CN118159517A - 约束络合剂的合成 - Google Patents

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Abstract

本文描述了合成约束络合剂的改进方法。还描述与所述改进方法相关的化合物和组合物，所述化合物包括其盐和其溶剂化物。

Description

约束络合剂的合成
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年10月27日提交的美国申请号63/272,547的优先权和权益，该申请的公开内容出于所有目的通过引用以其整体并入本文。
技术领域
本申请涉及制备约束络合剂(RESCA)的方法及由该方法制备的RESCA化合物和组合物。
背景技术
与在诊断、疾病监测和可视化中重要的分子结合的蛋白质(“标志物-结合蛋白”)可能缔合或接附可检测标记(例如，放射性标记或荧光标记)，该标记允许可视化分子，并且由此确定其位置和数量(定性或定量)。在一些情况下，可检测标记直接缔合或接附至标志物-结合蛋白，但在其他情况下，可检测标记经由连接分子(“接头”)接附至标志物蛋白，它们可能是不可裂解的或可裂解的(因此允许标志物-结合蛋白与其可检测标记的受控结合)。接头可以以多种方式与可检测标记相关联，包括直接缀合到螯合，后者适用于一些含金属的可检测标记。然而，接头缀合至标志物蛋白可能需要与特定标志物蛋白不相容的条件，或效率低下，或需要多种试剂。
约束络合剂(RESCA)是一类螯合剂分子，已成功用于用18F(氟-18)标记生物分子并促进可用作各种疾病和病况的诊断和/或治疗工具的PET(正电子发射断层扫描)成像。18F的特性，特别是其适度的半衰期，使其与其他放射性核素诸如89Zr(锆-89)和124I(碘-124)相比，成为成像技术的有吸引力的选择。使用一氟化铝({Al18F}2+)作为18F的来源已成为一种策略，与先前已知的18F标记方法相比，该策略允许经由在水介质中的RESCA并在较低温度进行18F标记。尽管RESCA有潜在的应用，但费力、低产率的合成是广泛开发并使用RESCA-Al18F标记策略的潜在障碍。改进的RESCA合成方法将有助于RESCA-Al18F标记方法的持续开发及其各种应用。
发明内容
本申请提供制备RESCA化合物的方法、RESCA化合物和组成物及其使用方法。
在一些实施方案中，本文提供一种制备式(I)化合物：
其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，
其中该方法包括：
(a)步骤(1-1)，其包括使式(Ia)化合物：
或其非对映体与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
或其非对映体；
(b)步骤(1-2)，其包括使式(Ic)化合物或其盐与式(Id)化合物
在碱存在下且在溶剂中进行反应，
以形成式(Ie)化合物：
或其非对映体；
(c)步骤(1-3)，其包括使式(Ie)化合物与碱在溶剂中进行反应，以形成式(If)化合物：
或其非对映体；
(d)步骤(1-4)，其包括使式(If)化合物与式(1g)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
或其非对映体；以及
(e)步骤(1-5)，其包括使式(Ih)化合物与酸进行反应，以形成式(I)化合物、其非对映体、其盐或其溶剂化物、或任何前述者的组合，
其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；
R3为卤代；且
R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
在一些实施方案中，步骤(1-1)中的溶剂包括醇。在一些实施方案中，溶剂为乙醇。在一些实施方案中，步骤(1-1)中的还原剂为氢化物。在一些实施方案中，还原剂为NaBH(OAc)3。
在一些实施方案中，步骤(1-1)进一步包括通过柱色谱来纯化式(Ic)化合物。
在一些实施方案中，步骤(1-2)中的溶剂为极性有机溶剂。在一些实施方案中，溶剂为CH3CN。在一些实施方案中，步骤(1-2)中的碱为有机碱。在一些实施方案中，有机碱为胺碱。在一些实施方案中，胺碱为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。
在一些实施方案中，步骤(1-2)进一步包括通过柱色谱来纯化式(1e)化合物。
在一些实施方案中，步骤(1-3)中的溶剂为水性溶剂。在一些实施方案中，溶剂进一步包括四氢呋喃(THF)。在一些实施方案中，步骤(1-3)中的碱为KOH。
在一些实施方案中，步骤(1-4)中的溶剂为卤化烃。在一些实施方案中，溶剂为CH2Cl2。在一些实施方案中，羧基活化试剂为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)。
在一些实施方案中，步骤(1-5)中的酸为三氟乙酸。
在一些实施方案中，步骤(1-5)进一步包括通过制备型高效液相色谱法纯化式(Ih)化合物。
在前述式中任一项的一些实施方案中，R1为甲基。在一些实施方案中，R2为叔丁基。在一些实施方案中，R3为Br。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7各自为F。在一些实施方案中，式(I)化合物为化合物1：
在一些实施方案中，本文提供一种制备式(I)化合物：
其非对映体、其盐、或其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，
其中该方法包括：
(a)步骤(2-1)，其包括使式(Ia)化合物：
与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
(b)步骤(2-2)，其包括使式(Ic)化合物与酸进行反应，以产生式(Ic)的盐；
(c)步骤(2-3)，其包括使式(Ic)的盐与式(Id)化合物：
在碱存在下且在溶剂中进行反应，
以形成式(Ie)化合物：
其非对映体、或其盐；
(d)步骤(2-4)，其包括使式(Ie)化合物与碱在溶剂中进行反应，以形成式(2f)化合物：
其非对映体、或其盐；以及
(e)步骤(2-5)，其包括使式(If)化合物或其盐与式(Ig)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
其非对映体、或其盐；以及
(f)步骤(2-6)，其包括使式(Ih)化合物与酸进行反应，以形成式(I)化合物、其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合，
其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；
R3为卤代；且
R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
在一些实施方案中，步骤(2-1)中的溶剂包括醇。在一些实施方案中，醇为乙醇。在一些实施方案中，步骤(2-1)中的还原剂包括氢化物。在一些实施方案中，还原剂为NaBH(OAc)3。
在一些实施方案中，步骤(2-2)中的酸为乳清酸(orotic acid)。在一些实施方案中，步骤(2-2)提供具有以下结构的式(Ic)的盐：
式(Ic)乳清酸盐(orotate)
在一些实施方案中，步骤(2-2)包括使式(Ic)的盐或其非对映体结晶作为乳清酸盐(orotate salt)。
在一些实施方案中，步骤(2-2)中的酸为富马酸(fumaric acid)。在一些实施方案中，步骤(2-2)提供具有以下结构的式(Ic)的盐：
在一些实施方案中，步骤(2-2)进一步包括将式(Ic)的盐或其非对映体结晶作为富马酸盐(fumarate salt)。
在一些实施方案中，步骤(2-3)中的碱为K2CO3。在一些实施方案中，步骤(2-3)中的溶剂包括甲苯。在一些实施方案中，步骤(2-3)中的溶剂包括水。
在一些实施方案中，步骤(2-4)中的碱为KOH。在一些实施方案中，步骤(2-4)中的溶剂包括THF。在一些实施方案中，步骤(2-4)中的溶剂包括水。
在一些实施方案中，步骤(2-4)提供作为HCl盐的式(If)盐，并且其中步(2-4)进一步包括使式(If)的盐结晶。
在一些实施方案中，步骤(2-5)中的溶剂为卤化烃。在一些实施方案中，卤化烃为CH2Cl2。在一些实施方案中，步骤(2-5)中的羧基活化试剂为EDCI。
在一些实施方案中，步骤(2-6)中的溶剂为二噁烷。在一些实施方案中，步骤(2-6)中的酸为HCl。
在一些实施方案中，步骤(2-6)提供具有以下结构的式(I)的盐或其溶剂化物：
在一些实施方案中，步骤(2-6)进一步包括使式(I)的盐结晶。在前述式中任一项的一些实施方案中，R1为甲基。在一些实施方案中，R2为叔丁基。在一些实施方案中，R3为Br。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7为F。
在一些实施方案中，式(I)的溶剂化物的盐具有以下结构：
在一些实施方案中，本文提供一种组合物，该组合物包含式(I)化合物的一种或多种非对映体、其盐或其溶剂化物：
其通过本文所述的方法生产。
在一些实施方案中，组合物包含至少约90％(重量/重量)的式(I)化合物的反式非对映体。在一些实施方案中，反式非对映体具有以下结构：
在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7为F。
在一些实施方案中，提供式(I)的盐或其溶剂化物，其中式(I)的盐具有以下结构：
其通过本文所述的方法生产。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7为F。
在一些实施方案中，本文提供式(Ie)化合物：
其非对映体、或其盐，
其中R1和R2各自独立地为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，本文提供式(Ic)化合物：
其非对映体、或其盐，
其中R1为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，本文提供一种包含络合物的组合物，该络合物包含使用本文所述的方法制备的化合物和金属卤化物。在一些实施方案中，金属卤化物为{Al18F}2+。在一些实施方案中，组合物中的化合物的至少90％(重量/重量)具有以下结构：
在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7为F。在一些实施方案中，组合物进一步包含多肽，其中络合物与多肽缀合。在一些实施方案中，多肽为抗体或抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段选自由以下项组成的组：VHH、scFv、微抗体、Fab、Fab’和Fv片段。在一些实施方案中，多肽为非抗体支架蛋白。在一些实施方案中，非抗体支架蛋白选自由以下项组成的组：亲和体、affilin、打结素、纤连蛋白、抗运载蛋白、atrimer、高亲和性多聚体、FN3支架、fynomer、Kunitz结构域、pronectin、OBody和DARPin。在一些实施方案中，组合物为适合施用于受试者的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物适合静脉内施用。在一些实施方案中，受试者为人。
在一些实施方案中，本文提供一种制备包含多肽和18F放射性核素的经标记的试剂的方法，其包括：
(a)在允许所述络合物与所述多肽结合以提供缀合物的条件下，将多肽与使用本文所述的方法制备的化合物接触；以及
(b)使缀合物与包含18F的氟化铝络合物接触，以提供经标记的试剂。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中该盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.5°2-θ、约13.9°2-θ、约16.6°2-θ、约23.4°2-θ和约25.6°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图1中的“A型乳清酸盐”图谱基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约3.3％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(e)显示在约172.8℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(g)在约5.68ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；或
