CN118084698A - 一种含炔基的可电离脂质化合物及其合成方法与在医药上的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含炔基的可电离脂质化合物及其合成方法与在医药上的应用，含炔基的可电离脂质化合物的结构式如下通式(Ⅰ)所示。本发明的可电离脂质化合物通过引入炔基，改进可电离脂质分子的结构，得到一类新型的可电离脂质化合物，具有更高的生物安全性，该脂质化合物可广泛应用于mRNA等核酸药物的高效递送，促进核酸药物的发展。

Description

一种含炔基的可电离脂质化合物及其合成方法与在医药上的 应用
技术领域
本发明涉及有机合成药物技术领域，具体是一种含炔基的可电离脂质化合物及其合成方法与在医药上的应用。
背景技术
基因治疗是指将具有治疗意义的外源基因药物导入靶细胞用以纠正异常基因或者补偿缺失基因、使相应蛋白正常表达，从而达到治疗目的技术。事实上，基因治疗存在着诸多亟待解决的难题，致使其临床应用发展受到阻碍。利用合适的载体将基因药物输送至靶细胞，突破基因药物面临的生物屏障，是基因治疗的关键环节。
mRNA可以发挥类似疫苗的作用以达到治疗的目的，进入21世纪后，mRNA的合成技术、修饰技术和递送技术进一步发展，相比传统疫苗，mRNA疫苗具有更安全、效率更高和免疫原性更好的优势，且不会插入基因突变，可以被正常细胞降解，还可以通过序列修饰和递送载体改变其半衰期，同时，还容易大规模生产。目前比较常见的核酸递送载体主要分为两类，即病毒载体和非病毒载体。其中病毒载体发展较早，转染效率较高，但是存在安全性低、脱靶效应等问题。非病毒载体大多为人工合成，种类繁多，结构性能更加可控，其中可电离脂质体的应用最为广泛。
在生理pH条件下，可电离脂质呈电中性，显著降低了细胞毒性，展现出巨大的临床转化潜力。当脂质纳米粒被细胞内吞后，内涵体中的pH值较低，脂质被质子化而带正电荷，膜结构的稳定性变差甚至被破坏，利于脂质纳米粒内涵体逃逸。而在正常生理pH值下又转化为中性脂质，中性脂质与血细胞的阴离子细胞膜相互作用较少，提高了脂质纳米粒的生物相容性。总的来说，就是脂质的pH敏感特性有利于包载mRNA分子的脂质纳米粒体内递送。
DLin-DMA脂质是最早合成出来用于siRNA分子递送的，通过修饰连接键和疏水基团，将DLin-DMA脂质优化为DLin-KC2-DMA，再对头部氨基进行优化合成了DLin-MC3-DMA(以下简称为MC3)，极大地改善了递送效率，MC3作为关键成分被用于FDA批准的第一个siRNA药物Onpattro。类似结构的SM-102也相继被开发，并且被用于新冠疫苗mRNA1273的处方中，优化了递送效率和药物动力学。
为丰富可电离脂质的多样性，相继开发了含亲水性基团和疏水尾部的脂质，用于体内递送mRNA分子。进一步的结构优化提高了递送效率，可用于肝靶向递送mRNA分子。但是目前的脂质仍存在细胞毒性大等缺点。因此，亟需开发出毒副作用低、药代动力学得到改善的新型可电离脂质，并测试其在医药上的用途。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种含炔基的可电离脂质化合物及其合成方法与在医药上的应用，
本发明的技术方案为：
一种含炔基的可电离脂质化合物，结构式如下通式(Ⅰ)所示：
通式(I)中，R1选自 R2选自-H、-CH3、-CH2CH3、
或/>n为0～10中的整数。
一种含炔基的可电离脂质化合物，结构式选自下式(Ⅰ-1)-(Ⅰ-6)：
一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，合成含炔基的可电离脂质化合物的化学反应式见下式(1)-(3)：
合成方法具体包括有以下步骤：
(1)、将8-溴正辛酸和9-十七醇溶于溶剂中，再加入缩合剂、催化剂和有机碱后，于30～50℃下、酯化反应3～6小时，酯化反应结束后，经萃取即得8-溴辛酸-9-十七醇酯；
(2)、将8-溴辛酸-9-十七醇酯、通式(Ⅱ)所示的化合物和无机碱加入到溶剂中后，于50～80℃下，反应3～8小时，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅲ)所示的中间物；其中，通式(Ⅱ)所示的化合物与8-溴辛酸-9-十七醇酯的摩尔配比为6～20:1；
(3)、将2-丁炔-1,4-二醇、通式(Ⅳ)所示的化合物、催化剂加入到溶剂中后，于80～100℃下、反应3～8小时，且保证反应液处于碱性条件下，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅴ)所示的中间物；
(4)、将通式(Ⅴ)所示的中间物和通式(Ⅵ)所示的化合物溶于溶剂中，再加入缩合剂、催化剂和有机碱后，于30～50℃下、酯化反应3～6小时，酯化反应结束后，经萃取即得通式(Ⅶ)所示的中间物；
