CN1259940A

CN1259940A - 晶体Roxifiban

Info

Publication number: CN1259940A
Application number: CN98806074A
Authority: CN
Inventors: M·B·毛林; P·马; D·J·梅洛尼; J·A·佩斯蒂; L·T·罗萨诺; R·K·瓦德; J·G·尹; L·H·张
Original assignee: DuPont Merck Pharmaceutical Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Pharma Co
Priority date: 1997-06-16
Filing date: 1998-06-12
Publication date: 2000-07-12
Also published as: PL337612A1; US6306886B1; HUP0004755A3; EA200000028A1; JP2002504153A; SK166699A3; HUP0004755A2; AR023840A2; NO996182D0; EE9900573A; AU8071998A; AR016070A1; IL132618A0; AU751198B2; HRP980291A2; KR20010013790A; NO996182L; WO1998057939A1; EP0991630A1; CA2294047A1

Abstract

制备晶体形式的有效的血小板糖蛋白Ⅱb/Ⅲa拮抗剂roxifiban。晶体roxifiban以两种多晶型物形式存在,称为1型和2型。这些多晶型形式通过x－射线粉末衍射以及固态碳NMR鉴定。介绍了药用组合物以及治疗或预防由血小板聚集诱发的疾病的方法。

Description

晶体Roxifiban

发明领域

制备晶体形式的有效的血小板糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂roxifiban。晶体roxifiban以两种多晶型物形式存在，称为1型和2型。这些多晶型形式通过x-射线粉末衍射以及固态碳NMR来鉴定。介绍了药用组合物以及治疗或预防由血小板聚集诱发的疾病的方法。

发明背景

本发明涉及晶体形式的有效的血小板糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂，称为roxifiban。Roxifiban是乙酸盐甲酯的前药形式的有效的血小板糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂。它是非肽异噁唑啉化合物，由以下的结构式表示：

Roxifiban其化学名为N³-[2-{3-(4-亚胺甲基氨基苯基)-异噁唑啉-5(R)-基}-乙酰基]-N²-(正丁氧基羰基)-2，3-(S)-二氨基丙酸甲酯乙酸盐。Roxifiban包括在专利合作条约申请号PCT/US94/13155(国际专利公布号WO 95/14683)(1994年11月14日申请)的说明书和权利要求书中，其公开内容通过引用结合到本文中。该国际专利申请要求U.S.序号08/157,598(1993年11月24日申请)、U.S.序号08/232,961(1994年4月22日申请)和U.S.序号08/337,920(1994年11月10日申请)的优先权，其每个公开内容通过引用结合到本文中。Roxifiban的前药碱的三氟乙酸盐的合成在PCT/US94/13155的实施例314B中说明。

已发现roxifiban的活性成分能抑制可溶性粘着蛋白，如纤维蛋白原、冯·维勒布兰德因子、纤连蛋白和玻连蛋白，与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。因此，该化合物能够抑制由所有已知的内源性血小板激动剂诱发的血小板的活化与聚集。所以roxifiban可用于治疗或预防血栓疾病，包括血栓或栓子形成、伤害性血小板聚集、血栓溶解后再闭合、再灌注损伤、再狭窄、动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞和不稳定心绞痛。也可通过给予roxifiban治疗其它涉及细胞粘附过程的疾病。这些疾病包括，如，类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应、成人呼吸综合症、器官移植排斥反应、败血病性休克、牛皮癣、接触性皮炎、骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤转移、糖尿病性视网膜病、炎症和肠炎疾病。

治疗或预防以上所提疾病是通过给予需要此治疗或预防的人或动物体治疗有效量的roxifiban来完成。可将该化合物以固体或液体剂型肠道或非肠道给药。通常所用剂量为每日每kg体重约0.001-约10mg，优选每日每kg体重约0.005-约1mg。

Roxifiban的合成以及以基本纯的结晶产物的回收在Zhang等，Tetrahedron Letters，37(26)，4455-58(1996)；Zhang等， J.Org.Chem.，62(8)，2469(1997)中说明。以前一直不知roxifiban可以以稳定的晶体多晶型形式存在。对于roxifiban的制备、纯化和制剂而言，制备该药物的晶体形式比较有利。因此，需要该药物的稳定晶体形式以及需要其制备的可靠及可重复的方法。

发明概述

一方面，本发明涉及晶体roxifiban。相关方面为roxifiban的新型晶体多晶型物，称为1型和2型。1型多晶型物与2型多晶型物的特征及区别在于固态碳NMR和X-射线粉末衍射分析上。

本发明的另一方面涉及晶体roxifiban和其1型和2型多晶形物的药用组合物。通过将治疗有效量的晶体前药与药学上可接受的载体混合，可将本发明的晶体前药产物制成常用的固体药用剂型或用于制备液体剂型。另一方面，本发明涉及抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物结合的方法，该方法包括给予充足量的能导致血小板糖蛋白IIb/IIIa与有效抑制量的所述活性药物接触的晶体roxifiban。本发明特别包括治疗或预防各种血栓疾病以及其它有关细胞粘附疾病的方法，其包括给予治疗有效量的含有本发明新型晶体形式roxifiban的药用组合物。