(h)1H核磁共振谱，其与图3中所示基本上相同。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中该盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.2°2-θ、约14.0°2-θ、约15.2°2-θ、约22.7°2-θ和约25.0°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图1中的“C型乳清酸盐”图谱基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约2.6％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(e)显示在约161.7℃处的放热峰和在约182.9℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(g)在约5.69ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图5中所示基本上相同。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中该盐具有以下中的至少一者：
(a)在约.3°2-θ、约7.8°2-θ、约9.7°2-θ、约13.9°2-θ、约16.7°2-θ、约21.4°2-θ、约23.4°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图6中所示的“湿样品”或“干样品”基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约4.8％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(e)显示在约178.1℃处的放热峰和在约185.6℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(g)在约5.68ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图8中所示基本上相同。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中所述盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.9°2-θ、约15.8°2-θ、约18.6°2-θ、约19.3°2-θ、约20.1°2-θ、约21.0°2-θ和约24.7°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图9中所示的“湿样品”或“干样品”基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与140℃之间约2.4％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(e)显示在约154.7℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(g)在约6.39ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图11中所示基本上相同。
在一些实施方案中，提供具有以下结构的化合物的盐的结晶溶剂化物：
其中盐的溶剂化物具有以下中的至少一者：
(a)在约6.8°2-θ、约17.6°2-θ、约20.3°2-θ、约22.2°2-θ和约23.3°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；和
(b)X射线粉末衍射图谱，其与图15中所示基本上相同。
在一些实施方案中，本文提供一种约束络合剂，该约束络合剂包括
(i)使用如本文所提供的方法制备的化合物；或
(ii)如本文所述的结晶的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，本文提供一种包含可检测标记的标记部分，该可检测标记包含与接头缀合或螯合的金属卤化物，该接头包括
(i)使用如本文所提供的方法制备的化合物；或
(ii)如本文所述的结晶的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，本文提供一种标记缀合的标志物-结合物蛋白，该标志物-结合物蛋白包括可检测标记，该可检测标记包括通过接头与该标志物-结合物蛋白质连接的金属卤化物，该接头包括
(i)使用如本文所提供的方法制备的化合物；或
(ii)如本文所述的结晶的盐或溶剂化物。
在一些实施方案中，本文提供一种可视化分子的方法，该方法包括将该分子暴露于标记缀合的标志物-结合物蛋白，该标志物-结合物蛋白质包括可检测标记，该可检测标记包括通过接头与标志物-结合物蛋白质连接的金属卤化物，该接头包括
(i)使用如本文所提供的方法制备的化合物；或
(ii)如本文所述的结晶的盐或溶剂化物，
其中该标志物-结合物蛋白结合该分子；以及
检测该标记。
附图说明
图1是化合物1c乳清酸盐的化合物样品的XRPD(X射线粉末衍射)图谱的集合。
图2描绘化合物1c乳清酸盐(A型乳清酸盐)的化合物的TGA(热重分析)和DSC(差示扫描量热法)热谱图。
图3为化合物1c乳清酸盐(A型乳清酸盐)的1H NMR(核磁共振)谱。
图4描绘化合物1c乳清酸盐(C型乳清酸盐)的TGA和DSC热谱图。
图5为化合物1c乳清酸盐(C型乳清酸盐)的1H NMR谱。
图6为样品化合物1c乳清酸盐(重新制备的A型乳清酸盐)的XRPD图谱的集合。
图7描绘化合物1c乳清酸盐(重新制备的A型乳清酸盐)的TGA和DSC热谱图。
图8为化合物1c乳清酸盐(重新制备的A型乳清酸盐)的1H NMR谱。
图9为样品化合物1c富马酸盐(A型富马酸盐)的XRPD图谱的集合。
图10描绘化合物1c富马酸盐(A型富马酸盐)的TGA和DSC热谱图。
图11为化合物1c富马酸盐(A型富马酸盐)的1H NMR谱。
图12为样品化合物1c富马酸盐(重新制备的A型富马酸盐)的XRPD图谱的集合。
图13描绘化合物1c富马酸盐(重新制备的A型富马酸盐)的TGA和DSC热谱图。
图14为化合物1c富马酸盐(重新制备的A型富马酸盐)的1H NMR谱。
图15为化合物2的化合物样品的XRPD图谱的集合。
具体实施方式
所公开的合成方法包括对已知的RESCA合成方法(WO 2016/065435)的若干改进。与先前报道的方法相比，减少了所需步骤的数量、使用成本更低的试剂和/或改善了产率。在一些实施方案中，在合成步骤中的一部分或全部中，已排除对柱色谱的使用。在一些实施方案中，当该方法以比先前报道的方法更大的规模进行时，合成保留了上述益处的一部分或全部。
所公开的方法使用与先前已知的RESCA合成方法不同的合成路径。改进方法的第一步是合成式(Ic)化合物：
或其盐，其提供将本文公开的方法与先前方法区别开来的至少一要点。改进的合成路径排除了对钯催化剂的需要。在一些实施方案(例如，实例3，如下所示)中，一些步骤的产物可以结晶，以排除对中间体进行更复杂纯化的需要。
I.定义
如本文所用，术语“C1-Cx烷基”单独或组合意指具有1至x个碳原子的直链或支链烷基部分，其中x为整数。因此，术语“C1-C6烷基”单独或组合意指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基部分。如果存在于分子的末端，则直链和支链C1-C6烷基的一些实例包括但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、2-甲基苯基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基和3,3-二甲基丙基。当分子的两个部分由C1-C6烷基基团连接(即C1-C6包括二价“亚烷基”部分)时，则实例包括但不限于-CH2-、-CH2CH2-、-CH(CH3)-、-CH2CH2CH2-、-CH(C2H5)-和-C(CH3)2-。
如本文所用，“卤素”是指氟、氯、溴或碘。术语“卤代”是指卤素取代基，即氟基、氯基、溴基或碘基。
如本文所用，术语“卤化烃”是指被卤素部分取代至少一次的烃化合物或部分。一些卤化烃可用作化学合成的溶剂。术语“卤化烃”包括例如但不限于二氯甲烷(也称为CH2Cl2或DCM)和氯仿(也称为CHCl3)。
除非另有说明，否则如本文所用，术语“当量”是指摩尔当量。
如本文所用，术语“手性”是指不能叠加在其镜像上的分子，而术语“非手性”是指可叠加在其镜像上的分子。
如本文所用，术语“立体异构体”是指具有相同化学式(即相同数量的各类型的原子)，但原子或基团在物理空间中的排列不同的化合物。
如本文所用，术语“非对映体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子并非彼此的镜像的立体异构体。非对映体可以具有不同的物理特性(例如熔点、沸点、光谱性质和反应性)。
如本文所用，术语“对映体”是指具有手性且为另一种分子的镜像的分子。两种相互镜像的分子为“对映体”。对映体不能相互叠加。
本文所用的立体化学定义和约定大致遵循：S.P.Parker,编辑,McGraw-HillDictionary ofChemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,s.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本申请中的化合物可能含有不对称或手性中心，因此以不同的立体异构体存在。本文所述的化合物的所有立体异构体，包括但不限于非对映体、对映异构物、阻转异构体及其混合物(例如外消旋混合物)，皆包括在本申请中。
本申请的一种或多种化合物可以与药用溶剂诸如水、乙醇等的非溶剂化和溶剂化形式存在，并且本申请旨在包括溶剂化和未溶剂化形式两者。“溶剂化物”是指本申请的化合物与一种或多种溶剂分子的物理缔合。此物理缔合涉及不同程度的离子和共价键，包括氢键。在某些实施方案中，溶剂化物将能够分离，诸如当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂化物。合适的溶剂化物的非限制性实例包括乙醇、水、1,4-二噁烷、盐酸等的溶剂化物。“水合物”为其中溶剂分子为H2O的溶剂化物。
应当理解，此处描述为“包括”特定特征的实施方案意味着已经设想了“组成”和/或“基本上由其组成”这些特征组成的实施方案。
本文对“约”某个值或参数的提及是指本技术领域的技术人员容易知道的各个值的通常误差范围。在本文中提及“约”值或参数包含(且描述)涉及该值或参数本身的方面。例如，提及“约X”的描述包括“X”的描述。
如在本文和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。
如本文所用的术语“和/或”，短语诸如“A和/或B”旨在包括A和B；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样，如本文所用的术语“和/或”，短语诸如“A、B和/或C”旨在涵盖以下每个的实施方案：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
II.合成方法
本文提供能够螯合金属卤化物的化合物的合成方法。在一些实施方案中，化合物为式(I)化合物：
或其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，其中R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
在一些实施方案中，式(I)化合物为具有以下结构的化合物：
或其盐、其溶剂化物或其盐的溶剂化物。
在一些实施方案中，式(I)化合物为化合物1：
或其盐、其溶剂化物或其盐的溶剂化物。
本文所述的方法与先前公开的合成方法相比具有化学和/或商业优势。在一些实施方案中，本反应的产率大于先前已知方法(例如，WO 2016/065435)的化合物1或化合物2(如下所示)的产率。在一些实施方案中，本文所述的方法以高产率提供产物。在一些实施方案中，产率为至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约98％或至少约99％。在一些实施方案中，产率在约20％与约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约30％与约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约40％与约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约50％与约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约60％与约70％、约80％、约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约70％与约80％、约90％、约95％、约98％、约99％和约100％之间。在一些实施方案中，产率在约80％与约90％、约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约90％与约95％、约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约95％与约98％、约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约98％与约99％或约100％之间。在一些实施方案中，产率在约99％与约100％之间。在特定实施方案中，产率在约20％与约30％之间。在其它特定实施方案中，产率为约50％至约70％，诸如约51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％和70％。
