CN1239480A - 含有mpl配体的药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及mpl配体组合物，其成分包括：与至少一种水溶性聚合物任选共价连接的具有相应于人内源mpl配体序列中氨基酸片段7－151至1－332(内含)的全长或截短mpl配体；选自谷氨酸盐，磷酸盐，组氨酸，咪唑和乙酸盐的缓冲剂；选自山梨糖醇，蔗糖，甘露糖醇，甘油，聚乙二醇和非极性氨基酸的赋形剂；任选地，去污剂或脂质例如Tween；任选地，选自谷胱甘肽，甲硫氨酸，柠檬酸盐和EDTA的抗氧化剂或螯合剂；具有pH优选范围5.0－60(内含)。这样的组合物形态可以是液体(优选含水的)，冷冻的(优选含水的)或者冻干的。

Description

含有MPL配体的药物组合物
                  发明领域
本发明涉及含有mpl配体的组合物，其成分适于药用。
                  发明背景
天然的人mpl配体是最近克隆的细胞因子，是循环血小板水平的主要调节剂。参见Bartley，T.D.等，细胞(Cell)77：1117-1124(1994)；Lok，S.等，自然(Nature)369：565-568(1994)；de Sauvage，F.J.等，自然369：533-538(1994)；Miyazake，H.等，Exp.Hematol.22：838(1994)；和Kuter，D.J.等，PNAS USA，91：11104-11108(1994)。人内源mpl配体也称之为血小板生成素(TPO)和megapoietin，是一共含有332个氨基酸的蛋白质。
由中国仓鼠卵巢(CHO)和大肠杆菌细胞制备的重组mpl配体在小鼠、大鼠和猴子体内显示出特异性刺激或增加巨核细胞和/或血小板的生物活性。参见例如，Hunt，P.等，Blood 84(10)：390A(1994)。从C-末端截断多达181个氨基酸的人mpl配体保留体内生物活性。所得mpl配体相应于全长序列中1-151直到1-331的氨基酸片段。也可以在人mpl配体蛋白质的N-末端去除前6个氨基酸而保留生物活性。因此，表明生物活性保留在人mpl配体的成熟氨基酸序列的氨基酸7-151(内含)中。
体内试验证明mpl配体的衍生物具有刺激产生巨核细胞和/或血小板的有利活性。参见公开的PCT申请WO95/26746。特别地，用水溶性聚合物例如聚乙二醇(“PEG”)部分衍生化的mpl配体有临床意义，因为它们在体内寿命长且有活性。
以一般方式公开了含有mpl配体和相关的衍生物的组合物。参见公开的PCT申请WO95/26746，WO95/21919，WO95/18858，和WO95/21920。但是，这里描述的对照实验未见报道，该实验可确定何种含有mpl配体的组合物具有适于药用的稳定性。这种组合物对将mpl配体实用于人类患者有重要意义。因此，当前本领域需要使用这种组合物，将mpl配体给予患者，使血小板水平升高。
发明概述
因此，本发明的目的是提供含有mpl配体的药用稳定组合物。
本发明另一个目的是提供对患者给药的含有mpl配体的组合物。
在实施方案中，本发明涉及的组合物包括：与至少一种水溶性聚合物任选共价连接的具有相应于天然人mpl配体的氨基酸7-151至1-332(内含)的氨基酸序列的全长或截短的mpl配体；选自谷氨酸盐，磷酸盐，组氨酸，咪唑和乙酸盐的缓冲剂；选自山梨糖醇，蔗糖，甘露糖醇，甘油，聚乙二醇和非极性氨基酸的赋形剂；任选地，去污剂例如Tween；任选地，选自谷胱甘肽，甲硫氨酸，柠檬酸盐和EDTA的抗氧化剂或螯合剂；具有pH优选范围5.0-6.0(内含)。这样的组合物可以是液体(优选含水的)，冷冻的(优选含水的)或者冻干的。
本发明的其他方面在下面提供的详细说明书中提出。
附图的简要说明
图1给出人内源mpl配体的cDNA序列和相应的蛋白质序列(SEQID NOS：1和2)。它们含有一个前导序列(氨基酸-21至-1，)，该序列在体内自cDNA编码蛋白中切除以产生成熟蛋白。
发明的详细说明
本发明提供含有mpl配体和其他试剂的组合物，其稳定、有生物活性，适于人用。
在第一个实施方案中，本发明涉及mpl配体的组合物。“mpl配体”广义上指能够特异性结合和激活mpl受体，从而刺激体内巨核细胞和/或血小板产生的所有蛋白分子。在优选的实施方案中，mpl配体具有和来自人的配体相同的氨基酸序列，例如天然人序列的氨基酸1-332(SEQ ID NO：2)。在另一个优选实施方案中，mpl配体至少与SEQ IDNO：2的氨基酸片段7-151有相同序列。优选1-171±20氨基酸(即氨基酸1-151至1-191)特别优选相应于SEQ ID NO：2的1-161±10氨基酸相同的氨基酸序列。一些特别优选的mpl配体种类如下：SEQID NO：2的氨基酸1-151，1-152，1-153，1-154，1-163，1-174，1-191，1-232，1-244。最优选的种类具有SEQ IDNO：2的氨基酸残基片段1-163。
mpl配体也可以用一种或多种水溶性聚合物例如一种或多种聚乙二醇(PEG)基团衍生物化。选择的聚合物应该是水溶性的，使得其所连接的mpl配体不在有水环境下(例如生理环境)沉淀。水溶性聚合物的例子在公开的PCT申请WO95/26746中给出，其在这里引作参考。
水溶性聚合物可以使用化学反应连接，例如使用那些在公开的PCT申请WO95/26746中描述的化学反应。优选的连接化学作用是酰化和烷基化。本发明mpl配体衍生物可以连接多个聚合物分子，例如可有2-6个，优选2-5个。聚合物基团通常在氨基酸的α或ε氨基处与蛋白质连接，但是也可考虑只要反应条件合适、反应活性足够，聚合物基团可与蛋白质上的任何氨基连接。
在优选的实施方案中，单个聚合物分子连接mpl配体。在这样的情况下，与mpl配体反应的聚合物应用单一反应基团加以修饰，例如用于酰化的活性酯或者用于烷基化的醛，从而可控制聚合程度。
聚合物可以是分支或未分支的。优先考虑终产物制剂的治疗用途，聚合物应是药学可接受的。水溶性聚合物可以选自基团，例如聚乙二醇，一甲氧基聚乙二醇，葡聚糖，聚-(N-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙基化多醇(例如甘油)和聚乙烯醇。对于mpl配体通过酰化反应进行衍生化，选择的聚合物应该具有单一的反应性酯基。对于mpl配体通过还原烷基化反应进行衍生化，选择的聚合物应该具有单一的反应性醛基。一般情况下，不应该选择天然存在糖基残基的水溶性聚合物，因其通常经哺乳动物重组表达系统更容易制备。聚合物可以是任何分子量，只要其基本不干扰或消除得到的mpl配体衍生物的生物活性。
这里所使用的特别优选的水溶性聚合物是聚乙二醇，缩写PEG。是包括用来衍生其他蛋白质的PEG的任何形式，例如一-(C1-C10)烷氧基-或芳基氧基-聚乙二醇(参见美国专利5252714)。
mpl配体的peg基化作用(pegylation)可以通过本领域已知的peg基化作用的任何反应进行。参见，例如：Focus on Growth Factor3(2)：4-10(1992)；EP0154316；EP0401384；和这里所引用的与peg基化作用相关的其他公开物。优选地，peg基化作用通过与反应性聚乙二醇分子的酰化或烷基化进行。
因此，从优选角度讲，本发明涉及peg基化的mpl配体，其中PEG基通过酰基或烷基连接。如上所讨论的，这样的产物可以是一-peg基化的或多-peg基化的(例如含有2-6个，优选2-5个PEG基团)。聚合物基团通常在氨基酸的α或ε氨基处与蛋白质连接，但是也包括PEG基团可以在合适的反应条件下，与具有足够反应活性的蛋白质上任何氨基连接。
优选分子量5-50kd的PEG基团通过还原烷基化作用方法连接。在最优选的实施方案中，PEG-mpl配体中的PEG基团平均分子量约为20kd(即20kd±2kd)。
特别优选的mpl配体衍生物是指SEQ ID NO：2中氨基酸1-163片段上第一个残基的α位氨基与PEG基团的连接产物，其中PEG通过与PEG醛反应物的还原性烷基化反应而连接。这里该类型mpl配体指定为缩写“PEG-rHuMGDF”。
在优选的实施方案中，mpl配体是已经转染到宿主细胞中的外源DNA序列的表达产物；也就是说，在优选的实施方案中，mpl配体是“重组mpl配体”。重组mpl配体可以在已知为此目的的任何细胞例如CHO细胞中制备。优选的宿主是细菌，特别优选大肠杆菌细胞。根据这里所引述的关于mpl配体克隆和表达的公开出版物中所描述的方法，重组mpl配体易于制备。
尽管先前技术人员曾报道过涉及天然人mpl配体(SEQ ID NO：2的氨基酸1-332)的组合物，但是没有一个人先前报道过这里所提出的作为组合物成分函数的大量稳定性数据。因此，尽管先前预测了mpl配体组合物的稳定性，但是直到本发明时还没有明确公开过具有期望稳定性的组合物，尤其是对于截短的衍生化的mpl配体。
