CN1230556C - 测定细菌的抗生素敏感性的方法 - Google Patents

Abstract

提供了测定抗生素对靶微生物的最小抑制浓度的方法和装置。该方法包括如下步骤：(a)提供一种微生物生长培养基(14，34)；(b)提供一种敏感试剂(17，36)，它包含与标记物混合的抗生素，所述标记物具有大小与该标记物的浓度成比例的信号；(c)将所述试剂按一定的方式掺到生长培养基中以至在该生长培养基中产生所述抗生素浓度和所述标记物浓度的梯度(18，40)；(c)用所述靶微生物接种所述生长培养基；(d)将所述接种过的培养基保温达足以使所述靶微生物在该生长培养基的第一部分(20，42)上生长到可检测量的一段时间；(e)确定在有可检测的靶微生物生长的所述生长培养基的第一部分与基本上没有可检测的靶微生物生长的第二部分(24，46)之间的生长界限(28，48)；(f)测量所述生长界限处的信号值；以及(g)应用测得的信号值测定所述抗生素的最小抑制浓度。

Description

测定细菌的抗生素敏感性的方法

本发明总体上涉及测定微生物对抗生素的敏感性的方法和装置，具体涉及测定抗生素对微生物的最小抑制浓度的方法和装置。

抗生素的最小抑制浓度(MIC)的测定是一项测定微生物(通常是细菌)对特定抗生素的敏感性的基本实验。MIC是指防止微生物生长所需的抗生素的最小浓度。通常根据这类实验判断抗生素的类别和剂量，从而得出对患者护理和成本低的治疗都极为重要的迅速且准确的结果。最常应用定性的Kirby-Bauer平板法进行抗生素敏感性测试，但至于定量MIC分析，最常应用“管稀释法”。

Kirby-Bauer实验利用覆盖了一层均匀的、专为手头实验配制的微生物生长培养基的平板。将一些薄片样底物置于这层生长培养基上，每片含特定浓度待评估的抗生素。细菌在培养基上生长形成可见的覆盖层，但在具有抑制细菌生长所需足够抗生素浓度的那些薄片样底物周围的区(常被称为“清亮区”)却例外。围绕薄片样底物的清亮区的大小指示微生物对含于该特定薄片样底物中的抗生素的敏感性；即，清亮区愈大，微生物对含于该薄片样底物中的抗生素的敏感性就愈大。Kirby-Bauer实验因其简单和能同时估测多种抗生素而得以普及。Kirby-Bauer实验的一个缺点在于，有若干变量影响生长培养基中任何给定点处的抗生素浓度，所以，不能计算MIC。已发表了有关基于清亮区大小计算近似的MIC的公式，但这些公式很少被应用并被认为充其量不过是近似法。

“管稀释法”包括：将等量的靶微生物置于很多布置在母板中的孔(被称为“管”)内，再往每个管添加不同浓度的抗生素。靶微生物不能生长的最低抗生素浓度决定了对该具体微生物的MIC。“管稀释法”的一个缺点是，它的精确度取决于管与管之间浓度变化的幅度。小幅度导致更大的精确度，但可能需要实际上达不到的数量的管和工作。此外，配制准确的稀释液是一项费用大的操作，它的成本随着管数量的增多而增大。因此，该方法精确度的提高还能增大成本和延长所需时间。

另一种进行MIC测定的方法被描述于美国专利No.4,778,758和其它文献中，该方法涉及“E-条带(E-strip)”的应用，“E-条带”是一种结合了准确形成的单一抗生素梯度的条带。沿该条带的一边布置了校准标记物，相应于该点处抗生素的准确浓度。将该条带置于接种过的Kirby-Bauer平板上，保温后，如果该梯度内的一个抗生素浓度超过MIC值，就会形成邻近微生物生长区的清亮区。相应于清亮区和生长区之间的界限的校准标记物给出待评估抗生素的MIC值。关于测定抗生素的MIC的该方法的几个缺点包括但不限于：1)该条带难于制作，所以昂贵；2)该条带的尺寸使得不能在一个装置中同时进行多种抗生素实验；以及3)在准确的保温期后就必须读取所述制剂以实现最佳准确性。

美国专利No.5,702,684公开了一种监测抗生素含量的方法，该方法应用荧光标记物来测定工业管道系统中什么时候应该补充抗生素。但是，该方法不能测定MIC或进行任何类型的抗生素敏感性测定。

