CN118103351A - 冠状病毒抑制剂 - Google Patents

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伊里娜·C·雅各布森
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Abstract

本发明提供式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物以及其在以下方法中的用途：抑制诺罗病毒和冠状病毒在生物样本或患者中的复制、减少生物样本或患者中诺罗病毒或冠状病毒的量，和治疗患者中的诺罗病毒和冠状病毒，所述方法包括向所述生物样本或患者给予安全且有效量的式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐。

Description

冠状病毒抑制剂
技术领域
本公开大体上涉及诺罗病毒(norovirus)和冠状病毒(coronavirus)复制的抑制剂，以及通过向需要治疗的患者给予所述抑制剂来治疗或预防诺罗病毒和冠状病毒感染的方法。
背景技术
诺罗病毒是涉及全世界非细菌性胃肠炎爆发的重要肠道病原体。诺罗病毒主要通过粪-口途径在人与人之间传播，但也会通过被污染的食物或水传播。由于病毒在环境中的持久性，也可能发生间接感染。人类诺罗病毒属于杯状病毒科(Caliciviridae)诺罗病毒属，且是具有正义单股RNA基因组的无包膜病毒。诺罗病毒株分类为七组。属于GI、GII和GIV组的病毒感染人类，而GII、GIII、GIV、GV、GVI和GVII NoV组在动物中加以描述。
冠状病毒是在人类中引起感冒至严重急性呼吸道综合征(severe acuterespiratory syndrome；SARS)的一系列疾病的常见病毒科。冠状病毒还可以在动物中引起多种疾病。冠状病毒是包膜的正股RNA病毒，其名称来源于其在电子显微照片中的特征性冠状外观。冠状病毒在网巢病毒目内分类为一科，所述病毒使用一组嵌套的mRNA进行复制。冠状病毒亚科进一步分类为四个属：α、β、γ和δ冠状病毒。人类冠状病毒(HCoV)属于这些属中的两种：α冠状病毒(包含HCoV-229E和HCoV-NL63)和β冠状病毒(包含HCoV-HKU1、HCoV-OC43、中东呼吸道综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus；MERS-CoV)、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndromecoronavirus；SARS-CoV)和SARS-CoV-2)。
2012年，沙特阿拉伯(Saudi Arabia)出现了一种新型冠状病毒，且被称为中东呼吸道综合征冠状病毒(MERS-CoV)。所报告的MERS-CoV感染病例中有约一半导致死亡，且所报告病例中的大部分出现在中老年男性中。所报告病例中仅少数涉及患有轻度呼吸道疾病的受试者。已发现MERS-CoV可能在人类之间传播，但非常有限。
鉴于这些病毒的广泛传播和潜在的健康影响，需要用于治疗诺罗病毒和冠状病毒感染的药物。
发明内容
本公开大体上涉及治疗诺罗病毒和冠状病毒感染的方法、抑制诺罗病毒和冠状病毒的复制的方法、减少诺罗病毒和冠状病毒的量的方法以及可用于所述方法的化合物和组合物。
本公开提供化合物和其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有式(I)的结构：
其中各RN独立地是H或C1-6烷基；各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的螺4元至8元杂环基，其任选地被C(O)ORN取代；R1b是氢、卤基、羟基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；n是0、1或2；各Rx独立地是卤基、C1-6烷基、C3-6碳环基或C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；m是0、1或2；各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；R2是C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基、被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C1-6羟烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代；R3a是H或C1-6烷基；且环A是C6-10环烷基、C6-10芳基或包括一个氮杂原子的5元至10元杂芳基，限制条件是当各R1a是氢或各R1a是甲基、环A是苯基、m是0或1、Ry是卤基且n是1时，则Rx不是氯，且限制条件是化合物不是：(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯；2-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(3-环己基-1-((4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(3-环己基-1-((4-(二乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；(E)-4-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-5-(2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯；3-(2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环己基)(苯基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-苯基丁酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氟苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；(4-甲基-1-((4-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-(4-氟苯基)丁酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯；或(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯。
还提供具有式(Ia)的结构的化合物和其药学上可接受的盐
其中各RN独立地是H或C1-6烷基；各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基；R1b是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；n是0、1或2；各Rx独立地是卤基或C1-6烷基；m是0、1或2；各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；R2是C1-6烷基或C1-6亚烷基-C5-8碳环基；且R3是CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代。
还提供具有式(Ib)的结构的化合物和其药学上可接受的盐
其中Rx是Cl、F、环丙基或苯基；Ry是F；m是0或1；R2是C4-5烷基、C3-5卤烷基、CH2C3-6碳环基或苯甲基，且所述碳环基任选地被甲基或乙基取代；且R3是CHO、C(O)C(O)NH2、C(O)C(O)NH环丙基或C(O)C(O)NH乙基，限制条件是，当Rx是Cl、m是0且R3是CHO、C(O)C(O)NH2或C(O)C(O)NH环丙基时，则R2不是2-甲基-丙基。
还提供向生物样本或患者给予安全且有效量的如本文所公开的化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)的化合物)或其药学上可接受的盐的方法。
本文还提供通过向所述生物样本或患者给予安全且有效量的如本文所公开的化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)的化合物)或其药学上可接受的盐而减少生物样本或患者中的诺罗病毒或冠状病毒的量的方法。
还提供治疗或预防患者的诺罗病毒或冠状病毒感染的方法，其包括向所述患者给予安全且有效量的如本文所公开的化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)的化合物)或其药学上可接受的盐。
还提供药物组合物，其包括如本文所公开的化合物(例如式(I)、(Ia)、(Ib)的化合物)或其药学上可接受的盐和药学上可接受的赋形剂、载剂、佐剂或媒剂。
还提供本文所描述的化合物的用途，其用于抑制或减少诺罗病毒或冠状病毒在生物样本或患者中的复制、用于减少生物样本或患者中诺罗病毒或冠状病毒的量，或用于治疗患者中的诺罗病毒或冠状病毒。
本文还提供本文所描述的化合物的用途，其用于制造药剂，所述药剂用于治疗患者的诺罗病毒或冠状病毒感染、用于减少生物样本或患者中诺罗病毒或冠状病毒的量或用于抑制诺罗病毒或冠状病毒在生物样本或患者中的复制。
具体实施方式
本文提供化合物和其在治疗或预防病毒感染(例如诺罗病毒或冠状病毒感染)中的用途。还提供本文所描述的化合物、或其药学上可接受的盐、或包括这类化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的组合物的用途，其用于抑制病毒在生物样本或患者中的复制、用于减少生物样本或患者中的病毒量(减少病毒滴度)和用于治疗患者的病毒感染。
除非另有指示，否则本文中所描绘的结构还意图包含结构的所有异构(例如对映异构、非对映异构、顺反异构、构形异构和旋转异构)形式。举例来说，除非具体指示仅异构体中的一种，否则本公开中包含每一不对称中心、(Z)和(E)双键异构体和(Z)与(E)构形异构体的R与S构形。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构、顺/反异构、构形异构和旋转异构混合物属于本公开的范围内。在一些情况下，本文所公开的化合物是立体异构体。“立体异构体”是指一个或多个立体异构中心的手性不同的化合物。立体异构体包含对映异构体和非对映异构体。本文所公开的化合物可能以单一立体异构体或立体异构体的混合物形式存在。除非另外讨论，否则本文中所示的化合物的立体化学指示相对立体化学，而非绝对立体化学。如本文中所指示，单一立体异构体、非对映异构体或对映异构体是指至少超过50％所指示立体异构体、非对映异构体或对映异构体且在一些情况下至少90％或95％所指示立体异构体、非对映异构体或对映异构体的化合物。
除非另有指示，否则本公开的化合物的所有互变异构形式在本公开的范围内。
另外，除非另有指示，否则本文所描绘的结构还意图包含仅在存在一个或多个经同位素增浓的原子的方面不同的化合物。举例来说，除了氢经氘或氚置换或碳经13C或14C增浓的碳置换外的具有本发明结构的化合物都在本公开的范围内。所述化合物适用作例如生物分析中的分析工具或探针。所述化合物(尤其氘类似物)还可以是治疗上适用的。
本公开的化合物在本文中通过其化学结构和/或化学名称定义。在通过化学结构与化学名称提及化合物且化学结构与化学名称矛盾时，化学结构决定化合物的属性。
化合物
本文提供了式(I)化合物和其药学上可接受的盐：
其中
各RN独立地是H或C1-6烷基；
各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，
或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的螺4元至8元杂环基，其任选地被C(O)ORN取代；
R1b是氢、卤基、羟基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；
n是0、1或2；
各Rx独立地是卤基、C1-6烷基、C3-6碳环基或C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；
m是0、1或2；
各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；
R2是C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；
R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基、被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C1-6羟烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代；
R3a是H或C1-6烷基；且
环A是C6-10环烷基、C6-10芳基或包括一个氮杂原子的5元至10元杂芳基，
限制条件是，当各R1a是氢或各R1a是甲基、环A是苯基、m是0或1、Ry是卤基且n是1时，则Rx不是氯，且
限制条件是，化合物不是：
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯；
2-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(3-环己基-1-((4-(二乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(E)-4-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-5-(2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯；
3-(2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环己基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-苯基丁酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氟苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(4-甲基-1-((4-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-(4-氟苯基)丁酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯；或
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯。
在一些实施例中，化合物和其药学上可接受的盐具有式(Ia)的结构：
其中
各RN独立地是H或C1-6烷基；
各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，
或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基；
R1b是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；
n是0、1或2；
各Rx独立地是卤基或C1-6烷基；
m是0、1或2；
各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；
R2是C1-6烷基或C1-6亚烷基-C5-8碳环基；且
R3是CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代。
如本文所用，术语“烷基”或“亚烷基”意谓饱和直链或支链烃。术语Cn意谓烷基具有“n”个碳原子。例如，C4烷基是指具有4个碳原子的烷基。C1-6烷基是指具有涵盖整个范围(即1至6个碳原子)以及所有子群(例如1至6个、2至6个、1至5个、2至6个、1至4个、2至5个、1个、2个、3个、4个、5个和6个碳原子)的碳原子数的烷基。具体实例包含但不限于甲基、乙基、异丙基、正丙基、仲丁基和叔丁基。
如本文所用，术语“卤素”和“卤基”意谓F、Cl、Br或I。
如本文所用，术语“卤烷基”是指其中一个或多个氢原子被卤素置换的烷基。这类基团包含但不限于氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1,1-二氟乙基、2-氟乙基、1-氯-2-氟甲基和2-氟异丁基。卤烷基可以进一步被取代或未被取代，且一些实施例涉及具有例如1至6个碳原子的卤烷基，诸如C1-6卤烷基。
术语“碳环”(或“碳环基”)是指非芳香族单环、稠合、桥联或螺环系统，其环原子是碳，且其可以是饱和的或具有一个或多个不饱和单元。碳环可以具有3至8个环碳原子，诸如3至6个环碳原子。在一些实施例中，碳原子数是3至6或5至8。在一些实施例中，碳原子数是6。“稠合”双环系统包括共享两个邻接环原子的两个环。桥联双环基团包括共享三个或四个相邻环原子的两个环。“螺”双环系统共享一个环原子。具体实例包含但不限于环己基、环戊基、环丙基和环丁基。碳环未被取代或如本文所描述被取代。
如本文所用，术语“杂环”(或“杂环基”)是指非芳香族单环、稠合、螺合或桥联环系统，其可以是饱和的或含有一个或多个不饱和单元，具有4至12个环原子，其中一个或多个(例如，一至三个，或一个、两个或三个)环原子是选自N、S和O的杂原子。在一些实施例中，杂环包括5至6个环成员。在一些实施例中，杂环包括5个环成员。在一些实施例中，杂环包括6个环成员。在一些实施例中，杂环是哌啶基。杂环的实例包含但不限于奎宁环基、哌啶基、哌嗪、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、三氮杂环庚烷基、氮杂环辛基、二氮杂环辛基、三氮杂环辛基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、异噻唑烷基、氧氮杂环辛基、氧氮杂环庚烷基、噻氮环庚烷基、噻氮环辛基、苯并咪唑酮基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、N-吗啉基(包含例如3-N-吗啉基、4-N-吗啉基)、2-N-硫代吗啉基、3-N-硫代吗啉基、4-N-硫代吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、吡咯烷-2-酮、1-四氢哌嗪基、2-四氢哌嗪基、3-四氢哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、1-吡唑啉基、3-吡唑啉基、4-吡唑啉基、5-吡唑啉基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、2-噻唑烷基、3-噻唑烷基、4-噻唑烷基、1-咪唑烷基、2-咪唑烷基、4-咪唑烷基、5-咪唑烷基、吲哚啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、苯并二硫杂环戊烷基、苯并二噻烷基、3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮基和1,3-二氢-咪唑-2-酮基。杂环未被取代或如本文所描述被取代。
如本文所描述，本公开的化合物可任选地被诸如一般说明或通过本公开的具体类别、亚类和物种所例示的一个或多个取代基取代。应了解，短语“任选地被取代”可与短语“被取代或未被取代”互换使用。一般来说，术语“被取代”无论是否放在术语“任选地”之后皆是指既定结构中的一个或多个氢基团被指定取代基的基团置换。除非另有指示，否则任选地被取代的基团可以在所述基团的每一可取代位置处具有取代基。当既定结构中超过一个位置可被超过一个选自指定群组的取代基取代时，在各位置处所述取代基可以是相同的或不同的。
在一些情况下，至少一个RN是H。在一些情况下，至少一个RN是C1-6烷基。在一些情况下，各RN是H。在一些情况下，至少一个RN是C1-6烷基，例如甲基。在一些情况下，各RN是C1-6烷基，例如甲基。
在一些情况下，至少一个R1a是氢。在一些情况下，各R1a是氢。
在一些情况下，至少一个R1a是卤基。在一些情况下，各R1a是卤基。在一些情况下，卤基是氯或氟。在一些情况下，卤基是氟。在一些情况下，至少一个R1a是氟。在一些情况下，各R1a是氟。在一些情况下，至少一个R1a是氯。在一些情况下，各R1a是氯。
在一些情况下，至少一个R1a是C1-6烷基。在一些情况下，各R1a是C1-6烷基。在一些情况下，C1-6烷基是甲基或乙基。在一些情况下，至少一个R1a是甲基或乙基。在一些情况下，各R1a是甲基或乙基。在一些情况下，各R1a是甲基。
在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基。在一些情况下，C3-6碳环基是环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些情况下，C 3-6碳环基是环丙基。在一些情况下，C 3-6碳环基是环丁基。在一些情况下，C 3-6碳环基是环戊基。在一些情况下，C 3-6碳环基是环己基。在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的螺4元至8元杂环基，且其任选地被C(O)ORN取代。在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成螺哌啶基。在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成未被取代的哌啶基。在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成被C(O)ORN取代的螺哌啶基。在一些情况下，各R1a与其所连接的碳一起形成被C(O)O-叔丁基取代的螺哌啶基。
在一些情况下，n是0或1。在一些情况下，n是0。在一些情况下，n是1。在一些情况下，n是2。
在一些情况下，Rx处于间位或对位。在一些情况下，Rx处于间位。在一些情况下，Rx处于对位。在一些情况下，一个Rx处于间位。在一些情况下，一个Rx处于对位。在一些情况下，一个Rx处于间位且另一Rx处于对位。在一些情况下，至少一个Rx是卤基。在一些情况下，各Rx是卤基。在一些情况下，至少一个Rx是氯。在一些情况下，至少一个Rx是氟。在一些情况下，Rx是氯。在一些情况下，Rx是氟。在一些情况下，各Rx是氟。在一些情况下，至少一个Rx是C1-6烷基。在一些情况下，两个Rx是C1-6烷基。在一些情况下，至少一个Rx是C3-6碳环基或C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代。在一些情况下，至少一个Rx是C3-6碳环基。在一些情况下，至少一个Rx是环丙基。在一些情况下，至少一个Rx是C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代。在一些情况下，至少一个Rx是未被取代的C6-10芳基。在一些情况下，至少一个Rx是苯基。在一些情况下，至少一个Rx是被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代的C6-10芳基。
在一些情况下，m是0或1。在一些情况下，m是0。在一些情况下，m是1。在一些情况下，m是2。
在一些情况下，Ry处于间位或对位。在一些情况下，Ry处于间位。在一些情况下，Ry处于对位。在一些情况下，一个Ry处于间位。在一些情况下，一个Ry处于对位。在一些情况下，一个Ry处于间位且另一Ry处于对位。在一些情况下，至少一个Ry是卤基。在一些情况下，各Ry是卤基。在一些情况下，至少一个Ry是氯。在一些情况下，至少一个Ry是氟。在一些情况下，Ry是氯。在一些情况下，Ry是氟。在一些情况下，各Ry是氟。在一些情况下，至少一个Ry是C1-6烷基。在一些情况下，两个Ry是C1-6烷基。
在一些情况下，R2是C1-6烷基。在一些情况下，R2是在一些情况下，R2是C1-6亚烷基-C3-8碳环基。在一些情况下，R2是C1-6亚烷基-C5-8碳环基。在一些情况下，R2是C1亚烷基-C5-8碳环基。在一些情况下，R2是在一些情况下，R2是C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代。在一些情况下，R2是C1-6卤烷基。在一些情况下，R2是C1-6亚烷基-C6-10芳基。在一些情况下，R2是苯甲基。
在一些情况下，R3是CHO。在一些情况下，R3是-[C(O)]2-NRN-B。在一些情况下，B是C1-6烷基或C1-6羟烷基。在一些情况下，B是C1-6烷基。在一些情况下，B是C1-6羟烷基。在一些情况下，B是任选地被C1-6烷基单取代的C3-8碳环基。在一些情况下，B是未被取代的C3-8碳环基。在一些情况下，B是被C1-6烷基单取代的C3-8碳环基。在一些情况下，B是任选地被C1-6烷基单取代的C3碳环基。在一些情况下，B是未被取代的C3碳环基。在一些情况下，B是被C1-6烷基单取代的C3碳环基。在一些情况下，B是未被取代的C6碳环基。在一些情况下，B是被C1-6烷基单取代的C6碳环基。在一些情况下，B是任选地被C1-6烷基单取代的具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基。在一些情况下，B是具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的未被取代的4元至12元杂环基。在一些情况下，B是被C1-6烷基单取代的具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基。在一些情况下，B包括任选地被C1-6烷基单取代的哌啶基。在一些情况下，B包括未被取代的哌啶基。在一些情况下，B包括被C1-6烷基单取代的哌啶基。在一些情况下，B包括被甲基单取代的哌啶基。在一些情况下，B包括被乙基单取代的哌啶基。在一些情况下，R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基或被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH。
在一些情况下，R3a是H。在一些情况下，R3a是C1-6烷基。在一些情况下，R3a是甲基。
在一些情况下，环A是C6-10环烷基。在一些情况下，环A是环己基。在一些情况下，环A是C6-10芳基或包括一个氮杂原子的5元至10元杂芳基。在一些情况下，环A是C6-10芳基。在一些情况下，环A是苯基。在一些情况下，环A是包括一个氮杂原子的5元至10元杂芳基。在一些情况下，环A是吡啶基。
在各种情况下，环A包括苯基，各R1a是F，R1b是H，各RN是H，n是1，Rx是卤基，R2是C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基、被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或-[C(O)]2-NRN-B。
在一些情况下，化合物和其药学上可接受的盐具有式(Ib)的结构：
其中
Rx是Cl、F、环丙基或苯基；
Ry是F；
m是0或1；
R2是C4-5烷基、C3-5卤烷基、CH2C3-6碳环基或苯甲基，且碳环基任选地被甲基或乙基取代；且
R3是CHO、C(O)C(O)NH2、C(O)C(O)NH环丙基或C(O)C(O)NH乙基，
限制条件是当Rx是Cl，m是0且R3是CHO、C(O)C(O)NH2或C(O)C(O)NH环丙基时，则R2不是2-甲基-丙基。
在一些情况下，对于式(Ib)的化合物或盐，是Cl。在一些情况下，m是0。在一些情况下，m是1，且Ry是F(例如间F)。
在一些情况下，对于式(Ib)的化合物或盐，R2是2-甲基-丙基、丁基、戊基、2-甲基-丁基、3,3-二氟丙基、CH2-环丙基、CH2环丁基、CH2环戊基、CH2-环己基、CH2-(1-乙基环丙基)、CH2-(1-甲基环丁基)、CH2-(1-乙基环丁基)、CH2-(1-乙基环戊基)或苯甲基。在一些情况下，R2是丁基、戊基、2-甲基-丁基、3,3-二氟丙基、CH2-环丙基、CH2环丁基、CH2环戊基、CH2-环己基、CH2-(1-乙基环丙基)、CH2-(1-甲基环丁基)、CH2-(1-乙基环丁基)、CH2-(1-乙基环戊基)或苯甲基。在一些情况下，R2是CH2环己基。在一些情况下，R2是丁基或2-甲基-丁基。在一些情况下，对于式(Ib)的化合物或盐，R3是CHO。在一些情况下，R3是C(O)C(O)NH环丙基。
所涵盖的具体化合物包含下表中的化合物。展示具体立体异构中心的化合物指示至少一种相对立体异构性。不指示具体立体异构性的具有手性中心的化合物指示所述手性中心处的立体异构中心的混合物。
化合物可以是如表A或表B中所列的化合物或其药学上可接受的盐。
表A
表B
在一些情况下，化合物是选自化合物A20和A25至A29或其药学上可接受的盐。在一些情况下，化合物是选自A20、A20-1、A20-2、A25-1、A48、A72、A119、A126、A164、A165、A167、A187、A196、A206、A209、A210、A228、A235、A239、A258、A265、A268、A270、A273、A289、A290、A295、A296、A297、A298、A299、A300、A302、A308、A309、A310、A316、A321和A325或其药学上可接受的盐。
本文所公开的化合物可用作生物样本或患者中的诺罗病毒或冠状病毒复制的抑制剂。这些化合物也可以用于降低生物样本或患者中的诺罗病毒或冠状病毒的量(病毒滴度)。其还可以用于生物样本或患者中的由诺罗病毒或冠状病毒引起的感染的治疗性和预防性治疗。
药学上可接受的盐
本文所描述的化合物可以游离形式或在适当时以盐形式存在。药学上可接受的盐备受关注，因为其适用于出于医疗目的而给予下文所描述的化合物。药学上不可接受的盐适用于制造过程、用于分离和纯化目的，且在一些情况下，用于分离本公开的化合物或其中间物的立体异构形式。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理医疗判断范围内适用于接触人类和低等动物的组织而无不当副作用(诸如毒性、刺激、过敏反应等)且满足合理利益/风险比的化合物的盐。
药学上可接受的盐在所属领域中已众所周知。举例来说，伯奇(S.M.Berge)等人在《医药科学杂志(J.Pharmaceutical Sciences)》,1977,66,1-19中详细描述药学上可接受的盐，所述文献以引用的方式并入本文中。本文所描述的化合物的药学上可接受的盐包含来源于适合的无机酸和碱以及有机酸和碱的盐。可以在化合物的最终分离和纯化期间就地制备这些盐。
在本文所描述的化合物含有碱基或足够碱性的生物同位体的情况下，酸加成盐可以通过1)使呈其游离碱形式的纯化化合物与适合的有机或无机酸反应，和2)分离由此形成的盐来制备。在实践中，酸加成盐可以是更便于使用的形式，且所述盐的使用相当于游离碱形式的使用。
药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是氨基与无机酸(诸如氢氯酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和过氯酸)或与有机酸(诸如乙酸、草酸、顺丁烯二酸、酒石酸、柠檬酸、丁二酸或丙二酸)形成的盐，或通过使用所属领域中所用的其它方法(诸如离子交换)形成的盐。其它药学上可接受的盐包含己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐(borate)、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、葡糖酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐(picrate)、特戊酸盐、丙酸盐、柳酸盐、硬脂酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
在本文所描述的化合物含有羧基或足够酸性的生物同位体的情况下，碱加成盐可以通过以下来制备：1)使呈其酸形式的经纯化化合物与适合有机或无机碱反应，和2)分离由此形成的盐。在实践中，碱加成盐的使用可以是更适宜形式，且所述盐形式本身的使用相当于游离酸形式的使用。来源于适当碱的盐包含碱金属(例如钠、锂和钾)盐、碱土金属(例如镁和钙)盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。本公开还设想本文所公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化。通过所述季铵化可获得水溶性或油溶性或可分散性产物。
碱加成盐包含药学上可接受的金属盐和胺盐。适合的金属盐包含钠、钾、钙、钡、锌、镁和铝。钠盐和钾盐通常是优选的。在适当时，其它药学上可接受的盐包含使用诸如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、低碳数烷基磺酸盐和芳基磺酸盐的相对离子形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。适合的无机碱加成盐由金属碱制备，所述金属碱包含氢化钠、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化镁、氢氧化锌等。适合的胺碱加成盐由因其低毒性和医学用途的可接受性而时常用于药物化学的胺制备。氨、乙二胺、N-甲基-葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苯甲基乙二胺、氯普鲁卡因(chloroprocaine)、二乙醇胺、普鲁卡因(procaine)、N-苯甲基苯乙基胺、二乙胺、哌嗪、三(羟基甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵、三乙胺、二苯甲基胺、安非胺(ephenamine)、去氢枞胺(dehydroabietylamine)、N-乙基哌啶、苯甲胺、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、碱性氨基酸、二环己胺等。
其它酸和碱在其本身并非药学上可接受时，可用于制备在获得本文所描述的化合物和其药学上可接受的酸或碱加成盐时适用作中间物的盐。
应理解，本文所公开的化合物可以不同的药学上可接受的盐的混合物/组合的形式存在。还涵盖游离形式的化合物和药学上可接受的盐的混合物/组合。
药物组合物
本文所描述的化合物可调配成还包括药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂的药物组合物。在实施例中，本公开涉及一种药物组合物，其包括上文所描述的化合物或其盐，和药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂。在实施例中，药物组合物包括安全且有效量的如本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载剂、稀释剂、佐剂或媒剂。药学上可接受的载剂包含例如关于预期给予形式适当选择且符合常规药学惯例的药学稀释剂、赋形剂或载剂。
“有效量”包含“治疗有效量”和“预防有效量”。术语“治疗有效量”是指在治疗和/或改善患者的诺罗病毒或冠状病毒感染方面有效的量。术语“预防有效量”是指在预防和/或大体上减轻诺罗病毒或冠状病毒感染爆发的机会或规模方面有效的量。
药学上可接受的载剂可含有不会过度抑制化合物的生物活性的惰性成分。药学上可接受的载剂应是生物相容的，例如无毒、非炎性、非免疫原性或在向受试者给予后无其它非所要反应或副作用。可采用标准医药调配技术。
如本文所使用的药学上可接受的载剂、佐剂或媒剂包含适用于所期望具体剂型的任何溶剂、稀释剂或其它液体媒剂、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等张剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。《雷明顿氏医药科学(Remington's PharmaceuticalSciences)》,第十六版,马丁(E.W.Martin)(宾夕法尼亚州伊斯顿的马克出版公司(MackPublishing Co.,Easton,Pa.),1980)公开用于调配药学上可接受的组合物的各种载剂和其已知制备技术。除非任何常规载剂介质诸如通过产生任何不合需要的生物作用或另外以有害方式与药学上可接受的组合物的任何其它组分相互作用而与本文所描述的化合物不相容，否则预期其使用属于本公开的范围内。如本文所用，短语“副作用”涵盖疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不希望和不良作用。副作用始终是不希望的，但不希望的作用不一定是不利的。疗法(例如，预防剂或治疗剂)的不良作用可以是有害或不适或有风险的。
可充当药学上可接受的载剂的物质的一些实例包含但不限于：离子交换剂；氧化铝；硬脂酸铝；卵磷脂；血清蛋白(诸如人血清白蛋白)；缓冲物质(诸如twin 80、磷酸酯、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾)；饱和植物脂肪酸、水、盐或电解质的偏甘油酯混合物(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠或锌盐)；胶态二氧化硅；三硅酸镁；聚乙烯吡咯烷酮；聚丙烯酸酯；蜡；聚乙烯-聚环氧丙烷嵌段聚合物；甲基纤维素；羟丙基甲基纤维素；羊毛脂；糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素和其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄芪粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可脂和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇或聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸；无热原质水；等张生理盐水；林格氏溶液(Ringer's solution)；乙醇；和磷酸酯缓冲溶液；且根据调配者的判断，诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁等其它无毒相容润滑剂以及着色剂、释放剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可以存在于组合物中。
用于经肺递送的调配物
在一些实施例中，本文所公开的药物组合物适用于通过吸入直接经由气道给予至下呼吸道(例如，肺)。通过吸入给予的组合物可以呈可吸入粉末组合物或液体或粉末喷雾剂形式，且可能以标准形式使用粉末吸入装置或气溶胶分配装置来给予。这类装置是众所周知的。对于通过吸入给予，粉末状调配物通常包括活性化合物以及惰性固体粉末状稀释剂(诸如乳糖或淀粉)。可吸入干粉组合物可以存在于明胶或类似物质的胶囊和药筒或者用于吸入器或吹入器的层压铝箔的泡壳中。各胶囊或药筒可以通常含有例如约10mg至约100g各活性化合物。可替代地，组合物可呈现为不含赋形剂。
可吸入组合物可被包装用于单位剂量或多剂量递送。举例来说，组合物可按类似于以下文献中所描述的方式包装以用于多剂量递送：GB 2242134、美国专利第6,632,666号、第5,860,419号、第5,873,360号和第5,590,645号(都说明了“Diskus”装置)；或GB2i78965、GB2129691、GB2169265、美国专利第4,778,054号、第4,811,731号和第5,035,237号(其说明了“Diskhaler”装置)；或者EP 69715(“Turbuhaler”装置)或GB 2064336和美国专利第4,353,656号(“Rotahaler”装置)。
用于通过吸入局部递送至肺的喷雾组合物可以调配成水溶液或悬浮液或自加压包装递送的气溶胶，诸如定剂量吸入器(MDI)，其中使用适合的液化推进剂，包含氢氟烷烃，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷和尤其1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷和其混合物。适用于吸入的气溶胶组合物可以悬浮液或溶液的形式呈现。
通过吸入给予的药物通常具有受控制粒度。用于吸入至支气管系统中的最佳粒度通常是约1μm至约10μm，且在一些实施例中，是约2μm至约5μm。具有大于约20μm的粒度的颗粒一般过大而在吸入时不能到达较小呼吸道。为了实现这些粒度，活性成分的颗粒可以经历诸如微米尺寸化的粒度减小处理过程。可以通过风选或筛分分离出所期望粒度部分。优选地，颗粒将是结晶。
鼻内喷雾剂可使用水性或非水性媒剂，通过添加诸如增稠剂、调节pH的缓冲盐或酸或碱、等张调节剂或抗氧化剂的试剂来调配。
用于通过雾化吸入的溶液可使用水性媒剂，通过添加诸如酸或碱、缓冲盐、等张调节剂或抗菌剂的试剂来调配。其可以通过过滤或在高压釜中加热来灭菌，或呈现为非灭菌产品。雾化器以自调配物水溶液产生的薄雾形式供应气溶胶。
在一些实施例中，本文中所公开的药物组合物可与补充活性成分一起调配。
在一些实施例中，本文所公开的药物组合物从干粉吸入器给予。在其它实施例中，本文所公开的药物组合物通过气溶胶分配装置，任选地结合吸入室(诸如“”吸入室)来给予。
载剂可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、液体聚乙二醇等)、其合适混合物和/或植物油的溶剂或分散介质。可以例如通过使用诸如卵磷脂的包衣、在分散液的情况下通过维持所要粒度和通过使用表面活性剂来维持适当流动性。通过添加抗细菌和/或抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙汞硫柳酸钠等)来实现预防本文中所公开的组合物中的微生物的作用。在许多情况下，优选包含等张剂，例如糖或氯化钠。可以通过在组合物中使用延缓吸收剂(例如，单硬脂酸铝和明胶)来延长可注射组合物的吸收。
在一些实施例中，药物组合物可处于控制组合物的释放的基质内。在一些实施例中，基质可以包括：脂质、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己内酯、聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚己内酯、聚乳酸、聚酸酐、聚丙交酯-共-乙交酯、聚氨基酸、聚氧化乙烯、丙烯酸封端的聚氧化乙烯、聚酰胺、聚乙烯、聚丙烯腈、聚磷氮烯、聚(原酸酯)、蔗糖乙酸异丁酸酯(SAIB)和其组合，以及例如美国专利第6,667,371号、第6,613,355号、第6,596,296号、第6,413,536号、第5,968,543号、第4,079,038号、第4,093,709号、第4,131,648号、第4,138,344号、第4,180,646号、第4,304,767号、第4,946,931号中所公开的其它聚合物，所述文献中的每一者明确地以全文引用的方式并入本文中。在这些实施例中，基质持续释放药物。
药学上可接受的载剂和/或稀释剂还可以包含任何溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和/或抗真菌剂、等张剂和吸收延迟剂等。这类介质和药剂用于医药活性物质的用途在所属领域中已众所周知。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于药物组合物中。
药物组合物可以根据常规技术经调配以供给予。参见例如雷明顿(Remington),《药学科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)》(第20版，2000)。举例来说，本公开的鼻内药物组合物可以调配成气溶胶(此术语包含液体与干粉气溶胶)。如所属领域的技术人员已知，液体颗粒的气溶胶可以通过任何适合的手段产生，诸如使用压力驱动的气溶胶雾化器或超声波雾化器。参见例如美国专利第4,501,729号。固体颗粒的气溶胶(例如冻干、冷冻干燥等)可同样使用任何固体微粒药剂气溶胶产生器通过药学领域中已知的技术来产生。作为另一实例，药物组合物可被调配成按需可溶形式，其提供药物组合物的冻干部分和药物组合物的溶解溶液部分。
在一些实施例中，药物组合物呈水性悬浮液形式，其可由溶液或悬浮液制备。对于溶液或悬浮液，剂型可以包括亲脂性物质、脂质体(磷脂小泡/膜)和/或脂肪酸(例如，棕榈酸)的微胞。在具体实施例中，药物组合物是能够溶解于由被给予、施用和/或递送药物组合物的组织的上皮细胞粘膜所分泌的流体中的溶液或悬浮液，其可有利地增强吸收。
药物组合物可以是水溶液、非水溶液或水溶液和非水溶液的组合。适合水溶液包含但不限于：水凝胶、水性悬浮液、水性微球体悬浮液、水性微球体分散液、水性脂质体分散液、脂质体的水性微胞、水性微乳液和前述的任何组合或可溶解于鼻腔粘膜分泌的流体中的任何其它水溶液。例示性非水溶液包含但不限于：非水凝胶、非水性悬浮液、非水性微球体悬浮液、非水性微球体分散液、非水性脂质体分散液、非水性乳液、非水性微乳液和前述的任何组合或可溶解或混合于粘膜分泌的流体中的任何其它非水溶液。
粉末调配物的实例包含但不限于：纯粉末混合物、微米化粉末、冷冻干燥粉末、冻干粉末、粉末微球、包衣粉末微球、脂质体分散液和前述的任何组合。粉末微球可由各种多糖和纤维素形成，包含但不限于淀粉、甲基纤维素、三仙胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆(carbomer)、聚乙烯醇海藻酸盐、阿拉伯胶、聚氨基葡萄糖和其任何组合。
在具体实施例中，组合物是至少部分或甚至大量(例如至少80％、90％、95％或更多)可溶于粘膜分泌的流体中以便有助于吸收的组合物。或者或另外，组合物可被调配成具有促进药剂溶解于分泌物内的载剂和/或其它物质，包含但不限于脂肪酸(例如，棕榈酸)、神经节苷脂(例如，GM-1)、磷脂(例如，磷脂酰丝氨酸)和乳化剂(例如，聚山梨醇酯80)。
所属领域的技术人员将了解，对于鼻内给予或递送，由于给予的药物组合物的量通常较小，故鼻分泌物可能改变所给予剂量的pH，因为鼻腔中的pH范围可宽达5至8。这类改变可以影响可供吸收的未离子化药物的浓度。因此，在代表性实施例中，药物组合物更包括缓冲剂以就地维持或调节pH。典型的缓冲剂包含但不限于抗坏血酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、醇溶谷蛋白、碳酸盐和磷酸盐缓冲剂。
在实施例中，选择药物组合物的pH以使得粘膜组织的内部环境在给予后处于酸性至中性，其(1)可提供未游离化形式的活性化合物以供吸收，(2)阻止更加可能出现于碱性环境中的病原菌的生长，和(3)降低粘膜刺激的可能性。
对于液体和粉末喷雾剂或气溶胶，药物组合物可以被调配成具有任何适合且所期望的粒度或液滴大小。在说明性实施例中，颗粒或液滴的大部分和/或平均粒度的范围等于或大于约1、2.5、5、10、15或20微米和/或等于或小于约25、30、40、45、50、60、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400或425微米(包含前述的所有组合)。大部分和/或平均粒度或液滴大小的合适范围的代表性实例包含但不限于约5至100微米、约10至60微米、约175至325微米和约220至300微米，其有助于安全且有效量的活性化合物例如在鼻腔中(例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅区和/或通向嗅觉神经通路的鼻窦区中)的沉积。一般来说，小于约5微米的颗粒或液滴将沉积于气管或甚至肺中，而约50微米或更大的颗粒或液滴一般不能到达鼻腔且沉积于鼻前部。
国际专利公开案WO 2005/023335(库威科技公司(Kurve Technology,Inc.))描述了具有适合于实践本文中所公开的药物组合物的代表性实施例的直径大小的颗粒和液滴。在具体实施例中，颗粒或液滴具有约5至30微米、约10至20微米、约10至17微米、约10至15微米、约12至17微米、约10至15微米或约10至12微米的平均直径。颗粒可“大体上”具有如本文中所描述的平均直径或大小，即至少约50％、60％、70％、80％、90％或95％或大于95％的颗粒具有所指示直径或大小范围。
药物组合物能够以具有如上文所描述的液滴大小的喷雾化或雾化液体形式递送。
根据包括鼻内递送方法的本公开的具体实施例，可能期望延长药物组合物在鼻腔中(例如，在鼻腔上部三分之一、上鼻道、嗅区和/或鼻窦区中)的滞留时间，例如以增强吸收。因此，药物组合物可任选地与以下一起调配：生物粘附聚合物、胶(例如三仙胶)、聚氨基葡萄糖(例如高度纯化阳离子多糖)、果胶(或当施用至鼻粘膜时如同凝胶一样稠化或乳化的任何碳水化合物)、微球体(例如淀粉、白蛋白、聚葡萄糖、环糊精)、明胶、脂质体、卡波姆、聚乙烯醇、海藻酸盐、阿拉伯胶、聚氨基葡萄糖和/或纤维素(例如甲基或丙基纤维素；羟基或羧基纤维素；羧甲基或羟丙基纤维素)，其是增加在鼻腔中的滞留时间的药剂。作为另一方法，增大调配物的粘度也可以提供延长药剂与鼻上皮的接触的手段。药物组合物可以调配成鼻乳液、软膏或凝胶，其由于其粘度而提供局部施用的优势。
潮湿和高度血管化的膜可有助于快速吸收；因此，药物组合物可任选地包括保湿剂，尤其在基于凝胶的组合物的情况下，以确保足够的鼻内水分含量。适合的保湿剂的实例包含但不限于丙三醇(glycerin)、甘油(glycerol)、矿物油、植物油、膜调节剂、舒缓剂和/或糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇；和/或甘露糖醇)。保湿剂在药物组合物中的浓度将视所选药剂和调配物而变化。
药物组合物还可以任选地包含吸收增进剂，诸如抑制酶活性、降低粘液的粘度或弹性、降低粘膜纤毛清除作用、打开紧密结合和/或溶解活性化合物的药剂。化学增强剂是所属领域中已知的且包含螯合剂(例如，EDTA)、脂肪酸、胆酸盐、表面活性剂和/或防腐剂。当调配展现较差膜渗透率、缺乏亲脂性和/或由氨基肽酶降解的化合物时，用于渗透的增强剂可尤其适用。吸收增强剂在药物组合物中的浓度将视所选药剂和调配物而变化。
为了延长储存寿命，可任选地将防腐剂添加至药物组合物。适合的防腐剂包含但不限于苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、硫柳汞、氯丁醇和苯扎氯铵以及前述的组合。防腐剂的浓度将视使用的防腐剂、所调配的化合物、调配物等而变化。在代表性实施例中，防腐剂以约2重量％或更小的量存在。
本文所描述的药物组合物可任选地含有气味剂，例如EP 0 504 263B1中所描述，以提供对气味的感觉，以便有助于吸入组合物，从而促进向嗅区的递送和/或通过嗅觉神经元触发运输。
作为另一选项，组合物可以包括调味剂，例如以增强味道和/或受试者对组合物的可接受性。
经肺给予的多孔颗粒
在一些实施例中，颗粒是多孔的，使得其具有适当密度以避免在通过吸入器给予时沉积于咽喉后部。相对较大的粒度和相对较低的密度的组合避免肺中的吞噬作用，提供适当靶向的递送，避免组分的全身递送且在肺内提供高浓度的组分。
用于制备这些颗粒和用于递送这些颗粒的代表性方法描述于以下中：例如名称为“用于经肺递送的颗粒组合物(Particulate compositions for pulmonary delivery)”的美国专利第7,384,649号；名称为“用于经肺递送的颗粒组合物(Particulatecompositions for pulmonary delivery)”的美国专利第7,182,961号；名称为“吸入装置和方法(Inhalation device and method)”的美国专利第7,146,978号；名称为“用于吸入的具有持续释放特性的颗粒(Particles for inhalation having sustained releaseproperties)”的美国专利第7,048,908号；名称为“稳定喷雾干燥蛋白调配物(Stablespray-dried protein formulations)”的美国专利第6,956,021号；名称为“吸入装置(Inhalation device)”的美国专利第6,766,799号；和名称为“吸入装置和方法(Inhalation device and method)”的美国专利第6,732,732号。
公开这些颗粒的额外专利包含：名称为“喷雾干燥多孔大颗粒的调配(Formulation for spray-drying large porous particles)”的美国专利第7,279,182号；名称为“使用简单氨基酸形成多孔颗粒(Use of simple amino acids to form porousparticles)”的美国专利第7,252,840号；名称为“吸入装置和方法(Inhalation deviceand method)”的美国专利第7,032,593号；名称为“用于产生干燥颗粒的方法和设备(Method and apparatus for producing dry particles)”的美国专利第7,008,644号；名称为“产生多孔大颗粒的过程湿度的控制(Control of process humidity to producelarge,porous particles)”的美国专利第6,848,197号；和名称为“喷雾干燥多孔大颗粒的调配(Formulation for spray-drying large porous particles)”的美国专利第6,749,835号。
名称为“用于吸入的具有持续释放特性的颗粒”的美国专利第7,678,364号公开用于将颗粒递送至肺部系统的方法，其包括：向需要治疗、预防或诊断的患者的呼吸道给予安全且有效量的干燥粉末，所述干燥粉末包括：a)与治疗剂、预防剂或诊断剂复合的多价金属阳离子，b)药学上可接受的载剂，和c)含多价金属阳离子的组分，其中所述干燥粉末经喷雾干燥且具有作为药剂总重量的约10％w/w或更多的多价金属阳离子总量、约0.4g/cm3或更小的振实密度、约5微米至约30微米的中值几何直径和约1至约5微米的空气动力直径。
颗粒中存在的本文所描述的化合物或其盐的量可以在约0.1重量％至约95重量％的范围内，尽管在一些情况下，可甚至高达100％。例如，约1至约50％，诸如约5至约30％。化合物分布于在整个颗粒中的颗粒可以是优选的。
在一些实施例中，颗粒包含除上文所描述的磷脂外的表面活性剂。如本文所使用，术语“表面活性剂”是指优选地吸收至两种不可混溶相之间的界面(诸如水与有机聚合物溶液之间的界面、水/空气界面或有机溶剂/空气界面)的任何试剂。表面活性剂一般具有亲水性部分和亲脂性部分，使得其在吸收至颗粒时易于使各部分到达不吸引类似包衣的颗粒的外部环境，因此减少颗粒集结。表面活性剂还可以促进治疗剂或诊断剂的吸收且提高药剂的生物可用性。
可用于制造本文中所公开的颗粒的适合表面活性剂包含但不限于：十六烷醇；脂肪醇，诸如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，诸如棕榈酸或油酸；甘胆酸盐；表面活性肽(surfactin)；泊洛沙姆(poloxamer)；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，诸如脱水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)；80；和泰洛沙泊(tyloxapol)。
表面活性剂可以约0至约5重量％范围内的量存在于颗粒中。优选地，其可以约0.1至约1.0重量％范围内的量存在于颗粒中。
具有小于约0.4g/cm3的振实密度、至少约5μm的中值直径和约1μm至约5μm或约1μm至约3μm的空气动力直径的颗粒更能够避免口咽区中的惯性和重力沉积，且靶向呼吸道或肺深部。使用较大的更多孔颗粒是有利的，因为其能够比更小、更致密的气溶胶颗粒(诸如当前用于吸入疗法的颗粒)更有效地气溶胶化。
脂质体递送
本文所描述的组合物宜被递送至肺，以在实际或潜在诺罗病毒或冠状病毒感染的位点处提供化合物。这可以通过经由定剂量吸入器或其它经肺递送装置进行经肺递送来实现，且也可以通过使颗粒进入肺中的肺泡周围的微血管床实现。
包含较小单层囊泡的纳米载剂(诸如脂质体)展示优于用于将药物递送至肺的其它常规方法的若干优势，包含延长的药物释放和细胞特异性靶向药物递送。纳米级药物载剂还可以有利于递送水溶性较差的药物，且本文所描述的化合物中的某些水溶性较差。额外优势包含其提供受控释放、保护以免代谢和降解、降低的药物毒性和靶向能力的能力。
脂质体(优选地单层囊泡)如通过动态光散射测量具有小于200nm的大小，且优选地特征在于由化学上纯的合成磷脂组成，最优选地具有长度为至少16个碳的脂族侧链，且含有本文所描述的化合物中的一种或多种或其药学上可接受的盐，其足以将一定量的其化合物优先递送(即靶向)至肺泡周围的微血管床。可以例如通过动态光散射使用氦-氖100mWNEC气体激光和Malvern K7027相关器测量囊泡直径，理想地每次产生至少两个或三个测量值以用于各大小判定。
表述“化学上纯的磷脂”旨在定义基本上不含有害洗涤剂部分和引起其形成的较小单层囊泡(SUV)的聚集的杂质且纯度超过97％的磷脂。优选地，脂质体的直径绝大多数是约50至约160nm，电荷基本上是中性，且并入侧链长度是16至18个碳原子的磷脂。更优选地，脂质体由二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)制备且包含作为囊泡稳定剂的胆固醇(最优选以全部脂质的10％至50％的量)。
脂质体具有高于体温(即大于37℃)的熔点也可以是有利的。出于此原因，使用纯磷脂，优选是饱和且具有至少16个碳、优选16个碳与18个碳之间的碳链长度的磷脂可以是有利的。二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)是优选磷脂。
胆固醇有助于稳定脂质体且优选以足以提供脂质体稳定性的量添加。最优选地，脂质体更包括聚乙二醇化磷脂，诸如DSPEPEG。所述方法涉及向患者的血流中引入一定量脂质体，所述脂质体大小小于200nm(优选是单层囊泡)且特征优选在于包括化学上纯的合成磷脂，最优选具有长度为至少16个碳的脂族侧链，且含有本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐或前药，其足以将一定量的化合物优先递送(即靶向)至肺中肺泡周围的微血管床。
