发明内容
本发明的目的就是应用楤木总皂苷制备治疗痛经的药物,克服目前西药治疗副作用大,中药复方治疗服药量大等缺点,提供一种副作用小,服用量小的单味中药提取的有效成分作为治疗痛经的理想药物。
当本发明用于制备治疗痛经的药物时,其口服或非口服给药均是安全的。在口服情况下,其可以是任何常规形式给药,如散剂、粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、滴丸、软胶囊、漂浮剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等;当该药物非口服给药时,可采用任何常规形式,例如栓剂、注射剂:如静脉内注射、软膏剂、经皮给药、吸入剂等。
本发明制备治疗痛经的药物是由有效部位或多种有效成分单体与固体或液体的赋形剂一起构成的,这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的,下面举几个具体例子,散剂是内服的粉末剂,它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁,碳酸氢钠、干燥酵母等;溶液剂的赋形剂有水、甘油、丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等;软膏剂的赋形剂可以使用脂油,含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。
有效物质的剂量可以根据服用方式,病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变,口服量为:50-1000mg/次·人,每日三次服用:栓剂用量为1g/次·人,每日一次。
其治疗作用效果是通过给动物灌胃楤木提取物,剂量为25-280mg/kg,连续五天。结果显示可明显抑制痛经的发生,并可拮抗小鼠二甲苯耳水肿,减少醋酸致扭体反应发生的次数,表现出明显的抗炎、镇痛抑菌及活血化瘀作用。
本发明可通过下面的实验例进一步说明。在药理实验过程中常通过整体的抗炎效果如:抑制小鼠二甲苯耳水肿及体外抑菌效果来反映其对妇科盆腔炎,阴道炎等炎症的治疗作用,进而达到对继发性痛经的治疗作用。
实验例一、对催产素止痛经反应的影响
(1)试验材料
动物:昆明种小鼠,雌性,体重19-22g,购自长春高新医学动物实验研究中心。
药物:楤木总皂苷,黄白色粉末,纯度达95%。阳性药妇康宁片,河南同心堂药业有限公司生产。所有药物用时以蒸馏水配成所需浓度,供灌胃给药,对照组同时给同体积蒸馏水。己烯雌酚注射液由广州明兴制药厂生产,批号950701-1;缩宫素注射液由上海禾丰制药有限公司生产,批号:020401。
(2)试验方法与结果
取50只小鼠,随机分为六组:妇康宁片0.64g/kg剂量给药组,楤木总皂苷200、100、50mg/kg三个剂量给药组。动物分组后,连续皮下注射己烯雌酚注射液四天,每天一次:其中第一、四天给0.2mg/只,第二、三天0.1mg/只。第五天开始按组别灌胃给药,每天一次,连续给药五天。末次给药1小时后动物腹腔注射缩宫素注射液2U/只,记录30min内小鼠扭体次数。结果见表1。
表1 楤木总皂苷对催产素所致小鼠扭体反应的影响(
x±s)
组别 |
动物数(只) |
扭体次数(次) |
空白对照组妇康宁片组0.64g/kg楤木总皂苷200mg/kg楤木总皂苷100mg/kg楤木总皂苷50mg/kg |
1111111111 |
8.6±7.341.5±1.86**2.6±2.54*0.8±0.98**5.3±3.95 |
注:与空白对照组比*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,以下各表均同。
由表1中结果可见,楤木总皂苷可明显抑制催产素所致小鼠扭体反应的发生,与空白对照组比具有明显差异,即对痛经具有明显的缓解作用。
实验例二、对醋酸致扭体反应的影响
(1)试验材料
动物:昆明种小鼠,体重18-22g,雌雄均可,所有动物均购于本院动物室。
药物:楤木总皂苷,黄白色粉末,纯度达95%。阳性药地奥心血康由中科院成都地奥制药公司生产,用时以蒸馏水配成所需浓度混悬液,供灌胃给药。
(2)试验方法与结果