以下文给出的数据为基础，本发明人发现一些稳定组合物包括：与至少一种水溶性聚合物共价选择性连接的具有相应于天然人mpl配体氨基酸片段7-151至1-332(内含)的全长或截短的mpl配体；选自谷氨酸盐，磷酸盐，组氨酸，咪唑和乙酸盐的缓冲剂；选自山梨糖醇，蔗糖，甘露糖醇，甘油，聚乙二醇和非极性氨基酸的赋形剂；任选
去污剂例如Tween；任选地，选自谷胱甘肽，甲硫氨酸，柠檬酸盐和EDTA的抗氧化剂或螯合剂；具有pH优选范围5.0-6.0(内含)。这样的组合物形态可以是液体(优选含水的)，冷冻的(优选含水的)或者冻干的。
该蛋白质(mpl配体)在最终组合物中的浓度一般应该是大约0.1mg/ml至5mg/ml范围，优选0.2mg/ml至3mg/ml，特别优选0.3-1mg/ml。
优选地，缓冲液是5-20mM浓度的乙酸盐，特别优选地大约10±2mM。下面的表1中提供了具体缓冲液和浓度的总结：
                       表1
缓冲液 优选的浓度范围(mM) 操作浓度范围(mM) 试验浓度(mM)
乙酸盐     5-20     8-12     10
磷酸盐     5-20     8-12     10
组氨酸     5-20     8-12     10
组合物的pH随着特定缓冲液和其他因素而变化。对于用适当的酸性缓冲液(例如乙酸盐)提高稳定性的优选的pH范围是4.0-6.0。最优选的范围是4.5-5.5，大约5.0是最优选的实施方案。
组合物应该还含有赋形剂。表2中列出了一些举例的赋形剂和代表性浓度：
                          表2
赋形剂 优选的浓度范围(W/V) 操作浓度范围(W/V) 试验浓度(W/V)
山梨糖醇     3-10％     4-6％     5％
  蔗糖     5-10％     8-10％     9％
甘露糖醇     3-10％     4-6％     5％
一般以一定量加入赋形剂，使得产生等渗溶液。
组合物可以进一步含有在某些情况下将增强稳定性的一些氨基酸。氨基酸可以是极性或非极性的，非极性氨基酸是优选的。举例的极性氨基酸是精氨酸和赖氨酸，举例的非极性氨基酸是甘氨酸，脯氨酸和丙氨酸。
本发明组合物中还可以含有抗氧化剂或螯合剂。优选的抗氧化剂是：EDTA，抗坏血酸，谷胱甘肽，甲硫氨酸和柠檬酸盐。也包括这些试剂的组合，例如柠檬酸盐加EDTA。以适合减少或消除mpl配体的氧化作用的量含有这样的试剂。举例的浓度是：0.1-10mM，优选0.5-5mM，一般1-3mM。
本发明组合物中还可以含有去污剂或脂质。一些代表性去污剂是：聚山梨酯的Tween商标(例如Tween20和Tween80)；Brij 35；Pluronics(例如F-127和F-68)；十二烷基硫酸钠；Triton(例如X-100)；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)；PEG蓖麻油(例如PEG-40)；油烯基(oleth)-3磷酸盐；二乙醇胺油烯基(oleth)-10-磷酸盐；含有例如C8(辛)和C14(十四)脂质的短链，长链单层脂小泡(SLUV)的混合物(例如1∶1)。这些去污剂/脂质的量一般应足以防止由于表面粘连或聚集引起的mpl配体损失。一些举例的去污剂浓度是0.004mg/ml-50mg/ml；优选0.004mg/ml-10mg/ml；最优选0.006mg/ml-0.060mg/ml。当mpl配体的浓度较低，例如尤其是小于等于0.2mg/ml mpl配体时，含有这些去污剂/脂质的需要会更大。
这样的组合物可以是液体(优选含水的)，冷冻的(优选含水的)或冻干的。
关于冻干的组合物，与液体组合物相比，有增加的蛋白质凝聚的可能性。特别优选的冻干的组合物含有pH在4.0-6.0范围内的谷氨酸盐，蔗糖和甘露糖醇的混合物。下面的表3中提供了特别优选的组合物说明：
                  表3
    材料      范围     实施例
  谷氨酸盐     5-20mM     10mM
  蔗糖     2-10％(w/v)     6％(w/v)
  甘露糖醇     1-5％(w/v)     2％(w/v)
  pH     4.0-6.0     5.0
本发明组合物是“稳定的”，这意味着根据单纯的SEC色谱分析，在37℃温度下贮存12星期后保留至少大约87％，优选大约90％，最优选大约93％完整的mpl配体衍生物(参见表4)。这种稳定程度有重要的实践意义，因为较小的稳定性会产生对患者不可接受的安全性。
这里所使用的“治疗有效量”可在患者体内产生合适的生物活性，即对给定症状和处方的患者产生疗效。
本发明组合物可以系统地在肠胃外，静脉内或皮下给药。此时，本发明中使用的治疗组合物可以是无热源、生理可接受水溶液。选择具体的途径取决于要治疗的症状。要求的剂量是足以提高患者血小板和/或巨核细胞水平的量，并且根据要治疗的症状的严重程度，使用的给药方法等而不同。
通过本发明方法和组合物要治疗的症状一般是涉及存在巨核细胞/血小板缺乏或者预期巨核细胞/血小板缺乏(例如由于安排好的手术)的那些症状。这样的症状通常是体内缺乏(暂时的或永久的)活性mpl配体的结果。血小板缺乏的通用术语是血小板减少，因此本发明方法和组合物一般用于治疗血小板减少。
血小板减少(血小板缺乏)由于各自原因而存在，包括用各种药物化疗和其它治疗，放疗，手术，偶然性失血，和其它具体的病症。涉及血小板减少并且可以根据本发明治疗的举例的具体病症是：再生障碍性贫血，自发的血小板减少，导致血小板减少的转移瘤，系统性红斑狼疮，脾肿大，范可尼综合症，维生素B12缺乏，叶酸缺乏，May-Hegglin异常，Wiskott-Aldrich综合症，和阵发性夜发血红蛋白尿。而且对于AIDS的某些治疗导致血小板减少(例如AZT)。一些伤口愈合失调也可以从血小板数增加获得好处。
关于预期的血小板缺乏，例如，由于未来的手术，本发明mpl配体类似物可以在需要血小板之前几天至几小时给药。对于急性情况，例如偶然性和大量失血，mpl配体类似物可以和血液或纯化的血小板一起给与。
mpl配体组合物也可以给计划提供血小板或其它相关细胞的正常人服用。给与本发明组合物会增加患者一次供出的血小板和/或相关的细胞的量。
用于治疗上述病症的方法中涉及的剂量计划将取决于根据主治医师，考虑调整药物作用的各种因素，例如年龄，症状，体重，性别和患者的饮食，感染的严重程度，给药时间和其他临床因素来确定。一般情况下，对于每千克体重的日剂量应该是0.01-1000微克mpl配体类似物范围。
在治疗特征在于其他综合症以及血小板缺乏的疾病状态中，本发明组合物还可以单独使用或者和其他细胞因子，可溶性Mpl受体(即mpl受体)，造血因子，白细胞介素，生长因子或抗体结合使用。预期这样的组合物证明在治疗与血细胞生成的一般刺激剂例如IL-3或GM-CSF结合的血小板减少的一些情况中是有用的。其他巨核细胞刺激因子，即meg-CSF，干细胞生长因子(SCF)，白血病抑制因子(LIF)，制癌蛋白M(OSM)，或者其他具有巨核细胞刺激活性的分子也可以与mpl配体使用。另外举例的用于这样的共同给药的细胞因子或血细胞生成因子包括IL-1α，IL-1β，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-11，集落刺激因子-1(CSF-1)，GM-CSF，粒细胞集落刺激因子(G-CSF)，EPO，干扰素-α(IFN-α)，IFN-β或IFN-γ。更为有用的是同时或者连续服用有效量的可溶性哺乳动物Mpl受体，表明具有一旦巨核细胞达到成熟形式就引起巨核细胞裂解成片段成为血小板的效果。因此，服用PEG-mpl配体(以增加成熟巨核细胞数)后再服用可溶性Mpl受体(以灭活类似物并且使成熟巨核细胞产生血小板)可望是刺激血小板产生的特别有效的方法。调节上述剂量可补偿治疗组合物中这样的附加成分。患者的疗程可以通过常规方法监测。
下面的实施例更全面描述本发明，但是不认为限制其范围。
                      实施例1
下面的表4和5总结了下面一些实施例提供的数据。在这些实施例的每一个中，试验的mpl配体是PEG-rHuMGDF，其含有SEQ ID NO：2的氨基酸1-163，用平均分子量大约20kDa的聚乙二醇基团在N-末端氨基酸的α氨基处单-peg基化。
                         表4
    配方 37℃12星期后通过SEC1测定的主峰百分数
组氨酸，pH8.0，5％山梨糖醇     70
Tris，pH8.0，5％山梨糖醇     47
磷酸盐，pH7.0，5％山梨糖醇     71
组氨酸，pH7.0，5％山梨糖醇     84
磷酸盐，pH6.0，5％山梨糖醇     89
谷氨酸盐/组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇     92
组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇     92