附图的简要说明

本发明通过参照以下所述的附图进行说明。

图1是roxifiban的1型晶体多晶型物的固态¹³C CP/MAS NMR光谱。

图2是roxifiban的2型晶体多晶型物的固态¹³C CP/MAS NMR光谱。

图3所示roxifiban的1型和2型晶体多晶型物的X-射线粉末衍射图。

图4是roxifiban的1型和2型多晶型物的混合物的¹³C CP/MASNMR光谱的峰面积比相对该混合物中1型多晶型物的摩尔比率所作出的标准曲线。

发明详述

在第一实施方案中，本发明提供基本纯品形式的晶体roxifiban。

在更优选的实施方案中，晶体roxifiban纯度大于90％。

在第二实施方案中，本发明提供基本纯品形式的晶体roxifiban的1型多晶型物。

在更优选的实施方案中，晶体roxifiban的1型多晶型物的纯度大于90％。

在另一优选的实施方案中，1型多晶型物特征在于其固态¹³CCP/MAS NMR光谱在63和66ppm处具有双重峰。

在更优选的实施方案中，1型多晶型物的固态¹³C CP/MAS NMR光谱在19和21ppm处具有双重峰。

在另一优选的实施方案中，晶体roxifiban的1型多晶型物所具有的固态¹³C CP/MAS NMR光谱与图1中所示的基本一致。

在另一优选的实施方案中，1型多晶型物特征是X-射线粉末衍射图具有的2θ值为6.4±0.2，9.6±0.2，12.5±0.2，14.7±0.2，19.3±0.2，21.5±0.2，22.5±0.2，23.2±0.2，25.2±0.2，27.2±0.2和32.2±0.2。

在更优选的实施方案中，1型多晶型物的X-射线粉末衍射图在2θ为13.6±0.2处基本上无峰。

在另一优选的实施方案中，1型多晶型物的特征是其X-射线粉末衍射图与图3中所示的基本一致。

在第二实施方案中，本发明说明通过将治疗有效量的1型多晶型物与药学上可接受的载体混合而制备的药用组合物。

在优选的实施方案中，药用组合物为固体或液体形式。

在更优选的实施方案中，药用组合物每单位剂量含有约0.1-约25mg该化合物。

在第三实施方案中，本发明说明固体单位剂型的药用组合物，其包含治疗有效量的1型多晶型物和药学上可接受的载体。

在优选的实施方案中，以胶囊、片剂、粉末或颗粒形式的药用组合物含有约0.1-约25mg该化合物。

在第四实施方案中，本发明说明抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物结合的方法，其包括提供充足量的能导致血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物与有效抑制量的该活性药物接触的1型多晶型物。

在优选的实施方案中，可溶性粘着蛋白是纤维蛋白原、冯·维勒布兰德因子、纤连蛋白或玻连蛋白。

在另一优选实施方案中，给人或动物体提供该化合物以在体内抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

在另一优选实施方案中，给含有血液的体外装置提供该化合物以在体外抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

在第五实施方案中，本发明说明治疗或预防选自血栓或栓子形成、伤害性血小板聚集、血栓溶解后再闭合、再灌注损伤、再狭窄、动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞和不稳定心绞痛等血栓疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗有效量的1型多晶型物。

在优选的实施方案中，给予该化合物的剂量为每日每kg体重约0.001-约10mg。

在另一优选的实施方案中，给予该化合物的剂量为每日每kg体重约0.005-约1mg。

在更优选的实施方案中，给予该化合物用以治疗或预防心肌梗塞或休克。

在更优选的实施方案中，给予该化合物以便用于治疗或预防心肌梗塞或中风。

在第六实施方案中，本发明说明治疗或预防类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应、成人呼吸综合症、器官移植排斥反应、败血病性休克、牛皮癣、接触性皮炎、骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤转移、糖尿病性视网膜病、炎症和肠炎疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗或预防有效量的1型多晶型物。

在第七实施方案中，本发明说明通过自混合溶剂系统重结晶roxifiban制备晶体roxifiban的1型多晶型物。

在第八实施方案中，本发明提供基本纯品形式的晶体roxifiban的2型多晶型物。

在优选的实施方案中，晶体roxifiban的2型多晶型物的纯度大于90％。

在另一优选的实施方案中，2型多晶型物特征在于其固态¹³CCP/MAS NMR光谱在66ppm处具有单峰，在63ppm处没有明显的峰。

在更优选的实施方案中，2型多晶型物的固态¹³C CP/MAS NMR光谱在19ppm处具有单峰，在21ppm处没有明显的峰。

在另一优选的实施方案中，2型多晶型物所具有的固态¹³CCP/MAS NMR光谱与图2中所示的基本一致。

在另一优选的实施方案中，2型多晶型物特征是X-射线粉末衍射图包括的2θ值为6.4±0.2，9.6±0.2，12.4±0.2，13.6±0.2，18.8±0.2，20.7±0.2，22.6±0.2，23.1±0.2，25.1±0.2，26.1±0.2，27.3±0.2和28.5±0.2。

在另一优选的实施方案中，2型多晶型物的特征是其X-射线粉末衍射图与图3中所示的基本一致。

在第九实施方案中，本发明说明通过将治疗有效量的2型多晶型物与药学上可接受的载体混合而制备的药用组合物。

在优选的实施方案中，药用组合物为固体或液体形式。

在第十实施方案中，本发明说明固体单位剂型的药用组合物，其包含治疗有效量的2型多晶型物和药学上可接受的载体。

在优选实施方案中，以胶囊、片剂、粉末或颗粒形式的药用组合物含有约0.1-约25mg该化合物。

在第十一实施方案中，本发明说明抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物结合的方法，其包括提供充足量的能导致血小板糖蛋白IIb/IIIa与有效抑制量的该活性药物接触的2型多晶型物。

在第十二实施方案中，本发明说明治疗或预防选自血栓或栓子形成、伤害性血小板聚集、血栓溶解后再闭合、再灌注损伤、再狭窄、动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞和不稳定心胶痛等血栓疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗有效量的2型多晶型物。

在更优选的实施方案中，给予该化合物用以治疗或预防心肌梗塞或中风。

在第十三实施方案中，本发明说明治疗或预防类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应、成人呼吸综合症、器官移植排斥反应、败血病性休克、牛皮癣、接触性皮炎、骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤转移、糖尿病性视网膜病、炎症和肠炎疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗或预防有效量的1型多晶型物。

