CN1206922C - 一种防治植物寄生线虫的生防制剂 - Google Patents
一种防治植物寄生线虫的生防制剂 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1206922C CN1206922C CN 03135134 CN03135134A CN1206922C CN 1206922 C CN1206922 C CN 1206922C CN 03135134 CN03135134 CN 03135134 CN 03135134 A CN03135134 A CN 03135134A CN 1206922 C CN1206922 C CN 1206922C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- control agent
- culture
- biological prevention
- test tube
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及一种防治植物寄生线虫的生防制剂,属生物农药技术领域。本发明的生防制剂按常规方法制备,其中,生产菌株采用中华轮枝菌Verticillium sinenseGAUZ 412,该菌株已于2003年5月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC NO.0933。本发明将该菌株,通过固体或液体培养,获得包括菌丝、分子孢子、厚垣孢子的菌体培养物,与蟹壳粉、虾壳粉、几丁质、活性炭和草碳、农作物秸秆糠等辅料和吸附载体按一定比例混合后,制成粉剂或微粒剂的线虫生物制剂。本发明具有明显稳定的防治效果,综合性状好,易于工业化生产。
Description
技术领域:
本发明涉及一种防治植物寄生线虫的生防制剂,属生物农药技术领域。
背景技术:
植物寄生线虫是一种世界范围内普遍发生的植物病害,仅根结线虫已知种类就达70多种,为害3000多种植物,每年造成巨大的损失。我国植物寄生线虫主要危害烟草、花卉、蔬菜、棉花、大豆、花生、三七、西洋参等经济作物,造成的损失十分惊人,全球每年因线虫造成的损失达1000亿美元(Weischer,1994)。目前线虫的防治主要依靠化学杀线虫剂,但化学杀线虫剂多为灭生性巨毒农药,对地下水的污染和残留,使其使用受到一定的限制。同时目前国内使用的化学杀线虫剂主要为国外进口产品,价格过于昂贵。因此,研制开发线虫生防制剂显得尤为重要。
自然界中,线虫的天敌是很多的,主要有:真菌、细菌、螨、捕食性线虫等。其中最多的是真菌,目前研究最多且成为产品上市的也主要是真菌。根据其侵染线虫的特性主要分为:
1、捕食菌物:通过营养菌丝特化形成的捕食器捕捉线虫;
2、寄生菌物:通过寄生线虫的卵、雌虫、胞囊等的菌物;
3、产毒菌物:能够产生毒素毒杀线虫的菌物。
目前成为产品进入市场的主要是捕食菌物和寄生菌物。
发明内容:
本发明的目的在于克服现有技术之不足,提供一种防治植物寄生线虫的生防制剂。
本发明采用的真菌是中华轮枝菌(Verticillium sinense)GAUZ 412,保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;地址:中国.北京.中关村;保藏日期:2003年5月26日;保藏登记入册的编号CGMCC NO.0933。
中华轮枝菌GAUZ 412,系本发明人于1996年发现的一个轮枝菌新种。主要形态特征为:营养菌丝分隔,分枝,常膨大;分子孢子梗直立,无色,长50-300μm,产生1个瓶梗或2-6个瓶梗轮生;瓶梗下部膨大,膨大的基部长4.8-12.2μm,宽1.5-2.0μm。自基向顶逐渐变细,顶端宽0.5-0.7μm;10-50个分生孢子聚集成头状或呈链状;分子孢子不分隔,无色,橡果形,大小为0.8-1×0.8-1.2μm。缺砖格厚垣孢子。
