CN1228438C - 液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了属于有机材料范围的一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂。该添加剂是按重量比分别配取新鲜土豆、腐朽木材和玉米芯,切成1cm×1cm×1cm的小块,分别加去离子水煮沸、过滤取得上清的浸出液,混合配成添加剂,加入到基础培养基中,在与基础培养基相同的培养条件下对白腐真菌进行培养,结果表明,浸出液按等量混合配成的添加剂添加到基础培养基中培养的小球产量均能够达到80g/L以上,是未添加添加剂的基础培养基的小球产量的5倍。其中比较复杂的有机成分能较好的促进白腐真菌的生长,耐其它微生物污染能力强,克服了人工合成的基础培养基对真菌小球增长速率的限制。能长时间保持良好的泥水分离能力。

Description

液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂
技术领域
本发明属于有机材料范围,特别涉及一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂。
背景技术
白腐真菌因其具有对难降解有机物很强的降解能力而受到广泛关注,包括多环芳烃(PAHs)、氯酚、多氯联苯(PCBs)、军工废水、农药、漂白厂废水、合成染料、合成多聚物、和杂酚油等。在研究白腐真菌小球的生理生化及降解特性时,大多数研究者采用液体培养基在摇床条件下进行扩大培养,目前多采用合成培养基。因为白腐真菌生长需要的营养条件还不是很清楚,为了促进其生长,各研究者对培养基成分进行了调整,所以报道中不同的研究者采用的培养基成份常常各不相同,这使得不同研究间的可比性降低。对于白腐真菌培养基的专门研究还比较少见报道,有必要对白腐真菌培养基进行更为深入的研究,为白腐真菌的研究提供更为合理的标准培养基。
根据培养基的组成成分,培养基可分为天然和合成两大类。天然培养基含有化学成分不完全明了的天然物质,如蛋白陈、牛肉膏等。其特点为取材方便,成本低,微生物增殖效果较好。合成培养基由已知化学成分的营养物质组成。这种合成培养基的配方成分都是已知的,所以只要配制过程的操作严格要求,各批培养基的质量可做到稳定一致,但是因为和微生物自然生长状况差别比较大,往往生长效果比较差。
发明内容
本发明的目的是提供一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂,由土豆浸出液、木材浸出液或玉米芯浸出液组成,其特征在于:所述天然添加剂是先分别取新鲜土豆、腐朽木材、玉米芯切成1cm×1cm×1cm见方的小块,按重量比(5~8)∶1∶(1~3)配取,分别加去离子水,电炉上煮沸,保持沸腾20min,然后用40目纱网过滤,其中木材浸出液和玉米芯浸出液再用快速滤纸过滤,得上清的浸出液。然后将过滤后的浸出液按土豆浸出液、木材浸出液或玉米芯浸出液中两种或三种等量配制成添加剂,然后添加到基础培养基中。
所述添加剂的组份配比为:将土豆浸出液、木材浸出液和玉米芯浸出液中的两种配成添加剂,其各占添加剂总量的1/2;若将三种配成添加剂,其各占添加剂总量的1/3。
本发明的有益效果为:1.在基础培养基中添加本发明的添加剂,对于白腐真菌的产量提高有极大的促进作用,在外加碳源为10g/L葡萄糖的条件下,经过3天培养,添加添加剂的基础培养基的小球产量均能够达到80g/L以上,是未添加添加剂的基础培养基的小球产量的5倍。2.在未添加任何添加剂的基础培养基中,小球产量很低,并且外加碳源葡萄糖浓度的增大,对小球产量影响甚小。3.添加土豆浸出液的样品容易染菌;添加玉米芯浸出液的样品培养较长时间后容易发生小球膨胀;添加有木材浸出液的样品用于培养白腐真菌小球,产量高、耐其它微生物污染能力强,能在较长时期内保持良好的泥水分离能力,是较好的液体培养生长促进添加剂。木材、玉米芯、土豆浸出液相互混合有利于白腐真菌的生长。4.用添加有木材浸出液的添加剂的基础培养基培养白腐真菌,在不同浓度葡萄糖条件下,小球产量的差别在初期并不明显,随着培养时间增加,小球产量差别逐渐增大。
具体实施方式
