CN118047886A - 化合物及其制备方法和封闭剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种化合物及其制备方法和包含该化合物的封闭剂。所述化合物具有如下式(I)所示的结构或其衍生物：

Description

化合物及其制备方法和封闭剂
技术领域
本发明涉及一种化合物及其制备方法和封闭剂，属于免疫诊断材料领域。
背景技术
蛋白结合表面(即免疫测定试剂体系中的固相载体的表面)的封闭在以固相载体为基础的免疫诊断领域非常重要。在免疫诊断中，以化学发光、免疫层析、Elisa、胶乳比浊等检测手段所用的固相载体如免疫磁珠、多孔包被板、荧光微球、胶乳微球、胶体金、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜等的表面对杂质蛋白的非特异性吸附会导致信噪比，即检测灵敏度的显著下降，同时可能引起假阳性，对疾病及其进程的诊断造成失误和医疗事故。
因此，蛋白结合表面的封闭在整个诊断流程中起重要作用。目前常用的封闭试剂主要成分为蛋白类试剂，如牛血清白蛋白、酪蛋白等；以及血清类，如胎牛血清、马血清等；并且还包含一些小分子或大分子化合物(以下简称辅助试剂)，如明胶、聚乙二醇、三乙醇胺、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等等。上述蛋白类成分和上述辅助试剂可分别独立作为封闭剂使用，也可整体作为封闭剂使用。在一些诊断过程，或如免疫印迹实验中，对封闭剂有较大用量需求、较低成本要求和较高性能要求。
具体地，在化学发光平台检测、Elisa平台检测、免疫层析平台检测、胶乳比浊平台检测等场景，通常采用往缓冲液加入牛血清白蛋白(BSA)的方式配置封闭剂，同时往缓冲液加入一些辅助试剂，即得到蛋白类封闭剂。这类封闭剂的特点是可以较好的封闭固相载体以及其它试剂分子表面的疏水位点，但是，BSA提纯难度大、成本高，作为生物技术制品存在批间差难控制的问题。同时，因为蛋白附着于固相载体表面，也可能与样本中其它蛋白类成分产生物理化学相互作用，降低其提升灵敏度的能力。最后，蛋白类试剂可能会阻挡应正常进行物理化学结合的位点，会导致检测信号值降低。
另外，上述辅助试剂也可以单独使用作为封闭剂，即为化合物封闭剂，当前主要应用的试剂以聚乙二醇、三乙醇胺和一些多糖类为主，这类封闭剂的特点是性能时好时差，各个检测平台(如免疫层析检测平台、化学发光检测平台、胶乳比浊检测平台等)和各个固相载体无法统一使用，大大限制了封闭剂的应用场景。
引用文献1公开一种甲氧基聚乙二醇-十六烷基醇-牛血清白蛋白-葡聚糖复合物，用于物理包被胶乳，其提供大量氢键以及离子键、疏水作用、支撑结构对蛋白稳定起关键作用。其中葡聚糖氧化开环生成醛基，然后与赖氨酸反应连接，再由赖氨酸分别连接甲氧基聚乙二醇、十六烷基醇、牛血清白蛋白。但是，该制备方法复杂，成本高。由于牛血清白蛋白接枝在主链上，因此同样可能会阻挡应正常进行物理化学结合的位点，导致检测信号值降低。
因此，开发一款低成本、且封闭效果整体优于蛋白类封闭剂的化合物封闭剂应用在免疫诊断或生物实验领域的需求是重要且急切的。
引用文献：
引用文献1：CN110437455A
发明内容
发明要解决的问题
鉴于现有技术中存在的技术问题，例如：封闭剂蛋白的提纯难度大，成本高。同时，因为蛋白附着于固相载体表面，也可能与样本中其它蛋白类成分产生物理化学相互作用，降低其提升灵敏度的能力等，本发明首先提供一种化合物。本发明的化合物能够用于制备封闭剂，其低成本，且封闭效果比肩于，或优于蛋白类封闭剂。
进一步地，本发明还提供一种化合物的制备方法，该制备方法简单易行，原料易于获取，适合大批量生产。
进一步地，本发明还提供一种封闭剂及其制备方法。
用于解决问题的方案
本发明提供一种化合物，其中，所述化合物具有如下式(I)所示的结构或其衍生物：
其中，结构单元A位于化合物的骨架结构中，所述结构单元A源自于含有氨基酸分子的化合物单体，或源自于杂环化合物；
M、Z相同或不同；相互独立地表示直接键或二价连接基团；
X表示亲水基团，且X通过亚烷基或单键连接在结构单元A上；
Y表示疏水基团，且Y通过亚烷基或单键与M相连接；
n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数；并且，
当n>1时，A每次出现时相同或不同，X每次出现时相同或不同，Y每次出现时相同或不同，M每次出现时相同或不同，以及Z每次出现时相同或不同。
根据上述的化合物，其中，M和Z各自独立的表示单键、双键、酰胺键、醚键、硫醚键或碳氮单键；
X表示羟基、醛基、氨基或羧基；
Y表示酯基、取代基取代或未取代碳原子数为2-15的烃基、取代基取代或未取代的芳香基、硝基或卤素原子；
优选地，所述亚烷基的碳原子数为1-10个；
优选地，Y表示取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烷基、取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烯基、取代基取代或未取代的碳原子数为6-12的芳香基、硝基或卤素原子。
根据上述的化合物，其中，所述化合物的重均分子量为0.2-40kD；优选为0.2kD-10KD；和/或，
所述杂环化合物包括五元杂环化合物或六元杂环化合物；和/或，所述杂环化合物中的杂原子为O或S。
根据上述的化合物，其中，所述化合物具有如下结构之一：
其中，n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数。
本发明还提供一种根据本发明所述的化合物的制备方法，其中，包括利用化学合成的方法制备得到化合物。
根据本发明所述的制备方法，其中，结构单元A源自于杂环化合物，所述制备方法包括以下步骤：
步骤1)对所述杂环化合物进行开环处理，得到开环产物；
步骤2)利用取代反应、加成反应、缩合反应、氧化反应或还原反应中的至少一种对所述开环产物进行后处理，得到化合物；
优选地，所述开环处理包括通过氧化反应或还原反应对所述杂环化合物进行开环处理。
本发明还提供一种封闭剂，其包括根据本发明所述的化合物。
根据上述的封闭剂，所述封闭剂还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和叠氮化钠中的至少一种。