本文所描述的化合物可以与其它抗诺罗病毒剂或抗冠状病毒剂组合。所述额外药剂也可以存在于脂质体中，可存在于不同脂质体中，或可以通过不同途径共同给予。
脂质体包含本文所描述的化合物中的一种或多种或其药学上可接受的盐，且可任选地包含其它抗诺罗病毒剂或抗冠状病毒剂。脂质体可以通过将磷脂和胆固醇溶解于诸如氯仿的适当有机溶剂中和蒸发溶剂以形成脂质膜来制备。如果采用离子载体来将本文所描述的化合物载入脂质体中，那么可以在蒸发前将离子载体添加至脂质溶液。接着将干燥脂质膜于适当水相中再水合，所述水相诸如是磷酸盐缓冲盐水或其它生理学上适当的溶液。水溶性药物或治疗剂可含于水合溶液中，但如果期望远距离装载，那么可以将诸如上文所描述的螯合剂的装载剂添加至水合溶液以包封于脂质体的内部水空间内。
在添加水合溶液时，不同大小的脂质体自发地形成且包封一部分水相。其后，使脂质体和悬浮水溶液经受诸如挤压的剪切力、声波处理或根据美国专利第4,753,788号中所描述的方法通过均质器进行的处理；以产生具体大小内的囊泡。
随后可处理脂质体以从悬浮溶液去除不合需要的化合物，例如未包封药物，其可以通过诸如凝胶色谱或超过滤的过程实现。
脂质体于干粉气溶胶中用于靶向肺递送的用途描述于例如威利斯(Willis)等人,《肺(Lung)》,2012年6月,190(3):251-262中。一个优势是用于制备脂质体的磷脂与内源性肺表面活性剂类似。
给药途径和剂量
视所治疗感染的严重程度而定，上文所描述的化合物和药学上可接受的组合物可以经口、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(作为粉剂、软膏或滴剂)、经颊、作为经口或经鼻喷雾、经肺部系统(诸如通过使用吸入器，诸如定剂量吸入器(MDI))等向人类和其它动物给予。在一些实施例中，本文所公开的化合物或组合物经口服，经由吸入或静脉内给予。
用于经口给予的液体剂型包含但不限于药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物以外，液体剂型可含有所属领域中常用的惰性稀释剂(诸如水或其它溶剂)、增溶剂和乳化剂，诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、四氢呋喃醇、聚乙二醇以及脱水山梨糖醇的脂肪酸酯和其混合物。除惰性稀释剂以外，口服组合物还可以包含佐剂，诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可注射制剂(例如，无菌可注射水性或油性悬浮液)可以根据已知技术使用适合的分散剂、湿润剂和/或悬浮剂调配。无菌可注射制剂还可以是于无毒性肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如呈于1,3-丁二醇中的溶液形式。在可接受的媒剂和溶剂中，可使用的包括水、林格氏溶液、U.S.P.和等张氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用包含合成单甘油酯或二甘油酯的任何温和的不挥发性油。另外，脂肪酸(诸如油酸)用于制备可注射剂。
可例如通过经由细菌截留过滤器过滤或通过并入在使用之前可溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中的呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来将可注射调配物灭菌。
为了延长本文所描述的化合物的作用，通常期望减缓来自皮下或肌肉内注射的化合物的吸收。这可以通过使用具有不佳水溶性的结晶或非晶形材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收率则视其溶解率而定，溶解率又可能视晶体大小和结晶形式而定。或者，通过将化合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现肠胃外给予的化合物的延迟吸收。通过在诸如聚丙交酯-聚乙交酯等生物可降解聚合物中形成化合物的微胶囊基质来制备可注射积存形式。视化合物与聚合物的比率和所使用的具体聚合物的性质而定，可控制化合物释放速率。其它生物可降解聚合物的实例包含聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射积存调配物也可以通过将化合物包覆于与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
用于经直肠或经阴道给予的组合物具体地是栓剂，其可以通过将本文所描述的化合物与适合非刺激性赋形剂或载剂，诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述赋形剂或载剂在环境温度下是固体，但在体温下是液体且因此在直肠或阴道腔中熔融并释放活性化合物。
用于经口给予的固体剂型包含胶囊、片剂、丸剂、粉剂和粒剂。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性药学上可接受的赋形剂或载剂(诸如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，诸如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；c)保湿剂，诸如甘油；d)崩解剂，诸如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，诸如石蜡；f)吸收加速剂，诸如季铵化合物；g)湿润剂，诸如鲸蜡醇和丙三醇单硬脂酸酯；h)吸附剂，诸如高岭土和膨润土；和i)润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠和其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型也可以包括缓冲剂。
也可以使用相似类型的固体组合物作为软填充和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和粒剂的固体剂型可制备有包衣和外壳，诸如肠溶包衣和医药调配技术中众所周知的其它包衣。其可任选地含有乳浊剂，且也可以具有仅在或优先在肠道的某一部分中释放或任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。也可以使用相似类型的固体组合物作为软填充和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，所述胶囊使用赋形剂，诸如乳糖(lactose/milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等。
活性化合物亦可呈具有一种或多种如上文所提及的赋形剂的微胶囊化形式。片剂、糖衣药丸、胶囊、丸剂和粒剂的固体剂型可制备有包衣和外壳，诸如肠溶衣、释放控制包衣和医药调配技术中众所周知的其它包衣。在这些固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂(诸如蔗糖、乳糖或淀粉)混合。如在一般实践中，这类剂型还可以包括除惰性稀释剂以外的其它物质，例如制锭润滑剂和其它制锭助剂，诸如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包括缓冲剂。其可以任选地含有乳浊剂，且也可以具有仅在或优先在肠道的某一部分中释放或任选地以延迟方式释放活性成分的组合物。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。
用于表面或经皮给予本文所描述的化合物的剂型包含软膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉剂、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴片。活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载剂和如可以是所要求的任何所需防腐剂或缓冲剂掺合。还涵盖眼用调配物、滴耳剂和滴眼剂属于本公开的范围内。另外，本公开涵盖使用经皮贴片，其具有向身体提供控制递送化合物的附加优点。这类剂型可以通过将化合物溶解或分配于适当介质中来制备。也可以使用吸收增强剂来增加化合物通过皮肤的通量。速率可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散于聚合物基质或凝胶中来控制。
本文所描述的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可根据所属领域中已知的技术使用适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂来调配。无菌可注射制剂也可以是无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈于1,3-丁二醇中的溶液的形式。在可接受的媒剂和溶剂中，可采用的包括水、林格氏溶液和等张氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于此目的，可采用任何温和不挥发性油，包含合成单甘油酯或二甘油酯。脂肪酸(诸如油酸和其甘油酯衍生物)以及天然药学上可接受的油(诸如橄榄油或蓖麻油，尤其是聚氧乙烯化形式)适用于制备可注射剂。这些油溶液或悬浮液也可以含有长链醇稀释剂或分散剂，诸如羧甲基纤维素或通常用于调配药学上可接受的剂型(包含乳液和悬浮液)的类似分散剂。其它常用表面活性剂(诸如Tween、Span和其它乳化剂)或常用于制造药学上可接受的固体、液体或其它剂型的生物可用性增强剂也可用于调配的目的。
本文所描述的药物组合物可用任何经口可接受的剂型经口给予，所述剂型包含但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口用途的片剂的情况下，常用载剂包含但不限于乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，诸如硬脂酸镁。对于以胶囊形式经口给予，适用的稀释剂包含乳糖和干燥玉米淀粉。当需要水性悬浮液用于经口使用时，使活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。若需要，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
替代地，本文所描述的药物组合物可以用于经直肠给予的栓剂形式给予。这些栓剂可以通过将试剂与适合非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下是固体但在直肠温度下是液体且因此将在直肠中熔融以释放药物。这类材料包含但不限于可可脂、蜂腊和聚乙二醇。
本文所描述的药物组合物也可以局部给予，当治疗目标包含局部施用可容易地接近的区域或器官时尤其如此，所述治疗目标包含眼、皮肤或低位肠道的疾病。用于这些区域或器官中的每一个的适合的局部调配物易于制备。
用于低位肠道的局部施用可以经直肠栓剂调配物(参见上文)形式或以适合灌肠调配物形式实现。局部施用还包含使用经皮贴片。
对于局部施用，药物组合物可以含有悬浮或溶解于一种或多种载剂中的活性组分的适合的软膏形式调配。用于本公开的化合物的局部给予的载剂包含但不限于矿物油、液体石蜡脂、白石蜡脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药物组合物可以含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载剂中的活性组分的适合洗剂或乳膏形式调配。适合载剂包含但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二醇、苯甲醇和水。
对于经眼使用，药物组合物可调配成具有或不具有防腐剂(诸如苯扎氯铵)的于等张、pH经调整的无菌生理盐水中的微米化悬浮液，或具体来说调配成于等张、pH经调整的无菌生理盐水中的溶液。替代地，对于经眼使用，药物组合物可调配于诸如凡士林的软膏中。
药物组合物还可以通过经鼻气溶胶或吸入给予。所述组合物是根据医药调配领域中众所周知的技术制备，且可采用苯甲醇或其它适合的防腐剂、增强生物可用性的吸收促进剂、氟碳化物和/或其它常规溶解剂或分散剂制备成于生理盐水中的溶液。
用于本公开的方法中的化合物可按单位剂型调配。术语“单位剂型”是指适合以单位剂量形式用于经受治疗的受试者的物理离散单元，其中各单元含有经计算以产生所期望治疗作用的预定量的活性材料，其任选地与适合的医药载剂结合。单位剂型可用于单一日剂量或多个日剂量(例如每天约1至4次或更多次)中的一种。当使用多种日剂量时，用于各剂量的单位剂型可以相同或不同。
治疗方法
本文提供本文所描述的化合物作为治疗剂的用途。本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐可用以降低生物样本(例如被感染的细胞培养物)的病毒滴度或人类的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐可以在治疗病毒感染的方法中使用。可用本文所描述的化合物或其药学上可接受的盐治疗的病毒感染的非限制性实例包含冠状病毒感染、杯状病毒(calicivirus)感染和小核糖核酸病毒(picornavirus)感染。
杯状病毒感染的非限制性实例包含诺罗病毒介导的病况和诺罗病毒感染。如本文所用，术语“诺罗病毒介导的病况”、“诺罗病毒感染”或“诺罗病毒”可互换使用以意谓由诺罗病毒感染引起的疾病。
诺罗病毒是引起哺乳动物的胃肠炎的感染性病毒。诺罗病毒是杯状病毒科的RNA病毒，所述杯状病毒科包括七个基因组：GI、GII、GIII、GIV、GV、GVI和GVII。基因组II是最普遍的人类基因组，当前含有19个基因型。基因组I、II和IV感染人类，而基因组III感染牛物种，且最近已在小鼠中分离出基因组V。与人类的胃肠炎最相关联的两个组是：基因组I(GI)，其包含诺沃克病毒(Norwalk virus)、沙漠风暴病毒(Desert Shield virus)和南安普顿病毒(Southampton virus)；和基因组II(GII)，其包含布里斯托尔病毒(Bristolvirus)、洛兹达雷病毒(Lordsdale virus)、多伦多病毒(Toronto virus)、墨西哥病毒(Mexico virus)、夏威夷病毒(Hawaii virus)和雪山病毒(Snow Mountain virus)。
在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗与胃肠炎相关联的诺罗病毒。在一些实施例中，诺罗病毒与诺沃克病毒相关联。在一些实施例中，诺罗病毒与HuNV GGII.4相关联。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗诺罗病毒，其中化合物结合至游离病毒，或抑制诺罗病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒和蛋白酶)。
在人类中，诺罗病毒的常见症状是恶心、呕吐、水样便、腹痛，且在一些情况下是味觉丧失。诺罗病毒可以在免疫功能不全的人群中建立长期感染。在严重情况下，持久性感染会引起诺罗病毒相关联肠病、肠道绒毛萎缩和吸收不良。诺罗病毒相关联胃肠炎也称为“冬季呕吐症(winter vomiting bug)”。
人通常在暴露于诺罗病毒后12至48小时出现胃肠炎症状。可能出现一般嗜睡、无力、肌肉痛、头痛和低烧。
如本文所用，术语“冠状病毒感染”意谓由冠状病毒感染所致的疾病。冠状病毒的非限制性实例包含严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒(acute respiratory syndrome-related coronavirus；SARS)、中东呼吸道综合征相关冠状病毒(Middle Eastrespiratory syndrome-related coronavirus；MERS)和SARS-CoV-2病毒(也称为2019-nCoV)。冠状病毒感染的非限制性实例包含SARS、MERS和COVID-19(即分别为SARS-CoV感染、MERS-CoV感染和SARS-CoV-2感染)。
冠状病毒是在哺乳动物和鸟类中引起疾病的病毒科。冠状病毒是属于冠状病毒科中的正冠状病毒亚科，属于网巢病毒目。存在四种主要的冠状病毒属，称为α、β、γ和δ。影响人类的冠状病毒包含人类冠状病毒229E(HCoV-229E)、人类冠状病毒OC43(HCoV-OC43)、严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒(SARS-CoV)、人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63，纽黑文冠状病毒(New Haven coronavirus))、人类冠状病毒HKU1、中东呼吸道综合征相关冠状病毒(MERS-CoV，先前称为新型冠状病毒2012和HCoV-EMC)和SARS-CoV-2(也称为2019-nCoV)。
在人类中，冠状病毒引起呼吸道感染，包含感冒，其通常是轻度呼吸道感染，但较罕见形式，诸如SARS、MERS和SARS-CoV-2可能是致命的。症状在其它物种中有所不同：在鸡中，其引起上呼吸道疾病，而在奶牛和猪中，冠状病毒引起腹泻。无疫苗或抗病毒药物预防或治疗人类冠状病毒感染。冠状病毒HCoV-229E、-NL63、-OC43和-HKU1在人类群体中不断循环，且在全世界在成人和儿童中引起呼吸道感染。
在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗α冠状病毒或β冠状病毒。在一些情况下，本文所用的化合物用于治疗α冠状病毒。α冠状病毒的非限制性实例包含HCoV-229E和HCoV-NL63。在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗β冠状病毒。β冠状病毒的非限制性实例是HCoV-HKU1、HCoV-OC43、中东呼吸道综合征冠状病毒(MERS-CoV)、严重急性呼吸道综合征冠状病毒(SARS-CoV)和SARS-CoV-2。在一些实施例中，本文所用的化合物用于治疗与SARS、MERS和COVID-19相关联的冠状病毒。在一些实施例中，冠状病毒与SARS相关联。在一些实施例中，冠状病毒与MERS相关联。在一些实施例中，冠状病毒与COVID-19相关联。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗冠状病毒，其中化合物结合至游离病毒，或抑制冠状病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒和蛋白酶)。
在人类中，冠状病毒的常见症状是发烧、咳嗽、呼吸短促和肌痛。
小核糖核酸病毒感染的非限制性实例包含鼻病毒介导的病况和鼻病毒感染。如本文所用，术语“鼻病毒介导的病况”和“鼻病毒感染”可互换使用以意谓由鼻病毒感染引起的疾病。
小核糖核酸病毒感染人类和动物两者，会引起严重麻痹(麻痹性脊髓灰白质炎)、无菌性脑膜炎、肝炎、肋肌痛、心肌炎、皮肤出疹和感冒；但无症状感染很常见。若干种医学上重要的属是此科的成员，诸如肠病毒(包含脊髓灰白质炎病毒(poliovirus；PV)、鼻病毒和人类肠病毒(例如柯萨奇病毒(coxsackie virus))；肝病毒，其包含A型肝炎病毒(HAV)；和口蹄疫病毒(aphthovirus)，其包含口蹄疫病毒(foot-and mouth disease virus；FMDV))。公认鼻病毒是人类感冒的主要病因，且包括三种不同物种：A、B和C。主要通过气溶胶途径和病毒在鼻中复制进行传播。
在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗小核糖核酸病毒感染。在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗鼻病毒感染。在一些实施例中，本文所公开的化合物可用于治疗鼻病毒感染，其中化合物结合至游离病毒，或抑制鼻病毒蛋白酶。在一些情况下，化合物可靶向两者(游离病毒和蛋白酶)。
如本文所用，术语“疾病”是指冠状病毒感染相关医学或病理学病状。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。术语“受试者”和“患者”是指动物(例如，诸如鸡、鹌鹑或火鸡的鸟类，或哺乳动物)，具体来说，包含非灵长类动物(例如，牛、猪、马、羊、家兔、天竺鼠、大鼠、猫、狗和小鼠)和灵长类动物(例如，猴、黑猩猩和人类)的“哺乳动物”，且更具体来说，人类。在一个实施例中，受试者是非人类动物，诸如农畜(例如，马、牛、猪或羊)，或宠物(例如，狗、猫、天竺鼠或家兔)。在优选实施例中，受试者是“人类”。
如本文所用，术语“生物样本”包含但不限于细胞培养物或其提取物；从受试者获得的活检材料或其提取物；血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或其它体液或其提取物。
如本文所用，“感染倍率”或“MOI”是感染剂(例如，噬菌体或病毒)与感染目标(例如，细胞)的比率。举例来说，当提及用感染性病毒颗粒接种的细胞群时，感染倍率或MOI是由沉积于孔中的感染性病毒颗粒的数目除以存在于孔中的目标细胞的数目来定义的比率。
如本文所用，术语“抑制诺罗病毒的复制”和“抑制冠状病毒的复制”包含减少病毒复制的量(例如，减少至少10％)，其可足以引起对病毒复制的完全遏制(即100％减少)。在一些实施例中，诺罗病毒或冠状病毒的复制被抑制至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少65％、至少75％、至少85％、至少90％或至少95％。
诺罗病毒或冠状病毒复制可以通过所属领域中已知的任何适合的方法测量。举例来说，可测量生物样本(例如被感染的细胞培养物)的诺罗病毒或冠状病毒的病毒滴度或人类的诺罗病毒或冠状病毒的病毒滴度(例如患者的肺病毒滴度)。更具体来说，对于基于细胞的分析，在细胞被体外培养的各情况下，在存在或不存在测试剂的情况下将病毒添加至培养物，且在适合的时间长度后评估病毒依赖性端点。所述分析是所属领域中已知的。可用于本公开的第一类细胞分析视被感染目标细胞的死亡，即称为细胞病变作用(CPE)的过程而定，其中病毒感染引起细胞来源的耗竭和细胞的最终裂解。在第一类细胞分析中，微量滴定板的孔中的较小部分细胞被感染(通常1/10至1/1000)，使病毒在48至72小时内经历若干轮复制，随后使用细胞ATP含量相较于未感染对照物的减小来测量细胞死亡的量。可用于本公开的第二类细胞分析视被感染细胞中的病毒特异性RNA分子的倍增而定，其中使用支链DNA杂交方法(bDNA)直接测量RNA含量。在第二类细胞分析中，较低数目的细胞最初于微量滴定板的孔中进行感染，使病毒在感染的细胞中复制且扩散至额外轮次的细胞，接着所述细胞裂解且对病毒RNA含量进行测量。通常在18至36小时后提早停止此分析，此时所有目标细胞仍有活力。病毒RNA通过杂交至固定于分析盘的孔的特异性寡核苷酸探针、接着通过与连接至报告酶的额外探针杂交而扩增信号来定量。
如本文所用，“病毒滴度(或滴度)”是病毒浓度的度量。滴度测试可采用连续稀释以从本质上仅评估为阳性或阴性的分析型程序获得大致定量信息。滴度对应于仍产生正读数的最高稀释因子；举例来说，前8次连续两倍稀释中的正读数转换是1:256的滴度。为了确定滴度，将制备若干稀释液，诸如10-1、10-2、10-3、10-8。
如本文所使用，术语“治疗(treat/treatment/treating)”是指治疗性与预防性治疗。举例来说，治疗性治疗包含因给予一种或多种疗法(例如一种或多种治疗剂，诸如本公开的化合物或组合物)而减少或减轻诺罗病毒或冠状病毒感染的进展、严重程度和/或持续时间，或改善诺罗病毒或冠状病毒感染的一种或多种症状(具体来说，一种或多种可辨别的症状)。在具体实施例中，治疗性治疗包含改善诺罗病毒或冠状病毒感染的至少一种可测量身体参数。在其它实施例中，治疗性治疗包含身体上通过例如使可辨别症状温度、生理上通过例如使身体参数稳定或所述两者来抑制诺罗病毒或冠状病毒感染的进展。在其它实施例中，治疗性治疗包含使诺罗病毒或冠状病毒介导的感染减少或稳定。抗病毒药物可用于社区环境以治疗已患有诺罗病毒或冠状病毒的人群以减轻症状的严重程度且减少其患病天数。
术语“化学疗法”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于治疗病症或疾病。
如本文所用，术语“预防”或“预防性用途”和“预防性治疗”是指目的在于预防而非治疗或治愈疾病的任何医学或公共卫生程序。如本文所用，术语“预防(prevent/prevention/preventing)”是指降低患上或出现给定病况的风险，或降低或抑制并未不适但已成为或可能接近成为带病人员的受试者的复发或所述病况。术语“化学预防”是指使用例如小分子药物(而非“疫苗”)的药品用于预防病症或疾病。
如本文所用，预防性用途包含在已检测到爆发的情形下的使用，以预防感染在处于严重诺罗病毒或冠状病毒并发症的高风险下的大量人群彼此紧密接触的场所(例如，医院病房、日托中心、监狱、护理之家等)的接触传染或扩散。其还包含在需要保护以免患诺罗病毒或冠状病毒但在疫苗接种后并未获得保护(例如，归因于免疫系统弱)的群体的中的使用，或在疫苗对其不可用时或在其由于副作用无法获得疫苗时的使用。其还包含在疫苗接种后两周期间的使用，因为在所述时间期间疫苗仍是无效的。预防性用途还可以包含治疗并未患有诺罗病毒或冠状病毒或不认为处于并发症高风险下的人以降低感染诺罗病毒或冠状病毒且将其传染给与其紧密接触的高风险的人(例如医疗保健工作者、护理之家工作者等)的机会。
在一些实施例中，本公开的方法是针对易患由诺罗病毒或冠状病毒的感染引起的并发症的患者，具体来说人类的“预防性(preventative/prophylactic)”措施。预防性用途包含在已确认“指示病例”或“爆发”的情况中的用途，以防止感染在社区或群体的其余部分中扩散。
在实施例中，本公开的方法用作对社区或群体的成员(具体来说，人类)的“预防性”措施，以防止感染扩散。
如本文所用，“有效量”是指足以引起所期望生物反应的量。在本公开中，所期望生物反应是抑制诺罗病毒或冠状病毒的复制，减少诺罗病毒或冠状病毒的量，或减少或改善诺罗病毒或冠状病毒感染的严重程度、持续时间、进展或发作，预防诺罗病毒或冠状病毒感染的加快，预防与诺罗病毒或冠状病毒感染相关的症状的复发、发展、发作或进展，或增强或改良针对诺罗病毒或冠状病毒感染使用的另一种疗法的预防性或治疗作用。向受试者给予的化合物的量将视给药模式、感染的类型和严重程度和受试者的特征(诸如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性)而定。所属领域的技术人员将能够依据这些和其它因素确定适当的剂量。当与其它抗病毒剂共同给予时，例如当与抗诺罗病毒或抗冠状病毒药品共同给予时，第二药剂的“有效量”将视所使用的药剂类型而定。批准药剂的适合的剂量是已知的且可由所属领域的技术人员根据受试者的病状、所治疗病状的类型和所使用的本文所描述的化合物的量进行调整。在未明确地标注量的情况下，应假设安全且有效的量。举例来说，本文所描述的化合物可能以大约0.01至100毫克/千克体重/天之间的剂量范围向受试者给予以用于治疗性或预防性治疗。
一般来说，给药方案可根据各种因素进行选择，所述因素包含：所治疗的病症和病症的严重程度；采用的具体化合物的活性；采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和膳食；采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；受试者的肾和肝功能；和采用的具体化合物或其盐、治疗的持续时间；与采用的具体化合物组合或同时使用的药物；以及医学领域中众所周知的类似因素。所属领域的技术人员可容易地确定和开立用于治疗、预防、抑制(完全或部分)或遏制疾病进展所需的本文所描述的化合物的有效量。
用于本文所描述的方法和组合物的化合物(例如式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物或其盐)的剂量可以在约0.01至约100毫克/千克体重/天、约0.01至约50毫克/千克体重/天、约0.1至约50毫克/千克体重/天、或约1至约25毫克/千克体重/天之间的范围内。在一些情况下，所述方法或组合物包括剂量为约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg的式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物或其盐。在一些情况下，所述方法或组合物包括剂量为约5mg/kg的式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物或其盐。在一些情况下，所述方法或组合物包括剂量为约10mg/kg的式(I)、式(Ia)、式(Ib)的化合物或其盐。
对于治疗性治疗，可以在症状(例如鼻塞、咽喉痛、咳嗽、疼痛、乏力、头痛和发冷/盗汗)的发作的例如48小时内(或40小时内、或小于2天、或小于1.5天或24小时内)向患者给予本文所描述的化合物。治疗性治疗可持续任何适合的持续时间，例如，5天、7天、10天、14天等。对于社区爆发期间的预防性治疗，可例如在指示病例的症状的发作的例如2天内向患者给予本文所描述的化合物，且可持续任何合适的持续时间，例如7天、10天、14天、20天、28天、35天、42天等。
组合疗法
本文所描述的化合物可以组合疗法，即与其它抗诺罗病毒或抗冠状病毒化合物结合或与疫苗结合使用。在患者可能暴露于超过一种形式的诺罗病毒或冠状病毒的情况下，组合疗法可能尤其有利。
可以在单独或与另外的适合治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)组合采用本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐的本发明的方法或药物组合物中实现安全且有效量。当采用“组合疗法”时，可使用第一量的本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二量的另外的适合治疗剂(例如抗病毒剂或疫苗)实现安全且有效的量。
在实施例中，本文所公开的化合物或药学上可接受的盐和另外治疗剂是各自以安全且有效的量(即，各自以在单独给予时将为治疗有效的量)给予。在其它实施例中，本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和另外的治疗剂各自以不单独提供治疗作用的量(亚治疗剂量)给予。在其它实施例中，本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐可以安全且有效的量给予，而另外的治疗剂是以亚治疗剂量给予。在其它实施例中，本文所公开的化合物、其药学上可接受的盐可以亚治疗剂量给予，而另外的治疗剂(例如适合抗病毒治疗剂)是以安全且有效的量给予。
如本文所用，术语“组合”或“共同给予”可互换使用以指使超过一种疗法(例如一种或多种预防剂和/或治疗剂)。所述术语的使用不限制向受试者给予的疗法(例如预防剂和/或治疗剂)的次序。
共同给予涵盖以基本上同时的方式，诸如以单一药物组合物形式，例如具有固定比率的第一量与第二量的胶囊或片剂，或以多个各自分开的胶囊或片剂形式给予第一量和第二量的共同给予的化合物。另外，所述共同给予还涵盖以任一次序以依序方式使用各化合物。
在实施例中，本公开涉及组合疗法的方法，其用于抑制病毒在生物样本或患者中的复制，或用于使用本文所描述的化合物或药物组合物(例如本文所公开的化合物)或其药学上可接受的盐治疗或预防患者中的冠状病毒或冠状病毒感染。因此，药物组合物还包含包括与呈现抗诺罗病毒或冠状病毒活性的抗病毒化合物组合的如本文中所公开的化合物(例如，病毒复制的抑制剂)的药物组合物。
本文所公开的化合物和组合物的使用方法还包含化学疗法与本文所公开的化合物或组合物或其药学上可接受的盐的组合，或与本公开的化合物或组合物以及另一抗病毒剂的组合。
当共同给予涉及分开给予第一量的本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二量的另外治疗剂时，化合物在足够接近的时间内给予以具有所需治疗作用。举例来说，可产生所期望治疗作用的各给药之间的时间段的范围可以在数分钟至数小时的范围内，且可考虑到各化合物的特性(诸如效能、溶解度、生物可用性、血浆半衰期和动力学概况)来确定。举例来说，本文公开的化合物或其药学上可接受的盐以及第二治疗剂可按任何次序彼此间隔约24小时、彼此间隔约16小时、彼此间隔约8小时、彼此间隔约4小时、彼此间隔约1小时或彼此间隔约30分钟地给予。
更具体来说，第一疗法(例如，诸如本公开的化合物的预防剂或治疗剂)可以在向受试者给予第二疗法(例如，诸如抗病毒剂的预防剂或治疗剂)之前(例如，之前5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同时或之后(例如，之后5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)进行给予。
应理解，共同投给予第一量的本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二量的另外治疗剂的方法可产生增强或协同的治疗作用，其中组合作用大于将由单独给予第一量的本文所公开的化合物或其药学上可接受的盐和第二量的另外治疗剂产生的累加作用。
如本文所用，术语“协同”是指与疗法的假定累加作用相比更有效的本文所公开的化合物与另一种疗法(例如，预防剂或治疗剂)的组合。疗法组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同作用可允许使用较低剂量的疗法中的一种或多种和/或较不频繁地向受试者给予所述疗法。能够利用较低剂量的疗法(例如预防剂或治疗剂)和/或较不频繁地给予所述疗法可降低与向受试者给予所述疗法相关联的毒性而不降低所述疗法在预防、处理或治疗病症方面的功效。另外，协同作用可使得药剂在预防、处理或治疗病症方面的功效改良。最后，疗法的组合(例如预防剂或治疗剂的组合)的协同作用可避免或降低与任一单独疗法的使用相关联的不利或不合需要的副作用。
当使用如本文所公开的化合物的组合疗法与病毒疫苗组合时，两种治疗剂均可给予以使得每次给药之间的时间段可以更长(例如数天、数周或数天)。
协同作用的存在可使用用于评估药物相互作用的适合的方法来确定。适合的方法包含例如Sigmoid-Emax方程式(霍夫德(Holford,N.H.G.)和舍纳(Scheiner,L.B.)，《临床药代动力学(Clin.Pharmacokinet.)》6:429-453(1981))、罗伊威可加性方程(equation ofLoewe additivity)(罗伊威(Loewe,S)和穆驰尼克(Muischnek,H.),《实验病理学与药理学档案(Arch.Exp.Pathol Pharmacol.)》114:313-326(1926))和中值作用方程(周(Chou,T.C.)和特拉雷(Talalay,P.)，《酶调控研究进展(Adv.Enzyme Regul.)》22:27-55(1984))。上文提及的各方程式可结合实验数据应用以产生有助于评估药物组合的作用的对应图表。与上文提及的方程式相关的对应图表分别是浓度-作用曲线、等效线图曲线和组合指数曲线。
手性分离
本文所描述的化合物可以具有不对称中心且以外消旋体、外消旋混合物、个别非对映异构体或对映异构体形式存在，其中所有异构体形式均包含在本公开中。具有手性中心的本公开的化合物可呈光学活性和外消旋形式存在且经分离。一些化合物可呈现多形现象。本公开涵盖具有本文所描述的适用特性的本公开的化合物的外消旋、光学活性、多形或立体异构形式或其混合物。光学活性形式可以通过例如用再结晶技术解析外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成、或通过使用手性固定相的色谱分离或通过酶促解析来制备。我们可以纯化对应化合物，随后衍生化所述化合物以形成本文所描述的化合物或纯化所述化合物本身。
光学活性形式的化合物可以通过使用所属领域中已知的任何方法制备，所述方法包含但不限于通过再结晶技术解析外消旋形式、通过从光学活性起始材料合成、通过手性合成、或通过使用手性固定相的色谱分离。
获得光活性材料的方法的实例包含以下至少一种。
i)晶体的物理分离：手动分离个别对映异构体的肉眼可见晶体的技术。若分离对映异构体的晶体存在，即材料聚结，且晶体在视觉上不同，则可使用此技术；
ii)同时结晶：可能仅当外消旋体以固体状态聚结时，个别对映异构体才从外消旋体的溶液中分别结晶的技术；
iii)酶促解析：借助于对映异构体与酶的不同反应速率部分或完全分离外消旋体的技术；
iv)酶促不对称合成：合成的至少一个步骤使用酶促反应以获得所期望对映异构体的对映异构性纯或增浓的合成前体的合成技术；
v)化学不对称合成：可使用手性催化剂或手性助剂实现的在产物中产生不对称性(即手性)的条件下，所期望对映异构体由非手性前体合成的合成技术；
vi)非对映异构体分离：使外消旋化合物与将单独的对映异构体转化成非对映异构体的对映异构性纯的试剂(手性助剂)反应的技术。所得非对映异构体随后借助于其当前更明显的结构差异和手性助剂(随后去除以获得所期望对映异构体)通过色谱或结晶分离；
vii)第一阶和第二阶不对称转换：来自外消旋体的非对映异构体平衡以在来自所期望的对映异构体的非对映异构体的溶液中产生优势，或其中从所期望对映异构体优先结晶非对映异构体干扰平衡以使得最终原则上所有材料从所期望对映异构体转化成结晶非对映异构体的技术。所期望对映异构体随后从非对映异构体释放；
viii)动力学解析：此技术是指借助于对映异构体与手性、非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不相等反应速率实现外消旋体的部分或完全解析(或部分溶解的化合物的进一步解析)；
ix)从非外消旋前体对映异构特异性合成：所期望对映异构体获自非手性起始材料，且其中立体化学完整性在合成过程中不受损或仅最低限度地受损的合成技术；
x)手性液相色谱：外消旋体的对映异构体借助于其与固定相的不同相互作用(包含但不限于通过手性HPLC)在液体移动相中分离的技术。固定相可由手性材料构成，或移动相可含有额外的手性材料以引起不同相互作用；
xi)手性气相色谱：外消旋体挥发，且对映异构体借助于其以气态移动相与含有固定的非外消旋手性吸附相的柱的不同相互作用分离的技术；
xii)用手性溶剂提取：对映异构体借助于将一种对映异构体优先溶解至具体手性溶剂中而分离的技术；
xiii)跨手性膜运输：使外消旋体与薄膜屏障接触的技术。屏障通常分离两种可混溶流体，一种含有外消旋体，且驱动力(诸如浓度或压力差)引起跨膜屏障的优先运输。分离通过膜的非外消旋手性性质而进行，所述性质使得外消旋体中仅一种对映异构体可以通过。
一个实施例中使用手性色谱，包含但不限于模拟移动床色谱。多种手性固定相是市售的。
将参考以下非限制性实例更好地理解本公开。
化合物合成
实例1：Int-7的合成
Int-7的制备
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)
在N2下，将2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(2)(16.9g，84.03mmol)添加至铜粉(10.58g，168.06mmol)于DMSO(100mL)中的悬浮液中，且将反应物在室温下搅拌1小时，接着添加1-氯-3-碘苯(10g，42.016mmol)，且将反应物在60℃搅拌16小时。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用NH4Cl水溶液(200mL)淬灭且用二乙醚(2×150mL)萃取，将合并的有机层用水(250ml)和盐水溶液(300mL)洗涤，经硫酸钠干燥且蒸发。通过正相色谱纯化粗残余物，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.2
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)
向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)(1g，4.273mmol)于THF(20mL)中的经搅拌溶液中添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(0.62g，6.41mmol)，且将反应物冷却至-10℃，随后添加含1.0M氯化异丙基镁的THF(12.8mL，12.82mmol)且在相同温度下搅拌2小时。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(120mL)洗涤，然后用盐水溶液(150mL)洗涤，随后经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf：0.2。LCMS(ESI):m/z 250.10[M+Na]+
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-酮(6)
在-30℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)(5.5g，22.08mmol)于THF(50mL)中的经搅拌溶液中添加溴化苯基镁(5)(44mL，44.17mmol)且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并且用水(150mL)和盐水溶液(150mL)洗涤，随后经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-酮(6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-酮(6)(6g，22.55mmol)于MeOH(60mL)中的经搅拌溶液中添加硼氢化钠(2.57g，67.66mmol)，在室温下搅拌2小时。通过TLC监测反应进展。用冰水淬灭反应混合物且在减压下蒸发过量甲醇。向其中添加1N HCl(150mL)，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取混合物。将合并的有机层用水(150mL)和盐水溶液(150mL)洗涤且经硫酸钠干燥，随后在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.45
实例2：化合物A20非对映异构体1和2的合成
A20非对映异构体1(A20-1)
(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇和(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇
通过SFC纯化化合物(Int-7)，得到(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-PK-1)和(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-PK-2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 558.57[M+H]+
(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在0℃向(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(1)(3.5g，13.059mmol)于ACN(35mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰亚胺酯(8.35g，32.64mmol)，然后添加三乙胺(5.4mL，39.177mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-氨基-3-环己基丙酸甲酯(2)(5.77g，26.118mmol)溶解于ACN(35mL)中，且用三乙胺(5.4mL，39.177mmol mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加至上文所制备的反应物质中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过逆相色谱纯化残余物，得到(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 502.47[M+Na]+
(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)
在室温下向(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)(4g，8.35mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.7g，16.701mmol)且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸馏反应混合物，将残余物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2，接着用二氯甲烷(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z＝953.64[2M+Na]+
(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)(1.5g，3.225mmol))于DMF(15mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC·HCl(0.923g，4.8375mmol)、HOBt(0.65g，4.8375mmol)、DIPEA(1.65mL，35.481mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(0.85g，3.87mmol))，且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取且用冰冷水(2×50mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 634.56[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)
在0℃向(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(1.1g，1.7377mmol)于二氯甲烷(15mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.86mL，1.7377mmol)，且将混合物搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。通过正相色谱纯化所得化合物且用乙醚湿磨，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝606652[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A20-1)
在0℃向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)(800mg，1.322mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(840mg，1.983mmol)且将溶液在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由滤片过滤反应物质，将其用乙酸乙酯(100mL)洗涤。随后将有机层用10％硫代硫酸钠溶液(2×100mL)洗涤，然后用饱和碳酸氢钠溶液(2×100mL)、水(1×100mL)和盐水(1×100mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过正相色谱纯化，得到((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A20-1)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 604.3[M+H]+
A20非对映异构体2(A20-2)
(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)
在0℃向(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(1)(3.2g，11.94mmol)于ACN(35mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰亚胺酯(4.6g，17.910mmol)，然后添加三乙胺(4mL，35.82mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一烧瓶中，将(S)-2-氨基-3-环己基丙酸甲酯盐酸盐(2)(2.65g，14.328mmol)溶解于CAN(35mL)中，且用三乙胺(4mL，35.82mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，接着逐滴添加至上文所制备的反应物质中，且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过逆相色谱纯化，得到(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 480.2[M+H]+
(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)
在室温下向(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸甲酯(3)(2.5g，5.219mmol)于THF(25mL)、水(12.5mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(0.394g，10.7438mmol)且在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸馏反应混合物，且将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2，用二氯甲烷(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z＝466.14[M+H]+
(S)-2-((S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(4)(0.5g，1.075mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.3g，1.612mmol)、HOBt(0.21g，1.612mmol)、DIPEA(0.46mL，3.225mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(0.23g，1.29mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取且用冰冷水(2×50mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到(S)-2-((S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 634.3[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)
在0℃向(S)-2-((S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(0.35g，0.552mmol)于二氯甲烷(5mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.5mL，1.1058mmol)，且将混合物搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭，且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，且经硫酸钠干燥。在减压下浓缩混合物，且通过正相色谱纯化残余物并用乙醚湿磨，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝606.3[M+H]+
((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A20-2)
在0℃向((S)-3-环己基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)(0.300g，0.49mmol)于EtOAc(60mmol)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(0.63g，1.40mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释且用饱和海波溶液(hypo solution)(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过逆相柱纯化，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯(A20-2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 603.23(M+H)+
实例3：化合物A25非对映异构体1和2的合成
((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(8)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(3.8g，14.179mmol))于ACN(40mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺酯(5.4g，21.268mmol)，然后添加三乙胺(5.9mL，42.537mmol)，且将混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一烧瓶中，将L-亮氨酸甲酯盐酸盐(7)(3.89g，21.268mmol)溶解于ACN(40mL)中，且用三乙胺(5.9mL，42.537mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5分钟，接着逐滴添加上文制备的反应物质且将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，且通过正相色谱，使用石油醚和乙酸乙酯作为移动相来纯化残余物，得到((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(8)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 440.39[M+H]+
((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(9)
在室温下向((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(8)(2.5g，5.694mmol)于THF(25mL)、水(25mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(717mg，17.084mmol)，且将混合物在室温下搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下去除过量THF，且将所得残余物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2。用DCM(2×100mL)萃取混合物，且将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 448.30[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(9)(2g，4.70mmol)于DMF(20mL)中的经搅拌溶液中添加EDC·HCl(1.34g，7.058mmol)、HOBt(0.952g，7.058mmol)、DIPEA(2.5mL，14.61176mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(1.567g，7.058mmol)，将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，随后将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过正相色谱纯化，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝594.62[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)(1g，1.686mmol)于二氯甲烷(10mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(1.68mL，3.372mmol)，且将混合物搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×50mL)萃取，接着经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z566.49[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2)