在一些实施方案中，该方法提供比先前公开的方法具有更高纯度的产物。在一些实施方案中，该方法提供一种包含式(I)的单一非对映体(例如，化合物1或化合物2)的组合物，该单一非对映体具有的纯度为至少80％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，纯度为约97.5A％、98A％和99A％(面积％)，如使用高效液相色谱法(HPLC)所确定。
在一些实施方案中，本发明中使用的试剂比先前公开的方法中使用的试剂便宜。在一些实施方案中，所公开的方法使用的试剂通常比先前公开的方法中使用的试剂更便宜且对环境更友好；然而，重要的是，该方法不需要钯催化剂。
在一些实施方案中，可以大规模制备式(I)化合物(例如，化合物1或化合物2)。在一些实施方案中，“大规模”是指在方法的任何步骤中使用至少100克、250克、500克、750克或1000克起始材料、中间体或试剂。在一些实施方案中，“大规模”是指在方法的任何步骤中使用至少1kg、10kg、25kg、50kg或100kg起始材料、中间体或试剂。
在一些实施方案中，本方法提供比先前公开的方法具有改善的产率和/或更高纯度的产物。在一些实施方案中，本方法以更大的规模提供比先前公开的方法具有改善的产率和/或更高纯度的产物。产率、纯度和规模中的任一项可组合在一起，就像特定产率、特定纯度和特定规模的每种组合都被具体地单独列出一样。
A.第一方法
在一些实施方案中，本文提供一种制备式(I)化合物，
其非对映体、其盐、其溶剂化物或任何前述者的组合的方法，其中R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代(例如，F)或氢，且其中该方法包括步骤(1-1)至(1-5)中的一者或多者。一种示例性合成方案显示在实例1的方案1中。
步骤(1-1)包括使式(Ia)化合物：
或其非对映体与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
或其非对映体，其中R1为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，与式(Ia)化合物的量相比，使用在约0.5当量至约2当量之间的式(Ib)化合物。在一些实施方案中，使用约1当量。
在一些实施方案中，式(Ia)化合物为选自由以下项组成的组的立体异构体：
在一些实施方案中，步骤(1-1)的溶剂包括醇。在一些实施方案中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇。在一些实施方案中，溶剂为乙醇。
在一些实施方案中，步骤(1-1)的还原剂包括氢化物。在一些实施方案中，还原剂包括NaBH(OAc)3、NaBH4CN和NaBH4。在一些实施方案中，还原剂为NaBH(OAc)3。在一些实施方案中，与式(Ia)化合物的量相比，使用1当量至2当量的还原剂(即，还原剂与化合物的摩尔比在1:1与2:1之间)。在一些实施方案中，使用约1.5当量至约2当量的还原剂。在一些实施方案中，使用约1.8当量至约2当量的还原剂。在一些实施方案中，使用约1.9当量的还原剂。
在一些实施方案中，步骤(1-1)在维持在约20℃至约70℃之间的温度下进行，持续时间在约1小时至约3小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约30℃至约60℃之间。在一些实施方案中，温度在约40℃至约50℃之间。在一些实施方案中，持续时间为约2小时。在一些实施方案中，步骤(1-1)在维持在约40℃至约50℃之间的温度下进行，持续时间为约2小时。
在一些实施方案中，步骤(1-1)进一步包括纯化式(Ic)化合物。在一些实施方案中，纯化使用硅胶柱。在一些实施方案中，纯化使用溶剂混合物。在一些实施方案中，溶剂混合物包括二氯甲烷(DCM)和甲醇(MeOH)。在一些实施方案中，HPLC包括随时间推移将DCM与MeOH的比率从100:0改变至30:1(v/v)。在一些实施方案中，MeOH包括NH3。在一些实施方案中，NH3以7M的浓度存在于MeOH中。
在一些实施方案中，步骤(1-1)不包括纯化式(Ic)化合物。
在一些实施方案中，式(Ic)化合物为具有下式中的一者的化合物：
步骤(1-2)包括使式(Ic)化合物或其非对映体与式(Id)化合物
在碱和溶剂的存在下反应，
以形成式(Ie)化合物：
或其非对映体，其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；且
R3为卤代。
在一些实施方案中，与式(Ic)化合物的量相比，使用约2当量至约5当量的式(Id)化合物。在一些实施方案中，使用约3当量至约4当量。在一些实施方案中，使用3.5当量。
在一些实施方案中，步骤(1-2)的溶剂包括极性有机溶剂。在一些实施方案中，溶剂包括CH3CN、四氢呋喃(THF)、MeTHF、丙酮、甲基乙基酮、乙酸异丙酯、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)或二甲基亚砜(DMSO)。在一些实施方案中，溶剂为CH3CN。
在一些实施方案中，步骤(1-2)的碱为有机碱。在一些实施方案中，碱为胺碱。在一些实施方案中，碱为三乙胺、三丁胺、N-甲基吗啉、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)或1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯。在一些实施方案中，碱为DIPEA。在一些实施方案中，与式(Ic)化合物的量相比，使用在约4当量至约12当量之间的碱。在一些实施方案中，使用在约6当量至约10当量之间的碱。在一些实施方案中，使用在约7当量至约9当量之间的碱。在一些实施方案中，使用约8当量的碱。
在一些实施方案中，步骤(1-2)在CH3CN中在DIPEA存在下进行。在一些此类实施方案中，使用约8当量的DIPEA。
在一些实施方案中，步骤(1-2)在维持在约20℃至约70℃之间的温度下进行，持续时间在约12小时至约24小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约30℃至约60℃之间。在一些实施方案中，温度在约40℃至约50℃之间。在一些实施方案中，持续时间在约16小时与约20小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约18小时。在一些实施方案中，步骤(1-2)在维持在约40℃至约50℃之间的温度下进行，持续时间为约18小时。
在一些实施方案中，步骤(1-2)进一步包括纯化式(Ie)化合物。在一些实施方案中，步骤(1-2)进一步包括通过柱色谱来纯化式(Ie)化合物。在一些实施方案中，纯化使用硅胶柱。在一些实施方案中，纯化使用包括乙酸乙酯和正庚烷的溶剂混合物。在一些实施方案中，纯化包括随着时间推移将乙酸乙酯与正庚烷的比率从100:0改变至1:5(v/v)。
在一些实施方案中，步骤(1-2)不包括纯化式(Ie)化合物。
在一些实施方案中，式(Ie)化合物为具有下式中的一者的化合物：
步骤(1-3)包括使式(Ie)化合物或其非对映体与碱在溶剂中反应，以形成式(If)化合物：
或其非对映体，其中各R2为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，步骤(1-3)的溶剂包括水。在一些实施方案中，溶剂包括有机溶剂。在一些实施方案中，溶剂为水和有机溶剂的混合物。在一些实施方案中，溶剂包括四氢呋喃(THF)、MeTHF、甲基叔丁基醚、环戊基甲基醚、二氯甲烷和乙酸异丙酯。在一些实施方案中，溶剂包括THF。在一些实施方案中，溶剂为水和THF的混合物。在一些实施方案中，使用有机溶剂与水的比率。在一些实施方案中，有机溶剂与水的比率在约4:1与1:1之间。在一些实施方案中，比率在约10:3与约6:3之间。在一些实施方案中，比率为约8:3。以上实施方案中的所有比率同样适用于其中比率为THF与水的比率的实施方案。
在一些实施方案中，步骤(1-3)的碱为强碱。在一些实施方案中，碱为KOH。在一些实施方案中，与式(Ie)化合物的量相比，使用约1当量至约3当量的碱。在一些实施方案中，使用约2当量的碱。
在一些实施方案中，步骤(1-3)在水和THF的混合物中在KOH存在下进行。在一些此类实施方案中，使用约2当量的KOH。
在一些实施方案中，式(If)化合物为具有下式中的一者的化合物：
在一些实施方案中，步骤(1-3)在维持在约-20℃至约30℃之间的温度下进行，持续时间在约18小时至约30小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约-10℃至约20℃之间。在一些实施方案中，温度在约0℃至约10℃之间。在一些实施方案中，持续时间在约16小时至约20小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约18小时。在一些实施方案中，步骤(1-3)在维持在约0℃至约10℃之间的温度下进行，持续时间为约18小时。
步骤(1-4)包括使式(If)化合物或其非对映体与式(Ig)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
或其非对映体，其中
各R2独立地为C1-C6烷基；且
R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
在一些实施方案中，式(Ih)化合物为具有下式中的一者的化合物：
在一些实施方案中，与式(If)化合物的量相比，使用在约0.8当量与约1.6当量之间的式(Ig)化合物。在一些实施方案中，使用约1.0当量至约1.4当量。在一些实施方案中，使用约1.2当量。
在一些实施方案中，步骤(1-4)的溶剂为卤化烃。在一些实施方案中，溶剂选自由以下项组成的组：1,2-二氯乙烷、CH2Cl2和CHCl3。在一些实施方案中，溶剂为CH2Cl2(DCM或二氯甲烷)。
在一些实施方案中，步骤(1-4)的羧基活化剂包括碳二亚胺。在一些实施方案中，羧基活化剂为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)。
在一些实施方案中，步骤(1-4)在DCM中在EDCI存在下进行。
在一些实施方案中，步骤(1-4)在维持在约0℃至约50℃之间的温度下进行，持续时间在约8小时至约24小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约10℃至约40℃之间。在一些实施方案中，温度在约20℃至约30℃之间。在一些实施方案中，持续时间在约12小时至约20小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约16小时。在一些实施方案中，步骤(1-4)在维持在约20℃至约30℃之间的温度下进行，持续时间为约10小时。在一些实施方案中，步骤(1-4)在维持在约20℃至约30℃之间的温度下进行，持续时间为约16小时。
步骤(1-5)包括使式(Ih)化合物或其非对映体与酸反应，以形成式(I)化合物或其非对映体。在一些实施方案中，酸包括HCl、HBr、H2SO4、甲磺酸、对甲苯磺酸或三氟乙酸。在一些实施方案中，酸为三氟乙酸。
在一些实施方案中，步骤(1-5)进一步包括纯化式(I)化合物。在一些实施方案中，步骤(1-5)进一步包括通过制备型高效液相色谱法(HPLC)纯化式(I)化合物。在一些实施方案中，HPLC是用比率为98:2的0.01％TFA的水溶液与乙腈进行。
在一些实施方案中，步骤(1-5)不包括纯化式(I)化合物。
在一些实施方案中，步骤(1-5)在维持在约0℃至约50℃之间的温度下进行，持续时间在约8小时与约24小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约10℃至约40℃之间。在一些实施方案中，温度在约20℃至约30℃之间。在一些实施方案中，持续时间在约12小时至20小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约16小时。在一些实施方案中，步骤(1-5)在维持在约20℃至约30℃之间的温度下进行，持续时间为约16小时。