(5)、将通式(Ⅲ)所示的中间物、通式(Ⅶ)所示的中间物和催化剂加入到溶剂中，于65～85℃下、反应3～5小时，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅰ)所示的产物；其中，通式(Ⅲ)所示的中间物和通式(Ⅶ)所示的中间物的摩尔比为1.1～1.5：1。
所述的步骤(1)中，溶剂选用甲苯、二氯甲烷或乙醇，缩合剂选用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，催化剂选用4-二甲氨基吡啶，有机碱选用N,N-二异丙基乙胺，缩合剂、催化剂、有机碱和9-十七醇的摩尔为1.1～1.3：0.01～0.06：1.2～1.4：1。
所述的步骤(2)中，无机碱选用碳酸钾、碳酸钠或碳酸铯，溶剂选用乙腈、乙醇、二甲基甲酰胺和甲苯中的一种或多种的混合。
所述的步骤(3)中，溶剂选自乙腈、甲醇、二氯甲烷或1,4-二氧六环，催化剂选用四丁基溴化铵，催化剂的加入量与通式(Ⅳ)所示的化合物的摩尔配比为0.01～0.05:1，碱性条件由氢氧化钠或氢氧化钾提供。
所述的步骤(4)中，溶剂选用甲苯、二氯甲烷或乙醇，缩合剂选用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，催化剂选用4-二甲氨基吡啶，有机碱选用N,N-二异丙基乙胺，缩合剂、催化剂、有机碱和通式(Ⅵ)所示的化合物的摩尔为1～1.2：0.04～0.06：1.2～1.4：1。
所述的步骤(5)中，溶剂选用1,4-二氧六环、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺，催化剂选用碘化钾，碱性条件由碳酸钾、碳酸钠或碳酸铯提供。
一种含炔基的可电离脂质化合物在医药上的应用，包括有所述的通式(Ⅰ)所示结构的立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐的应用，以及由通式(Ⅰ)所示结构组成的组合物的应用。
所述的组合物作为核酸药物的递送载体，核酸药物选自DNA、RNA、含有DNA或RNA的复合物、修饰后的DNA、修饰后的RNA以及修饰后的含有DNA或RNA的复合物中的至少一种。
本发明的优点：
本发明的可电离脂质化合物通过引入炔基，改进可电离脂质分子的结构，得到一类新型的可电离脂质化合物，具有更高的生物安全性，该脂质化合物可广泛应用于mRNA等核酸药物的高效递送，促进核酸药物的发展。
本发明可电离脂质化合物的合成方法简便，原料价格低廉易得，反应条件温和、易于实现，产物分离操作简单。
附图说明
图1是本发明实施例合成得到的含炔基的可电离脂质化合物与DLin-MC3-DMA、SM-102在转染CD19核酸至细胞后的细胞存活率对比图。
图2是本发明本发明实施例合成得到的含炔基的可电离脂质化合物与DLin-MC3-DMA、SM-102在转染CD19核酸至细胞后的免疫原性对比图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
缩略语解释：
DMAP：4-二甲氨基吡啶；
EDCI：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐；
DIEA：N，N-二异丙基乙胺；
TBAB：四丁基溴化铵
CDCl3：氖代氯仿；
1H-NMR：核磁共振氢谱；
HRMS：高分辨质谱；
DMG-PEG：磷脂-聚乙二醇；
DOPE：磷脂。
实施例1
式(Ⅰ-1)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-1)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
(1)、8-溴辛酸-9-十七醇酯的合成：
将市售的8-溴辛酸(4.79g，21.45mmol)、9-十七醇(5g，19.5mmol)和50mL的甲苯加入反应瓶中，8-溴正辛酸和9-十七醇溶于甲苯后，再加入EDCI(4.31g，21.45mmol)、DMAP(0.012g，0.1mmol)和DIEA(3.27g，25.35mmol)，接着将反应瓶置于35℃油浴中回流反应3-4h，随时通过薄层层析板在碘缸中熏染观察原料点和产物点变化来监测反应情况，反应结束后，减压浓缩反应液，用乙酸乙酯和水萃取后，去除水溶性杂质，得到8-溴辛酸-9-十七醇酯(7.29g，透明油状液体，产率81％)；
(2)、6-溴己酸-十一醇酯(中间体Ⅲ-1)的合成：