通过SFC纯化来纯化((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(7g，12.38mmol)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2)。LCMS(ESI):m/z 566.52[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1-A)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1)(1.8g，3.185mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(4.5g，10.83mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过正相纯化而纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1-A)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 564.2[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-1)
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-1-A)(800mg，1.42mmol)于DCM(6mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(0.7mL，7.1mmol)、异氰酸环丙烷(114mg，1.7mmol)和TFA(80mg，0.71mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用1N HCl(2×30mL)洗涤，然后用水((20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-1)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.25；LCMS(ESI):m/z 649.62[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A25-1)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-1)(900mg，1.388mmol)于乙酸乙酯(8mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.4g，3.47mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×40mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A25-1)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 647.3[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2-A)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2)(1.9g，3.36mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(5.25g，11.76mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过正相纯化而纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2-A)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 564.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-2)
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11-PK-2-A)(1.1g，1.95mmol)于DCM(8mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(0.8mL，9.75mmol)、异氰酸环丙烷(214mg，3.19mmol)和TFA(111mg，0.95mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用1N HCl(2×30mL)洗涤，然后用水((20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-2)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.25；LCMS(ESI):m/z 649.62[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A25-2)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12-PK-2)(1.1g(粗物质)，1.69mmol)于乙酸乙酯(12mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(2.4g，5.94mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，并接着将滤液用海波溶液(3×40mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A25-2)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 647.3[M+H]+
实例4：化合物A26P和A26的合成
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-醇(2)
在-30℃向2-(3-氯苯基)-2-甲基丙醛(Int-3)(10g，54.94mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加溴化4-氯苯基镁(1)(109.89mL，109.89mmol)，且将反应混合物在0℃搅拌3小时。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl(150mL)淬灭且经由床过滤，且用乙酸乙酯(2×150mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过硅胶柱色谱，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化残余物，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-醇(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z＝243.18[M-OH]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(4)
向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-醇(2)(10g，38.46mmol)(2)于DCM(100mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(7.6mL，96.15mmol)。接着在0℃添加(S)-2-氨基己酸甲酯(3)(16.25g，57.69mmol和三光气(5.6g，19.23mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用1N HCl(25mL)酸化且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，接着有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下蒸发。将残余物通过combi-flash纯化且以10％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(4)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z＝431.12[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(5)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(4)(12g，27.84mmol)于THF(80mL)、水(30mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(2.28g，55.68mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸发反应混合物，且用1N HCl水溶液酸化残余物直到约pH 2。将溶液用乙酸乙酯(2×60mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 440.38[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(5)(8g，25.23mmol)于DMF(100mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(7.23g，37.85mmol)、HOBt(5.1g，37.85mmol)、DIPEA(19.79mL，113.55mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8.36g，37.85mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取且用冰冷水(2×50mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝586.55[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7-PK-2)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(6)(8g，13.67mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(13.67mL，27.35mmol)，且将混合物搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用EtOAc(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到残余物，其通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7)。
通过SFC纯化化合物(7)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7-PK-1)和(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙基((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(7-PK-2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 558.57[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A26前体)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯(7-PK-1)(1g，1.79mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.14g，2.69mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A26前体)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 556.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(10-PK-1)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A26前体)(450mg，0.81mmol)的经搅拌溶液中添加吡啶(0.5mL，5vol)、异氰酸环丙烷(9)(86.83mg，1.29mmol)和TFA(184mg，1.62mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用1N HCl(2×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到粗((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(10-PK-1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 641.66[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A26)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(10PK-1)(450mg，0.70mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(744mg，1.75mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A26)。TLC系统：
10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 639.3[M+H]+
实例5：化合物A27的合成
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(10g，37.313mmol))于ACN(100mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺酯(23.9g，93.283mmol)，然后添加三乙胺(15.8mL，111.939mmol)，且将混合物在室温下搅拌4小时。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一烧瓶中，将(S)-2-氨基己酸甲酯HCl(2)(16.9g，93.283mmol)溶解于ACN(60mL)中，且用三乙胺(15.8mL，111.939mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加至上文所制备的反应物质中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，随后将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过硅胶柱色谱纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 440.2[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)(10g，22.727mmol)于THF(80mL)、水(20mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.9g，45.454mmol)且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸发反应混合物，且随后将残余物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)。TLC系统：60％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z＝448.2[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)(9g，21.176mmol)于DMF(30mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC·HCl(6.06g，31.764mmol)、HOBt(4.3g，31.764mmol)、DIPEA(11.3mL，65.148mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7g，31.764mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取且用冰冷水(2×100mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到残余物，其通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：80％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 594.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(8g，13.468mmol)于THF(80mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(14mL，26.93mmol)且搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到残余物，其通过硅胶柱色谱纯化，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝566.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-2)
通过SFC纯化化合物(6)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 566.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A27)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)(300mg，0.50mmol)溶解于乙酸乙酯(3mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(674mg，1.59mmol)且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A27)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 564.3[M+H]+
实例6：化合物A28非对映异构体1和2的合成
((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-醇(1)(12.5g，48.07mmol)、(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯HCl(10.47g，57.69mmol)于DCM(50mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(38mL，3vol)，然后添加三光气(7.1g，24.03mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用2N HCl(50mL)淬灭且用DCM(2×40mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤且在减压下蒸发。通过逆相液相色谱(RP-HPLC)(10％ABC:ACN)纯化残余物，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z454.48[M+Na]+。手性HPLC数据：PK-139％和PK-2 56％
((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(3)(7.2g，16.70mmol)于THF(40mL)、水(40mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.4g，33.41mmol)且将混合物在室温下搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸发反应混合物，且将残余物用1N HCl水溶液酸化直到pH约3。将溶液用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)。TLC系统：100％EtOAc Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 440.47[M+Na]+。手性HPLC数据：PK-139％和PK-2 60％
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)-L-亮氨酸(4)(7.2g，16.78mmol)于DMF(30mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC·HCl(4.8g，25.17mmol)、HOBt(3.3g，25.17mmol)、DIPEA(8.7mL，50.35mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(3.7g，20.14mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用冰水(80mL)稀释，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过RP-HPLC(10％ABC:ACN)纯化残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 586.62[M+H]+。手性HPLC数据：PK-145％和PK-2 54％
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(4.4g，7.52mmol)于DCM(20mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH 4 的THF(7.5mL，15.04mmol)，且将反应混合物在0℃搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭且用DCM(2×30mL)萃取。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 558.9[M+Na]+。手性HPLC数据：PK-1 46％和PK-249％
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-2)
经由SFC分离((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)(4g，7.16mmol)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 558.27[M-OH]-。手性HPLC数据：PK-1 99％，手性HPLC数据：PK-299％
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-1)(700mg，1.25mmol)于二氯甲烷(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1g，2.51mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，接着用海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过正相色谱纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 556.45(M+H)+。手性HPLC数据：PK-1 82％
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7)(550mg，0.98mmol)溶解于DCM(15mL)中的经搅拌溶液中依序添加吡啶(0.54mL，3vol)和异氰基环丙烷(8)(0.13mL，1.98mmol)且将混合物搅拌10min。在0℃向此溶液中添加TFA(0.07mL，0.99mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。用1N HCl(3×15mL)和盐水溶液(3×10mL)洗涤有机层。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 641.5[M+H]+。手性HPLC数据：PK-1 49％和PK-2 33％
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A28非对映异构体1)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)(350mg，0.54mmol)于EtOAc(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(463mg，1.09mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)洗涤，然后用海波溶液(3×20mL)和饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过RP-HPLC(10％ ABC:ACN)纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A28非对映异构体1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 639.2(M+H)+。手性HPLC数据：PK-1 96％
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7a)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(PK-2)(700mg，1.25mmol)于二氯甲烷(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1g，2.51mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)、海波溶液(3×20mL)和饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过正相色谱纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7a)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z556.45(M+H)+。手性HPLC数据：PK-1 93％
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9a)
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(7a)(520mg，0.98mmol)于DCM(15mL)中的经搅拌溶液中依序添加吡啶(0.75mL，3vol)和异氰基环丙烷(8)(0.13mL，1.98mmol)，且将混合物搅拌10分钟。在0℃向此混合物中添加TFA(0.07mL，0.99mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用冰水(20mL)淬灭且用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将有机层用1N HCl(3×15mL)和盐水溶液(3×10mL)洗涤，随后经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9a)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 641.5[M+H]+。手性HPLC数据：PK-1 27％和PK-1 60％
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A28非对映异构体2)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9a)(350mg，0.54mmol)于EtOAc(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(463mg，1.09mmol)，且将混合物在室温下搅拌3小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物经由垫过滤且用乙酸乙酯(25mL)、海波溶液(3×20mL)和饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物，其通过RP-HPLC(10％ ABC:ACN)纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(化合物A28非对映异构体2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 639.2(M+H)+。手性HPLC数据：PK-1 97％
实例7：化合物A29的合成
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在室温下向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(1.8mg，2.838mmol)于THF(30mL)和水(15mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(357.6mg，8.516mmol)，且将混合物在室温下搅拌2小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸发反应混合物，且将残余物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2。随后将混合物用乙酸乙酯(2×20mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝620.60[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1l4-噻吩-1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(8)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(1.0g，1.612mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中同时添加HATU(903.09mg，3.225mmol)、DIPEA(0.89mL，4.838mmol)和1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-溴化鎓(3)(503.4mg，2.419mmol)，且将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用冰水(50mL)稀释，用二氯甲烷(2×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将残余物通过combi-flash NP纯化，随后以5％甲醇/二氯甲烷洗脱，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1l4-噻吩-1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 729.61[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)
在0℃向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1l4-噻吩-1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)(400mg，0.548mmol)于甲醇(30mL)中的经搅拌溶液中添加m-CPBA(189.13mg，1.096mmol)，且将反应混合物在0℃搅拌2小时。向其中添加乙胺盐酸盐(5)(1.34g，16.454mL)和DIPEA(3.03mL，16.454mmol)，且将混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用饱和NaHCO3溶液(2×20mL)洗涤。将有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到残余物，其通过制备型HPLC纯化，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(化合物A29)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 675.4[M+H]+
实例8：化合物A107和A110的合成
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(1)(50g，186.56mmol)于ACN(500mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺酯(119.4g，466.41mmol)，然后添加Et3N(80.7mL，559.74mmol)，且在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-氨基己酸甲酯(2)(70g，171.96mmol)溶解于ACN(350mL)中，且添加Et3N(46mL，318.21mmol)。将反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到物质，其通过硅胶(200至300目)柱色谱，用10％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 440.13[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(3)(40g，90.1mmol)于THF(200mL)：水(200mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(9.56g，227.71mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物浓缩且用1NHCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到物质，其通过硅胶(230至300目)柱色谱，使用30％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)。TLC系统：5％MeOH:DCM。Rf:0.3；；LCMS(ESI):m/z＝448.26[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(4)(20g，47.05mmol)于DMF(100mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(13.72g，70.4mmol)、HOBt(9.5g，70.4mmol)、DIPEA(25mL，56.446mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(15.67g，70.4mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。向反应混合物中添加冰水(200mL)，用乙酸乙酯(2×150mL)萃取且用冰冷水(2×100mL)洗涤。合并的有机层经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到化合物。通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 594.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(19g，32.04mmol)于THF(190mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(32mL，64.08mmol)且搅拌2h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(250mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到化合物。通过逆相柱色谱纯化所述化合物，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝566.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-2)
通过手性SFC纯化15g的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝566.2[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A107)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-1)(4g，7.064mmol)于乙酸乙酯(80mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(6g，14.132mmol)，且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×100mL)、饱和NaHCO3溶液(3×100mL)和盐水(2×50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过逆相柱色谱纯化所述化合物，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A107)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z564.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A110)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6-PK-2)(6g，10.64mmol)溶解于乙酸乙酯(40mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(6g，14.132mmol)，且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×100mL)、饱和NaHCO3溶液(3×100mL)和盐水(2×50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过逆相柱色谱纯化所述化合物，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A110)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 564.2[M+H]+
实例9：化合物A122的合成
(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1-PK-1)和(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1-PK-2)
通过手性SFC纯化10g的(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1)，得到(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1-PK-1)(4.2g，5.99mmol)和(S)-2-((((R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1-PK-2)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 440.2[M+Na]+
(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)
在0℃向(S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酸(1-PK-1)(4g，9.6mmol)于DMF(20mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(2.7g，13.8mmol)、HOBt(1.86g，13.8mmol)、DIPEA(5mL，27.6mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2')(2.56g，13.8mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用冰水(80mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash(正相)来纯化所述物质，以5％甲醇/二氯甲烷洗脱化合物，得到(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：100％ EtOAc。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 602.6[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)
在0℃向(S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(2)(4g，6.83mmol)于DCM(20mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH 4 的THF(6.8mL，13.6mmol)，且将反应混合物在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z558.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A122)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(1-PK-1)(3.5g，6.3mmol)于乙酸乙酯(50mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(5.3g，12.5mmol)，且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，且用饱和海波溶液(3×50mL)、饱和NaHCO3溶液(3×50mL)和盐水(1×50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过逆相combi-flash色谱纯化所述化合物，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A122)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z556.3[M+H]+
实例10：化合物A164和A165的合成
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-酮(2)
在0℃向(3-氟苯基)溴化镁(1)(由Mg(4.3g，258.49mmol)新鲜制备)、1-溴-3-氟苯(15g，86.16mmol)、1,2-二溴乙烷(3mL)在0℃于二乙醚中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加含2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(15g，60.24mmol)的THF(45mL)，且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(500mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×700mL)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化所得残余物，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-酮(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-醇(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-酮(2)(9g，31.69mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加硼氢化钠(3.59g，95.07mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用冰水淬灭且在减压下蒸发以去除THF。随后添加1N HCl(150mL)且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(150mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-醇(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(5)：
在室温下向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙-1-醇(3)(6.4g，22.37mmol)于甲苯(30mL)中的经搅拌溶液中添加(S)-2-异氰酸己酸甲酯(9.2g，44.75mmol)，然后添加三乙胺(9.4mL，67.13mmol)，且加热至100℃持续16h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸发反应混合物，且通过硅胶柱色谱，用6％至7％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化残余物，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 458.4[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(6)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(5)(9.7g，21.22mmol)于THF(50mL)和水(15mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.7g，42.45mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物以去除THF。将所得残余物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(6)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z＝424.2[M-19]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(6)(4.0g，9.02mmol)于DMF(20mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(2.58g，13.54mmol)、HOBt(1.82g，13.54mmol)、DIPEA(4.85mL，27.08mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2.0g，10.83mmol)，且在室温下搅拌16h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用冰水(100mL)稀释且用乙酸乙酯(2×150mL)萃取。将合并的有机层用冰冷水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过硅胶柱色谱，用100％乙酸乙酯洗脱来纯化所得残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 612.14[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(8)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(7)(2.2g，3.60mmol)于二氯甲烷(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加含2M LiBH4的THF(3.6mL，7.20mmol)且在相同温度下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。依据TLC反应完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭且用二氯甲烷(2×150mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝584.8[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(8-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(8-PK-2)
通过手性SFC纯化2g的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3)，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3-PK-1)(1g，2.71mmol)和((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(3-PK-2)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 584.57[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(A164)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(8)(450mg，0.77mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(981mg，2.31mmol)，且在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用DEE/正戊烷湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(A164)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z582.76[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(A165)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(8)(450mg，0.77mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(981mg，2.31mmol)且在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)和盐水(1×20mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用DEE/正戊烷湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(3-氟苯基)乙酯(A165)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z582.7[M+H]+
实例11：化合物A173的合成
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(2)：
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A77)(700mg，1.27mmol)于DCM中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(1)(1.5mL，2vol)，然后添加乙酸(0.2mL，3.56mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过柱色谱，使用硅胶和3％MeOH/DCM作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-乙酸-4-氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(360mg，542.98mmol)，将其溶解于THF(10mL)、水(5mL)中，在0℃添加氢氧化锂(71mg，1.62mmol)且在室温下搅拌4h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 621.70[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A173)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(2)(0.25g，0.40mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(381mg，0.80mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到，其通过逆相纯化和50％ACN/0.1％甲酸水溶液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A173)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 619.3[M+H]+
实例12：化合物A220和A221的合成
三氟甲烷磺酸环戊-1-烯-1-基酯(3)
在-78℃向环戊-1-烯-1-醇(1)(40g，476.19mmol)于THF(200mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加含1M LiHMDS的THF(153mL，428mmol)并在相同温度下保持30min。随后在-78℃逐滴添加溶解于THF(200mL)中的N-苯基-O-((三氟甲基)磺酰基)-N-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)羟胺(152.9g，428.57mmol)且在室温下保持16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。将有机层用水(2×100mL)和盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过100至200二氧化硅柱，用2％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化所得物，得到三氟甲烷磺酸环戊-1-烯-1-基酯(3)。TLC系统：2％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.6(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环戊-1-烯-1-基)丙酸甲酯(5)
在室温下向锌粉(15.6g，182.37mmol)和催化量的碘于DMF(200mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(4)(20g，60.79mmol)且搅拌30min。此后，在室温下添加三氟甲烷磺酸环戊-1-烯-1-基酯(3)(13.1g，60.79mmol)且用氩气脱气10min。随后添加Sphos(496mg，1.21mmol)、Pd(dppf)Cl2(888mg，1.21mmol)且再次用氩气脱气10min，并在50℃搅拌16h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用冰水(500mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。将所得物通过二氧化硅(100至200目)柱纯化且用5％乙酸乙酯/石油醚洗脱，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环戊-1-烯-1-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：2％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.4(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(6)
