CN118063635A - 一种从白云参中提取活性多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从白云参中提取活性多糖的方法，属于中药生物活性成分的提取方法技术领域，本发明的方法包括：粉碎、脱脂、多糖提取、浓缩、除蛋白、脱色、固液分离、沉淀、离心和干燥等步骤。本发明方法易于操作，将干白云参粉碎成特定尺寸的颗粒后采用特定试剂对其进行脱脂、多糖提取和除蛋白，通过调整反应温度和时间，减少了对多糖的破坏；采用超声波辅助，提高了提取效率，设备投入少，工艺路线简单，生产成本低，能获得产率高的白云参多糖，适合工业化生产。本发明方法提高了白云参的综合利用率，节约资源，为白云参的开发再利用提供了技术支撑。
Description
技术领域
本发明涉及中药生物活性成分的提取方法技术领域，具体涉及从白云参中提取活性多糖的方法。
背景技术
白云参为桔梗科金钱豹属植物大花金钱豹，主要产在云南省红河州、文山州等地区。性甘，平，补中益气、润肺生津。主治病后体虚、肺结核、多汗、虚咳、神经衰弱、食欲不振、久泻、产后乳汁不下。白云参与制草乌、三七、断节参是虎力散胶囊主要成份，虎力散胶囊为云南云河药业股份有限公司独家中药保护品种，是云南省列入重点发展“云药”名方名药品种，并且是云南伤科药物中独具特色的代表性品种。
我国多糖资源丰富，尤其是来源于中草药的植物多糖，应用历史悠久，具有巨大的开发前景。近年来，随着生活水平的不断提高，人们的健康保健意识在逐渐增强，多糖作为保健食品的主要成分己悄然兴起。现阶段，人们对白云参的研究不断深入，已从该属植物中分离得到党参苷、丁香苷、腺苷、黄酮等，多糖是白云参的有效成分之一，具有降血脂、降糖、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫功能等作用。
目前关于白云参多糖提取及分离方法报道的很少。而将现有的多糖提取及分离方法用于白云参不仅工艺路线长，十分费时，所需溶剂量也较大，对多糖的破坏较大。因此，如何提供一种工艺路线简单又可减少对多糖的破坏，还能从白云参中提取获得高产率的活性多糖的方法，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
发明内容
针对上述问题，本发明提供了一种工艺路线简单，可减少对多糖的破坏，能从白云参中提取获得高产率的活性多糖的方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种从白云参中提取活性多糖的方法，包括以下步骤：
(1)粉碎：取干燥的白云参，粉碎成0.1～0.15mm颗粒备用；
(2)脱脂：按每千克白云参用5～7升石油醚的比例，将白云参颗粒放入石油醚中搅拌均匀，然后以1h/次的频率回流2次，将白云参颗粒脱脂；
(3)多糖提取：脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，按白云参颗粒重量14～16倍质量加纯化水，以30min/次的频率超声提取3次，过滤，合并3次滤液；
(4)浓缩：将步骤(3)的滤液浓缩至ρ＝1.02-1.10g/cm3，得到浓缩液；
(5)除蛋白：以浓缩液：脱蛋白液的体积比为3：1的量将脱蛋白液加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复3～6次，即得到多糖溶液；
(6)脱色：向多糖溶液中按质量比加入活性炭脱色2次；
(7)固液分离：将脱色后的多糖溶液进行固液分离；
(8)沉淀：向步骤(7)固液分离得到的滤液中加入乙醇，搅拌混匀后，冷藏22～26h，形成沉淀混合液；
(9)离心：将沉淀混合液进行离心处理得到沉淀物；
(10)干燥：将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖。
进一步地，步骤(2)所述回流的温度为60-70℃。
进一步地，步骤(3)所述超声提取的条件为温度40～60℃，频率30-35kHz。
进一步地，步骤(4)所述浓缩是将滤液在50～70℃下减压浓缩。
进一步地，步骤(5)所述所述脱蛋白液为二氯甲烷∶正丁醇的体积比为4∶1的混合物。
进一步地，步骤(6)所述的质量比为活性炭占多糖溶液质量的0.1-0.5％。
进一步地，步骤(8)所述乙醇的加入量为滤液体积的4～6倍。
进一步地，步骤(8)所述冷藏的冷藏温度为0-5℃。
进一步地，步骤(9)所述离心的条件为转速3000rpm，时间10min。
进一步地，步骤(10)所述真空干燥的干燥温度为50-80℃。