在第十四实施方案中，本发明说明通过自混合溶剂系统重结晶roxifiban制备晶体roxifiban的2型多晶型物。

合成

Roxifiban是具有以下结构的治疗上活性的异噁唑啉化合物的光学纯对映体的甲酯前药的乙酸盐：

PCT/US94/13155的实施例314B中说明活性药物物质(II)的甲酯的三氟乙酸盐的合成方法。正如有机化学合成的技术人员所了解的那样，可采用其中所述的方法，通过在最后合成的步骤中用乙酸取代三氟乙酸制备roxifiban。

另一制备晶体roxifiban的方法在以上Zhang等的参考文献中说明。该合成基本上应用Kawase和Kakugawa，J.Chem.Soc.，PerkinTrans I，1979，p.643所述的方法，从使4-氰基苯甲醛与硫酸羟胺反应生成4-氰基苯甲醛肟开始。通过以下反应式说明该反应：

在三乙胺存在下，4-氰基苯甲醛肟与N-氯代琥珀酰亚胺反应生成活性腈氧化物中间体，其再与乙烯基乙酸异丁酯缩合生成下式代表的化合物的外消旋混合物：

用脂肪酶使化合物III的外消旋混合物酶水解生成光学纯R构型的异噁唑啉酸。该异噁唑啉酸由下式表示：

该酶反应可使用商业提供的脂肪酶产品进行，如从AmanoEnzyme得到的脂肪酶PS30。该反应在pH7.5磷酸盐缓冲液中进行。

可用催化量的叔丁醇钾将具有S构型的式III未水解的异丁基酯外消旋化。再重复该酶水解-碱的差向异构化过程，得到高收率的光学纯的异噁唑啉酸。

使该式IV的光学纯的异噁唑啉酸与N-α-丁氧基羰基-1，2-二氨基丙酸的甲酯偶合得到下式光学纯的中间体：

该光学纯氨基酸N-α-丁氧基羰基-1，2-二氨基丙酸可由商业提供(如Bachem提供)，可在亚硫酰氯存在下，使其与甲醇反应转化成其甲酯。

通过Pinner反应将化合物V转化成亚胺酸酯(imidate)中间体(Allen等，J.Am.Chem.Soc.(1958)80，591；Zhang等，TetrahedronLetters，(1996)37(26)，4455-58)。可使该亚胺酸酯中间体与乙酸铵反应生成较高收率的所要求的乙酸盐，roxifiban(I)。从反应介质中回收晶体roxifiban，干燥得到较高收率的晶体roxifiban。

已发现该方法制备出roxifiban的两种晶体多晶型物的混合物，用1型和2型表示。

从甲醇稀溶液中重结晶roxifiban得到1型多晶型物。该重结晶溶液优选包含每克roxifiban多于约20mL甲醇，更优选每克roxifiban多于约25mL甲醇。在roxifiban浓度较高时，用甲醇重结晶通常得到1型和2型多晶型物的混合物。相对快速冷却甲醇溶液有利于制备1型多晶型物。将roxifiban的稀甲醇溶液加热至约50-约65℃有利于使该化合物完全溶解。然后将该溶液冷却至＜35℃使主要为1型的产物结晶。

也可通过将反溶剂，如乙酸甲酯，加入到该化合物的稀甲醇溶液中来制备1型多晶型物。或者，将热的二甲苯加入到加热的roxifiban甲醇溶液中，接着从该溶液中快速蒸馏甲醇得到主要为1型多晶型物的晶体产物。在以下的实施例2中说明已发现的制备基本纯品形式的1型roxifiban晶体多晶型物的方法。

相对慢速冷却重结晶溶液有利于制备2型多晶型物。将每克roxifiban包含少于约20mL溶剂，优选每克roxifiban少于约10mL溶剂的溶液加热至约50约65℃使该化合物完全溶解。然后将该溶液冷却至＜35℃使主要为2型的产物结晶。

通过慢慢冷却甲醇-乙酸-乙腈混合溶剂中的roxifiban浓溶液，可以回收高收率且高纯度的2型多晶型物。优选的混合溶剂系统包含甲醇-乙酸-乙腈，其体积比约为10∶1.5∶10。

晶体roxifiban的1型和2型多晶型物很容易通过X-射线粉末衍射和固态碳NMR区分。1型和2型多晶型物的X-射线衍射图见图3。1型多晶型物衍射图的主峰出现在2θ值约为6.4，9.6，12.5，14.7，19.3，21.5，22.5，23.2，25.2，27.5和32.2处。这些峰的相对强度可随样品的制备技术、样品的加入方法以及所用的特定仪器而变化。另外，仪器偏差和其它因素也影响2θ值，因此，该峰的测定值在加或减0.2范围变动。

区分1型和2型多晶型物最有用的衍射图的区域在约13.6°的区域。2型多晶型物在该角度呈现强峰，而1型多晶型物的衍射图在该区域基本上是平坦的。

固态碳NMR分析也是晶体roxifiban的多晶型物的定性的有用方法。应用CP/MAS技术的固态¹³C NMR光谱确定roxifiban的1型和2型多晶型物的存在。如图1中的光谱所示，1型多晶型物具有较低对称的结构，其通过在两个结晶学不等效位置之一中的正丁基的占据位置所证实。相反地，如图2中的光谱所示，2型多晶型物的正丁基位于单一确定的结构位置处。因此，1型多晶型物的光谱特征是在63和66ppm以及在19和21ppm处具有双重峰。2型多晶型物的光谱在66和19ppm处呈现单峰。

可用固态¹³C NMR方法定量分析1型和2型多晶型物的混合物。63ppm处的峰面积和66ppm处的峰面积的比值与1型和2型多晶型物的摩尔比值有关。另外，21ppm处的峰面积和19ppm处的峰面积的比值也与1型和2型多晶型物的摩尔比值有关。可通过从该多晶型物的混合物中得到的比率的回归分析制成标准曲线，以供分析之用。图4说明此校准曲线。

