CN118048269A - 一株铜绿假单胞菌、造模试剂和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株铜绿假单胞菌、造模试剂和应用。本发明提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，保藏编号为GDMCC NO:64358。实施例的结果表明：本发明的铜绿假单胞菌FKC2造模时小鼠存活率高、慢性感染模型成功率高、铜绿假单胞菌FKC2可长期存在小鼠体内，有利于慢性感染的形成。本发明的铜绿假单胞菌FKC2可应用于科学研究，提供造模成功率高的菌株，可以解决慢性铜绿假单胞菌定植的科学难题，有助于推动该领域的科学研究与发展，为病人、社会创造可观的社会和经济价值。

Description

一株铜绿假单胞菌、造模试剂和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株铜绿假单胞菌、造模试剂和应用。
背景技术
铜绿假单胞菌是目前最为常见的院内获得性感染病原体之一，可引起全身各个系统的感染。该菌在支气管扩张症、慢性阻塞性肺疾病等慢性气道疾病的患者体内容易形成长期定植与感染，严重危害广大患者的生命健康，给社会造成极大的经济负担，是目前亟需解决的一大临床难题。基于此，国内外研究人员正大力开展基础与临床研究奋力攻克这一核心问题。针对探究深层机制的基础研究，动物模型的应用是极为重要的研究手段，因此，动物慢性模型能否构建成功是研究能否顺利进行的关键。
现阶段国际上针对铜绿假单胞菌慢性感染动物模型的构建流程较为统一，多采用琼脂包被铜绿假单胞菌进行小鼠气道灌注的方法构建，但目前暂无统一的标准菌株可用于构建慢性感染动物模型。国外研究选用的菌株较为集中，绝大多数应用于慢性感染模型的一株菌株RP73来源于汉诺威医学院囊性纤维化(CF)诊所一位病人的气道，其造模成功率(约70～80％)相较于国际上公认的模式菌株PAO1(约20％)来说更为理想，因此得到了广泛应用。而国内目前对于该模型的研究尚未完全成熟，仅个别研究者采用模式菌株PAO1构建成功，总体来说，菌株的选择较为参差。
国外的研究表明，相比于PAO1等急性菌株，CF患者气道分离的临床菌株如RP73等的造模成功率更高，但国内难以取得该菌株进行应用。因此，造模菌株的选择对于研究的推动、实验资源的利用都存在一定的局限性，亟需提供效果优的具有自主知识产权的铜绿假单胞菌慢性感染造模菌株。
发明内容
本发明的目的提供一株铜绿假单胞菌，该菌株的慢性感染模型成功率高。
为了解决以上技术问题，本发明提出了如下技术方案：
本发明提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，保藏编号为GDMCC NO:64358。
本发明提供了一种动物慢性肺部感染模型的造模试剂，包括上述技术方案所述铜绿假单胞菌FKC2。
优选的，所述铜绿假单胞菌FKC2制备成铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠后应用。
优选的，所述铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠的制备方法包括：将所述铜绿假单胞菌FKC2菌体与PBS缓冲液混合后得到重悬液；将所述重悬液、培养基和矿物油混合得到混合物；将所述混合物冰孵后离心得到含有矿物油琼脂珠；将所述含有矿物油琼脂珠利用PBS溶液离心得到洗脱后的琼脂珠；将所述洗脱后的琼脂珠与PBS缓冲液混合后过滤得到直径为100～300μm的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。
优选的，所述铜绿假单胞菌FKC2菌体的制备方法包括：所述铜绿假单胞菌FKC2进行第一培养得到菌液；将所述菌液进行第二培养得到铜绿假单胞菌FKC2菌体。
本发明提供了上述技术方案所述铜绿假单胞菌FKC2或上述技术方案所述造模试剂在构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型中的应用。
优选的，所述慢性肺部感染包括慢性气道疾病；所述慢性气道疾病包括支气管扩张症。