需要的是一种测定抗生素对靶微生物的MIC的方法，一种能在最短时间内测定MIC的方法，一种提供准确的MIC的方法，一种能同时测定数种抗生素对靶微生物的MIC值的方法，以及一种成本低的方法。

因此，本发明的一个目的是提供一种测定抗生素对靶微生物的MIC的方法，该方法在最短时间内提供准确的结果。

本发明的另一目的是提供一种测定数种抗生素对靶微生物的MIC的方法。

本发明的又一目的是提供一种测定抗生素对靶微生物的MIC的成本低的方法。

本发明的又一目的是提供一种测定抗生素对靶微生物的MIC的成本低的装置，该装置在最短时间内提供准确的结果。

本发明的又一目的是提供一种实用于兽医的、测定抗生素对靶微生物的MIC的方法。

按本发明，提供了一种测定抗生素对靶微生物的MIC的方法，该方法包括如下步骤：

(a)提供一种微生物生长培养基；

(b)提供一种敏感试剂，它包含与一种标记物混合的抗生素，所述标记物具有大小与该标记物的浓度成比例的信号；

(c)将所述敏感试剂按一定的方式掺到该生长培养基中以至在所述生长培养基中产生抗生素浓度和标记物浓度的梯度；

(d)用靶微生物接种该生长培养基；

(e)将接种过的生长培养基保温达足以使靶微生物生长到可检测量的一段时间；

(f)测定在具有可检测的靶微生物生长的生长培养基部分与基本上没有可检测的靶微生物的部分之间的生长界限；以及

(g)测量生长界限处标记物信号的大小；以及

(h)应用测得的标记物信号值确定抗生素的最小抑制浓度。

本发明的一个优点在于，提供了一种测定抗生素对靶微生物的MIC的方法，该方法在最短时间内给出准确的结果。本发明应用了一种敏感试剂，它包含一种标记物，该标记物具有大小与该标记物的浓度成比例的信号。所述试剂中标记物的浓度与抗生素的浓度成比例。因而，可通过检测生长界限处标记物的信号测定该生长界限处抗生素的MIC。所以，可测定抗生素的准确MIC而不是近似值，并且不用大量费时的稀释步骤就能测定。

本发明的另一个优点在于，可应用本发明方法同时测定数种抗生素对靶微生物的MIC’S。例如，可将一些用靶微生物接种的独立的生长培养基区铺板于一个容器中，并将不同的抗生素掺入各独立的区。然后，就可应用本发明方法的后续步骤确定掺入各生长培养基区的特定抗生素的MIC。

本发明的又一个优点在于，提供了一种测定抗生素对靶微生物的MIC的成本低的方法。本发明方法提供准确MIC信息的能力避免了象管稀释法中要求的那样对很多昂贵抗生素稀释液的需要。本领域技术人员将认识到，将宝贵的医学实验时间和实验开支减至最少使本发明方法比现有的方法花费少得多。

本发明的又一个优点在于，提供了一种实用于兽医的、测定抗生素对靶微生物的MIC的方法。

本发明的又一个优点在于，容易测定不同浓度的多种抗生素对某特定靶微生物的效果。结果，涉及抗生素应用的医护人员能对抗生素的类别和有效剂量作出有更好指导性的判断，所以，有益于抗生素接受者。

借助于如附图阐释的、对本发明最佳形式实施方案的详细描述将使本发明的这些和其它目的、特征和优点变得明显。

图1示出阐释本发明方法的Kirby-Bauer平板型装置的剖面示意图。

图2是描绘与图1所示Kirby-Bauer型装置相关的标记物信号值作为线性距离的函数的图。

图3示出阐释本发明方法的、盛有微生物生长培养基的样品保持器的剖面示意图。

图4是描绘与图3所示装置相关的标记物信号值作为线性距离的函数的图。

图5示出图3所示剖面的示意图，它进一步包含应用于底物的敏感试剂。

本发明测定抗生素对靶微生物的最小抑制浓度(MIC)的方法包括如下步骤：提供微生物生长培养基、提供有效量的靶微生物和提供敏感试剂。所述生长培养基必须能维持微生物生长，它可以是凝胶型培养基或渗透性固体生长培养基。能在应用过程中再水合的脱水生长培养基是特别有利的，因为它们易被长时间贮存。所述靶微生物可以包括：或是采自例如尿样的第一代微生物，或是采自例如生长在另一生长培养基上的菌落的微生物悬浮液。该靶微生物一般是液体溶液中的一种组分，不过也可应用携带该靶微生物的扩散性凝胶。含有靶微生物的液体溶液便于用靶微生物接种生长培养基这一步骤，当应用脱水生长培养基时尤其如此。