向盛有8-溴辛酸-9-十七醇酯(7.28g，15.78mmol)的反应瓶中加入适量乙腈和碳酸钾(10.89g,78.9mmol)，然后在70℃的反应过程中，将乙醇胺(Ⅱ-1)(7.7g，126.24mmol)分3次加入，搅拌反应4h，随时通过薄层层析板在碘缸中熏染观察原料点和产物点变化来监测反应情况，反应结束后，旋干反应液，用乙酸乙酯和水萃取，直至水相PH约为7，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(乙酸乙酯:甲醇＝20:1)得到6-溴己酸-十一醇酯(4.3g，浅黄色色油状，产率62％)，即中间体Ⅲ-1。
(3)、4-(辛基氧基)丁-2-炔-1-醇(中间体Ⅴ-1)的合成：
取市售原料2-丁炔-1,4-二醇(4.92g，57.2mmol)和适量1,4-二氧六环加入反应瓶中，再向反应瓶中添加TBAB(0.18g，0.28mmol)和氢氧化钠(0.49g，12.25mmol)，最后分三次加入市售的1-溴代庚烷(Ⅳ-1)(2g，11.18mmol)后，于100℃油浴下反应5h，反应结束后，先用正己烷和水萃取(100mL×3)后，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到4-(辛基氧基)丁-2-炔-1-醇(3.4g，浅黄色油状，产率30％)，即中间体Ⅴ-1；
(4)、4-(辛基氧基)丁-2-烯-1-基6-溴己酸酯-酮(中间体Ⅶ-1)的合成
市售原料6-溴己酸(Ⅵ-1)(3.68g，18.9mmol)、制得的中间体Ⅴ-1(3.4g，17.1mmol)和50mL的甲苯加入反应瓶中，6-溴己酸和中间体Ⅴ-1溶于甲苯中后，再加入EDCI(3.80g，18.9mmol)、DMAP(0.108g，0.885mmol)和DIEA(2.87g，22.23mmol)，接着将反应瓶置于35℃油浴中反应3-4h，随时通过薄层层析板在碘缸中熏染观察原料点和产物点变化来监测反应情况，反应结束后，减压浓缩反应液，配合酸水-碱化萃取法去除水溶性杂质,再柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，得到4-(辛基氧基)丁-2-烯-1-基6-溴己酸酯-酮(1.92g，透明油状液体，产率30％)，即中间体Ⅶ-1；
(5)、庚烷-9-基8-((6-((4-(庚氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-6-氧代己基)(2-羟乙基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-1)的合成：
取制得的中间体Ⅲ-1(2.93g，6.65mmol)和制得的中间体Ⅶ-1(1.92g，5.12mmol)和乙腈加入反应瓶中，中间体Ⅲ-1和中间体Ⅶ-1溶于乙腈中后，再向反应瓶中添加碳酸钾(3.53g，25.6mmol)和碘化钾(42.5g，0.256mmol)，于70℃油浴反应4h，反应结束后，先用乙酸乙酯和水萃取(100mL×3)后，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，再柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得到含炔基的可电离脂质化合物(Ⅰ-1)(0.92g，透明油状，产率25％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.85(p,J＝12.6,7.0,5.5Hz,1H),4.71(t,J＝1.9Hz,2H),4.15(t,J＝1.9Hz,2H),3.51(t,J＝5.4Hz,2H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),2.56(t,J＝5.4Hz,2H),2.46–2.40(m,4H),2.40–2.29(m,2H),2.34(t,J＝7.5Hz,2H),2.27(t,J＝7.5Hz,7H),1.68–1.53(m,7H),1.52–1.21(m,47H),0.90–0.80(m,9H).；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.722.6295。
实施例2
式(Ⅰ-2)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-2)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
步骤(1)同实施例1，将实施例1步骤(2)中的乙醇胺(Ⅱ-1)替换成3-氨基-1-丙醇(Ⅱ-2)(9.46g，126.24mmol)，制得中间体Ⅲ-2，步骤(3)和(4)同实施例的步骤(3)和(4)，制得中间体Ⅶ-1，将实施例1中步骤(5)中的中间体Ⅲ-1替换成中间体Ⅲ-2，制得庚烷-9-基8-((6-