本发明还提供一种稀释液，其包括根据本发明所述的化合物；优选地，所述稀释液选自磁珠稀释液、胶体金稀释液、胶乳稀释液、AE标记物稀释液、鲁米诺标记物稀释液、异鲁米诺标记物稀释液、AP标记物稀释液、HRP标记物稀释液、荧光材料标记物稀释液、量子点材料标记物稀释液、上转发光材料标记物稀释液、电化学发光材料标记物稀释液或样本稀释液中的至少一种。
本发明还提供一种检测试剂，其包括根据本发明所述的化合物；优选地，所述检测试剂还包括选自磁珠、胶体金、胶乳、AE标记物(吖啶酯简称AE)、鲁米诺标记物、异鲁米诺标记物、AP标记物(碱性磷酸酶简称AP)、HRP标记物(辣根过氧化物酶简称HRP)、荧光材料标记物、量子点材料标记物、上转发光材料标记物、电化学发光材料标记物中的至少一种。
本发明还提供一种试剂盒，其包括根据本发明所述的化合物。
本发明还提供一种根据本发明所述的化合物或所述的封闭剂或所述的稀释液或所述的试剂盒在封闭固相载体中的应用；优选地，所述固相载体选自微球、板和膜中的至少一种；更优选地，所述固相载体选自磁珠、塑料微球、胶乳微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜中的至少一种。
发明的效果
本发明的化合物能够用于制备封闭剂，其成本低，且封闭效果整体优于蛋白类封闭剂。
本发明的化合物的制备方法简单易行，原料易于获取，适合大批量生产。
附图说明
图1示出了本发明封闭剂在SCCA项目进行加速稳定性测试的测试结果示意图。
图2示出了本发明封闭剂在ELISA检测平台的封闭效果对比图；其中，
抗体-AE:HIV p24抗体标记吖啶酯
抗体-AP:HIV p24抗体标记碱性磷酸酶
抗原-AE:HIV I型抗原标记吖啶酯
抗原-AP:HIV I型抗原标记碱性磷酸酶。
图3示出了HIV检测项目中，在AE稀释液或磁珠稀释液中添加BSA或本发明化合物成分，对103例随机阴性血清的测试结果，其中无蛋白组：不加封闭剂；对照蛋白组：在AE稀释液中加BSA；MAP组：在AE稀释液中加FA MAP(即本发明化合物)；MAP+MAP组：在AE稀释液和磁珠稀释液中加FA MAP。
图4示出了实施例4所得化合物的液相色谱-质谱联用图谱，结果证明确实生成了所述O-CN-C6化合物。
具体实施方式
以下将详细说明本发明的各种示例性实施例、特征和方面。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
另外，为了更好地说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在另外一些实例中，对于本领域技术人员熟知的方法、手段、器材和步骤未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
如无特殊声明，本说明书中所使用的单位均为国际标准单位，并且本发明中出现的数值，数值范围，均应当理解为包含了工业生产中所不可避免的系统性误差。
本说明书中，使用“可以”表示的含义包括了进行某种处理以及不进行某种处理两方面的含义。
本说明书中，所提及的“一些具体/优选的实施方案”、“另一些具体/优选的实施方案”、“实施方案”等是指所描述的与该实施方案有关的特定要素(例如，特征、结构、性质和/或特性)包括在此处所述的至少一种实施方案中，并且可存在于其它实施方案中或者可不存在于其它实施方案中。另外，应理解，所述要素可以任何合适的方式组合在各种实施方案中。
本说明书中，使用“数值A～数值B”表示的数值范围是指包含端点数值A、B的范围。
本说明书中，使用“常温”、“室温”时，其温度可以是10-40℃。
<第一方面>
本发明的第一方面提供一种化合物，其中，所述化合物具有如下式(I)所示的结构或其衍生物：
其中，结构单元A位于化合物的骨架结构中，所述结构单元A源自于含有氨基酸分子的化合物单体，或源自于杂环化合物；
M、Z相同或不同；相互独立地表示直接键或二价连接基团；
X表示亲水基团，且X通过亚烷基或单键连接在结构单元A上；
Y表示疏水基团，且Y通过亚烷基或单键与M相连接；
n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数；并且，
当n>1时，A每次出现时相同或不同，X每次出现时相同或不同，Y每次出现时相同或不同，M每次出现时相同或不同，以及Z每次出现时相同或不同。
本发明的化合物能够用于制备封闭剂，其低成本，且封闭效果比肩于或优于蛋白类封闭剂。
在本发明中，选择合适的疏水基团Y对封闭性能的影响较大，连接骨架与Y的连接键M、Z基本没有结构限制，可以根据需要进行选择。在一些具体的实施方案中，M和Z各自独立的表示单键、双键、酰胺键、醚键、硫醚键或碳氮单键。进一步，在本发明中，Z的选择主要取决于含有氨基酸分子的化合物单体或杂环化合物。
另外，在本发明中，但X表示亲水基团，Y表示疏水基团；可见，X与Y亲疏水性不同。通过使用亲疏水性不同的X与Y，使封闭性能得到最有效的发挥。
在一些具体的实施方案中，Y表示酯基、取代基取代或未取代的碳原子数为2-15，优选5-10的烃基、取代基取代或未取代的芳香基、硝基或卤素原子，且Y通过亚烷基或单键与M相连接。优选地，Y表示取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烷基、取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烯基、取代基取代或未取代的碳原子数为6-12的芳香基、硝基或卤素原子。
进一步地，对于碳原子数为2-15的烃基，其可以是碳原子数为2-15的烷基、烯基等。当Y表示碳原子数为2-15的烷基、烯基时，其可以被取代基取代。对于取代基，本发明不作特别限定，可以是本领域任何可行的一些取代基，只要不影响烃基的疏水性即可。例如：取代基可以是无机物基团或碳原子数为1～10的有机基团，优选碳原子数为1-5的有机基团。优选地，对于无机物基团，其可以是卤素原子、磷酸基、膦酸基、偏磷酸基、硝基、硫酸基、磺酸基、氰基、硫氰基、巯基、碳酸基、膦基等；对于有机基团，其可以是烷基、烷氧基、碳酸酯基、烷基醚基、烷基酯基等等。其中的烷基均可以是碳原子数为1～10的直链烷基或支链烷基，其中的烷氧基均可以是碳原子数为1～10的直链烷氧基或支链烷氧基，其中的环烷基可是碳原子数为3～10的环烷基。