所述敏感试剂包含待评估的抗生素和标记物。在第一个实施方案中，敏感试剂含有实用的、但未准确测定量的标记物混合的准确量待评估抗生素。在第二个实施方案中，将该试剂的待评估抗生素与标记物按已知的准确比例混合，但可改变该试剂的总量以适合应用。这些试剂实施方案只要求一个准确已知的参数(抗生素的量或者抗生素与标记物比例)，于是，将制备所述敏感试剂的费用(因而将整个方法的费用)减至最小。

所述标记物可以是这样的任何物质：1)具有可识别的信号，信号值与该标记物浓度成比例；2)具有可与试验样品中的其它成分区分的信号；3)具有不被靶微生物的生长不利地影响的信号和信号值；4)基本不会不利地影响靶微生物的生长；5)不会意外地或不利地影响待评估的抗生素的作用；以及6)如果需要的话，一种将在保温期间与抗生素在生长培养基中以可预料的方式共同扩散的标记物，于是，局部标记物浓度与局部抗生素浓度成比例。例如，可应用一种荧光标记物，它的激发波长或发射波长在生长培养基的激发波长或发射波长范围之外，并且不与生长培养基或靶微生物结合。标记物与抗生素优选以相同速度在生长培养基中扩散，不过，不要求相似的扩散速度。也可应用具有不同但已知的扩散速度的标记物和抗生素。在另一实例中，可应用一种被抗生素吸收的可识别的染料。从该染料发射的标记物信号的大小与抗生素的浓度成比例，因为是抗生素“携带”了该染料。本说明书中应用的术语“比例”和“成比例”包括可用数学方法描述的任何关系；例如，x∶y，x∶y²，x∶¹/y，等。

本发明的方法包括如下进一步的步骤：a)将所述敏感试剂掺入生长培养基；b)用靶微生物接种该生长培养基；c)将接种过的生长培养基保温；d)确定靶微生物生长的生长界限；e)测定生长界限处标记物的信号值；以及f)应用测得的标记物信号值确定抗生素的MIC。

按一定方式将敏感试剂掺入生长培养基以至在该生长培养基内形成至少一个试剂浓度梯度。在该梯度的一端，抗生素浓度和标记物浓度都大于关于抗生素的MIC可能的浓度。在该梯度的另一端，抗生素浓度和标记物浓度都小于关于抗生素的MIC可能的浓度。可通过将试剂加入生长培养基中或者通过将试剂涂到生长培养基表面而直接实现掺和。还可通过这样间接实现掺和：将试剂涂到底物上，再将该底物与生长培养基接触或紧靠着生长培养基。

生长培养基可通过为生长培养基和靶微生物的应用所接受的任何已知方法接种。接种入生长培养基的靶微生物的数量应足以充分覆盖掺有试剂的生长培养基的整个区。接种物浓度的足够量将取决于当前的MIC试验参数，包括：模式生长培养基、靶微生物、抗生素等。然而，在大多数情况下，足够的靶微生物接种物浓度将在每毫升接种物一千个微生物(10³个微生物/ml)和每毫升接种物一亿个微生物(10⁸个微生物/ml)之间；更高的接种物浓度一般需要更小的接种物体积。如前所述，靶微生物优选是液体溶液或凝胶溶液中的一种成分。

掺有所述试剂并用靶微生物接种过的生长培养基可在生长培养基和靶微生物可接受的任何条件下被保温。一般将生长培养基保温直到生长培养基的一部分具有可检测的靶微生物生长。具有可检测的靶微生物生长的该部分生长培养基将接近一个基本上没有可检测的靶微生物生长的生长培养基部分。在一些情况下，该“基本上没有”可检测靶微生物生长的生长培养基部分可能存在可忽略量的靶微生物生长。这两部分之间的界限被称为生长界限。具有靶微生物的可检测生长的那部分生长培养基是这样的：其中，靶微生物的生长基本上未受抗生素抑制。反之，没有可检测靶微生物生长的部分是这样的：其中，靶微生物的生长基本上被抗生素抑制。生长界限与待评估的抗生素对靶微生物的MIC相符。