中华轮枝菌(Verticillium sinense)容易变异,原始菌株生长缓慢。我们从线虫及土壤中分离到不同菌株,其中大部份不具备我们所需的“明显稳定的防治效果,综合性状好,易于规模化生产”的特性。通过对菌株进行筛选和改良后,获得了中华轮枝菌的一株独特菌株,命名为:GAUZ 412。它不但对根结线虫(Meloidogyne)、胞囊线虫(Heterodera)具良好的防治效果,同时具备了工业化生产的基本性状。
鉴于该菌株可能由于(自发的、物理的或化学的)突变、原生质体融合,转化或其他通过生物技术而发生变化或被改造,本菌种任何菌株的突变株、变种和衍生物均在本发明的保护范围内。
本发明按常规方法制备。即将中华轮枝菌GAUZ 412,通过固体或液体培养,获得包括菌丝、分子孢子、厚垣孢子的菌体培养物,与蟹壳粉、虾壳粉、几丁质、活性炭和草碳、农作物秸杆糠等辅料和吸附载体按一定比例混合后,经固体发酵生产和液体发酵生产,制成粉剂或微粒剂。
1、固体发酵生产
(1)试管种培养
将GAUZ 412的菌丝体或孢子接种到试管固体培养基斜面上,培养基配方为1000毫升PDA培养基中添加5-10克蔗糖和5-10毫升甘油,22-26℃下培养6-10天,获得试管种。
(2)菌种摇床扩大培养(以下均为重量百分比)
将斜面种子接种到三角瓶液体培养基中,培养基配方为1000毫升PDA中添加10-20克糖蜜、2-5克硫酸铵,2-4克氯化钠,1-3克硫酸二氢钾,2-4克柠檬酸三钠,5-10克蔗糖,5-10毫升甘油。25-30℃下摇床培养(转速200-300rpm),8-15天。
(3)固体发酵制备生防制剂
将培养好的液体种子接入固体培养基中,培养基的配方为40%-60%农作物秸杆糠、10-20%豆饼粉、20-30%麸皮、10%-20%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,22-26℃培养20-30天后,40-45℃温度条件下烘干后制成粉剂或微粒剂。
2、液体发酵生产
(1)试管种培养与前述固体发酵生产中(1)相同
(2)菌种摇床扩大培养与前述固体发酵生产中(2)相同
(3)液体发酵制备生物制剂
将逐级扩大的菌种按10%比例接种于不同容量的发酵罐中,培养基配方为前述固体发酵(2)培养基配方,培养温度28-32℃,培养时间为144-240小时,获生产所需的菌丝体和孢子。将菌体培养物与5%-10%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,1%-2%活性炭混合后,用草碳和农作物秸杆糠吸附并混匀,制成粉剂或微粒剂。
本生防制剂可以与其他的杀线虫农药、植物生长调节剂混合使用,但必须保证所混药剂对本发明采用的中华轮枝菌无副作用。
本发明的线虫生防制剂一般在作物播种或移栽时施用。方法是播种时与种子共同施入土壤中,移栽时将本制剂施入作物根际周围。对线虫发生严重地区可在作物生长过程中追施一次,方法是将本制剂施入作物根际周围,每亩每次施用量为2-3公斤。
本发明具有明显稳定的防治效果,综合性状好,易于工业化生产。
具体实施方式:
下面用实施例来进一步详述本发明,但本发明的内容并不局限于此。
实例一:生防制剂对线虫卵寄生
1、制备试验用制剂
将GAUZ 412菌株接种于培养皿中培养,培养基配方为1000毫升PDA培养基中添加6克蔗糖和6毫升甘油,25℃下培养8天后,用无菌水将孢子洗下,用血球计数板进行计数,制成孢子含量为1×108/毫升的孢子悬浮液。
2、试验方法
以吸管取5毫升孢子悬浮液置于直径5厘米的无菌培养皿中,然后接入根结线虫卵(Meloidogyne)悬浮液,每皿接种1000头卵。
卵的制备:将带有大量根结线虫的根系剪碎与土壤混合,然后移栽4周龄的番茄苗,5个月左右转繁一次。使用时从钵栽番茄苗中取出已接种上根结线虫的根系,水洗,切碎后放入广口瓶中,加入1%次氯酸钠,振荡3分钟后倒入双层筛中(上筛孔径250微米,下筛孔径38微米),反复冲洗直到所有卵都冲洗到下筛中,收集后制成线虫卵悬浮液,用线虫计数板计数。
试验重复3次。对照加入5毫升无菌水。25℃下培养,将各处理培养皿用封口膜封严,以减少污染以及菌液蒸发。15天后观察线虫孵化情况,孵化了即说明未被抑制,未孵化即说明其卵已被抑制而未能萌发,然后计算卵抑制率。
3、试验结果
表1 生防制剂对根线虫卵孵化的抑制率
处理 | 孵化出的线虫数(条) | ||||