咪唑，pH6.0，5％山梨糖醇     92
谷氨酸盐，pH5.5，5％山梨糖醇     91
谷氨酸盐/组氨酸，pH5.5，5％山梨糖醇     93
乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇     92
谷氨酸盐/组氨酸，pH5.0，5％山梨糖醇     93
谷氨酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇     91
组氨酸，pH5.0，5％山梨糖醇     89
琥珀酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇     76
谷氨酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇     87
琥珀酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇     81
乙酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇     77
酒石酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇     18
琥珀酸盐，pH3.5，5％山梨糖醇     74
1附加的稳定性指数测定，具体地说，是反相和阳离子交换色谱，对SEC给出相似结果。
主峰百分数的减少指示优选的pH范围4.0-6.0，优选5.0-6.0。另外，pH范围4.0-6.0内的缓冲效果表明该范围内一些缓冲液不是优选的。
                           表5
               配方 37℃12星期后SEC1测定的主峰百分数
    乙酸盐，pH5.0，5％等渗多醇(山梨糖醇)     92
    乙酸盐，pH5.0，等渗盐水，一价和二价两者(NaCl)     10
    乙酸盐，pH5.0，等渗极性氨基酸(赖氨酸)     10
    乙酸盐，pH5.0，等渗非极性氨基酸(甘氨酸)     84
所有试验的多醇，包括：山梨糖醇，蔗糖，甘油，甘露糖醇和聚乙二醇，都给出相似结果。
所有的盐(一价和二价两者)，包括：氯化钠，氯化钙，氯化铜，氯化镁，氯化锰，氯化镍，氯化锌和二氯化铁，都给出相似结果。
所有试验的极性氨基酸，包括：精氨酸和赖氨酸，都给出相似结果。
所有试验的非极性氨基酸，包括：甘氨酸，脯氨酸和丙氨酸，都给出相似结果。
所有试验的抗氧化剂，包括：EDTA，抗坏血酸，谷胱甘肽，甲硫氨酸，甲硫氨酸+EDTA和柠檬酸盐，没有表现出超过A50S的PEG-rHuMGDF的稳定性的大大提高(参见定义的实施例)。
                     实施例2
                     pH评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇    (A50S)
10mM乙酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇    (A40S)
10mM琥珀酸盐，pH3.5，5％山梨糖醇  (S35S)
10mM琥珀酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇  (S40S)
10mM琥珀酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇  (S50S)
10mM组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇    (H60S)
10mM咪唑，pH6.0，5％山梨糖醇      (I60S)
10mM酒石酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇  (T40S)
10mM谷氨酸盐，pH4.0，5％山梨糖醇  (E40S)
10mM磷酸盐，pH6.0，5％山梨糖醇    (P60S)
10mM磷酸盐，pH7.0，5％山梨糖醇    (P70S)
10mM Tris，pH8.0，5％山梨糖醇     (T80S)
10mM组氨酸，pH5.0，5％山梨糖醇    (H50S)
10mM组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇    (H60S)
10mM组氨酸，pH7.0，5％山梨糖醇    (H70S)
10mM组氨酸，pH8.0，5％山梨糖醇    (H80S)C.  管瓶：以0.5mg/ml蛋白质浓度装入3cc管瓶1mL。D.  温度和时间点：37℃；时间点在表中给出。E.  分析：HPLC：大小排阻层析(SEC)，反相色谱(RP)，离子交换色谱(IEX)。F.  数据
表6-11给出在37℃孵育指定时间后通过大小排阻，反相和阳离子交换色谱测定的主峰百分数。
    pH评定-在37℃孵育指定时间后通过
    大小排阻层析测定的主峰百分数
                                 表6
 Form*                            孵育时间
  T＝0  T＝2星期   T＝4星期   T＝8星期   T＝12星期   T＝17星期
 A40S 94.3994.9094.6394 2794.9994.9389.7194.90 90.8693.6592.5987.5394.3194.5643.4694.29 88.2090.2990.2085.2993.7794.2034.4493.65 82.9180.9586.1680.7791.7492.7724.4891.30 77.2174.2880.5176.4589.1391.4918.1086.84 70.1962.4372.3471.1285.9694.83-77.94
 S35S
 S40S
 S50S
 H60S
 I60S
 T40S
 E40S
*Form.＝配方。
                                   表7
Form                                  孵育时间
  T＝0  T＝3天  T＝7天   T＝10天   T＝2星期   T＝3星期   T＝6星期   T＝12星期
 T80S 97.7097.5397.6297.6297.7097.6597.8197.72 93.5694.2097.0296.64-95.5596.4596.28 91.2894.2297.2496.7594.6896.8495.8495.43 88.1294.3797.0995.8693.2796.3594.8395.45 86.6394.5494.5095.3792.0396.3894.1295.63 80.2592.9496.1994.3389.3695.7791.7794.71 66.1891.7695.1290.9581.5293.7684.8193.97 46.5889.1891.6884.3469.6589.1671.1491.65
 H50S
 H60S
 H70S
 H80S
 P60S
 P70S
 A50S
         pH评定-在37℃孵育指定时间后通过
             反相色谱测定的主峰百分数
                              表8
配方                            孵育时间
  T＝0  T＝2星期   T＝4星期   T＝8星期   T＝12星期   T＝17星期
 A40S 93.4993.7893.9193.4993.6593.6893.6593.67 91.6990.1091.6192.5990.5492.6188.0492.39 84.3480.8683.8988.9386.6987.6474.5186.03 78.8770.3677.1685.9686.4987.3466.0880.64 70.5559.35-79.3580.8884.1153.8771.50 64.2350.9859.2273.7176.1179.49-65.23
 S35S
 S40S
 S50S
 H60S
 160S
 T40S
 E40S
                                    表9
配方                             孵育时间
  Time0   T＝3天   T＝7天   T＝10天    T＝2星期   T＝6星期   T＝12星期