优选的，所述构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型时铜绿假单胞菌FKC2的注射有效活菌数为≥3×106个。
本发明提供了一种构建铜绿假单胞菌慢性感染疾病动物模型的方法，包括以下步骤：将上述技术方案所述的铜绿假单胞菌FKC2或上述技术方案所述造模试剂注射在动物体内，进行造模。
优选的，所述动物包括小鼠。
本发明的有益效果：本发明提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，保藏编号为GDMCC NO:64358。
本发明提供的铜绿假单胞菌FKC2从长期感染铜绿假单胞菌的临床患者气道中获得，其本身具有气道慢性定植特性，适用于气道慢性感染模型的构建。实施例的结果表明：本发明的铜绿假单胞菌FKC2造模时小鼠存活率高、慢性感染模型成功率高、铜绿假单胞菌FKC2可长期存在小鼠体内，有利于慢性感染的形成。本发明的铜绿假单胞菌FKC2注射在小鼠体内进行造模时，小鼠存活率为90％；现有技术中的铜绿假单胞菌PAO1注射在小鼠体内进行造模时，小鼠存活率为50％；铜绿假单胞菌FKC2慢性感染造模成功率为70％；铜绿假单胞菌PAO1的慢性感染造模成功率为35％。铜绿假单胞菌FKC2造模组的小鼠在第14d的肺部细菌清除率明显低于铜绿假单胞菌PAO1造模组的小鼠，提示铜绿假单胞菌可长期存在于小鼠体内，有利于慢性感染的形成。本发明的铜绿假单胞菌FKC2可应用于科学研究，为解决慢性铜绿假单胞菌定植的科学难题提供可靠的菌株选，有助于推动该领域的科学研究与发展，为病人、社会创造可观的社会和经济价值。
生物保藏说明
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，于2024年02月01日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO:64358，保藏单位地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为琼脂包被后的FKC2菌株beads；
图2为琼脂包被后的PAO1菌株beads；
图3为两组菌株构建慢性感染模型的小鼠存活率比较图；
图4为两组菌株构建慢性感染模型的成功率比较图；
图5为两组菌株构建慢性感染模型的细菌清除率比较图。
具体实施方式
本发明提供了一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，保藏编号为GDMCC NO:64358。
本发明提供的铜绿假单胞菌FKC2从长期感染铜绿假单胞菌的临床患者气道中获得，其本身具有气道慢性定植特性，适用于气道慢性感染模型的构建。
本发明提供了一种动物慢性肺部感染模型的造模试剂，包括上述技术方案所述铜绿假单胞菌FKC2。
在本发明中，所述铜绿假单胞菌FKC2优选制备成铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠后应用。本发明所述铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠的制备方法优选包括：将所述铜绿假单胞菌FKC2菌体与PBS缓冲液混合后得到重悬液；将所述重悬液、培养基和矿物油混合得到混合物；将所述混合物冰上孵育后离心得到含有矿物油琼脂珠；将所述含有矿物油琼脂珠利用PBS溶液离心得到洗脱后的琼脂珠；将所述洗脱后的琼脂珠与PBS缓冲液混合后过滤得到直径为100～300μm的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。
本发明所述铜绿假单胞菌FKC2菌体的制备方法优选包括：将所述铜绿假单胞菌FKC2进行第一培养得到菌液；将所述菌液进行第二培养得到铜绿假单胞菌FKC2菌体；更优选为将所述铜绿假单胞菌FKC2单菌落进行第一培养得到菌液；将所述菌液进行第二培养得到铜绿假单胞菌FKC2菌体。
本发明优选将所述铜绿假单胞菌FKC2单菌落进行第一培养得到菌液。本发明所述第一培养的温度优选为35～40℃，更优选为37℃。本发明所述第一培养的时间优选为16～18h，更优选为17h。本发明所述第一培养的转速优选为200～240rpm，进一步优选为210～230rpm，更优选为220rpm。本发明所述第一培养应用的培养基优选包括LB液体培养基。本发明所述LB液体培养基优选以双蒸水为溶剂，每300mL双蒸水中包括以下浓度组分：3g胰蛋白胨、1.5g酵母提取物和1.5g氯化钠。本发明所述LB液体培养基优选高压灭菌后应用。