经由上述的技术方案可知，本发明方法易于操作，将干白云参粉碎成特定尺寸的颗粒后采用特定试剂对其进行脱脂、多糖提取和除蛋白，通过调整反应温度和时间，减少了对多糖的破坏；采用超声波辅助，提高了提取效率，设备投入少，工艺路线简单，生产成本低，能获得产率高的白云参多糖，适合工业化生产。本发明方法提高了白云参的综合利用率，节约资源，为白云参的开发再利用提供了技术支撑。
具体实施方式
下面结合实施例，进一步阐述本发明的内容。实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于解释本发明，并不限制本发明权利要求书的保护范围。
本发明实施例所涉及的试剂均为市售渠道采购，未提及的方法为常规实验方法，在此不再一一赘述。
实施例1
一种从白云参中提取活性多糖的方法，包括以下步骤：
(1)取30kg干燥白云参粉碎成粒径0.1mm的颗粒放置在提取器中；
(2)加入180L石油醚，在60℃温度下回流脱脂2次，每次1h；
(3)脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，之后加入450kg纯化水，在40℃温度条件下采用频率为35kHz的超声波提取3次，每次30min，过滤，合并3次滤液；
(4)将滤液在50℃温度下减压浓缩至ρ＝1.02g/cm3；
(5)将浓缩液体积1/3的脱蛋白液(二氯甲烷∶正丁醇的质量比为4∶1)加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复3次，即得多糖溶液45kg。
(6)向多糖溶液中加入45g活性炭脱色2次；
(7)将脱色后的多糖溶液进行抽滤分离得到滤液；
(8)向滤液中加入225kg质量浓度95％的乙醇，充分搅拌混匀后，在3℃条件下冷藏24h，形成沉淀混合液；
(9)将沉淀混合液在转速3000rpm条件下离心10min得到沉淀物；
(10)在60℃的温度条件下将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖2.7kg。
实施例2
一种从白云参中提取活性多糖的方法，包括以下步骤：
(1)取200kg干燥白云参粉碎成粒径0.15mm的颗粒放置在提取器中；
(2)加入1400L石油醚，在70℃温度下回流脱脂2次，每次1h；
(3)脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，之后加入2800kg纯化水，在60℃温度条件下采用频率为30kHz的超声波提取3次，每次30min，过滤，合并3次滤液；
(4)将滤液在70℃温度下减压浓缩至ρ＝1.05g/cm3；
(5)将浓缩液体积1/3的脱蛋白液(二氯甲烷∶正丁醇的质量比为4∶1)加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复4次，即得多糖溶液300kg；
(6)向多糖溶液中加入1500g活性炭脱色2次；
(7)将脱色后的多糖溶液进行抽滤分离得到滤液；
(8)向滤液中加入1800kg质量浓度95％的乙醇，充分搅拌混匀后，在5℃条件下冷藏22h，形成沉淀混合液；
(9)将沉淀混合液在转速3000rpm条件下离心10min得到沉淀物；
(10)在80℃的温度条件下将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖18.9kg。
实施例3
一种从白云参中提取活性多糖的方法，包括以下步骤：
(1)取500kg白云参粉碎成粒径0.12mm的颗粒放置在提取器中；
(2)加入2500L石油醚，在64℃温度下回流脱脂2次，每次1h；
(3)脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，之后加入8000kg纯化水，在55℃温度条件下采用频率为32kHz的超声波提取3次，每次30min，过滤，合并3次滤液；
(4)将滤液在50℃温度下减压浓缩至ρ＝1.10g/cm3；
(5)将浓缩液体积1/3的脱蛋白液(二氯甲烷∶正丁醇的质量比为4∶1)加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复6次，即得多糖溶液750kg；
(6)向多糖溶液中加入1500g活性炭脱色2次；
(7)将脱色后的多糖溶液进行抽滤分离得到滤液；
(8)向滤液中加入3000kg质量浓度95％的乙醇，充分搅拌混匀后，在0℃条件下冷藏22h，形成沉淀混合液；
(9)将沉淀混合液在转速3000rpm条件下离心10min得到沉淀物；
(10)在50℃的温度条件下将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖45.5kg。
实施例4
