CN1247609C - 一种卵巢癌相关基因及其编码的蛋白质 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种卵巢癌相关基因及其编码的蛋白质。本发明所提供的与卵巢癌相关的基因是序列表中序列1的DNA序列；本发明所提供的蛋白质由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成。本发明与卵巢癌发生发展进程相关的基因及其编码的蛋白质，有望为临床卵巢癌的诊断和治疗提供有意义的生物学指标，并为抗肿瘤药物的设计提供新的作用靶点和新思路，将会带来巨大的社会效益及经济效益。

Description

一种卵巢癌相关基因及其编码的蛋白质

技术领域

本发明涉及一种与癌症相关的基因及其编码的蛋白质，特别是涉及一种与卵巢癌相关的基因及其编码的蛋白质。

背景技术

卵巢癌是严重威胁妇女身心健康的恶性肿瘤。美国每年有大约25,000的妇女被诊断为卵巢癌。我国是世界第一人口大国，妇女人口占全球的1/5，卵巢癌患者的人数远远超过美国。随着人口老龄化的增加，卵巢癌的患病率还有逐年上升的趋势。由于卵巢癌生长迅速，缺少早期临床诊断症状，致使60-70％的卵巢癌患者至晚期才被诊断，手术难以根治，而且目前治疗卵巢癌的药物特异性和敏感性均较差，使得卵巢癌患者在妇科肿瘤患者中死亡率最高，5年生存率仅为40％左右，25年来这一低生存率一直没有得到改善。

据估计在人类基因组中大约有5000个潜在的药物靶点，迄今为止成功应用于药物开发的人类药物靶标约有500种，仅占潜在药物靶点的十分之一，因此该领域具有巨大的开发潜力。重要疾病相关基因的研究和成功开发将有助于这一巨大潜在市场的开发和利用。

发明内容

本发明的目的是提供一种与卵巢癌发生发展进程相关的基因及其编码的蛋白质。

本发明提供的与卵巢癌相关的基因，它是序列表中序列1的DNA序列。

所述与卵巢癌相关基因的完整开放读码框为序列表中序列1的第236至949共714个碱基。

本发明提供的与卵巢癌相关的蛋白质，由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成。

利用NCBI的Genbank数据库对本发明基因进行检索，结果表明数据库中没有基因与此基因序列完全相同。进一步利用STS数据库对所获得的基因序列进行比较分析，结果表明本发明基因中含有一个编号为WI-13139的STS，应用GDB的数据库进行进一步的检索，结果表明，本发明基因应定位于9号染色体的长臂2区2带1至3亚带(9q22.1-22.3)。

由于本发明所提供的基因在包括卵巢在内的人体正常组织中均无表达，而在上皮性的卵巢癌组织中表达阳性率高达53％，因此本发明的基因及其编码的蛋白质有望为临床卵巢癌的诊断和治疗提供有意义的生物学指标，并为抗肿瘤药物的设计提供新的作用靶点和新思路，将会带来巨大的社会效益及经济效益，而且，对于基因不同研究阶段所开发的不同产品，包括新抗体、生物芯片的靶基因、筛选出的新药等，也将促进形成新兴的人类基因产业。

附图说明

图1为本发明基因的Northern blot验证结果。

图2为本发明基因在正常卵巢组织中的原位杂交结果。

图3为本发明基因在卵巢癌组织中的原位杂交结果。

图4为本发明基因在卵巢癌细胞OVC3中的原位杂交结果。

图5为本发明基因在胚胎发育组织中的反转录结果。

具体实施方式

实施例1、本发明基因的克隆

本发明的基因cDNA克隆自卵巢癌的细胞系OVC3的cDNA文库，引物序列及其多聚酶链式反应(PCR)的条件如下：

primer 1：5’CGAGAGTGCTTGTGATTTCACGTA 3’

primer 2：5’CGTGCACATAAAGGGTTTATT 3’

50μl反应体系包括：4ul cDNA(100ng/ul)，3μl primerl和10μM primer2，4μl dNTP(2.5mM)，1μl Ex Taq DNA聚合酶(TakaRa公司，5u/μl)，5μl 10×PCRBuffer，30μl灭菌水。反应条件为：94℃1min；48℃1min，72℃2min，30个循环，72℃7min。反应产物克隆至PGEM-T载体(Promega公司，美国)。用常规方法测序，结果表明本发明所克隆到的基因为序列表中序列1的DNA序列。