在一些实施方案中，式(I)化合物为具有下式中的一者的化合物：
B.第二方法
在一些实施方案中，提供一种制备式(I)化合物：
其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，其中R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代(例如，F)或氢，其中该方法包括步骤(2-1)至(2-6)中的一者或多者。一种示例性合成方案显示在实例3的方案2中。第二方法的一个优势在于结晶步骤无需昂贵且耗时的纯化步骤，诸如硅胶色谱法。
步骤(2-1)包括使式(Ia)化合物：
或其非对映体与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
或其非对映体，其中R1为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，与式(Ib)化合物的量相比，使用约0.5当量至约3当量的式(Ia)化合物。在一些实施方案中，使用约1当量至约2当量。在一些实施方案中，使用约1.3当量。
在一些实施方案中，式(Ia)化合物包括一种立体异构体、由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，式(Ia)化合物为立体异构体的混合物。在一些实施方案中，式(Ia)化合物为外消旋混合物。在一些实施方案中，式(Ia)化合物选自由以下项组成的组：
在一些实施方案中，式(Ia)化合物为包含如上所示的三种立体异构体中的两种或更多种的混合物。
在一些实施方案中，步骤(2-1)的溶剂包括醇。在一些实施方案中，溶剂为甲醇、乙醇、正丙醇或异丙醇。在一些实施方案中，溶剂为乙醇。
在一些实施方案中，步骤(2-1)的还原剂包括氢化物。在一些实施方案中，还原剂包括NaBH(OAc)3。在一些实施方案中，还原剂为NaBH(OAc)3。在一些实施方案中，与式(Ib)化合物的量相比，使用约1当量至约5当量的氢化物。在一些实施方案中，使用约2当量至约4当量。在一些实施方案中，使用约3当量。
在一些实施方案中，步骤(2-1)在乙醇中在NaBH(OAc)3存在下进行。在一些实施方案中，使用3当量的NaBH(OAc)3。
在一些实施方案中，步骤(2-1)在维持在约20℃至约65℃之间的温度下进行，持续时间在约1小时至约3小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约30℃至约55℃之间。在一些实施方案中，温度在约40℃至约45℃之间。在一些实施方案中，持续时间为约2小时。在一些实施方案中，步骤(2-1)在维持在约40℃至约45℃之间的温度下进行，持续时间为约2小时。
在一些实施方案中，式(Ic)化合物为具有下式中的一者的化合物：
步骤(2-2)包括使式(Ic)化合物或其非对映体与酸反应，以产生式(Ic)的盐或其非对映体。在一些实施方案中，酸为有机酸。在一些实施方案中，酸选自由以下项组成的组：富马酸、L-酒石酸和乳清酸。
在一些实施方案中，酸为乳清酸。在一些实施方案中，式(Ic)的盐或其非对映体具有以下结构：
在一些实施方案中，式(Ic)的盐为化合物1c乳清酸盐：
在一些实施方案中，步骤(2-2)包括使式(Ic)的盐或其非对映体结晶。在一些实施方案中，步骤(2-2)包括使式(Ic)的乳清酸盐或其非对映体结晶。在一些实施里中，式(Ic)的盐或其非对映体从丙酮、2-甲基-四氢呋喃或乙腈中结晶为水混合物(例如，19:1的CH3CN和H2O)。
在一些实施方案中，酸为富马酸。在一些实施方案中，式(Ic)的盐或其非对映体具有以下结构：
在一些实施方案中，式(Ic)的盐为化合物1c富马酸盐：
在一些实施方案中，步骤(2-2)进一步包括将式(Ic)的盐或其非对映体结晶作为富马酸盐。在一些实施方案中，式(Ic)的盐或其非对映体从丙酮中结晶。
步骤(2-3)包括使式(Ic)的盐或其非对映体与式(Id)化合物：
在碱和溶剂存在下反应，
以形成式(Ie)化合物：
其非对映体，其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；且
R3为卤代。
在一些实施方案中，与式(Ic)的盐的量相比，使用在约2当量至约5当量之间的式(Id)化合物。在一些实施方案中，使用约3当量至约4当量。在一些实施方案中，使用约3.5当量。
在一些实施方案中，步骤(2-3)中的碱包括碳酸盐。在一些实施方案中，碱包括K2CO3。在一些实施方案中，碱为K2CO3。在一些实施方案中，与式(Ic)的盐、其非对映体的量相比，使用约1当量至约5当量的碱。在一些实施方案中，使用约2当量至约4当量。在一些实施方案中，使用约3当量。
在一些实施方案中，步骤(2-3)中的溶剂包括水。在一些实施方案中，溶剂包括有机溶剂。在一些实施方案中，溶剂包括甲苯。在一些实施方案中，溶剂为水和有机溶剂的混合物。在一些实施方案中，溶剂为水和甲苯的混合物。在一些实施方案中，水和甲苯以在约2:1至约1:2之间的比率使用。在一些实施方案中，比率为约1:1。
在一些实施方案中，步骤(2-3)在水和甲苯的混合物中在K2CO3存在下进行。在一些此类实施方案中，水和甲苯的比率为约1:1。在一些此类实施方案中，使用约3当量的K2CO3。在一些此类实施方案中，水与甲苯的比率为约1:1并使用约3当量的K2CO3。
在一些实施方案中，步骤(2-3)在维持在约25℃至约65℃之间的温度下进行，持续时间在约8小时至约24小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约35℃至约55℃之间。在一些实施方案中，温度维持在约45℃。在一些实施方案中，持续时间在约12小时与约20小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约16小时。在一些实施方案中，步骤(2-3)在维持在约45℃的温度进行，持续时间为约16小时。
在一些实施方案中，式(Ie)化合物为具有下式中的一者的化合物：
步骤(2-4)包括使式(Ie)化合物或其非对映体与碱于溶剂中反应，以形成式(If)化合物：
其非对映体、或其盐。
在一些实施方案中，步骤(2-4)中的碱为强碱。在一些实施方案中，碱为KOH。在一些实施方案中，与式(Ie)化合物的量相比，使用在约1当量与约4当量之间的KOH。在一些实施方案中，使用约2当量至约3当量。在一些实施方案中，使用约2.5当量。
在一些实施方案中，步骤(2-4)中的溶剂包括THF。在一些实施方案中，溶剂包括水。在一些实施方案中，溶剂为包括水和THF的混合物。
在一些实施方案中，步骤(2-4)在水和THF的混合物中在KOH存在下进行。在一些此类实施方案中，使用2.5当量的KOH。
在一些实施方案中，步骤(2-4)在维持在约0℃与约5℃之间的温度进行，持续时间在约20小时至约60小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约0℃与约5℃之间，持续时间在约30小时至约40小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约0℃与约5℃之间，持续时间为约20小时。
在一些实施方案中，步骤(2-4)提供式(If)的HCl盐或其非对映体。在一些实施方案中，步骤(2-4)包括使式(If)的盐或其非对映体结晶。在一些实施方案中，式(If)的盐具有以下结构：
或为其非对映体。
在一些实施方案中，式(If)的HCl盐具有以下结构：
在一些实施方案中，式(If)化合物或其盐包含具有下式中的一者的化合物或其盐：
步骤(2-5)包括使式(If)化合物、其非对映体、其盐或其盐的非对映体与式(Ig)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
其非对映体、或其盐。
在一些实施方案中，与式(If)化合物的量相比，使用在约1当量至约1.5当量之间的式(Ig)化合物。在一些实施方案中，使用约1.2当量。
在一些实施方案中，步骤(2-5)的溶剂为卤化烃。在一些实施方案中，溶剂为选自由CH2Cl2或CHCl3所组成的组。在一些实施方案中，溶剂为CH2Cl2。
在一些实施方案中，步骤(2-5)的羧基活化试剂为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)。在一些实施方案中，与式(If)化合物的量相比，使用在约1当量至约2当量之间的EDCI。在一些实施方案中，使用约1.5当量。
在一些实施方案中，步骤(2-5)在CH2Cl2中在EDCI存在下进行。
在一些实施方案中，步骤(2-5)在维持在约0℃至约5℃之间的温度进行，持续时间在约2小时至约4小时之间。在一些实施方案中，持续时间为约3小时。在一些实施方案中，步骤(2-5)在维持在约0℃至约5℃之间的温度下进行，持续时间为约3小时。
在一些实施方案中，式(Ih)化合物为具有下式中的一者的化合物：
步骤(2-6)包括使式(Ih)化合物、或其非对映体、其盐或其盐的非对映体与酸反应，以形成式(I)化合物或其盐。在一些实施方案中，步骤(2-6)包括使式(Ih)化合物与酸反应，以形成式(I)化合物的盐。
在一些实施方案中，式(I)化合物为具有下式中的一者的化合物或其盐：
在一些实施方案中，步骤(2-6)的酸为无机酸。在一些实施方案中，步骤(2-6)的酸为盐酸。在一些实施方案中，式(I)的盐或其溶剂化物为HCl盐。在一些实施方案中，式(I)的盐或其溶剂化物具有以下结构：
或为其非对映体。在一些实施方案中，式(I)的盐或其溶剂化物具有以下结构：
在一些实施方案中，步骤(2-6)在二噁烷中进行。在一些实施方案中，步骤(2-6)在维持在约45℃至约70℃之间的温度进行，持续时间在约2小时至约4小时之间。在一些实施方案中，温度维持在约55℃至约60℃之间。在一些实施方案中，持续时间为约3小时。在一些实施方案中，步骤(2-6)在维持在约55℃至约60℃之间的温度在二噁烷中进行约3小时。
在一些实施方案中，式(I)化合物、或盐、溶剂化物或其溶剂化物的盐为化合物2：
在一些实施方案中，式(I)化合物为化合物2的非对映体。
在前述方法(包括“第一方法”和“第二方法”小节中描述的方法)中任一项的一些实施方案中，R1为直链C1-C6烷基。在一些实施方案中，R1为C1-C3烷基。在一些实施方案中，R1为C1-C3直链烷基。在一些实施方案中，R1为甲基、乙基、异丙基、正丙基、叔丁基或仲丁基。在一些实施方案中，R1为甲基、乙基或异丙基。在一些实施方案中，R1为甲基或乙基。在一些实施方案中，R1为甲基。
在前述方法(包括“第一方法”和“第二方法”小节中描述的方法)中任一项的一些实施方案中，R2为C3-C6支链烷基。在一些实施方案中，R2为甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基或叔丁基。在一些实施方案中，R2为乙基、异丙基或叔丁基。在一些实施方案中，R2为异丙基或叔丁基。在一些实施方案中，R2为叔丁基。
在前述方法(包括“第一方法”和“第二方法”小节中描述的方法)中任一项的一些实施方案中，R3为F、Cl或Br。在一些实施方案中，R3为Cl或Br。在一些实施方案中，R3为Br。
在前述方法(包括在“第一方法”和“第二方法”小节中描述的方法)中任一项的一些实施方案中，R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7各自独立地为Cl或F。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7各自为F。
III.组合物、经标记的试剂和使用方法
本文还公开了包含本文所公开的化合物和中间体的组合物。特别地，考虑到式(I)、(Ic)、(Ie)、(If)和(Ih)化合物(包括任何前述者的盐、溶剂化物和盐的溶剂化物)的立体异构体的组合物。在一些实施方案中，本文提供一种组合物，该组合物包含式(I)化合物的一种或多种非对映体、其盐或其溶剂化物：
在一些实施方案中，使用第II-A部分中描述的方法制备式(I)化合物。在一些实施方案中，使用第II-B部分中描述的方法制备式(I)化合物。在一些实施方案中，R4、R5、R6和R7各自为F。
在一些实施方案中，组合物包含化合物1、其盐或其溶剂化物：
在一些实施方案中，组合物包含或基本上包含单一非对映体，或由其组成或基本上由其组成。在一些实施方案中，组合物包含至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％(重量/重量)的化合物1的反式非对映体，或盐、溶剂化物、或盐的溶剂化物。在一些实施方案中，组合物包含至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％(重量/重量)的化合物2的反式非对映体：