在室温下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环戊-1-烯-1-基)丙酸甲酯(5)(10g，37.17mmol)于甲醇(100mL)中的经搅拌溶液中添加10％ Pd-C(20％w/w)且在氮气球压力下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，用甲醇(50mL)洗涤床且在减压下蒸发滤液，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(6)。TLC系统：4％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5(S)-2-氨基-3-环戊基丙酸甲酯盐酸盐(7)：
在0℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(6)(19.1g，70.47mmol)于DCM(40mL)中的经搅拌溶液中添加4M 1,4-二噁烷.HCl(76mL，4vol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸发反应混合物，得到物质，将其用二乙醚(2×50mL)湿磨，得到(S)-2-氨基-3-环戊基丙酸甲酯盐酸盐(7)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.2
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(8)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(22g，82.089mmol)于100mL乙腈中的经搅拌溶液中添加DSC(42g，164.17mmol)，然后添加三乙胺(28.5mL，205.22mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2h。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-氨基-3-环戊基丙酸甲酯盐酸盐(7)(13g，62.8mmol)溶解于乙腈(120mL)中，且用三乙胺(21.8mL，75.36mmol)处理。随后逐滴添加以上制备的反应物质且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到化合物。通过正相色谱纯化所述物质，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 466.27[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸(9)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸甲酯(8)(23g，49.67mmol)于THF(150mL)、水(10mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(5.2g，124.17mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×500mL)萃取，将合并的有机层用水(200mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 452.25[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酸(9)(17g，37.69mmol)于DMF(170mL)中的经搅拌溶液中同时添加HATU(21.4g，56.53mmol)、DIPEA(20mL，113.07mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(10g，45.23mmol)，且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(400mL)稀释，用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过正相combiflash柱纯化残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝620.34[M+H]+
((S)-3-环戊基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环戊基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)(1.5g，2.42mmol)于二氯甲烷(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加含2M LiBH4的THF(2.4mL，4.84mmol)且在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((S)-3-环戊基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z592.27[M+H]+
((S)-3-环戊基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A93)
在0℃向((S)-3-环戊基-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)(2.1g，3.55mmol)于乙酸乙酯(25mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(2.2g，5.32mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((S)-3-环戊基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A93)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 590.3[M+H]+
((2S)-3-环戊基-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(13)
将((S)-3-环戊基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A93)(4g，6.78mmol)的经搅拌溶液溶解于DCM(40mL)中，随后在0℃添加异氰乙烷于DCM(10mL)中的溶液(14.24mmol)，并搅拌直到达到室温持续6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×15mL)洗涤，然后用水(2×20mL)和盐水(20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到物质，其通过逆相柱(C18)纯化且用1％碳酸氢铵/乙腈洗脱，得到乙酸(6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环戊基甲基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(13)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 705.33[M+H]+
((2S)-3-环戊基-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)
在0℃向乙酸(6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环戊基甲基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(13)(4g，14.9mmol)于THF:H2O(30mL)(4:1)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(939mg，22.35mmol)且在相同温度下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用水淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，并用盐水溶液(20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((2S)-3-环戊基-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)。LCMS(ESI)：m/z 663.50[M+H]+
((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A117)
在0℃向((2S)-3-环戊基-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)(5g，7.55mmol)于乙酸乙酯(50mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(6.4g，15.1mmol)且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤反应混合物，用乙酸乙酯(50mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)和盐水溶液(20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得物质，得到((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A117)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.6；LCMS(ESI):m/z 661.29[M+H]+
((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A220)和((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A221)
通过SFC手性纯化来纯化((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A117)(4g，60.4mmol)，得到((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A220)和((S)-3-环戊基-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A221)。
实例13：化合物A223的合成
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(5-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(5-PK-2)：
通过手性SFC纯化来分离((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(Int-5)(2.3g)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(5-PK-1)(800mg)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(5-PK-2)。LCMS(ESI)：m/z 550.3[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A223)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(5-PK-1)(260mg，0.47mmol)于EtOAc(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(602mg，1.42mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用EtOAc(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。经逆相combiflash柱(C18)和45％ACN/1％NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得化合物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯A223。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。LCMS(ESI):m/z＝548.3(M+H)+。Rf:0.5
实例14：化合物A224的合成
((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A48)(600mg，1.063mmol)于DCM(10mL)中的经搅拌溶液中添加丙酮氰胺(acetonecyanohydrine)(0.6mL，1vol)、Et3N(0.6mL，1vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用DCM(15mL)稀释且用水(2×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到产物。用正戊烷(25mL)湿磨此物质，得到((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 591.35[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(450mg，0.762mmol)于DMSO(5mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(210mg，1.525mmol)，然后添加30％H2O2(0.8mL，2vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×15mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到物质，将其用正戊烷(15mL)湿磨，得到((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z609.39[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A224)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(300mg，0.492mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(417mg，0.985mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过逆相色谱，使用0.1％碳酸铵水溶液/乙腈作为缓冲液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A224)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 607.2[M+H]+
实例15：化合物A222和A226的合成
2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)
在N2下将2-溴-2,2-二氟乙酸乙酯(2)(28.97g，142.857mmol)添加至铜粉(18.52g，285.612mmol)于DMSO(100mL)中的悬浮液中。将悬浮液在室温下搅拌1h，随后添加3-碘-1,1'-联苯(20g，71.4030mmol)且在60℃搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用NH4Cl水溶液(200mL)淬灭，且用二乙醚(2×150mL)萃取。将合并的有机层用水(2×200mL)、盐水(1×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且蒸发，得到物质，其通过正相色谱纯化，得到2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 257.06[M-F]+
2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)
向2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟乙酸乙酯(3)(12g，43.478mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加N,O-二甲基羟胺.盐酸盐(6.32g，65.217mmol)，且将反应物冷却至-10℃，随后缓慢添加含1.0M氯化异丙基镁的THF(130.434mL，130.434mmol)并在相同温度下搅拌1h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(1×100mL)洗涤，然后用盐水(1×100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 292.10[M+H]+
1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-酮(6)
在-10℃向2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(4)(10g，34.364mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加氯化异丙基镁(86mL，171.821mmol)且在室温下搅拌2h。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-酮(6)，其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 255.06[M-F]+
1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇(7)
在0℃向2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-酮(6)(7.4g，27.007mmol)于THF(130mL)中的经搅拌溶液中添加硼氢化钠(3.062g，81.021mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用氯化铵(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(150mL)、盐水(150mL)洗涤，且经硫酸钠干燥，在减压下蒸发，得到产物，此产物是使用combi flash(正相)，用15％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化，得到1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 257.09[M-F]+
(((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(9)
在0℃向1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇(7)(3.2g，11.594mmol)于ACN(30mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺基酯(7.42g，28.985mmol)，然后添加Et3N(9.6mL，3vol)，且在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将L-亮氨酸甲酯盐酸盐(8)(5.24g，28.985mmol)溶解于ACN(20mL)中，且用Et3N(9.6mL，3vol)处理。将反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。依据TLC和LC-MS反应完成后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到物质，其通过combi flash(正相)，用5％乙酸乙酯/石油醚洗脱来纯化，得到(((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(9)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 428.35[M-F]+
(((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸(10)
在室温下向(((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-亮氨酸甲酯(9)(1.2g，2.684mmol)于THF(12mL)、水(12mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(128.5mg，5.369mmol)，且在室温下搅拌2h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(10)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 456.31[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-((((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)
在0℃向((2-([1,1'-联苯]-3-基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-亮氨酸(10)(800mg，1.845mmol)于DMF(20mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(528.7mg，2.768mmol)、HOBt(373.7mg、2.768mmol)、DIPEA(1.02mL，5.536mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(411.9mg，2.214mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。将水(100mL)添加至反应混合物中且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到化合物。通过正相色谱纯化物质，得到(2S)-2-((2S)-2-((((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝602.31[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(12)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-((((1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(11)(500mg，0.830mmol)于THF(10mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(0.83mL，1.661mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(10mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(12)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 574.48[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A222)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(12)(100mg，0.174mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(110.8mg，0.2614mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯洗涤，并将滤液用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，将其用正戊烷/二乙醚湿磨，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A222)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z572.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(14)
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A222)(180mg，0.314mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(0.06mL，0.944mmol)和吡啶(0.5mL，3vol)，然后添加TFA(0.006mL，0.062mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用饱和NaHCO3溶液(50mL)和水(50mL)洗涤，然后用盐水(50mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(14)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z657.4[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A226)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(14)(170mg，0.258mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(164.67mg，0.388mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯洗涤。将滤液用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质。使用逆相(缓冲液：0.1％ ABC/CAN)纯化所述化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A226)(15)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5。LCMS(ESI):m/z 655.4[M+H]+
实例16：化合物A227和A228的合成
((S)-5,5-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A163)：
在0℃向((S)-5,5-二氟-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(2g，3.40mmol)于乙酸乙酯(30mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(2.9g,6.81mmol)且在室温下搅拌2h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用二乙醚/正戊烷湿磨纯化所得化合物，得到((S)-5,5-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A163)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 586.2[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-5,5-二氟丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)：
在0℃向((S)-5,5-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A163)(1.2g，2.05mmol)于二氯甲烷(20mL)中的经搅拌溶液中添加乙酸(1mL)和环丙基异氰(2)(687mg，10.25mmol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应。反应完成后，将反应混合物用DCM(20mL)稀释且用水(3×40mL)和盐水溶液洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过combi-flash且使用3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂纯化所得残余物，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-5,5-二氟丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 713.3(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-5,5-二氟丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)(1g，1.4mmol)于THF(8mL)、水(4mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(0.11g，2.8mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物以去除THF。将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 671.28(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A179)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(8)(1g，1.49mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.2g，2.98mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由方解石垫过滤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A179)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 669.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A227)和((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A228)：
通过手性SFC纯化化合物((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A179)(800mg)，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙基酯(A227)和((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-5,5-二氟-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A228)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 647.3[M+H]+
实例17：化合物A229的合成
(2S,6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环己基甲基)-1,1-二氟-4,7,12-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3,11-二氧杂-5,8-二氮杂十四烷-10-磺酸钠(A229)
在室温下向(2S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸钠(A141)(200mg，0.282mmol)于ACN(4mL)中的经搅拌溶液中添加丙酸酐(0.06g，0.424mmol)且在50℃搅拌16h。通过LC-MS监测反应进展。将反应混合物浓缩且用戊烷(10mL)和二乙醚(10mL)湿磨，然后进行制备型HPLC/冻干，得到(2R,6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环己基甲基)-1,1-二氟-4,7,12-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3,11-二氧杂-5,8-二氮杂十四烷-10-磺酸钠(A229)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 742.2[M-Na]+
制备型HPLC条件：柱/尺寸：X BIRDGE C18(19*250，5μm)，移动相A：MILI-Q水，移动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、9/40、14.9/40、15/98、19.9/98、20/10、22/10；流速：18mL/min。溶解性：乙腈。
实例18：化合物A230的合成
((S)-4,4-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A232)：
在0℃向((S)-4,4-二氟-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)(700mg，1.2mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(1.29g，3.05mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((S)-4,4-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55LCMS(ESI):m/z 572.3[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)：
将((S)-4,4-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A232)(550mg，0.96mmol)溶解于DCM(8mL)中，接着在0℃添加异氰基环丙烷(13)(200mg，2.88mmol)，然后添加乙酸(0.17mL，2.88mmol)且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和氯化铵溶液(2×30mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过逆相(C18)柱色谱，使用55％CAN/0.1％甲酸水溶液作为洗脱剂来纯化所得化合物，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z699[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4,4-二氟-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)(150mg，0.107mmol)于THF(2mL)、水(0.4mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(9.9mg，0.236mmol)且在0℃搅拌30min。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×30mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4,4-二氟-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z 657.41[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4,4-二氟-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A230)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4,4-二氟-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)(90mg，0.132mmol)于乙酸乙酯(2mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(87.2mg，0.205mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(10mL)洗涤。将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化残余物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4,4-二氟-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A230)。TLC系统：10％
MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z 655.2[M+H]+
实例19：化合物A231的合成
Int-1合成:
((2S)-1-(((2S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A48)(200mg，0.3552mmol)于DCM(6mL)中的经搅拌溶液中添加((2-异氰基乙氧基)甲基)苯(1)(6mL，3vol)、吡啶(6mL，3vol)和TFA(0.01mL)。使反应混合物在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释且用1N HCl水溶液(3×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 743.34[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(190mg，0.2560mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(217mg，0.5121mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，将滤液用饱和海波溶液(3×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 741.2(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-((2-羟基乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A231)
在室温下向((S)-1-(((S)-4-((2-(苯甲基氧基)乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)(170mg，0.2297mmol)于MeOH(6mL)中的经搅拌溶液中添加10％Pd/C(34mg，20％w/w)和三乙基硅烷(80mg，0.6891mmol)。将反应混合物在60℃搅拌3h。完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物。滤液经Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。通过制备型HPLC纯化物质，得到((S)-1-(((S)-4-((2-羟基乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A231)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4
制备型HPLC条件：柱/尺寸：KROMOSIL(25*150)10μm，移动相A：10mM ABC/水(水溶液)，移动相B：10Mm ABC(1:1)CAN和MeOH，梯度(时间/％B)：0/40、1/40,18/98、22/98、22.1/40、25/40，流速：25mL/min。溶解性：ACN+THF+水，LCMS(ESI):m/z 651.2(M+H)+
Int-1-合成：N-(2-(苯甲基氧基)乙基)甲酰胺
在室温下向2-(苯甲基氧基)乙-1-胺盐酸盐(1A)于原甲酸三乙酯(2g，10.689mmol)中的混合物中。使反应混合物在120℃搅拌12h。完成后，在真空下浓缩反应混合物，得到N-(2-(苯甲基氧基)乙基)甲酰胺(2A)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3LCMS(ESI):m/z 180.2(M+H)+
((2-异氰基乙氧基)甲基)苯
在-10℃向N-(2-(苯甲基氧基)乙基)甲酰胺(2A)(1.5g，8.379mmol)于DCM(4.5mL)中的经搅拌溶液中添加POCl3(0.5mL，6.284mmol)、Et3N(2.1mL，20.93mmol)。使反应混合物在-10℃搅拌3h。完成后，将反应混合物用饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭，且用DCM(2×10mL)萃取。将合并的有机层用水(2×15mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，得到((2-异氰基乙氧基)甲基)苯(Int-1)(10mL)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 161.99(M+H)+
实例20：化合物A232的合成
2-乙酰胺基-2-(2,2-二氟乙基)丙二酸二乙酯(2)：
向2-乙酰胺基丙二酸二乙酯(1)(50g，230mmol)于THF(1000mL)中的经搅拌溶液中添加KOtBu(25.8g，230mmol)且回流2h。此后，在70℃缓慢逐滴添加三氟甲烷磺酸2,2-二氟乙酯(74g，345mmol)且在相同温度下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，浓缩反应混合物，且将所得残余物用EtOAc(500mL)稀释且用0.5N HCl(2×500mL)、1NNaOH水溶液(2×500mL)和盐水溶液(500mL)洗涤。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过在-20℃使用DEE再结晶来纯化残余物且过滤固体，得到2-乙酰胺基-2-(2,2-二氟乙基)丙二酸二乙酯(2)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.6；LCMS(ESI):m/z282.3[M+H]+
2-氨基-4,4-二氟丁酸盐酸盐(3)：
在室温下向2-乙酰胺基-2-(2,2-二氟乙基)丙二酸二乙酯(2)(25g，88.9mmol)中添加6N HCl(250mL)且使混合物在100℃回流16h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，用DEE洗涤反应物质且在减压下浓缩水层，得到2-氨基-4,4-二氟丁酸盐酸盐(3)。TLC系统：50％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 140.15[M+H]+
2-氨基-4,4-二氟丁酸甲酯盐酸盐(4)：
在0℃向2-氨基-4,4-二氟丁酸盐酸盐(3)(11g，63.2mmol)于甲醇(110mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加SOCl2(55mL)且在室温下搅拌12h。通过LCMS监测反应进展。起始物质完成后，在减压下直接浓缩反应混合物，得到2-氨基-4,4-二氟丁酸甲酯盐酸盐(4)。LCMS(ESI):m/z 154.13[M+H]+
2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(5)：
在0℃向2-氨基-4,4-二氟丁酸酯盐酸盐(4)(11g，58.02mmol)于THF(66mL)和水(33ml)中的经搅拌溶液中添加NaHCO3(14.8g，175.5mmol)，然后缓慢逐滴添加Cbz-Cl(15g，87.7mmol)且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用冰冷水(300mL)稀释且用EtOAc(500mL)萃取。将有机层分离，用盐水溶液(300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash柱且以15％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(5)。LCMS(ESI):m/z 288.1[M+H]+
(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(5-PK-1)：
通过手性SFC纯化15g的2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(5)，得到(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯。
(S)-2-氨基-4,4-二氟丁酸甲酯(Int-1C)：
在室温下向(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(5-PK-1)(3.5g 12.1mmol)于甲醇(35mL)中的经氮气脱气溶液中添加Pd/C(350mg)且在H2气球压力下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，经由硅藻土垫过滤反应物质且用甲醇洗涤床，并在减压下浓缩所得滤液，得到(S)-2-氨基-4,4-二氟丁酸甲酯(Int-1C)。
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(8)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(5g，18.6mmol)于DCM(50mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加吡啶(15ml)，然后添加三光气(3.3g，11.19mmol)，且在相同温度下搅拌30min。随后在相同温度下添加(S)-2-氨基-4,4-二氟丁酸甲酯(Int-1C)(3.4g，22.3mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用1N HCl(10ml)淬灭且用DCM(200ml)萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)洗涤，然后用盐水溶液(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过正相硅胶柱色谱，使用5％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(8)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z448.07[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸(9)：
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸甲酯(8)(2.9g，6.4mmol)于THF(15mL)和水(15mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(0.8g，19.4mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下蒸馏THF溶剂，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×100mL)萃取，将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 414.22[M-F]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)：
在0℃向含(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酸(9)(2.6g，6.0mmol)的DMF(26mL)中添加EDC.HCl(1.72g，9mmol)、HOBt(1.37g，9mmol)、DIPEA(3.1mL，18mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.6g，7.2mmol)且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(100mL)稀释且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和95％乙酸乙酯/石油醚来纯化所得残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)。TLC系统：5％MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝602.3[M+H]+
((S)-4,4-二氟-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)：
在0℃向含(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4,4-二氟丁酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸酯(10)(2.4g，3.9mmol)的DCM(30mL)中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中，3.98mL，7.9mmol)且搅拌2h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)和50％ ACN/0.1％ TFA水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-4,4-二氟-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z 574.15[M+H]+
((S)-4,4-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A232)：
在0℃向((S)-4,4-二氟-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)(360mg，0.62mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(399mg，0.94mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相柱(C18)色谱和45％ CAN/0.1％NH4CO3水溶液来纯化所得物质，得到((S)-4,4-二氟-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基丙烷-2-基)氨基)丁烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A232)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 572.3[M+H]+
实例21：化合物A233的合成
(2S)-2-((S)-3-环己基-2-((((R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸钠(A233)
在室温下向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A119，150mg，0.255mmol)于乙酸乙酯(1.2mL)、乙醇(1.35mL)、水(0.45mL)中的经搅拌溶液中添加硫酸氢钠(53mg；0.51mmol)且在45℃温度下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯洗涤。将所得滤液经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。用乙腈、二乙醚湿磨所得固体化合物，得到(2S)-2-((S)-3-环己基-2-((((R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸钠(A233)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z＝667.97[M-Na]-
实例22：化合物A234的合成
(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)：
在室温下向经活化锌(7.75g，91.1mmol)于DMF(50ml)中的悬浮液中添加催化量的碘且搅拌10min，且接着在相同温度下分数份添加(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(1)(10g，30.3mmol)，然后添加催化量的碘且在相同温度下搅拌60min。用氩气球使反应物质脱气15min，且在室温下添加2-溴丁-1-烯(2)(4.46g，33.3mmol)、Pd2(dppf)Cl2(442.9mg，0.60mmol)和SPHOS(246mg，0.60mmol)，且加热至50℃持续12h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯洗涤床。将所得滤液用水(250mL)稀释且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和0％ EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化残余物，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.6；LCMS(ESI):m/z 280.22[M+Na]+
(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(4)：
在室温下向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)(5.0g，19.3mmol)于EtOH(50mL)中的经脱气溶液中添加Pd/C(1g，20％w/w)且在H2气球压力下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，经由硅藻土衬垫过滤l反应物质且用EtOH(30mL)洗涤床。在减压下浓缩所得滤液，得到(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(4)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 282.23[M+Na]+
(2S)-2-氨基-4-甲基己酸甲酯盐酸盐(int-5)：
在0℃向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(4)(4.0g，18.9mmol)于DCM(24.5mL)中的经搅拌溶液中添加含4M HCl的二噁烷(24.5mL)且在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到(2S)-2-氨基-4-甲基己酸甲酯盐酸盐(int-5)。LCMS(ESI):m/z 160.42[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(6)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(8.0g，29.8mmol)于ACN(40mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰亚胺酯(19g，74.5mmol)，然后添加三乙胺(19.4mL，150.66mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，得到(2S)-2-氨基-4-甲基己酸甲酯盐酸盐(int-5)、ACN(40mL)，且用三乙胺(19.4ml，150.66mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(200mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×250mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过硅胶(100至200目)柱色谱纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(6)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸(7)：