实施例2、Northern Blot鉴定

随机引物方法用地高辛标记所得基因(DIG DNA Labeling and Detection Kit，Boehringer Mannheim公司，德国)，与来源于OVC3的总RNA进行Northern Blot杂交，杂交结果如图1所示，从图中可以看出在4300个碱基对左右处具有一条明显的谱带。

实施例3、用原位杂交方法检测本发明基因在人体卵巢组织中的表达

利用原位杂交法检测本发明的基因在正常人体卵巢组织中的表达，结果如图2所示，从图中可以看出，本发明的基因在正常人体卵巢组织中没有表达。

实施例4、用原位杂交方法检测本发明基因在肿瘤组织中的表达

利用原位杂交法检测本发明基因在肿瘤组织中的表达，实验结果表明，本发明基因在子宫癌、胃癌、肾癌、肾上腺癌、脑癌、肝癌、肠癌组织中均无表达，但在上皮性的卵巢癌组织中表达阳性率高达53％(76/144)，图3、图4显示出，本发明基因在卵巢癌组织及卵巢癌细胞OVC3中明显扩增，呈显著的阳性反应。

实施例5、用反转录-PCR检测本发明基因在胚胎发育中的表达

用反转录-PCR方法检测人14周胎龄组织和人32周胎龄组织中本发明基因的表达，以β-肌动蛋白(β-actinl)为对照，检测结果如图5所示，其中：A1组为14周胎龄组织中本发明基因的表达；B1组为14周胎龄组织中β-actinl的表达；A2组为32周胎龄组织中本发明基因的表达；B2组为32周胎龄组织中β-actinl的表达；1为卵巢癌细胞系OVC3；2为卵巢；3为胃；4为子宫；5为脾；6为胸腺；7为肾；8为肾上腺；9为脑；10为肝；11为小肠；从图中的结果可以看出，本发明基因在14周胎龄早期胚胎的卵巢组织和肾上腺组织中有表达，但是随着胚胎发育的成熟，本发明基因的表达消失。因此说明本发明基因应该是胚胎早期表达基因家族的成员。

序列表

<160>2

<210>1

<211>4375

<212>DNA

<213>人属人种(Homo sapiens)