在一些实施方案中，组合物进一步包含可检测标记。在一些实施方案中，可检测标记为放射性标记，诸如18F。在一些实施方案中，可检测标记为金属卤化物的一部分。在一些实施方案中，金属卤化物为{AlF}2+。在一些实施方案中，金属卤化物为{Al18F}2+。在一些实施方案中，标记(例如，金属卤化物)与接头形成络合物。在一些实施方案中，接头为式(I)化合物(例如，化合物1或化合物2)。在一些实施方案中，标记通过接头螯合。
在一些实施方案中，组合物进一步包含多肽，其中式(I)化合物(例如，化合物1或化合物2)与该多肽缀合。在一些实施方案中，组合物包含与络合物缀合的多肽，该络合物包含式(I)化合物(例如，化合物1或化合物2)和金属卤化物(例如，{Al18F}2+)。在一些实施方案中，多肽与靶分子诸如标记分子特异性结合。在一些实施方案中，多肽为结合标志物的多肽或蛋白质。在一些实施方案中，多肽为抗体或抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段选自由以下项组成的组：VHH、scFv、微抗体、Fab、Fab’和Fv片段。在一些实施方案中，多肽为非抗体支架蛋白。在一些实施方案中，非抗体支架蛋白选自由以下项组成的组：亲和体、affilin、打结素、纤连蛋白、抗运载蛋白、atrimer、高亲和性多聚体、FN3支架、fynomer、Kunitz结构域、pronectin、OBody和DARPin。
本文还提供了包含标志物结合蛋白、接头和标记的组合物。在一些实施方案中，组合物进一步包含通过接头连接到标记的标志物结合蛋白。在一些实施方案中，接头为化合物1。在一些实施方案中，接头为化合物2。在一些实施方案中，标记为金属卤化物。在一些实施方案中，金属卤化物为{Al18F}2+。在一些实施方案中，接头螯合标记。在一些实施方案中，接头螯合金属卤化物。
本文中的术语“抗体”是最广义的，并且涵盖多种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、单价抗体(例如，单臂抗体)、4-链抗体(诸如IgG抗体)、仅重链抗体(HcAb)及其抗体片段，只要它们呈现出期望的抗原结合活性即可。术语“4-链抗体”在本文中可互换使用，指具有两个重链和两个轻链的抗体或抗原结合片段。
“抗体片段”包含抗体的一部分，优选地为抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括单结构域抗体(包括VHH抗体)、Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利号5,641,870，实例2；Zapata等人，Protein Eng.8(10):1057-1062[1995])；单链抗体分子；以及从抗体片段形成的多特异性抗体。
在一些实施方案中，组合物适合施用于受试者。在一些实施方案中，组合物适合静脉内施用。在一些实施方案中，受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，受试者为人。
还提供了使用本文所述的化合物中的任一者制备经标记的试剂的方法。一些相关方法可以在WO2021/046159和Cleeren,F.,Lecina,J.,Bridoux,J.等人，Direct fluorine- 18 labeling of heat-sensitive biomolecules for positron emission tomography imaging using the Al18F-RESCA method,Nat Protoc,13,2330–2347(2018)中找到，两者全文皆并入本文。在一些实施方案中，试剂为标志物结合蛋白。在一些实施方案中，本文提供一种制备包含多肽和18F放射性核素的经标记的试剂的方法，该方法包括：(a)在允许络合物与多肽缀合以提供缀合物的条件下，将多肽与使用本文所述的方法制备的化合物(例如，化合物1)或组合物接触；和(b)使缀合物与包含18F的氟化铝络合物(例如，{Al18F}2+)接触以提供经标记的试剂。在一些实施方案中，化合物与多肽的赖氨酸残基缀合。在一些实施方案中，在一种或多种抗氧化剂化合物存在下，使缀合物与氟化铝络合物接触。在一些实施方案中，一种或多种抗氧化剂化合物包括甲硫氨酸和/或N-乙酰基-色氨酸。在一些实施方案中，在甲硫氨酸和N-乙酰基-色氨酸存在下，使缀合物与氟化铝络合物接触。在一些实施方案中，方法包括通过脱盐柱从包含缀合物和氟化铝的反应混合物中纯化经标记的试剂。在一些实施方案中，用包含组氨酸、甲硫氨酸、N-乙酰色氨酸和/或蔗糖的缓冲液平衡脱盐柱。在一些实施方案中，用包含组氨酸、甲硫氨酸、N-乙酰色氨酸和蔗糖的缓冲液平衡脱盐柱。
进一步提供使用本文所述方法制备的经标记的试剂，以及使用该经标记的试剂例如用于体内成像、诊断、预后或监测的方法。在一些实施方案中，经标记的试剂用于经由多肽与靶分子的特异性结合来进行靶分子的体内检测。在一些实施方案中，通过以下中的至少一者来检测靶分子：免疫PET(正电子发射断层扫描)、SPECT(单光子发射计算机断层扫描)、MRI(磁共振成像)(也称为NMR(核磁共振))、近红外(NIR)或切伦科夫发光成像(CLI)。
术语“检测”旨在包括确定物质的存在或不存在或量化物质(例如，靶分子)的量。因此，该术语指的是本申请的材料、组合物和方法用于定性和定量确定的用途。通常，用于检测的特定技术对于本申请中方法的实践不是关键的。例如，如本文所述的方法的“检测”可包括：观察靶分子的存在或不存在或靶分子含量的变化。与对照相比时，检测可以包括量化在10％与90％之间的任何值、或在30％与60％之间、或超过100％的任何值的变化(增加或减少)。检测可包括量化在2倍与10倍之间(包括端值)或更多(例如，100倍)的任何值的变化。
IV.化合物
本文还公开了本文所述的合成方法的中间体。在一些实施方案中，化合物为式(Ie)化合物：
其非对映体、或其盐，
其中R1和R2各自独立地为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，式(Ie)化合物或其盐具有下式中的一者的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式：
在一些实施方案中，化合物为式(Ic)化合物：
或其非对映体或盐，其中R1为C1-C6烷基。
在一些实施方案中，式(Ic)化合物或其盐具有下式中的一者的结构：
在一些实施方案中，化合物具有式：
盐
公开了特定中间体的盐或其溶剂化物。
在一些实施方案中，盐为化合物1c乳清酸盐：
化合物1c乳清酸盐为式(Ic)化合物的乳清酸盐，其中R1为甲基。
在一些实施方案中，盐为化合物1c富马酸盐：
化合物1c富马酸盐为式(Ic)化合物的富马酸盐，其中R1为甲基。
在一些实施方案中，盐为化合物2：
化合物2为化合物1的盐的溶剂化物。
在一些实施方案中，化合物1c乳清酸盐具有以下项中的至少一者：
(a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约7.5°2-θ、约13.9°2-θ、约16.6°2-θ、约23.4°2-θ和约25.6°2-θ处；
(b)XRPD图谱，其与图1中所示的那些中的一者基本上相同；
(c)TGA(热重分析)热谱图，其在20℃与150℃之间显示约3.3％质量损失；
(d)TGA热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(e)DSC(差示扫描量热法)热谱图，其显示在约172.8℃的吸热峰；
(f)DSC热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(g)1H NMR(核磁共振)谱，其特征峰位于约5.68ppm处；或
(h)1H NMR谱，其与图3中所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1c乳清酸盐具有以下项中的至少一者：
(a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约7.2°2-θ、约14.0°2-θ、约15.2°2-θ、约22.7°2-θ和约25.0°2-θ处；
(b)XRPD图谱，其与图1所示的那些中的一者基本上相同；
(c)TGA(热重分析)热谱图，其在20℃与150℃之间显示约2.6％质量损失；
(d)TGA热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(e)DSC(差示扫描量热法)热谱图，其显示在约161.7℃的放热峰和在约182.9℃的吸热峰；
(f)DSC热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(g)1H NMR(核磁共振)谱，其特征峰位于约5.69ppm处；以及
(h)1H NMR谱，其与图5中所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1c乳清酸盐具有以下项中的至少一者：
(a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约7.3°2-θ、约7.8°2-θ、约9.7°2-θ、约13.9°2-θ、约16.7°2-θ、约21.4°2-θ、约23.4°2-θ处；
(b)XRPD图谱，其与图6所示的那些中的一者基本上相同；
(c)TGA(热重分析)热谱图，其在20℃与150℃之间显示约4.8％质量损失；
(d)TGA热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(e)DSC(差示扫描量热法)热谱图，其显示在约178.1℃的放热峰和在约185.6℃的吸热峰；
(f)DSC热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(g)1H NMR(核磁共振)谱，其特征峰位于约5.68ppm处；以及
(h)1H NMR谱，其与图8中所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1c富马酸盐具有以下项中的至少一者：
a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约7.9°2-θ、约15.8°2-θ、约18.6°2-θ、约19.3°2-θ、约20.1°2-θ、约21.0°2-θ和约24.7°2-θ处；
(b)XRPD图谱，其与图9所示的那些中的一者基本上相同；
(c)TGA(热重分析)热谱图，其在20℃与140℃之间显示约2.4％质量损失；
(d)TGA热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(e)DSC(差示扫描量热法)热谱图，其显示在约154.7℃的吸热峰；
(f)DSC热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(g)1H NMR(核磁共振)谱，其特征峰位于约6.39ppm处；以及
(h)1H NMR谱，其与图11中所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物1c的富马酸盐的结晶的盐具有以下项中的至少一者：
(a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约7.9°2-θ、约15.8°2-θ、约18.6°2-θ、约19.3°2-θ、约20.1°2-θ、约21.0°2-θ和约24.7°2-θ处；
(b)XRPD图谱，其与图12所示的那些中的一者基本上相同；
(c)TGA(热重分析)热谱图，其在20℃与140℃之间显示约1.9％质量损失；
(d)TGA热谱图，其与图13中所示基本上相同；
(e)DSC(差示扫描量热法)热谱图，其显示在约156.2℃的吸热峰；
(f)DSC热谱图，其与图13中所示基本上相同；
(g)1H NMR(核磁共振)谱，其特征峰位于约6.39ppm处；以及
(h)1H NMR谱，其与图14中所示基本上相同。
在一些实施方案中，化合物2具有以下项中的至少一者：
(a)XRPD(X射线粉末衍射)图谱，其特征峰位于约6.8°2-θ、约17.6°2-θ、约20.3°2-θ、约22.2°2-θ和约23.3°2-θ处；和
(b)XRPD图谱，其与图15中所示基本上相同。
实例
在整个实例中使用以下缩写：
A％-基于HPLC分析的面积百分比
HPLC-高效液相色谱
1H NMR-质子核磁共振
MeOH-甲醇
EtOH-乙醇
EtOAc-乙酸乙酯
DMSO-二甲基亚砜
NaBH(OAc)3-三乙酰氧基硼氢化钠
DIPEA-N,N-二异丙基乙胺
MTBE-甲基叔丁基醚实例1：化合物1的小规模无钯合成方案1.