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸甲酯(6)(6.8g，15.0mmol)于THF(34mL)和水(34mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.88g，45mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 440.28[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酸(7)(5.0g，11.3mmol)于DMF(25mL)中的溶液中添加EDC.HCl(3.2g，17.0mmol)、HOBt(2.56g，17.0mmol)、DIPEA(4.88mL，28mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(3.28g，14.8mmol)且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(100mL)稀释且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过使用硅胶(100至200目)的柱色谱纯化所得残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝608.41[M+H]+
((2S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(4.0g，6.58mmol)于DCM(40mL)中的溶液中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中，6.58mL，13.1mmol)且在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，并通过逆相柱(C18)，用50％ ACN/0.1％ FA水溶液洗脱来纯化，得到((2S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z580.27[M+H]+
((2S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)：
在0℃向((2S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)(400mg，0.69mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(585mg，1.39mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((2S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 578.3[M+H]+
实例23：化合物A235的合成
((2S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)：
在0℃向((2S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)(0.7g，1.20mmol)于乙酸乙酯(7mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(1.02g，2.41mmol)，且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((2S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)，其直接用于下一步骤中。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55LCMS(ESI):m/z578.3[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)：
在0℃向((2S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)(0.48g，0.83mmol)于DCM(4.8mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(10)(160mg，2.49mmol)，然后添加乙酸(0.15mL，2.49mmol)且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和氯化铵溶液(2×30mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过逆相combi flash(C18)，使用50％ ACN/0.1％甲酸水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 705.33[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)(350mg，0.49mmol)于THF(3.1mL)和水(1.05mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(31.2mg，0.74mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 663.4[M+H]+
((2S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A235)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12)(250mg，0.37mmol)于乙酸乙酯(2.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(320.2mg，0.75mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(10mL)洗涤。将所得滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得残余物，得到((2S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A235)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z 661.3[M+H]+
实例24：化合物A236和A237的合成
乙酸(3S)-3-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(2)：
在0℃向((S)-3-环己基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A67)(600mg，1.02mmol)于二氯甲烷(6mL)中的经搅拌溶液中添加乙酸(0.18mL，3.06mmol)和环丙基异氰(1)(200mg，3.06mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应。反应完成后，将反应混合物用DCM(20mL)稀释且用水(3×40mL)和盐水溶液洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combi-flash(C18)且使用45％ ACN/0.1％ FA水溶液和3％甲醇/二氯甲烷作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到乙酸(3S)-3-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z715.5(M+H)+
((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-3-环己基-2-(((2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(2)(450mg，0.63mmol)于THF(3.6mL)、水(0.9mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(52mg，1.26mmol)且在相同温度下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，在减压下浓缩反应混合物以去除THF。将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)。TLC系统：10％甲醇/乙酸乙酯。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 673.92(M+H)+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A74)：
在0℃向((2S)-3-环己基-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)(350mg，0.52mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(440mg，1.04mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由方解石垫过滤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A74)。TLC系统：5％甲醇/乙酸乙酯。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 671.5[M+H]+
((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A236)和((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A237)：
通过手性SFC纯化化合物((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A74)(250mg)，得到((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A236)和((S)-3-环己基-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A237)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 671.3[M+H]+
实例25：化合物A234、A235、A236和A237的合成
(3-(1-甲基环丁基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A300)
在0℃向(1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)(4.5g，7.6mmol)于EtOAc(45mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(6.4g，15.2mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释，经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。用正戊烷湿磨所得物质并过滤，得到(3-(1-甲基环丁基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A300)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 590.3[M+H]+
乙酸(9S)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-6-((1-甲基环丁基)甲基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(6)：
在0℃向(3-(1-甲基环丁基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A300)(3.0g，5.01mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(5)(1.2g，25.45mmol)(于DCM溶液中新鲜制备)，然后添加乙酸(6mL)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，且用饱和氯化铵溶液(2×30mL)洗涤，然后用盐水(30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过逆相combi flash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ FA水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(9S)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-6-((1-甲基环丁基)甲基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 705.3(M+H)+
(1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(7)：
在0℃向乙酸(9S)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-6-((1-甲基环丁基)甲基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(6)(1.3g，1.84mmol)于THF(13mL)、水(4mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(92.94mg，2.21mmol)且在相同温度下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×150mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水溶液(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(7)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z663.45(M+H)+
(1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234A)：
在0℃向(1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(7)(0.9g，1.35mmol)于乙酸乙酯(9mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.15g，2.71mmol)且在室温下搅拌3h。反应完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且将滤液用饱和海波溶液(3×100mL)、饱和NaHCO3溶液(3×70mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过用正戊烷/Et2O湿磨来纯化所得化合物，得到(1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234A)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z 661.3[M+H]+
((R)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)、((R)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A235)、((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A236)、((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A237)：通过手性SFC纯化0.6g的(1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234A)，得到((R)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A234)、((R)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A235)、((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A236)和((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丁基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A237)。LCMS(ESI)：m/z 661.3[M+H]+
实例26：化合物A238的合成
(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(1)：
在-10℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(15g，52.44mmol)于MeOH(30mL)中的经搅拌溶液中添加溶解于80mL水中的NaOH(8.39，262.23mmol)且在内部温度不升高的情况下逐滴添加。将所得反应混合物在-5℃搅拌1h。反应完成后(通过TLC监测)，在减压下蒸发反应混合物，得到残余物，将物质用水(200mL)稀释，在0℃用1N HCl酸化(直到约pH 2)且用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。LCMS(ESI):m/z＝173.011(M+H)+；Rf:0.5
((S)-1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2)：
在0℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(14g，51.47mmol，1.0eq)于DCM(140mL)中的经搅拌溶液中添加EDCI(10.81g，56.61mmol，1.1eq)、HOBt(6.94g，51.47mmol，1.0eq)、N-甲基吗啉(16.95mL，154.41mmol，3.0eq)，然后添加N,O-二甲基羟胺.HCl(4.99g，51.47mmol，1.0eq)。将所得反应混合物在室温下搅拌4h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，将反应混合物用水(300mL)稀释且用DCM(2×250mL)萃取。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥和且减压下浓缩。通过硅胶(100至200)柱色谱，使用0％至5％甲醇/DCM作为洗脱剂来纯化，得到((S)-1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。LCMS(ESI):m/z＝216.092(M+H)+；Rf:0.5
((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)：
在-78℃向((S)-1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2)(0.5g，1.58mmol)于THF(5mL)中的经搅拌溶液中添加n-BuLi(8.4mL，15.87mmol)且搅拌30min。此后，在-78℃添加苯并[d]噻唑(3)(1.64mL，15.87mmol)且在-60℃至-50℃搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶(100至200目)柱色谱，使用0％至5％ MeOH/DCM作为洗脱剂来纯化所述物质，得到((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝412.12(M+Na)+
呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-2-氨基-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-氧代丙基)吡咯烷-2-酮(5)
在0℃向含经搅拌((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)(0.5g，1.28mmol)的DCM(5mL)中添加TFA(3mL)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸馏反应混合物，得到呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-2-氨基-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-氧代丙基)吡咯烷-2-酮(5)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 290.13[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A238)
在0℃向(S)-3-((S)-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-氧代-2-((2,2,2-三氟乙酰基)-l4-氮烷基)丙基)吡咯烷-2-酮(3)(0.25g，0.62mmol)于DMF(10mL)中的经拌溶液中添加(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(0.26g，0.62mmol)、HBTU(0.23g，0.62mmol，1.0eq)、DIPEA(0.33mL，1.86mmol)，且将所得反应混合物在室温下搅拌2h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，将反应混合物用水(50mL)稀释且用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。通过制备型HPLC纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A238)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 2697.2[M+H]+
实例27：化合物A239的合成
((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(2)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(5g，18.65mmol)于DCM(40mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(15mL，3vol)和L-苯基丙氨酸甲酯氯化氢(1)(6g，27.9mmol)，然后添加三光气(8.25g，27.9mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用1N HCl(50mL)淬灭且用DCM(2×40mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash纯化残余物，以10％乙酸乙酯/石油醚洗脱化合物，得到((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(2)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 496.1[M+Na]+
((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(3)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(2)(2.7g，5.7mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(719mg，1.71mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。在减压下蒸馏溶剂，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2，且用乙酸乙酯(2×40mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(3)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 482.2[M+Na]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(3)(2g，4.35mmol)于DMF(10mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.27g，6.53mmol)、HOBt(881mg，6.53mmol)、DIPEA(2.4mL，13.05mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.2g，6.53mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。向反应混合物中添加冰水(150mL)且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash(正相)纯化所述物质，以3％甲醇/二氯甲烷洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 628.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(5)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(4)(1.7g，2.71mmol)于THF(17mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH 4 的THF(2.71mL，5.42mmol)且将反应混合物搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸]2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z600.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A239)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(5)(200mg，0.3338mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中分数份添加戴斯-马丁高碘烷(283mg，0.6677mmol)。使反应混合物在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯洗涤，将滤液层用饱和海波溶液(3×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×25mL)和盐水(2×25mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。通过逆相柱色谱纯化所述物质，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 598.2(M+H)+
实例28：化合物A240的合成
乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A239)(200mg，0.335mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(1)(0.7mL，0.6700mmol)，然后添加乙酸(0.2mL，0.167mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3(3×25mL)洗涤，然后用盐水(1×25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z713.85[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)
在0℃向乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)(210mg，0.2949mmol)于甲醇(5mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(25mg，0.5898mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下完全蒸馏反应混合物，将化合物用1NHCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 671.3(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A240)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)(190mg，0.2835mmol)于乙酸乙酯(6mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(240mg，0.5671mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。反应完成后，经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液用饱和海波溶液(3×25mL)、饱和NaHCO3溶液(3×25mL)且最后用盐水(3×25mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。通过使用逆相柱色谱(缓冲液：0.1％ ABC水溶液/乙腈)来纯化所述化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A240)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 669.3(M+H)+
实例29：化合物A241的合成
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A239)(200mg，0.3349mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(1.2mL，6vol)、异氰基环丙烷(1)(0.04mL，0.6700mmol)，然后添加TFA(0.01mL，0.1675mmol)，且在室温下搅拌6h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释且用1N HCl(2×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 683.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A241)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(190mg，0.278mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(236mg，0.5571mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，将滤液用饱和海波溶液(3×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×25mL)和盐水(25mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。利用combi-flash(逆相)纯化所述化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A241)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 681.3(M+H)+
实例30：化合物A242的合成
(2S,6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环己基甲基)-1,1-二氟-4,7,12-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3,11-二氧杂-5,8-二氮杂十五烷-10-磺酸钠(A242)
在室温下向(2S)-2-((S)-2-((((S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸钠(A141)(200mg，0.282mmol)于ACN(4mL)中的经搅拌溶液中添加丁酸酐(0.06g，0.424mmol)且在50℃搅拌16h。通过LC-MS监测反应进展。浓缩反应混合物，得到物质，将其用戊烷和二乙醚湿磨，然后进行制备型HPLC/冻干，得到(2S,6S,9S)-1-(3-氯苯基)-6-(环己基甲基)-1,1-二氟-4,7,12-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3,11-二氧杂-5,8-二氮杂十五烷-10-磺酸钠(A242)。TLC系统：20％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z756.3[M-Na]+
制备型HPLC条件：柱/尺寸：KROMOSIL PACKED(25*150mm)10μm，移动相A：Miili-Q-Water(水溶液)，移动相B：乙腈，梯度(时间/％B)：0/10、1/10、10/40、15.8/40、15.81/98、23.90/98、24.0/10、27/10，流速：24mL/min。溶解性：ACN+水。
实例31：化合物A243和A243A的合成
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-酮(3)
在-78℃向3-溴吡啶(2)(5.0g，32.051mmol)于THF中的经搅拌溶液中添加iPrMgCl.LiCl(50mL，64.102mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。2h之后，接着在0℃添加2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1)(8.0g，32.051mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-酮(3)。TLC系统：0％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 286.1[M+H2O]+
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-醇(4)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-酮(3)(6g，22.471mmol)于甲醇(60mL)中的经搅拌溶液中添加NaCNBH3(5.66g，89.887mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物用H2O(25mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(1×20mL)、盐水(1×20mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-醇(4)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 270.2[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(6)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙-1-醇(4)(4.2g，15.613mmol)于ACN(42mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺酯(9.99g，39.033mmol)，然后添加Et3N(6.4mL，46.839mmol)。使反应混合物在室温下搅拌4h。TLC证实了非极性斑点的形成。反应物质直接用于后续反应中。
在另一烧瓶中，将(S)-2-氨基己酸甲酯盐酸盐(5)(5.65g，31.226mmol)溶解于ACN(56mL)中，且用Et3N(6.4mL，46.839mmol)处理。将所得反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，并通过正相色谱，使用石油醚和乙酸乙酯作为移动相来纯化残余物，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 441.19[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(6)(4.0g，9.090mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(654mg，27.272mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用柠檬酸溶液酸化且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)。TLC系统：10％ MeOH:DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z427.2[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)(1.6g，3.75mmol)于DMF(16mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.081g，5.532mmol)、HOBt(0.760g，5.632mmol)、DIPEA(1.9mL，11.12mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.37g，7.41mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash(C-18)纯化所述物质，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 595.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(9)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(900mg，1.512mmol)于MeOH(10mL)中的经搅拌溶液中添加NaBH4(862mg，22.689mmol)且将反应混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到产物，将其用二乙醚(10mL)湿磨，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 567.23[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A243)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(9)(350mg，0.617mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(523mg，1.234mmol)且在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，且经由方解石垫过滤，并用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过柱色谱combi-flash(RP，缓冲液：0.1％ABC/ACN)纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-环丙基苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A243)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 565.2[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A243)(150mg，0.265mmol)于DCM(3mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(10)(36mg，0.530mmol)，然后添加乙酸(0.2mL，0.530mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释且用1N HCl(2×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 692.33[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(12)
在室温下向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)(150mg，0.216mmol)于MeOH(4.5mL)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(60mg，0.433mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物在减压下完全蒸馏且用水(10mL)稀释，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(12)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 650.7[M+H]
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A243A)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(12)(100mg，0.153mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(130mg，0.307mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC/ACN)纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A243A)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 648.2[M+H]+
实例32：化合物A244的合成
(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(3)：
在室温下向经活化锌(6.07mg，3.03mmol)于DMF(50ml)中的悬浮液中添加催化量的碘且搅拌10min，且接着在相同温度下分数份添加(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(1)(1g，3.03mmol)，然后添加催化量的碘且在相同温度下搅拌60min。用氩气球使反应物质脱气15min，且在室温下添加2-溴丙-1-烯(2)(361mg，3.39mmol)、Pd2(dppf)Cl2(55mg,0.060mmol)和SPHOS(24mg，0.060mmol)，且加热至50℃持续12h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯洗涤床。将所得滤液用水(50mL)稀释且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和10％EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化残余物，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.6；(S)-2-氨基-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(4)：
在0℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸酯(4)(7.0g，28.6mmol)于DCM(70mL)中的经搅拌溶液中添加TFA(20mL)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在起始物质完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到(S)-2-氨基-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(4)。LCMS(ESI):m/z 144.42[M+H]+。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1
(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(5)：
在0℃向(S)-2-氨基-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(4)(500mg，3.4mmol)于THF(8mL)和水(2ml)中的经搅拌溶液中添加NaHCO3(720mg，8.68mmol)和Cbz-Cl(880mg，5.2mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用冰冷水(20mL)稀释且用EtOAc(2×20mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过正相色谱，使用硅胶(100至200目)和15％ EtOAc/石油醚作为洗脱剂来纯化所得物质，得到(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸甲基甲酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 278.1[M+H]+
(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(6)：
在0℃向(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊-4-烯酸甲酯(5)(10g，36.1mmol)于DCM(100mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加Et2Zn(1M于THF中，144mL，144.4mmol)且在0℃搅拌10min。此后添加CH2I2(2.8g，108.3mmol)且将反应物在室温下搅拌16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物在0℃用1N HCl溶液(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和20％乙酸乙酯作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 292.14[M+H]+
(S)-2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(Int-6A)：
在室温下向(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(6)(4g，13.7mmol)于EtOH(40mL)中的经脱气溶液中添加Pd/C(2g，50％w/w)且在H2气球压力下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，经由硅藻土垫过滤反应物质且用EtOH(30mL)洗涤床。在减压下浓缩所得滤液，得到(S)-2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(Int-6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷，Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 158.1[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(7)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(共同Int-7)(6.0g，22.3mmol)于ACN(40mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰亚胺酯(8.59g，33.5mmol)，然后添加三乙胺(12mL，89.5mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，用三乙胺(12ml，89.5mmol)处理含(S)-2-氨基-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(Int-6A)(int-5)的ACN(40mL)。将所得反应混合物搅拌5min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用冰水(200mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并且用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和20％乙酸乙酯作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(7)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 452.20[M+H]+
((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸(8)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸甲酯(7)(3g，6.65mmol)于THF(14mL)和水(7mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(558mg，13.3mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，并将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×200mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 438.2[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酸(8)(3g，6.86mmol)于DMF(30mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.5g，8.2mmol)、HOBt(1.0g，8.2mmol)、DIPEA(3.6mL，20.5mmol)和(S)-2-氨基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2.2g，12.3mmol)且在室温下搅拌5h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以40％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 606.4[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(10)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(2.0g，3.30mmol)于THF(40mL)中的溶液中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中，3.3mL，6.6mmol)且在0℃搅拌1h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩。通过逆相柱(C18)，用50％ACN/0.1％ FA水溶液洗脱来纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(10)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z 578.43[M+H]+
((S)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A244)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(10)(700mg，1.21mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(1.02g，2.42mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A244)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 576.3[M+H]+
实例33：化合物A245的合成
((S)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A244)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)(700mg，1.21mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(1.02g，2.42mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。用乙酸乙酯(50mL)稀释反应混合物且经由硅藻土垫过滤。将所得滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((S)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A244)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 576.2[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)：
在0℃向((S)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A244)(700mg，1.21mmol)于二氯甲烷(7mL)中的经搅拌溶液中添加乙酸(0.6mL)和环丙基异氰(12)(687mg，10.25mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应。反应完成后，将反应混合物用DCM(20mL)稀释且用水(3×40mL)、盐水溶液洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相comb flash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 703.3(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)(400mg，0.56mmol)于THF(4mL)、水(2mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(47mg，1.13mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取反应混合物。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 661.7(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A245)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)(320mg，0.48mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(411mg，1.13mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-甲基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A245)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 659.3[M+H]+
实例34：化合物A246的合成