 T80S 95.9696.1495.8895.7895.8896.4996.0496.02 93.7595.3894.3292.6694.1194.6294.9895.13 92.6895.5294.7793.8493.2394.8294.1495.57 88.5794.7094.6590.7290.9494.1892.4194.68 87.9897.0894.0890.9589.6693.4494.3796.35 68.5892.1890.20-77.8286.2582.6792.78 48.8488.4584.8070.8367.6481.0971.1189.30
 H50S
 H60S
 H70S
 H80S
 P60S
 P70S
 A50S
         pH评定-在37℃孵育指定时间后通过
          阳离子交换色谱测定的主峰百分数
                                       表10
配方                                孵育时间
  T＝0   T＝2星期   T＝4星期     T＝8星期   T＝12星期    T＝17星期
 A40S 81.1782.6482.1682.8682.3283.7279.2382.37 73.8472.9774.5475.3079.6080.2030.2575.53 69.6667.1070.9567.9175.5777.9527.5869.71 53.9652.3653.8158.1470.7772.1519.3759.80 43.0945.8444.6349.4865.4764.0511.9250.91 41.1437.7034.9641.49-66.01-47.72
 S35S
 S40S
 S50S
 H60S
 I60S
 T40S
 E40S
                                   表11
配方                                孵育时间
  Time0  T＝3天   T＝7天  T＝10天  T＝2星期   T＝3星期  T＝6星期  T＝12星期
 T80S 87.4484.4287.8682.9984.0885.6887.6083.00 80.3883.7086.8183.3384.7284.5878.7084.54 78.0483.8685.4081.3581.4983.7382.5081.65 76.4183.2384.5681.0182.1783.2284.0483.81 72.7682.1682.0079.5577.2879.1578.9981.54 71.2878.5278.9072.7064.2175.8777.8577.68 54.4976.0780.6467.9568.2173.3878.9079.50 -70.8573.7156.9154.7960.9369.1872.22
 H50S
 H60S
 H70S
 H80S
 P60S
 P70S
 A50S
                      实施例3
              mpl配体浓度的评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇，2.0mg/ml    (20A5S)
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇，1.0mg/ml    (10A5S)
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇，0.5mg/ml    (05A5S)
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇，0.2mg/ml    (02A5S)C.  管瓶：以指定的蛋白质浓度装入3cc管瓶1mL。D.  温度和时间点：37℃；时间点在表中给出。E.  分析：HPLC：SEC，RP，IEX。F.  数据
表12-14给出在37℃孵育指定时间后通过大小排阻，反相和阳离子交换色谱测定的主峰百分数。
mpl配体浓度评定-在37℃孵育指定时间后的主峰百分数
                                  表12
                              大小排阻色谱
  配方                                  孵育时间
  T＝0  T＝1星期   T＝2星期     T＝3星期     T＝4星期    T＝8星期   T＝12星期
 02A5S05A5S10A5S20A5S  94.4494.1193.9693.81  94.8693.7892.6091.50  93.8492.8691.6990.25  94.5393 2591.7490.20    94.5193.4091.3289.55    93.9091.5589.2086.89  92.7490.1186.8983.59
                                                表13
                                              反相色谱
配方                                            孵育时间
    T＝0     T＝1星期     T＝2星期     T＝3星期     T＝4星期     T＝8星期     T＝12星期
 02A5S05A5S10A5S20A5S     94.5394.7394.8694.67     93.4194.4494.5694.12     93.2893.3093.2593.07     92.1692.4192.3992.47     91.0591.9791.9891.79     88.8989.1888.0688.37     87.9085.9787.6287.07
                                      表14
                                  阳离子交换色谱
配方                                  孵育时间
  T＝0    T＝1星期   T＝2星期     T＝4星期    T＝8星期    T＝12星期
 02A5S05A5S10A5S20A5S  79.4078.22-79.52  65.7567.4466.1876.71   78.5680.2680.8082.09  79.8081.1082.0281.38   74.4276.2775.8174.26   59.7461.3960.7260.89
                      实施例4
                    赋形剂评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇
  5mM EDTA                        (A5SE)
10mM乙酸盐，pH5.0，2％丙氨酸      (A5A)
10mM乙酸盐，pH5.0，1.6％甘氨酸    (A5G)
10mM乙酸盐，pH5.0，2.7％脯氨酸    (A5P)
10mM乙酸盐，pH5.0，3.5％赖氨酸    (A5K)
10mM乙酸盐，pH5.0，4.3％精氨酸    (A5R)
10mM谷氨酸盐，pH5.0，9.3％蔗糖    (E5Su)
10mM谷氨酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇  (E5S)C.  管瓶：以0.5mg/ml蛋白质浓度装入3cc管瓶1mL。D.  温度和时间点：37℃；时间点在表中给出。E.  分析：HPLC：SEC，RP，IEX。F.  数据
表15-17给出在37℃孵育指定时间后通过大小排阻，反相和阳离子交换色谱测定的主峰百分数。
赋形剂评定-在37℃孵育指定时间后的主峰百分数
                                       表15
                                   大小排阻色谱
  配方                                孵育时间
    T＝0     T＝2星期     T＝4星期     T＝8星期     T＝12星期
  A5R 84.7194.3094.5786.7593.0894.6694.7894.55 21.8391.4091.2217.2460.0191.9793.0791.57 19.0191.9591.4315.0254.5392.1693.5592.18 12.3088.3692.269.7643.2287.6390.6888.13 -86.5284.50-37.7585.0592.2885.89
  E5Su
  A5G
  A5K
  A5SE
  A5P
  E5S
  A5A
                               表16
                           阳离子交换色谱