对于芳香基，其一般可以是碳原子数为6-18的芳香基，例如可以是苯基、萘基、蒽基、联苯基等等。对于取代基，本发明不作特别限定，可以是本领域任何可行的一些取代基，只要不影响芳香基的疏水性即可。例如：取代基可以是无机物基团或碳原子数1～10的有机基团，优选碳原子数为1-5的有机基团。优选地，对于无机物基团，其可以是卤素原子、磷酸基、膦酸基、偏磷酸基、硝基、硫酸基、磺酸基、氰基、硫氰基、巯基、碳酸基、膦基等；对于有机基团，其可以是烷基、烷氧基、碳酸酯基、烷基醚基、烷基酯基等等。其中的烷基均可以是碳原子数为1～10的直链烷基或支链烷基，其中的烷氧基均可以是碳原子数为1～10的直链烷氧基或支链烷氧基，其中的环烷基可是碳原子数为3～10的环烷基。
对于酯基，一般可以表示为-COOR，其中，R可以是取代基取代或未取代的碳原子数为1-10的烷基。对于取代基，本发明不作特别限定，可以是任何可行的取代基，例如：本申请上述列举的取代基。
在本发明中，所述卤素原子可以为F、Cl或Br原子。
在一些具体的实施方案中，X可以表示羟基、醛基、氨基或羧基；且上述基团可以通过亚烷基或单键连接在结构单元A上。
对于本发明中所述的亚烷基的碳原子数，本发明不作特别限定，一般可以是1-10个，例如：2个、4个、6个、8个等。另外，所述亚烷基本还可以具有取代基，对于取代基，本发明不作特别限定，可以是任何可行的一些取代基，只要不影响亲水性基团的亲水性即可。例如：取代基可以是无机物基团或碳原子数1～10的有机基团，优选碳原子数为1-5的有机基团，具体可以是本发明上述所列举的取代基。
在一些具体的实施方案中，所述化合物的相对分子质量为0.2-40kD，优选0.2-10kD，例如：0.2kD、0.5kD、1kD、3kD、5kD、7kD、9kD、10kD、15kD、20kD、25kD、30kD、35kD等。当化合物的相对分子质量为0.2-40kD时，其聚合度更合适，化合物的功能能够更有效的发挥。
进一步地，对于本发明的化合物的端基，本发明不作特别限定，其主要是依据含有氨基酸分子的化合物单体或杂环化合物的而定。X和Y基团是本发明化合物发挥作用的主体侧链基团，端基相对分子质量与聚合物主体的相对分子质量相比，影响可忽略不计。
进一步，对于含有氨基酸分子的化合物单体，本发明不作特别限定，其可以是氨基酸、寡肽、多肽等，优选地，所述含有氨基酸分子的化合物单体的主链上(除去羧基以外)的碳原子数可以为6-10个。
本发明的杂环化合物可以是修饰性或非修饰性的杂环化合物。具体地，所述杂环化合物可以是五元杂环化合物或六元杂环化合物。优选地，所述杂环化合物是的杂原子为O或S，优选为O，例如：呋喃糖类聚合物、吡喃糖类聚合物等。本发明的杂环化合物还可以是修饰性的呋喃糖类聚合物、修饰性的吡喃糖类聚合物等。具体地，本发明的杂环化合物可以是葡聚糖、聚氨基葡糖(壳聚糖)等。本发明的杂环化合物可以是单糖的缩聚物，单糖选自葡萄糖、甘露糖、果糖、半乳糖或其任意组合。
对于杂环聚合物的分子量，本发明不作特别限定，可以根据需要进行选择。优选地，考虑到应用时的分子量不宜过大，所述杂环聚合物的重均分子量优选为重均分子量为0.2-40kD，优选0.2-10kD。
所述杂环化合物优选为杂环聚合物，即n为2以上的自然数，优选n为5-100的自然数。
进一步，在一些具体的实施方案中，所述化合物具有如下结构之一：
其中，n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数。
另外，在本发明中，对于n的取值，本发明不作特别限定，可以根据需要进行选择，例如：n可以是10、20、30、40、50、60、70、80、90等，本领域技术人员知道实际产物应当是不同聚合度化合物的混合，没有一个统一的固定聚合度，只能用聚合度区间表示，可以辅以分子量区间进行判断。
本发明的化合物及其衍生物作为固相载体封闭剂的主要成分，成本低，使用方式简单，提升试剂检测性能优异。
<第二方面>
本发明的第二方面提供一种根据本发明第一方面所述的化合物的制备方法，其包括利用化学合成的方法制备得到化合物。
本发明的制备方法简单易行，制备得到的化合物用于封闭剂使用时，稳定性优越，可以进行批量生产。
结构单元A源自于含有氨基酸分子的化合物单体
所述结构单元A源自于含有氨基酸分子的化合物单体，所述制备方法包括以下步骤：
步骤1)：获取形成骨架结构的单体，并对单体进行氨基保护反应，得到氨基保护的单体；
步骤2)：使所述氨基保护的单体与未进行保护的单体发生缩聚反应，得到缩聚产物；
步骤3)：脱除对单体的氨基的保护，得到本发明化合物。
在一些具体的实施方案中，所述步骤1)中，利用氨基保护剂使单体进行氨基保护反应，优选在有机溶剂中利用氨基保护剂使单体进行氨基保护反应；更优选地，单体与氨基保护剂的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等；所述氨基保护反应的时间为4-8小时，例如：5小时、6小时、7小时等。
对于氨基保护剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的氨基保护剂，例如：二碳酸二叔丁酯、对二甲氨基吡啶等。作为优选，为了获得性能优异的本发明化合物，可以使用二碳酸二叔丁酯和对二甲氨基吡啶的组合作为氨基保护剂使用。
进一步地，对于所述步骤1)中的有机溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的有机溶剂。具体地，所述有机溶剂可以选自二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈，甲醇等中的一种或两种以上的组合。
在一些具体的实施方案中，所述步骤2)中，在催化剂的存在下进行缩聚反应；所述氨基保护的单体与催化剂的摩尔比为1:1.1～1:1.5，例如：1:1.2、1:1.3、1:1.4等；所述氨基保护的单体与所述未进行保护的单体的摩尔比为1:1.1～1:1.5，例如：1:1.2、1:1.3、1:1.4等；所述缩聚反应的时间为12-24小时，例如：14小时、16小时、18小时、20小时、22小时等。
优选地，所述步骤2)还包括在缩聚反应完成之后，进行层析分离后得到缩聚产物。
对于催化剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的催化剂，例如：碳二亚胺类化合物，活性酯类化合物，碳鎓盐类化合物，有机磷类化合物，均三嗪衍生物，羰基二咪唑等中的一种或两种以上的组合。