本发明为一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂,该天然添加剂的制备方法是先分别取新鲜土豆、腐朽木材、玉米芯切成1cm×1cm×1cm见方的小块,按重量比(5~8)∶1∶(1~3)配取,如分别取木材2.5g、玉米芯3.75g、土豆15g,加去离子水,电炉上煮沸,保持沸腾20min,然后用40目纱网过滤,其中木材浸出液和玉米芯浸出液再用快速滤纸过滤,得上清的浸出液。然后将过滤后的上清的浸出液按土豆浸出液,木材浸出液,玉米芯浸出液中的两种或三种等量配成添加剂。添加有添加剂的基础培养基的基本成分为:葡萄糖10g/L;KH2PO4 2g/L;酒石酸铵0.2g/L;CaCl2 0.1g/L;MgSO4 0.25g/L;维生素B1 5mg/L;微量元素1ml/L。微量元素成分:CuSO4.7H2O 0.08g/L;H2MoO4 0.05g/L;MnSO4.7H2O 0.07g/L;ZnSO4.7H2O 0.043g/L;Fe2(SO4)3 0.05g/L。将得到添加剂添加到基础培养基中,用于促进白腐真菌的生长。在与基础培养基相同的培养条件下对白腐真菌进行培养。其培养过程为:将木材、玉米芯、土豆的浸出液分别按表1中所示比例的添加剂加入到基础培养基中,加适当的去离子水后用250ml锥形瓶分装,每瓶100ml,8层纱布封口;在高压灭菌锅中121℃下灭菌10min;冷却,用接种环轻刮固体培养基表面黄孢平革菌的粉状孢子,接种到上述基础培养基中;然后置于30℃恒温、150r/min恒转速摇床进行培养;3天后用40目筛网过滤收集白腐真菌菌丝球。
                       表1添加不同浸出液添加剂的基础培养基培养白腐真菌小球3天后的产量比较
  培养基名称   木材浸液(份)   玉米芯浸液(份)   土豆浸液(份)   小球产量(g/L)
  含木材、玉米芯、土豆浸出液的添加剂的基础培养基   1/3   1/3   1/3   135.5
  含木材、玉米芯浸出液的添加剂的基础培养基   1/2   1/2   0   108.5
  含木材、土豆浸出液的添加剂的基础培养基   1/2   0   1/2   100
  含玉米芯、土豆浸出液混合的液体培养基   0   1/2   1/2   91
  含木材浸出液的添加剂的基础培养基   1   0   0   69.5
  含玉米芯浸出液的添加剂的基础培养基   0   1   0   75.25
  含土豆浸出液的添加剂的基础培养基   0   0   1   81.5
  基础培养基   0   0   0   14.5
从得到的小球产量比较可以看到,将三种浸出液等量混合成的添加剂加入到基础培养基时,小球产量最高,达到135.5g/L,将两种浸出液等量混合成的添加剂加入到基础培养基时,小球平均产量为99.8g/L,添加单一成分的添加剂到基础培养基时,平均产量75.4g/L。这一结果表明,比较复杂的有机成分有利于白腐真菌的生长,这和它的腐生特性是相吻合的,本发明的添加剂成分按等量混合的三种浸出液得到的效果较好,而采用成分较为简单或人工合成的基础培养基对白腐真菌进行培养,对真菌小球增长速率有一定限制。

Claims (2)

1.一种液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂,由土豆浸出液、木材浸出液或玉米芯浸出液组成,其特征在于:所述天然添加剂是先分别取新鲜土豆、腐朽木材、玉米芯切成1cm×1cm×1cm见方的小块,按重量比(5~8)∶1∶(1~3)配取,分别加去离子水,电炉上煮沸,保持沸腾20min,然后用40目纱网过滤,其中木材浸出液和玉米芯浸出液再用快速滤纸过滤,得上清的浸出液,然后将过滤后的上清浸出液按新鲜土豆浸出液,腐朽木材浸出液或玉米芯浸出液中两种或三种等量搭配成添加剂,然后添加到基础培养基中。
2.根据权利要求1所述液体培养基中促进白腐真菌生长的天然添加剂,其特征在于:所述添加剂的组份配比为:将土豆浸出液、木材浸出液或玉米芯浸出液中的两种配成添加剂,其各占添加剂总量的1/2;若将三种配成添加剂,其各占添加剂总量的1/3。
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