步骤1a-1：化合物1c-甲基-2-(4-((((1R,2R)-2-氨基环己基)-氨基)甲基)苯基)乙酸酯的合成
在15分钟内向在50℃的(1R,2R)-(–)-反式-1,2-二氨基环己烷(化合物1a，200g，1.75mol)在EtOH(6L，30mL/g)中的混合物中依次分批添加2-(4-甲酰基苯基)乙酸甲酯(化合物1b，310g，1.74mol)和NaBH(OAc)3(730g，3.31mol)，维持温度低于60℃。将所得混合物搅拌2小时，然后冷却至20℃，通过过滤去除残余固体，并将母液在真空中浓缩，然后通过硅胶色谱法(3％ MeOH 7M NH3，在CH2Cl2中)纯化，以得到化合物1c(240g，0.87mol，产率50％，96A％HPLC)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):7.28(d,J＝8.1Hz,2H),7.19(d,J＝8.1Hz,2H),3.80(d,J＝13.5Hz,1H),3.64(s,2H),3.61(s,3H),3.59(d,J＝13.6Hz,1H),2.29–2.23(m,1H),2.05–1.93(m,2H),1.79–1.73(m,1H),1.68–1.54(m,2H),1.27–0.85(m,4H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6):δ172.0,140.8,132.7,129.4,128.3,63.5,55.3,52.0,50.5,40.4,36.1,31.2,25.5,25.4。针对C16H24N2O2[M+H]+277.1911计算的HRMS(m/z)，发现值277.1912。
步骤1a-2：化合物1e-二叔丁基-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)(4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸酯的合成
向在50℃的化合物1c(225g，0.81mol)和DIPEA(842g，6.50mol)在CH3CN(2.3L，10mL/g)中的混合物中添加化合物1d(556g，2.84mol)，并搅拌18小时。将CH3CN溶剂切换为EtOAc(2.5L，11mL/g)，然后将有机溶剂用H2O(3×400mL，2.1mL/g)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，在真空中去除溶剂，并通过硅胶色谱法(在正庚烷中的20％EtOAc)纯化，以得到化合物1e(400g，0.65mol，产率79％，98A％HPLC)。1H NMR (400MHz,DMSO-d6):7.33(d,J＝8.1Hz,2H),7.16(d,J＝8.1Hz,2H),4.50(s,2H),3.90(d,J＝13.5Hz,1H),3.60(s,3H),3.56(d,J＝13.5Hz,1H),3.41,3.34(ABq,J＝16.0Hz,4H),3.27,3.19(ABq,J＝16.6Hz,2H),2.75–2.65(m,1H),2.56–2.50(m,1H),1.95–1.87(m,2H),1.66–1.56(m,2H),1.39(s,18H),1.35(s,9H),1.30–1.27(m,1H),1.06–0.97(m,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3):δ172.1,171.6,139.1,132.3,129.4,128.9,80.2,63.6,60.9,54.3,53.2,52.7,51.9,40.9,29.3,28.4,28.1,25.8,25.7。针对C34H54N2O8[M+H]+619.3953计算的HRMS(m/z)，发现值619.3952。
步骤1a-3：化合物1f-2-(4-((((1R,2R)-2-(双(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)环己基)(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)甲基)苯基)乙酸的合成
向在0℃的化合物1e(353g，0.60mol)在THF(3L，8mL/g)中的溶液中添加1M KOH水溶液(67.5g,1.2mol，在1.2L H2O中)，同时维持温度低于10℃。将所得混合物搅拌24小时，然后将pH用1M HCl水溶液调节为5至6，维持温度低于10℃。将溶剂由THF切换为CH2Cl2(3.8L，10mL/g)，然后分离各层，将有机溶剂用25％ NaCl水溶液(1.85L，5mL/g)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在40℃下在真空中浓缩，以得到化合物1f(327g，0.54mol，产率95％，98A％HPLC)。1H NMR(400MHz,CDCl3):9.10(s,1H),7.38(d,J＝7.9Hz,2H),7.22(d,J＝7.8Hz,2H),4.09(d,J＝13.4Hz,1H),3.83(d,J＝13.4Hz,1H),3.61(s,2H),3.48(s,2H),3.35(s,4H),2.76–2.65(m,2H),2.14(d,J＝12.2Hz,1H),2.00(d,J＝9.7Hz,1H),1.73–1.64(m,2H),1.43(s,18H),1.40(s,9H),1.28–1.18(m 1H),1.13–1.03(m,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3):δ172.6,171.4,170.5 165.2,137.3,131.7,130.4,127.9,84.6,82.2,65.2,60.9,58.5,55.9,49.8,41.5,31.1,28.1,27.9,26.0,25.4,24.5,24.2。针对C33H52N2O8[M+H]+605.3796计算的HRMS(m/z)，发现值605.3790。
步骤1a-4：化合物1h-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)-氮烷二基)二乙酸二叔丁酯的合成
向在25℃的化合物1f(180g，0.30mol)和2,3,5,6-四氟苯酚(59g，0.36mol)在CH2Cl2(1.8L，10mL/g)中的混合物中添加EDCI(70g，0.45mol)，并搅拌16小时。将混合物冷却至0℃，用1M NaHCO3水溶液(3×1.8L，10mL/g)和25％ NaCl水溶液(900mL，5mL/g)洗涤，将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并在真空下去除溶剂，以得到化合物1h(216g，产率96％，93A％HPLC)。1H NMR(400MHz,CDCl3):7.39(d,J＝7.8Hz,2H),7.21(d,J＝7.9Hz,2H),6.95–6.86(m,1H),3.97(d,J＝13.6Hz,1H),3.87(s,2H),3.62(d,J＝13.6Hz,1H),3.42,3.37(ABq,J＝16.8Hz,4H),3.30,3.20(ABq,J＝16.8Hz,2H),2.70–2.60(m,1H),2.52–2.45(m,1H),2.01–1.93(m,2H),1.65–1.57(m,2H),1.36(s,18H),1.34(s,9H),1.21–0.94(m,4H)。13C NMR(101MHz,CDCl3):δ172.0,171.6,167.5,146.0(dtd,J＝248.5,11.9,4.2Hz),140.6(dddd,J＝250.8,15.2,4.6,2.1Hz),140.0,130.5,129.7,128.9,103.2(t,J＝22.8Hz),80.2,63.6,61.0,54.2,53.4,53.1,52.7,39.9,29.2,28.4,28.1,25.8,25.7。针对C39H52F4N2O8[M+H]+753.3733计算的HRMS(m/z)，发现值753.3744。
步骤1a-5：化合物1-2,2'-(((1R,2R)-2-((羧甲基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸的合成
在20℃将化合物1h(210g，0.28mol)溶解于TFA(2.1L，10mL/g)中，并搅拌4小时。将溶液在40℃在真空下浓缩，并通过制备型HPLC纯化，以得到化合物1(95g，产率59％，0.16mol，99A％HPLC，99％ee)。1H NMR(400MHz,CD3OD)：7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.44(d,J＝8.0,2H),7.43–7.34(m,1H),4.59(br s,1H),4.09(s,3H),3.94–3.33(br s,3H),3.52(d,J＝16.4Hz,2H),3.28–3.06(m,3H),2.29(d,J＝12.3Hz,1H),2.19(d,J＝10.5Hz,1H),1.92–1.77(m,2H),1.62–1.40(m,1H),1.38–1.19(m,3H).13C NMR(101MHz,CD3OD):δ172.2,171.9,169.7,167.5,146.1(dtd,J＝247.5,12.2,2.8Hz),140.5(ddm,J＝250,16.2Hz),130.9,130.7,129.9,129.4,103.4(t,J＝22.2Hz),62.4,61.1,50.9,40.0,38.9,25.1,24.2,24.0。针对C27H28F4N2O8[M+H]+585.1855计算的HRMS(m/z)，发现值585.1854。
实例2：化合物1的大规模无钯合成
将方案1应用于以下合成。
步骤1b-1：化合物1c-甲基-2-(4-((((1R,2R)-2-氨基环己基)-氨基)甲基)苯基)乙酸酯的合成
向100L夹套反应器中添加化合物1b(2.20kg，12.35mol，1当量)、化合物1a(1.41kg，12.35mol，1当量)和EtOH(44L，20mL/g)。将混合物温度调节至40℃至50℃。在40℃至50℃将NaBH(OAc)3(5.28kg，24.91mol，2当量)分批添加至混合物中。然后将反应混合物在40℃至50℃搅拌2小时。通过HPLC监测反应(6A％化合物1b，77A％化合物1c)。将反应混合物的温度调节至20℃至30℃。然后过滤该反应混合物，并将滤饼用EtOH(5L，2.3mL/g)洗涤。将滤液在45℃以下在真空下浓缩至干。将粗制油状产物通过硅胶柱色谱法(DCM/MeOH(7MNH3)＝100/0至30/1(v/v))纯化。收集含有产物的级分，并在45℃以下在真空下浓缩至干。获得1.75kg的油状化合物1c，其纯度为95.4A％HPLC，且产率为51％。
步骤1b-2：化合物1e-二叔丁基-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)(4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸酯的合成
向50L夹套反应器中添加化合物1c(1.70kg，6.15mol，1当量)、CH3CN(17L，10mL/g)和二异丙基乙胺(DIPEA，6.40kg，49.52mol，8.0当量)。将混合物的温度调节至40℃至50℃。然后在40℃至50℃在三小时内将化合物1d(4.20kg，21.53mol，3.5当量)分3批添加至混合物中。将反应混合物在40℃至50℃搅拌18小时。通过HPLC监测反应(0A％化合物1c，92A％化合物1e)。将混合物在45℃以下在真空下浓缩至干。然后将乙酸乙酯(17L，10mL/g)添加至混合物中。将混合物用H2O(5L，3mL/g)洗涤三次。将有机层分离，并经Na2SO4(2.50kg)干燥。然后过滤混合物，并将滤饼用乙酸乙酯(4L，2.4mL/g)洗涤。将滤液合并，并在45℃以下在真空下浓缩至干。将粗产物通过硅胶柱色谱法(乙酸乙酯/正庚烷＝0/100至1/5(v/v))纯化。收集含有产物的级分，并在真空下浓缩至干。获得2.75kg的油状化合物1e，其纯度为97.4A％HPLC，且产率为72％。
步骤1b-3：化合物1f-2-(4-((((1R,2R)-2-(双(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)环己基)(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)甲基)苯基)乙酸的合成
向50L夹套反应器中添加化合物1e(2.60kg，4.20mol，1当量)和THF(26L，10mL/g)。将反应混合物的温度调节至0℃至10℃。然后在0℃至10℃在4小时内将KOH水溶液(8.6mol，2当量，0.48kg KOH在H2O(8.4L)中的溶液，3mL/g)分4批添加至反应混合物中。将反应混合物在0℃至10℃搅拌24小时。通过HPLC监测反应(1A％化合物1e，95A％化合物1f)。将反应混合物的pH在0℃至10℃用1M HCl水溶液(10kg)调节至5至6。然后将混合物在40℃以下在真空下浓缩以去除THF。将反应混合物用DCM(25L，9.5mL/g)萃取两次。将有机层合并，并经Na2SO4(2.50kg)干燥，经硅胶垫(2.50kg)过滤，然后将滤饼用DCM(8L，3.1mL/g)洗涤。将滤液合并，并在45℃以下在真空下浓缩至干。获得2.20kg浅黄色固体状化合物1f，其纯度为98A％HPLC，产率为87％。
步骤1b-4：化合物1h-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)-氮烷二基)二乙酸二叔丁酯的合成
向50L夹套反应器中添加化合物1f(2.00kg，3.31mol，1当量)、化合物1g(0.72kg，4.34mol，1.3当量)和DCM(21L，10.5mL/g)。将反应混合物的温度调节至20℃至30℃。将EDCI(0.81kg，4.23mol，1.3当量)分批添加至反应混合物中。将反应混合物温度调节至20℃至30℃，并搅拌10小时。通过HPLC监测反应(2A％化合物1f，98A％化合物1h)。将反应混合物温度调节至0℃至10℃，然后在0℃至10℃用0.5M NaHCO3水溶液(16kg)洗涤五次。将两层分离，并通过HPLC监测有机层(0.3A％SM4，93A％D)。有机层经Na2SO4(2kg)干燥，经硅胶垫(2kg)过滤，并将滤饼用DCM(17L，8.5mL/g)洗涤。将滤液合并，并在35℃以下在真空下浓缩至约4kg，以获得粗化合物1h(2.49kg)，其纯度为95A％，产率为100％。
步骤1b-5：化合物1-2,2'-(((1R,2R)-2-((羧甲基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸的合成
向50L夹套反应器中添加粗化合物1h(2.49kg)和TFA(41kg，10mL/g)。将反应混合物温度调节至20℃至30℃，并搅拌16小时。通过HPLC监测反应(0A％化合物1h，94A％化合物1)。然后将反应混合物在45℃以下在真空下浓缩。获得6kg粗化合物1，其为油状物(1.93kg)，纯度为91A％HPLC。
将粗化合物1通过制备型HPLC(移动相A：0.01％ TFA水溶液(v/v)；移动相B：乙腈)纯化，并将经纯化的产物冷冻干燥，以得到白色固体状化合物1，其纯度为98A％HPLC，产率为51％(经两步骤)。
(注：制备型HPLC级分中的化合物1不稳定，其需要立即冷冻以冷冻干燥。固体中的残余TFA为0.1当量的E)
实例3：化合物2的大规模合成
方案2