生长界限的位置通常由光学法确定。确定生长界限的位置的第二种方法应用一种标记物(它可能与所述试剂中包含的标记物相同或不同)，该标记物与生长着的微生物相互作用(包括但不限于被生长着的微生物代谢)而生成可检测的产物。该可检测的产物(它随着靶微生物的生长而存在)被检测到从而确定生长界限。确定生长界限的位置的第三种方法包括，评定有靶微生物生长的部分中的光散射特性与基本上没有靶微生物生长的部分中的光散射特性。在所有这三种方法中，一旦确定了生长界限，就能测得所述试剂内的标记物信号并测定它的大小。

在敏感试剂中与抗生素混合的标记物提供生长界限处的定量信息，它使得能计算抗生素的MIC。具体地说，生长界限处的标记物信号值与标记物浓度成比例，于是，可应用标记物浓度和抗生素浓度之间的已知的比例关系确定抗生素的浓度。测定抗生素浓度的确切方法将依赖于生长培养基的实际实施方案、敏感试剂是如何分布的、该试剂中标记物与抗生素之间的比例关系等。

本发明还提供一种测定抗生素对靶微生物样品的最小抑制浓度的装置，它包括：

一个样品保持器；

一片置于所述样品保持器中的微生物生长培养基；以及

一种敏感试剂，所述敏感试剂包含一种抗生素和一种标记物，所述标记物具有大小与所述标记物的浓度成比例的信号，将所述试剂按一定的方式掺到所述那片生长培养基中以至在所述生长培养基中产生所述抗生素浓度和所述标记物浓度的梯度。

所述装置可以进一步包括：

一个检测所述标记物信号的传感器；以及

检测靶微生物生长的装置；

其中，所述传感器可被操作以检测在检测到的与所述靶微生物生长邻近的生长界限处的所述标记物信号。

如下实施例阐述了如何可应用本发明的方法计算抗生素浓度。

实施例I：

参照图1，在第一个实施例中，本发明方法应用了Kirby-Bauer型装置10(以示意剖面图示出)，它包括：样品保持器12、一层用靶微生物接种过的均匀厚度“T”的微生物生长培养基14，以及薄片样底物16。将敏感试剂17(包含与未准确测定量的荧光标记物混合的、准确已知量的抗生素)涂到薄片样底物16上，放置该薄片样底物16使其与生长培养基14接触。敏感试剂17扩散到生长培养基14中，随着它径向扩散而产生浓度梯度18(图1中示出示意图)。将接种过的生长培养基14保温，形成了与没有可检测靶微生物生长的生长培养基部分24接近的、有可检测靶微生物生长22的部分20。

参照图1和2，将样品保持器12置于已被调节到检测所述标记物的荧光信号特征的可商购扫描荧光计(未示出)中。该荧光计产生一条曲线26(图2)，它反映作为穿过样品保持器12的径向距离的函数的信号值。标记物信号值是给定体积(V)中标记物浓度的函数，是通过检测具有均匀厚度(T；V＝A*T)的生长培养基14的面积(A)测定的。在20、24这两部分之间的生长界限28处的标记物信号值例如是以位于生长界限28处的生长培养基14的体积(V)中测定的信号值给出的。如前所述，在20、24这两部分之间的生长界限28的位置可通过光学法或通过其它方法确定。在薄片样底物16下方的生长培养基14中和有可检测靶微生物生长22的生长培养基14的部分20中，标记物的信号可能因干扰而模糊。标记物的总信号值可通过用曲线拟合数学分析法估测模糊区内的标记物信号值而测定。为阐述起见，图2示出一条模糊区内的数学拟合曲线30的实例。接着，通过积分曲线26、30下方的面积而测定标记物的总信号值。如上所述，以线性方式穿过试验区的中心扫描标记物信号。由于敏感试剂17实际上以径向方式扩散，所以，可能需要调节信号积分法从而反射试剂的径向扩散。不过，可通过扫描含试剂的径向扩散的整个区而避免信号积分法调节。

生长界限28处的给定体积(V)中标记物的浓度可以以生长界限28处的标记物信号值(从体积V检测的)与生长培养基14的总体积内检测的标记物信号的总值的比率表示。生长界限28处的标记物浓度又通过标记物和抗生素的扩散速度比率而与生长界限28处(相同体积V内)抗生素的浓度关联。如果扩散速度相等，就可按下式测定生长界限28处的抗生素浓度(即，抗生素对靶微生物的MIC)：