进一步地，对于所述步骤2)中的有机溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的有机溶剂。具体地，所述有机溶剂可以选自水，二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈等中的一种或两种以上的组合。
为了获得所需分子量的本发明化合物，可以重复上述过程，直至得到所需分子量的缩聚反应产物。
在一些具体的实施方案中，所述步骤3)中，利用酸剂通过酸解反应以脱除对所述单体的氨基的保护；优选地，所述氨基保护的单体与所述酸剂的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等。
对于酸剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的酸解反应所使用的酸剂，例如：三氟乙酸等。
进一步地，对于所述步骤3)中的有机溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的有机溶剂。具体地，所述有机溶剂可以选自二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈等中的一种或两种以上的组合。
结构单元A源自于杂环化合物
所述结构单元A源自于杂环化合物，所述制备方法包括以下步骤：
步骤1)对所述杂环化合物进行开环处理，得到开环产物；
步骤2)利用取代反应、加成反应、缩合反应、氧化反应或还原反应中的至少一种对所述开环产物进行后处理，得到本发明化合物。
<开环处理>
所述开环处理包括通过氧化反应或对所述杂环化合物进行开环处理。
对于氧化反应，本发明不作特别限定，可以是本领域中常用的氧化反应。具体而言：
在一些具体的实施方案中，所述氧化反应可以使用氧化剂对杂环化合物进行开环处理。对于氧化剂，本发明不作特别限定，只要可以对杂环化合物进行开环即可。例如：高碘酸钠。
当使用高碘酸钠作为氧化剂用于开环时，所述开环处理包括以下步骤：
使杂环化合物与高碘酸钠进行氧化反应，得到反应产物；
对所述反应产物进行提纯后干燥，得到第一开环产物。
进一步，在该氧化反应中，杂环化合物与高碘酸钠的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等。该氧化反应的时间为20-40小时，例如：22小时、25小时、28小时、30小时、32小时、35小时、38小时等。另外，该氧化反应可以在常温下进行。
具体地，所述氧化反应是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。
对于提纯的方法，本发明不作特别限定，可以根据需要进行提纯处理。具体地，当所获得的反应产物为溶液时，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选采用50-100％的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱。当所获得的反应产物为悬浊液时，可以采用离心分离的方式进行提纯。具体以10000-14000rpm进行高速离心后除去上清液。
对于干燥，本发明不作特别限定，可以根据需要进行。具体地，提纯后可以置于60-80℃的温度下，干燥48-72小时，从而得到第一开环产物。
以X为羟基的β-1,4-(2,3-二醛基)开环葡聚糖为例，具体制备方法为：
将β-1,4-葡聚糖溶解或分散在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的高碘酸钠，高速搅拌20-40小时，得到反应产物。
若反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60-80℃干燥48-72小时，得到第一开环产物；若反应结束后呈稳定悬浊液状态的，以10000-14000rpm进行高速离心，重复1-3次，将离心所得产物60-80℃干燥48-72小时，得到第一开环产物。
在一些具体的实施方案中，为了获得想要的其它开环产物，本发明可以再继续对第一开环产物进行还原处理的步骤。
具体地，所述还原处理包括以下步骤：
将第一开环产物与还原剂进行还原反应后，得到反应产物；
对所述反应产物进行提纯后干燥，得到第二开环产物。
进一步，在该还原反应中，第一开环产物与还原剂的摩尔比为1:1.2-1:1.6，例如：1:1.3、1:1.4、1:1.5等。该氧化反应的时间为16-28小时，例如：18小时、20小时、22小时、24小时、26小时等。另外，该还原反应可以在常温下进行。
具体地，所述还原反应是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。
对于还原剂，本发明不作特别限定，具体可以选自硼氢化钠，氰基硼氢化钠，三乙酰氧基硼氢化钠等中的一种或两种以上的组合。
对于提纯的方法，本发明不作特别限定，可以根据需要进行提纯处理。具体地，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选采用50-100％的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱。
对于干燥，本发明不作特别限定，可以根据需要进行。具体地，提纯后可以置于60-80℃的温度下，干燥48-72小时，从而得到第二开环产物。
以X为羟基的β-1,4-(2,3-二羟基)开环葡聚糖为例，具体制备方法为：
将上述第一开环产物溶解在超纯水中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:1.2-1:1.6的还原剂，高速搅拌16-28小时。反应结束后以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60-80℃干燥48-72小时，得到第二开环产物。
在另一些具体的实施方案中，为了获得想要的其它开环产物，本发明可以再继续对第一开环产物再进行氧化处理的步骤。
具体地，所述氧化处理包括以下步骤：
使第一开环产物与次氯酸钠进行氧化反应后，得到反应产物；
对所述反应产物进行提纯后干燥，得到第三开环产物。
