CN118373900A - 一种重组xvii型胶原蛋白、重组细胞及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种重组XVII型胶原蛋白、重组细胞及其应用，涉及生物工程技术领域。本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白来自传统的三螺旋结构的G‑X‑Y结构区，由构成胶原蛋白的3条肽链的胶原域拼接而成，不含非胶原域。与现有的止血用的明胶海绵相比，本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白具有更优的促凝效果，具有止血速度更快，止血效果好的优势。本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白可以在常用表达系统，特别是毕赤酵母工程菌中表达生产，表达量高且无内毒素隐患。本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白制备方法适于工业化大规模生产，无动物来源的感染源，因此生物安全性更高。

Description

一种重组XVII型胶原蛋白、重组细胞及其应用

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体而言，涉及一种重组XVII型胶原蛋白、重组细胞及其应用。

背景技术

胶原蛋白是一种重要的结构蛋白，是许多生物体体内最丰富的蛋白质之一。胶原蛋白的主要功能是提供机体的结构支撑，维持组织的稳定性和弹性。在组织和器官中，胶原蛋白主要存在于骨骼、关节、肌肉、皮肤、血管、角膜等组织中。此外，胶原蛋白还能作为一种信号分子参与调节细胞的增殖、分化和迁移，对于维持正常的生理功能和机体的整体健康具有重要的作用。

随着基因工程技术的发展，人们开始尝试通过重组DNA技术来制备胶原蛋白。通过基因工程技术，可以将目标基因插入到表达载体中，并在表达宿主中表达目标蛋白质。这一阶段的研究取得了重要进展，使得胶原蛋白的体外重组成为可能。

XⅦ型胶原蛋白(COL17)，是一种含有1497个氨基酸的跨膜蛋白，其N端位于细胞质中，C端位于细胞外基质中。COL17在细胞外基质中有15个胶原结构域，并且表位在紧密排列的非胶原第16A(NC16A)结构域内紧密排列。胶原蛋白是生物体内含量最高的蛋白质，是细胞外间质的主要成份，它具有抗原性低、组织亲合力大、与血小板产生血凝作用等特点。

现有专利CN202111082088.2公开了一种重组XⅦ型人源化胶原蛋白及其制备方法和用途，该专利开发的重组XⅦ型人源化胶原蛋白C1L1T具有促进毛发增长的作用，具有良好的生物黏附活性，但其在其他方面的功能鲜有报道。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种重组XVII型胶原蛋白、重组细胞及其应用以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明提供了一种重组人源XVII型胶原蛋白，其氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列如下：

GPPGPPGAMG PPGPPGAPGP AGPAGLPGHQ GPPGPPGPRG

PPGPSIPGPP GPRGPPGEGG PPGPPGSFGP PGPPGPPGPK

GDQGPPGPRG HQGEQGLPGF SGPPGPPGPQ GPKGDKGDPG

VPGALGIPGP PGPPGPPGPP GSIGPPGPPG PPGPVGPPGP

PGASGDGGLP GPPGPPGLPG TSGPPGPPGP PGIPGNVGPP

GPPGPPGPRG PPGVSGALGP PGPPGPQGPP GDS。

本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白来自传统的三螺旋结构的G-X-Y结构区，由构成胶原蛋白的3条肽链的胶原域拼接而成，不含非胶原域。不包含胶原区的C-端、N-端的氨基酸序列，免疫原性小，生物安全性高。与现有的止血用的明胶海绵相比，本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白具有更优的促凝效果，具有止血速度更快，止血效果好的优势。本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白可以在常用表达系统，特别是毕赤酵母工程菌中表达生产，表达量高且无内毒素隐患。

第二方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其编码上述的重组人源XVII型胶原蛋白。

术语“编码重组人源XVII型胶原蛋白的核酸分子”可以是包括编码本发明重组人源XVII型胶原蛋白的多核苷酸，也可以是还包括附加编码和/或非编码序列的多核苷酸。

在本发明提供了上述氨基酸序列的情况下，本领域技术人员根据密码子的简并性容易获得编码上述重组人源XVII型胶原蛋白的核酸序列。

本发明多核苷酸全长序列通常可以通过PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(或如载体)和细胞中。此外，还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。

应用PCR技术扩增DNA/RNA的方法被优选用于获得本发明的多核苷酸。特别是很难从文库中得到全长的cDNA时，可优选使用RACE法(RACE-cDNA末端快速扩增法)，用于PCR的引物可根据本文所公开的本发明的序列信息适当地选择，并可用常规方法合成。可用常规方法如通过凝胶电泳分离和纯化扩增的DNA/RNA片段。

在一种可选的实施方式中，核酸分子选自DNA、RNA、或其组合。

第三方面，本发明提供了一种表达盒，其包括上述的核酸分子。

在本发明应用较佳的实施方式中，表达盒还包括启动子和终止子。启动子用于启动上述核酸分子的转录，终止子用于终止上述核酸分子的转录。本领域熟知的用于细菌表达载体启动子、真菌表达载体启动子均可行。

第四方面，本发明提供了一种载体，其包括上述的核酸分子或包括上述的表达盒。

载体包括不限于表达载体、穿梭载体和整合载体。

术语“表达载体”指本领域熟知的细菌质粒、酵母质粒或其他载体。只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

在本发明应用较佳的实施方式中，载体为细菌载体、真菌载体或昆虫载体。

用载体转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

在一种可选的实施方式中，表达载体还包括信号肽，例如核定位信号肽等。

第五方面，本发明提供了一种重组细胞或重组菌，其包括上述的载体；

在本发明应用较佳的实施方式中，重组细胞或重组菌选自细菌、真菌或昆虫细胞。

昆虫细胞例如选自昆虫卵巢细胞(如Sf9细胞等)。

在本发明应用较佳的实施方式中，细菌为农杆菌、分枝杆菌、链霉菌、大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。

在本发明应用较佳的实施方式中，真菌为里氏木霉或酵母菌。

上述重组细胞包括转化体和转化细胞，其包括原代转化细胞和源自其的后代，不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。

里氏木霉是一种美国FDA认证的食品级安全菌株，该菌株作为生产菌株不会产生类似大肠杆菌生成的内毒素；相比于酿酒酵母发酵，里氏木霉的发酵过程不会大量产热，降低降温设备投入成本；相比于大型真菌，里氏木霉发酵周期较短。

在本发明应用较佳的实施方式中，酵母菌选自以下属中的至少一种：德克酵母属、酒香酵母属、有孢汉逊酵母属、克氏酵母属、毕赤酵母属(Pichia)、假丝酵母属、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、Kazachstania、Wickerhamomyces、Lindnera、Zygotorulaspora、接合酵母属(Zygosaccharomyces)和裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)。

在本发明应用较佳的实施方式中，昆虫细胞为昆虫卵巢细胞。

上述重组菌(或基因工程菌)，由通过本领域常规方法将重组表达载体转化至宿主微生物中制得；宿主微生物可为本领域常规的各种宿主微生物，只要能满足重组表达载体可稳定地自行复制，且所携带的重组人源XVII型胶原蛋白的编码基因可被有效表达即可。

在本发明应用较佳的实施方式中，重组菌是指重组菌的休止细胞、重组菌的活细胞、重组菌的死菌和重组菌的细胞破碎物中的至少一种。

休止细胞，也称为静息细胞，是一种特殊的细胞状态。在这种状态下，细胞不进行生长繁殖，但仍含有各种酶系，并具有氧化和发酵能力。在适宜的条件下，休止细胞可以重新恢复生长。休止细胞的特点包括：a.细胞保持生长潜力：尽管处于休眠状态，但在给予适当刺激时，这些细胞可以重新进入细胞周期并恢复增殖能力。b.专一性强：休止细胞在反应中的专一性较强，可以提高底物转化率。c.不易染杂菌：由于其特性，休止细胞在使用过程中可以减少产物对菌体生长及酶合成的抑制。

重组菌的死菌包括不限于通过热、压力、辐射等方式灭活后获得的菌。

细胞破碎物是指：包括不限于通过超声、机械、化学、生物等方式使得细胞膜通透性改变，致使细胞内容物外泄，由此获得细胞破碎物。

在本发明应用较佳的实施方式中，死菌选自死菌的沉淀物和死菌的无细胞上清中的至少一种。死菌的无细胞上清是指去除死菌体外壳，剩余的“渗出内容物”。

第六方面，本发明提供了一种生产上述的重组人源XVII型胶原蛋白的方法，培养上述的重组细胞或重组菌。

本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白制备方法适于工业化大规模生产，无动物来源的感染源，因此生物安全性更高。

在本发明应用较佳的实施方式中，对重组细胞或重组菌的培养物进行分离纯化。

在上面的方法中的重组人源XVII型胶原蛋白可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、色谱层析、离子交换层析、疏水层析、酸碱沉淀、膜分离、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

具体的培养条件如下:当重组细胞为毕赤酵母时，将毕赤酵母基因工程菌接种于YPD培养基中，于30℃，220rpm条件下培养22-24h，至OD₆₀₀＝18-20作为上罐种子液，将种子液扩培后按10％接种量接入初始体积为5L的NBS 415发酵罐中，培养温度为28-30℃，pH＝5.0-6.0，溶氧控制在20％-30％，待甘油耗尽，开始进入甘油补料培养，至菌体湿重达到200g/L以上时，开始进行诱导培养。

对于表达方式，本发明不作任何限制，其可以根据需要进行自适应调整，例如表达为诱导表达，对于诱导表达，其诱导剂为甲醇。

在一个具体的实施方式中，流加甲醇进行诱导培养，诱导阶段温度为28℃，pH为5.0，诱导48h放罐。

第七方面，本发明提供了重组人源XVII型胶原蛋白或上述的重组细胞或重组菌在制备组织工程材料或医疗器械中的应用。

在本发明应用的实施方式中，组织工程材料选自皮下填充剂、人工皮肤、骨植入剂和胶原蛋白海绵中的任意一种。

皮下填充剂：是指能够注射到人体皮下，来增加面部或身体部位的体积和弹性，达到美容的效果的一类试剂。

骨植入剂包括不限于缓释骨植入剂，用于诸如下肢骨、锁骨、牙槽骨等骨的植入，用于骨缺损修复。

胶原蛋白海绵呈网状结构具有良好的透气性，能够促进肉芽组织生长、加速伤口愈合。可用于创面治疗与修复。其中的胶原蛋白具有典型的甘—X—Y结构(X、Y分别代表脯氨酸和羟基脯氨酸)，其中主要为羟基脯氨酸，而羟基脯氨酸是人体中一种起修复作用的氨基酸。

在本发明应用较佳的实施方式中，医疗器械选自血管支架、细胞间质支架、合成的人造血管、心脏瓣膜、血管修补筛、起搏器、起搏器导子、除纤颤器、PFO隔膜封闭器械、血管夹、动脉血管瘤闭锁器、血液透析移植物、血液透析导管、大动脉血管瘤移植物器械、静脉瓣、血管接合夹、留置式动脉导管、气道支架、血管护鞘、胆道支架、尿道支架、消化道支架、喉气管支架、泪道支架(如泪道修复支架)、植发支架、隆胸支架、药物洗脱支架、流体递送支架、胆胰管支架、耳咽管支架、直肠支架、结肠支架、肛管支架、神经支架、晶状体支架、巩膜支架、脊髓支架、面部支架、埋植线、提拉线中的一种或多种的组合。

此外，医疗器械包括不限于：金属支架、金属笼、线圈支架等形式；气道支架包括不限于气管支架。腔道支架、插管支架等。

第八方面，本发明提供了一种组织工程材料或医疗器械，其包括上述的重组人源XVII型胶原蛋白或上述的重组细胞或重组菌。

在本发明应用较佳的实施方式中，组织工程材料选自皮下填充剂、人工皮肤、骨植入剂和胶原蛋白海绵中的任意一种；

在本发明应用较佳的实施方式中，组织工程材料为胶原蛋白海绵时，胶原蛋白海绵由重组人源XVII型胶原蛋白与交联剂进行交联，冻干制得。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白来自传统的三螺旋结构的G-X-Y结构区，由构成胶原蛋白的3条肽链的胶原域拼接而成，不含非胶原域。不包含胶原区的C-端、N-端的氨基酸序列，免疫原性小，生物安全性高。与现有的止血用的明胶海绵相比，本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白具有更优的促凝效果，具有止血速度更快，止血效果好的优势。本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白可以在常用表达系统，特别是毕赤酵母工程菌中表达生产，表达量高且无内毒素隐患。

本发明提供的重组人源XVII型胶原蛋白制备方法适于工业化大规模生产，无动物来源的感染源，因此生物安全性更高。可广泛应用于生物材料、医药、医疗器械等领域。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为实施例1的表达重组人XVII型胶原蛋白的毕赤酵母工程菌的构建过程的图；

图2为实施例1中纯化得到的重组人XVII型胶原蛋白的SDS-PAGE电泳图。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。

除非另外指明，否则实践本发明将采用细胞生物学、分子生物学(包含重组技术)、微生物学、生物化学和免疫学的常规技术，所述常规技术在本领域技术人员的能力范围内。文献中充分解释了这种技术，如《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratoryManual)》，第二版(Sambrook等人，1989)；《寡核苷酸合成(OligonucleotideSynthesis)》(M.J.Gait编，1984)；《动物细胞培养(Animal Cell Culture)》(R.I.Freshney编，1987)；《酶学方法(Methods inEnzymology)》(学术出版社有限公司(Academic Press，Inc.)；《实验免疫学手册(Handbook of Experimental Immunology)》(D.M.Weir和C.C.Blackwell编)；《哺乳动物细胞用基因转移载体(Gene TransferVectors forMammalian Cells)》(J.M.Miller和M.P.Calos编，1987)；《当代分子生物学方法(CurrentProtocols in Molecular Biology)》(F.M.Ausubel等人编，1987)；《PCR:聚合酶链反应(PCR:ThePolymerase Chain Reaction)》(Mullis等人编，1994)；以及《当代免疫学方法(Current Protocols in Immunology)》(J.E.Coligan等人编，1991)，所述文献中的每个文献均通过引用明确并入本文中。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供了重组人源XVII型胶原蛋白的表达。

化学合成重组人XVII型胶原蛋白基因。合成时在5’端和3’分别加入EcoRI和NotI识别位点和信号肽识别位点，经限制性内切酶SacI线性化后克隆至表达载体pPICZaA(HG-VJI0296，Invitrogen)中，以毕赤酵母X33为表达宿主菌，通过电转化将获得的pPICzaA-XVII克隆质粒线性化后转化到X33中。以博来霉素梯度法挑选高拷贝阳性克隆，30.0℃下培养72h得到毕赤酵母基因工程菌。该毕赤酵母工程菌的表达载体图参照图1所示。

将上述得到的毕赤酵母基因工程菌接种于YPD培养基，培养至OD₆₀₀＝25±3时，按10％接种量接入初始体积为5L的NBS 415发酵罐中，培养温度为30℃、pH＝5.5、OD控制在30-32.5，待甘油耗尽，开始进入甘油补料培养，至菌体湿重达到200g/L以上时，开始流加甲醇进行诱导培养，诱导阶段温度为28℃，p为5.0，诱导48h放罐，离心收集上清液。将上清液进行BCA试剂盒(23227，赛默飞)检测蛋白浓度，检测结果如表1所示。检测结果显示重组人XVII型胶原蛋的蛋白含量为22.85g/L。

表1重组人XVII型胶原蛋发酵结束后的检测结果

	XVII型胶原蛋白
		诱导48h后的BCA结果g/L	22.85

离心收集的粗蛋白上清液中加入终浓度为60％的NaCl，搅拌溶解后常温下静置3h，10000rpm离心10min后收集上清液。将收集的上清液经10KD超滤膜浓缩脱盐。

将浓缩脱盐后的蛋白上清液用磷酸调整pH至6.5，阳离子交换树脂上样，通过0.5MNaCl洗脱后获得目标蛋白；

将收集的目标蛋白溶液经10KD超滤膜脱盐后，然后置于-20℃冰箱预冻5h，然后转入真空冷冻干燥机中进行冻干，48h后收集冻干后蛋白，即为重组人源XVII型胶原蛋白。将纯化得到的重组人XVII型胶原蛋白进行SDS-PAGE电泳，电泳结果图参照图2所示，图2中XVII型胶原蛋白的3个泳道指代：XVII型胶原蛋白的3个重复。

实施例2

本实施例进行重组人源XVII型胶原蛋白在止血方面的功效试验。

1.复合型胶原蛋白海绵的制备：将实施例1制备的重组人XVII型胶原蛋白，配制成5％的胶原水溶液，加入0.03％戊二醛25℃交联24h，-20℃冰箱预冻5h，然后转入真空冷冻干燥机中进行冻干，48h后将冻干后的样品用PBS清洗，清洗后再次冷冻干燥后形成重组人源XVII型胶原蛋白海绵。

2.实验动物：新西兰大白兔，体重约为1.5kg，雌雄不限每组5只。

具体步骤：将兔子麻醉后，退兔耳处兔毛，消毒后用75％酒精脱碘。固定兔子，用手术刀在兔耳中央动脉处创口，用纱布吸收流出血液后，迅速用1×1×0.5cm重组人源XVII型胶原海绵敷于创面，用20g砝码垂直敷压，同时立即计时，每隔20s观察伤口是否渗血，无渗血后停止计时，得止血时间。对照组为医用胶原蛋白海绵(贝迪生物，型号为圆柱型：Φ10x25)，实验室空白组为无纺纱布。

表2几种材料的止血时间比较

从表2中结果可以看出，重组人XVII型胶原蛋白海绵的止血时间是2.4min，医用胶原蛋海绵的平均止血时间2.8min，纱布的止血时间大于10min。观察止血结束后兔耳形成的伤口可知，空白组的血凝块主要存在于血管内部，表面只有残留的血渍，这表明纱布的止血主要是通过伤口压迫实现。重组人XVII型胶原蛋白海绵和医用胶原蛋海绵在伤口处均起到了堵塞作用，但其形成的血凝块状态不同，医用胶原蛋海绵还是鲜红色，说明血凝块主要在血管内部形成，而重组人XVII型胶原蛋白海绵明显形成了黑红色的血凝块，说明其能够促进吸收的血液的凝固，在体外形成血凝块。这一结果进一步说明，相较于市售的医用胶原蛋海绵，重组人XVII型胶原蛋白海绵具有更好的促凝效果。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种重组人源XVII型胶原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码权利要求1所述的重组人源XVII型胶原蛋白。

3.一种表达盒，其特征在于，其包括权利要求2所述的核酸分子；

优选地，所述表达盒还包括启动子和终止子。

4.一种载体，其特征在于，其包括权利要求2所述的核酸分子或包括权利要求3所述的表达盒。

5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述载体为细菌载体、真菌载体或昆虫载体。

6.一种重组细胞或重组菌，其特征在于，其包括权利要求4-5任一项所述的载体；

优选地，所述重组细胞或重组菌选自细菌、真菌或昆虫细胞；

优选地，所述细菌为农杆菌、分枝杆菌、链霉菌、大肠杆菌或枯草芽孢杆菌；

优选地，所述真菌为里氏木霉或酵母菌；

优选地，所述酵母菌选自以下属中的至少一种：德克酵母属、酒香酵母属、有孢汉逊酵母属、克氏酵母属、毕赤酵母属(Pichia)、假丝酵母属、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、德巴利氏酵母属(Debaryomyces)、Kazachstania、Wickerhamomyces、Lindnera、Zygotorulaspora、接合酵母属(Zygosaccharomyces)和裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)；

优选地，所述昆虫细胞为昆虫卵巢细胞；

优选地，所述重组菌是指所述重组菌的休止细胞、所述重组菌的活细胞、所述重组菌的死菌和所述重组菌的细胞破碎物中的至少一种；

优选地，所述死菌选自所述死菌的沉淀物和所述死菌的无细胞上清中的至少一种。

7.一种生产权利要求1所述的重组人源XVII型胶原蛋白的方法，其特征在于，培养权利要求6所述的重组细胞或重组菌。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，对所述重组细胞或重组菌的培养物进行分离纯化。

9.如权利要求1所述的重组人源XVII型胶原蛋白或权利要求6所述的重组细胞或重组菌在制备组织工程材料或医疗器械中的应用；

优选地，所述组织工程材料选自皮下填充剂、人工皮肤、骨植入剂和胶原蛋白海绵中的任意一种；

优选地，医疗器械选自血管支架、细胞间质支架、合成的人造血管、心脏瓣膜、血管修补筛、起搏器、起搏器导子、除纤颤器、PFO隔膜封闭器械、血管夹、动脉血管瘤闭锁器、血液透析移植物、血液透析导管、大动脉血管瘤移植物器械、静脉瓣、血管接合夹、留置式动脉导管、气道支架、血管护鞘、胆道支架、尿道支架、消化道支架、喉气管支架、泪道支架、植发支架、隆胸支架、药物洗脱支架、流体递送支架、胆胰管支架、耳咽管支架、直肠支架、结肠支架、肛管支架、神经支架、晶状体支架、巩膜支架、脊髓支架、面部支架、埋植线、提拉线中的一种或多种的组合。

10.一种组织工程材料或医疗器械，其特征在于，其包括权利要求1所述的重组人源XVII型胶原蛋白或权利要求6所述的重组细胞或重组菌；

优选地，所述组织工程材料选自皮下填充剂、人工皮肤、骨植入剂和胶原蛋白海绵中的任意一种；

优选地，所述组织工程材料为胶原蛋白海绵时，所述胶原蛋白海绵由所述重组人源XVII型胶原蛋白与交联剂进行交联，冻干制得。