   配方                        孵育时间
  T＝0   T＝2星期   T＝4星期     T＝8星期   T＝12星期
   A5R 82.2684.9386.1780.8884.5686.7387.4986.28 28.4186.2281.9020.1862.7587.5890.2381.31 21.3288.6266.8114.2356.4086.2288.8386.10 11.7172.1618.958.7536.3169.3475.5570.29 -65.0426.45-30.3865.7670.0163.69
   E5Su
   A5G
   A5K
   A5SE
   A5P
   E5S
   A5A
                                 表17
                               反相色谱
  配方                        孵育时间
    T＝0     T＝2星期     T＝4星期     T＝12星期
    A5R 95.9696.1095.7195.8195.9895.6795.6495.78 92.3594.5769.6188.9393.6092.9893.9890.38 85.6891.5939.8681.3090.0189.9690.6186.52 -77.92---78.8583.9070.00
    E5Su
    A5G
    A5K
    A5SE
    A5P
    E5S
    A5A
                           实施例5
                         等渗性评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：
10mM乙酸盐，pH5.0，9.3％蔗糖      (A5SU)
10mM乙酸盐，pH5.0，5％甘露糖醇    (A5MA)
10mM乙酸盐，pH5.0，140mM氯化钠    (A5N)
10mM乙酸盐，pH5.0，2％PEG8000     (A5P8)
10mM乙酸盐，pH5.0，2.5％甘油      (A5G)
10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇，
0.01％Tween20                     (A5ST)
10mM组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇    (H6S)
10mM组氨酸，pH6.0，5％山梨糖醇，
0.001％抗坏血酸                   (H6AA)C.  管瓶：以0.5mg/ml蛋白质浓度装入3cc管瓶1mL。D.  温度和时间点：37℃；时间点在表中给出。E.  分析：HPLC：SEC，RP，IEX。F.  数据
表18-20给出在37℃孵育指定时间后通过大小排阻，反相和阳离子交换色谱测定的主峰百分数。
等渗性评定-在37℃孵育指定时间后的主峰百分数
                                             表18
                                         大小排阻色谱
  配方                                        孵育时间
    T＝0     T＝3.5天   T＝1星期     T＝2星期  T＝3星期    T＝7星期   T＝12星期
  H6S 96.7096.7583.5496.5596.3696.4694.8896.25 96.2395.6630.4295.1495.1895.2992.8994.83 96.3096.0328.0495.2295.3795.4992.8994.50 95.9595.7224.6495.0295.1695.2092.6194.58 95.7795.2920.1995.1395.6095.5991.6294.37 93.3793.3217.6293.0893.4993.2392.7891.16 91.0390.61-91.4291.8991.6882.0587.68
  H6Aa
  A5N
  A5Ma
  A5Su
  A5G
  A5P8
  A5ST
                                       表19
                                     反相色谱
配方                                    孵育时间
  T＝0    T＝3.5天     T＝1星期     T＝2星期     T＝7星期     T＝12星期
 H6S 95.4995.6494.9495.9095.5595.5794.7594.57 94.3992.0093.9995.0595.3994.7891.3193.24 94.6990.6792.1995.2994.7895.5187.0793.90 85.5593.0289.5294.3493.4794.8876.9382.75 87.6074.2268.6790.1388.1990.0413.4187.61 85.6266.22-87.2282.8888.64-85.45
 H6Aa
 A5N
 A5Ma
 A5Su
 A5G
 A5P8
 A5ST
                                                   表20
                                               阳离子交换色谱
    配方                                            孵育时间
    T＝0     T＝3.5天     T＝1星期     T＝2星期     T＝3星期     T＝7星期     T＝12星期
    H6S 87.1385.1279.9884.7382.9882.7985.6585.02 85.7980.7539.0184.3784.8384.6982.2683.83 84.6779.3129.1484.4383.4685.0981.7483.95 82.6675.9925.0381.9280.7681.7377.4180.02 82.7775.2320.7783.0781.0981.6174.7779.79 79.3264.6214.6778.1776.6176.9853.7474.56 59.3545.93-58.5256.8559.034.8055.85
    H6Aa
    A5N
    A5Ma
    A5Su
    A5G
    A5P8
    A5ST
                 实施例6
            抗氧化剂/螯合剂评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇3mM谷胱甘肽    (A5S GT)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇5mM甲硫氨酸    (A5S M)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇5mM甲硫氨酸1mM EDTA                                    (A5S ME)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇1mM柠檬酸盐    (A5S C)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇0.5mM柠檬酸盐  (A5S 05C)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇1mM EDTA       (A5S 1E)10mM乙酸盐，pH5.0，5％山梨糖醇0.5mM EDTA     (A5S E)C.  管瓶：以0.5mg/ml蛋白质浓度装入3cc管瓶1mL。D.  温度和时间点：37℃；时间点在表中给出。E.  分析：HPLC：SEC，RP，IEX。F.  数据
表21-23给出在37℃保温指定时间后通过大小排阻，反相和阳离子交换色谱测定的主峰百分数。
抗氧化剂/螯合剂评定-在37℃保温指定时间后的主峰百分数
                              表21
                          大小排阻色谱
配方                         孵育时间
    T＝0     T＝2星期      T＝4星期     T＝9星期