进一步，在该氧化处理中，第一开环产物与次氯酸钠的摩尔比为1:1.2-1:1.6，例如：1:1.3、1:1.4、1:1.5等。该氧化反应的时间为40-72小时，例如：45小时、50小时、55小时、60小时、65小时、70小时等。另外，该氧化反应可以在常温下进行。
具体地，所述氧化处理是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。另外，在氧化反应过程中，为了使反应能够有效时行，可以适当添加一些冰乙酸。具体地，所述冰乙酸的添加量可以是200-1000μL，例如：400μL、600μL、800μL等。
对于提纯的方法，本发明不作特别限定，可以根据需要进行提纯处理。具体地，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选采用50-100％的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱。
对于干燥，本发明不作特别限定，可以根据需要进行。具体地，提纯后可以置于60-80℃的温度下，干燥48-72小时，从而得到第三开环产物。
以X为羟基的β-1,4-(2，3-二羧基)开环葡聚糖为例，具体制备方法为：
将第一开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:1.2-1:1.6的次氯酸钠，滴加200-1000μL的冰乙酸，高速搅拌40-72小时。反应结束后以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60-80℃干燥48-72小时，得到第三开环产物。
当使用四甲基哌啶氧化物和高碘酸钠作为氧化剂用于开环时，所述开环处理包括以下步骤：
步骤1、使杂环化合物与四甲基哌啶氧化物进行氧化反应，然后再进行提纯并干燥，得到中间产物；
步骤2、使所述中间产物继续与高碘酸钠进行氧化反应，然后再进行提纯并干燥，得到第四开环产物。
进一步，在步骤1的氧化反应中，杂环化合物与四甲基哌啶氧化物的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等。该氧化反应的时间为20-40小时，例如：22小时、25小时、28小时、30小时、32小时、35小时、38小时等。另外，该氧化反应可以在常温下进行。
具体地，步骤1的氧化反应是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。
对于步骤1的提纯的方法，本发明不作特别限定，可以根据需要进行提纯处理。具体地，当所获得的反应产物为溶液时，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选采用50-100％的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱。当所获得的反应产物为悬浊液时，可以采用离心分离的方式进行提纯。具体以10000-14000rpm进行高速离心后除去上清液。
对于步骤1的干燥，本发明不作特别限定，可以根据需要进行。具体地，提纯后可以置于60-80℃的温度下，干燥48-72小时，从而得到中间产物。
进一步，在步骤2的氧化反应中，中间产物与高碘酸钠的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等。该氧化反应的时间为20-40小时，例如：22小时、25小时、28小时、30小时、32小时、35小时、38小时等。另外，该氧化反应可以在常温下进行。
具体地，步骤2的氧化反应是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。
对于步骤2的提纯的方法，本发明不作特别限定，可以根据需要进行提纯处理。具体地，当所获得的反应产物为溶液时，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选采用50-100％的正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱。当所获得的反应产物为悬浊液时，可以采用离心分离的方式进行提纯。具体以10000-14000rpm进行高速离心后除去上清液。
对于步骤2的干燥，本发明不作特别限定，可以根据需要进行。具体地，提纯后可以置于60-80℃的温度下，干燥48-72小时，从而得到第四开环产物。
以X为羧基的β-1,4-(2，3-二醛基)开环葡聚糖为例，其制备方法为：
将β-1,4-葡聚糖溶解或分散在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的四甲基哌啶氧化物，高速搅拌20-40小时。
若反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60-80℃干燥48-72小时，得到中间产物；若反应结束后呈稳定悬浊液状态的，以10000-14000rpm进行高速离心，重复2次，将离心所得产物60-80℃干燥48-72小时，得到中间产物。
将中间产物溶解或分散在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的高碘酸钠，高速搅拌20-40小时，得到反应产物。
若反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60-80℃干燥48-72小时，得到第四开环产物；若反应结束后呈稳定悬浊液状态的，以10000-14000rpm进行高速离心，重复1-3次，将离心所得产物60-80℃干燥48-72小时，得到第四开环产物。
<后处理>
在本发明中，可以利用取代反应、加成反应、缩合反应、氧化反应或还原反应中的至少一种对所述开环产物进行后处理，得到本发明化合物。
①当连接键M为碳氮单键时，可以使用第一开环产物或第四开环产物继续进行后处理，其制备方法包括：
将第一开环产物或第四开环产物作为反应物与含有氨基和疏水基团Y的化合物进行缩合反应，得到缩合产物；
利用还原剂对所述缩合产物进行还原反应后提纯，得到本发明化合物。