((4-(庚氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-6-氧代己基)(3-羟丙基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-2)(1g，透明油状，产率28％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ
4.85(p,1H),4.72(t,J＝1.8Hz,2H),4.16(t,J＝1.8Hz,2H),3.79(t,2H),3.48(t,J＝6.7Hz,2H),2.69(s,1H),2.46(s,3H),2.35(t,J＝7.5Hz,2H),2.27(t,J＝7.5Hz,2H),1.74–1.54(m,11H),1.49–1.20(m,47H),0.90–0.85(m,9H).；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.736.6437。
实施例3
式(Ⅰ-3)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-3)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
步骤(1)同实施例1，将实施例1步骤(2)中的乙醇胺(Ⅱ-1)替换成4-氨基-1-丁醇(中间体Ⅱ-3)(11.25g，126.24mmol)，制得中间体Ⅲ-3，步骤(3)和(4)同实施例的步骤(3)和(4)，制得中间体Ⅶ-1，将实施例1中步骤(5)中的中间体Ⅲ-1替换成中间体Ⅲ-3，制得庚烷-9-基8-((6-((4-(庚氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-6-氧代己基)(4-羟基丁基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-3)(0.97g，透明油状，产率33％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.84(p,1H),4.70(t,J＝1.9Hz,2H),4.15(t,J＝1.9Hz,2H),3.52(t,J＝4.7Hz,2H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),2.45–2.37(m,6H),2.33(t,J＝7.5Hz,2H),2.26(t,J＝7.6Hz,2H),1.67–1.51(m,11H),1.45–1.19(m,47H),0.88–0.84(m,9H)；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.750.6587。
实施例4
式(Ⅰ-4)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-4)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
步骤(1)和(2)同实施例2的步骤(1)和(2)，制得中间体Ⅲ-2，步骤(3)同实施例1的步骤(3)，制得中间体Ⅴ-1，将实施例1步骤(4)中的6-溴己酸(Ⅵ-1)替换为5-溴戊酸(Ⅵ-4)(1.91g,18.9mmol)，制得中间体Ⅶ-4，将实施例1步骤(5)中的中间体Ⅶ-1替换成中间体Ⅶ-4、中间体Ⅲ-1替换成Ⅲ-2，制得庚烷-9-基8-((5-((4-(庚氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-5-氧代戊基)(3-羟丙基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-4)(0.77g，透明油状，产率37％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.85(p,1H),4.71(t,2H),4.15(t,J＝1.9Hz,2H),3.78(t,J＝5.1Hz,2H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),2.63(t,J＝5.5Hz,2H),2.46–2.39(m,4H),2.37(t,J＝7.4Hz,2H),2.26(t,J＝7.5Hz,2H),1.69–1.52(m,10H),1.47–1.20(m,44H),0.89–0.84(m,9H)；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.722.6280。
实施例5
式(Ⅰ-5)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-5)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