(4S,E)-4-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸甲酯(A246)
向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A239)(100mg，0.1672mmol)于甲苯(5mL)中的经搅拌溶液中添加2-(三苯基-伸磷烷基)乙酸甲酯(2)(55.8mg，0.1672mmol)且回流3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物浓缩并通过制备型HPLC纯化，得到(4S,E)-4-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-5-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸甲酯(A246)。TLC系统：50％ EtOAc/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 654.3[M+H]+
实例35：化合物A247和A248的合成
((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A48)(500mg，0.886mmol)于DCM(10mL)中的经搅拌溶液中添加丙酮氰胺(0.5mL，1vol)、Et3N(0.5mL，1vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用DCM(15mL)稀释且用水(2×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到产物。用正戊烷(25mL)湿磨此物质，得到((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 591.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(1g，0.8474mmol)于DMSO(5mL)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(350mg，2.54mmol)，然后添加30％H2O2(4mL，4vol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(2×15mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到物质，将其用正戊烷(15mL)湿磨，得到((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 609.39[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A224)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(640mg，1.050mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.113g，2.627mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过逆相色谱，使用0.1％碳酸铵水溶液/乙腈作为缓冲液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A224)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 607.2[M+H]+
SFC纯化；通过手性SFC纯化所获得的外消旋体(500mg)，得到两种异构体。((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A247)。((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A248)、A247；LCMS(ESI):m/z 607.3[M+H]+,A248；LCMS(ESI):m/z 607.3[M+H]+
实例36：化合物A249的合成
((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A249)：
在0℃向呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-2-氨基-3-(苯并[d]噻唑-2-基)-3-氧代丙基)吡咯烷-2-酮(1)(0.30g，0.77mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(2)(0.36g，0.77mmol)、HBTU(0.29g，0.77mmol)和DIPEA(0.42mL，2.33mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌2h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，将反应混合物用水(50mL)稀释且用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噻唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A249)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z737.2[M+H]+
实例37：化合物A250的合成
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(1)(5.5g，9.25mmol)于THF(30mL)、水(30mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(569mg,13.88mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用1N HCl(20mL)酸化且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到产物。用正戊烷(50mL)湿磨此物质，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 580.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1λ4-噻吩1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸(2)(4.8g，8.275mmol)于DCM(15mL)中的经搅拌溶液中添加HATU(4.7g 12.41mmol)、溴化1-(氰基甲基)四氢-1H-噻吩-1-鎓(3)(2g，9.93mmol)、DIPEA(4.3mL，24.82mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×40mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过正相色谱，使用乙酸乙酯/石油醚来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1l4-噻吩-1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 549.3[M+H]+
(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸：A250
在0℃向((S)-1-(((S)-4-氰基-3-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-4-(四氢-1l4-噻吩-1-亚基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(4)(3.5g，5.079mmol)于THF(20mL)、水(20mL)中的经搅拌溶液中添加过硫酸氢钾(4.67g,15.239mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(25mL)稀释且用水(2×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(A250)。将100mg此物质通过制备型HPLC纯化，得到A250。
制备型HPLC条件：柱/尺寸：X BRIDGE phenyl(19*250)5μm，移动相A：10mM ABC/水，移动相B：10mM ABC乙腈:MeOH(1:1)，梯度(时间/％B)：0/5、1/5、8/35、13.5/35、13.51/98、19/98、19.01/5、22/5，流速：18mL/min。溶解性：ACN。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 608.3[M+H]+
实例38：化合物A251的合成
2-(3-氯苯基)乙酰氯(2)：
在0℃向2-(3-氯苯基)乙酸(1)(40g，235.29mmol)于DCM(400mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加催化量的DMF和SOCl2(25.6mL，352.94mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，在氩气气氛存在下在减压下蒸发反应混合物，得到2-(3-氯苯基)乙酰氯(2)，其直接用于下一步骤中。
2-(3-氯苯基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(3)：
在0℃向2-(3-氯苯基)乙酰氯(2)(44g，232.76mmol)于DCM(440mL)中的经搅拌溶液中添加N,O-二甲基羟胺.HCl(17.03g，279.31mmol)。在0℃向其中缓慢逐滴添加吡啶(51mL，465.52mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，用盐水溶液:DCM:DEE的混合物(2:1:1)(160mL)稀释反应混合物。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(3)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-酮(5)：
在-30℃向2-(3-氯苯基)-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(3)(48g，224.65mmol)于THF(480mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加PhMgBr(1M于THF中，450mL，449.3mmol)且搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用乙酸乙酯(500mL)萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以1％ EtOAc:己烷洗脱化合物，得到2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-酮(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 231.06[M+H]+
4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸乙酯(7)：
向2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-酮(5)(10g，43.47mmol)于苯:DEE(1:1)(100mL)中的经搅拌溶液中添加锌(经新鲜活化，21.19g，326.08mmol)、2-溴乙酸乙酯(19.23mL，173.88mmol)，然后添加I2(催化性)，且将反应物在70℃搅拌6h。通过TLC监测反应进展。使反应物质冷却至室温且经硅藻土床过滤，并用DEE(50mL)洗涤。将所得滤液用水(50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过combi-flash NP纯化残余物，以5％ EtOAc:己烷洗脱化合物，得到4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸乙酯(7)。TLC系统：10％ EtoAc:己烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 301.10[M-OH]+
4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸(8)：
在0℃向4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸乙酯(7)(8.0g，25.09mmol)于THF(60mL)和水(20mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.58g，37.73mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸(8)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 288.99[M-H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸甲酯(10)：
在0℃向4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酸(8)(7g，24.04mmol)于DMF(70mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(7g，36.206mmol)、HOBt(4.9g，36.206mmol)、DIPEA(12.6mL，72.41mmol)和(S)-2-氨基己酸甲酯盐酸盐(5.25g，28.96mmol)且在室温下搅拌4h。将反应混合物用冰水(140mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以100％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸甲酯(10)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z416.15[M-H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸(11)：
向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸甲酯(10)(6g，14.36mmol)于THF(45mL)和水(15mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(906.47mg，21.58mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸(11)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 402.13[M-H]+
(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(12)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酸(11)(5g，12.38mmol)于DMF(50mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(3.6g，18.57mmol)、HOBt(2.5g，18.57mmol)、DIPEA(6.5mL，37.14mmol)和(S)-2-氨基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2`)(3.3g，14.85mmol)且在室温下搅拌4h。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以100％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(12)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z570.56[M-H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(13)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(12)(3g，5.25mmol)于THF(45mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH 4 的THF(5.25mL，10.507mmol)且将反应混合物在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱色谱，使用60％ ACN:水作为洗脱剂来纯化所得物质，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(13)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 542.19[M-H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A251)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(13)(1.5g，2.7mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.75g，6.9mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相柱纯化所述化合物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A251)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 542.2[M+H]+
实例39：化合物A254和A255的合成
2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-酮
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1)(6.5g，26.10mmol)(1)于二乙醚(65mL)中的经搅拌溶液中添加溴化环己基镁(52mL，52.20mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-酮(3)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 313.14[M+CH3CN)+
2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-醇(4)
在0℃向2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-酮(3)(5.5g，20.22mmol)于THF(55mL)中的经搅拌溶液中添加硼氢化钠(2.29g，60.66mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用H2O(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-醇(4)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 297.15[M+Na)+
((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)
在0℃向2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙-1-醇(4)(7.0g，25.54mmol)于DCM(70mL)中的经搅拌溶液中分数份添加吡啶(21mL，3vol)和L-苯基丙氨酸甲酯(5)(17.0g，51.09mmol)，然后添加三光气(15.12g，51.09mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，且用DCM(2×100mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash(正相)，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化所述物质，得到((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 460.48[M-F]+
((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)(4.0g，8.370mmol)于THF(40mL)、水(20mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.052g，25.05mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)。TLC系统：5％ MeOH:DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 446.50[M-F]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃向((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)(3.8g，8.172mmol)于DMF(25mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(2.341g，12.25mmol)、HOBt(1.65g，12.25mmol)、DIPEA(4.2mL，24.51mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.82g，9.80mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash(正相)纯化所述物质，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 634.67[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(9)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(3.0g，4.73mmol)于THF(10mL)中的经搅拌溶液中添加LiBH4(4.7mL，9.47mmol)且将反应混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭且用EtOAc(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到产物，将其用二乙醚(50mL)湿磨，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 606.6[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(A254)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(1.0g，1.6528mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.4g，3.30mmol)且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，并用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过combi-flash(C-18，0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈)纯化，然后冻干，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(A254)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 604.3[M+H]+
乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-2-环己基-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(10)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(A254)(250mg，0.414mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(1mL，4vol)，然后在0℃添加乙酸(0.05mL，0.83mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤，然后用盐水(1×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-2-环己基-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(10)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z719.40[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(11)
在0℃向乙酸(6S,9S)-6-苯甲基-1-(3-氯苯基)-2-环己基-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(10)(160mg，0.2228mmol)于THF(1.6mL)、水(0.8mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(28mg，0.6685mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下去除溶剂，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 677.3(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(A255)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(11)(100mg，0.147mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(156mg，0.37mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。经由硅藻土床过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，将滤液用饱和海波溶液(3×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×25mL)和盐水(25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，将其用Et2O/戊烷(10mL)湿磨，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-环己基-2,2-二氟乙酯(A255)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 675.3(M+H)+
实例40：化合物A256和A257的合成
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-酮(3)
在0℃向4-溴吡啶盐酸盐(1)(5.0g，25.773mmol)于THF中的经搅拌溶液中添加iPrMgCl.LiCl(40mL，51.546mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。2h之后，接着在0℃添加2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(2)(6.41g，25.773mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取将合并的有机层用水(1×50mL)、盐水(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-酮(3)。TLC系统：40％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 286.02[M+H2O]+
2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-醇(4)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-酮(3)(1.5g，5.617mmol)于甲醇(15mL)中的经搅拌溶液中添加NaBH3CN(1.41g，22.471mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用水(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(1×40mL)、盐水(1×40mL)洗涤，且经硫酸钠干燥，在减压下蒸发，得到2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-醇(4)。TLC系统：30％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 270.1[M+H]
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲基酯(6)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙-1-醇(4)(1g，3.703mmol)于ACN(10mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'二丁二酰亚胺酯(2.4g，9.259mmol)，然后添加Et3N(1.56mL，11.109mmol)，且在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，将(S)-2-氨基己酸甲酯盐酸盐(5)(1.34g，7.407mmol)溶解于ACN(10mL)中，且用Et3N(1.56mL，11.109mmol)处理。将反应混合物搅拌10min，随后逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到物质，其通过combi-flash(正相)，使用乙酸乙酯和石油醚作为移动相来纯化，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(6)。TLC系统：50％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 441.19[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸甲酯(6)(1.3g，2.947mmol)于THF(13mL)、水(5mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(142mg，5.895mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(25mL)、盐水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)。TLC系统：70％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 427.13[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酸(7)(1.2g，2.810mmol)于DMF(12mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(805mg，4.215mmol)、HOBt(570mg，4.215mmol)、DIPEA(1.5mL，8.430mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(750mg，3.372mmol)且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(30mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash(正相)纯化所述物质，以80％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸乙酯(8)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 595.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(9)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(900mg，1.512mmol)于MeOH(10mL)中的经搅拌溶液中添加NaBH4(862mg，22.689mmol)且将反应混合物在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×20mL)萃取。将有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到产物，将其用二乙醚(10mL)湿磨，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(9)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 567.23[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(A256)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(9)(350mg，0.617mmol)于乙酸乙酯(10.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(523mg，1.234mmol)且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由方解石垫过滤，并用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC水溶液/乙腈)纯化，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-环丙基苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A256)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 565.2[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(A256)(150mg，0.265mmol)于DCM(3mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(10)(36mg，0.530mmol)，然后添加乙酸(0.2mL，0.530mmol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释且用1N HCl(2×10mL)洗涤，然后用盐水(1×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 692.33[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(12)
在室温下向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(11)(150mg，0.216mmol)于MeOH(4.5mL)中的经搅拌溶液中添加K2CO3(60mg，0.433mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物在减压下完全蒸馏且用水稀释，并用乙酸乙酯(2×25mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(12)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 650.7[M+H]
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(A257)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(12)(100mg，0.153mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(130mg，0.307mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×15mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×15mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC水溶液，乙腈)纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-4-基)乙酯(A257)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 648.3[M+H]+
实例41：化合物A258的合成
(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)：
在室温下向经活化锌(7.6g，91.1mmol)于DMF(50ml)中的悬浮液中添加催化量的碘并搅拌10min，且接着在相同温度下分数份添加(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-碘丙酸甲酯(1)(10g，30.3mmol)，然后添加催化量的碘并在相同温度下搅拌60min。用氩气球使反应物质脱气15min，且在室温下添加2-溴丁-1-烯(2)(4.8g，33.3mmol)、Pd2(dppf)Cl2(440mg，0.60mmol)和SPHOS(240mg，0.60mmol)，且加热至50℃持续16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯洗涤床。将所得滤液用水(300mL)稀释且用乙酸乙酯(2×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(250mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和10％ EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化残余物，得到(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.6；(S)-2-氨基-4-亚甲基己酸甲酯(4)：
在0℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(3)(15.0g，58.3mmol)于DCM(70mL)中的经搅拌溶液中添加TFA(15mL)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在起始物质完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到呈TFA盐形式的(S)-2-氨基-4-亚甲基己酸甲酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1
(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(5)
在0℃向(S)-2-氨基-4-亚甲基己酸甲酯(4)(10.0g，63.6mmol)于THF(60mL)和水(30ml)中的经搅拌溶液中添加NaHCO3(21.37g，254.4mmol)和Cbz-Cl(11.8g 69.96mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用冰冷水(100mL)稀释且用EtOAc(2×500mL)萃取，且将合并的有机层用盐水溶液(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过正相色谱，使用硅胶(100至200目)和15％ EtOAc/石油醚作为洗脱剂来纯化所得物质，得到(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲基酯(5)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.5
(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(6)
在0℃向(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-4-亚甲基己酸甲酯(5)(11g，37.5mmol)于DCM(110mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加Et2Zn(1M于THF中，150mL，150mmol)且搅拌10min。此后，在0℃缓慢逐滴添加CH2I2(24.8g，93.75mmol)且在室温下搅拌16h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物在0℃用1N HCl溶液(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并且用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(6)。TLC系统：10％乙酸乙酯。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 306.4[M+H]+
(S)-2-氨基-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(Int-6)：
在室温下向(S)-2-(((苯甲基氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(6)(2.9g，9.5mmol)于MeOH(29mL)中的经脱气溶液中添加Pd/C(580mg，20％w/w)且在H2气球压力下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，经由硅藻土垫过滤反应物质且用MeOH(50mL))洗涤床。在减压下浓缩所得滤液，得到(S)-2-氨基-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(Int-6)。TLC系统：20％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.1
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(8)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(Int-7)(2.0g，7.4mmol)于ACN(20mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸N,N'-二丁二酰亚胺酯(4.76g，18.6mmol)，然后添加三乙胺(4.9mL，37.3mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。反应物质直接用于后续反应中。
在另一RB烧瓶中，用三乙胺(4.9ml，37.3mmol)处理含(S)-2-氨基-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(Int-6)(1.53g，8.9mmol)的ACN(20mL)。将所得反应混合物搅拌5min，随后在0℃逐滴添加以上制备的反应物质，且将反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过柱色谱，使用硅胶(100至200目)和20％乙酸乙酯/石油醚作为洗脱剂来纯化所得残余物，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 466.17[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸(9)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸甲酯(8)(1.8g，3.86mmol)于THF(12mL)和水(6mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(487mg，11.6mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸(9)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 452.2[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酸(9)(1.4g，3.1mmol)于DMF(14mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(0.89g，4.6mmol)、HOBt(0.71g，4.6mmol)、DIPEA(2.7mL，15.5mmol)和(S)-2-氨基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲基酯(胺片段-2)(0.89g，4.0mmol)且在室温下搅拌5h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash柱纯化残余物且以40％乙酸乙酯/石油醚洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z620.32[M+H]+
((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(10)(260mg，0.41mmol)于DCM(2.6mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中)(0.4mL，0.83mmol)且在0℃搅拌1h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，并通过逆相柱(C18)，用50％ ACN/0.1％ FA水溶液洗脱来纯化，得到((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(10)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z 592.8[M+H]+
((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A258)：
在0℃向((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(10)(130mg，0.21mmol)于乙酸乙酯(1.3mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(186mg，0.43mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A258)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 590.3[M+H]+
实例42：化合物A259的合成
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A251)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(13)(1.5g，2.7mmol)于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.75g，6.9mmol)且在室温下搅拌3h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A251)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 542.3[M+H]+。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 536.7[M+H]+
乙酸((3S)-3-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-1-(乙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(15)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A251)(750mg，1.38mmol)于DCM(7.5mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(14)(228mg，4.15mmol)，然后添加乙酸(0.32mL，5.54mmol)，且在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。4h之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释且用盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过逆相柱色谱，使用60％ ACN/水作为洗脱剂洗脱来纯化所得残余物，且用戊烷/二乙醚湿磨所得固体，得到乙酸((3S)-3-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-1-(乙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(15)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z657.31[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(16)：
在0℃向乙酸((3S)-3-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)己酰胺基)-1-(乙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(15)(500mg，0.76mmol)于THF(3.75mL)、水(1.25mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O((48mg，1.14mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过逆相柱色谱，使用60％ ACN/水作为洗脱剂洗脱来纯化此残余物，且用戊烷/二乙醚湿磨所得固体，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(16)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 615.31[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(A259)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(16)(300mg，0.48mmol)溶解于乙酸乙酯(3.0mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(310mg，0.732mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(10mL)洗涤。将所得滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得化合物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-3-苯基丁酰胺基)-N-((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(A259)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 613.3[M+H]+
实例43：化合物A260的合成
2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-酮(2)：
在0℃向2-(3-氯苯基)-1-苯基乙-1-酮(Int-1)(7g，30.43mmol)于THF(100mL)中的经搅拌溶液中添加叔丁醇钾(8.52g，76.07mmol)且在相同温度下搅拌30min。随后在0℃逐滴添加碘代甲烷(5.6mL，91.3mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，将反应物用冰冷的水淬灭且用乙酸乙酯(2×250mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-酮(2)。TLC系统：5％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z259.26[M+H]+
4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸乙酯(4)：
在室温下向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-酮(2)(6.0g 23.71mmol)于苯:二乙醚(1:1，120mL)中的经搅拌溶液中同时添加预活化锌(11.5g，177.86mmol)、催化碘和溴乙酸乙酯(3)(15.7g，94.86mmol)且在80℃回流6h。通过TLC监测反应进展。反应完成后，经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(2×50mL)洗涤。将滤液用1N HCl(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×300mL)萃取。将合并的有机层用水(250mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸乙酯(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z329.40[M-OH]-
4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸(5)：
在0℃向4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸乙酯(4)(4g，11.53mmol)于THF(22.5mL)和水(5mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(1.2g，28.65mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸(5)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 317.31[M-H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸甲酯(7)：
在0℃向4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基戊酸(5)(5.0g，11.6mmol)于DMF(100mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(3.3g，17.4mmol)、HOBt(2.3g，17.4mmol)、DIPEA(4.8mL，34.8mmol)和(S)-2-氨基己酸甲酯(6)(3.34g，15.08mmol)且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(150mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将合并的有机层用冰水(2×100mL)、盐水溶液(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以80％乙酸乙酯/石油醚洗脱化合物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸甲酯(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 446.54[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸(8)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸甲酯(7)(6.5g，14.57mmol)于THF(22.5mL)和水(4mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(2.44g，58.29mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙基10％甲醇/DCM(2×150mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸(8)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 432.52[M+H]+