虽然可用固态碳NMR方法定量分析多晶型物的混合物，但本发明并不限定任何分析或鉴别所要求的多晶型物的特定方法。

等温微量热法和相溶解度研究表明两种形式的roxifiban的热力学稳定性非常相似。认为2型多晶型物在低于约132℃温度下更加稳定，而1型多晶型物在132℃以上温度下稍加稳定。这些差别很小，1型产物室温下储存19个月后多晶型稳定。没有发现1型多晶型物自发转化为2型多晶型物。Roxifiban 1型和2型晶体多晶型物的水溶解性非常接近，未发现两种多晶型形式的生物学差别。

如果有适当大的结晶，该1型和2型晶体多晶型物的晶胞参数和原子配价可通过单晶X-射线衍射技术测定。如果roxifiban的1型和2型生成针状或片状结晶，它们将不能获得供单衍射方式的足够大的体积。一般而言，单晶研究中两种形式的分析表明该晶体是孪晶或聚结物。在这种情况下，可用透射式电子显微术(TEM)和同步加速器X-射线粉末衍射确定该晶胞。

定义

此处所用术语“混合溶剂系统”是指含有两种或多种溶剂混合物的溶剂系统。本发明中优选的混合溶剂系统是包括乙酸、乙腈和丙酮或乙酸、苯甲醚和丙酮的混合溶剂系统。

本发明说明基本纯品形式的多晶型物。此处所用“基本纯品”是指化合物的纯度高于90％，包括90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％。

可将此处所述的晶体形式的roxifiban制成药用组合物，并用于如上所提的国际专利申请号PCT/US94/13155中所述的治疗和预防的方法中。例如，本发明的新型晶体roxifiban产物除可用于治疗血栓疾病以及以上所提的其它与细胞粘附有关的疾病外，还可用于外周动脉的手术(动脉移植)、颈动脉内膜切除术和心血管手术中，其中动脉和器官的操作和/或血小板与人工表面的相互作用能导致血小板的聚集和消耗，而其中所聚集的血小板可形成血栓和血栓栓塞。可给予手术患者含有本发明化合物的制剂以抑制血栓和血栓栓塞的形成。

该晶体化合物还可用于体外装置中来抑制血小板膜上血小板糖蛋白IIb/IIIa与吸附在体外系统表面上的纤维蛋白原或其它细胞粘着蛋白之间的相互作用。

可将本发明晶体形式的roxifiban以口服剂型给药，如片剂、胶囊(各自可包括缓释或限时释放剂型)、丸剂、粉末剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、悬浮剂、糖浆剂和乳剂。同样地，还可以以静脉内(大量注射或输液)、腹膜内、皮下或肌内形式给药或通过透皮电离子渗透传递系统给药，所有所用的剂型对药学领域的普通技术人员都是熟悉的。

当roxifiban溶解时，它失去其晶体结构；但可用其制备其中该药物为溶解或混悬的液体制剂。另外，可将该晶体roxifiban混入固体剂型中，如片剂、胶囊、混悬剂等。将治疗有效量的晶体roxifiban与药学上可接受的载体混合而制成本发明的药用组合物。所谓“治疗有效量”是指单独或与其它治疗剂一起给药时，能够有效防止或缓解疾病或症状或者该疾病或症状的发展的量。

适于给药的剂型(药用组合物)一般每剂量单位含有约0.05-约50mg的晶体roxifiban。在这些药用组合物中，晶体roxifiban的量一般为该组合物总重量的约0.1-95％(重量)。

对于以片剂或胶囊形式口服给药，可将晶体roxifiban与非毒性的药学上可接受的惰性载体，如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、磷酸二钙、硫酸钙、甘露糖醇、山梨醇等混合。对于以液体形式口服给药，可将晶体roxifiban与任何口服非毒性的药学上可接受的惰性载体，如乙醇、甘油、水等混合。如需要或必要的话，还可使用适当的粘合剂、润滑剂、崩解剂、调味剂和着色剂。适当的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖、葡萄糖或β-乳糖、玉米甜剂、天然和合成胶如阿拉伯胶、黄耆胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、皂土、黄原胶等。

应用本领域技术人员熟悉的传递系统，也可将本发明的晶体roxifiban化合物制成供鼻内或局部使用的组合物。另外，还可用透皮电离子渗透皮肤贴片供药物连续传递。

该晶体roxifiban还可通过脂质体传递系统给药，如小单层囊泡、大单层囊泡和多层囊泡。可用各种磷脂，如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成脂质体。

还可将晶体roxifiban与作为靶向药物载体的水溶性聚合物偶合。这些聚合物包括聚乙烯吡咯烷吡喃共聚物、聚羟基丙基异丁烯酰胺-苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺-苯酚或由棕榈酰基取代的聚氧化乙烯-多熔素。另外，可将晶体roxifiban与一类能控制药物的释放的可生物降解的聚合物偶合，如，聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯以及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。

晶体roxifiban的明胶胶囊可包含该化合物和粉末化的载体，如，乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可使用类似的稀释剂制备压制片。片剂和胶囊都可制成缓释产品以在一定时间内连续释放药物。可将片剂包糖衣或薄膜衣来掩盖任何不良味道及防止空气对片剂作用，或包肠溶衣以在胃肠道选择性崩解。一般地，水、适当的油、盐水、葡萄糖水溶液和有关的糖溶液及二元醇，如丙二醇或聚乙二醇是胃肠外溶液的适当载体。可通过将晶体roxifiban溶于该载体中制备胃肠外溶液，如果必要可加入缓冲物质。适当的稳定剂为抗氧化剂，如单独或混合应用的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸。还可使用柠檬酸及其盐和EDTA钠。胃肠外溶液还可含有防腐剂，如苯扎氯铵、对羟基苯甲酸甲酯或丙酯和氯丁醇。

