CN1228052C

CN1228052C - 一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN1228052C
Application number: CN 02135573
Authority: CN
Inventors: 娄红祥; 任冬梅; 翟光喜
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Shandong University
Priority date: 2002-09-26
Filing date: 2002-09-26
Publication date: 2005-11-23
Anticipated expiration: 2022-09-26
Also published as: CN1401326A

Abstract

一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮及其制备方法与应用，属于植物药提取技术领域。本发明的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮是从植物岩青兰地上干燥全草经提取、层析分离得到的，主要成分为两种二氢黄酮类化合物柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷，具有显著的PAF拮抗作用，可抑制PAF诱导的血小板聚集，可扩张冠状动脉，增加冠脉流量，做成口服或注射剂，用于治疗缺血性心脑血管疾病，心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞。

Description

一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮及其制备方法与应用

(一)技术领域

本发明涉及一种植物药提取的总黄酮及其制备方法与应用，具体涉及一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的制备、制剂的制备工艺。

(二)背景技术

随着社会的高龄化，心脑血管疾病的危害性日益引人注目，缺血性心脑血管疾病、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞等疾病的发生均与心肌缺血、血小板功能异常有关；PAF(血小板活化因子)是一种具有广泛生物学作用的脂类介质，在多种病理过程的发生和发展中有重要作用，可激活血小板，诱导血小板的聚集，导致血栓形成，从而引发心肌梗塞或脑梗塞。岩青兰总黄酮是从唇形科植物岩青兰(Dracocephalum rupestra Hance)地上全草中提取、分离得到的有效部位，其主要成分为二氢黄酮类化合物柚皮素-7-O-葡萄糖苷及北美圣草素-7-O-葡萄糖苷，试验证明该有效部位可扩张冠脉，显著增加冠脉流量；具有显著的PAF拮抗作用，对于PAF诱导的血小板聚集有明显抑制作用，具有抗氧化、清除自由基和抗蛋白质糖化作用，可治疗缺血性心脑血管疾病、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞。

(三)发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮及其制备方法与应用。

本发明治疗心脑血管系统疾病的总黄酮以岩青兰地上干燥全草为原料，通过溶剂提取、醇沉或水沉、层析和纯化制备而成，所得总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于70％，二者比例为0.50～0.80。

本发明治疗心脑血管系统疾病的总黄酮制备方法包括如下步骤：原植物经过粉碎后，以水、甲醇、乙醇、30～95％含水甲醇、30～95％含水乙醇、丙酮、30～95％含水丙酮或醋酸乙酯为提取溶剂，加热提取，所用溶剂量与原料重量比为8～15∶1，可重复提取1～3次，除去药渣，滤液在常压或减压条件下浓缩至比重1.13～1.17后，通过醇沉或水沉方法，除去一些杂质，上清液浓缩至比重1.10～1.15，进行柱层析，用洗脱液洗脱，蒸除溶剂，70～95％乙醇溶解，放置，析晶，结晶以70～95％乙醇重结晶，滤取结晶，即得。以上均为重量百分比。

本发明的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮制备方法具体步骤如下：

1.溶剂提取

原植物经过粉碎后，用水、甲醇、乙醇或含水甲、乙醇(30～95％)、丙酮、含水丙酮(30～95％)或醋酸乙酯，加热提取(包括回流)，所用溶剂量与原植物重量比为8～15∶1，以12倍溶剂量最佳，可重复提取1～3次，除去药渣，滤液在常压或减压条件下浓缩至比重1.13～1.17。

溶剂提取以60～95％含水醇或30％～50％含水丙酮回流提取，溶剂量为原料的12倍。

2.醇沉或水沉

将上述浓缩液醇沉或水沉除去杂质。用水提取的通过醇沉法，用有机溶剂提取的通过水沉的方法，除去杂质。

醇沉法中所用含水甲、乙醇浓度为50％～80％，以70％最好

3.柱层析

将上述上清液浓缩至比重1.10～1.15，进行硅胶(柱层析用)、聚酰胺(13-40目)或大孔树脂柱层析。硅胶层析用氯仿-甲醇洗脱；聚酰胺和大孔树脂层析用水-乙醇或甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇8∶2～6∶4洗脱部分或30％～50％乙醇或甲醇洗脱部分，蒸干溶剂。

4.纯化

将上述步骤所的产物用70～95％乙醇溶解，放置，析晶。结晶再以70～95％乙醇重结晶，滤取结晶，即得总黄酮。

本发明方法所得总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于70％，二者比例为0.30～0.80。

本发明的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的应用如下：在总黄酮中加入相关辅料，可制成片剂、胶囊剂及冻干注射剂。