 A5SGT 16.6994.5394.8894.3093.9694.8894.80 12.3291.0392.1590.8390.9590.7591.72 8.0389.7290.7388.1488.9889.1589.89 5.9189.0085.7479.61-80.6382.06
 A5SM
 A5SME
 A5SC
 A5S05C
 A5S1E
 A5SE
                                     表22
                                   反相色谱
  配方                                孵育时间
    T＝0     T＝2星期     T＝4星期     T＝9星期     T＝12星期
 A5SGT 5.6994.7094.5493.9894.4394.3694.75 2.3791.5987.6681.1387.0186.8490.27 2.8088.6791.3690.3384.3076.4385.64 2.6088.5581.9768.0179.8389.9381.20 2.5086.8380.3962.9176.3584.5678.96
 A5SM
 A5SME
 A5SC
 A5S05C
 A5S1E
 A5SE
                            表23
                        阳离子交换色谱
配方                         孵育时间
    T＝0     T＝2星期      T＝4星期     T＝9星期
 A5SGT 4.6684.6984.9385.2386.0685.3886.51 5.1581.1878.3672.1178.0077.0080.07 0.080.9678.2666.4672.5376.4277.93 -72.9569.4854.6866.0666.2169.79
 A5SM
 A5SME
 A5SC
 A5S05C
 A5S1E
 A5SE
                    实施例7
                   去污剂评定A.  起始材料：PEG-rHuMGDFB.  配方：
所有的形式含有10mM乙酸盐，pH5.0，和5％山梨糖醇和0.050mg/ml PEG-rHuMGDF。
004T20：0.004mg/ml Tweeh-20
006T20：0.006mg/ml Tween-20
010T20：0.010mg/ml Tween-20
040T20：0.040mg/ml Tween-20
060T20：0.060mg/ml Tween-20
004T80：0.004mg/ml Tween-80
006T80：0.006mg/ml Tween-80
010T80：0.010mg/ml Tween-80
040T80：0.040mg/ml Tween-80
060T80：0.060mg/ml Tween-80C.  数据
表24给出以主峰百分数为基础的反相HPLC纯度的结果。
                                 表24
                               反相色谱
  配方                      在37摄氏度的孵育时间
    T＝0     T＝2星期     T＝4星期     T＝6星期     T＝12星期
   A5S004T20006T20010T20040T20060T20004T80006T80010T80040T80060T80     94.6694.6894.6994.8994.5994.6194.4494.4394.8994.4594.19     94.0594.7993.9994.3092.9592.6294.3594.0594.2292.6488.38     90.6791.2591.4891.3390.6390.5790.9191.0190.6989.7488.67     90.9091.0290.4690.7689.8889.4990.8090.1890.2289.2687.64     89.0788.4988.4388.4787.5886.7288.4888.0888.0486.5684.53
D.  结果：
去污剂例如Tween可以包含在PEG-rHuMGDF配方中以提高物理稳定性，并且在对化学稳定性没有不利影响下回收。Tween-20和Tween-80可以以最多大约0.060mg/ml的终浓度加入到PEG-rHuMGDF配方中而没有引起过量的甲硫氨酸的氧化。Tween-20和Tween-80在0.006mg/ml至0.060mg/ml的浓度范围中最有效。
                    实施例8
                  冻干的组合物
下面的表25总结了对于含有mpl配体的冻干的组合物获得的数据。在这些实施例的每一个中，试验的mpl配体是PEG-rHuMGDF，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸1-163，用平均分子量大约20kDa的聚乙二醇基团在N-末端氨基酸的α氨基处一-PEG基化。对于表25-27，在分析前用大约1ml注射用水再次配制冻干的PEG-rHuMGDF，并且主峰百分数代表作为冻干结果的PEG-rHuMGDF的回收率。
                          表25
               配方     SEC测定的主峰百分数％
 10mM组氨酸，5％甘露糖醇          88
 10mM组氨酸，4％甘露糖醇，1％蔗糖          93
注：mpl配体浓度是0.5mg/ml。
对于冻干的样品，根据大小排阻所测定的pH6，7和8时，物理稳定性没有增加。
研究的蔗糖浓度范围：
           表26
   蔗糖浓度 SEC测定的主峰百分数％
      2％          91
      4％          94
      5％          97
      6％          95
研究的缓冲液的范围(10mM浓度)：
                        表27
                   配方 SEC，HPLC测定的主峰百分数％
组氨酸，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH5        87
柠檬酸盐，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH5        87
乙酸盐，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH5        79
琥珀酸盐，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH5        88
MES，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH5        88
磷酸盐，3.8％甘露糖醇，2％蔗糖，pH7        87
磷酸盐，3.8％甘露糖醇，0.5％甘氨酸，pH7        80
所有的稳定剂例如氨基酸(例如等渗精氨酸，赖氨酸，脯氨酸和组氨酸)和非晶形试剂(例如海藻糖和PEG)在冻干期间没有表现出提高的稳定性。
具有最好主峰回收率和最低凝聚水平的配方：
    10mM谷氨酸盐，6％蔗糖，2％甘露糖醇，pH5.0
虽然用优选的实施方案描述了本发明，但是不限于公开的实施方案，相反，意要覆盖各种各样的附加权利要求书精神和范围内的修饰和等价物，其范围记录最宽的解释可包括所有这样的修饰和等价物。
                        序列表(1)一般信息：
 (i)申请人：AMGEN INC
 (ii)发明题目：含有mpl配体的药物组合物
 (iii)序列数：2
 (iv)联系地址：
    (A)住址：AMGEN INC.
    (B)街道：1849 DeHavilland Drive
    (C)城市：Thousand Oaks
    (D)州：California
    (E)国家：美国
    (F)邮编(ZIP)：91320-1789
 (v)计算机可读形式：
    (A)Floppy盘
    (B)计算机：IBM PC兼容
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软盘：Patent In Release#1.0，Version #1.30
 (vi)当前申请数据：
    (A)申请号：US(还没有登记)
    (B)申请日：04-10-1996
    (C)分类：
 (viii)代理人/事务所信息：
    (A)名称：COOK Ph.D.，Robert R.