步骤2-1：化合物1c-甲基-2-(4-((((1R,2R)-2-氨基环己基)-氨基)甲基)苯基)乙酸酯的合成
向3L夹套反应器中添加50g化合物1b和1500mL EtOH。将混合物加热至45℃至50℃。然后添加化合物1a(41.66g，1.3当量)。将混合物在45℃至50℃搅拌10分钟。然后添加NaBH(OAc)3(178.42g，3.0当量)。将混合物在45℃至50℃搅拌2小时。通过HPLC监测反应(77A％化合物1c，8A％化合物1b)。将反应过滤并用150mL EtOH洗涤。向滤液中添加1000mL水，并在30℃至35℃浓缩以去除EtOH。添加另外的500mL水和500mL MeTHF，并将混合物搅拌10分钟，然后分离各层。将水相用NH3·H2O调节至pH为9.1，并用250mL DCM萃取两次。将DCM层合并，经Na2SO4干燥并过滤，以得到882g化合物1c，其为DCM溶液，经校正的产率为66％(89.3A％，分析为5.78重量％)。
步骤2-2：化合物1c的乳清酸盐的合成
将500mL MeCN添加至上述化合物1c的DCM溶液中。将2,4-二氧代-1H-嘧啶-6-甲酸(28.79g，1.0当量)添加至溶液中。将反应在20℃至25℃搅拌16小时。然后过滤混合物，并将滤饼用100mL MeCN洗涤。将滤饼在30℃至35℃在真空下干燥20小时。在两个步骤中，获得79.29g化合物1c的乳清酸盐，其从化合物2b的两步经校正的产率为64％(纯度为97.1A％HPLC，分析为98.2重量％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.36(d,J＝7.9Hz,2H),7.18(d,J＝7.9Hz,2H),5.80(s,1H),3.86(d,J＝13.4Hz,1H),3.66-3.57(m,6H),2.78(dt,J＝3.9,10.9Hz,1H),2.39(dt,J＝3.7,10.3Hz,1H),2.13(br d,J＝11.7Hz,1H),2.02(br d,J＝11.6Hz,1H),1.66(br d,J＝9.0Hz,2H),1.44-1.28(m,1H),1.26-0.98(m,3H)。
步骤2-3：化合物1e-二叔丁基-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)(4-(2-甲氧基-2-氧乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸酯的合成
向5L夹套反应器中添加化合物1c的乳清酸盐(135.70g，分析为95.8重量％)、1300mL甲苯和1300mL水。然后添加K2CO3(124.63g，3.0当量)，并将混合物在20℃至25℃搅拌0.5小时。添加化合物2d(205.22g，3.5当量)。将混合物加热至40℃至45℃，并在40℃至45℃搅拌16小时。通过HPLC监测反应(93.8A％B，未剩余化合物1c)。过滤反应混合物以去除乳清酸，并将滤饼用390mL甲苯洗涤。分离各层。将有机层在20℃至25℃用NaOH水溶液(1当量，12.0g NaOH在1300mL H2O中)洗涤0.5小时，持续3次，以去除残余化合物2d。将有机层浓缩至干。获得206.8g油状化合物1e，其纯度为96.6A％HPLC，分析为81重量％，且经校正的产率为90％。残余甲苯为8.0重量％，且残余化合物2d为5.2重量％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.34(d,J＝7.9Hz,2H),7.21-7.12(m,2H),3.91(d,J＝13.6Hz,1H),3.68-3.53(m,6H),3.47-3.31(m,4H),3.24(q,J＝16.5Hz,2H),2.75-2.63(m,1H),2.01-1.83(m,2H),1.60(brd,J＝6.2Hz,2H),1.48-1.32(m,27H),1.25-0.96(m,5H)。
步骤2-4：化合物1f盐酸盐-2-(4-((((1R,2R)-2-(双(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)环己基)(2-(叔丁氧基)-2-氧乙基)氨基)甲基)苯基)乙酸的合成
向5L夹套反应器中添加185.19g化合物1e(通过QNMR的分析为81重量％)，并添加1500mL THF。将混合物冷却至0℃至5℃。然后在0℃至5℃将KOH水溶液(2.5当量34g KOH，在450mL水中)缓慢添加至反应混合物中。将反应混合物在0℃至5℃搅拌40小时。通过HPLC监测反应(95.2A％化合物1f，未剩余化合物1e)。将混合物用1M HCl水溶液(约700mL，4.5v)调节至pH为2.0。混合物用1500mL DCM萃取。将有机层蒸馏并用DCM交换两次(每次750mLDCM)。获得509.4g化合物1f在DCM中的溶液，经校正的产率为107％。(分析为30.7重量％，残余THF为5.5重量％，残余甲苯为1.1重量％)。
在2L夹套反应器中添加508.9g C在DCM中的溶液(1.7v DCM)。添加230mL DCM(1.5v)和230mL MTBE(1.5v)。将混合物在25℃搅拌为澄清溶液。将230mL MTBE(1.5v)添加至该混合物中。添加1.7g C种子。将混合物在25℃搅拌21小时。在25℃在8小时内添加1400mL MTBE(9v)。将混合物在25℃搅拌40小时。过滤该混合物，并将滤饼用940mL(DCM:MTBE＝1:4，v:v)洗涤3次。将滤饼在25℃干燥24小时。获得154.2g化合物1f盐酸盐，其纯度为98.0A％HPLC，分析为90.2重量％，且从化合物1e的经校正的产率为90％。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ＝9.16-9.14(m,1H),8.97(br s,1H),7.65-7.58(m,2H),7.36-7.26(m,2H),4.73-4.55(m,2H),4.41-4.07(m,1H),4.00-3.81(m,1H),3.78-3.65(m,2H),3.66-3.33(m,2H),3.25-3.03(m,2H),2.81-2.50(m,2H),2.20-1.70(m,3H),1.60-1.33(m,28H),1.26-1.12(m,2H)
步骤2-5：化合物1h盐酸盐-2,2'-(((1R,2R)-2-((2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)-氮烷二基)二乙酸二叔丁酯的合成
向1L夹套反应器中添加33.26g化合物1f盐酸盐(分析为90.2重量％)和化合物1g(9.89g，1.2当量)。将混合物用N2脱气3次。将300mL DCM添加至混合物中。将混合物在N2保护下冷却至0℃至5℃。添加EDCI(13.31g，1.4当量)。将混合物在0℃至5℃搅拌20小时。通过HPLC监测反应(89.2A％化合物1g，未剩余化合物1f)。添加300mL水，并将混合物加热至20℃至25℃。分离各层。有机层中的KF为0.38％。将有机层经由Al2O3滤筒(Al2O3，75.3g)再循环5小时，并将KF降低至0.07％。将有机层浓缩至约120mL，以获得化合物1h盐酸盐在DCM中的溶液(37.35g，纯度94.7A％)。
步骤2-6：化合物2-2,2'-(((1R,2R)-2-((羧甲基)(4-(2-氧代-2-(2,3,5,6-四氟苯氧基)乙基)苄基)氨基)环己基)氮烷二基)二乙酸的合成
向在N2保护下的1L夹套反应器中，添加以上获得的化合物1h盐酸盐溶液。添加4NHCl/二噁烷(370mL，29.8当量，通过分子筛预干燥)。将混合物加热至55℃至60℃，并在55℃至60℃搅拌3小时。通过HPLC监测反应(92.8A％化合物2，未剩余化合物2h)。将反应物冷却至20℃至25℃，过滤，并将滤饼用50mL DCM洗涤。将滤饼在45℃至50℃在真空下干燥16小时。获得26.35g化合物2，其纯度为97.5A％HPLC，分析为79.9重量％，且经校正的产率为70％。残余氯化物为5.2重量％。E:HCl＝1:1。残余二噁烷为11重量％。E:二噁烷＝1:0.9。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ＝7.95(tt,J＝7.4,10.9Hz,1H),7.78-7.57(m,2H),7.42(br d,J＝7.9Hz,1H),7.33-7.15(m,1H),4.50(br d,J＝12.7Hz,1H),4.54-4.42(m,1H),4.42-4.19(m,3H),3.89(br d,J＝17.1Hz,2H),3.66-3.50(m,9H),3.50-2.96(m,4H),2.23(br d,J＝10.5Hz,1H),2.07(br s,1H),1.72(br d,J＝18.7Hz,2H),1.55-1.12(m,4H)。
实例4：盐筛选和结晶产物的表征
从油状化合物1c开始，共在三种溶剂体系中使用17种酸进行51次盐筛选实验(参见下表1)。获得5个结晶匹配结果：A型富马酸盐；A型L-酒石酸盐；以及A型、B型和C型乳清酸盐。L-酒石酸盐匹配结果被认为在空气中随时间推移而降解。通过X射线功率衍射(XRPD)、热重分析(TGA)、差示扫描量热法(DSC)和核磁共振(NMR)(参见图1至5和图9至11)表征富马酸盐和乳清酸盐。推测来自1,5-萘二磺酸、没食子酸和龙胆酸系统的三个结晶样品为降解产物。基于这些特性，通过浆料以约200mg规模重新制备A型富马酸盐和A型乳清酸盐，并通过如上所述的相同技术重新表征(参见图6至8和图12至15)。将干XRPD样品在真空下干燥至少2小时。
表1.盐筛选结果。
盐/溶剂系统 丙酮 2-MeTHF CH3CN/H2O(19:1，v/v)
空白 凝胶* 凝胶* 凝胶*
HCl 凝胶* 凝胶* 凝胶*
柠檬酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
马来酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
富马酸 A型富马酸盐 无定形 凝胶*
L-马来酸 凝胶* 无定形** 凝胶*
L-酒石酸 无定形 无定形 A型L-酒石酸盐**
己二酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
琥珀酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
粘液酸 无定形 无定形 凝胶*
对甲苯磺酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
4-氨基苯甲酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
没食子酸 降解产物** 凝胶* 凝胶*
乳清酸 A型乳清酸盐 B型乳清酸盐 A型乳清酸盐
1,5-萘二磺酸 降解产物* 凝胶* 凝胶*
苯磺酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
肉桂酸 凝胶* 凝胶* 凝胶*
*：在5℃从浆液获得澄清溶液，因此在室温进行缓慢蒸发
**：在5℃从浆料获得。

Claims (89)

1.一种制备式(I)化合物：
其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，其中所述方法包括：
(a)步骤(1-1)，其包括使式(Ia)化合物：
或其非对映体与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
或其非对映体；
(b)步骤(1-2)，其包括使式(Ic)化合物或其盐与式(Id)化合物：
在碱存在下且在溶剂中进行反应，
以形成式(Ie)化合物：
或其非对映体；
(c)步骤(1-3)，其包括使式(Ie)化合物与碱在溶剂中进行反应，以形成式(If)化合物：
或其非对映体；
(d)步骤(1-4)，其包括使式(If)化合物与式(1g)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
或其非对映体；以及
(e)步骤(1-5)，其包括使所述式(Ih)化合物与酸进行反应，以形成式(I)化合物、其非对映体、其盐或其溶剂化物、或任何前述者的组合，
其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；
R3为卤代；且
R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(1-1)中的所述溶剂包括醇。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述步骤(1-1)中的所述溶剂为乙醇。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-1)中的所述还原剂为氢化物。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述步骤(1-1)中的所述还原剂为NaBH(OAc)3。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中步骤(1-1)进一步包括通过柱色谱来纯化所述式(Ic)化合物。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-2)中的所述溶剂为极性有机溶剂。
8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(1-2)中的所述溶剂为CH3CN。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-2)中的所述碱为有机碱。
10.根据权利要求9所述的方法，其中步骤(1-2)中的所述碱为胺碱。
11.根据权利要求10所述的方法，其中步骤(1-2)中的所述碱为N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-2)进一步包括通过柱色谱来纯化所述式(1e)化合物。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-3)中的所述溶剂为水性溶剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中步骤(1-3)中的所述溶剂进一步包含四氢呋喃(THF)。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-3)中的所述碱为KOH。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-4)中的所述溶剂为卤化烃。
17.根据权利要求16所述的方法，其中步骤(1-4)中的所述溶剂为CH2Cl2。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述羧基活化试剂为1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-5)中的所述酸为三氟乙酸。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述步骤(1-5)进一步包括通过制备型高效液相色谱来纯化所述式(Ih)化合物。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中R1为甲基。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中R2为叔丁基。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中R3为Br。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中R4、R5、R6和R7各自为F。