具体应用方法如下：

1)片剂或胶囊剂的制作，均按总黄酮总量的重量百分比：

所述总黄酮，加入2～5重量倍的稀释剂，如淀粉、糖粉、糊精、微晶纤维素，5％～10％的润湿剂如水、乙醇，4％～15％的崩解剂，如羧甲基淀粉钠，按常规湿法制粒，干燥后整粒，再加入0.5％～3％的润滑剂，如硬脂酸镁、滑石粉，压片或装入胶囊壳。

2)注射用冻干制品的制作，均按总黄酮总量的重量百分比：

所述总黄酮，加入甘露醇作为骨架剂，2-羟丙基-β-环糊精作为增溶剂，溶于2～3倍量(重量/体积)注射用水，分装，冷冻干燥。

上述甘露醇与总黄酮重量比为1～3∶1，2-羟丙基-β-环糊精与总黄酮重量比为1～5∶1。

本发明的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮及其制剂用于治疗缺血性心脑血管疾病、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞。

本发明的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的药效如下：

对离体大鼠冠脉流量的影响：取大鼠击头致昏，剪开胸腔，暴露心脏，剪开心包膜，轻提心脏，剪断与心脏相连的血管组织，取出心脏，立即放入4℃氧饱和的任洛氏液中，挤出心脏余血，找到主动脉残端，将主动脉套在主动脉插管上，结扎固定后，稳定10分钟，灌流液温度37±1℃，压力50mmH2O，充氧。测定每分钟流量，连续3分钟流量相近，其平均值可作为给药前的基础流量。自侧管依次给注射用冻干品溶液0.2ml，测定每次给药后连续6分钟内每分钟的流量，找出最大值，计算药后流量的最大增加值，计算冠脉流量增加率，结果显示，总黄酮可显著增加冠脉流量。

抗PAF作用观察：新西兰兔，体重在2.5～3Kg之间，采集30ml耳缘静脉血，用1∶9(V/V)3.8％枸橼酸钠防凝，离心法制备富含血小板血浆(PRP)，于PRP测定管中加入25μl总黄酮水溶液(1mg/ml)，37℃敷育1min，加入血小板聚集诱导剂PAF，采用Born比浊法，测定血小板聚集。结果显示，总黄酮对PAF诱导的血小板聚集有明显抑制作用。

本发明治疗心脑血管系统疾病的总黄酮具有PAF拮抗作用，可抑制PAF诱导的血小板聚集，扩张冠脉，增加冠脉流量，具有抗氧化、清除自由基和抗蛋白质糖化作用，用于治疗缺血性心脑血管疾病、心绞痛、心肌梗塞、脑梗塞，具有疗效好，成本低的优点。

(四)具体实施方式

实施例1：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量水，沸腾提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至比重1.15，加乙醇至醇浓度70％，沉淀24小时，上清液浓缩至粘稠膏状，加入2倍量柱层析硅胶拌匀，真空干燥，研细，装入层析柱，氯仿-甲醇9∶1洗脱至洗脱液蒸干后无残留物，氯仿-甲醇6∶4洗脱，洗脱至洗脱液TLC(薄层层析)检测无被测斑点，洗脱液蒸除溶剂，95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于75％，二者比例为0.70。

实施例2：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量水，沸腾提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至比重1.15，加乙醇至醇浓度70％，沉淀24小时，上清液浓缩至流浸膏状，加入预先装好的聚酰胺柱(聚酰胺与原药材重量比为1∶2)的顶端，水洗脱至洗脱液无色，30％乙醇洗脱，洗脱至洗脱液TLC(薄层层析)检测无被测斑点，洗脱液减压蒸除溶剂后用95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于73％，二者比例为0.55。

实施例3：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量水，沸腾提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至比重1.15，加乙醇至醇浓度70％，沉淀24小时，上清液浓缩至流浸膏状，加入预先装好的大孔树脂柱(大孔树脂与原药材重量比为1∶1)的顶端，水洗脱至洗脱液无色，30％乙醇洗脱，洗脱至洗脱液TLC(薄层层析)检测无被测斑点，洗脱液减压蒸除溶剂后用95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于78％，二者比例为0.55。

实施例4：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量70％乙醇，回流提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至流浸膏状，加入与药材重量等量的水，沉淀24小时，上清液浓缩至流浸膏状，加入预先装好的聚酰胺柱(聚酰胺与药材重量比为1∶2)的顶端，水洗脱至洗脱液无色，30％乙醇洗脱，洗脱至洗脱液TLC(薄层层析)检测无被测斑点，洗脱液减压蒸除溶剂后用95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于71％，二者比例为0.58。