在本领域标准参考书，Remington的Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.中说明了适当的药物载体。

以下说明本发明晶体roxifiban给药的几个代表性的有用的药物剂型：

胶囊通过在每个标准的两节硬明胶胶囊中填充2毫克晶体roxifiban、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁制备大量单位胶囊。

软明胶胶囊制备晶体roxifiban在可消化的油如豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，然后通过正位移泵注入明胶中形成含有2毫克roxifiban的软明胶胶囊。再将该胶囊冲洗、干燥。

片剂通过常用方法制备大量片剂，从而在每剂量单位中含有2毫克晶体roxifiban、0.2毫克胶态二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可采用适当的包衣物以增加适口性或延迟吸收。

注射剂通过将0.2％(重量)的晶体roxifiban在10％(体积)的丙二醇和水中搅拌，制备适于注射给药的胃肠道外组合物。用氯化钠使该溶液等渗，灭菌。

悬浮剂制备口服给药的混悬水溶液，而使每5mL含有2mg分散均匀的晶体roxifiban、200mg羧甲基纤维素钠、5mg苯甲酸钠、1.0g山梨糖醇溶液(U.S.P.)和0.025mL香兰素。

分析方法 X-射线粉末衍射

用Philips 3720型自动粉末衍射仪测定X-射线粉末衍射数据。用PW 1775型多位样品转换器，以分批方式进行样品测定。该衍射仪装置可变狭缝(θ-补偿狭缝)、闪烁计数器和石墨单色器。放射物为CuKα(40kV，30mA)。在室温下从2至60度2θ收集数据；步长(step size)为0.02度；计数时间为每步0.5秒。在玻璃样品器上将样品制成无溶剂薄层粉末的物质。固态碳NMR

应用CP/MAS技术，对于¹³C在Varian VXR-200 S NMR上，在50.3MHz下测定固态¹³C NMR光谱。测定该光谱大约使用200mg样品。所有测定都在室温下进行。用六甲基苯作为副校准物，以TMS为基准记录化学位移。用间断的去耦脉冲程序结合在Varian Unity 400NMR上100MHz下进行的液态¹³C实验测定固态共振值。

光谱中信号峰裂数的原点的正值需要在较低的静态场强下进行另外的¹³C CP/MAS NMR实验。它在具有25.2MHz的¹³C共振频率的100-MHz光谱仪上进行。同步加速器X-射线粉来衍射

通过透射式电子显微术(TEM)和同步加速器X-射线粉末衍射结合测定Roxifiban的两种多晶型物的晶胞参数。TEM采用JEM-2000EX(200kV加速电压)显微镜，其装备鉴定所述物质的Gatan 1024×1024CCD照相机。在光束线DND-5BMB的Huber衍射计上收集同步加速器X-射线粉末衍射图。使用Si(111)分析仪和1×8mm级的狭缝连同闪烁计数器一起达到尽可能高的分辨率和信号/噪音比。

实施例

通过以下实施例进一步说明本发明，这些实施例对本发明不作任何限制。

实施例1

晶体Roxifiban的合成

4-氰基苯甲醛肟在55-60℃下，将甲醇(272.1 L)、4-氰基-苯甲醛(50kg，381.3mol)和硫酸羟胺(36.1kg，219.7mol)的溶液搅拌3小时，然后加入水(272L)。将该混合液冷却至0-5℃，保持30分钟。过滤收集粗产物。滤饼用冷却的甲醇和水的混合溶剂(2/3比例，735.0L)和水(750.0L)洗涤，真空干燥(60-70℃)至恒重：54.1kg，收率97％；mp 174-6℃；¹H NMRδ7.82(2H)，7.88(2H)，8.26(1H)，12.00(1H)。C₈H₆N₂O分析计算值：C，65.75；H，4.14；N，19.17。实测值：C，65.73；H，4.26；N，19.14。

(-)-异丁基-2-[3-(4-氰基苯基)-4，5-二氢-5-异噁唑基]乙酸酯(III)向DMF(262.0 L)、4-氰基苯甲醛肟(46kg，342.1mol)和N-氯代琥珀酰亚胺(54kg，389.4mol)的溶液中加入乙烯基乙酸异丁酯(95kg，665.7mol)。将该溶液冷却至2-6℃，在4小时内慢慢加入三乙胺(40kg，388.6mmol)。在相同温度下，再将反应物搅拌1小时。加入水(330.0L)和盐酸(1N，49L)。过滤收集粗产物，用水(555.0L)洗涤，再将其溶于甲苯(500.0L，40℃)中。将有机层用水(291.0L)洗涤，共沸蒸馏干燥(除去约250L甲苯)。加入庚烷(300.0L)，将反应物冷却至0-5℃3小时。过滤收集产物，用甲苯/庚烷(150.0L，1/2比例)洗涤。在55-60℃下真空干燥产物至恒重：81.8kg，收率90％；mp 98-100℃；¹H NMR(CDCl₃)δ0.96(6H)，1.96(1H)，2.70(1H)，2.92(1H)，3.15(1H)，3.56(1H)，3.90(2H)，5.20(1H)，7.70(2H)，7.80(2H)。C₁₆H₁₈N₂O₃分析计算值：C，67.12；H，6.34；N，9.78。实测值：C，67.06；H，6.20；N，9.76。

(R)-2-[3-(4-氰基苯基)-4，5-二氢-5-异噁唑基]乙酸将H₂O(597.0L)、NaH₂PO₄-H₂O(60.0kg)、NaOH水溶液(33％，36.0L)、Triton X-100(3.2kg)、化合物III(40.0kg，139.7mol)和脂肪酶PS30(4.0kg，酶含量8％)的悬浮液慢慢加热至40℃，保持在40-43℃温度范围内直至拆分完毕(约16小时)。将反应混合液的pH保持在7.4-8.0之间，通过加入33％NaOH水溶液调节pH。反应完成时，将该批料冷却至20-25℃，通过加入NaOH水溶液(33％，11.0L)调节反应混合液pH至8.0-8.2。通过Celite层(20kg)过滤收集粗品未反应的s-酯，用水(70L)洗涤。再将粗酯通过外消旋化步骤回收：¹H NMR(CDCl₃)δ0.95(6H)，1.8(1H)，2.69(1H)，2.91(1H)，3.14(1H)，3.54(1H)，3.91(2H)，5.13-5.23(1H)，7.68-7.78(4H)。