可将该式重排而求出生长界限28处的未知抗生素浓度：

如果抗生素和标记物的扩散速度不同，就应用表示两个扩散速度之间的数学关系的校正因子来校正该差异。此外，上述表达式要求生长培养基总体积中抗生素的量是准确已知的。如果将全部敏感试剂17(包含与未准确测定量的荧光标记物混合的准确已知量的抗生素)掺入生长培养基中，就可从试剂的量求得抗生素的量。也可应用准确测定生长培养基总体积中抗生素的量的其它方法。

实施例II：

参照图3～5，样品保持器32含有一层用靶微生物接种过的、已知均匀厚度“T”的微生物生长培养基34。图3阐释了一个实施方案，其中，将一定量含有已知准确浓度比率的抗生素和标记物的敏感试剂36涂到处于样品保持器32一端的生长培养基34的表面。图5阐释了另一个实施方案，其中，将一定量含有已知准确浓度比率的抗生素和标记物的敏感试剂36涂到与样品保持器32一端的生长培养基34的表面接触的底物33上。在这两个实施方案中，选定抗生素与标记物初始浓度的比率以保证抗生素与标记物将足以扩散入生长培养基以便在可能的MIC点提供可容易检测量的标记物。初始浓度的比率以常数“k₁”表示：

           k₁＝(抗生素浓度)_初始/(标记物浓度)_初始

反映抗生素与标记物初始浓度比率的准确值是在制造敏感试剂36的时候测定的。提供了一块与那层生长培养基34独立的参比贴片38，它含发射已知大小的荧光信号的已知量标记物。含于参比贴片38中的标记物可以不同于试剂36中应用的标记物。但是，如果这些标记物不同，或者如果参比贴片38中的标记物的响应不同于生长培养基34中标记物的响应，那么，每种标记物的浓度与信号值比率就必须是已知的。

敏感试剂36扩散入生长培养基34中，随着它横向扩散而产生递降浓度的梯度40(如图3中的示意图所示)。将接种过的生长培养基34保温，形成了与没有可检测的靶微生物生长的部分46接近的、有可检测的靶微生物生长44的部分42。应用一个被调节到检测所述标记物的荧光信号特征的可商购扫描荧光计(未示出)来测量从处于42和46这两部分之间的生长界限48的给定体积(V)发射的标记物信号值，其中，体积(V)被定义为具有均匀厚度(T；V＝A*T)的被扫描的接种生长培养基34的面积(A)。如前所述，处于42和46这两部分之间的生长界限28的位置可通过光学法或者通过其它方法确定。该荧光计产生一条曲线50(图4)，它反映作为穿过样品保持器32的横向距离的函数的信号值。

生长界限48处的抗生素浓度(即，抗生素对靶微生物的MIC)可通过这样计算：首先，应用下列关系式确定生长界限48处的给定体积(V)中的标记物浓度：

可将它重排而求出未知的标记物浓度，因为生长界限48处的标记物信号是已知的：

一旦确定了生长界限48处的标记物浓度，就可确定生长界限48处的抗生素浓度，即，通过将抗生素和标记物初始浓度的比率(k1)乘以生长界限48处的标记物浓度，但须敏感试剂36中的抗生素和标记物具有相等的扩散速度：

k₁*[(标记物的量)/(V)]_生长界限＝生长界限处的抗生素浓度

如果抗生素和标记物的扩散速度不同，就应用一个表示这两个扩散速度之间数学关系的校正因子校正该差异。

虽然就其详细的实施方案展示和描述了本发明，但本领域技术人员应懂得，可对其形式和细节作各种改变而不偏离本发明的精神和范围。

Claims (20)

1.一种测定抗生素对靶微生物的最小抑制浓度的方法，该方法包括如下步骤：

(a)提供一种微生物生长培养基，其含有一种敏感试剂，该敏感试剂包含待测抗生素和一种标记物，其中所述标记物具有与其自身浓度成比例量级的信号；

(b)用所述靶微生物接种所述生长培养基；

(c)将所述接种过的培养基温育一段时间，时间长达足以使所述靶微生物在所述生长培养基的第一部分(20)上生长到可检测的量；

(d)确定在有可检测的靶微生物生长的所述生长培养基的第一部分与基本上没有可检测的靶微生物生长的所述生长培养基的第二部分(24)之间的生长界限(28)；接着

(e)测量生长界限处的所述敏感试剂的值；以及

(f)应用所述敏感试剂的测量值计算所述抗生素的最小抑制浓度。

2.权利要求1的方法，所述比率为x∶y、x∶y²或x∶1/y的数学关系。

3.权利要求1的方法，将所述试剂按一定的方式掺到所述生长培养基中以至在生长培养基中产生所述抗生素浓度和所述标记物浓度的梯度；

测量生长界限处的所述试剂的信号量级；

并应用测量获得的所述试剂的信号量级计算所述抗生素的最小抑制浓度。

4.权利要求1的方法，其中所述第一部分中的所述抗生素的浓度不足以抑制所述培养基上的所述靶微生物，所述第二部分中的所述抗生素的浓度足以基本上抑制所述靶微生物的生长。