处理1 | 处理2 | 处理3 | 平均 | 抑制率/% | |
生防制剂 | 342 | 318 | 351 | 337 | 62.1 |
空白对照 | 892 | 872 | 906 | 890 |
结果表明:菌剂对根结线虫的卵孵化具有较好的抑制作用,抑制率达62.2%。本发明菌剂通过抑制卵孵化而达到防治线虫的目的。
实例二:深层发酵制备生防制剂及对根结线虫的药效试验
1、深层发酵制备生防制剂
(1)将GAUZ 412的菌丝或孢子接种到试管固体培养基斜面上,培养基配方为1000毫升PDA培养基中添加6克蔗糖和6甘油,25℃下培养8天,获得试管种。
(2)将斜面种子接种到三角瓶(500毫升)液体培养基中,培养基配方为1000毫升PDA中添加12克糖蜜、3克硫酸铵,4克氯化钠,1克硫酸二氢钾,2克柠檬酸三钠,8克蔗糖,8毫升甘油。26℃下,摇床(转速250rpm)培养10天。
(3)将发酵好的三角瓶液体菌种接入1吨发酵罐中,培养基配方与前述(2)相同,30℃,培养48小时后接入10吨发酵罐中发酵190小时后,放出与5%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,1%活性炭混合后,用草碳和农作物秸杆糠吸附并混匀,42℃烘干后制成微粒剂。
2、试验方法
(1)试验用药剂及处理
A、生防制剂2公斤/亩,在烤烟移栽时一次性施于苗根际;
B、阿巴丁,稀释1000倍液,在烤烟移栽时一次性施于苗根部;
C、空白对照,施入清水。
(2)试验方法
供试作物为感病烟草品种红花大金元,试验地点为云南省昆明市宜良县马街乡龚家营村,历年发生根结线虫(Meloidogyne)很严重的地块,土壤为红壤,肥力中等。
小区为单行区,面积33平方米,种烟50株,每处理设3个重复,随机排列,共9个小区,四周设保护行,按优质烟栽培管理措施规范化管理。
(3)调查方法
在烤烟采收最后一片烟叶后立即进行发病情况调查,每小区随机取10株进行挖根调查,根翻挖出来后,用水轻洗去泥沙,用放大镜检查根结并注意观察卵块情况,按烟草系统根结线虫病分级标准(Y/cT40-1996)分级记载,分别计算病株率、根结百分率、根坏死百分率、病情指数、防治效果。
各个小区挂牌采收和烘烤,不同处理分别分级,称重计算产量、产值、均价、上等烟和中上等烟比例。
4、实验结果
表2 生防制剂对根结线虫的防治率
处理 | 发病情况 | ||||
病株率/% | 根结百分率/% | 根坏死百分率/% | 病情指数 | 防治效果/% | |
生防制剂 | 15.2 | 10 | 2 | 16.7 | 70.5 |
阿巴丁 | 40 | 25 | 10 | 40 | 29.5 |
空白对照 | 56.7 | 40 | 15 | 56.7 |
表3 不同药剂处理烟株的经济性状指标
处理 | 经济性状指标 | ||||
产量kg/m2 | 产值/元 | 均价/元(kg) | 上等烟比例/% | 中上等烟比例/% | |
生防制剂 | 14.15 | 116.3 | 8.21 | 41 | 76.3 |
阿巴丁 | 10.25 | 83.6 | 8.15 | 30.7 | 69.3 |
空白对照 | 9.75 | 66.3 | 6.8 | 28.2 | 65.1 |
结果表明:生防制剂的病株率/%、根结百分率/%、根坏死百分率/%、病情指数分别比阿巴丁低24.8%、15%、8%、23.3,比空白对照低41.5%、30%、13%、40,平均防效比化学农药阿巴丁高41%,显示了生防制剂很好的防效,具备了生产上大量推广的基本条件。
经济性状指标分析表明,生防制剂的各个经济性状指标都较化学农药和对照高,其产量、产值、均价、上等烟比例和中上等烟比例分别比化学农药阿巴丁高3.9kg、32.7元、0.06元、10.3%、7%,比对照分别提高了4.4kg、50元、1.41元、12.8%、11.2%。
田间药效试验表明,本发明生产的生防制剂对根结线虫有良好的防治效果,其防效超过化学农药阿巴丁,可以在生产上推广使用。
实例三:固体发酵制备生防制剂