用浓盐酸(约57kg)将滤液(约800L)和乙酸异丙酯(20L)的溶液的pH调节至2.8-3.2。将粗产物酸IV沉淀，过滤收集，用水(70L)洗涤。再将粗品用热乙醇(525.0L)结晶得到光学纯度的IV。过滤收集异噁唑啉IV，用乙醇(76.0L)洗涤。干燥至恒重：12.3kg，以III计IV收率77％；mp 198-200℃；¹H NMRδ2.70(2H)，3.20(1H)，3.59(1H)，5.00-5.10(1H)，7.78-7.91(4H)，12.44(1H)。C₁₂H₁₀N₂O₃分析计算值：C，62.61；H，4.38；N，12.17。实测值：C，62.39；H，4.49；N，11.98。

S-酯外消旋化成III 将甲苯(414.0L)和粗s-酯(约120kg湿饼)的溶液加热至50℃，过滤除去Celite(约40kg)。将滤饼用甲苯(72.0L)洗涤。合并有机层，用盐水(108.0L)洗涤。除去水层后，有机层通过共沸蒸馏至恒沸点(111℃)干燥。将该批料冷却至40℃，加入叔丁醇钾的叔丁醇溶液(1N，1.6L)。在40℃下将反应物搅拌(200rpm)直至外消旋化完成。将该批料冷却至20-25℃，加入水(108.0L)。加入盐酸水溶液(1N，1.6L)中和反应混合液。除去底层水溶液，蒸馏浓缩有机层。当除去约380.0L甲苯时，将反应物冷却至60℃。向该溶液中加入庚烷(115L)，在50℃下将反应物保持1小时。将混合液冷却至0-5℃，保持2小时。过滤收集产物IV，用甲苯和庚烷的混合溶剂(1/2比例，70L)洗涤。将产物III真空干燥(50-55℃)至恒重：17.3kg，87％收率。

(R)-甲基-3-[[[3-(4-氰基苯基)-4，5-二氢-5-异噁唑基]乙酰基]氨基]- N-(丁氧基羰基)-L-丙氨酸(V)在0-5℃下，将乙腈(402.0L)、酸IV(12.0kg，52.10mol)、胺(22.4kg，57.30mol)和亚硫酰氯(6.8kg，57.30mol)搅拌1小时。在20℃下，在90分钟内向该溶液中加入二异丙基乙胺(22.2kg，172.00mol)。反应后加入水(612.0L)。粗产物V沉淀出。过滤收集粗产物V，用水(96.0L)洗涤。将湿饼溶于热甲醇(50-60℃，311.0L)中，过滤除去不溶的颗粒。将该溶液冷却至0-5℃3小时，过滤收集产物，用甲醇(75.0L)洗涤。真空干燥(55-60℃)产物至恒重：18.3kg，收率82％；mp 154-6℃；¹H NMRδ0.92(3H)，1.37(2H)，1.59(2H)，1.67(1H)，2.58(1H)，2.71(1H)，3.22(1H)，3.51(1H)，3.67(2H)，3.77(3H)，4.06(2H)，4.44(1H)，5.14(1H)，5.70(1H)，6.38(1H)，7.70(2H)，7.77(2H)。C₁₂H₁₀N₂O₆分析计算值：C，62.61；H，4.38；N，12.17。实测值：C，62.39；H，4.49；N，11.98。

(R)-甲基-3-[[[3-[4-(氨基亚氨基甲基)苯基]-4，5-二氢-5-异噁唑基] 乙酰基]氨基]-N-(丁氧基羰基)-L-丙氨酸单乙酸盐(I)将乙酸甲酯(55.8 L)、甲醇(4.8L)、HCl(9.6kg)和化合物4(12.0kg，27.88mol)的溶液冷却至-20℃，在3-5psi(HCl)、10℃下搅拌27小时。反应后，真空除去HCl，加入乙酸甲酯(21.5L)和甲醇(63.2L)。在10℃下，将残留的HCl用氨(2.5kg)中和。过滤除去产生的氯化铵。将滤饼用乙酸甲酯和甲醇(20.0L)洗涤，向该滤液中加入乙酸铵(6kg)，将该反应液在室温下搅拌过夜。过滤收集粗品得到DMP 754：10.4kg，收率74％。

实施例2

晶体Roxifiban的1型多晶型物

将roxifiban(1.38kg，2.73mol)的乙腈(5.5L)浆状液加入到冰醋酸(2.77L，48.4mol)中。将该浆状液加热至80℃，所有的固体溶解。然后将该溶液冷却至40-45℃，用30分钟加入丙酮(12.5L)。将得到的浆状液在20-25℃下搅拌1小时，然后冷却至0-5℃1小时。过滤固体，用10％甲醇-丙酮溶液(11L)漂洗，在65℃下真空干燥。该步骤得到1.26kg(91％)的晶体roxifiban的1型多晶型物。

按以上所述，将该物质进行粉末X-射线衍射分析。衍射图见图3。衍射图显示出2θ值为6.4±0.2，9.6±0.2，12.5±0.2，14.7±0.2，19.3±0.2，21.5±0.2，22.5±0.2，23.2±0.2，25.2±0.2，27.5±0.2和32.2±0.2。按以上所述也进行固态¹³C CP/MAS NMR分析。得到的光谱见图1。该光谱在19/21ppm和63/66ppm处显示出双峰，它们是1型多晶型物的特征。确定该物质基本上是roxifiban的纯1型多晶型物，未检测出2型多晶型物。