其中，所述缩合反应中，所述反应物与含有氨基和疏水基团Y的化合物的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等；缩合反应的时间为2-4小时，例如：2.2小时、2.5小时、2.8小时、3小时、3.2小时、3.5小时、3.8小时等。该还原反应中，所述还原剂与所述反应物的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等；还原反应的时间为2-4小时，例如：2.2小时、2.5小时、2.8小时、3小时、3.2小时、3.5小时、3.8小时等。
具体地，缩合反应和还原反应都是在溶剂中进行的，对于溶剂，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的一些极性溶剂。例如：水等。
对于提纯，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的方法进行提纯。具体地，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选地，在还原反应结束后，以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到本发明化合物。
所述还原剂可以选自硼氢化钠，氰基硼氢化钠，三乙酰氧基硼氢化钠中的一种或两种以上的组合。
以X为羟基，连接键M为碳氮单键，Y为乙基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第一开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的乙胺，高速搅拌2-4小时后，加入与第一开环产物摩尔比为1:2-1:6的还原剂，常温高速搅拌4-8小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物化合物。
以X为羟基，连接键M为碳氮单键，Y为正十二烷基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第一开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的正十二胺，高速搅拌2-4小时后，加入与第一开环产物摩尔比为1:2-1:6的还原剂，常温高速搅拌4-8小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物化合物。
以X为羟基，连接键M为碳氮单键，Y为苯乙基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第一开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的苯乙胺，高速搅拌2-4小时后，加入与第一开环产物摩尔比为1:2-1:6的还原剂，常温高速搅拌4-8小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物化合物。
以X为羧基，连接键M为碳氮单键，Y为正己烷基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第四开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的正己胺，高速搅拌2-4小时后，加入与第四开环产物摩尔比为1:2-1:6的还原剂，常温高速搅拌4-8小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物化合物。
②当连接键M为醚键，可以使用第二开环产物继续进行后处理，其制备方法包括：
将第二开环产物溶于稀碱溶液中，与具有醛基和疏水基团Y的化合物进行缩合反应，得到反应产物；
对该反应产物进行提纯，得到本发明化合物。
其中，所述缩合反应中，所述第二开环产物与含有氨基和疏水基团Y的化合物的摩尔比为1:1.1-1:1.5，例如：1:1.3、1:1.4、1:1.5等；缩合反应的时间为12-24小时，例如：14小时、16小时、18小时、20小时、22小时等；缩合反应的反应温度为0-4℃，例如：2℃、3℃等。
具体地，稀碱溶液的pH值为7.5-9.5，例如：7.8、8、8.2、8.5、8.8、9、9.2等。所述稀碱溶液选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或两种以上的组合。
对于提纯，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的方法进行提纯。具体地，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选地，在还原反应结束后，以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到本发明化合物。
以X为羟基，连接键M为醚键，Y为正己烷基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第二开环产物溶于pH为7.5-9.5稀碱溶液中，平衡至0-4℃，加入与其摩尔比1：1.1-1.5的正己醛，0-4℃下搅拌12-24小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析，得到产物化合物。
③当连接键M为酰胺键，可以使用第三开环产物继续进行后处理，其制备方法包括：
在催化剂的存在下，使第三开环产物与具有氨基和疏水基团Y的化合物进行缩合反应，得到反应产物；
对该反应产物进行提纯，得到产物化合物。
其中，所述缩合反应中，所述第三开环产物与含有氨基和疏水基团Y的化合物的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等；缩合反应的时间为12-24小时，例如：14小时、16小时、18小时、20小时、22小时等。所述第三开环产物与催化剂的摩尔比为1:2-1:6，例如：1:3、1:4、1:5等。将第三开环产物与催化剂混合15分钟至1小时，例如：30分钟、45分钟等后，再与含有氨基和疏水基团Y的化合物进行反应。
所述溶剂选自水，二氯甲烷，四氢呋喃，乙腈中的一种或两种以上的组合；所述催化剂选自碳二亚胺类化合物，活性酯类化合物，碳鎓盐类化合物，有机磷类化合物，均三嗪衍生物，羰基二咪唑中的一种或两种以上的组合。
