CN106978357A - 一种促进白腐真菌挂膜的培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种促进白腐真菌挂膜的培养基，属于废水生物处理领域。本发明所述培养基中：葡萄糖8~12 g/L，红薯淀粉8‑15 g/L，维生素0.008‑0.010 g/L，0.5~1.2 mL/L吐温80，65~75 mL/L微量元素。本发明根据白腐真菌的固定化培养基，使得白腐真菌菌丝更好附着在载体上生长。本发明所述培养基可以使白腐真菌菌丝均匀的附着在载体上，菌丝向外延伸，完成挂膜，避免了菌丝在载体上造成不均匀挂膜。
Description
技术领域
本发明公开了一种促进白腐真菌挂膜的培养基，属于废水生物处理领域。
背景技术
在微生物的培养中人们常常采用固定化的培养方式，这是因为固定化培养能够促进微生物的生长和代谢。
白腐真菌的固定化培养有利于其活性的维持。Saucedo等人（1988）在对Gibberella fujikuroi菌丝的固定化研究中发现：固定化培养可以提高真菌生长的稳定性，延长其活性维持的时间；Bottcher等（1988）和Komel等（1985）的固定化真菌研究得出类似的结果。固定的白腐真菌还可以促进其对代谢酶等的合成，Rogalski等（2006）将Nematoloma frowardii固定于聚氨酯泡沫载体（polyurethane foam）上获得2304 nkat/l的MnP，比自由悬浮培养的MnP高出1.4倍。Nakamura等（1999）的研究结果表明：采用聚氨酯泡沫载体的固定化培养获得高产的木质素降解酶（LiP: 300 U/mL, MnP: 250 U/mL, andLac: 50 U/mL）远远高于非固定化培养的酶活（LiP: 22 U/mL, MnP: 8 U/mL, and Lac:1.8 U/mL）。
但是，固定化的微生物常常遇到一些问题，如：生物膜脱落的问题，即随着生物膜的加厚，生物膜内部获得的营养物质和氧气逐步减少，造成生物膜的脱落。为了解决此问题，实验室前期发明了一种新型载体——脉管载体和生物转盘装置（专利号：ZL201420249212.9）以期解决生物膜脱落的问题。但是脉管载体的挂膜难以实现，常规的挂膜常常出现菌丝在载体上造成不均匀挂膜。
发明内容
本发明的目的在于解决脉管载体的挂膜问题，提供一种促进白腐真菌挂膜的培养基，所述培养基的成分及含量为：葡萄糖8~12 g/L，红薯淀粉8-15 g/L，维生素0.008 -0.010 g/L，吐温80 0.5~1.2 mL/L，微量元素65~75 mL/L，去离子水。
优选的，使用时先将红薯淀粉溶解在80~100℃的水中，避免淀粉糊化。
本发明所述的培养基用于脉管载体的挂膜。
本发明的有益效果为：与PDA培养基相比，白腐真菌的PDA培养基使菌丝在载体上成片状式生长，菌丝生长不够均匀，而本发明的生物膜是向外延伸，实现了脉管载体的均匀挂膜。
附图说明
图1为两种培养基的培养结果示意图。
图2为单一碳源培养基的培养结果示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。
本发明实施例1~3中挂膜均在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，在实际操作过程中，试管是根据载体选择，也可以选择其他规格的试管进行实验。
实施例1
（1）培养基的配制
固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖10g/L，红薯淀粉15g/L，维生素0.008g/L，1mL/L吐温80，70 mL/L微量元素和去离子水组成。
首先将15 g红薯淀粉放到1 L的锥形瓶中，加入500 mL的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖10 g，维生素0.008 g ，1mL的吐温80，70 mL的微量元素，加入去离子水定容至1 L。
（2）脉管载体的挂膜
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120 rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀，如图1（b）所示。使用PDA培养基培养4天的结果如图1（a）所示由图可以看出菌丝在载体上成片状式生长，菌丝生长不够均匀；使用单一碳源（淀粉或葡萄糖）培养基的培养结果如图2所示，图2（a）为淀粉培养基培养4天结果，图2（b）为葡萄糖培养基培养4天结果,由图可以看出使用单一碳源（淀粉或葡萄糖）培养基，菌丝生长不够均匀，且较为稀少。
脉管载体的挂膜（对比例）
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中的淀粉换为玉米淀粉时，在大试管中加入此液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120 rpm的条件下。培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝长势不均匀，且菌丝稀少。
脉管载体的挂膜（对比例）
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中的淀粉换为小麦淀粉时，在大试管中加入PDA液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120 rpm的条件下。培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝长势不均匀，且菌丝稀少。
脉管载体的挂膜（对比例）
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中无淀粉时，在大试管中加入PDA液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30 min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝成片状生长，长势不均匀。
实施例2
（1）培养基的配制
固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖8g/L，红薯淀粉10g/L，维生素0.009g/L，0.5mL/L吐温80，65 mL/L微量元素和去离子水组成。
首先将10g红薯淀粉放到1 L的锥形瓶中，加入500 mL的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖8g，维生素0.009 g ，0.5mL的吐温80，65mL的微量元素，加入去离子水定容至1 L。
（2）脉管载体的挂膜
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120 rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀。
实施例3
（1）培养基的配制
固定化培养白腐真菌的培养基，由葡萄糖12g/L，红薯淀粉8g/L，维生素0.01g/L，1.2mL/L吐温80，75mL/L微量元素和去离子水组成。
首先将12g红薯淀粉放到1 L的锥形瓶中，加入500 mL的去离子水，放到电炉上先进行热溶，在此过程中进行搅拌，使得淀粉尽量避免糊化；等待其冷却到室温，加入葡萄糖12 g，维生素0.01g ，1.2mL的吐温80，75mL的微量元素，加入去离子水定容至1 L。
（2）脉管载体的挂膜
挂膜是在大试管（外直径：3 cm；长：20 cm）中完成，当培养基中的淀粉为红薯淀粉时，在大试管中加入上述液体培养基70 mL，并投加一个脉管载体，在121℃的条件下灭菌30min后接种黄孢原毛平革菌（P. chrysosporium），每毫升接种104个孢子，然后放置于摇床上，在37℃，120 rpm的条件下，培养3-4天后进行观察，载体上的菌丝向外延伸，载体自上而下菌丝长势均匀。
Claims (3)
1.一种促进白腐真菌挂膜的培养基，其特征在于：所述培养基的成分及含量为：葡萄糖8~12 g/L，红薯淀粉8-15 g/L，维生素0.008 -0.010 g/L，吐温80 0.5~1.2 mL/L，微量元素65~75 mL/L，去离子水。
2.根据权利要求1所述促进白腐真菌挂膜的培养基，其特征在于：使用时先将红薯淀粉溶解在80~100 ℃的水中，避免淀粉糊化。
3.根据权利要求1所述促进白腐真菌挂膜的培养基，其特征在于：所述的培养基用于脉管载体的挂膜。
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