(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酸(8)(2.7g，6.26mmol)于DMF(40mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.8g，9.39mmol)、HOBt(1.26g，9.39mmol)、DIPEA(3mL，18.78mmol)和(S)-2-氨基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(2g，9.39mmol)且在室温下搅拌16h。反应完成后，将反应混合物用冰水(100mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×80mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以100％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 600.30[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(10)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(9)(3g，5mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH 4 的THF(5mL，10mmol)，且将反应混合物在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物在0℃用饱和氯化铵溶液(40mL)淬灭，且用DCM(2×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，并通过正相柱色谱，使用100％乙酸乙酯纯化，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(10)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 572.30[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A260)
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(10)(1.0g，1.75mmol)溶解于乙酸乙酯(15mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.48g，3.5mmol)且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过逆相柱纯化所述化合物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A260)。此后，将250mg物质通过逆相柱色谱纯化且用40％ACN/0.1％NH4CO3水溶液洗脱，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A260)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z570.3[M+H]+
实例44：化合物A261的合成
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(A260)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)己酰胺(1)(2.0g，3.50mmol)溶解于乙酸乙酯(30mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(4.4g，10.507mmol)且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×40mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×40mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过逆相柱纯化所述化合物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1-(3-环丙基苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A260)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z570.3[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)己酰胺基)-1-(乙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)：
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1-(3-环丙基苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A260)(0.6g，1.05mmol)于DCM(6mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(2)(86mg，1.57mmol(3ml DCM)，然后添加乙酸(0.12mL，2.1mmol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。4h之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释且用盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过正相柱色谱，使用5％MeOH/DCM洗脱来纯化此残余物且用戊烷/二乙醚湿磨所得固体，得到乙酸(3S)-1-(环丙基氨基)-3-((2S)-2-((((1-(3-环丙基苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酰胺基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)。TLC系统：乙酸乙酯。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 685.32[M+H]
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(4)：
在0℃向乙酸(3S)-1-(环丙基氨基)-3-((2S)-2-((((1-(3-环丙基苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酰胺基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(3)(0.5g，0.73mmol)于THF(4mL)、水(1mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(61mg，1.46mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将合并的有机层用盐水溶液(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(4)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 643.46[M+H]+
(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(A261)：
在0℃向(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(4)(350mg，0.56mmol)溶解于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(475mg，1.12mmol)且在室温下搅拌2h。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到化合物。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化残余物，得到(2S)-2-(4-(3-氯苯基)-3-羟基-4-甲基-3-苯基丙酰胺基)-N-((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)己酰胺(A261)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 641.3[M+H]+
实例45：化合物A262的合成
(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸甲酯盐酸盐(int-5)：
在0℃向(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸(1)(9.0g，45mmol)于MeOH(90mL)中的经搅拌溶液中添加SOCl2(18mL)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。在起始物质完成后，在减压下浓缩反应混合物，且用二乙醚(50mL)洗涤物质，得到(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸甲酯盐酸盐(2)。LCMS(ESI):m/z 214.2[M+H]+
(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙-1-醇(int-7)(5g，18.6mmol)于DCM(50mL)中的经搅拌溶液中添加吡啶(35mL，3vol)，然后添加(S)-2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸甲酯盐酸盐(5.9g，27.98mmol)。在0℃向其中缓慢地分数份添加三光气(5.5g，18.6mmol)并在室温下搅拌5h。通过TLC和LCMS监测反应进展。直接浓缩反应混合物。将所得残余物用DCM稀释且用1N HCl(150mL)洗涤。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash纯化残余物，以10％乙酸乙酯/石油醚洗脱化合物，得到(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(2)。TLC系统：30％乙酸乙酯/己烷。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 508.1[M+H]+
(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸(4)：
在室温下向(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸甲酯(2)(4g，15.0mmol)于THF(34mL)和水(17mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(659mg，15.7mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水(100mL)、盐水溶液(150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 494.09[M+H]+
(2S)-2-((2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)：
在0℃向(2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酸(4)(4g，8.11mmol)于DMF(40mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.8g，9.73mmol)、HOBt(1.0g，9.73mmol)、DIPEA(5.9mL，32.44mmol)和(S)-2-氨基-3-((R)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2`)(2.6g，14.6mmol)且在室温下搅拌3h。反应完成后(通过TLC监测)，将反应混合物用冰水(30mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层合并，且用盐水溶液(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过combi-flash NP纯化残余物，以40％乙酸乙酯洗脱化合物，得到(2S)-2-((2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝662.31[M+H]+
((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-3-(4-氯苯基)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(3.0g，5.53mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中，4.5mL，9.07mmol)且在0℃搅拌1h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×100mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，并通过逆相柱(C18)，用50％ACN/0.1％ FA水溶液洗脱来纯化，得到((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z 634.2[M+H]+
((S)-3-(4-氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A262)：
在0℃向((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)(2.0g，3.15mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(2.7g，6.3mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-3-(4-氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A262)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 632.2[M+H]+
实例46：化合物A263的合成
((S)-3-(4-氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A262)：
在0℃向((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(6)(2.0g，3.15mmol)于乙酸乙酯(20mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(2.7g，6.3mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-3-(4-氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A262)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 632.2[M+H]+
乙酸(6S,9S)-6-(4-氯苯甲基)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(8)：
在0℃向((S)-3-(4-氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A262)(800mg，1.26mmol)于DCM(4mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(7)(于DCM(2vol)中的溶液)，然后添加乙酸(0.8mL)，且在室温下搅拌16h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和氯化铵溶液(2×30mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过逆相combi flash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ FA水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(6S,9S)-6-(4-氯苯甲基)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(8)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z747.3[M+H]+
((2S)-3-(4-氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)：
在0℃向乙酸(6S,9S)-6-(4-氯苯甲基)-1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(8)(200mg，0.28mmol)于THF(3mL)和水(1.5mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(22.7mg，0.56mmol)，且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，得到((2S)-3-(4-氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 705.4[M+H]+
((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A263)：
在0℃向((2S)-3-(4-氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(9)(180mg，0.25mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(216mg，0.511mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物且用乙酸乙酯(10mL)洗涤。将所得滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得残余物，得到((S)-3-(4-氯苯基)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A263)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z 703.2[M+H]+
实例47：化合物A266的合成
1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-酮(3)
在0℃向2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(1)(5.0g，20.069mmol)于二乙醚中的经搅拌溶液中添加iPrMgCl(77mL，100.4mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵淬灭，且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并有机层，且用水(1×50mL)、盐水溶液(1×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-酮(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):未电离
1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇(4)
在0℃向1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-酮(3)(4.5g，19.396mmol)于THF(45mL)中的经搅拌溶液中添加硼氢化钠(2.2g，58.189mmol)。使反应混合物在室温下搅拌2h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用1NHCl水溶液(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×30mL)萃取。将合并的有机层用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇(4)。TLC系统：20％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):未电离
(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)
在0℃向1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-醇(4)(3.0g，12.820mmol)、L-苯基丙氨酸甲酯(5)(6.092g，28.204mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中分数份添加吡啶(9mL，3vol)，然后添加三光气(8.30g，28.204mmol)。使反应混合物在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用1N HCl水溶液(50mL)淬灭，且用DCM(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发。通过硅胶(100至200目)柱色谱，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化所述物质，得到(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)。TLC系统：20％ EtOAc/石油醚。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 440.2[M+H]+
(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)
在室温下向(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(6)(3.8g，8.656mmol)于THF(30mL)、水(10mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(623mg，25.968mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏过量THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)。TLC系统：100％乙酸乙酯。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 406.2[M-F]+
(2S)-2-((2S)-2-((((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)
在0℃向(((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(7)(2.5g，5.882mmol)于DMF(25mL)中的经搅拌溶液中添加EDC.HCl(1.694g，8.823mmol)、HOBt(1.191g，8.823mmol)、DIPEA(3.06mL，17.646mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(胺片段-2)(1.567g，7.058mmol)。使反应混合物在室温下搅拌16h。将水(150mL)添加至反应混合物且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC:乙腈)纯化所述物质，得到(2S)-2-((2S)-2-((((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z594.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(9)
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-((((1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(8)(2.2g，3.709mmol)于THF(22mL)中的经搅拌溶液中添加LiBH4(5.5mL，11.129mmol)且将反应混合物在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，且用DCM(2×75mL)萃取。将有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，将其用二乙醚(25mL)湿磨，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(9)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 566.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A266)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(9)(500mg，0.884mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.1g，2.654mmol)且在室温下搅拌3h。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由方解石垫过滤，并用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，其通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC:乙腈)纯化，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A266)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 564.2[M+H]+
实例48：化合物A267和A268的合成
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-2)
通过combi-flash(C-18，0.1％ ABC水溶液:乙腈)纯化800mg的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-2)。LCMS(ESI):m/z 567.2[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A267)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-1)(250mg，0.441mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(563mg，1.32mmol)且在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，经由硅藻土垫过滤且用饱和海波溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，将其使用Et2O:戊烷(1:1，15mL)湿磨，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A267)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 565.2[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A268)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(1-PK-2)(250mg，0.441mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(563mg，1.32mmol)且在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释，经由硅藻土垫过滤且用饱和海波溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，将其使用Et2O:戊烷(1:1，15mL)湿磨，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-(吡啶-3-基)乙酯(A268)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 565.2[M+H]+
实例49：化合物A269的合成
((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1)：
在内部温度不升高的情况下在-10℃向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(15g，52.44mmol)于MeOH(30mL)中的经搅拌溶液中逐滴添加NaOH(8.39，262.23mmol，溶解于80mL水中)。将所得反应混合物在-5℃搅拌2h。反应完成后(通过TLC监测)，在减压下蒸发反应混合物。将所得残余物用水(200mL)稀释，在0℃用1NHCl酸化(直到约pH 2)且用EtOAc(3×200mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(200mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-叔丁酯(1)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z＝271.14(M-H)+
((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2)：
在0℃向((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1)(14g，54.26mmol)于DCM(140mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加DMP(34.51g，81.39mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌3h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，经由硅藻土床过滤反应混合物且用(10％ M/DCM)洗涤。将有机层用饱和硫代硫酸钠(300mL)和饱和NaHCO3溶液(300mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5
((2S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)：
在0℃向苯并[d]噁唑(3)(6.97g，58.59mmol)于THF(30mL)中的经搅拌溶液中添加iPrMgCl.LiCl(1.3M于THF中，36.05ml，46.87mmol)且搅拌2h。此后在0℃将此溶液添加至((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2)(1.5g，5.85mmol)于THF(7mL)中的溶液中且在0℃搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶(100至200目)柱色谱，使用0％至10％MeOH/DCM作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((2S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z＝376.61(M+H)+
((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5)：
在0℃向((2S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4)(0.75g，2.00mmol)于EtOAc(21mL)中的经搅拌溶液中添加DMP(1.69g，4.00mmol)。将所得反应混合物在室温下搅拌16h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，经由硅藻土床过滤反应混合物且用(10％ M/DCM)洗涤。将有机层用饱和硫代硫酸钠(300mL)和饱和NaHCO3(300mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过逆相柱，使用0％至50％(CAN/水)来纯化所述物质，得到((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝396.17(M+Na+H)+
呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-3-(苯并[d]噁唑-2-基)-3-氧代-2-((2,2,2-三氟乙酰基)-l4-氮烷基)丙基)吡咯烷-2-酮(6)：
在0℃向含经搅拌((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5)(0.5g，1.34mmol)的DCM(10mL)中添加TFA(3mL)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在减压下完全蒸馏反应混合物，得到呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-3-(苯并[d]噁唑-2-基)-3-氧代-2-((2,2,2-三氟乙酰基)-l4-氮烷基)丙基)吡咯烷-2-酮(6).TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 274.12[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A269)：
在0℃向呈TFA盐形式的(S)-3-((S)-3-(苯并[d]噁唑-2-基)-3-氧代-2-((2,2,2-三氟乙酰基)-l4-氮烷基)丙基)吡咯烷-2-酮(6)(0.25g，0.67mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酸(0.28g，0.67mmol)、HBTU(0.25g，0.67mmol)、DIPEA(0.37mL，2.02mmol)且将所得反应混合物在室温下搅拌2h。反应完成后(通过TLC和LCMS监测)，将反应混合物用水(50mL)稀释且用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A269)。TLC系统：80％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z681.3[M+H]+
实例50：化合物A253和A270的合成
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-2)
通过手性SFC纯化400mg的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-2)。LCMS(ESI):m/z＝600.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A253)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-1)(140mg，0.2336mmol)于乙酸乙酯(7mL)中的经搅拌溶液中分数份添加戴斯-马丁高碘烷(298mg，0.7009mmol)。使反应混合物在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯洗涤，将滤液用饱和海波溶液(2×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(2×25mL)和盐水(2×25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。通过正戊烷/Et2O湿磨所述物质，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A253)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 598.2(M+H)+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A270)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1-PK-2)(130mg，0.217mmol)于乙酸乙酯(6.5mL)中的经搅拌溶液中分数份添加戴斯-马丁高碘烷(276mg，0.651mmol)。使反应混合物在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯洗涤，将滤液层用饱和海波溶液(2×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(2×25mL)和盐水(2×25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到化合物。通过正戊烷/Et2O湿磨所述物质，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A270)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 598.3(M+H)+
实例51：化合物A271的合成
(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(1)
在0℃向(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(A250，1g，1.644mmol)于THF(30mL)中的经搅拌溶液中添加NaCNBH3(2.466mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭，且用乙酸乙酯(2×25mL)萃取。将合并的有机层用水(25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到产物。用正戊烷(15mL)湿磨此物质，得到(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(1)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 610.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)
在0℃向(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸(1)(500mg，0.819mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加HATU(467mg1.229mmol)、DIPEA(0.43mL,2.45mmol)和N,N-二乙基乙烷-1,2-二胺(2)(115mg，0.983mmol)，且在40℃搅拌32h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(10mL)稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤，然后用盐水(1×10mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，其通过逆相色谱，使用0.1％ ABC水溶液/乙腈来纯化，得到((2S)-1-(((2S)-4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)。TLC系统：15％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 708.3[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯-A271
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(3)(150mg 0.212mmol)于DCM(7.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(134mg，0.318mmol)且在室温下搅拌3h。依据TLC和LC-MS反应完成后，将反应混合物用DCM(10mL)稀释且用饱和Na2S2O3(2×20mL)、饱和NaHCO3溶液(2×20mL)和盐水(2×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，通过制备型HPLC纯化，得到((S)-1-(((S)-4-((2-(二乙基氨基)乙基)氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A271)。
制备型HPLC条件：柱/尺寸X BRIDGE PHENYL-(19*250，5μm)，移动相A：10MM ABC/水；移动相B：5MM ABC于ACN中/MeOH(80:20)，梯度(时间/％B)：0/30、1/30、15/65、19/65、19.05/98、24/98、24.05/30、27/30。流速：16mL/min；溶解度：乙腈+THF+水。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LC-MS(ESI):m/z 706.4[M+H]+
实例52：化合物A272和A273的合成
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-2)
通过手性SFC纯化2.5g的(1)((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-1)(1.2g，2.0917mmol，50％产率)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-2)。LCMS(ESI):m/z 574.36[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A272)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-1)(500mg，0.8715mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(739.34mg，1.743mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。在反应之后，经由硅藻土床过滤且用乙酸乙酯洗涤，且将滤液用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质。使用combi-flash(C-18，0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈)来纯化所得化合物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A272)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z572.19[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A273)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(1-PK-2)(500mg，0.8715mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(739.34mg，1.743mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土床过滤悬浮液且用乙酸乙酯洗涤，且将有机层用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质。使用combi-flash(C-18，0.1％碳酸氢铵水溶液:乙腈)来纯化所得化合物，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-1-([1,1'-联苯]-3-基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A273)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 572.3[M+H]+
实例53：化合物A274的合成
乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-13-((3-氯苯基)二氟甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(2)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A266)(150mg，0.2487mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中依序添加异腈乙烷(1)(7mL，4V)，然后在0℃添加乙酸(0.04mL，0.7462mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和NaHCO3溶液(3×10mL)洗涤，然后用盐水(1×10mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-13-((3-氯苯基)二氟甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(2)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 679.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(3)
在0℃向乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-13-((3-氯苯基)二氟甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(2)(160mg，0.2228mmol)于THF(1.6mL)、水(1.6mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(28mg，0.6685mmol)且在室温搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将溶剂在减压下完全蒸发且用1NHCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×10mL)萃取。将合并的有机层经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(3)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 637.3(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A274)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(3)(150mg，0.2218mmol)于乙酸乙酯(7.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(282mg，0.6656mmol)。使反应混合物在室温下搅拌3h。依据TLC反应完成后，经由硅藻土床过滤悬浮液且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液层用饱和海波溶液(3×25mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×25mL)和盐水(3×25mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且浓缩，得到物质，将其使用Et2O:戊烷湿磨，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸1-(3-氯苯基)-1,1-二氟-3-甲基丁烷-2-基酯(A274)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 635.3(M+H)+
实例54：化合物A275和A265的合成
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-2)：
通过手性SFC纯化0.6g的((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1)，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-1)和((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-2)。LCMS(ESI):m/z 574.7[M+H]+
((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(A275)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-1)(180mg，0.31mmol)于乙酸乙酯(2mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(0.2g，0.465mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。用乙酸乙酯(5mL)稀释反应混合物且经由硅藻土垫过滤。将所得滤液用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combi flash柱(C-18)和55％ ACN/1％碳酸氢铵水溶液来纯化所得物质，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(A275)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 572.4[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-2)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(1-PK-2)(170mg，0.29mmol)于乙酸乙酯(2mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(189g，0.445mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。用乙酸乙酯(5mL)稀释反应混合物且经由硅藻土垫过滤。将所得滤液用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combi flash柱(C-18)和55％ ACN/1％碳酸氢铵水溶液来纯化所得物质，得到((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-异丙基苯基)-1-苯基乙酯(A265)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 572.3[M+H]+
实例55：化合物A276和A277的合成
((3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(3)
在0℃向3-苯基丙烷-1-醇(1)(5g，36.713mmol)、S-苯基丙氨酸甲酯盐酸盐(8.5g，44.055mmol)于DCM(60mL)中的经搅拌溶液中分数份添加吡啶(15mL，3vol)，然后添加三光气(5.4g，18.35mmol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用1N HCl水溶液(100mL)淬灭，随后用DCM(2×75mL)萃取，用盐水(1×50mL)洗涤，将有机层经硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过硅胶(230至400目)柱色谱，用5％乙酸乙酯/己烷洗脱来纯化所述物质，得到((3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/石油醚。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 342.17[M+H]+
((3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)
在0℃向((3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯基丙氨酸甲酯(3)(5g，14.66mmol)于THF(40mL)、水(10mL)中的经搅拌溶液中添加氢氧化锂(701mg，29.29mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取，将合并的有机层用水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)。TLC系统：100％ EtOAc。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 328.43[M+H]
(S)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(((3-苯基丙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)
在0℃向(3-苯基丙氧基)羰基)-L-苯丙氨酸(4)(2g，6.109mmol)于DMF(10mL)中的经搅拌溶液中同时添加EDC.HCl(1.75g，9.163mmol)、HOBt(1.23g，9.163mmol)、DIPEA(3.1mL，18.327mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.63g，7.330mmol)且在室温下搅拌16h。将反应混合物用冰水(100mL)淬灭，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。将合并的有机层用冰水(2×30mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到化合物。通过硅胶(230至400目)柱色谱纯化所述物质，得到(S)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(((3-苯基丙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z＝496.29[M+H]+
((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(6)
在0℃向(S)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-((S)-3-苯基-2-(((3-苯基丙氧基)羰基)氨基)丙酰胺基)丙酸甲酯(5)(1g，2.017mmol)于二氯甲烷(15mL)中的经搅拌溶液中添加含2M LiBH4的THF(2.0mL，4.035mmol)且搅拌2h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和NH4Cl溶液(25mL)淬灭且用二氯甲烷(2×30mL)萃取，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(6)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 468.3[M+H]+
