciribine-5’-单磷酸酯抵抗1型和2型人类免疫缺损病毒的活性”；以及White，E.L.，Buckheit，R.W.，Jr.，Ross，L.J.，Germany，J，M.，Andries，K.，Pauwels，R.，Janssen，P.A.J.，Shannon，W.M.，Chirigosm，M.A.，在抗病毒研究1991，16，257-266中所著的“TIBO衍生物，R82913是带有杂多聚体模板的HIV-1反转转录酶的强抑制剂”中所述的方法来进行。
细胞毒性分析
采用两种不同的分析进行常规的细胞毒性实验。(i)通过细胞(未被斑分析中的病毒感染的)显微镜检查可以测定静态HFF细胞所产生的细胞毒性(参见Turk，S.R.；Shipman，C.，Jr.；Nassiri，M.R.；Genzingler，G.；Krawczyk，，S.H.；Towmsend，L.B.；Drach，J.C.在Antimicrob.Agents Chemother.1987，31，544-550中所著的“作为人类巨细胞病毒抑制剂的吡咯[2，3-d]嘧啶核苷”)。(ii)按照前述的方法，通过用结晶紫染色和分光光度测定法对洗脱自染色细胞的染料进行定量测定，可以测定得到在KB细胞两次细胞数量翻倍之间化合物的作用(参见Prichard，M.N.；Prichard，L.E.；Baguley，W A；Nassiri，M.R.；Shipman，C.，Jr.在抗病毒研究，1991，35，1060-1065中所著的“Ganciclovir和Zidovudine的协同细胞毒性的三维分析”)。简而言之，在96-池组(cluster)的培养皿中接种KB细胞，每池中含有3000-5000个细胞。37℃培养过夜后，在6-8个浓度下，加入受试化合物，共4份。培养皿在37℃下的CO2培养器中培养48小时，淋洗，用95％的乙醇固定，用0.1％的结晶紫染色。加入酸化的乙醇，在分光光度计(为96-池ELISA分析培养皿设计)中570nm下读取培养皿的读数。
数据分析
通过对得自前一部分的百分抑制参数相对于药物浓度的对数进行线性回归建立剂量-反应关系。从回归直线上计算出50％抑制浓度(IC50’s)或IC90’s。在所有的实验中，均采用含有阳性对照的样品(用于HSV-1的阿昔洛维、用于HCMV的更昔洛韦、以及用于细胞毒性的2-乙酰基吡啶硫代半卡巴腙)。记录众多合成化合物用于HCMV(斑和产量)和HSV-1(ELISA)的抗病毒活性数据及其细胞毒性数据(可见和生长)。数据归纳于表2。并记录众多合成化合物用于另一个HCMV株(AD169)的抗病毒活性数据。数据归纳于表3。
Figure A9880851700631
a斑和产量降低分析按照文中所述方法采用双份平行样品进行。表2中给出了Towne染色的数据。斑分析的结果用IC50来表示，产量降低实验的结果用IC90来表示。
b斑分析实验用来测定DHPG抗HSV-1的活性；用ELISA分析测试所有其它化合物(每个样品在四个池中实验)。
c在进行HCMV斑计数时，用HFF细胞进行可见细胞毒性的评分。
给出的是双份平行样品实验的结果。按照文中所述的方法，测定KB细胞生长的抑制情况(做四份平行样品)。结果用IC50来表示。
d来自2-4个实验的平均值。
e＞100表示IC50或IC90值大于标注的(最高的)受试浓度。
f来自15个实验的平均值±标准差。
g分别为来自108，33和3个实验的平均值±标准差。
Figure A9880851700641
a斑和产量降低分析按照文中所述方法采用双份进行。表2中还给出了Towne株的数据。斑分析的结果用IC50来表示，产量降低实验的结果用IC90来表示。
b来自2-3个实验的平均值。
化合物抗肝炎B病毒(HBV)的活性可以按照Jansen，R.等人在抗微生物制剂和化疗，Vol.37，No.3，pp.441-447，1993中所述的方法进行。在两个独立的实验中，2-溴-5，6-二氯-1-(α-L-来苏呋喃糖基)苯并咪唑(化合物5a)的IC50值为8.8μM和16μM。
尽管已对本发明作了详细的描述并例举了一些具体的实施方案，但是对于本领域内的专家来说，很明显，在不违背本发明精神和范围的前提下，可以进行各种变化和修饰。

Claims (23)

1、D-和L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物，它们选自具有下列通式的化合物组：
Figure A9880851700021
其中
R2，R4，R5，R6和R7各自独立，可以相同或不同，它们独立的选自：-H，-F，-Cl，-Br，-I，-NO2，-N(R8)2，-OR8，-SR12，以及-CF3，其中R8独立地为-H或具有1-6个碳原子的烷基，且R12独立地为-H或具有1-10个碳原子的烃基基团；并且，
R9，R10和R11各自独立，可以相同或不同，为H或保护的羟基基团。
2、权利要求1中所述的D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，
其中：
R2选自-H，-F，-Cl，-Br，-I和-N(R8)2；
R4和R7均为-H；
R5和R6独立地选自-H，-F，-Cl，-Br和-I。
3、权利要求1或2中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其中所述的化合物为α-D-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。
4、权利要求1或2中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其中所述的化合物为β-D-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。
5、权利要求1或2中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其中所述的化合物为α-L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。