对于提纯，本发明不作特别限定，可以是本领域常用的方法进行提纯。具体地，可以采用柱层析梯度洗脱进行提纯。优选地，在还原反应结束后，以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到本发明化合物。
以X为羟基，连接键M为酰胺键，Y为正己烷基的本发明化合物为例，其制备方法为：
将第三开环产物溶解在溶剂中，常温高速搅拌，加入与其摩尔比为1:2-1:6的催化剂，常温搅拌15分钟至1小时后，加入与OC-ROG摩尔比1:2-1:6的正己胺，常温搅拌12-24小时后过滤，滤液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析，得到产物化合物。
本发明的制备方法简单易行，原料易于获取，适合大批量生产。
<第三方面>
本发明的第三方面首先提供一种封闭剂，其包括根据本发明第一方面所述的化合物。该封闭剂中，其可以是将化合物溶于缓冲液中得到，具体地，所述缓冲液选自三羟甲基氨基甲烷缓冲液、磷酸缓冲液、硫酸铵缓冲液、硼酸缓冲液、2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸缓冲液、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液等中的一种或两种以上的组合。
进一步地，本发明的封闭剂还可以含有其它添加剂，例如：三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、叠氮化钠等中的至少一种。
进一步地，所述封闭剂还可以包括本领域其它各种已知具有封闭作用的化合物、聚合物或者蛋白质之类的生物材料。
进一步，本发明的第三方面还提供一种稀释液，其包括根据本发明第一方面所述的化合物；并且还包括磁珠稀释液、胶体金稀释液、胶乳稀释液、AE标记物稀释液、鲁米诺标记物稀释液、异鲁米诺标记物稀释液、AP标记物稀释液、HRP标记物稀释液、荧光标记物稀释液、量子点标记物稀释液、上转发光材料标记物稀释液、电化学发光材料标记物稀释液或样本稀释液中的至少一种。
进一步，本发明的第三方面还提供一种检测试剂，其包括本发明第一方面所述的化合物，还包括选自磁珠、胶体金、胶乳、AE标记物、鲁米诺标记物、异鲁米诺标记物、AP标记物、HRP标记物、荧光材料标记物、量子点材料标记物、上转发光材料标记物、电化学发光材料标记物中的至少一种。
荧光材料主要包括异硫氰酸荧光素、四乙烯基罗丹明、四甲基异硫氰酸罗丹明、与酶作用后产生荧光的物质和镧系等。量子点材料主要选自硒化镉胶体量子点、碲化镉胶体量子点、硒化镉/硫化锌核壳结构胶体量子点、铯铅溴钙钛矿量子点、铯铅碘钙钛矿量子点等，其中，所述硒化镉/硫化锌核壳结构胶体量子点是以硒化镉为核、硫化锌为壳的核壳结构胶体量子点。上转发光材料是一种由稀土元素掺杂于晶体的晶格中构成的特殊材料，其在近红外光激发下，可以将所吸收的低能近红外光子通过多光子吸收或者能量传递转化为高能量可见光。电化学发光剂包括三联吡啶钌等。
本发明命名的“××标记物”是指连接有前缀“××”材料的试剂成分，本发明命名的“××稀释液”是指用于在免疫检测过程/检测试剂制备过程中溶解前缀“××”材料的试剂溶液。
AE标记物包括吖啶酯标记的抗体、吖啶酯标记的抗原、以及吖啶酯标记的其它检测试剂中的材料，该材料可以例如是载体蛋白、载体聚合物、载体化合物等。同理，鲁米诺标记物、异鲁米诺标记物、AP标记物、HRP标记物、荧光材料标记物、量子点材料标记物、上转发光材料标记物、电化学发光材料标记物也相应地如此理解。
另外，本发明的第三方面还提供一种试剂盒，其包括根据本发明第一方面所述的化合物。
进一步，本发明的第三方面还提供一种根据本发明第一方面所述的化合物或上述的封闭剂或稀释液或检测试剂或试剂盒在封闭固相载体中的应用；优选地，所述固相载体选自微球、板和膜中的至少一种；更优选地，所述固相载体选自磁性微球、塑料微球、胶乳微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜中的至少一种。
使用本发明化合物成分进行各个检测平台和很多检测项目的免疫测定，封闭固相载体和其他试剂分子表面的效果显著提高，大大降低了检测本底(背景噪声)，使得灵敏度有显著提高。因此，本发明化合物可用于提升各个检测平台(包括但不限于化学发光检测平台、Elisa检测平台、免疫层析检测平台等)的检测试剂性能，应用价值高。
实施例
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
β-1,4-(2,3-二醛基)开环葡聚糖(OA-ROG)的制备
将β-1,4-葡聚糖溶解或分散在10mL超纯水中，使β-1,4-葡聚糖的浓度为0.01mol/L；然后常温高速搅拌，加入高碘酸钠，使反应液中高碘酸钠的浓度为0.04mol/L；高速搅拌24小时。反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60℃干燥48小时，得到产物OA-ROG。
实施例2
β-1,4-(2,3-二羟基)开环葡聚糖(OH-ROG)的制备
将OA-ROG溶解在10mL超纯水中，使OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.015mol/L；高速搅拌24小时。反应结束后以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60℃干燥48小时，得到产物OH-ROG。
实施例3
β-1,4-(2，3-二羧基)开环葡聚糖(OC-ROG)的制备
将OA-ROG溶解在10mL超纯水中，使OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入次氯酸钠，使反应液中次氯酸钠的浓度为0.015mol/L；滴加500μL冰乙酸，高速搅拌60小时。反应结束后以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60℃干燥48小时，得到产物OC-ROG。
实施例4
O-CN-C6的制备