<400>1

agagtgcttg tgatttcacg tatttttgct gaactcgtaa aagagacact  50

tggatggtgg attaaccaga acactaacat tctgtgaaaa gtttcaaatt  100

ggagaatatt gaattttcac cctagtccag cagctccgct gctcacttaa  150

atacagatga atgaagaccc cattcggaaa gacacctggc cagcggtcca  200

gagctgatgc aggccatgct ggagtatctg ccaacatgat gaaaaagagg  250

acgtcccaca agaagcatcg gagcagtgtg ggtccgagca aacctgtttc  300

ccagccccgg cggaacatcg taggctgcag gattcagcat gggtggaaag  350

aggggaatgg ccctgttacc cagtggaaag gaaccgttct ggaccaggtg  400

cctgtaaatc cttctttgta tcttataaaa tacgatggat ttgactgtgt  450

ttatggacta gaacttaata aagatgaaag agtttctgcg cttgaagtcc  500

tccctgatag agttgcgaca tctcgaatca gcgatgcaca cttggcagac  550

acaatgattg gcaaagcagt ggaacatatg tttgagacag aggatggttc  600

taaagatgag tggaggggaa tggtcttagc acgtgcacct gtcatgaaca  650

catggtttta cattacctat gagaaagacc ctgtcttgta catgtaccaa  700

ctcttagatg attacaaaga aggcgacctt cgcattatgc ctgattccaa  750

tgattcacct ccagcagaaa gggaaccagg agaagttgtg gacagcctgg  800

taggcaaaca agtggaatat gccaaagaag atggctcgaa aaggactggc  850

atggtcattc atcaagtaga agccaagccc tccgtctatt tcatcaagtt  900

tgatgatgat ttccatattt atgtctacga tttggtgaaa acatcctaga  950

tgtcatcaca aactctgcca aatttgtgga actatgaaat gtattatttg  1000

tagacataaa gacttgattg ctttccagtt taatgaaagc ttaaatgtcc  1050

ctgcgaaccc acaatctctg ccagcagaac tggttttgtt ctgaatagta  1100

cagattgatg tgaacacaaa gcattttgtg taaggagaac ccctttcttt  1150

taaaagaagt ctgtctattt cgaggggagt tacaggcaag tttggtaaaa  1200

gttaagctag tatcatagtc atttaaaatt gtaatagatc ttaaccattt  1250

tccccctcac cctaactctc ttattctgcc gccacaatgc aagcatagtt  1300

tgatgttttc gttattgcct tttttgagat gtatgtatct gtatctacct  1350

atatctatat gtgtgtatac atatataata tatacacaca gatacaagtg  1400

tacacacaca caccacacac cacacacacc ccactggcag tctttgtgga  1450

ttaggatggg ggtgacataa ttttcttgag tttaacagga gtgctttacc  1500

caagtcagtc atggatatga tatcactgct ctttatttaa aagtaaactt  1550

tgggcacagg aaccatatgg gaacattcag cttgtttaaa aaaaaaaaat  1600

cagaagttca gagcaccttt tcaatctgga gcccttaaac cataagtcca   1650

aatatgaatt atttgtgaac agttaatgac ccatattaga attttacaat   1700

ctggtgaaca atctgggtaa aaggctacct ttaattctaa gcttcatttt   1750

tttttggggg ggggttacat tttaatcata aattcttttt tgcaaagccc   1800

aggttcttgt tccacacagt gtaatgtagg tgtattttgg acagcacata   1850

tggtccattg tgtacaagtc agtaatctgg atttcagtac atggatttaa   1900

aaggcaacaa tccatcactg gtttgtgtgt ttttggttaa gtttctggaa   1950

gaatacaatg cttttatatt ggaagtataa gttttgagtg gcattgttgc   2000

cttctaacaa gctctctggg acttttaaag ttttattact attattgcta   2050

atgtatgatt atggtcagag actttcaacc caccccttcc tgcctacccc   2100

tggcttttcc tcacaaagaa tgtctagaca aacagcagct tagtctcctg   2150

acacctcttg tggggtgcat gttcctgctc caggtatgct gttcatgtgg   2200

attcattcca ttcagtggcc ccttggggtt tgcatgccag tgaagcgtta   2250

ccatagaaga gccagccgtt tgtgttcgct tggtaggtgt aagtaatagc   2300

agcccttagc cacggagtct ttatgtggtt tattcctgca aggttgtttt   2350

aaactgaaat agaactgcta gtgtgattgg ttgatcagca aaacagctgc   2400

tctcattttg ttttggagga accctggtgg tttgacagcc aggagaaagg   2450

ccatatgtga aaccagtctc ttgtggagat tggaaatcct ccctgatatt   2500

tgggcagagc ctaaacgtgc atgcttgtca ctcaaacacc agaagtttga   2550

atcagaggtc tgagtgacct cttttgtggc tgttcttgat ggtttccagg   2600

cctcgttatg catggtttgc ttgatgccca ttttttgtgc cttgtgctgt   2650

tggatggtaa cgaccactca ccatgtaaac acagtacctc agttttctgt   2700

ccacagctgc agtcgctctg tccctcgtgc ttcactgtgg gcagccaggg   2750

acaagcttct gaaagcagtg tgatacccaa gtcataggtg cttctcgtat   2800

gtgaacaggt gtcattctac agatctgtta tgtgttttcc tgttgactct   2850

taagagtccc tgcatgtaaa tctcaaagct gagcctggct cccagagtcc   2900

agactgacat tacagcgcaa gagtttgcaa gtgtgtccag catgcaccaa   2950

ctgtgcagaa cttggctcgg taactttgcg tggaaaaata aagtacattt   3000

tgaagtatct tgagggttgg gtcaattgag acatttctag cattacttaa   3050

tgacttgcat tgtggttttt ctgcaagcaa ctttaatgac tttttttata   3100