采用前述实例二(1)制备固体试管斜面菌种,实例二(2)制备三角瓶液体菌种,将培养好的三角瓶液体菌种接入固体培养基中,固体培养基的配方为15%豆饼粉、20%麸皮、55%农作物秸杆糠、10%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,25℃培养20天后,42℃温度条件下烘干后制成粉剂或微粒剂。
Claims (1)
1.一种防治植物寄生线虫的生防制剂,由生产菌株和辅料按固体发酵生产或液体发酵生产方法制备,其特征在于该生防制剂的生产菌株为中华轮枝菌(Verticilliumsinense GAUZ)412,该菌株已于2003年5月26日保臧在中国微生物菌种保臧管理委员会普通微生物中心,保藏号为CGMCC NO.0933;固体发酵生产或液体发酵生产制备生防制剂的过程为:
(1)固体发酵生产过程包括试管种培养、菌种摇床扩大培养、固体发酵制备生防制剂;其中:
试管种培养为:将Verticillium sinense GAUZ 412的菌丝体或孢子接种到试管固体培养基斜面上,培养基配方为1000毫升PDA培养基中添加5-10克蔗糖和5-10毫升甘油,在22-26℃下培养6-10天,获得试管种;
菌种摇床扩大培养为:将斜面种子接种到三角瓶液体培养基中,培养基配方为1000毫升PDA中添加10-20克糖蜜、2-5克硫酸铵,2-4克氯化钠,1-3克硫酸二氢钾,2-4克柠檬酸三钠,5-10克蔗糖,5-10毫升甘油,在25-30℃、转速200-300rpm的摇床培养8-15天;
固体发酵制备生防制剂为:将培养好的液体种子接入固体培养基中,培养基的配方为40%-60%农作物秸杆糠、10-20%豆饼粉、20-30%麸皮、10%-20%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,22-26℃培养20-30天后,在40-45℃温度条件下烘干后制成粉剂或微粒剂;
(2)液体发酵生产过程包括试管种培养、菌种摇床扩大培养、液体发酵制备生防制剂;其中:
试管种培养及菌种摇床扩大培养过程同固体发酵生产过程;
液体发酵制备生防制剂为:将逐级扩大的菌种按10%比例接种于不同容量的发酵罐中,培养基配方为固体发酵中菌种摇床扩大培养的培养基配方,培养温度为28-32℃,培养时间为144-240小时,获生产所需的菌丝体和孢子;将菌体培养物与5%-10%蟹壳粉或虾壳粉或几丁质,1%-2%活性炭混合后,用草碳和农作物秸杆糠吸附并混匀,制成粉剂或微粒剂。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 03135134 CN1206922C (zh) | 2003-06-03 | 2003-06-03 | 一种防治植物寄生线虫的生防制剂 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 03135134 CN1206922C (zh) | 2003-06-03 | 2003-06-03 | 一种防治植物寄生线虫的生防制剂 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1476762A CN1476762A (zh) | 2004-02-25 |
CN1206922C true CN1206922C (zh) | 2005-06-22 |
Family
ID=34154524
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 03135134 Expired - Fee Related CN1206922C (zh) | 2003-06-03 | 2003-06-03 | 一种防治植物寄生线虫的生防制剂 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1206922C (zh) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100401900C (zh) * | 2005-03-16 | 2008-07-16 | 云南大学 | 一种杀线虫生物菌剂及其制备方法和应用 |