    (B)登记号：31602
    (C)参考/记录号：A-412(2)SEQ ID NO：1的信息：
 (i)序列特征：
    (A)长度：1342个碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)链数：未知
    (D)拓扑学：未知
 (ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
  (A)名词/关键词：CDS
  (B)位置：36..1097
(ix)特征：
  (A)名词/关键词：mat-肽
  (B)位置：99..1097
(ix)特征：
  (A)名词/关键词：sig-肽
  (B)位置：36..98(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：CAGGGAGCCA CGCCAGCCAA GACACCCCGG CCAGA ATG GAG CTG ACT GAA TTG         53
                                   Met Glu Leu Thr Glu Leu
                                   -21 -20CTC CTC GTG GTC ATG CTT CTC CTA ACT GCA AGG CTA ACG CTG TCC AGC       101Leu Leu Val Val Met Leu Leu Leu Thr Ala Arg Leu Thr Leu Ser Ser-15             -10                      -5                   1CCG GCT CCT CCT GCT TGT GAC CTC CGA GTC CTC AGT AAA CTG CTT CGT       149Pro Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg Val Leu Ser Lys Leu Leu Arg
      5                      10                  15GAC TCC CAT GTC CTT CAC AGC AGA CTG AGC CAG TGC CCA GAG GTT CAC       197Asp Ser His Val Leu His Ser Arg Leu Ser Gln Cys Pro Glu Val His
     20                  25                  30CCT TTG CCT ACA CCT GTC CTG CTG CCT GCT GTG GAC TTT AGC TTG GGA       245Pro Leu Pro Thr Pro Val Leu Leu Pro Ala Val Asp Phe Ser Leu Gly
 35                  40                  45GAA TGG AAA ACC CAG ATG GAG GAG ACC AAG GCA CAG GAC ATT CTG GGA       293Glu Trp Lys Thr Gln Met Glu Glu Thr Lys Ala Gln Asp Ile Leu Gly50                  55                  60                  65GCA GTG ACC CTT CTG CTG GAG GGA GTG ATG GCA GCA CGG GGA CAA CTG       341Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met Ala Ala Arg Gly Gln Leu
             70                  75                  80GGA CCC ACT TGC CTC TCA TCC CTC CTG GGG CAG CTT TCT GGA CAG GTC       389Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly Gln Leu Ser Gly Gln Val
         85                  90                  95CGT CTC CTC CTT GGG GCC CTG CAG AGC CTC CTT GGA ACC CAG CTT CCT       437Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gln Ser Leu Leu Gly Thr Gln Leu Pro
    100                 105                 110CCA CAG GGC AGG ACC ACA GCT CAC AAG GAT CCC AAT GCC ATC TTC CTG       485Pro Gln Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp Pro Asn Ala Ile Phe Leu
115                 120                 125AGC TTC CAA CAC CTG CTC CGA GGA AAG GTG CGT TTC CTG ATG CTT GTA          533Ser Phe Gln His Leu Leu Arg Gly Lys Val Arg Phe Leu Met Leu Val130                 135                 140                 145GGA GGG TCC ACC CTC TGC GTC AGG CGG GCC CCA CCC ACC ACA GCT GTC          581Gly Gly Ser Thr Leu Cys Val Arg Arg Ala Pro Pro Thr Thr Ala Val
            150                 155                 160CCC AGC AGA ACC TCT CTA GTC CTC ACA CTG AAC GAG CTC CCA AAC AGG          629Pro Ser Arg Thr Ser Leu Val Leu Thr Leu Asn Glu Leu Pro Asn Arg
        165                 170                 175ACT TCT GGA TTG TTG GAG ACA AAC TTC ACT GCC TCA GCC AGA ACT ACT          677Thr Ser Gly Leu Leu Glu Thr Asn Phe Thr Ala Ser Ala Arg Thr Thr
    180                 185                 190GGC TCT GGG CTT CTG AAG TGG CAG CAG GGA TTC AGA GCC AAG ATT CCT          725Gly Ser Gly Leu Leu Lys Trp Gln Gln Gly Phe Arg Ala Lys Ile Pro
195                 200                 205GGT CTG CTG AAC CAA ACC TCC AGG TCC CTG GAC CAA ATC CCC GGA TAC          773Gly Leu Leu Asn Gln Thr Ser Arg Ser Leu Asp Gln Ile Pro Gly Tyr210                 215                 220                 225CTG AAC AGG ATA CAC GAA CTC TTG AAT GGA ACT CGT GGA CTC TTT CCT          821Leu Asn Arg Ile His Glu Leu Leu Asn Gly Thr Arg Gly Leu Phe Pro
            230                 235                 240GGA CCC TCA CGC AGG ACC CTA GGA GCC CCG GAC ATT TCC TCA GGA ACA          869Gly Pro Ser Arg Arg Thr Leu Gly Ala Pro Asp Ile Ser Ser Gly Thr
        245                 250             255TCA GAC ACA GGC TCC CTG CCA CCC AAC CTC CAG CCT GGA TAT TCT CCT          917Ser Asp Thr Gly Ser Leu Pro Pro Asn Leu Gln Pro Gly Tyr Ser Pro
    260             265             270TCC CCA ACC CAT CCT CCT ACT GGA CAG TAT ACG CTC TTC CCT CTT CCA          965Ser Pro Thr His Pro Pro Thr Gly Gln Tyr Thr Leu Phe Pro Leu Pro
275                 280                 285CCC ACC TTG CCC ACC CCT GTG GTC CAG CTC CAC CCC CTG CTT CCT GAC         1013Pro Thr Leu Pro Thr Pro Val Val Gln Leu His Pro Leu Leu Pro Asp290                 295                 300                 305CCT TCT GCT CCA ACG CCC ACC CCT ACC AGC CCT CTT CTA AAC ACA TCC         1061Pro Ser Ala Pro Thr Pro Thr Pro Thr Ser Pro Leu Leu Asn Thr Ser
                    310         315                 320TAC ACC CAC TCC CAG AAT CTG TCT CAG GAA GGG TAA GGTTCTCAGA              1107Tyr Thr His Ser Gln Asn Leu Ser Gln Glu Gly  ★
        325                 330CACTGCCGAC ATCAGCATTG TCTCGTGTAC AGCTCCCTTC CCTGCAGGGC GCCCCTGGGA       1167GACAACTGGA CAAGATTTCC TACTTTCTCC TGAAACCCAA AGCCCTGGTA AAAGGGATAC          1227ACAGGACTGA AAAGGGAATC ATTTTTCACT GTACATTATA AACCTTCAGA AGCTATTTTT          1287TTAAGCTATC AGCAATACTC ATCAGAGCAG CTAGCTCTTT GGTCTATTTT CTGCA               1342(2)SEQ ID NO：2的信息：
(i)序列特征：
   (A)长度：354个氨基酸
   (B)类型：氨基酸
   (D)拓扑学：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：Met Glu Leu Thr Glu Leu Leu Leu Val Val Met Leu Leu Leu Thr Ala-21 -20                  -15                 -10Arg Leu Thr Leu Ser Ser Pro Ala Pro Pro Ala Cys Asp Leu Arg Val-5                   1               5                  10Leu Ser Lys Leu Leu Arg Asp Ser His Val Leu His Ser Arg Leu Ser
         15                  20                  25Gln Cys Pro Glu Val His Pro Leu Pro Thr Pro Val Leu Leu Pro Ala
     30                  35                  40Val Asp Phe Ser Leu Gly Glu Trp Lys Thr Gln Met Glu Glu Thr Lys