得到菌液后，本发明将所述菌液进行第二培养得到菌体。本发明所述第二培养的温度优选为35～40℃，更优选为37℃。本发明所述第二培养的转速优选为200～240rpm，进一步优选为210～230rpm，更优选为220rpm。本发明所述第二培养的时间优选为2～4h，更优选为3h。本发明所述菌液与第二培养的总体积的比值优选为1:20；所述第二培养的总体积为菌液的体积与培养基的体积和。本发明所述第二培养应用的培养基优选为LB液体培养基。本发明优选对第二培养所得的菌液进行离心得到菌体。本发明所述离心的温度优选为4℃，所述离心力优选为2700g，所述离心的时间优选为15min。
得到菌体，本发明优选将所述菌体与PBS缓冲液混合后得到重悬液；将所述重悬液、培养基和矿物油混合得到混合物。本发明所述PBS缓冲液优选灭菌后应用；在本发明实施例中，所述PBS缓冲液的体积优选为1mL。本发明所述重悬液、培养基和矿物油的体积比优选为1:9:150；所述混合优选包括第一混合和第二混合，先将重悬液和培养基的混合称之为第一混合，得到第一混合物，再将第一混合物与矿物油进行第二混合，得到混合物；所述培养基优选先预热至50℃之后再进行第一混合；本发明培养基优选包括LB固体培养基，所述LB固体培养基优选以双蒸水为溶剂，每300mL双蒸水中包括以下浓度组分：4.5g琼脂粉、3g胰蛋白胨、1.5g酵母提取物和1.5g氯化钠。本发明所述LB固体培养基优选高压灭菌后应用。本发明所述固体LB培养基优选加热融化后应用或者灭菌后温度降至45～55℃时应用。本发明对所述第一混合的温度和时间没有特殊限定，采用常规的方法即可。本发明所述第一混合应当尽快，以防止固体培养基凝固。所述矿物油优选先预热至50℃之后再进行第二混合，得到混合物；
所述矿物油的作用是包被含有细菌的固体培养基，形成琼脂珠子以达到细菌缓慢释放的作用。本发明所述固体培养基中含有琼脂，因此，可以形成琼脂珠。
得到第一混合物，本发明优选再将第一混合物与矿物油进行第二混合，得到混合物。本发明所述第二混合优选包括依次进行第一阶段和第二阶段；所述第一阶段优选在温室下快速搅拌5min；所述室温优选为25℃，所述快速搅拌在搅拌过程中出现涡流即可。在本发明的实施例中，所述快速搅拌的转速优选为转速1800rpm；本发明所述快速搅拌的转速的设置有助于形成更加细密的琼脂珠；所述第二阶段在4℃下低速搅拌35min，所述低速搅拌优选为越慢越好，搅拌不停即可；本发明所述第二阶段的低速搅拌优选在冰箱中完成。
得到混合物，本发明优选将所述混合物冰上孵育后离心得到含有矿物油琼脂珠。本发明所述冰上孵育的温度优选为4℃，所述冰上孵育的时间优选为20min，所述冰上孵育的作用为促进琼脂珠的沉降和稳定琼脂珠的形态。本发明所述离心的温度优选为4℃，所述离心的离心力优选为2700g，所述离心的时间优选为15min。
得到含有矿物油琼脂珠；本发明优选将所述含有矿物油琼脂珠利用PBS溶液离心得到洗脱后的琼脂珠。本发明优选将含有矿物油琼脂珠与PBS溶液混合后离心和移除记为一次洗脱过程；本发明优选在50mL的离心管中放置30mLPBS溶液后离心，利于将矿物油清洗干净；所述离心的温度优选为4℃，所述离心的离心力优选为2700g，所述离心的时间优选为15min。在本发明的实施例中，所述PBS溶液的添加量优选为30mL。本发明所述洗脱的次数优选为6次；所述洗脱的作用优选为去除矿物油。
得到洗脱后的琼脂珠，本发明优选将所述洗脱后的琼脂珠与PBS缓冲液混合后过滤得到直径为100～300μm的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。本发明所述PBS缓冲液的每次用量优选为5～10mL。本发明所述过滤优选先利用直径为300μm滤网进行过滤，再利用直径为100μm滤网进行反滤，得到直径为100～300μm的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。
本发明提供了上述技术方案所述铜绿假单胞菌FKC2或上述技术方案所述造模试剂在构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型中的应用。
