CN1241943C - 一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(igf-1)的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子即IGF-1的方法。鹿茸中含有多种生理活性成份以及胰岛素样生长因子(IGF-1)和表皮生长因子(EGF)、成纤维生长因子(FGF)等活性蛋白。在鹿茸的传统加工过程中及一般利用时,IGF-1等活性蛋白都会被破坏,从而大大降低了鹿茸的应用价值,造成很大的资源浪费。本发明提出了一种从鹿茸中提取IGF-1的方法,包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥等步骤。应用本发明技术从鹿茸中提取IGF-1,活性保持良好,具有很高的营养价值,可用作抗衰老保健品的原料。
Description
技术领域
本发明属于一种从鹿茸中提取活性物质的方法,特别是涉及一种鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子即IGF-1的方法。
背景技术
鹿茸为梅花鹿或马鹿的尚未骨化的幼角,几千年来,鹿茸都被认为是一种名贵的滋补品。现代药物化学分析表明,鹿茸中含有多种生理活性成份,主要有磷脂、多肽、生物胺类化合物、前列腺素、维生素、氨基酸、无机元素、高不饱和脂肪酸、脂类和甾体类成份以及皮质醇等。随着生物技术的快速发展,人们发现鹿茸中除了含有以上各种生理活性成份以外,还含有胰岛素样生长因子(IGF-1)、人生长激素(HGH)、促生长释放因子(GHRF-6)、神经生长因子(NGF)、表皮生长因子(EGF)、成纤维生长因子(FGF)等活性蛋白;这些物质都有着各自的功效,但又相互关联;而IGF-1则有着突出的作用。
在传统的鹿茸加工过程中,鹿茸要经过煮炸、烘干等步骤,高温会使其中的IGF-1等活性蛋白变性而失去生理功能;通常人们对鹿茸的利用往往是将其泡在高酒精含量的酒中,而酒精作为一种有机溶剂也会使蛋白变性。因此在鹿茸的传统加工过程中及一般利用时,IGF-1等活性蛋白都会被破坏,从而大大降低了鹿茸的应用价值,造成很大的资源浪费。目前还没有一种较好的办法将IGF-1从鹿茸中提取出来以供人们有效利用。
发明内容
本发明针对上述现有技术存在的不足,提出了一种从鹿茸中提取IGF-1的方法,该方法工艺合理、可行,并能保持IGF-1的活性。
本发明的技术方案是:一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子(IGF-1)的方法,包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥步骤:
(1)切片:用切片机将鲜鹿茸切成薄片;
(2)低温匀浆:将鲜鹿茸薄片放入匀浆机中匀浆,匀浆过程可加入适量的预冷的去离子水,使整个匀浆过程保持低温,匀浆操作应进行至匀浆中没有大的组织块才结束;
(3)超声波处理:将匀浆物用超声波破碎,使细胞破裂,超声波处理过程中,匀浆物应置于冰浴中;
(4)高速离心分离:匀浆物经超声波处理后进行高速离心分离,取上清液;在沉淀中加入一定量的去离子水,重悬后再次进行高速离心分离,取上清液;然后可再重复一次;
(5)超滤:混合各次离心分离所得上清液,用膜进行超滤,去除小分子物质和大分子物质,并对上清液进行浓缩,得浓缩液;
(6)冷冻干燥:先将超滤所得浓缩液冷冻,然后在超低温下用冷冻干燥机进行冷冻干燥。
所述鲜鹿茸应当在新鲜割下后尽快存放于-20℃冷藏。
所述切片步骤(1)应当在从冷藏处取出后立即进行,操作的温度应当在0℃~30℃内;鲜鹿茸切片的厚度为1mm~5mm。
所述低温匀浆步骤(2)可以将匀浆机置于冷库或冷柜中进行。
在所述高速离心分离步骤(4)中离心的速度为5000rpm~20000rpm,离心的时间10min~30min;在沉淀中加入的去离子水的量为其体积的2~5倍。
所述超滤步骤(5)所采用的膜是1000Da~100000Da的膜。
在所述冷冻干燥步骤(6)中将浓缩液冷冻的温度为-20℃,冷冻干燥机的工作温度为-30℃~-50℃,干燥后产品的含水量为3%~10%。
为提高IGF-1收率和含量,在上述方法的超声波处理步骤(3)与高速离心分离步骤(4)之间可增加低温浸提步骤;所述低温浸提步骤是将经超声波处理后的匀浆物静置于0℃~4℃的低温下0~24hr。