实施例3

在回流下，通过将roxifiban(2.0g，3.9mmol)溶于甲醇(15mL)和乙酸(3mL)中制备其溶液。通过Celite过滤除去任何不溶物；将结晶在过滤颗粒上的任何roxifiban用5mL热甲醇洗涤。再将滤液加热回流，一旦所有的固体溶解，用10分钟加入乙腈(20mL)。再将该溶液加热10分钟以使在加入乙腈过程中可能析出的固体再溶解，再用2小时慢慢冷却至室温。一旦冷却开始时，在该溶液中加入微量2型结晶的晶种直至混悬液中保持混浊。2小时后，再将该混悬液加热回流，除去30mL馏出液，期间用乙腈维持该体积。将该体积再用8mL乙腈进一步稀释，用100分钟将该浆状液冷却至15℃。过滤结晶，用15mL乙腈洗涤，真空干燥得到roxifiban(1.82g，91％回收率)，为白色固体。经X-射线粉末衍射分析确定其为2型结晶，无或有痕迹量的1型结晶。

实施例4

除在完成溶剂交换后保持回流过夜外，按实施例3类似的方法进行重结晶。然后继续按实施例3的处理方法分离roxifiban(1.83g，91％回收率)，为白色固体。经X-射线粉末衍射分析确定其为2型结晶，无或有痕迹量的1型结晶。

实施例5

向100mL圆底烧瓶中加入roxifiban 1型结晶(3.6g，6.1mmol)、30mL甲醇和乙酸铵(0.47g，6.1mmol)。在剧烈搅拌下将该混合液缓慢加热至回流，在回流下再将该混悬液搅拌6小时。然后用4小时将该混合液慢慢冷却至室温。过滤固体，用20mL甲醇和乙腈的混合溶剂(1/1，v/v)洗涤。真空干燥该固体得到roxifiban(3.1g，86％回收率)，为白色针状物。经X-射线粉末衍射分析确定其为2型结晶，无或有痕迹量的1型结晶。

实施例6

向3L圆底烧瓶中加入roxifiban(108.0g，0.182mmol，1型和2型混合物)、乙酸铵(15.2g，0.182mmol)和1100mL甲醇。将该混合液加热回流，再将得到的混悬液搅拌4小时。然后用5小时将该混合液冷却至10℃。收集固体，用400mL甲醇和乙腈的混合溶剂(1/1，v/v)洗涤。真空干燥该固体得到roxifiban(101.0g，93.5％回收率)，为白色针状物，HPLC测定为99.9％(峰面积)和100.6％(重量)的纯度。经X-射线粉末衍射分析确定该产物为2型roxifiban，无或有痕迹量的1型结晶。

实施例7

在1和2型roxifiban样品中收集同步加速器粉末衍射以确定两种晶型的晶胞参数。用相同的光学器件：Si(111)单色器结晶、Si(111)分析结晶和Soller狭缝进行九组测定。使用双波长0.49617和1.00006测定。样品制备如下：样品制备波长1.0mm毛细管中的1型结晶 0.496171.5mm毛细管中的1型结晶 0.496171.0mm毛细管中的2型结晶 0.496171.5mm毛细管中的2型结晶 0.49617固定在未磨光的深平板(deep flat plate)中的1型结晶 1.00006固定在磨光的深平板中的1型结晶 1.00006固定在未磨光的深平板中的2型结晶 1.00006固定在磨光的深平板中的2型结晶 1.00006固定在磨光的深平板中的1和2型结晶 1.000061型晶胞的测定

透射式电子显微术(TEM)测定表明：1型晶胞无论单斜晶或三斜晶都具有低对称性，三晶胞轴的两个约为5和9-10，角度为81°。同步加速器图案表明第三轴更长(约27-28)。每分子的体积约为648³，它在每个晶胞中与两个分子配伍。用CELLREF精选晶胞参数，GSAS的LeBail拟合程序中使用这些数据。所精选的三斜晶的晶胞参数，其空间群P1及Z＝2，为1型多晶型物提供所测定的最后的晶胞。1型 a b c α β数值： 5.02349 28.07480 9.29536 98.533 98.498σ ： 0.00047 0.00228 0.00092 0.006 0.009

γ V数值： 92.244 1279.712σ ： 0.008 0.2082型晶胞的测定

透射式电子显微术(TEM)结果表明：1型和2型的a、c和β值相似。除非所述晶面之一不重合，不能记录2型图案的峰。这需要晶胞中存在四个分子，因此，该晶胞可能是单斜晶，其空间群P21。最长的轴被认定为b，因为TEM衍射图案表明5-9投射具有角度为81°。调整α和γ的角度至90°，期间调整a、c和β角度得到与2型图案一致的晶胞。用CELLREF精选晶胞参数，在GSAS的LeBail拟合程序中使用这些数据以确定2型多晶型物的最后的晶胞。2型 a b c α β数值：4.99190 54.77106 9.37211 90.000 99.154σ ：0.00175 0.02405 0.00325 0.000 0.037

γ V数值：90.000 2529.806σ ：0.000 1.461

Claims

1.晶体roxifiban。

2.基本纯品形式的权利要求1的晶体化合物。

3.权利要求2的化合物，其中基本纯品高于90％纯度。

4.晶体roxifiban的1型多晶型物。

5.基本纯品形式的权利要求4的晶体化合物。

6.权利要求5的化合物，其中基本纯品高于90％纯度。

7.权利要求4的1型多晶型物，其特征是固态¹³C CP/MAS NMR光谱在63和66ppm处具有双重峰。

8.权利要求7的1型多晶型物，其中固态¹³C CP/MAS NMR光谱在19和21ppm处具有双重峰。

9.权利要求4的1型多晶型物，其具有的固态¹³C CP/MAS NMR光谱与图1中所示的基本一致。

10.权利要求4的1型多晶型物，其特征是X-射线粉末衍射图具有的2θ值为6.4±0.2，9.6±0.2，12.5±0.2，14.7±0.2，19.3±0.2，21.5±0.2，22.5±0.2，23.2±0.2，25.2±0.2，27.5±0.2和32.2±0.2。