5.权利要求1的方法，其中，所述接种步骤包括以液体溶液形式提供所述靶微生物，其中，所述液体溶液在所述接种步骤过程中水合初始脱水的所述生长培养基。

6.权利要求3的方法，其中，所述掺和步骤包括将所述敏感试剂直接加入所述生长培养基中。

7.权利要求3的方法，其中，所述掺和步骤包括将所述敏感试剂直接涂到所述生长培养基的表面。

8.权利要求3的方法，其中，所述掺和步骤包括将所述敏感试剂涂到底物上，使所述底物接触或紧邻所述生长培养基。

9.权利要求1的方法，它进一步包括如下步骤：

提供另一种标记物，其中，所述另一种标记物与所述可检测的靶微生物生长相互作用而生成可检测的产物；

检测该产物用于确定所述生长界限(28)。

10.权利要求1的方法，它进一步包括如下步骤：

检测所述生长培养基(14)而确定在光散射特性方面有差异的邻接区；

确定所述沿所述邻接区之间的界限的生长界限(28)。

11.权利要求1～10之一的方法，其中所述敏感试剂(17)包含：

以准确已知量提供的所述抗生素和实用量的所述标记物。

12.权利要求11的方法，其中，所述测量步骤进一步包括：测量所述生长培养基(14)的位于所述生长界限(28)处已知体积内的所述信号值。

13.权利要求12的方法，进一步包括测量所述生长培养基(14)内所述信号的总值。

14.权利要求13的方法，其中，测定所述最小抑制浓度MIC的步骤进一步包括：

将单位体积所述抗生素的准确已知量[(抗生素的量)/(总体积)]_总的乘以单位体积内测得的所述信号值[(信号值)/(V)]_生长界限与生长培养基(14)内测得的信号总值[(信号值)/(总体积)]_总的的比率；

其中，所述相乘步骤的结果等于所述抗生素对所述靶微生物的最小抑制浓度MIC为

15.权利要求1～10之一的方法，其中敏感试剂(36)包含：

已知准确比率的抗生素和标记物，所述准确比率可表示为初始抗生素浓度与初始标记物浓度的比率。

16.权利要求15的方法，它进一步包括如下步骤：

提供一块含有已知量的参比标记物的参比贴片(38)，所述参比标记物具有已知大小的参比信号，且

[(信号值)/(v)]_生长界限表示生长培养基(34)的位于生长界限(48)处单位体积内的所述信号值，[(标记物的量)/(v)]_生长界限表示产生所述信号值的相应的标记物的浓度。

17.权利要求16的方法，其中测量步骤进一步包括：测量生长培养基(34)的位于所述生长界限(48)处已知体积内的所述信号值。

18.权利要求17的方法，其中，所述测定最小抑制浓度MIC的步骤进一步包括：

将单位体积内测得的所述信号值[(信号值)/(V)]_生长界限乘以参比标记物的所述已知量[标记物的量]_参比与参比信号的所述已知值[信号值]_参比的比率，并乘以初始抗生素浓度(抗生素浓度)_初始与初始标记物浓度(标记物浓度)_初始的比率，

其中，所述相乘步骤的结果等于所述抗生素对所述靶微生物的最小抑制浓度MIC，即

19.一种测定抗生素对靶微生物样品的最小抑制浓度的装置，它包括：

一个样品保持器；

一片置于所述样品保持器中的微生物生长培养基；以及

一种敏感试剂，所述敏感试剂包含一种抗生素和一种标记物，所述标记物具有大小与所述标记物的浓度成比例的信号，将所述试剂按一定的方式掺到所述那片生长培养基中以至在所述生长培养基中产生所述抗生素浓度和所述标记物浓度的梯度。

20.权利要求19的装置，它进一步包括：

一个检测所述标记物信号的传感器；以及

检测靶微生物生长的装置；

其中，所述传感器可被操作以检测在检测到的与所述靶微生物生长邻近的生长界限处的所述标记物信号。

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