步骤(1)和(2)同实施例2的步骤(1)和(2)，制得中间体Ⅲ-2，将实施例1步骤(3)中的1-溴代庚烷(Ⅳ-1)替换成8-溴代辛烷(Ⅳ-5)(2.16g，11.18mmol)，制得中间体Ⅴ-5，将实施例1步骤(4)中的中间体Ⅴ-1替换成Ⅴ-5，制得中间体Ⅶ-5，将实施例1步骤(5)中的中间体Ⅶ-1替换成中间体Ⅶ-5、中间体Ⅲ-1替换成Ⅲ-2，制得庚烷-9-基8-(3-羟丙基)(6-((4-(辛基氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-6-氧己基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-5)(0.75g，透明油状，产率36％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.85(p,J＝6.2Hz,1H),4.71(t,J＝1.9Hz,2H),4.15(t,J＝1.9Hz,2H),3.78(t,2H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),2.63(t,J＝5.5Hz,2H),2.43–2.37(m,4H),2.34(t,J＝7.5Hz,2H),2.27(t,J＝7.5Hz,2H),1.70–1.53(m,9H),1.46–1.20(m,49H),0.89–0.84(m,9H)；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.750.6591。
实施例6
式(Ⅰ-6)可电离脂质化合物的化学反应式为：
式(Ⅰ-6)可电离脂质化合物的合成方法，具体包括有以下步骤：
步骤(1)和(2)同实施例3的步骤(1)和(2)，制得中间体Ⅲ-3，步骤(3)和(4)同实施例5的步骤(3)和(4)制得中间体Ⅶ-5，将实施例1步骤(5)中的中间体Ⅶ-1替换成中间体Ⅶ-5、中间体Ⅲ-1替换成Ⅲ-3，制得庚烷-9-基8-((4-羟基丁基)(6-((4-(辛基氧基)丁-2-炔-1-基)氧基)-6-氧己基)氨基)辛酸酯(Ⅰ-6)(0.81g，透明油状，产率35％)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ4.86(p,1H),4.71(t,J＝1.7Hz,2H),4.15(t,J＝1.7Hz,2H),3.78(t,2H),3.47(t,J＝6.7Hz,2H),2.63(t,2H),2.44–2.38(m,4H),2.34(t,J＝7.5Hz,4H),2.27(t,J＝7.5Hz,2H),1.68–1.55(m,9H),1.49–1.23(m,49H),0.89–0.85(m,9H).；HRMS(ESI):m/z,(M+H)+,found.764.6758。
生物学评价测试
组合物脂质纳米颗粒的制备：
将实施例1-6制备的可电离脂质化合物与胆固醇、DMG-PEG、DOPE按照33:44:1:22的摩尔比溶于乙醇中，制备脂质乙醇溶液(其中可电离脂质的浓度为10mg/mL)。使用柠檬酸盐或醋酸钠缓冲液(pH＝3～5)将CD19核酸mRNA稀释至0.2mg/mL。利用NanoAssemblr微流控设备将脂质乙醇溶液和mRNA溶液以体积比为1:5到1:1的比例快速混合制备得到含有脂质纳米颗粒的溶液。所获溶液通过超滤和透析的手段纯化除去乙醇后，得到脂质纳米颗粒。
脂质纳米颗粒安全性评估：
本实验选用CD19 mRNA作为核酸药物mRNA，在RAW-ISG细胞上检测，具体操作方法如下：取对数生长期的RAW-ISG细胞按照10*104/孔的密度接种于装有DMEM培养基24孔板上并在细胞培养箱中培养过夜，37℃培养24小时后采用流式细胞仪检测CD19阳性细胞比例，合成的脂质纳米粒能够转染表达CD19的mRNA至RAW-ISG细胞。同时，24小时后对于平行的脂质纳米颗粒处理的细胞组应用CCK 8试剂进行细胞毒性的测试。试验中以仅加入PBS的细胞组为阴性对照。具体步骤如下：在细胞中加入CCK 8溶液后，于37℃细胞培养箱中静置4小时，于多功能酶标仪在吸收光波段为450nm的条件下读取吸光值。将经过纳米颗粒处理过的细胞读取吸光值与阴性对照的吸光值的比值作为细胞存活率的表征参数。
从图1和图2可知，化合物Ⅰ-6较SM-102有更好的细胞存活率和更低的免疫原性；化合物Ⅰ-6较MC3有更高的细胞存活率。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种含炔基的可电离脂质化合物，其特征在于：结构式如下通式(Ⅰ)所示：