一种从白云参中提取活性多糖的方法，包括以下步骤：
(1)取300kg白云参粉碎成粒径0.14mm的颗粒放置在提取器中；
(2)加入1800L石油醚，在68℃温度下回流脱脂2次，每次1h；
(3)脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，之后加入4500kg纯化水，在55℃温度条件下采用频率为34kHz的超声波提取3次，每次30min，过滤，合并3次滤液；
(4)将滤液在60℃温度下减压浓缩至ρ＝1.02g/cm3；
(5)将浓缩液体积1/3的脱蛋白液(二氯甲烷∶正丁醇的质量比为4∶1)加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复3次，即得多糖溶液460kg；
(6)向多糖溶液中加入460g活性炭脱色2次；
(7)将脱色后的多糖溶液进行抽滤分离得到滤液；
(8)向滤液中加入2300kg质量浓度95％的乙醇，充分搅拌混匀后，在3℃条件下冷藏24h，形成沉淀混合液；
(9)将沉淀混合液在转速3000rpm条件下离心10min得到沉淀物；
(10)在60℃的温度条件下将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖26.5kg。
采用硫酸-蒽酮法测定白云参多糖含量，以葡聚糖为对照品，测定波长为589nm,实施例1-4检测结果如表1所示。
表1实施例1-4白云参多糖的提取情况统计表
由表1可知，采用本发明的方法从白云参中提取活性多糖，产率可达8.8％-9.5％，白云参多糖纯度为85.3％-87.1％。本发明工艺路线简单，提高了白云参的综合利用率，为白云参的开发再利用提供了技术支撑。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)粉碎：取干燥的白云参粉碎成0.1～0.15mm颗粒备用；
(2)脱脂：按每千克白云参用5～7升石油醚的比例，将白云参颗粒放入石油醚中搅拌均匀，然后以1h/次的频率回流2次，将白云参颗粒脱脂；
(3)多糖提取：脱脂后回收石油醚，将脱脂后的白云参中的石油醚溶剂烘干，按白云参颗粒重量14～16倍质量加纯化水，以30min/次的频率超声提取3次，过滤，合并3次滤液；
(4)浓缩：将步骤(3)的滤液浓缩至ρ＝1.02-1.10g/cm3，得到浓缩液；
(5)除蛋白：以浓缩液：脱蛋白液的体积比为3：1的量将脱蛋白液加入到浓缩液中，充分震荡1h，离心取上清液，重复3～6次，即得到多糖溶液；
(6)脱色：向多糖溶液中按质量比加入活性炭脱色2次；
(7)固液分离：将脱色后的多糖溶液进行固液分离；
(8)沉淀：向步骤(7)固液分离得到的滤液中加入乙醇，搅拌混匀后，冷藏22～26h，形成沉淀混合液；
(9)离心：将沉淀混合液进行离心处理得到沉淀物；
(10)干燥：将沉淀物进行真空干燥，即得白云参多糖。
2.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(2)所述回流的温度为60-70℃。
3.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(3)所述超声提取的条件为温度40～60℃，频率30-35kHz。
4.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(4)所述浓缩是将滤液在50～70℃下减压浓缩。
5.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(5)所述脱蛋白液为二氯甲烷：正丁醇体积比为4：1的混合物。
6.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(6)所述的质量比为活性炭占多糖溶液质量的0.1-0.5％。
7.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(8)所述乙醇的加入量为滤液体积的4～6倍。
8.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(8)所述冷藏的冷藏温度为0-5℃。
9.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(9)所述离心的条件为转速3000rpm，时间10min。
10.根据权利要求1所述的一种从白云参中提取活性多糖的方法，其特征在于，步骤(10)所述真空干燥的干燥温度为50-80℃。
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