本发明所述慢性肺部感染优选包括慢性气道疾病；所述慢性气道疾病优选包括支气管扩张症。
在本发明中，所述构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型时每只动物注射铜绿假单胞菌FKC2的有效活菌数优选为≥3×106个，更优选为3×106个。本发明优选注射完整的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。
本发明提供了一种构建铜绿假单胞菌慢性感染疾病动物模型的方法，包括以下步骤：将上述技术方案所述铜绿假单胞菌FKC2或上述技术方案所述造模试剂注射在动物体内，进行造模。
在本发明中，所述动物优选包括小鼠。
本发明也证实，现有技术的铜绿假单胞菌模式菌株PAO1构建慢性模型的造模成功率并不高。在本发明实施例中，所述铜绿假单胞菌FKC2注射在小鼠体内进行造模时小鼠存活率为90％，铜绿假单胞菌FKC2慢性感染造模成功率达到70％；利用现有技术中的铜绿假单胞菌PAO1注射在小鼠体内进行造模时，小鼠存活率为50％，铜绿假单胞菌PAO1的慢性感染造模成功率为35％。铜绿假单胞菌FKC2造模组的小鼠在第14d的肺部细菌清除率明显低于现有技术的铜绿假单胞菌PAO1造模组的小鼠，提示铜绿假单胞菌可长期存在小鼠体内，有利于慢性感染的形成。
本发明的铜绿假单胞菌FKC2可应用于科学研究，为解决慢性铜绿假单胞菌定植的科学难题提供可靠的菌株选，有助于推动该领域的科学研究与发展，为病人、社会创造可观的社会和经济价值。
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
LB固体培养基组成为：琼脂粉(Agar)4.5g、胰蛋白胨(Tryptone)3g、酵母提取物(Yeast Extract)1.5g和氯化钠(NaCl)1.5g，溶于300mL双蒸馏水(即dd水)后进行高压灭菌得到。
培养基名称为LB(Luria-Bertani)液体培养基，其配方为：胰蛋白胨(Tryptone)3g，酵母提取物(Yeast Extract)1.5g，氯化钠(NaCl)1.5g，溶于300mL双蒸馏水(即dd水)后进行高压灭菌得到。
实施例1
实验组材料为分离自上海市肺科医院住院的一位支气管扩张症患者的痰液中分离菌株，从患者的痰液到最后单菌落菌株的保存均按照中华人民共和国卫生行业标准中的《临床微生物检验基本技术标准》(WS/T 805-2022)进行，获得的菌株经鉴定为铜绿假单胞菌菌株，记为“FKC2”。
实施例2
实验材料为实施例1所得的铜绿假单胞菌菌株FKC2作为实验组，对照组材料为实验室保种的模式菌株PAO1。
具体实验方法如下：
一、琼脂包被铜绿假单胞菌FKC2和PAO1
琼脂包被铜绿假单胞菌FKC2即得到铜绿假单胞菌菌株FKC2琼脂珠，实验组琼脂包被铜绿假单胞菌FKC2的具体方法如下：
1实验前一天，挑取LB培养基平板划线所得的菌株FKC2单菌落接种于LB液体培养基3mL中以220rpm，37℃的条件过夜培养16～18h，得到过夜菌液；
2第二天将过夜菌液接种在LB液体培养基中进行复摇，过夜菌液和复摇液体总体积的体积比为1：20，复摇液体总体积为过夜菌液和LB液体培养基的体积和；复摇的温度和转速也一致同步骤1的过夜培养；复摇液体总体积为10mL。
3复摇3h后结束，取所有菌液在4℃，2700g条件下离心15min，弃上清，以1mL无菌PBS重悬菌体，再加入预热至50℃的9mL LB固体培养基，混合均匀，得到第一混合物；
将第一混合物加入含预热至50℃的150mL矿物油(矿物油货号是8042-47-5，别名液体石蜡)的锥形瓶中得到混合物，室温下快速搅拌5min，快速搅拌的转速为1800rpm；把搅拌器及含混合物的锥形瓶移至4℃的冰箱中进行低速搅拌，低速搅拌的转速越慢越好，保证搅拌不停即可；低速搅拌35min后将含有混合物的锥形瓶移至冰上孵育20min；转移所得混合物至50mL离心管，4℃，2700g离心15min；此时可见上层的矿物油和下层的FKC2琼脂珠，尽量移除上层的矿物油；再加入30mL无菌PBS，轻轻混匀FKC2琼脂珠，再次以2700g离心15min，移除上层含有矿物油的PBS；重复加入无菌PBS、离心和移除步骤6次，以尽量洗脱矿物油；一次加入无菌PBS、离心和移除的过程视为洗脱一次。