6、权利要求1或2中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其中所述的化合物为β-L-来苏呋喃糖基苯并咪唑化合物。
7、权利要求1或2中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-溴-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-苄硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
8、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基)-2，5，6-三氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
9、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-溴-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
10、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲基氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
11、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-异丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
12、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-环丙氨基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
13、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-硫代-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
14、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-苄硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
15、权利要求1中所述的来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物，其选自下列化合物：
1-(来苏呋喃糖基-)-2-甲硫基-5，6-二氯-苯并咪唑；它们的异头、光学和构型异构体；以及它们制药学上可以接受的盐类和前药衍生物。
16、包含生物上可接受载体以及权利要求1-15中所述的任意一个D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物的组合物。
17、在被病毒感染的细胞中预防或抑制病毒繁殖和/或复制的方法，其包括使细胞与有效剂量的权利要求1-15中所述的任意一个D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物进行接触，预防或抑制病毒在细胞中繁殖和/或复制。
18、预防细胞中病毒感染的方法，其包括使细胞与预防有效剂量的权利要求1-15中所述的任意一个D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物进行接触。
19、治疗病毒感染的方法，其包括给予被感染的宿主治疗有效剂量的权利要求1-15中所述的任意一个D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物。
20、预防宿主病毒感染的方法，其包括给予宿主预防有效剂量的权利要求1-15中所述的任意一个D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物进行接触。
21、权利要求17-20任意一项中所述的方法，其中的病毒感染是指HCMV，HSV以及肝炎病毒感染。
22、权利要求17-20任意一项中所述的方法，其中的病毒感染是指肝炎病毒感染。
23、制备权利要求1中D-或L-来苏呋喃糖基苯并咪唑类化合物的方法，所述的方法包括以下步骤：
(a)使式(II)化合物与式(III)化合物进行反应，
Figure A9880851700061
其中R2选自-Cl，-Br和＝S，且R9，R10或R11各自独立，可以相同或不同，并且为-H或羟基保护基团；且，
(b)随后进行一或多个下列步骤：
  (i)从产品(a)上去除一或多个羟基保护基团，如果存在；
  (ii)使产品(a)与HX进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (iii)使产品(a)与R8NH2进行反应，其中的为-H或具有1-6个碳原子的直链、支链或环状烷基基团；
  (iv)使产品(a)与H2NCSNH2进行反应；
  (v)使产品(a)与C6H5CH2X进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (vi)使产品(b)(iv)与C6H5CH2X进行反应，其中X选自-Cl，-Br，-F和-I；
  (vii)使产品(a)与CH3I进行反应；并且
  (viii)使产品(b)(iv)与CH3I进行反应。
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PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication