CN118217179B - 一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物及其制备方法与应用，旨在提供一种能够增强DPPH自由基和羟基自由基清除能力，增强胶原蛋白分泌能力，具有补水保湿功效，并且能够通过抑制弹性蛋白酶活性来减缓弹性蛋白降解，具有良好的抗皱紧致功效的组合物；其技术方案包含A组分1～10 wt%，B组分5～10 wt%，C组分0.1～3 wt%，D组分3～10 wt%；余量为E组分；所述的A组分为玫瑰复合多肽；所述的B组分为玫瑰复合多糖；所述的C组分为玫瑰复合多酚；所述的D组分为羟丙基四氢吡喃三醇；所述的E组分为溶剂及防腐剂体系；属于化妆品技术领域。

Description

一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明公开了一种组合物，具体地说，是一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，本发明还公开该含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物的制备方法与应用。
背景技术
随着年龄的增长，皮肤主要受到外源性因素（紫外线、空气污染、温度、生活习惯等）和内源性因素（遗传或激素等）的影响，从而逐渐衰老。皮肤缺水、松弛、出现皱纹是人体衰老最明显的表现之一。
内源性因素是皮肤衰老过程中不可避免的因素。与皱纹最相关的是皮肤真皮层的细胞外基质，它可以赋予皮肤强度和弹性，若细胞外基质的机械结构被破坏，会使皮肤出现皱纹、松弛、缺少紧致与弹性等问题。在分子或细胞层面，过多的活性氧（ROS）会引发一系列细胞信号转导，进而产生更多的炎症因子以及基质金属蛋白酶（MMPs），使得细胞外基质降解，从而出现皱纹。
与内源性因素相比，外源性因素在一定程度上是可以避免的。在日常生活中，紫外线辐射和生活方式是导致人们皮肤产生皱纹的主要因素。随着年龄的增长和紫外线等外界环境的刺激，皮肤中的弹性蛋白和胶原蛋白不断流失，具体表现为角质层变薄、皮肤暗沉、缺水干燥、产生皱纹、肌肤再生能力减弱等。人体在发生氧化反应时，会产生大量自由基，过剩的自由基会攻击健康的细胞，加速细胞死亡，破坏胶原蛋白和弹性纤维。同时，弹性蛋白下降会导致皮肤表面缺少弹性，自身修复能力减弱，皮肤屏障衰退，进一步使皮肤的锁水和保湿能力减弱。因此，对于抗衰产品的研究开发已经成为研究热点。然而，当前市场上的抗皱紧致产品多为合成肽类产品，其抗皱通路单一，且长期使用安全性未知。
玫瑰是集药用、食用、美化、绿化于一体的木本植物，历代本草均有记载。玫瑰花中含有多种化学成分，包括黄酮类、多酚类、多糖类以及蛋白质等，具备抗氧化、降血糖、抗肿瘤、抑菌等功效。目前，玫瑰花在药食与日用化妆品行业具有重要的开发利用价值，包括作为天然食用色素；调节女性的生理问题，改善内分泌紊乱，使气血通畅，具有美容养颜、延缓衰老的作用；因其独特的芬芳还可以作为护肤精油或饮料原料。另外，研究证实，玫瑰花提取物具有良好的抗氧化作用，但并未明确其活性成分，因此，其在抗衰抗皱方向上具有较好的应用前景。
比如：CN105796406A中涉及的是一种祛除皱纹的玫瑰组合物，主要包含玫瑰精油0.5～1份、芦荟提取物20～25份、黄芪提取物15～25份。CN111374900A中涉及的是一款具有补水保湿、增强皮肤弹性功效的玫瑰花色素苷护肤鲜花水，主要包括90～92 wt%玫瑰花色素苷浓缩液5～10份、芦荟提取物2～5份、银耳多糖0.5～3份、蜂蜜1～3份、维生素C 0.5～1份、维生素E 0.5～1份、柠檬榨汁液0.5～1份、甜菜碱0.5～1份、透明质酸0.1～0.5份、苯氧乙醇/乙基己基甘油0.1～0.5份、白桦树汁2～5份、黄原胶0.1～0.5份、玫瑰鲜花液85～90份。其中玫瑰花色素苷浓缩液的制备工艺为以60 wt%酸性乙醇（pH = 1）为提取剂，在料液比1:10～12 wt%，温度为50～52℃条件下，对玫瑰花干花进行提取2～2.5 h，重复提取3次，微滤膜过滤，合并滤液，真空浓缩得90～92 wt%玫瑰花色素苷浓缩液。CN106821847A涉及的是一款以苦水玫瑰纯露和枸杞浸取物为活性成分，具有保湿、延缓皮肤衰老、增强皮肤弹性及抗皱功效的天然有机化妆品。CN111909791A涉及的是一种玫瑰精油的制备方法，即玫瑰花瓣清洗沥干，并置于-25～-5℃温度下冷冻处理1～3 h，冷冻后加入去离子水，并于80～100℃温度下缓慢溶化至玫瑰花瓣软化。以上申请主要采用玫瑰精油、玫瑰水或某一单一活性成分，从清除DPPH自由基和羟基自由基的抗氧化通路进行抗衰祛皱，存在抗皱通路单一、功效成分不明确或功效成分单一的问题，并不能从最大程度上解决皮肤皱纹、松弛等皮肤老化问题。同时，目前市场上的玫瑰功效成分制备工艺无法将各类成分逐一纯化分离，导致其功效成分不明确，在应用上具有局限性。
但是，当前市场上的玫瑰护肤产品多为玫瑰精油、玫瑰水或某一单一活性成分，存在功效成分不明确或功效成分单一的问题，并且，玫瑰功效成分制备工艺无法将各类功效成分逐一纯化分离，导致其在应用上功效成分不明确。
发明内容
针对上述问题，本发明的第一个目的是提供一种能够增强DPPH自由基和羟基自由基清除能力，增强胶原蛋白分泌能力，具有补水保湿功效，并且能够通过抑制弹性蛋白酶活性来减缓弹性蛋白降解，具有良好的抗皱紧致功效的组合物。
本发明的第二个目的是提供一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物的制备方法。
一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，按照含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物总质量100%计，包含以下组分及其含量：A组分1～10 wt%，B组分5～10 wt%，C组分0.1～3 wt%，D组分3～10 wt%；余量为E组分；
所述的A组分为玫瑰复合多肽；
所述的B组分为玫瑰复合多糖；
所述的C组分为玫瑰复合多酚；
所述的D组分为羟丙基四氢吡喃三醇；
所述的E组分为溶剂及防腐剂体系。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，按照含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物总质量100%计，所述的溶剂及防腐剂体系中各个组分及其含量如下：丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂0.7～1 wt%，余量为去离子水。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，所述的防腐剂为对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，所述的A组分玫瑰复合多肽、B组分玫瑰复合多糖、C组分玫瑰复合多酚通过下述步骤分别制备得：
1）药材准备：称取干燥玫瑰花瓣45份、甜瓜果25份、野大豆籽10份和珊瑚藻10份，粉碎，过筛，混匀，保存备用；
2）提取：称取步骤1）药材粉末置于离心管中，加入20～50倍去离子水，浸泡1.5～2h，加入纤维素酶4.5～5 wt%和果胶酶0.1～0.5 wt%进行酶解，酶解温度为45～50℃，酶解时间为1～3 h；超声辅助提取，过滤除渣；收集提取物液，将收集的提取液升温至85～95℃灭菌10～20 min，离心分离收集上清液，抽滤过滤膜，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，得到粗提物；
3）纯化：取步骤2）粗提物，采用大孔树脂柱层析法对粗提物进行分离纯化，上样流速为1～2 mL/min，洗脱剂为去离子水和50～60 wt%乙醇溶液，去离子水用量为3～5 BV，50～60 wt%乙醇溶液用量为4～6 BV，洗脱流速均为1.5～2.5 mL/min，分别收集上样废液、去离子水洗脱液和50～60 wt%乙醇溶液洗脱液；将50～60 wt%乙醇溶液洗脱液浓缩至无醇味，并置于-18℃预冷4～5 h，再置于-80℃速冻1～2 h，最后迅速放入冷冻干燥器内升华干燥24～36 h，得到C组分玫瑰复合多酚；
4）二次纯化：将步骤3）上样废液和去离子水洗脱液进行合并，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，再用磷酸缓冲溶液调节pH至6~7，电场强度为15～18 kV/cm，脉冲数为6～8，酶添加量为2.5～3 wt%，酶解温度为40～45℃，酶解时间为1～3 h；在6000 r/min条件下离心10～15 min，收集上清液，抽滤除杂，选用截留分子质量为1 ku的超滤膜对上清液进行超滤分级，操作压力为0.2～0.25 MPa，操作温度为35～45℃，得到分子质量＜1 ku的多肽；将超滤截留液浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，加入4倍量的无水乙醇，在4℃下放置12～24 h，在4000 r/min条件下离心15～20 min，收集沉淀，得到多糖；将超滤得到的多肽和沉淀得到的多糖进行浓缩，并置于-18℃预冷4～5 h，再置于-80℃速冻1～2 h，最后放入冷冻干燥器内升华干燥24～36 h，分别得到A组分玫瑰复合多肽和B组分玫瑰复合多糖。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，步骤2）所述超声辅助提取为在500～600 W条件下超声5～10 min/次。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，步骤2）所述的离心是在4000 r/min条件下离心15～30 min。
进一步的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，步骤2）所述的滤膜孔径为0.45 μm。
本发明提供的第二个技术方案是这样的，上述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物的制备方法，依次包括下述步骤：
1）按照第一个技术方案所述的重量百分含量称取A组分，B组分，C组分，D组分和E组分；
2）将步骤1）称取的A组分、B组分、C组分、D组分分散于部分去离子水中，再加入丁二醇和1,2-戊二醇助溶，再加入防腐剂，升温至50℃，搅拌15～20 min，混匀至澄清透明，补充剩余去离子水，过滤膜，得到的含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物。
本发明提供的第三个技术方案是上述的含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物作为制备化妆品的添加剂的应用。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下优点：
1、本发明提供的技术方案主要依托天然植物成分，采用多种玫瑰复合成分进行组合，各组分之间存在协同增效作用，从补水保湿、清除自由基、增加胶原蛋白分泌、减少胶原蛋白降解多个通路对抗皱、紧致护肤品进行开发；从肌肤根源出发，抑制ROS的产生，增加皮肤胶原蛋白的分泌，解决紫外线损伤带来的细胞老化、皮肤松弛、衰老等问题，是作为皮肤长期护理的优先选择。
2、本发明提供的抗皱紧致功效组合物中含有玫瑰复合多肽、玫瑰复合多糖、玫瑰复合多酚和羟丙基四氢吡喃三醇；其中玫瑰复合多肽具有补水保湿、抗氧化、抑制胶原酶活性等功效；玫瑰复合多糖具有补水保湿和抗氧化等功效；玫瑰复合多酚具有抗氧化，抑制透明质酸酶、弹性蛋白酶的基因表达和活性，提高糖胺聚糖（GAG）水平，刺激胶原蛋白合成，光保护等功效；羟丙基四氢吡喃三醇能促进GAG合成，帮助保持疏松结缔组织中的水分，补水保湿功效显著；同时可以间接增加真皮胶原产生，达到促进真皮修复、改善皮肤弹性和增加皮肤紧致度的作用；还能够促进真皮层细胞加速生产IV型、VII型胶原蛋白，加强真皮表皮连接，使GAG填充在IV型胶原蛋白的网络中，改善因年龄增长出现的皮肤松弛现象，进而减轻皱纹。
3、本发明提供的技术方案中，采用超声辅助酶解法对玫瑰花、野大豆籽、甜瓜果和珊瑚藻中的活性成分进行提取，接着采用大孔树脂柱层析法和高压脉冲电场辅助胰蛋白酶法进行纯化得到多种玫瑰复合成分；该提取纯化方法具有绿色环保、提取纯化效率高、对活性物的富集效果好、操作简单、耗时短、成本低，在市场上将具有更好的应用价值。
总而言之，本发明提供的技术方案能够增强DPPH自由基和羟基自由基清除能力，增强胶原蛋白分泌能力，具有补水保湿功效，并且能够通过抑制弹性蛋白酶活性来减缓弹性蛋白降解，从肌肤根源出发，多通路更大程度地解决皮肤衰老问题，达到良好的抗皱紧致效果。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和技术效果，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本发明提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽10 wt%，B组分玫瑰复合多糖5 wt%，C组分玫瑰复合多酚2 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇6 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水56 wt%。
实施例2
本发明提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽1 wt%，B组分玫瑰复合多糖10 wt%，C组分玫瑰复合多酚2 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇6 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水60 wt%。
实施例3
本发明提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽5 wt%，B组分玫瑰复合多糖7 wt%，C组分玫瑰复合多酚0.1 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇10 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水56.9 wt%。
实施例4
本发明提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽5 wt%，B组分玫瑰复合多糖7 wt%，C组分玫瑰复合多酚3 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇3 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水61 wt%
实施例1～4中所述的含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，所述的A组分玫瑰复合多肽、B组分玫瑰复合多糖、C组分玫瑰复合多酚通过下述步骤分别制备得：
1）药材准备：称取干燥玫瑰花瓣45g、甜瓜果25g、野大豆籽10g和珊瑚藻10g，粉碎，过筛，混匀，保存备用；
2）提取：称取步骤1）药材粉末置于离心管中，加入30质量倍去离子水，浸泡2 h，加入纤维素酶4.5 wt%和果胶酶0.3wt%进行酶解，酶解温度为45℃，酶解时间为2h。并以超声，在600 W条件下超声辅助提取10 min/次，共3次，过滤除渣。将反应好的提取液升温至90℃灭菌15 min，并在4000 r/min条件下离心25 min，收集上清液，抽滤过0.45 μm滤膜，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，得到粗提物；
3）纯化：取步骤2）粗提物，采用大孔树脂柱层析法对粗提物进行分离纯化，上样流速为2 mL/min，洗脱剂为去离子水和55 wt%乙醇溶液，去离子水用量为4 BV，55 wt%乙醇溶液用量为5 BV，洗脱流速均为2 mL/min，分别收集上样废液、去离子水洗脱液和55 wt%乙醇溶液洗脱液。将55 wt%乙醇溶液洗脱液浓缩至无醇味，并置于-18℃预冷4.5 h，再置于-80℃速冻1.5 h，最后迅速放入冷冻干燥器内升华干燥30 h，得到C组分玫瑰复合多酚；
4）二次纯化：将步骤3）上样废液和去离子水洗脱液进行合并，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，再用磷酸缓冲溶液调节pH至6~7。先采用高压脉冲电场辅助胰蛋白酶法制备多肽，电场强度为18 kV/cm，脉冲数为7，酶添加量为3 wt%，酶解温度为40℃，酶解时间为2 h。在6000 r/min条件下离心12 min，收集上清液，抽滤除杂。选用截留分子质量为1 ku的超滤膜对上清液进行超滤分级，操作压力为0.2 MPa，操作温度为40℃，得到分子质量＜1 ku的多肽；并且，收集超滤截留液，将上述超滤截留液浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，加入4倍量的无水乙醇，在4℃下放置18 h，在4000 r/min条件下离心15 min，收集沉淀，得到多糖。将上述超滤得到的多肽和沉淀得到的多糖进行浓缩，并置于-18℃预冷5 h，再置于-80℃速冻1.5 h，最后迅速放入冷冻干燥器内升华干燥30 h，分别得到A组分玫瑰复合多肽和B组分玫瑰复合多糖。
实施例1～4所述的含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物通过下述方法制备得：
按照实施例1～4所述的重量比称取各个组分，将A组分，B组分，C组分，D组分分散于50 g去离子水中，用丁二醇和1,2-戊二醇助溶，再加入剩余防腐剂，升温至50℃，300 rpm下搅拌18 min，混匀至澄清透明，用去离子水补充至100 g，过0.45 μm滤膜，得到组合物。
实施例5
实施例1按照合计量添加进入如下空白基质配方，转化为10 wt%含量的抗皱紧致精华液。
具体包括下述质量百分比的组分：卡波姆0.02%，丁二醇5%，1,3-丙二醇5%，甘油5%，实施例1提供的含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物10%，碱性中和剂三乙醇胺0.05%，肤感调节剂蓝丝美肤剂5%，防腐剂苯氧乙醇0.5%，余量为去离子水。
制备工艺：乳化锅中加入水，开启搅拌形成漩涡后，加入卡波姆，均质分散均匀后，加入丁二醇、1,3-丙二醇和甘油，搅拌加热至80～85℃，加入含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，调节pH至澄清，保温10～15 min，待溶解完全，降温至45～50℃，加入碱性中和剂、肤感调节剂、耐低温的防腐剂，搅拌10～15 min，混合均匀，即可过滤出料。
对比例1
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽10 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水69 wt%。
对比例2
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：B组分玫瑰复合多糖10 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水69 wt%。
对比例3
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：C组分玫瑰复合多酚3 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水76 wt%。
对比例4
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：D组分羟丙基四氢吡喃三醇10 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水69wt%。
对比例5
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：B组分玫瑰复合多糖5 wt%，C组分玫瑰复合多酚3 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇6wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水65 wt%。
对比例6
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽5 wt%，C组分玫瑰复合多酚0.1 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇10wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水63.9 wt%。
对比例7
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽10 wt%，B组分玫瑰复合多糖7 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇3wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水59 wt%。
对比例8
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽1 wt%，B组分玫瑰复合多糖10 wt%，C组分玫瑰复合多酚2 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水66 wt%。
对比例9
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽20 wt%，B组分玫瑰复合多糖1 wt%，C组分玫瑰复合多酚2 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇6 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水50 wt%。
对比例10
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽5 wt%，B组分玫瑰复合多糖7 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇20wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水47 wt%。
对比例11
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽10 wt%，B组分玫瑰复合多糖20 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇3wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水46 wt%。
对比例12
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽1 wt%，B组分玫瑰复合多糖5 wt%，C组分玫瑰复合多酚10 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇1 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水62 wt%。
对比例13
本案例提供的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物，包括下述重量百分比的组分：A组分玫瑰复合多肽和B组分玫瑰复合多糖15 wt%，C组分玫瑰复合多酚2 wt%，D组分羟丙基四氢吡喃三醇6 wt%，丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂1 wt%（对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种），去离子水56 wt%。
本对比例所述的含玫瑰多肽具有抗皱紧致的组合物制备工艺如下：
1）药材准备：称取干燥玫瑰花瓣45份、甜瓜果25份、野大豆籽10份和珊瑚藻10份，粉碎，过筛，混匀，保存备用；
2）提取：称取药材粉末置于离心管中，加入30倍去离子水，浸泡2 h，搅拌提取45min，过滤除渣，在4000 r/min条件下离心25 min，收集上清液，抽滤过0.45 μm滤膜，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，得到粗提物；
3）纯化：采用大孔树脂柱层析法对粗提物进行分离纯化，上样流速为2 mL/min，洗脱剂为去离子水和55 wt%乙醇溶液，去离子水用量为4 BV，55 wt%乙醇溶液用量为5 BV，洗脱流速均为2 mL/min，分别收集上样废液、去离子水洗脱液和55 wt%乙醇溶液洗脱液。将55wt%乙醇溶液洗脱液浓缩至无醇味，并置于-18℃预冷4.5 h，再置于-80℃速冻2 h，最后迅速放入冷冻干燥器内升华干燥30 h，得到C组分；将上样废液和去离子水洗脱液进行合并，按同样的冷冻干燥工艺制得A、B组分混合物。
为了证明本申请提供的技术方案的优点，下面给出实施例1～4，对比例1～13提供的各个组合物的检测试验数据。
1、本申请提供的提取纯化工艺与对比例13提供的工艺制备的组合物各个检测数据如表1所述。
表1 两种工艺制得的组合物对比情况
采用工艺 组合物色泽 60℃耐热稳定性 5℃耐寒稳定性 组合物中的总蛋白、总多糖、总多酚质量浓度（g/100 g） pH值 电导率（μS/cm）
实施例1提供的工艺 透亮浅黄色 稳定 稳定 总蛋白1.604、总多糖0.979、总多酚0.896 5.6 102.1
对比例13提供的工艺 深棕色 不稳定，颜色变深 不稳定，有油状物析出 总蛋白1.021、总多糖0.264、总多酚0.568 5.4 5118.9
结果分析：对比例13提供的制备提纯工艺只能制得A、B组分混合物和C组分，而本申请提供的工艺可将A、B、C组分纯化分离制得，使其功效成分明确，且活性成分纯度更高。本申请提供的工艺对应的组合物在60℃耐热和5℃耐寒中稳定性好，便于后续复配和使用添加，而对比例13在60℃耐热稳定性中不稳定，颜色变深，在5℃耐寒中不稳定，有油状物析出，电导率明显升高，表明其杂质成分较多，成分复杂。经复配制得组合物，本申请提供的工艺对应的组合物色泽更浅，更透亮，pH值相当。
2、自由基清除实验（DPPH自由基、羟基自由基清除实验）
机体衰老过程中会产生氧自由基，使细胞造成氧化损害，因此清除自由基能有效修复细胞损伤，延缓衰老，提升机体活力。DPPH是一种稳定的以氮为中心的自由基，在517nm波长处有最大吸收值。DPPH的乙醇溶液呈深紫色，当自由基清除剂加入到DPPH溶液中时，DPPH的单电子被配对而使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光值随之减小。因此，可通过吸光值减弱的程度来判断物质清除DPPH自由基的能力。羟基自由基是另一种高活性氧自由基，具有极强的氧化性，在检测过程中，反应产生羟基自由基后，会对底物的结构、性质、颜色产生较大影响，从而以分光光度计进行检测。
DPPH自由基清除率：将DPPH用无水乙醇配制成适当浓度的DPPH溶液工作液。取2mL待测样品与4 mL DPPH溶液工作液混合，常温避光反应30 min后，用紫外分光光度计检测其517 nm波长的吸光值。
按以下公式计算样品的DPPH·清除率：
DPPH·清除率(%) = [1－(B－C)/A]*100%
A：对照液（无水乙醇代替待测样品）测定的吸光值；B：受试物测定的吸光值；C：试样空白（无水乙醇代替DPPH）测定的吸光值。
羟基自由基清除率：取0.5 mL适当浓度的邻二氮菲无水乙醇溶液于试管中，依次加入1 mL PBS（pH 7.40）和0.5 mL蒸馏水，充分混匀后，加入0.5 mL适当浓度的FeSO4溶液，混匀后加入0.5 mL适当浓度的H2O2溶液，于37 ℃水浴60 min，在536 nm波长处测定其吸光度，即为损伤管吸光度（A损伤）。未损伤管以0.5 mL蒸馏水代替损伤管中的0.5 mL适当浓度的H2O2溶液，操作方法同损伤管，测得536 nm波长处未损伤管的吸光度（A未损伤）。样品管以0.5 mL样品溶液代替损伤管中的0.5 mL蒸馏水，操作方法同损伤管，测得536 nm波长处样品管的吸光度（A样品）。
按以下公式计算样品的·OH清除率：
·OH清除率(%) = [(A样品－A损伤)/(A未损伤－A损伤)]*100%
将各组样品稀释至2%浓度进行自由基清除测试，各组案例的自由基清除率结果参阅表2。
表2 DPPH自由基、羟基自由基清除实验结果
样品 DPPH自由基清除率% 羟基自由基清除率%
实施例1 92.03% 86.38%
实施例2 86.26% 83.21%
实施例3 88.42% 84.64%
实施例4 93.24% 89.45%
对比例1 39.08% 30.14%
对比例2 58.20% 52.94%
对比例3 67.97% 61.28%
对比例4 42.66% 35.39%
对比例5 82.90% 79.02%
对比例6 78.21% 73.55%
对比例7 73.12% 65.50%
对比例8 83.05% 80.32%
对比例9 79.41% 75.29%
对比例10 74.32% 68.97%
对比例11 69.21% 63.62%
对比例12 72.58% 67.09%
对比例13 69.66% 63.98%
结果分析：实施例1～4的DPPH自由基和羟基自由基清除率较高，表明具有较好的抗氧化效果。由对比例1～4可知，对比例3在单一组分中的抗氧化效果最佳，对比例2效果其次，对比例1和4效果最弱，表明B、C组分在组合物中发挥主要的抗氧化作用，且C组分效果比B组分好，A、D组分不是关键的抗氧化成分。由对比例5～8可知，B、C组分在抗氧化作用上能协同增效，比单一组分效果更好。与实施例1～4相比，对比例9～12中存在两个组分超出最优重量份范围，抗氧化效果下降，表明该发明所提供的各组分重量份为最优条件，在此条件内的抗氧化效果最好。同时，对比例13的DPPH自由基和羟基自由基清除率比实施例1低，表明本申请提供的提取纯化工艺比对比例13提供的工艺制得的A、B、C组分纯度更高，抗氧化活性更好。
3、弹性蛋白酶活性抑制实验
实验原理：弹性蛋白酶作为具有极高选择性和专一性的蛋白分解酶，对许多氨基酸如甘氨酸、亮氨酸、丙氨酸等含羟基的多肽键具有催化水解的作用，可以缔结组织蛋白质中的弹性蛋白分解。抑制弹性蛋白酶的活性能有效减慢弹性蛋白的降解速度，减少皮肤衰老、皱纹和光老化的产生。
弹性蛋白酶抑制率的测定：在96孔板中加入90 μL缓冲液、30 μL不同浓度的样品稀释液以及10 μL的底物，混匀后置于25 ℃中孵育20 min。随后加入20 μL弹性蛋白酶溶液孵育10 min，检测吸光度。按以下公式计算样品的弹性蛋白酶抑制率：
弹性蛋白酶抑制率(%) = (对照组-实验组)/对照组×100%
实验结果参阅表3。
表3 弹性蛋白酶活性抑制实验结果
样品 弹性蛋白酶抑制率%（Mean±SD）
实施例1 59.24%±2.13
实施例2 59.05%±3.20
实施例3 60.72%±1.04
实施例4 63.86%±1.75
对比例1 41.92%±0.25
对比例2 23.65%±2.78
对比例3 35.84%±1.29
对比例4 25.06%±3.11
对比例5 45.04%±2.14
对比例6 53.27%±1.77
对比例7 50.14%±1.98
对比例8 54.35%±2.10
对比例9 49.18%±0.95
对比例10 51.20%±1.52
对比例11 51.66%±0.82
对比例12 51.31%±1.59
对比例13 39.21%±2.19
结果分析：实施例1～4的弹性蛋白酶抑制率较高，表明具有较好的减缓弹性蛋白降解效果。由对比例1～4可知，对比例1在单一组分中的减缓弹性蛋白降解效果最佳，对比例3效果其次，对比例2和4效果最弱，表明A、C组分在组合物中发挥主要的减缓弹性蛋白降解效果，且A组分效果比C组分好，B、D组分不是关键的减缓弹性蛋白降解效果成分。由对比例5～8可知，A、C组分在弹性蛋白酶抑制作用上能协同增效，比单一组分效果更好。与实施例1～4相比，对比例9～12中存在两个组分超出最优重量份范围，减缓弹性蛋白降解效果下降，表明该发明所提供的各组分重量份为最优条件，在此条件内的减缓弹性蛋白降解效果最好。同时，对比例13的弹性蛋白酶抑制率比实施例1制备的产品的弹性蛋白酶抑制率低，表明本申请提供的提取纯化工艺比对比例13提供的工艺制得的A、B、C组分纯度更高，减缓弹性蛋白降解效果更好。
4、胶原蛋白分泌实验
紫外线对胶原蛋白的影响主要包括使胶原蛋白损伤、降解和合成受阻。紫外线能够穿透皮肤表层，达到真皮层，并对胶原蛋白进行损伤。这种损伤会导致胶原蛋白的结构发生变化，从而影响其功能。紫外线还会激活皮肤中的酶，这些酶会催化胶原蛋白的分解反应，从而导致胶原蛋白的数量减少。同时，紫外线照射还会抑制胶原蛋白合成的关键基因表达，从而减少胶原蛋白的生成。这些影响最终会导致皮肤失去弹性和光泽，出现皱纹和松弛等光老化问题，因此，可通过检测Ⅰ型胶原评价抗衰老功效。
按照人Ⅰ型胶原酶联免疫检测试剂盒说明书进行样品的测定。测试样品稀释至适当浓度后，滴加到人皮肤成纤维细胞上反应24 h，取细胞培养液上清液，在2～8 ℃，1000×g条件下离心15 min，取上清液立即进行测定。在预先包被了抗体的酶标孔中加入样品或标准品，再加入辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）标记的识别抗原，在37 ℃条件下孵育1 h，两者与固相抗原竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤后，结合的HRP催化四甲基联苯胺（tetramethylbenzidine，TNB）呈蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长处测定吸光度，对照标准曲线来计算样品刺激后细胞的Ⅰ型胶原含量。按以下公式计算样品的Ⅰ型胶原提升率：
Ⅰ型胶原提升率% = (实验组～对照组)/对照组×100%
其结果参阅表4。
表4 胶原蛋白分泌实验结果
样品 Ⅰ型胶原提升率%（Mean±SD）
实施例1 74.79%±2.21
实施例2 74.56%±3.19
实施例3 76.53%±2.29
实施例4 78.78%±3.24
对比例1 33.53%±2.47
对比例2 31.40%±1.35
对比例3 52.17%±1.20
对比例4 60.15%±3.01
对比例5 70.35%±0.79
对比例6 69.12%±1.26
对比例7 64.75%±3.29
对比例8 62.93%±2.25
对比例9 71.81%±3.06
对比例10 63.28%±2.28
对比例11 65.98%±2.68
对比例12 63.56%±1.29
对比例13 67.65%±1.04
结果分析：实施例1～4的Ⅰ型胶原提升率较高，表明具有较好的增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果。由对比例1～4可知，对比例4在单一组分中的增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果最佳，对比例3效果其次，对比例1和对比例2效果最弱，表明C、D组分在组合物中发挥主要的增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果，且D组分效果比C组分好，A、B组分不是发挥增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果的关键成分。由对比例5～8可知，C、D组分在增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果上能协同增效，比单一组分效果更好。与实施例1～4相比，对比例9～12中存在两个组分超出最优重量份范围，增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果下降，表明该发明所提供的各组分重量份为最优条件，在此条件内的增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果最好。同时，对比例13的Ⅰ型胶原提升率比实施例1低，表明本申请提供的提取纯化工艺比对比例13提供的工艺制得的A、B、C组分纯度更高，增强胶原蛋白Ⅰ分泌效果更好。
5、斑马鱼抗皱紧致实验
胶原蛋白是人体皮肤中主要的胞外基质，其中I型胶原蛋白的含量最多。皮肤皱纹的出现与胶原蛋白的正常合成和表达密切相关。斑马鱼具有与人高度保守的调控胶原蛋白的相关基因col1a1a。col1a1a基因的表达量随鱼龄的增长有不同的变化，其中4天的斑马鱼幼鱼中col1a1a基因的表达量相对最高，因此，采用4天的斑马鱼幼鱼作为检测对象，来研究不同成分对col1a1a基因表达的影响。通过检测斑马鱼胶原蛋白基因RNA的相对表达量可以反映样品的抗皱功效。
收集3dpf的A、B系斑马鱼幼鱼40尾，将幼鱼置于6孔板中，每孔20尾幼鱼，用一定浓度的样品对第一个孔的20尾幼鱼进行处理24 h，用标准稀释水对第二个孔的20尾幼鱼进行处理24 h。第二天分别收集所有幼鱼，并用灭菌的养殖水分别清洗幼鱼2次，随后将幼鱼分别转移至做好标记的已灭菌的1.5 mL EP管中，提取斑马鱼RNA，RNA逆转录为cDNA，RT～qPCR检测col1a1a基因在mRNA水平的变化。按以下公式计算斑马鱼col1a1a基因相对表达水平提升率：
斑马鱼col1a1a基因相对表达水平提升率% = (实验组～对照组)/对照组×100%
其结果参阅表5。
表5 斑马鱼抗皱紧致实验结果
样品 斑马鱼col1a1a基因相对表达水平提升率%（Mean±SD）
实施例1 45.33%±3.07
实施例2 45.69%±3.15
实施例3 48.08%±2.46
实施例4 51.82%±1.50
对比例1 9.36%±2.22
对比例2 8.21%±1.85
对比例3 25.82%±1.24
对比例4 32.55%±2.47
对比例5 41.25%±1.97
对比例6 41.52%±2.21
对比例7 37.85%±1.28
对比例8 34.56%±2.67
对比例9 42.73%±1.58
对比例10 36.24%±1.73
对比例11 38.93%±2.75
对比例12 36.18%±1.42
对比例13 35.07%±1.57
结果分析：实施例1～4的斑马鱼col1a1a基因相对表达水平提升率较高，表明具有较好的提高胶原蛋白Ⅰ合成效果。由对比例1～4可知，对比例4在单一组分中的提高胶原蛋白Ⅰ合成效果最佳，对比例3效果其次，对比例1和对比例2效果最弱，表明C、D组分在组合物中发挥主要的提高胶原蛋白Ⅰ合成效果，且D组分效果比C组分好，A、B组分不是发挥提高胶原蛋白Ⅰ合成效果的关键成分。由对比例5～8可知，C、D组分在提高胶原蛋白Ⅰ合成效果上能协同增效，比单一组分效果更好。与实施例1～4相比，对比例9～12中存在两个组分超出最优重量份范围，提高胶原蛋白Ⅰ合成效果下降，表明该发明所提供的各组分重量份为最优条件，在此条件内的提高胶原蛋白Ⅰ合成效果最好。同时，对比例13的斑马鱼col1a1a基因相对表达水平提升率比实施例1低，表明本申请提供的提取纯化工艺比对比例13提供的工艺制得的A、B、C组分纯度更高，提高胶原蛋白Ⅰ合成效果更好。
6、人体测试
测试流程简述：
采用实施例5产品作为实验组和空白膏基作为空白对照组进行志愿者测试。
选择面部有眼角皱纹、抬头纹，面部肌肤缺水干燥、松弛的中国健康女性志愿者60名，年龄区间为35～50岁，并签署志愿者知情同意书。将志愿者随机分为空白对照组和实验组，每组各30人，空白对照组志愿者使用空白对照产品（即实施例5中不添加抗皱紧致组合物的空白基质料体），实验组志愿者使用实施例5产品，连续使用30天，每天早晚涂抹1次。通过填写调查问卷的形式，收集志愿者对产品的抗皱紧致效果评价，评价结果如表6所示。采用仪器对志愿者使用产品前后TEWL值、皮肤弹性、皮肤角质层水分含量、皱纹数量和皱纹长度进行测量，测量结果如表7所示。
表6 志愿者对产品的抗皱紧致效果评价情况
评价指标 空白对照组认同度 实验组认同度
产品可以有效淡化细纹 6.67% 86.67%
产品可以有效改善眼周皱纹 3.33% 80.00%
产品可以有效改善抬头纹 3.33% 83.33%
产品可以有效改善眉间皱纹 0 70.00%
产品可以有效改善面颊皱纹 0 70.00%
产品可以有效改善法令纹 0 66.67%
产品可以有效提升皮肤紧致度，令皮肤肌肤饱满，盈润细致 6.67% 83.33%
产品可以有效提升皮肤保湿度 16.67% 90.00%
产品可以有效改善皮肤粗糙状态提升水润嫩肤 16.67% 86.67%
产品可以有效提升皮肤光泽度 3.33% 80.00%
表7 产品使用前后各指标的测量结果
结果分析：由人体30天连续试用测试结果表明，空白对照组对皮肤的皱纹、紧致度和保湿度没有明显的改善，而实验组相对于空白对照组而言，具有较为明显的效果，认同度更高。由仪器测量结果可知，实验组在减少经皮水分流失、增加皮肤弹性、增加角质层水分含量、减少皱纹数量和长度五个指标下，表现出比空白对照组更好的效果。因此，由上述人体测试结果可知，该组合物具有较好的抗皱紧致效果。

Claims (7)

1.一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，其特征在于，按照含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物总质量100%计，包含以下组分及其含量：A组分1～10 wt%，B组分5～10wt%，C组分0.1～3 wt%，D组分3～10 wt%；余量为E组分；
所述的A组分为玫瑰复合多肽；
所述的B组分为玫瑰复合多糖；
所述的C组分为玫瑰复合多酚；
所述的D组分为羟丙基四氢吡喃三醇；
所述的E组分为溶剂及防腐剂体系；
所述的A组分玫瑰复合多肽、B组分玫瑰复合多糖、C组分玫瑰复合多酚通过下述步骤分别制备得：
1）药材准备：称取干燥玫瑰花瓣45份、甜瓜果25份、野大豆籽10份和珊瑚藻10份，粉碎，过筛，混匀，保存备用；
2）提取：称取步骤1）药材粉末置于离心管中，加入20～50倍去离子水，浸泡1.5～2 h，加入纤维素酶4.5～5 wt%和果胶酶0.1～0.5 wt%进行酶解，酶解温度为45～50℃，酶解时间为1～3 h；超声辅助提取，过滤除渣；收集提取物液，将收集的提取液升温至85～95℃灭菌10～20 min，离心分离收集上清液，抽滤过滤膜，浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，得到粗提物；
步骤2）所述超声辅助提取为在500～600 W条件下超声5～10 min/次；
3）纯化：取步骤2）粗提物，采用大孔树脂柱层析法对粗提物进行分离纯化，上样流速为1～2 mL/min，洗脱剂为去离子水和50～60 wt%乙醇溶液，去离子水用量为3～5 BV，50～60wt%乙醇溶液用量为4～6 BV，洗脱流速均为1.5～2.5 mL/min，分别收集上样废液、去离子水洗脱液和50～60 wt%乙醇溶液洗脱液；将50～60 wt%乙醇溶液洗脱液浓缩至无醇味，并置于-18℃预冷4～5 h，再置于-80℃速冻1～2 h，最后迅速放入冷冻干燥器内升华干燥24～36 h，得到C组分玫瑰复合多酚；
4）二次纯化：将步骤3）上样废液和去离子水洗脱液进行合并，浓缩至生药材浓度为0.1g/mL，再用磷酸缓冲溶液调节pH至6~7，电场强度为15～18 kV/cm，脉冲数为6～8，胰蛋白酶添加量为2.5～3 wt%，酶解温度为40～45℃，酶解时间为1～3 h；在6000 r/min条件下离心10～15 min，收集上清液，抽滤除杂，选用截留分子质量为1 ku的超滤膜对上清液进行超滤分级，操作压力为0.2～0.25 MPa，操作温度为35～45℃，得到分子质量＜1 ku的多肽；将超滤截留液浓缩至生药材浓度为0.1 g/mL，加入4倍量的无水乙醇，在4℃下放置12～24 h，在4000 r/min条件下离心15～20 min，收集沉淀，得到多糖；将超滤得到的多肽和沉淀得到的多糖进行浓缩，并置于-18℃预冷4～5 h，再置于-80℃速冻1～2 h，最后放入冷冻干燥器内升华干燥24～36 h，分别得到A组分玫瑰复合多肽和B组分玫瑰复合多糖。
2.根据权利要求1所述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，其特征在于，按照含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物总质量100%计，所述的溶剂及防腐剂体系中各个组分及其含量如下：丁二醇15 wt%，1,2-戊二醇5 wt%，防腐剂0.7～1 wt%，余量为去离子水。
3.根据权利要求1或2所述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，其特征在于，所述的防腐剂为对羟基苯乙酮、苯氧乙醇、辛甘醇、棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-1中的至少一种。
4.根据权利要求1所述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，其特征在于，步骤2）所述的离心是在4000 r/min条件下离心15～30 min。
5.根据权利要求1所述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物，其特征在于，步骤2）所述的滤膜孔径为0.45 μm。
6.权利要求2所述的一种含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
1）按权利要求2所述的比例称量各组分；
2）将所述的A组分、B组分、C组分、D组分分散于部分去离子水中，再加入丁二醇和1,2-戊二醇助溶，再加入防腐剂，升温至50℃，搅拌15～20 min，混匀至澄清透明，补充剩余去离子水，过0.45 μm滤膜，得到含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物。
7.权利要求1所述的含玫瑰多肽具有抗皱紧致功效的组合物作为制备化妆品的添加剂的应用。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106333886A (zh) * 2016-08-29 2017-01-18 欧标（广州）化妆品有限公司 一种具有保湿和美白亮肤作用的组合物及其应用
CN110157758A (zh) * 2017-12-26 2019-08-23 浦江县欧立生物技术有限公司 发酵法制备的玫瑰花粉蛋白多肽的用途

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101972123B1 (ko) * 2017-08-14 2019-04-24 (주)모아캠 갈산 및 당단백질을 유효성분으로 포함하는 장미 추출물과 이의 제조방법, 및 이를 포함하는 화장료 조성물
CN115944581A (zh) * 2023-02-01 2023-04-11 欧诗漫生物股份有限公司 一种玫瑰细胞液及其制备方法与应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106333886A (zh) * 2016-08-29 2017-01-18 欧标（广州）化妆品有限公司 一种具有保湿和美白亮肤作用的组合物及其应用
CN110157758A (zh) * 2017-12-26 2019-08-23 浦江县欧立生物技术有限公司 发酵法制备的玫瑰花粉蛋白多肽的用途

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