4在最后一次洗脱结束后，所得FKC2琼脂珠再加入10mL无菌PBS，重悬FKC2琼脂珠，得到10mL重悬液。吸取5mL上述重悬液先过300μm滤网，用无菌PBS清洗滤网2～3次，收集滤得的液体；再将收集到的液体过100μm滤网，用无菌PBS清洗滤网2～3次，收集滤网上的FKC2琼脂珠；剩余的5mL重悬液也进行上述300μm滤网、100μm滤网过滤处理，收集滤网上的FKC2琼脂珠；
5再取一新的50mL离心管，用3mL无菌PBS反复清洗离心管，之后放入步骤4回收得到FKC2琼脂珠，显微镜下观察FKC2琼脂珠直径为100～300μm为宜；
6吸取步骤5所得的混匀的FKC2琼脂珠0.5mL(其余的FKC2琼脂珠保存4℃备用)，用无菌匀浆器制成匀浆后，倍比稀释，点板在固体LB培养板上，37℃孵育过夜，次日计算菌量；将FKC2琼脂珠匀浆后测定含菌量，FKC2琼脂珠调整菌量至3×106个/30μL，用于小鼠感染模型的构建。
对照组琼脂包被铜绿假单胞菌PAO1(简称PAO1琼脂珠)的制备方法同实验组，唯一的区别在于将铜绿假单胞菌FKC2替换为铜绿假单胞菌PAO1。铜绿假单胞菌菌株PAO1琼脂珠匀浆后测定含菌量，PAO1琼脂珠调整菌量至3×106个/30μL，用于小鼠感染模型的构建。
显微镜下可见，实验组和对照组的菌株经琼脂包被后的beads均符合标准(见图1和图2)，根据图1可知，FKC2菌株被成功包被成琼脂珠子(简称FKC2琼脂珠)，符合慢性感染造模所用琼脂珠直径为100～300μm的标准；根据图2可知，PAO1菌株被成功包被成琼脂珠子(简称PAO1琼脂珠)，符合慢性感染造模所用琼脂珠(beads)直径为100～300μm的标准。
二、感染小鼠造模
实验组和对照组各取20只SPF级别的6～8周周龄大小的雄性C57BL/6小鼠进行如下实验，具体的实验过程如下：
将胰岛素针针头套上无菌塑料软管，软管末端超出针头约5mm即可，得到胰岛素针软管；
将麻醉好的小鼠采取仰卧姿势放置于斜坡操作台上，小鼠门牙挂在水平橡皮筋上，用胶带固定四肢；
开启冷光源灯，将光源对着小鼠气道位置，用无菌弯镊将小鼠舌头小心拉出置于左侧；
经冷光源灯照射可清晰看到小鼠声门，之后将胰岛素针软管轻轻插入声门，缓慢注射；实验组小鼠注射完整的FKC2琼脂珠，对照组小鼠注射完整的PAO1琼脂珠，实验组和对照组的每只小鼠注射的菌量均为3×106个。
观察实验组和对照组2组小鼠有明显的呛咳后，将小鼠继续头朝上仰卧挂着持续约十分钟防止菌液回流至口腔；随后，将实验组和对照组小鼠放回对应的笼子里，并做好标记，注意保暖，约半小时后小鼠即可苏醒。
三、模型观察和结果统计
1小鼠生存率：注射菌液当天作为感染后的第0d，于感染后第14d统计2组小鼠存活情况，计算存活率＝存活数/造模总数*100％；
2慢性感染成功率：注射菌液当天作为感染后的第0d，于感染后第14d，在无菌环境下提取小鼠全肺于1mL无菌PBS中，统一匀浆后进行梯度稀释涂板，统计存活菌落数，以全肺菌落数≥1000为成功的标志，计算慢性感染成功率＝菌落数达标的小鼠数量/造模总数*100％；
3细菌清除率：于感染后第14d，在无菌环境下提取小鼠全肺于1mL无菌PBS中，统一匀浆后进行梯度稀释涂板，统计存活菌落数，计算细菌清除率＝菌落数为0的小鼠数量/造模总数*100％。
经气道构建慢性感染模型后发现，FKC2组的小鼠生存率(90％)远高于PAO1组(50％)(见图3)；图3中，FKC2组共造模20只，截至14d共死亡2只，存活率＝(20-2)/20*100％＝90％；PAO1组：共造模20只，截至14d共死亡10只，存活率＝(20-10)/20*100％＝50％。
图4中FKC2组：第14d肺部菌落数≥1000的小鼠有14只，慢性感染造模成功率＝14/20*100％＝70％；PAO1组：第14d肺部菌落数≥1000的小鼠有7只，慢性感染造模成功率＝7/20*100％＝35％；图4中FKC2组慢性感染模型成功率(70％)为PAO1组(35％)的2倍。
图5中，FKC2组造模的小鼠在第14d的肺部细菌清除率明显低于PAO1造模组，并且在FKC2组未观察到细菌的清除；而PAO1组在第14d有10％的小鼠肺中的菌荷量为0(图5)。根据图5可知，FKC2组造模的小鼠提示细菌长期存在，有利于慢性感染的形成。