11.权利要求10的1型多晶型物，其中X-射线粉末衍射图在2θ为13.6±0.2处基本上无峰。

12.权利要求4的1型多晶型物，其特征的X-射线粉末衍射图与图3中所示的基本一致。

13.药用组合物，其通过将治疗有效量的权利要求4的化合物与药学上可接受的载体混合制备。

14.权利要求13的药用组合物，其为固体或液体形式。

15.权利要求14的药用组合物，其每单位剂量含有约0.1-约25mg所述化合物。

16.固体单位剂量形式的药用组合物，其包含治疗有效量的权利要求4的化合物与药学上可接受的载体。

17.以胶囊、片剂、粉末或颗粒形式的权利要求16的药用组合物，其含有约0.1-约25mg所述化合物。

18.抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物结合的方法，其包括提供充足量的能导致血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物与有效抑制量的该活性药物接触的权利要求4的化合物。

19.权利要求18的方法，其中可溶性粘着蛋白是纤维蛋白原、冯·维勒布兰德因子、纤连蛋白或玻连蛋白。

20.权利要求18的方法，其中给人或动物体提供所述化合物以在体内抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

21.权利要求18的方法，其中给含有血液的体外装置提供该化合物以在体外抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

22.治疗或预防选自血栓或栓子形成、伤害性血小板聚集、血栓溶解后再闭合、再灌注损伤、再狭窄、动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞和不稳定心胶痛等血栓疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗有效量的权利要求4的化合物。

23.权利要求22的方法，其中所给予所述化合物的剂量为每日每kg体重约0.001-约10mg。

24.权利要求22的方法，其中所给予所述化合物的剂量为每日每kg体重约0.005-约1mg。

25.权利要求24的方法，其中所给予所述化合物用于治疗或预防心肌梗塞或中风。

26.治疗或预防类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应、成人呼吸综合症、器官移植排斥反应、败血病性休克、牛皮癣、接触性皮炎、骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤转移、糖尿病性视网膜病、炎症或肠炎疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗或预防有效量的权利要求4的化合物。

27.通过自混合溶剂系统重结晶roxifiban制备的晶体roxifiban的1型多晶型物。

28.晶体roxifiban的2型多晶型物。

29.基本纯品形式的权利要求28的化合物。

30.权利要求29的化合物，其中基本纯品高于90％纯度。

31.权利要求28的2型多晶型物，其特征是固态¹³C CP/MASNMR光谱在66ppm处具有单峰，在63ppm处无明显的峰。

32.权利要求31的2型多晶型物，其中固态¹³C CP/MAS NMR光谱在19ppm处具有单峰，在21ppm处无明显的峰。

33.权利要求28的2型多晶型物，其具有的固态¹³C CP/MASNMR光谱与图2中所示的基本一致。

34.权利要求28的2型多晶型物，其特征是X-射线粉末衍射图具有的2θ值为6.4±0.2，9.6±0.2，12.4±0.2，13.6±0.2，18.8±0.2，20.7±0.2，22.6±0.2，23.1±0.2，25.1±0.2，26.1±0.2，27.3±0.2和28.5±0.2。

35.权利要求28的2型多晶型物，其特征是X-射线粉末衍射图与图3中所示的基本一致。

36.药用组合物，其通过将治疗有效量的权利要求28的化合物与药学上可接受的载体混合制备。

37.权利要求36的药用组合物，其为固体或液体形式。

38.权利要求37的药用组合物，其每单位剂量含有约0.1-约25mg所述化合物。

39.固体单位剂量形式的药用组合物，其包含治疗有效量的权利要求28的化合物与药学上可接受的载体。

40.以胶囊、片剂、粉末或颗粒形式的权利要求39的药用组合物，其含有约0.1-约25mg所述化合物。

41.抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物结合的方法，其包括提供充足量的能导致血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物与有效抑制量的所述活性药物接触的权利要求28的化合物。

42.权利要求41的方法，其中可溶性粘着蛋白是纤维蛋白原、冯·维勒布兰德因子、纤连蛋白或玻连蛋白。

43.权利要求41的方法，其中给人或动物体提供所述化合物以在体内抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

44.权利要求41的方法，其中给含有血液的体外装置提供所述化合物以在体外抑制可溶性粘着蛋白与血小板糖蛋白IIb/IIIa复合物的结合。

45.治疗或预防选自血栓或栓子形成、伤害性血小板聚集、血栓溶解后再闭合、再灌注损伤、再狭窄、动脉粥样硬化、中风、心肌梗塞和不稳定心胶痛等血栓疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗有效量的权利要求28的化合物。

46.权利要求45的方法，其中所给予所述化合物的剂量为每日每kg体重约0.001-约10mg。

47.权利要求45的方法，其中所给予所述化合物的剂量为每日每kg体重约0.005-约1mg。

48.权利要求47的方法，其中给予所述化合物用于治疗或预防心肌梗塞或中风。

49.治疗或预防类风湿性关节炎、哮喘、过敏反应、成人呼吸综合症、器官移植排斥反应、败血病性休克、牛皮癣、接触性皮炎、骨质疏松症、骨关节炎、肿瘤转移、糖尿病性视网膜病、炎症或肠炎疾病的方法，其包括给予需要此治疗或预防的宿主治疗或预防有效量的权利要求28的化合物。

50.通过自混合溶剂系统重结晶roxifiban制备晶体roxifiban的2型多晶型物。