实施例5：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量50％丙酮，回流提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至流浸膏状，加入与药材重量等量的水，沉淀24小时，上清液浓缩至粘稠膏状，加入2倍量柱层析硅胶拌匀，真空干燥，研细，装入层析柱，氯仿-甲醇9∶1洗脱至洗脱液蒸干后无残留物，氯仿-甲醇6∶4洗脱，洗脱至洗脱液TLC检测无被测斑点，洗脱液蒸除溶剂，95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于76％，二者比例为0.70。

实施例6：

岩青兰干燥地上全草，加12倍量70％乙醇或50％丙酮，回流提取2小时，共提取2次，提取液浓缩至流浸膏状，加入与药材重量等量的水，沉淀24小时，上清液浓缩至流浸膏状，加入预先装好的大孔树脂柱(大孔树脂与药材重量比为1∶1)的顶端，水洗脱至洗脱液无色，30％乙醇洗脱，洗脱至洗脱液TLC检测无被测斑点，洗脱液减压蒸除溶剂后用95％乙醇溶解，析晶，滤出结晶，乙醇重结晶，得岩青兰总黄酮。

总黄酮中柚皮素-7-O-葡萄糖苷和北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮含量不低于79％，二者比例为0.78。

实施例7：总黄酮用于片剂

实施例1所得的总黄酮20g，加入淀粉40g，糊精25g，蔗糖粉10g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，整粒，加入滑石粉0.3g，混匀，压制成1000片，即得。

实施例8：总黄酮用于胶囊剂

实施例3所得的总黄酮20g，加入淀粉40g，糊精25g，微晶纤维素10g，混匀，制成颗粒，60℃以下干燥，整粒，加入硬脂酸镁0.2g，混匀，装入胶囊壳，即得。

实施例9：总黄酮用于注射用冻干制品

实施例4所得的总黄酮10g，与等量甘露醇混匀，加注射用水100ml，80℃加热使成混悬液，备用；称取20g2-羟丙基-β-环糊精，加注射用水100ml溶解，80℃搅拌条件下将混悬液缓慢加入2-羟丙基-β-环糊精中，加活性炭0.05％80℃搅拌30分钟，微孔滤膜过滤，滤液定容至300ml，分装，装量3ml/支，冷冻干燥即得。

Claims

1、一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮，其特征在于，由岩青兰为原料，通过溶剂提取、醇沉或水沉、层析和纯化制备而成，所得总黄酮主要成分为柚皮素-7-O-葡萄糖苷、北美圣草素-7-O-葡萄糖苷两种二氢黄酮类成分，其总量大于70％，其比例为0.30～0.80，其中：所用提取溶剂为水、甲醇、乙醇、30～95％含水甲醇、30～95％含水乙醇、丙酮、30～95％含水丙酮或醋酸乙酯，柱层析用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析或聚酰胺柱层析中的一种，硅胶柱层析采用氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇8∶2～6∶4洗脱部分，大孔树脂和聚酰胺采用水-乙醇或甲醇梯度洗脱，收集30％～50％乙醇或甲醇洗脱部分。

2、一种权利要求1所述的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的制备方法，包括如下步骤：原植物经过粉碎后，以水、甲醇、乙醇、30～95％含水甲醇、30～95％含水乙醇、丙酮、30～95％含水丙酮或醋酸乙酯为提取溶剂，加热提取，所用溶剂量与原料重量比为8～15∶1，重复提取1～3次，除去药渣，滤液在常压或减压条件下浓缩至比重1.13～1.17后，通过醇沉或水沉方法，除杂质，上清液浓缩至比重1.10～1.15，进行柱层析，洗脱液洗脱，蒸除溶剂，70～95％乙醇溶解，放置，析晶，结晶以乙醇重结晶，滤取结晶即得，其中，柱层析用硅胶柱层析、大孔树脂柱层析或聚酰胺柱层析中的一种，硅胶柱层析采用氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇8∶2～6∶4洗脱部分，大孔树脂和聚酰胺采用水-乙醇或甲醇梯度洗脱，收集30％～50％乙醇或甲醇洗脱部分。

3、根据权利要求2所述的一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的制备方法，其特征在于提取溶剂是60～95％含水醇或30％～50％含水丙酮回流提取，溶剂量为原料的12倍。

4、根据权利要求2所述的一种治疗心脑血管系统疾病的总黄酮的制备方法，其特征在于醇沉用含水甲醇、乙醇浓度为50％～80％。

5、由权利要求1所述的治疗心脑血管系统疾病的总黄酮与制药辅料组成的片剂、胶囊剂或注射剂。