ccacatggtc tcccagtttc tagatgaatg caacatgatg atggtgatga   3150

tgacgatgag tttaatcatt gttcatttat tgcctttagg gctgagggaa   3200

agggaaggtt tgtttttttt tctccccatt ttcccccatt ctgtctttct   3250

tttggtgact tacaccacat gtaatgacgc tatgactaat tctgctccca   3300

agcccttgta tcttgggctt cattttaggc tcatgtgtca gatctgcatg   3350

cattgcttgc atttttctgg tatctgaatg ttggttcctt gttccaggaa   3400

ttcaacatta atttccaaaa gtatcatggg acttgtgaca atacaagaca   3450

tgaatctatg tataaaattt atcggccttt ctcatttacc tgctctagta   3500

ttattgtatt gtgtgtgcgt gcgtgtgtga tgtcaggctg ccacgtaaaa   3550

cttcagagaa aaatcttaaa agcagaccat ccttttttgc atgctctatt   3600

ctaagtagaa tgttcaatgt aactgactaa aattgcatgt taaagatatt   3650

taggtttttt tgttttcttt atttttattt gttttcagtt tcctgtatat   3700

ttgcttactg tgccgtttta gtggttttag gataaaaatg cactggtgaa  3750

gcaaatgtag tgccaacaga aggtgatttt ccagttgtaa atgtcatgca  3800

gcatttgaag ggactgtgtt ttcttaaaaa aaaatcacag ttacttctaa  3850

accagatttc atttctttta ttgttttatg tgccaaacca cgaagtgcat  3900

tgggcttcaa tctctgaaca ctgtagaccc attagaagac tgttccgatt  3950

gttacaaatt gtagtgcctg aaaacactct taagctgatt gtcttaacaa  4000

aatgaaagtt ctccaaagac aaaacagaac aattattata acaaaataat  4050

tatggttgaa atgtctgtgg ttccttggaa atgctgcgct ctttgtgttt  4100

ttccatcatt agtgcagttg gaatgaatgt gtataggtca gaggtcttcg  4150

tgttcacatt ttaaaattag gtaaatgacc tcatctttca agcttgaatt  4200

catttttaat tttaatttta ttttatacaa tgtgtagaca gttccctgtt  4250

ctctgcattt agaagtatac acaatataaa tctgttaatt ctgtaagtaa  4300

tttttataat tatgatgtaa ctctatctta tccttaaaac atttaaaata  4350

aaccctttat gtgcaaaaaa aaaaa                             4375

<210>2

<211>237

<212>PRT

<213>人属人种(Homo sapiens)

<400>2

Met Met Lys Lys Arg Thr Ser His Lys Lys His Arg Ser Ser Val

1               5                   10                  15

Gly Pro Ser Lys Pro Val Ser Gln Pro Arg Arg Asn Ile Val Gly

                20                  25                  30

Cys Arg Ile Gln His Gly Trp Lys Glu Gly Asn Gly Pro Val Thr

                35                  40                  45

Gln Trp Lys Gly Thr Val Leu Asp Gln Val Pro Val Asn Pro Ser

                50                  55                  60

Leu Tyr Leu Ile Lys Tyr Asp Gly Phe Asp Cys Val Tyr Gly Leu

                65                  70                  75

Glu Leu Asn Lys Asp Glu Arg Val Ser Ala Leu Glu Val Leu Pro

                80                  85                  90

Asp Arg Val Ala Thr Ser Arg Ile Ser Asp Ala His Leu Ala Asp

                95                  100                 105

Thr Met Ile Gly Lys Ala Val Glu His Met Phe Glu Thr Glu Asp

                110                 115                 120

Gly Ser Lys Asp Glu Trp Arg Gly Met Val Leu Ala Arg Ala Pro

                125                 130                 135

Val Met Asn Thr Trp Phe Tyr Ile Thr Tyr Glu Lys Asp Pro Val

                    140             145                 150

Leu Tyr Met Tyr Gln Leu Leu Asp Asp Tyr Lys Glu Gly Asp Leu

                155                 160                 165

Arg Ile Met Pro Asp Ser Asn Asp Ser Pro Pro Ala Glu Arg Glu

                170                 175                 180

Pro Gly Glu Val Val Asp Ser Leu Val Gly Lys Gln Val Glu Tyr

                185                 190                 195

Ala Lys Glu Asp Gly Ser Lys Arg Thr Gly Met Val Ile His Gln

                200                 205                 210

Val Glu Ala Lys Pro Ser Val Tyr Phe Ile Lys Phe Asp Asp Asp

                215                 220                 225

Phe His Ile Tyr Val Tyr Asp Leu Val Lys Thr Ser

                230                 235     237

Claims (3)

1、一种与卵巢癌相关的基因，是序列表中序列1的DNA序列。

2、根据权利要求1所述的基因，其特征在于：所述与卵巢癌相关基因的完整开放读码框为序列表中序列1的第236至949共714个碱基。

3、一种与卵巢癌相关的蛋白质，它由序列表中序列2的氨基酸残基序列组成。

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