25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述式(I)化合物为化合物1：
26.一种制备式(I)化合物：
其非对映体、其盐、或其溶剂化物、或任何前述者的组合的方法，其中所述方法包括：
(a)步骤(2-1)，其包括使式(Ia)化合物：
与式(Ib)化合物：
在溶剂中且在还原剂存在下进行反应，以形成式(Ic)化合物：
(b)步骤(2-2)，其包括使式(Ic)化合物与酸进行反应，以产生式(Ic)的盐；
(c)步骤(2-3)，其包括使所述式(Ic)的盐与式(Id)化合物：
在碱存在下且在溶剂中进行反应，
以形成式(Ie)化合物：
其非对映体、或其盐；
(d)步骤(2-4)，其包括使式(Ie)化合物与碱在溶剂中进行反应，以形成式(2f)化合物：
其非对映体、或其盐；以及
(e)步骤(2-5)，其包括使式(If)化合物或其盐与式(Ig)化合物：
在溶剂中且在羧基活化试剂存在下进行反应，以形成式(Ih)化合物：
其非对映体、或其盐；以及
(f)步骤(2-6)，其包括使所述式(Ih)化合物与酸进行反应，以形成式(I)化合物、其非对映体、其盐、其溶剂化物、或任何前述者的组合，
其中
R1和R2各自独立地为C1-C6烷基；
R3为卤代；且
R4、R5、R6和R7各自独立地为卤代或氢。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述步骤(2-1)中的所述溶剂包括醇。
28.根据权利要求27所述的方法，其中步骤(2-1)中的所述溶剂为乙醇。
29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-1)中的所述还原剂包括氢化物。
30.根据权利要求29所述的方法，其中步骤(2-1)中的所述还原剂为NaBH(OAc)3。
31.根据权利要求26至30中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-2)中的所述酸为乳清酸。
32.根据权利要求26至31中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-2)提供具有以下结构的式(Ic)的盐：
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述步骤(2-2)包括使所述式(Ic)的盐或其非对映体结晶作为乳清酸盐。
34.根据权利要求26至30中任一项所述的方法，其中步骤(2-2)中的所述酸为富马酸。
35.根据权利要求26至30或34中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-2)提供具有以下结构的式(Ic)的盐：
36.根据权利要求34或35所述的方法，其中所述步骤(2-2)进一步包括将所述式(Ic)的盐或其非对映体结晶作为富马酸盐。
37.根据权利要求26至36中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-3)中的所述碱为K2CO3。
38.根据权利要求26至37中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-3)中的所述溶剂包括甲苯。
39.根据权利要求26至38中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-3)中的所述溶剂包括水。
40.根据权利要求26至39中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-4)中的所述碱为KOH。
41.根据权利要求26至40中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-4)中的所述溶剂包括THF。
42.根据权利要求26至41中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-4)中的所述溶剂包括水。
43.根据权利要求26至42中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-4)提供作为HCl盐的式(If)的盐，并且其中所述步骤(2-4)进一步包括使所述式(If)的盐结晶。
44.根据权利要求26至43中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-5)中的所述溶剂为卤化烃。
45.根据权利要求44所述的方法，其中步骤(2-5)中的所述溶剂为CH2Cl2。
46.根据权利要求26至45中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-5)的所述羧基活化试剂为EDCI。
47.根据权利要求26至46中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-6)中的所述溶剂为二噁烷。
48.根据权利要求26至47中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-6)中的所述酸为HCl。
49.根据权利要求26至48中任一项所述的方法，其中所述步骤(2-6)提供具有以下结构的式(I)的盐或其溶剂化物：
50.根据权利要求49所述的方法，其中所述步骤(2-6)进一步包括使所述式(I)的盐结晶。
51.根据权利要求26至50中任一项所述的方法，其中R1为甲基。
52.根据权利要求26至51中任一项所述的方法，其中R2为叔丁基。
53.根据权利要求26至52中任一项所述的方法，其中R3为Br。
54.根据权利要求26至50中任一项所述的方法，其中R4、R5、R6和R7为F。
55.根据权利要求26至54中任一项所述的方法，其中式(I)的溶剂化物的盐具有以下结构：
56.一种组合物，其包含式(I)化合物的一种或多种非对映体、其盐或其溶剂化物：
其通过根据权利要求1至25中任一项所述的方法产生。
57.根据权利要求56所述的组合物，其中所述组合物包含至少约90％(重量/重量)的式(I)化合物的反式非对映体。
58.根据权利要求57所述的组合物，其中所述反式非对映体具有以下结构：
59.根据权利要求56至58中任一项所述的组合物，其中R4、R5、R6和R7为F。
60.一种式(I)的盐或其溶剂化物，其中所述式(I)的盐具有以下结构：
其通过根据权利要求26至55中任一项所述的方法产生。
61.根据权利要求60所述的盐，其中R4、R5、R6和R7为F。
62.一种式(Ie)化合物：
其非对映体、或其盐，
其中R1和R2各自独立地为C1-C6烷基。
63.一种式(Ic)化合物：
其非对映体、或其盐，
其中R1为C1-C6烷基。
64.一种组合物，其包含络合物，所述络合物包含使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物以及金属卤化物。
65.根据权利要求64所述的组合物，其中所述金属卤化物为{Al18F}2+。
66.根据权利要求65所述的组合物，其中所述组合物中至少90％(重量/重量)的所述化合物具有以下结构：
67.根据权利要求66所述的组合物，其中R4、R5、R6和R7为F。
68.根据权利要求64至67中任一项所述的组合物，其进一步包含多肽，其中所述络合物与所述多肽缀合。
69.根据权利要求68所述的组合物，其中所述多肽为抗体或抗体片段。
70.根据权利要求69所述的组合物，其中所述抗体片段选自由以下项组成的组：VHH、scFv、微抗体、Fab、Fab'和Fv片段。
71.根据权利要求68所述的组合物，其中所述多肽为非抗体支架蛋白。
72.根据权利要求71所述的组合物，其中所述非抗体支架蛋白选自由以下项组成的组：亲和体、affilin、打结素、纤连蛋白、抗运载蛋白、atrimer、高亲和性多聚体、FN3支架、fynomer、Kunitz结构域、pronectin、OBody和DARPin。
73.根据权利要求64至72中任一项所述的组合物，其中所述组合物为适合施用于受试者的药物组合物。
74.根据权利要求73所述的组合物，其中所述药物组合物适合静脉内施用。
75.根据权利要求73或74所述的组合物，其中所述受试者为人。
76.一种制备包含多肽和18F放射性核素的经标记的试剂的方法，所述方法包括：
(a)使所述多肽与使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物在允许所述络合物与所述多肽缀合的条件下接触，以提供缀合物；以及
(b)使所述缀合物与包含18F的氟化铝络合物接触，以提供所述经标记的试剂。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述多肽为抗体或抗体片段。
78.根据权利要求77所述的方法，其中所述抗体片段选自由以下项组成的组：VHH、scFv、微抗体、Fab、Fab'和Fv片段。
79.根据权利要求76所述的方法，其中所述多肽为非抗体支架蛋白。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述非抗体支架蛋白选自由以下项组成的组：亲和体、affilin、打结素、纤连蛋白、抗运载蛋白、atrimer、高亲和性多聚体、FN3支架、fynomer、Kunitz结构域、pronectin、OBody和DARPin。
81.一种具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中所述盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.5°2-θ、约13.9°2-θ、约16.6°2-θ、约23.4°2-θ和约25.6°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图1中的“A型乳清酸盐”图谱基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约3.3％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(e)显示在约172.8℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图2中所示基本上相同；
(g)在约5.68ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；或
(h)1H核磁共振谱，其与图3中所示基本上相同。
82.一种具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中所述盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.2°2-θ、约14.0°2-θ、约15.2°2-θ、约22.7°2-θ和约25.0°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图1中的“C型乳清酸盐”图谱基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约2.6％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(e)显示在约161.7℃处的放热峰和在约182.9℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图4中所示基本上相同；
(g)在约5.69ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图5中所示基本上相同。
83.一种具有以下结构的化合物的结晶盐：
其中所述盐具有以下中的至少一者：
(a)在约.3°2-θ、约7.8°2-θ、约9.7°2-θ、约13.9°2-θ、约16.7°2-θ、约21.4°2-θ、约23.4°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图6中所示的“湿样品”或“干样品”基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与150℃之间约4.8％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(e)显示在约178.1℃处的放热峰和在约185.6℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图7中所示基本上相同；
(g)在约5.68ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图8中所示基本上相同。
84.一种具有以下结构的化合物的结晶的盐：
其中所述盐具有以下中的至少一者：
(a)在约7.9°2-θ、约15.8°2-θ、约18.6°2-θ、约19.3°2-θ、约20.1°2-θ、约21.0°2-θ和约24.7°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；
(b)与图9中所示的“湿样品”或“干样品”基本上相同的X射线粉末衍射图谱；
(c)显示在20℃与140℃之间约2.4％质量损失的热重分析热谱图；
(d)热重分析热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(e)显示在约154.7℃处的吸热峰的差示扫描量热法热谱图；
(f)差示扫描量热法热谱图，其与图10中所示基本上相同；
(g)在约6.39ppm处具有特征峰的1H核磁共振谱；以及
(h)1H核磁共振谱，其与图11中所示基本上相同。
85.一种具有以下结构的化合物的盐的结晶的溶剂化物：
其中所述盐的所述溶剂化物具有以下中的至少一者：
(a)在约6.8°2-θ、约17.6°2-θ、约20.3°2-θ、约22.2°2-θ和约23.3°2-θ处具有特征峰的X射线粉末衍射图谱；和
(b)X射线粉末衍射图谱，其与图15中所示基本上相同。
86.一种约束络合剂，其包含
(i)使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物；或
(ii)根据权利要求81至85中任一项所述的结晶的盐或溶剂化物。
87.一种标记部分，其包含可检测标记，所述可检测标记包含与接头缀合或螯合的金属卤化物，所述接头包含
(i)使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物；或
(ii)根据权利要求81至85中任一项所述的结晶的盐或溶剂化物。
88.一种标记缀合的标志物-结合物蛋白，其包含可检测标记，所述可检测标记包含通过接头与所述标志物-结合物蛋白连接的金属卤化物，所述接头包含
(i)使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物；或
(ii)根据权利要求81至85中任一项所述的结晶的盐或溶剂化物。
89.一种使分子可视化的方法，所述方法包括将所述分子暴露于包含可检测标记的标记缀合的标志物-结合物蛋白，所述可检测标记包含通过接头与所述标志物-结合物蛋白连接的金属卤化物，所述接头包含
(i)使用根据权利要求1至55中任一项所述的方法制备的化合物；或
(ii)根据权利要求81至85中任一项所述的结晶的盐或溶剂化物，其中所述标志物-结合物蛋白结合所述分子；以及
检测所述标记。
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