通式(I)中，R1选自 R2选自-H、-CH3、-CH2CH3、-(CH2)2CH3、-(CH2)3CH3、-(CH2)4CH3、-(CH2)5CH3、-(CH2)6CH3、-(CH2)7CH3、-(CH2)8CH3或-(CH2)9CH3；n为0～10中的整数。
2.根据权利要求1所述的一种含炔基的可电离脂质化合物，其特征在于：结构式选自下式(Ⅰ-1)-(Ⅰ-6)：
3.根据权利要求1所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方
法，其特征在于：合成含炔基的可电离脂质化合物的化学反应式见下式
合成方法具体包括有以下步骤：
(1)、将8-溴辛酸和9-十七醇溶于溶剂中，再加入缩合剂、催化剂和有机碱后，于30～50℃下、酯化反应3～6小时，酯化反应结束后，经萃取即得8-溴辛酸-9-十七醇酯；
(2)、将8-溴辛酸-9-十七醇酯、通式(Ⅱ)所示的化合物和无机碱加入到溶剂中后，于50～80℃下，反应3～8小时，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅲ)所示的中间物；其中，通式(Ⅱ)所示的化合物与8-溴辛酸-9-十七醇酯的摩尔配比为6～20:1；
(3)、将2-丁炔-1,4-二醇、通式(Ⅳ)所示的化合物、催化剂加入到溶剂中后，于80～100℃下、反应3～8小时，且保证反应液处于碱性条件下，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅴ)所示的中间物；
(4)、将通式(Ⅴ)所示的中间物和通式(Ⅵ)所示的化合物溶于溶剂中，再加入缩合剂、催化剂和有机碱后，于30～50℃下、酯化反应3～6小时，酯化反应结束后，经萃取即得通式(Ⅶ)所示的中间物；
(5)、将通式(Ⅲ)所示的中间物、通式(Ⅶ)所示的中间物和催化剂加入到溶剂中，于65～85℃下、反应3～5小时，反应结束后，经萃取和干燥得通式(Ⅰ)所示的产物；其中，通式(Ⅲ)所示的中间物和通式(Ⅶ)所示的中间物的摩尔比为1.1～1.5：1。
4.根据权利要求3所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，其特征在于：所述的步骤(1)中，溶剂选用甲苯、二氯甲烷或乙醇，缩合剂选用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，催化剂选用4-二甲氨基吡啶，有机碱选用N,N-二异丙基乙胺，缩合剂、催化剂、有机碱和9-十七醇的摩尔为1.1～1.3：0.01～0.06：1.2～1.4：1。
5.根据权利要求3所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，其特征在于：所述的步骤(2)中，无机碱选用碳酸钾、碳酸钠或碳酸铯，溶剂选用乙腈、乙醇、二甲基甲酰胺和甲苯中的一种或多种的混合。
6.根据权利要求3所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，其特征在于：所述的步骤(3)中，溶剂选自乙腈、甲醇、二氯甲烷或1,4-二氧六环，催化剂选用四丁基溴化铵，催化剂的加入量与通式(Ⅳ)所示的化合物的摩尔配比为0.01～0.05:1，碱性条件由氢氧化钠或氢氧化钾提供。
7.根据权利要求3所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，其特征在于：所述的步骤(4)中，溶剂选用甲苯、二氯甲烷或乙醇，缩合剂选用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，催化剂选用4-二甲氨基吡啶，有机碱选用N,N-二异丙基乙胺，缩合剂、催化剂、有机碱和通式(Ⅵ)所示的化合物的摩尔为1～1.2：0.04～0.06：1.2～1.4：1。
8.根据权利要求3所述的一种含炔基的可电离脂质化合物的合成方法，其特征在于：所述的步骤(5)中，溶剂选用1,4-二氧六环、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺，催化剂选用碘化钾，碱性条件由碳酸钾、碳酸钠或碳酸铯提供。
9.根据权利要求1所述的一种含炔基的可电离脂质化合物在医药上的应用，其特征在于：包括有所述的通式(Ⅰ)所示结构的立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐的应用，以及由通式(Ⅰ)所示结构组成的组合物的应用。
10.根据权利要求9所述的一种含炔基的可电离脂质化合物在医药上的应用，其特征在于：所述的组合物作为核酸药物的递送载体，核酸药物选自DNA、RNA、含有DNA或RNA的复合物、修饰后的DNA、修饰后的RNA以及修饰后的含有DNA或RNA的复合物中的至少一种。
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