CN1191262C - 老鹳草总黄酮提取物及其在制备抗病毒药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属中药领域,涉及一种抗病毒的药物,具体涉及老鹳草总黄酮提取物及其在制备抗病毒药物中的用途。经体内外试验,证实本发明对疱疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制作用。本发明老鹳草总黄酮提取物及其提取物有效组分槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖加入辅料可制成胶囊,片剂,颗粒和针剂等剂型,用于临床治疗病毒性肝炎、病毒性流感、疱疹病毒和艾滋病毒感染。
Description
技术领域
本发明属中药领域,涉及一种抗病毒的药物,具体涉及老鹳草总黄酮提取物及其在制备抗病毒药物中的用途。
背景技术:
中草药老鹳草包括长嘴、短嘴和野老鹳草,其主要成分为鞣质、有机酸、挥发油和黄酮类等,主要功能和主治为祛风湿、痛经络、止泻痢,用于治疗风湿痹痛、麻木拘挛、筋骨酸痛、泄泻痢疾等。目前,其常用制剂为老鹳草软膏。90年代前认为老鹳草属少常用药,近年来对老鹳草的研究报导较多。1997年国外曾有报导从老鹳草(Geranium Sanguineum L)的根中分离提取抗感染活性物质,含有类黄酮儿茶素、鞣酸和羧酸类的复合物,该复合物在体外能抑制多种病毒也能抑制金葡菌、白色念珠菌的生长等作用。
1995年苏州中医学研究所报导直接采用老鹳草水煎剂治疗慢性乙型肝炎,结果认为老鹳草中含有的鞣质具有很强的抗氧化作用和抗过氧化脂质体的作用,在抑制血清和肝脏中过氧化脂质的上升中抑制了其对肝细胞的损害。但没有涉及到对乙肝病毒的抑制。
综观国内外的报导,均未见老鹳草(Gerancium carolinianum L)的干燥地上部分的总黄酮提取物其药物及抗病毒药效。
发明内容
本发明的目的是提供老鹳草总黄酮及其在制备抗病毒药物中的新用途。
本发明的进一步目的是提供老鹳草总黄酮提取物及其制备抗病毒药物中的新用途。
本发明从我国产的pang牛儿苗科植物老鹳草(Gerancium carolinianumL)的干燥地上部分(药材中文名称:老鹳草,拉丁文名Herba Geranii)分离提取得到总黄酮提取物,其主要组分为槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。
所述老鹳草总黄酮提取物经体外细胞模型和体内动物模型试验后,证实其具有很强的抗病毒活性。
本发明通过下述方法进行,
1、提取老鹳草总黄酮:
用50%酒精提取中药材老鹳草,浓缩提取液至1/4-1/5体积,上D101大孔树脂,用水和70%酒精洗脱,收集洗脱液,经镁粉/盐酸检测验证,收集黄酮含量高的部分,洗脱液浓缩至干得固形物即有效部位产物,称重且测定总黄酮,有效部位产物收率达1%以上,总黄酮含量超过50%。
2.老鹳草总黄酮提取物主要化学组分结构鉴定:
经质谱和13C、1H测定,证实本发明老鹳草总黄酮提取物的主要化学成分为槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖,其化学结构如下:
3,老鹳草总黄酮提取物用于抗乙型肝炎病毒、流行型感冒病毒、疱疹病毒和艾滋病毒试验。经体外细胞试验,证实老鹳草总黄酮对疱疹病毒、流感病毒、乙肝病毒及艾滋病毒均有抑制。
1)采用流感病毒MDCK细胞,A3毒株(购于上海市卫生防疫站)按卫生部新药临床前药理指南规定的方法进行测试,结果为:
Ic50=200μg/ml Ec50=50μg/ml TI=4
2)采用单纯疱疹病毒vero细胞:HSV-1毒株Sm44,(由中国医学科学院生物医药研究所提供)按卫生部新药临床前药理指南规定的方法进行测试,结果为:
Ic50=200μg/ml Ec50=25μg/ml TI=8
3)抗乙肝病毒试验
体外试验
按卫生部新药临床前药理指南规定,采用HepG22.215细胞,对药物的抗乙肝病毒作用进行测试,结果表明老鹳草总黄酮对HBsAg和HbeAg均有抑制。
表1是不同浓度老鹳草总黄酮对HBsAg和HBeAg的抑制。
表2是不同时间50μg/ml的老鹳草总黄酮对抗原的抑制。
表1
100μg/ml 50μg/ml 25μg/ml
抑制HBsAg(%) 70 52 41
抑制HBeAg(%) 51 43 38
表2
天 3 6 9 12
HBsAg(%) 43.4 48.2 58.3 33.3
HBeAg(%) 48.4 54.35 41.5 25.6
抗乙肝病毒体内试验:
按卫生部新药临床前药理指南规定,采用北京芙蓉鸭作为乙肝新药的动物模型,给药10天,结果证明老鹳草总黄酮提取物对鸭乙肝病毒有抑制作用。
表3是老鹳草总黄酮提取物对鸭乙肝病毒抑制作用。
表3
剂量(克/公斤) 天 DHBVsAg的抑制(%)
3(以生药计) 5 29.4
10 51.0
13 35.1
1.5(以生药计) 5 22.0
10 42.6
13 21.7
拉米呋定(50毫克/公斤) 5 52.2
10 29.8
13 4.2
实验结束取出试验鸭肝脏,做电镜检测,未见因乙肝病毒感染而引起的肝坏死,结果证实口服老鹳草总黄酮后,对鸭乙肝病毒感染引起的肝损伤有明显的保护作用。
4).艾滋病毒:
采用pBMC细胞,取50μg/ml的老鹳草总黄酮提取物对5株HIV毒株进行试验,结果表明老鹳草总黄酮提取物抑制HIV P24达85-96%。
本发明老鹳草总黄酮经检测表明其中含有槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷的组分,由于在肝脏上有半乳糖的受体,因此采用野老鹳草总黄酮作为药物,无疑会被肝脏很好吸收,达到良好的药效。本发明老鹳草总黄酮提取物及其提取物有效组分槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖加入辅料可制成胶囊,片剂,颗粒和针剂等剂型,用于临床治疗病毒性肝炎、病毒性流感、疱疹病毒和艾滋病毒感染。
附图说明
图1是鸭乙肝病毒感染后,鸭肝脏细胞的照片(鸭肝脏细胞核出现坏死)。
图2是正常鸭肝细胞照片。
图3是老鹳草总黄酮给药后鸭肝脏细胞的照片。
图4是拉米呋定给药后鸭肝脏细胞的照片
具体实施方式
实施例1
取300克我国产的pang牛儿苗科植物老鹳草(Geranciumcarolinianum L)的干燥地上部分生药材,用50%酒精提取三次,浓缩提取液至1/4-1/5体积,上D101大孔树脂,用水和70%酒精洗脱,收集洗脱液,经镁粉/盐酸检测验证,收集黄酮含量高的部分,洗脱液浓缩至干得固形物有效部位产物,称重,测定总黄酮,有效部位产物收率达1%以上,总黄酮含量超过50%。表4是老鹳草总黄酮收率及含量。
表4
批号 1 2 3 平均
产物产量(克) 3.36 3.61 4.30 3.76
总黄酮量(克) 2.28 1.95 3.30 2.51
产物收率% 1.12 1.20 1.43 1.25
总黄酮含量% 67.9 54.0 76.7 66.7
实施例2
取老鹳草总黄酮提取物50克,粉碎过100目筛,加入淀粉3克混合均匀,再加入10%淀粉浆适量制成软材,20目筛网制粒,60-70℃干燥,过30目筛整粒,加入羟丙基纤维素3克和硬脂酸镁1克充分混匀,压片,薄膜包衣,即得片剂1000片。每片含总黄酮提取物50mg。
实施例3
取老鹳草总黄酮提取物50克,粉碎过100目筛,加入淀粉3克,微晶纤维适量,用稀乙醇制粒,20目筛网制粒,60-70℃干燥,整粒,加入硬脂酸镁适量,充分混匀,填入胶囊即得,1000粒,
实施例4
取老鹳草总黄酮提取物30克,粉碎过100目筛,加入淀粉300克加入10%淀粉浆适量制成颗粒,60-70℃干燥,分装200袋。
实施例5
取老鹳草总黄酮提取物50克,加适量注射用水,加热溶解,再加入0.5%活性炭充分搅拌,煮沸20分钟,过滤,冷却至室温,冷库过夜,加注射用水至1000ml,用碳酸氢钠调节PH至7,过滤除菌,灌装,封口,灭菌即得注射剂。规格调2ml,10ml,100ml。
Claims (5)
2、权利要求1的野老鹳草总黄酮提取物在制备抗乙肝病毒药物中的用途。
3、权利要求1的野老鹳草总黄酮提取物在制备抗疱疹病毒药物中的用途。
4、权利要求1的野老鹳草总黄酮提取物在制备抗流感病毒药物中的用途。
5、权利要求1的野老鹳草总黄酮提取物在制备抗艾滋病毒药物中的用途。
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