 45                  50                  55Ala Gln Asp Ile Leu Gly Ala Val Thr Leu Leu Leu Glu Gly Val Met60                  65                  70                  75Ala Ala Arg Gly Gln Leu Gly Pro Thr Cys Leu Ser Ser Leu Leu Gly
             80                  85                  90Gln Leu Ser Gly Gln Val Arg Leu Leu Leu Gly Ala Leu Gln Ser Leu
         95                 100                 105Leu Gly Thr Gln Leu Pro Pro Gln Gly Arg Thr Thr Ala His Lys Asp
    110                 115                 120Pro Asn Ala Ile Phe Leu Ser Phe Gln His Leu Leu Arg Gly Lys Val
125                 130                 135Arg Phe Leu Met Leu Val Gly Gly Set Thr Leu Cys Val Arg Arg Ala140                 145                 150                 155Pro Pro Thr Thr Ala Val Pro Ser Arg Thr Ser Leu Val Leu Thr Leu
            160                 165                 170Asn Glu Leu Pro Asn Arg Thr Ser Gly Leu Leu Glu Thr Asn Phe Thr
        175                 180                 185Ala Ser Ala Arg Thr Thr Gly Ser Gly Leu Leu Lys Trp Gln Gln Gly
    190                 195                 200Phe Arg Ala Lys Ile Pro Gly Leu Leu Asn Gln Thr Ser Arg Ser Leu
205                 210                 215Asp Gln Ile Pro Gly Tyr Leu Asn Arg Ile His Glu Leu Leu Asn Gly220                 225                 230                 235Thr Arg Gly Leu Phe Pro Gly Pro Ser Arg Arg Thr Leu Gly Ala Pro
            240                 245                 250Asp Ile Ser Ser Gly Thr Ser Asp Thr Gly Ser Leu Pro Pro Asn Leu
        255                 260                 265Gln Pro Gly Tyr Ser Pro Ser Pro Thr His Pro Pro Thr Gly Gln Tyr
    270         275         280Thr Leu Phe Pro Leu Pro Pro Thr Leu Pro Thr Pro Val Val Gln Leu
285                 290                 295His Pro Leu Leu Pro Asp Pro Ser Ala Pro Thr Pro Thr Pro Thr Ser300                 305                 310                 315Pro Leu Leu Asn Thr Ser Tyr Thr His Ser Gln Asn Leu Ser Gln Glu
            320                 325                 330Gly  ★

Claims (22)

1.  一种组合物，含有mpl配体；选自谷氨酸盐，磷酸盐，组氨酸，咪唑和乙酸盐的缓冲剂；选自山梨糖醇，蔗糖，甘露糖醇，甘油，聚乙二醇和非极性氨基酸的赋形剂；具有pH范围5.0-6.0。
2.  权利要求1的组合物，其中mpl配体包括至少SEQ ID NO：2的氨基酸片段7-151。
3.  权利要求1的组合物，其中mpl配体由SEQ ID NO：2的氨基酸片段1-171±20组成。
4.  权利要求1的组合物，其中mpl配体由SEQ ID NO：2的氨基酸片段1-161±10组成。
5.  权利要求1的组合物，其中mpl配体由SEQ ID NO：2的氨基酸片段1-151组成。
6.  权利要求1的组合物，其中mpl配体由SEQ ID NO：2的氨基酸片段1-163组成。
7.  权利要求1的组合物，其中mpl配体与选自聚乙二醇，一甲氧基聚乙二醇，葡聚糖，聚-(N-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙基化多醇的水溶性聚合物连接。
8.  权利要求7的组合物，其中水溶性聚合物是聚乙二醇。
9.  权利要求6的组合物，其中含有作为缓冲剂的乙酸盐，作为赋形剂的山梨糖醇，并且在水介质中，pH大约为5.0。
10.  权利要求1的组合物，其中非极性氨基酸选自甘氨酸，脯氨酸和丙氨酸。
11.  权利要求1的组合物，进一步含有抗氧化剂。
12.  权利要求11的组合物，其中抗氧化剂选自DETA，抗坏血酸，谷胱甘肽，甲硫氨酸和柠檬酸盐。
13.  权利要求1的组合物，进一步含有去污剂或脂质。
14.  权利要求13的组合物，其中去污剂选自Tween；Brij 35；Pluronics；十二烷基硫酸钠；Triton；二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)；PEG-40蓖麻油；油烯基(oleth)-3-磷酸盐；二乙醇胺油烯基(oleth)-10-磷酸盐；含有C8(辛)和C14(十四)脂质的短链和长链单层囊泡(SLUV)的混合物。
15.  权利要求1的组合物，其中组合物处于水介质中。
16.  权利要求1的组合物，其中组合物是冻干形态。
17.  权利要求1的组合物，其含有磷酸盐缓冲剂，5％山梨糖醇，并且水基质中pH大约为6.0。
18.  权利要求1的组合物，其水基质中含有组氨酸缓冲剂，和大约5％山梨糖醇。
19.  权利要求1的组合物，其水基质中含有咪唑缓冲剂，和大约5％山梨糖醇。
20.  权利要求1的组合物，其水基质中含有谷氨酸盐缓冲剂，和大约5％山梨糖醇。
21.  权利要求1的组合物，其水基质中含有谷氨酸盐缓冲剂，5％山梨糖醇，并且具有pH大约5.0。
22.  权利要求1的组合物，其冻干形式中含有谷氨酸盐缓冲剂，大约6％蔗糖，大约2％甘露糖醇，pH大约5.0。
CNB971802777A 1996-10-04 1997-09-12 含有mpl配体的药物组合物 Expired - Fee Related CN1142940C (zh)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552184A (zh) * 2012-02-16 2012-07-11 山东泉港药业有限公司 一种血小板生成素拟肽冻干制剂
CN109219448A (zh) * 2016-06-16 2019-01-15 扬森疫苗与预防公司 Hiv疫苗配制品

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8357513B1 (en) 1994-01-03 2013-01-22 Genentech, Inc. Nucleic acids encoding mpl ligand (thrombopoietin) and fragments thereof
US5989538A (en) * 1995-02-15 1999-11-23 Amgen Inc. Mpl ligand analogs
HUP0203133A3 (en) * 1999-10-04 2005-07-28 Chiron Corp Emeryville Stabilized liquid polypeptide-containing pharmaceutical compositions
US6495534B2 (en) 2000-05-15 2002-12-17 Pharmacia & Upjohn Spa Stabilized aqueous suspensions for parenteral use
AU2001280161A1 (en) * 2000-08-24 2002-03-04 Kirin Beer Kabushiki Kaisha C-mpl ligand-containing medicinal compositions for increasing platelets and erythrocytes
US7172905B2 (en) 2001-08-07 2007-02-06 The University Of Chicago Polypeptide immobilization
MXPA05006117A (es) * 2002-12-13 2005-09-30 Zymogenetics Inc Produccion de il-21 en hospederos procarioticos.
RU2358440C2 (ru) 2003-07-07 2009-06-20 Хилл`С Пет Ньютришн, Инк. Композиция для улучшенного окислительного статуса домашних животных
US9283260B2 (en) * 2006-04-21 2016-03-15 Amgen Inc. Lyophilized therapeutic peptibody formulations
AU2011265555B2 (en) * 2006-04-21 2016-03-10 Amgen Inc. Lyophilized therapeutic peptibody formulations
AU2014201388C1 (en) * 2006-12-21 2017-02-02 Amgen Inc. Stable Buffered Formulations Containing Polypeptides
EP2129401B8 (en) * 2006-12-21 2020-01-15 Amgen Inc. Stable buffered formulations containing polypeptides
EA031489B1 (ru) 2012-09-20 2019-01-31 МорфоСис АГ Способ лечения ревматоидного артрита
CN111344018A (zh) * 2017-11-16 2020-06-26 美国安进公司 聚乙二醇化卡非佐米化合物的稳定的组合物

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5874075A (en) * 1993-10-06 1999-02-23 Amgen Inc. Stable protein: phospholipid compositions and methods
CZ288926B6 (cs) * 1994-03-31 2001-09-12 Amgen Inc. MGDF derivát, způsob jeho výroby a farmaceutický prostředek s jeho obsahem
ATE323724T1 (de) * 1995-02-15 2006-05-15 Amgen Inc Mpl-liganden analoga
US6790439B1 (en) * 1995-06-07 2004-09-14 Zymogenetics, Inc. Thrombopoietin compositions
TW497972B (en) * 1995-06-08 2002-08-11 Kirin Brewery Stable thrombopoietin (TPO)-containing lyophilized compositions
US5879673A (en) * 1996-01-25 1999-03-09 Genentech, Inc. Administration of thrombopoietin on a single day only

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102552184A (zh) * 2012-02-16 2012-07-11 山东泉港药业有限公司 一种血小板生成素拟肽冻干制剂
CN109219448A (zh) * 2016-06-16 2019-01-15 扬森疫苗与预防公司 Hiv疫苗配制品

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