取55只小鼠,随机分为五组:空白对照组,地奥心血康120mg/kg剂量给药组,楤木总皂苷140、70、35mg/kg三个剂量给药组。每天一次,连续给药五天。末次给药后1小时,于小鼠腹腔注射0.7%醋酸10ml/kg,5分钟后观察10分钟内小鼠发生扭体反应的次数,结果见表2。
表2 楤木总皂苷对小鼠醋酸致扭体反应的影响(
x±s)
组别 |
动物数(只) |
扭体反应次数(次) |
空白对照组地奥心血康120mg/mg楤木总皂苷140mg/kg楤木总皂苷70mg/kg楤木总皂苷35mg/kg |
1111111111 |
25.5±11.4614.1±8.29*16.3±7.86*19.5±7.6718.3±6.57 |
表2中结果显示,楤木总皂苷140mg/kg剂量组可明显抑制醋酸致小鼠扭体反应的发生。
实验例三、对小鼠二甲苯耳水肿的影响
(1)试验材料
动物:昆明种小鼠,体重18-21g,雄性,购自长春高新医学动物实验研究中心。
药物:楤木总皂苷,黄白色粉末,纯度达95%。阳性药妇康宁片,河南同心堂药业有限公司生产。所有药物用时以蒸馏水配成所需浓度,供灌胃给药,对照组同时给同体积蒸馏水。
(2)试验方法与结果
取55只小鼠,随机分为五组:空白对照组,妇康宁片0.64g/kg剂量给药组,楤木提取物200、100、50mg/kg三个剂量给药组。每天一次,连续给药五天。末次给药后1小时于小鼠右耳滴二甲苯0.03ml/只,2小时后将动物脱臼处死后,以Φ9mm的打孔器打下左右两耳片,称重,计算两耳片重量差。结果见表3。
表3 楤木总皂苷对小鼠二甲苯耳水肿的影响(
x±s)
组别 |
动物数(只) |
扭体次数(次) |
空白对照组妇康宁片组0.64g/kg楤木总皂苷200mg/kg楤木总皂苷100mg/kg楤木总皂苷50mg/kg |
1111111111 |
15.8±5.6213.1±6.4410.5±5.50*12.6±3.6412.9±3.81 |
由表3中结果可见,楤木总皂苷对小鼠二甲苯耳水肿具有明显抑制作用,表现出明显的抗炎作用。
实验例四、对血瘀大鼠血液流变性的影响
(1)实验材料
动物:Wistar大鼠,体重200-250g,雌雄均可,所有动物均购于本院动物室。
药物:楤木总皂苷,黄白色粉末,纯度达95%。阳性药银杏叶片,由三九企业集团宁波立华制药有限公司生产。所有药物用时均以蒸馏水配成所需浓度的混悬液,供灌胃给药。盐酸肾上腺素Adr注射液由北京永康制药厂生产。
仪器:LIANG-100微机显示自动记录血液血浆粘度计由上海医科大学医疗仪器研究中心出品。
(2)试验方法与结果
取58只大鼠,随机分为六组:空白对照组,血瘀模型组,银杏叶片182mg/kg剂量给药组,楤木总皂苷100、50、25mg/kg剂量给药组。每天一次,连续给药五天。第二天给药后0.5小时于动物皮下注射0.1%Adr0.1ml/只,0.5小时后将动物置于1.5℃水中冰浴5分钟,24小时重复一次,隔24小时后再给一次Adr。末次注射Adr24小时后,灌胃楤木总皂苷。于给药后1小时,动物腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg,麻醉,然后腹主动脉采血,在血液血浆粘度计上测全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积及血沉。结果见表4。
表4 楤木总皂苷对血瘀大鼠血液流变学的影响(
x±s)
细别 |
动物数(只) |
全血比粘度(s) |
血浆比粘度(s) |
血沉(mm/h) |
红细胞压积(%) |
高切 |
低切 |
空白对照组模型对照组银杏叶片组182mmg/kg楤木总皂苷100mg/kg楤木总皂苷50mg/kg楤木总皂苷25mg/kg |
81010101010 |
5.0±0.725.9±1.175.4±0.524.5±0.43ΔΔ5.6±1.155.5±1.33 |
6.3±1.298.0±2.276.7±0.847.0±3.117.7±2.367.2±2.45 |
1.5±0.071.7±0.11***1.7±0.141.6±0.03ΔΔ1.6±0.111.7±0.06 |
6.0±0.826.7±1.256.3±0.716.0±1.166.0±1.256.0±1.05 |
39.3±1.1741.4±1.43**40.3±1.2539.8±1.40Δ42.1±2.2340.7+0.95 |