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(A277)
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(6)(100mg，2.147mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(140mg，2.577mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。用乙酸乙酯(15mL)稀释反应混合物且经由硅藻土床过滤。将滤液用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和海波溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，将此物质通过逆相色谱，使用0.1％ ABC水溶液:乙腈纯化，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(A277)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z466.3[M+H]+
乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-15-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(A277)(250mg，0.536mmol)于DCM(4mL)中的经搅拌溶液中添加AcOH(0.2mL，1.610mmol)、异氰基环丙烷(60mg，1.072mmol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷(10mL)稀释，且用水(15mL)和盐水(15mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-15-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z581.3[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(9)
在0℃向乙酸(6S,9S)-9-苯甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-15-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)(290mg，0.499mmol)于THF:H2O(3mL:1mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH(18mg，0.749mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物浓缩，且用1N HCl酸化，并用EtOAc(2×20mL)萃取。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发，得到物质：通过逆相色谱，使用0.1％ ABC水溶液:乙腈纯化此物质，得到纯((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(9)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 539.6[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(A276)
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(9)(100mg，0.185mmol)于乙酸乙酯(5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(157mg，0.371mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土垫过滤反应混合物且用乙酸乙酯(15mL)洗涤，且将滤液用海波溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到残余物。通过逆相色谱，使用0.1％ ABC水溶液:乙腈纯化化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸3-苯基丙酯(A276)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.6；LCMS(ESI):m/z537.3[M+H]+
实例56：化合物A278的合成
((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A278)：
在0℃向(S)-3-((S)-3-(苯并[d]噁唑-2-基)-3-氧代-2-((2,2,2-三氟乙酰基)-l4-氮烷基)丙基)吡咯烷-2-酮(呈TFA盐形式)(1)(0.14g，0.37mmol)于DMF(5mL)中的经搅拌溶液中添加(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酸(0.176g，0.37mmol)、HBTU(0.143g，0.37mmol、1eq)、DIPEA(0.62mL，1.13mmol)且将所得反应混合物在室温下搅拌2h。反应完成后(通过TLC和LC-MS监测)，将反应混合物用水(50mL)稀释且用EtOAc(2×25mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过制备型HPLC纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A278)。TLC系统：80％ EA/石油醚。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 721.3[M+H]+
实例57：化合物A279的合成
(S)-2-氨基-3-(3,4-二氯苯基)丙酸甲酯盐酸盐(2)：
在0℃向(S)-2-氨基-3-(3,4-二氯苯基)丙酸(1)(5.0g，21.45mmol)于MeOH(50mL)中的经搅拌溶液中添加SOCl2(4.67mL)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。在起始物质完成后，在减压下浓缩反应混合物，得到(S)-2-氨基-3-(3,4-二氯苯基)丙酸甲酯盐酸盐(2)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 247.98[M+H]+
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸甲酯(3)：
在0℃向2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙烷-1-醇(Int-5)(3.0g，11.53mmol)于DCM(30mL)中的经搅拌溶液中分数份添加吡啶(9mL，115.38mmol)和Cpd-2(3.9g，13.84mmol)，然后添加三光气(2.73g，9.22mmol)，且将反应混合物在室温下搅拌4h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用1N HCl(50mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×75mL)萃取。将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过硅胶(230至400目)柱色谱纯化所述物质，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸甲酯(3)。TLC系统：10％乙酸乙酯/己烷。
Rf:0.55
(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸(4)：
在室温下向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸甲酯(3)(2.9g，5.44mmol)于THF(20mL)和水(7mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(0.34g，8.16mmol)，且在室温下搅拌2h。通过TLC监测反应进展。在减压下蒸馏THF，将化合物用1N HCl水溶液酸化直到约pH 2且用DCM(2×50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)、盐水溶液(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸(4)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z 518.26[M-H]+
(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)：
在0℃向(2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酸(4)(2.5g，4.8mmol)于DMF(2.5mL)中的溶液中添加EDC.HCl(1.38g，7.2mmol))、HOBt(0.972g 7.2mmol)、DIPEA(2.5mL，14.4mmol)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯盐酸盐(胺片段-2)(1.28g，5.78mmol)且在室温下搅拌4h。将反应混合物用冰水(50mL)稀释且用乙酸乙酯(2×50mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥且在减压下蒸发。通过使用硅胶(230至400目)的柱色谱纯化所得残余物，得到(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)。TLC系统：5％ MeOH/DCM。Rf:0.45；LCMS(ESI):m/z＝688.3[M+H]+
((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)：
在0℃向(2S)-2-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(3,4-二氯苯基)丙酰胺基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸甲酯(5)(2.3g，3.34mmol)于THF(23mL)中的经搅拌溶液中缓慢逐滴添加LiBH4(2M于THF中，3.34mL，6.69mmol)且在0℃搅拌2h。通过TLC监测反应进展。起始物质完成后，将反应混合物用饱和NH4Cl溶液淬灭且用二氯甲烷(2×150mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，并通过逆相柱(C18)，用60％ ACN/0.1％ FA水溶液洗脱来纯化，得到((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.35；LCMS(ESI):m/z 660.4[M+H]+
((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A279)：
在0℃向((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(6)(400mg，0.606mmol)于乙酸乙酯(4mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(386mg，0.91mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用60％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A279)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 658.2[M+H]+
实例58：化合物A280的合成
乙酸(6S,9S)-14-(3-氯苯基)-9-(3,4-二氯苯甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-13-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)：
在0℃向((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A279)(0.6g，0.913mmol)于DCM(6mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基乙烷(7)(150mg，2.73mmol)，然后添加乙酸(0.22mL，3.65mmol)，且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。在起始物质完成后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用饱和氯化铵溶液(2×20mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。通过逆相combi flash柱(C18)，使用60％ ACN/0.1％ FA水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(6S,9S)-14-(3-氯苯基)-9-(3,4-二氯苯甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-13-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 773.42[M+H]+
((2S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)：
在0℃向乙酸(6S,9S)-14-(3-氯苯基)-9-(3,4-二氯苯甲基)-14-甲基-4,8,11-三氧代-6-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-13-苯基-12-氧杂-3,7,10-三氮杂十五烷-5-基酯(8)(400mg，0.518mmol)于THF(3mL)和水(1mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(32.6mg，0.77mmol)且在室温搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水溶液(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)。TLC系统：10％ MeOH/DCM。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z731.6[M+H]+
((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A280)：
在0℃向((2S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(9)(230mg，0.315mmol)于乙酸乙酯(2.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(200mg，0.47mmol)且在室温下搅拌2h。通过TLC和LCMS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(10mL)洗涤。将所得滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×20mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得残余物，得到((S)-3-(3,4-二氯苯基)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯(A280)。TLC系统：10％MeOH/DCM。Rf:0.65；LCMS(ESI):m/z729.2[M+H]+
实例59：化合物A281的合成
((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A258)：
在0℃向((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-(((S)-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(11)(580mg，0.98mmol)于乙酸乙酯(5.8mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加戴斯-马丁高碘烷(830mg，1.96mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A258)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 590.3[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)：
在0℃向((S)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A258)(500mg，0.84mmol)于二氯甲烷(5mL)中的经搅拌溶液中添加乙酸(152.7mg2.54mmol)和环丙烷异腈(12)(170.5mg，2.54mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应。反应完成后，将反应混合物用DCM(20mL)稀释且用水(3×40mL)、盐水溶液洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩。通过逆相comb flash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 717.63(M+H)+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)丙酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基酯(13)(330mg，0.46mmol)于THF(2mL)和水(1mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(29mg，0.69mmol)且在室温下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取且用水(30mL)洗涤。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 675.58(M+H)+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A281)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(14)(300mg，0.44mmol)于乙酸乙酯(3mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(377mg，0.88mmol)且在室温下搅拌2h。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(20mL)稀释且经由方解石垫过滤。将所得滤液用饱和海波溶液(3×50mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×50mL)洗涤。将有机层分离，经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过用正戊烷/DEE湿磨来纯化所得化合物，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-(1-乙基环丙基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A281)。TLC系统：5％甲醇/DCM。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 673.3[M+H]+
实例60：中间物I225的合成
((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A72)(420mg，7.44mmol)于DCM(10mL)中的经搅拌溶液中添加丙酮氰胺(0.42mL，1vol)、Et3N(0.42mL，1vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用DCM(15mL)稀释且用水(2×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到产物。将其用正戊烷(15mL)湿磨，得到((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.6；LCMS(ESI):m/z 591.35[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯
在0℃向((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(300mg，5.07mmol)于DMSO(5mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(90mg，7.614mmol)，然后添加30％ H2O2(0.8mL，2vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。将合并的有机层用水(2×15mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到物质，将其用正戊烷(15mL)湿磨，得到((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 609.39[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(250mg，4.105mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(522mg，1.231mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC和LC-MS监测反应进展。经由硅藻土床过滤反应混合物且用乙酸乙酯(20mL)洗涤。将滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过逆相色谱，使用0.1％ABC/乙腈作为缓冲液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(I225)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z607.3[M+H]+
实例61：化合物A282和A273的合成
((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯
在0℃向((S)-4-甲基-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(I225A)(1.0g，1.7761mmol)于DCM(10mL)中的经搅拌溶液中添加丙酮氰胺(1mL，1vol)、Et3N(1mL，1vol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用DCM(15mL)稀释且用水(2×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下蒸发，得到产物。用正戊烷(15mL)湿磨此物质，得到((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.5；LCMS(ESI):m/z 591.30[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)。在0℃向((2S)-1-(((2S)-1-氰基-1-羟基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(1)(1.0g，1.6949mmol)于DMSO(5mL)中的经搅拌溶液中添加碳酸钾(350mg，2.54mmol)，然后添加30％H2O2(4mL，4vol)且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用水(25mL)淬灭且用乙酸乙酯(2×75mL)萃取。将合并的有机层用水(2×15mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，且在减压下蒸发，得到物质。用正戊烷(15mL)湿磨此物质，得到((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 609.30[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-氨基-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(2)(700mg，1.1513mmol)于乙酸乙酯(14mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.46g，3.45mmol)且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。经由硅藻土床过滤悬浮液，且用乙酸乙酯(20mL)洗涤，将滤液用饱和海波溶液(3×20mL)、饱和NaHCO3溶液(3×20mL)洗涤，然后用盐水(1×15mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过逆相色谱，使用0.1％ABC/乙腈作为缓冲液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(I225)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z 607.2[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A282)和((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A273)
通过手性SFC纯化中间物I225，得到((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(S)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A282)(150mg，0.2475mmol)和((S)-1-(((S)-4-氨基-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(R)-2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A273)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.3；LCMS(ESI):m/z 607.3[M+H]+
实例62：化合物A283和A284的合成
乙酸(6S,9S)-6-丁基-1,1-二氟-1-(3-氟苯基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)：
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A77)(3.7g，6.76mmol)于DCM(37mL)中的经搅拌溶液中添加含异氰基乙烷(1)(1.1g，20.28mmol)的DCM(17mL)，然后添加乙酸(1.62mL，27.05mmol)，且在室温下搅拌6h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用二氯甲烷稀释，且用1N HCl(2×40mL)洗涤，然后用盐水(1×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥且在减压下蒸发。将所得物质通过逆相柱色谱纯化且用40％ ACN/0.1％碳酸氢铵水溶液洗脱，得到乙酸(6S,9S)-6-丁基-1,1-二氟-1-(3-氟苯基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.2；LCMS(ESI):m/z 663.41[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)：
在0℃向乙酸(6S,9S)-6-丁基-1,1-二氟-1-(3-氟苯基)-4,7,11-三氧代-9-(((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2-苯基-3-氧杂-5,8,12-三氮杂十四烷-10-基酯(2)(2g，3.02mmol)于THF(20mL)、水(2mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(190mg，4.5mmol)，且在室温下搅拌4h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，将反应混合物用乙酸乙酯(2×100mL)萃取，经无水硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)。TLC系统：5％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.1；LCMS(ESI):m/z621.64[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A173)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(乙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(3)(1g，1.61mmol)于乙酸乙酯(10mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(1.36g，3.22mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，经由硅藻土垫过滤反应混合物，且用乙酸乙酯(30mL)洗涤所述床。将所得滤液用海波溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3水溶液(3×20mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩，得到物质，其通过逆相纯化和50％ ACN/0.1％甲酸水溶液来纯化，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A173)。TLC系统：10％甲醇/二氯甲烷。Rf:0.4；LCMS(ESI):m/z619.60[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A283)和((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A284)：
通过手性SFC纯化600mg((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A173)，得到((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(S)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A283)和((S)-1-(((S)-4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸(R)-2,2-二氟-2-(3-氟苯基)-1-苯基乙酯(A284)。LCMS(ESI):m/z 619.3[M+H]+
实例63：化合物A285的合成
((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A292)：
在0℃向((S)-1-(((S)-1-羟基-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(12)(500mg，0.86mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中缓慢地分数份添加NaHCO3(146mg,1.739mmol)和戴斯-马丁高碘烷(737mg，1.739mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC和LCMS监测反应进展。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。用DEE/戊烷(50％)湿磨所得物质，得到((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A292)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 574.2[M+H]+
乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基酯(14)：
在0℃向((S)-1-氧代-1-(((S)-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A292)(500mg，2.61mmol)于DCM(5mL)中的经搅拌溶液中添加异氰基环丙烷(13)(0.5g，7.85mmol)，然后添加乙酸(0.47mL，7.85mmol)，且在室温下搅拌16h。通过TLC监测反应进展。16h之后，将反应混合物用二氯甲烷稀释且用盐水(15mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化此残余物，得到乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基酯(14)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 701.66[M+H]+
((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(15)：
在0℃向乙酸(3S)-3-((2S)-2-(((2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)己酰胺基)-1-(环丙基氨基)-1-氧代-4-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基酯(14)(300mg，0.42mmol)于THF(3.0mL)、水(1.5mL)中的经搅拌溶液中添加LiOH.H2O(26.9mg，0.64mmol)且在相同温度下搅拌1h。通过TLC和LCMS监测反应进展。反应完成后，用乙酸乙酯(2×50mL)萃取反应混合物，将合并的有机层用盐水溶液(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(15)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z659.61[M+H]+
((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A285)：
在0℃向((2S)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(15)(250mg，0.379mmol)于DCM(2.5mL)中的经搅拌溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(322mg，0.75mmol)，且在室温下搅拌3h。通过TLC监测反应进展。将反应混合物用DCM(50mL)稀释且经由硅藻土垫过滤，且将滤液用饱和硫代硫酸钠溶液(3×30mL)洗涤，然后用饱和NaHCO3溶液(3×30mL)洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，且在减压下浓缩。通过逆相combiflash柱(C18)，使用50％ ACN/0.1％ NH4CO3水溶液作为洗脱剂来纯化所得物质，得到((S)-1-(((S)-4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯(A285)。TLC系统：10％甲醇/DCM。Rf:0.55；LCMS(ESI):m/z 657.3[M+H]
测试化合物活性
体外抗病毒分析
冠状病毒抗病毒分析：
基于细胞的抗病毒剂分析：在携带诺沃克病毒复制子的细胞(HG23细胞)中检查抑制剂的抗病毒剂作用。简单来说，将融合细胞和半融合细胞与含有DMSO(<0.1％)或各种化合物(最多100μM)的培养基一起培育48小时。培育后，提取总RNA，且用实时定量RT-PCR(qRT-PCR)定量病毒基因组。由GraphPadPrism软件确定EC50值。除诺沃克病毒复制子以外，还使用猫冠状病毒(feline coronavirus；FCoV)、MERS-CoV(中东呼吸道综合征相关冠状病毒)、SARS-CoV(严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒)、人类冠状病毒229E、鼠类诺罗病毒和人类鼻病毒来确定抑制剂的细胞病变作用(cytopathic effect；CPE)抗病毒活性。
病毒蛋白酶分析：通过荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance EnergyTransfer；FRET)分析来确定抑制剂的抗病毒活性。将经纯化的病毒蛋白酶与蛋白酶底物肽(Edans-DFHLQ/GP-Dabcyl)和抑制剂一起培育，且随后通过荧光信号确定IC50值。
在20mM HEPES-Na pH 7、120mM NaCl、0.4mM EDTA、0.01％Triton、5％丙三醇和4mM DTT中进行SARS2 FRET蛋白酶分析。通过Anaspec自定义合成自淬灭肽底物5-FAM-TSAVLQ SGF RKK(5TAMRA)-NH2。将化合物以4倍连续稀释的方式稀释到20μM至0.075nM的最终浓度。视酶活性程度而定，添加SARS2蛋白酶直到最终浓度为30nM，且添加肽底物直到最终浓度为1.3μM。将所述分析物在37℃下培育120分钟，且在Perkin Elmer Envision中读取(在492nm下进行激发且在518nm下进行发射测量)。
SARS-CoV-2蛋白酶抑制分析的结果呈现于下表C中。
表C
本文提供的所有参考文献以全文引用的方式并入本文中。如本文所用，所有缩写、符号和定则与当代科学文献中所用的缩写、符号和定则一致。参见例如杰奈特(JanetS.Dodd)编,《ACS风格指南：作者和编辑手册(The ACS Style Guide:A Manual forAuthors and Editors)》,第2版,华盛顿特区：美国化学学会(Washington,D.C.:AmericanChemical Society),1997。
应理解，虽然本公开已结合其具体实施方式进行描述，但前述描述意图说明且不限制本公开的范围，本公开的范围是由权利要求书的范围限定。其它方面、优势和修改在权利要求书的范围内。

Claims (75)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(I)结构：
其中
各RN独立地是H或C1-6烷基；
各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，
或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的螺4元至8元杂环基，其任选地被C(O)ORN取代；
R1b是氢、卤基、羟基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；
n是0、1或2；
各Rx独立地是卤基、C1-6烷基、C3-6碳环基或C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；
m是0、1或2；
各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；
R2是C1-6烷基、C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；
R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基、被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C1-6羟烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代；
R3a是H或C1-6烷基；且
环A是C6-10环烷基、C6-10芳基或包括一个氮杂原子的5元至10元杂芳基，
限制条件是，当各R1a是氢或各R1a是甲基，环A是苯基，m是0或1，Ry是卤基且n是1时，则Rx不是氯，且
限制条件是所述化合物不是：
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-二苯基乙酯；
2-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
2-(2-(((2-(3-氯苯基)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-1-羟基-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-1-磺酸；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(间甲苯基)丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-苯基乙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代己烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-3-环己基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1-(2-氯苯基)-2-(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(3-环己基-1-((4-(二乙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(E)-4-(2-(((1,2-二苯基乙氧基)羰基)氨基)-4-甲基丙酰胺基)-5-(2-氧代吡咯烷-3-基)戊-2-烯酸乙酯；
3-(2-(((2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-(萘-2-基)丙氧基)羰基)氨基)-3-环己基丙酰胺基)-2-氧代-4-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁酸；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(4-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丙基)甲酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(1-((4-氨基-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2,2-二氟-1-苯基乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；
(1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(3-环己基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-1-(3-氟苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2,2-二氟乙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代庚烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环己基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丁基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-苯基丁酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氟苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环戊基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(4-甲基-1-((4-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-甲基-1-苯基丙酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸2-(3-氯苯基)-2-乙基-1-(4-氟苯基)丁酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(3-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环戊基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸1,2-双(3-氯苯基)-2-甲基丙酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氯苯基)环丙基)(4-氟苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(1-(3-氟苯基)环丙基)(苯基)甲酯；
(4-甲基-1-氧代-1-((1-氧代-3-(2-氧代吡咯烷-3-基)丙烷-2-基)氨基)戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯；或
(1-((4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-(2-氧代吡咯烷-3-基)丁烷-2-基)氨基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)氨基甲酸(4-氯苯基)(1-(3-氯苯基)环丁基)甲酯。
2.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中各RN是H。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或盐，其中至少一个R1a是H。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物或盐，其中至少一个R1a是卤基。
5.根据权利要求4所述的化合物或盐，其中各R1a是卤基。
6.根据权利要求4或5所述的化合物或盐，其中卤基是氯或氟。
7.根据权利要求4或5中任一项所述的化合物或盐，其中卤基是氟。
8.根据权利要求1至4、6和7所述的化合物或盐，其中至少一个R1a是C1-6烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物或盐，其中各R1a是C1-6烷基。
10.根据权利要求8或9所述的化合物或盐，其中C1-6烷基是甲基或乙基。
11.根据权利要求1或2所述的化合物或盐，其中各R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基。
12.根据权利要求11所述的化合物或盐，其中所述C3-6碳环基是环丙基、环丁基或环己基。
13.根据权利要求12所述的化合物或盐，其中所述C3-6碳环基是环丙基。
14.根据权利要求12所述的化合物或盐，其中所述C3-6碳环基是环丁基。
15.根据权利要求12所述的化合物或盐，其中所述C3-6碳环基是环己基。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐，其中n是0。
17.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐，其中n是1。
18.根据权利要求17所述的化合物或盐，其中Rx处于间位。
19.根据权利要求17或18所述的化合物或盐，其中Rx是卤基。
20.根据权利要求19所述的化合物或盐，其中Rx是氯。
21.根据权利要求19所述的化合物或盐，其中Rx是氟。
22.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物或盐，其中n是2。
23.根据权利要求22所述的化合物或盐，其中至少一个Rx是卤基。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或盐，其中m是0。
25.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或盐，其中m是1。
26.根据权利要求25所述的化合物或盐，其中Ry处于间位。
27.根据权利要求25所述的化合物或盐，其中Ry处于对位。
28.根据权利要求25至27中任一项所述的化合物或盐，其中Ry是卤基。
29.根据权利要求28所述的化合物或盐，其中卤基是氯。
30.根据权利要求28所述的化合物或盐，其中卤基是氟。
31.根据权利要求1至23中任一项所述的化合物或盐，其中m是2。
32.根据权利要求31所述的化合物或盐，其中一个Ry处于间位。
33.根据权利要求31或32所述的化合物或盐，其中一个Ry处于对位。
34.根据权利要求31至33中任一项所述的化合物或盐，其中至少一个Ry是卤基。
35.根据权利要求34所述的化合物或盐，其中各Ry是卤基。
36.根据权利要求34或35所述的化合物或盐，其中至少一个卤基是氟。
37.根据权利要求36所述的化合物或盐，其中各Ry是氟。
38.根据权利要求34至36中任一项所述的化合物或盐，其中至少一个卤基是氯。
39.根据权利要求1至25中任一项所述的化合物或盐，其中R2是C1-6烷基。
40.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物或盐，其中R2是
41.根据权利要求1至39中任一项所述的化合物或盐，其中R2是C1-6亚烷基-C5-8碳环基。
42.根据权利要求41所述的化合物或盐，其中R2是
43.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物或盐，其中R3是CHO。
44.根据权利要求1至42中任一项所述的化合物或盐，其中R3是-[C(O)]2-NRN-B。
45.根据权利要求44所述的化合物或盐，其中B是任选地被C1-6烷基单取代的C3-8碳环基。
46.根据权利要求45所述的化合物或盐，其中B是任选地被C1-6烷基单取代的C3碳环基。
47.根据权利要求44所述的化合物或盐，其中B是具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，其任选地被C1-6烷基单取代。
48.根据权利要求47所述的化合物或盐，其中B包括任选地被C1-6烷基单取代的哌啶基。
49.根据权利要求1所述的化合物或盐，其中环A包括苯基，各R1a是F，R1b是H，各RN是H，n是1，Rx是卤基，R2是C1-6卤烷基、C1-6亚烷基-C3-8碳环基或C1-6亚烷基-C6-10芳基，其中所述芳基任选地被1或2个独立地选自OH、卤基、C1-6烷基、C1-6卤烷基和C1-6烷氧基的取代基取代；R3是CN、被SO3H取代的C1-6亚烷基-O(O)C-C1-6烷基、C1-6亚烯基-C(O)O-C1-6烷基、被PO(OCH2CH2)2取代的C1-6亚烷基-OH、CHO或-[C(O)]2-NRN-B。
50.根据权利要求1至49中任一项所述的化合物或盐，所述化合物具有式(Ia)的结构：
其中
各RN独立地是H或C1-6烷基；
各R1a独立地是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基，或两个R1a与其所连接的碳一起形成螺C3-6碳环基；
R1b是氢、卤基、C1-6烷基或C1-6卤烷基；
n是0、1或2；
各Rx独立地是卤基或C1-6烷基；
m是0、1或2；
各Ry独立地是卤基或C1-6烷基；
R2是C1-6烷基或C1-6亚烷基-C5-8碳环基；且
R3是CHO或-[C(O)]2-NRN-B，其中B是C1-6烷基、C3-8碳环基或具有1至3个选自N、O和S的环杂原子的4元至12元杂环基，且所述碳环基或杂环基任选地被C1-6烷基单取代。
51.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有式(Ib)的结构：
其中
Rx是Cl、F、环丙基或苯基；
Ry是F；
m是0或1；
R2是C4-5烷基、C3-5卤烷基、CH2C3-6碳环基或苯甲基，且所述碳环基任选地被甲基或乙基取代；且
R3是CHO、C(O)C(O)NH2、C(O)C(O)NH环丙基或C(O)C(O)NH乙基，
限制条件是当Rx是Cl、m是0且R3是CHO、C(O)C(O)NH2或C(O)C(O)NH环丙基时，则R2不是2-甲基-丙基。
52.根据权利要求51所述的化合物或盐，其中R2是2-甲基-丙基、丁基、戊基、2-甲基-丁基、3,3-二氟丙基、CH2-环丙基、CH2环丁基、CH2环戊基、CH2-环己基、CH2-(1-乙基环丙基)、CH2-(1-甲基环丁基)、CH2-(1-乙基环丁基)、CH2-(1-乙基环戊基)或苯甲基。
53.根据权利要求52所述的化合物或盐，其中R2是丁基、戊基、2-甲基-丁基、3,3-二氟丙基、CH2-环丙基、CH2环丁基、CH2环戊基、CH2-环己基、CH2-(1-乙基环丙基)、CH2-(1-甲基环丁基)、CH2-(1-乙基环丁基)、CH2-(1-乙基环戊基)或苯甲基。
54.根据权利要求51至53中任一项所述的化合物或盐，其中Rx是Cl。
55.根据权利要求51至54中任一项所述的化合物或盐，其中m是0。
56.根据权利要求51至54中任一项所述的化合物或盐，其中Ry是F，或更具体地说，是间F。
57.根据权利要求51至56中任一项所述的化合物或盐，其中R2是CH2环己基。
58.根据权利要求51至56中任一项所述的化合物或盐，其中R2是丁基或2-甲基-丁基。
59.根据权利要求51至58中任一项所述的化合物或盐，其中R3是CHO。
60.根据权利要求51至58中任一项所述的化合物或盐，其中R3是C(O)C(O)NH环丙基。
61.一种如表A或表B中所述的化合物或其药学上可接受的盐。
62.根据权利要求61所述的化合物或盐，其选自化合物A20和A25至A29。
63.根据权利要求61所述的化合物或盐，其选自A20、A20-1、A20-2、A25-1、A48、A72、A119、A126、A164、A165、A167、A187、A196、A206、A209、A210、A228、A235、A239、A258、A265、A268、A270、A273、A289、A290、A295、A296、A297、A298、A299、A300、A302、A308、A309、A310、A316、A321和A325。
64.一种药学调配物，其包括根据权利要求1至63中任一项所述的化合物或盐和药学上可接受的赋形剂。
65.一种治疗或预防宿主的病毒感染的方法，其包括向所述宿主给予治疗量的根据权利要求1至63中任一项所述的化合物或盐。
66.根据权利要求65所述的方法，其中所述病毒感染是冠状病毒感染、杯状病毒感染或小核糖核酸病毒感染。
67.根据权利要求66所述的方法，其中所述病毒感染是杯状病毒感染。
68.根据权利要求67所述的方法，其中所述杯状病毒感染是诺罗病毒感染。
69.根据权利要求66所述的方法，其中所述病毒感染是小核糖核酸病毒感染。
70.根据权利要求69所述的方法，其中所述小核糖核酸病毒感染是鼻病毒感染。
71.根据权利要求70所述的方法，其中所述鼻病毒感染是鼻病毒A、鼻病毒B或鼻病毒C感染。
72.根据权利要求66所述的方法，其中所述病毒感染是冠状病毒感染。
73.根据权利要求72所述的方法，其中所述冠状病毒感染是严重急性呼吸道综合征(SARS)、中东呼吸道综合征(MERS)或冠状病毒疾病2019(COVID-19)。
74.根据权利要求72所述的方法，其中所述冠状病毒是α冠状病毒。
75.根据权利要求72所述的方法，其中所述冠状病毒是β冠状病毒。
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