CN1311750C (zh) * | 2006-02-14 | 2007-04-25 | 云南大学 | 一种活性发酵液及其应用 |
CN104004663B (zh) * | 2014-05-27 | 2017-10-13 | 内蒙古农业大学 | 捕食线虫性真菌生物冻干制剂的制备方法 |
CN104928192A (zh) * | 2015-06-26 | 2015-09-23 | 云南大学 | 一株绿色木霉菌株及其应用 |
-
2003
- 2003-06-03 CN CN 03135134 patent/CN1206922C/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN1476762A (zh) | 2004-02-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106187515B (zh) | 利用食用菌菌渣制作的羊肚菌营养袋及其制备方法 | |
CN101485336A (zh) | 一种防治作物土传病害的木霉菌制剂 | |
CN103396954B (zh) | 一种防控水稻纹枯病的生物防治菌株、生物有机肥及其制备方法 | |
CN114317289B (zh) | 一种草地贪夜蛾球孢白僵菌Bbsfa202007菌株及其应用 | |
CN1806495A (zh) | 利用外来入侵杂草栽培食用菌的方法 | |
CN114717155B (zh) | 一种用于防治党参根腐病的多粘类芽孢杆菌及其应用 | |
CN106399132B (zh) | 一株白囊耙齿菌及其应用 | |
CN109136123A (zh) | 一株线虫生防菌及其应用 | |
CN108409479B (zh) | 杀线虫微生物有机肥及其制备方法和应用 | |
EP0401560A1 (en) | Antibacterial, anti-nematode and/or plant-cell activating composition, and chitinolytic microorganisms for producing the same | |
CN109749953B (zh) | 蜡样芽孢杆菌、菌剂及其制备方法和应用 | |
CN108641978B (zh) | 一株可防治梨树褐斑病的类芽孢杆菌Lzh-N1及其复合菌剂的应用 | |
CN101558766A (zh) | 防治烟草土传真菌病害的木霉固体颗粒剂及其制备方法 | |
CN113831187A (zh) | 一种海洋生物有机肥及其制备方法 | |
CN104560740B (zh) | 一株防治油茶象幼虫的金龟子绿僵菌及其应用 | |
CN112063543B (zh) | 一种产脲酶细菌及其在制备用于防治烟草根结线虫病的菌剂中的应用 | |
CN107043711B (zh) | 一株黄绿木霉t-321010菌株及其培养方法与应用 | |
CN111334458B (zh) | 一种生防放线菌及其在生姜茎基腐病或大豆疫病防治方面的应用 | |
CN110791459B (zh) | 一株用于防控连作百合土传枯萎病的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
CN1206922C (zh) | 一种防治植物寄生线虫的生防制剂 | |
CN102242066B (zh) | 一种顶孢霉菌株及顶孢霉菌可湿性粉剂 | |
CN1045043C (zh) | 塑料袋代用料地栽黑木耳菌种及培养方法 | |
CN101849478B (zh) | 一种墨汁鬼伞及其栽培方法 | |
CN110499254A (zh) | 一种抗盐碱赭曲霉菌株w1及其菌剂和应用 | |
CN1225172C (zh) | 一种大批量生产生物除草剂的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
C19 | Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |