CN1198141C

CN1198141C - 酱油中乙酰丙酸的测定方法

Info

Publication number: CN1198141C
Application number: CN 02156446
Authority: CN
Inventors: 董胜利; 徐开生; 吴鸣; 司京成; 王之琳; 白燕; 杨桂菊; 赵伟; 梁斌
Original assignee: BEIJING FOOD-MAKING INSTITUTE
Current assignee: BEIJING FOOD-MAKING INSTITUTE
Priority date: 2002-12-16
Filing date: 2002-12-16
Publication date: 2005-04-20
Anticipated expiration: 2022-12-16
Also published as: CN1419122A

Abstract

本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法涉及检化验技术领域。包括带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行检测、以内标法定量。配制双溶液在设定仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获相对表现系数。样品经处理获样品提取液加内标物获混合液、经浓缩获浓缩液，浓缩液在设定仪器条件下经仪器检测后获内标物波峰、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰。据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。用于酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的检测。方法科学、稳定、可靠，结果直观、准确、有效。可在酿造酱油、配制酱油区分中应用推广。

Description

酱油中乙酰丙酸的测定方法

技术领域

本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，涉及检化验测定技术领域。

背景技术

在酱油调味品生产企业中，过去只生产发酵酱油，在发酵酱油中不存在无机酸，同时发酵酱油的高温生产条件几乎不生成乙酰丙酸(果糖酸)。所以，酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定从分析技术到测定结果都是一项空白。随着GB18186-2000酿造酱油、SB10336-2000配制酱油、SB10338-2000酸水解植物蛋白调味液等一系列调味品的国家最新标准的颁布，在产品标签上必须明示酿造酱油或配制酱油的要求，以及严令禁止在酱油中添加酸水解动物蛋白调味液政令的执行；如何按照国家最新标准有效地区分各种酱油调味品产品，是一直没有解决的技术问题。申请人就是在长期研究试验基础上，寻找到乙酰丙酸(果糖酸)是区分各种酱油调味品的敏感指标，从而也试验研究成功了酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法。申请人通过从中国重大科技成果数据库(STAC)、中国科技成果数据库(CSTAD)、中国专利数据库(PATENT)、中国学术会议论文数据库(CAPC)、中文科技期刊篇名数据库(PSTP)、中国学位论文数据库(CDDB)、全国科技成果交易信息数据库(NDSTRTI)、中国新产品库(XCP)、中国95-96重要成果数据库(ZYCG)、中国科技论文统计数据库(CSTP)、中国科技论文引文分析数据库(CSTY)、98-99年国家科技奖励项目初评结果库(CP98，CP99)、国家级授奖项目库(SJXMK)、火炬项目库(HJJH)、中国机械工程文摘数据库(JLXIE)、中国化工文摘数据库(HGWZ)、中国农业科技文献数据库(NY)、中国畜牧文献库(XUMU)、中国粮油食品科技文献库(LS)、中国科研机构数据库(CSI)、中国企业公司及产品数据库(CECDB)、百万商务(CBM)、中国高新技术企业数据库(CNHEDB)等进行检索查新，均未检出与本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法相关的文献资料以及相关的专利文献资料。目前，国内外尚无与本发明相近似的研究项目报告。

发明内容

本发明的目的是提供一种酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法。通过这种方法：

1、根据国家最新颁布的GB 18186-2000酿造酱油、SB10336-2000配制酱油、SB10338-2000酸水解植物蛋白调味液等调味品标准，以乙酰丙酸(果糖酸)这一敏感指标，作为区分上述三类调味品的直观、准确、行之有效的技术依据。

2、根据必须在调味品产品标签上明示酿造酱油或配制酱油的要求，应用本发明对产品标签上未作出明示的调味品进行有效地区分，从而在有效的规范市场前提下，促进企业的公平竞争及行业的健康发展。

3、根据严禁在酱油中添加酸水解动物蛋白调味液的政令，应用本发明对市场上的调味品进行监督检验、打击假冒伪劣，有效地保护消费者的合法利益，保护人民群众的身心健康。

本发明可达到预期的目的。

为实现上述目的，本发明所提供的技术方案为：一种酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，包括气相色谱内标法的用带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行检测，以内标法进行定量，配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数，样品经样品处理后获得样品提取液，在样品提取液中加入配制内标物获得混合液，混合液经浓缩后获得浓缩液，浓缩液在设定的仪器条件下进行仪器检测后获得内标物波峰、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。

所述配制双溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得B液，分别由A液2毫升与B液5毫升、A液3毫升与B液4毫升、A液4毫升与B液3毫升、A液5毫升与B液2毫升、A液6毫升与B液1毫升混匀获得五种配比的配制双溶液，所述配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数是将五种配比的配制双溶液依次在设定的仪器条件下进行仪器检测后依次分别获得A液、B液各五个波峰，依次分别获得A液、B液各五个波峰面积，依次分别以同组A液波峰面积比B液波峰面积的五个比值作为纵坐标，依次分别以同组的A液容积比B液容积的五个比值作为横坐标，在坐标上依次找出同组A、B液波峰面积比与同组A、B液容积比的五个交汇点，将五个交汇点连线而制定标准曲线，制定出标准曲线后计算出标准曲线的斜率，标准曲线斜率的计算就是相对表现系数的计算，其计算公式为：

或

从而获得相对表现系数。

所述配制内标物是由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容后而获得的配制内标物。

所述样品为酿造酱油、或配制酱油、或酸水解植物蛋白调味液、或酸水解动物蛋白调味液，所述样品处理是取样品10毫升滴入数滴浓盐酸调PH值为1至2，再加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，重复两次加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，将上述三次提取的混合萃取液合并获得样品提取液，所述混合液是在样品提取液中加入1毫升配制内标物而获得混合液，所述浓缩液是在漏斗中塞入在棉球、并在棉球上放有无水硫酸钠、而后使混合液通过漏斗后、置于40℃±2℃条件下浓缩至2毫升而获得的浓缩液。

所述配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测，仪器检测所使用的仪器是带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪，仪器条件是气相色谱仪的载气为高纯氮气、分流毛细管柱的分流比为1∶100、压力为411894Pa，气相色谱仪带有的氢火焰离子化检测器的检测温度为270℃、氢气压力为58842Pa、空气压力为58842Pa，所述仪器检测的检测过程是取配制双溶液、或浓缩液1微升进样，仪器在一分钟内升至120℃的初始温度，仪器以每分钟升8℃的速度继续连续升温，仪器升温至230℃时维持4分钟再自动降温至120℃的初始温度，重复对每个配制双溶液、或浓缩液的检测，当仪器温度从120℃升至190℃时配制双溶液中的B液、浓缩液中的配制内标物溶液出波峰，当仪器温度从120℃升至210℃时配制双溶液中的A液、浓缩液中的乙酰丙酸(果糖酸)出波峰。

所述根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的计算公式为：

样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝

从而获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。

由于采用了本发明的技术方案，使得本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法具有如下有益效果：

1、由于本发明研究设置的配制双溶液在所设置的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数，以及样品、样品处理、样品提取液加配制内标物、混合液、浓缩液在设定的仪器条件下进行仪器检测，根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量等一套完整的科学方法。从而获得了填补酱油中乙酰丙酸(果糖酸)测定方法空白的有益效果；同时获得了方法稳定可靠、再现性强、便于推广应用、可作为国家标准经批准后予以颁布执行的有益效果。

2、由于本发明所设置的样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量，是酿造酱油、配制酱油、酸水解植物蛋白调味液、酸水解动物蛋白调味液中的敏感指标，从而获得了可直观、准确、有效区分上述各种产品的有益效果；同时，还获得了规范市场、促使企业公平竞争、促进行业健康发展、打击假冒伪劣、保护消费者利益、保证人民群众身心健康的有益效果。

说明书附图

图1为本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法的操作流程窗口示意图；以图中所示，在使用虚线箭头时，双虚线箭头断开而不用；以图中所示，在使用双虚线箭头时，虚线箭头断开而不用。

图2为本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法的仪器测定的波峰图图谱；该图是波峰图图谱之一，是波峰图图谱中的例图。

图3为本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法的标准曲线图；该图是标准曲线图之一，是标准曲线图中的例图。

具体实施方式

下面结合说明书附图，对本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法作详细描述，正如说明书附图所示：一种酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，包括气相色谱内标法的用带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行检测，以内标法进行定量，配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数，样品经样品处理后获得样品提取液，在样品提取液中加入配制内标物获得混合液，混合液经浓缩后获得浓缩液，浓缩液在设定的仪器条件下进行仪器检测后获得内标物波峰、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。

所述配制双溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得B液，分别由A液2毫升与B液5毫升、A液3毫升与B液4毫升、A液4毫升与B液3毫升、A液5毫升与B液2毫升、A液6毫升与B液1毫升混匀获得五种配比的配制双溶液，所述配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数是将五种配比的配制双溶液依次在设定的仪器条件下进行仪器检测后依次分别获得A液、B液各五个波峰，依次分别得出A液、B液各五个波峰面积，依次分别以同组A液波峰面积比B液波峰面积的五个比值作为纵坐标，依次分别以同组的A液容积比B液容积的五个比值作为横坐标，在坐标上依次找出同组A、B液波峰面积比与同组A、B液容积比的五个交汇点，将五个交汇点连线而制定标准曲线，制定出标准曲线后计算出标准曲线的斜率，标准曲线斜率的计算就是相对表现系数的计算，其计算公式为：

或

从而获得相对表现系数。

样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝

从而获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。

实施例1

正如说明书附图1所示，采用气相色谱内标法。用带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行检测，以内标法进行定量。仪器条件是：气相色谱仪的载气为高纯氮气、分流毛细管柱的分流比为1∶100、压力为411900Pa，气相色谱仪带有的氢火焰离子化检测器的检测温度为270℃、氢气压力为58800Pa、空气压力为58800Pa。

实施例2

正如说明书附图1所示，配制双溶液：由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得A液；由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得B液；A液2毫升与B液5毫升获双溶液1、A液3毫升与B液4毫升获双溶液2、A液4毫升与B液3毫升获双溶液3、A液5毫升与B液2毫升获双溶液4、A液6毫升与B液1毫升获双溶液5，共配制五个双溶液。

实施例3

正如说明书附图1所示，配制内标物：由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容而获得配制的内标物。

实施例4

正如说明书附图1所示，取低盐固态发酵酱油10毫升为样品，进行样品处理。即：在样品中加入数滴浓盐酸调PH值为1至2，再加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，再重复两次加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，将上述三次提取的混合萃取液合并而获得样品提取液。在样品提取液中加入1毫升如实施例3所述的内标物而获得混合液。在漏斗中塞入棉球、并在棉球上放有无水硫酸钠、而后使混合液通过漏斗后、置于40℃±2℃条件下浓缩至2毫升，从而获得浓缩液1。

重复上述操作；但不是取低盐固态发酵酱油为样品，而是取高盐稀发酵酱油为样品；从而获得浓缩液2。

重复上述操作；而是取浇淋(固稀)发酵酱油为样品；从而获得浓缩液3。

重复上述操作；而是取以低盐固发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油为样品；从而获得浓缩液4。

重复上述操作；而是取以高盐稀发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油为样品；从而获得浓缩液5。

重复上述操作；而是取以浇淋(固稀)发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油为样品；从而获得浓缩液6。

重复上述操作；而是取以低盐固态发酵酱油、高盐稀发酵酱油、浇淋(固稀)发酵酱油的混合酱油为基料，加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油为样品；从而获得浓缩液7。

重复上述操作；而是取酸水解植物蛋白调味液为样品；从而获得浓缩液8。

重复上述操作；而是取酸水解动物蛋白调味液为样品；从而获得浓缩液9。

实施例5

正如说明书附图1、2、3所示，进行仪器检测：按照实施例1所述的仪器条件，将仪器在一分钟内升至120℃的初始温度。将实施例2所述的双溶液1向仪器进样1微升。使仪器进行程序升温，即：仪器以每分钟8℃的速度连续升温，仪器升温至230℃时维持4分钟后再自动降温至120℃的初始温度。当仪器温度从120℃升至190℃时，双溶液1中的B液(即庚酸)出波峰；当仪器温度从120℃升至210℃时，双溶液1中的A液(即乙酰丙酸)出波峰。

在上述条件下，以双溶液2进样1微升，重复上述操作，获双溶液2中B液、A液波峰。

在上述条件下，以双溶液3进样1微升，重复上述操作，获双溶液3中B液、A液波峰。

在上述条件下，以双溶液4进样1微升，重复上述操作，获双溶液4中B液、A液波峰。

在上述条件下，以双溶液5进样1微升，重复上述操作，获双溶液5中B液、A液波峰。

至此，依次分别获得了双溶液1、2、3、4、5的B、A液波峰。该波峰类似于说明书附图2所示的波峰。

在上述条件下，以浓缩液1进样1微升，重复上述操作，获得浓缩液1中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。该波峰类似于说明书附图2所示意的波峰。

重复浓缩液1的操作，但浓缩液1改为浓缩液2，获得浓缩液2中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液3，获得浓缩液3中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液4，获得浓缩液4中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液5，获得浓缩液5中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液6，获得浓缩液6中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液7，获得浓缩液7中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液8，获得浓缩液8中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

重复浓缩液1的操作；但浓缩液1改为浓缩液9，获得浓缩液9中内标物(庚酸)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰。

实施例6

正如说明书附图1、2、3所示。对9种样品中各自的乙酰丙酸(果糖酸)含量进行计算：

(1)制定标准曲线：以实施例5所述而获得的双溶液1、2、3、4、5中A、B液波峰为基础，获得各自的波峰面积；依次分别以同组的A液波峰面积/B液波峰面积的五个比值为纵坐标。依次分别以同组的A液容积/B液容积的五个比值为横坐标。在坐标上依次找出同组A、B液波峰面积比值与同组A、B液容积比值的五个交汇点，将五个交汇点连线而制定出标准曲线。该标准曲线类似于说明书附图3所示的标准曲线图。

根据以上所述，得出：

双溶液1的A液(乙酰丙酸)波峰面积为1212，双溶液1的B液(庚酸)波峰面积为4988，二者的比值为0.2430；

双溶液2的A液(乙酰丙酸)波峰面积为1550；双溶液2的B液(庚酸)波峰面积为3456，二者的比值为0.4485；

双溶液3的A液(乙酰丙酸)波峰面积为2148，双溶液3的B液(庚酸)波峰面积为2697，二者的比值为0.7964；

双溶液4的A液(乙酰丙酸)波峰面积为3016，双溶液4的B液(庚酸)波峰面积为1983，二者的比值为1.5209；

双溶液5的A液(乙酰丙酸)波峰面积为3567，双溶液5的B液(庚酸)波峰面积为1004，二者的比值为3.5528；

至此，在双溶液1、2、3、4、5中A、B液的波峰面积基础上，分别得出双溶液1、2、3、4、5中A、B液波峰面积的比值，根据这五个比值，制定出标准曲线的纵坐标。

根据以上所述，得出：

双溶液1的A液(乙酰丙酸)容积为2，双溶液1的B液(庚酸)容积为5，二者的比值为0.4；

双溶液2的A液(乙酰丙酸)容积为3，双溶液1的B液(庚酸)容积为4，二者的比值为0.75；

双溶液3的A液(乙酰丙酸)容积为4，双溶液3的B液(庚酸)容积为3，二者的比值为1.33；

双溶液4的A液(乙酰丙酸)容积为5，双溶液4的B液(庚酸)容积为2，二者的比值为2.5；

双溶液5的A液(乙酰丙酸)容积为6，双溶液5的B液(庚酸)容积为1，二者的比值为6；

至此，在双溶液1、2、3、4、5中A、B液的容积基础上，分别得出双溶液1、2、3、4、5中A、B液容积的比值，根据这五个比值，制定出标准曲线的横坐标。

通过标准曲线的纵坐标和横坐标，点出双溶液1的A、B液波峰面积比值0.2430与双溶液1的A、B液容积比值0.4的交汇点，依次点出双溶液2的A、B液波峰面积比值0.4585与双溶液1的A、B液容积比值0.75的交汇点，点出双溶液3的A、B波峰面积比值0.7965与双溶液3的A、B液容积比值1.33的交汇点，点出双溶液4的A、B液波峰面积比值1.5209与双溶液4的A、B液容积比值2.5的交汇点，点出双溶液5的A、B液波峰面积比值3.5528与双溶液5的A、B容积比值6的交汇点。

至此，在座标中获得五个交汇点，将五个交汇点连线而制定出标准曲线。该标准曲线类似于说明书附图3的标准曲线。

(2)、计算出相对表现系数：制定出标准曲线后，计算出标准曲线斜率，标准曲线斜率的计算就是相对表现系数的计算，其计算公式为：

或

按上述第一公式计算，即：将(1)中所述的有关数据代入第一公式，从而得出：

A、将双溶液1的有关数据代入公式：

B、将双溶液2的有关数据代入公式：

C、将双溶液3的有关数据代入公式：

D、将双溶液4的有关数据代入公式：

E、将双溶液5的有关数据代入公式：

至此，通过五个双溶液的有关数据分别代入第一公式计算，均得出了标准曲线的斜率为0.6，从而也就得出了相对表现系数为0.6；同样，将五个双溶液的有关数据分别代入第二公式计算，也得出了相对表现系数为0.6的结果。

(3)、样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的计算：根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积，计算样品中乙酰丙酸(果糖酸)的含量，计算公式为：

样品中乙酰丙酸(果糖酸)的含量(g/100ml)＝

均以已知的相对表现系数为0.6、内标物(庚酸)浓度为0.5依次代入公式，那么：

再将获得的浓缩液1中内标物(庚酸)的波峰面积7256、低盐固态发酵酱油样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰面积276代入公式，从而获得：

低盐固态发酵酱油中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝

\frac{276}{0.6} \times \frac{0.5}{7256} \div 10 = 0.003;

再将获得的浓缩液2中的内标物(庚酸)的波峰面积6567、高盐稀发酵酱油样品中乙酰丙酸(果糖酸)的波峰面积71代入公式，从而获得高盐稀发酵酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.009g/100ml；

以此类推，再将浓缩液3中的内标物波峰面积2091、样品中乙酰丙酸波峰面积109代入公式，从而获得浇淋(固稀)发酵酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.004g/100ml；

以此类推，再将浓缩液4中的内标物波峰面积4157、样品中乙酰丙酸波峰面积5480代入公式，从而获得以低盐固态发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.11g/100ml；

以此类推，再将浓缩液5中的内标物波峰面积2279、样品中乙酰丙酸波峰面积6592代入公式，从而获得以高盐固态发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.24g/100ml；

以此类推，再将浓缩液6中的内标物波峰面积1846、样品中乙酰丙酸波峰面积3190代入公式，从而获得以浇淋(固稀)发酵酱油为基料加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.14g/100ml；

以此类推，再将浓缩液7中的内标物波峰面积3343、样品中乙酰丙酸波峰面积7320代入公式，从而获得以低盐固态发酵酱油、高盐稀发发酵酱油、浇淋(固稀)发酵酱油的混合酱油为基料，加入酸水解植物蛋白调味液而制作的配制酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为0.18g/100ml；

以此类推，再将浓缩液8中的内标物波峰面积7594、样品中乙酰丙酸波峰面积124991代入公式，从而获得酸水解植物蛋白调味液中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为1.37g/100ml；

以此类推，再将浓缩液9中的内标物波峰面积380、样品中乙酰丙酸波峰面积6351代入公式，从而获得酸水解动物蛋白调味液中乙酰丙酸(果糖酸)的含量为1.39g/100ml；

至此，九种样品中的乙酰丙酸(果糖酸)含量均已测出。

应用本发明，对诸多样品进行检测，均收到了预期的良好效果。

通过对多批诸多样品的检测，通过对事先加入定量的乙酰丙酸(果糖酸)样品进行验证性检测，均收到了预期的良好效果，同时验证了两个问题：

1、本方法精确、稳定、直观、快速、有效、可操作性强。

2、酱油中乙酰丙酸(果糖酸)是区分酿造酱油、配制酱油、酸水解液(含植物蛋白酸水解液与动物蛋白水解液)的敏感指标。因为凡乙酰丙酸(果糖酸)含量在0.01g/100ml以下时均为酿造酱油、含量在0.01g/100ml以上时均为配制酱油，这样就对酿造酱油、配制酱油进行了明确有效地区分；同时，酸水解植物蛋白调味液、酸水解动物蛋白调味液均存在一种固有的味道而不可能直接上市；从而可起到静化市场、促使企业公平竞争、促进行业健康发展、保护消费者合法利益的良好作用。

实施例7

本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法评价试验：

1、精密度(平行性试验)：

抽取具有代表性的样品2份，No.1，No.2(No.1：酱油；No.2：酸水解植物蛋白液)，分别进行8次平行处理分析，并依据下列计算公式计算其标准偏差和变异系数，结果列于表一。

S = \sqrt{\frac{Σ {(x - \bar{x})}^{2}}{n - 1}}

CV = \frac{S}{\bar{X}} \times 100 %

S：标准偏差

X：任何一次测定结果

X：n次测定结果的平均值

CV：差异系数

表一：平行性试验结果(三次测定的平均值)

由表中数据可以看出，两组平行的变异系数分别为3.97％、1.73％，说明该方法有良好的平行性和稳定性。

2、准确性(回收率试验)：

取酱油样品一式3份，分别做回收试验，结果列于下表二。

表二：回收率试验结果(三次测定平均值)

注：加标量：添加内标准溶液的量为1毫升；相当于乙酰丙酸(果糖酸)0.4586克，其浓度为0.04586％。样品回收率94-97％，平均回收率为94.91％。

综上所述，通过精密度(平行性试验)和准确性(回收率试验)试验可以看出，本发明酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法具有良好的平行性、稳定性、准确性。

Claims

1、一种酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，包括气相色谱内标法的用带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行检测，以内标法进行定量，其特征在于：配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数，样品经样品处理后获得样品提取液，在样品提取液中加入配制内标物获得混合液，混合液经浓缩后获得浓缩液，浓缩液在设定的仪器条件下进行仪器检测后获得内标物波峰、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰，根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。

2、根据权利要求1所述的酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，其特征在于：所述配制双溶液是由0.5毫升乙酰丙酸(果糖酸)溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得A液，由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容获得B液，分别由A液2毫升与B液5毫升、A液3毫升与B液4毫升、A液4毫升与B液3毫升、A液5毫升与B液2毫升、A液6毫升与B液1毫升混匀获得五种配比的配制双溶液，所述配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测后制定标准曲线而获得相对表现系数是将五种配比的配制双溶液依次在设定的仪器条件下进行仪器检测后依次分别获得A液、B液各五个波峰，依次分别得出A液、B液各五个波峰面积，依次分别以同组A液波峰面积比B液波峰面积的五个比值作为纵坐标，依次分别以同组的A液容积比B液容积的五个比值作为横坐标，在坐标上依次找出同组A、B液波峰面积比与同组A、B液容积比的五个交汇点，将五个交汇点连线而制定标准曲线，制定出标准曲线后计算出标准曲线的斜率，标准曲线斜率的计算就是相对表现系数的计算，其计算公式为：

或

从而获得相对表现系数。

3、根据权利要求1所述的酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，其特征在于：所述配制内标物是由0.5毫升庚酸溶液加99.5毫升乙腈溶液经定容后而获得的配制内标物。

4、根据权利要求1所述的酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，其特征在于：所述样品为酿造酱油、或配制酱油、或酸水解植物蛋白调味液、或酸水解动物蛋白调味液，所述样品处理是取样品10毫升滴入数滴浓盐酸调PH值为1至2，再加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，重复两次加入乙醚振摇后使其分层并提取样品与乙醚的混合萃取液，将上述三次提取的混合萃取液合并获得样品提取液，所述混合液是在样品提取液中加入1毫升配制内标物而获得混合液，所述浓缩液是在漏斗中塞入在棉球、并在棉球上放有无水硫酸钠、而后使混合液通过漏斗后、置于40℃±2℃条件下浓缩至2毫升而获得的浓缩液。

5根据权利要求1所述的酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，其特征在于：所述配制双溶液在设定的仪器条件下进行仪器检测，仪器检测所使用的仪器是带有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪，仪器条件是气相色谱仪的载气为高纯氮气、分流毛细管柱的分流比为1∶100、压力为411894Pa，气相色谱仪带有的氢火焰离子化检测器的检测温度为270℃、氢气压力为58842Pa、空气压力为58842Pa，所述仪器检测的检测过程是取配制双溶液、或浓缩液1微升进样，仪器在一分钟内升至120℃的初始温度，仪器以每分钟升8℃的速度继续连续升温，仪器升温至230℃时维持4分钟再自动降温至120℃的初始温度，重复对每个配制双溶液、或浓缩液的检测，当仪器温度从120℃升至190℃时配制双溶液中的B液、浓缩液中的配制内标物溶液出波峰，当仪器温度从120℃升至210℃时配制双溶液中的A液、浓缩液中的乙酰丙酸(果糖酸)出波峰。

6、根据权利要求1所述的酱油中乙酰丙酸(果糖酸)的测定方法，其特征在于：所述根据相对表现系数、浓缩液中乙酰丙酸(果糖酸)波峰面积、内标物浓度、内标物波峰面积经计算获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量的计算公式为：

样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量(g/100ml)＝

从而获得样品中乙酰丙酸(果糖酸)含量。