由表4中结果可见,动物连续注射Adr,同时又受到寒冷刺激可行成血瘀症状,体内积压液流变性各项指标发生明显改变。而服用楤木总皂苷后,全血比粘度、血浆粘度和红细胞压积百分率均明显降低,与模型组有明显差异,表明其具有活血化瘀作用。
实施例五、体外抑菌作用
菌种:白色念珠菌[CMCC(B)98001]、生孢梭菌[CMCC(B)6491]、破伤风杆菌[CMCC(B)6406]、淋病奈瑟菌[CMCC(B)98001]、滴虫活体。
培养基:普通肉汤、普通肉汤琼脂、甘露醇盐琼脂、血琼脂、巧克力琼脂、肝浸液、霉菌琼脂、生理盐水,以上培养基制备符合《中国药典2000年版》微生物限度检查法要求。
药物:楤木总皂苷,黄白色粉末,纯度达95%。对照品青霉素钠由石家庄制药集团有限公司生产。
(2)试验方法与结果
菌液制备:将淋病奈瑟菌、生孢梭菌、破伤风杆菌、白色念珠菌分别接种于普通肉汤培养基,置37℃培养18-24小时;淋病奈瑟菌置5%CO2孵箱培养,生孢梭菌、破伤风杆菌封蜡盖置厌氧罐中培养。白色念珠菌置35℃±2℃培养18-24小时,以无菌生理盐水稀释成最终浓度为1∶10000菌液,备用。将滴虫活体加入含灭活血清及半胱氨酸还原剂青霉素250-1000U/ml、链霉素0.5mg/ml、氯霉素0.5mg/ml,pH值为5.8-6.0肝浸液培养基中,经35±2℃培养备用。
供试品制备:用试管法将楤木总皂苷分别稀释到最终浓度为50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625mg/ml,将稀释各浓度的供试液分别加入备用的5种菌液中各0.1ml;另取2只盛有普通肉汤试管作空白对照和阳性对照,同时将青霉素钠按上述浓度稀释,同作空白和阳性对照。各种含药细菌按前述条件培养24小时后,记录最小抑菌浓度MIC。另外将供试品和对照药用肝浸液培养基稀释成上述各浓度,分别加入滴虫培养物0.1ml,摇匀,同时做阴性和阳性对照,同上方法培养,48小时后取出,l0×40低倍镜观察结果,阳性对照管可见许多运动活泼滴虫,供试品如有最小抑菌作用,则镜下看不到滴虫活体。结果见表5。
表5楤木总皂苷体外抑菌试验
细菌名称 |
阴性 |
阳性 |
楤木总皂苷药物浓度及MIC(mg/ml) |
50 |
25 |
12.5 |
6.25 |
3.125 |
1.5625 |
白色念珠菌生孢梭菌破伤风杆菌淋病奈瑟菌滴 虫 |
----- |
+++++ |
----- |
----- |
---+- |
+--++ |
+++++ |
+++++ |
细菌名称 |
阴性 |
阳性 |
青霉素药物浓度及MIC(mg/ml) |
50 |
25 |
12.5 6.25 3.125 |
1.5625 |
白色念珠菌生孢梭菌破伤风杆菌淋病奈瑟菌滴 虫 | ----- | +++++ | ----- | ----- | ----- | ----- | ----- | +++++ |
由表5中结果可见,楤木总皂苷对白色念珠、生孢梭菌、破伤风杆菌及滴虫均有较强的抑制作用,其MIC分别为12.5mg/ml和6.25mg/kg;对淋病奈瑟菌轻度敏感。
实验例六、毒性实验
(1)急性毒性:通过对小鼠和大鼠灌胃及静脉注射的LD50测定结果表明,小鼠灌胃楤木总皂苷LD50为2.34g/kg,95%可信限为1.919-2.849g/kg;大鼠灌胃楤木总皂苷LD50为2.25g/kg,95%可信限为1.979-2.555g/kg;小鼠静脉注射楤木总皂苷LD50为184.27g/kg,95%可信限为1.979-2.555g/kg;大鼠静脉注射木总皂苷LD50为184.27g/kg,95%可信限为152.082-218.827g/kg。
(2)长期毒性:楤木总皂苷以800、470、235mg/kg剂量给大鼠灌胃60天,高剂量出现毒性反应,并可能有胃肠刺激性。中、低剂量对动物生长状态、血液学及血液生化学无明显影响,主要脏器亦未见药物引起的明显的病理改变,其中高剂量为临床用量的93.3倍。以161、96.8、48.8mg/kg剂量给犬口服60天,高剂量组有个别动物体重下降,开始有呕吐、拒食药物现象,而对所有动物生长状态、脏器指数及血液学、血液生物学、尿常规无明显影响,主要脏器亦无药物引起的明显病理改变。
上述结果证明楤木总皂苷具有明显的抗炎、镇痛、抑菌、活血化瘀等作用,这为临床治疗妇科炎症、痛经提供了理论依据。