对比例1
现有技术(参见“Facchini,M.,De Fino,I.,Riva,C.,Bragonzi,A.Long TermChronic Pseudomonas aeruginosaAirway Infection in Mice.J.Vis.Exp.(85),e51019,doi:10.3791/51019(2014).”)中采用铜绿假单胞菌PAO1构建慢性肺部感染模型的成功率为20％～27.8％。由此可知，本发明涉及的铜绿假单胞菌FKC2在构建慢性感染模型上具有优势。
综上，本发明涉及的铜绿假单胞菌FKC2是从一名支气管扩张症患者的痰液中分离培养、纯化出并进一步鉴定得到的单克隆菌株FKC2。该菌株FKC2来源于慢性感染铜绿假单胞菌的支气管扩张症患者的气道，其本身长期处于患者体内，通过适应性进化获得了生长缓慢、菌落小、分泌粘液等慢性感染菌株的特征，并因此更能造成小鼠肺部慢性感染，具有良好特性。
相对于现有技术，由本发明的铜绿假单胞菌菌株FKC2构建的小鼠慢性肺部感染模型成功率更高，小鼠肺部细菌清除率及小鼠死亡率均低于现有技术。说明书附图中所涉及的指标均为国际公认慢性感染模型成功的标志，参见“Bragonzi A,Paroni M,Nonis A,etal.Pseudomonas aeruginosa microevolution during cystic fibrosis lunginfection establishes clones with adapted virulence.Am J Respir Crit CareMed.2009；180(2):138-145.doi:10.1164/rccm.200812-1943OC”。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (10)

1.一株铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)FKC2，保藏编号为GDMCCNO:64358。
2.一种动物慢性肺部感染模型的造模试剂，其特征在于，包括权利要求1所述铜绿假单胞菌FKC2。
3.根据权利要求1所述造模试剂，其特征在于，所述铜绿假单胞菌FKC2制备成铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠后应用。
4.根据权利要求3所述造模试剂，其特征在于，所述铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠的制备方法包括：将所述铜绿假单胞菌FKC2菌体与PBS缓冲液混合后得到重悬液；将所述重悬液、培养基和矿物油混合得到混合物；将所述混合物冰孵后离心得到含有矿物油琼脂珠；将所述含有矿物油琼脂珠利用PBS溶液离心得到洗脱后的琼脂珠；将所述洗脱后的琼脂珠与PBS缓冲液混合后过滤得到直径为100～300μm的铜绿假单胞菌FKC2琼脂珠。
5.根据权利要求4所述造模试剂，其特征在于，所述铜绿假单胞菌FKC2菌体的制备方法包括：所述铜绿假单胞菌FKC2进行第一培养得到菌液；将所述菌液进行第二培养得到铜绿假单胞菌FKC2菌体。
6.权利要求1所述铜绿假单胞菌FKC2或权利要求2～5任一项所述造模试剂在构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述慢性肺部感染包括慢性气道疾病；所述慢性气道疾病包括支气管扩张症。
8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述构建铜绿假单胞菌慢性肺部感染动物模型时铜绿假单胞菌FKC2的注射有效活菌数为≥3×106个。
9.一种构建铜绿假单胞菌慢性感染疾病动物模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的铜绿假单胞菌FKC2或权利要求2～5任一项所述造模试剂注射在动物体内，进行造模。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述动物包括小鼠。
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