应用本发明技术从鹿茸中提取IGF-1,活性保持良好,具有很高的营养价值,可用作抗衰老保健品的原料。
具体实施方式
实施例1:
称取1kg鹿茸,切片后用匀浆机在4℃进行匀浆,然后在冰浴条件下,加入2L预冷的去离子水,混匀后进行超声波破碎。接着将此产物以5000rpm离心20min;沉淀物中再加入2L去离子水,离心;再重复上述步骤一次。混合3次离心上清,用截留分子量为100000Da的超滤膜进行超滤,滤出液再用1000Da的超滤膜超滤,浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥,得到IGF-1成品40克。这种方法得到的产品中,除具有较高含量的IGF-1外,还有EGF、FGF等各种活性蛋白。
实施例2:
称取1kg鹿茸,切片后用匀浆机在4℃进行匀浆,然后在冰浴条件下,加入2L预冷的去离子水,混匀后进行超声波破碎。然后放置在4℃浸提24小时。接着将此产物以5000rpm离心20min;沉淀物中再加入2L去离子水,离心;再重复上述步骤一次。混合3次离心上清,用截留分子量为100000Da的超滤膜进行超滤,滤出液再用1000Da的超滤膜超滤,浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥,得到IGF-1成品45克。这种方法得到的产品中,IGF-1的含量较高。
实施例3:
称取1kg鹿茸,切片后用匀浆机在4℃进行匀浆,然后在冰浴条件下,加入2L预冷的去离子水,混匀后进行超声波破碎。接着将此产物5000rpm离心20min;沉淀物中再加入2L去离子水,离心;再重复上述步骤一次。混合3次离心上清,用截留分子量为10000Da的超滤膜进行超滤,滤出液再用1000Da的超滤膜超滤,浓缩到1L的体积。将浓缩液进行冷冻干燥,得到IGF-1成品20克。这种方法由于使用截留分子量为10000Da的超滤膜进行超滤,去除了更多的大分子物质,得到的产品中IGF-1的含量更高。
Claims (5)
1.一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子的方法,其特征在于包括切片、低温匀浆、超声波处理、高速离心分离、超滤、冷冻干燥步骤:
(1)切片:用切片机将鲜鹿茸切成薄片;
(2)低温匀浆:将鲜鹿茸薄片放入匀浆机中匀浆,匀浆过程可加入适量的预冷的去离子水,使整个匀浆过程保持低温,匀浆操作应进行至匀浆中没有大的组织块才结束;
(3)超声波处理:将匀浆物用超声波破碎,使细胞破裂,超声波处理过程中,匀浆物应置于冰浴中;
(4)高速离心分离:匀浆物经超声波处理后进行高速离心分离,取上清液;在沉淀中加入一定量的去离子水,重悬后再次进行高速离心分离,取上清液;然后可再重复一次;
(5)超滤:混合各次离心分离所得上清液,用膜进行超滤,去除小分子物质和大分子物质,并对上清液进行浓缩,得浓缩液,其中所采用的膜是1000Da~100000Da的膜;
(6)冷冻干燥:先将超滤所得浓缩液冷冻,然后在超低温下用冷冻干燥机进行冷冻干燥,其中将浓缩液冷冻的温度为-20℃,冷冻干燥机的工作温度为-30℃~-50℃,干燥后产品的含水量为3%~10%。
2.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子的方法,其特征在于所述鲜鹿茸应当在新鲜割下后存放于-20℃冷藏。
3.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子的方法,其特征在于所述切片步骤(1)应当在从冷藏处取出后立即进行,操作的温度应当在0℃~30℃内;鲜鹿茸切片的厚度为1mm~5mm。
4.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子的方法,其特征在于所述低温匀浆步骤(2)将匀浆机置于冷库或冷柜中进行。
5.如权利要求1所述的一种从鲜鹿茸提取胰岛素样生长因子的方法,其特征在于所述高速离心分离步骤(4)中的离心速度为5000rpm~20000rpm,离心的时间为10分钟~30分钟;在沉淀中加入的去离子水的量为沉淀体积的2~5倍。
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