将OA-ROG溶解在10mL超纯水中，使反应液中OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入正己胺，使反应液中正己胺的浓度为0.04mol/L；高速搅拌2小时后，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.04mol/L；常温高速搅拌6小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CN-C6。
实施例5
O-CO-C6的制备
将OH-ROG溶于10mL pH为8的稀碱溶液中，OH-ROG的浓度为0.01mol/L；平衡至4℃，加入正己醛，正己醛的浓度为0.012mol/L；4℃下搅拌16小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CO-C6。
实施例6
O-CONH-C6的制备
将OC-ROG溶解在10mL二氯甲烷中，使OC-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入二环己基碳二亚胺和对二甲氨基吡啶，使反应液中二环己基碳二亚胺的浓度为0.02mol/L，二甲氨基吡啶的浓度为0.02mol/L，常温搅拌15分钟后，加入正己胺，使反应液中正己胺的浓度为0.04mol/L；常温搅拌16小时后过滤，滤液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CONH-C6。
实施例7
O-CN-C2的制备
将OA-ROG溶解在超纯水中，使反应液中OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入乙胺，使反应液中乙胺的浓度为0.04mol/L；高速搅拌2小时后，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.04mol/L；常温高速搅拌6小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CN-C2。
实施例8
O-CN-C12的制备
将OA-ROG溶解在超纯水中，使反应液中OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入正十二胺，使反应液中正十二胺的浓度为0.04mol/L；高速搅拌4小时后，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.04mol/L；常温高速搅拌6小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CN-C12。
实施例9
O-CN-Ph的制备
将OA-ROG溶解在超纯水中，使反应液中OA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入苯乙胺，使反应液中苯乙胺的浓度为0.04mol/L；高速搅拌4小时后，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.04mol/L；常温高速搅拌6小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物O-CN-CPh。
实施例10
β-1,4-(2,3-二醛基)开环葡聚糖(CA-ROG)的制备
将β-1，4-葡聚糖溶解或分散在超纯水中，使β-1,4-葡聚糖的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入四甲基哌啶氧化物，使反应液中四甲基哌啶氧化物的浓度为0.04mol/L；高速搅拌36小时。反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60℃干燥48小时，得到中间产物CA-G。
将CA-G溶解或分散在超纯水中，使CA-G的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入高碘酸钠，使反应液中高碘酸钠的浓度为0.04mol/L，高速搅拌24小时。反应结束后呈溶液状态的，以50-100％正己烷-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，60℃干燥48小时，得到产物CA-ROG。
实施例11
C-CN-C6的制备
将CA-ROG溶解在超纯水中，使CA-ROG的浓度为0.01mol/L；常温高速搅拌，加入正己胺，使反应液中正己胺的浓度为0.04mol/L，高速搅拌2小时后，加入硼氢化钠，使反应液中硼氢化钠的浓度为0.04mol/L，常温高速搅拌6小时后，溶液以10-100％甲醇-乙酸乙酯混合溶剂进行柱层析梯度洗脱，得到产物C-CN-C6。
应用实施例
分别称取上述实施例4-11的产物，以0.1％的质量体积浓度，溶于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，分别加入氯化钠，其中氯化钠的浓度为0.05mol/L，搅拌溶解，使用0.22μm微孔滤膜真空抽滤，加入0.02％叠氮化钠保存，得到本发明封闭剂。
应用实施例性能检测
接下来是对本发明的化合物和含有本发明化合物的本发明封闭剂的封闭固相载体和其他试剂分子表面的测试效果验证。
如果是使用含有本发明化合物的本发明封闭剂，则该封闭剂可以作为单独的固相载体封闭剂产品搭配市售的任何免疫诊断试剂盒(例如化学发光检测试剂盒、ELISA检测试剂盒、胶体金试剂盒、胶乳比浊试剂盒等)使用，此时本发明封闭剂就是用于预封闭固相载体，在操作时就是先用该固相载体封闭剂产品与免疫诊断试剂盒中的固相载体(例如磁珠、多孔包被板、荧光微球、胶乳微球、胶体金、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜)孵育一段时间，然后再依据免疫诊断试剂盒的说明书流程操作。本领域技术人员也可以根据实际需要将本发明封闭剂(后续可直接从菲鹏生物购买)掺入市面上已有的检测体系涉及的稀释液或者检测试剂中发挥封闭作用。
如果是将本发明化合物作试剂添加成分使用，则该化合物可加入到固相载体稀释液中、标记蛋白稀释液中(标记蛋白包括例如吖啶酯标记的抗体或抗原、碱性磷酸酶标记的抗体或抗原、辣根过氧化物酶标记的抗体或抗原、生物素标记的抗体或抗原、亲和素标记的抗体或抗原)或者样本稀释液中。因为进行免疫测定时，最终样本、固相载体、标记蛋白都会混合在一起，化合物掺入在稀释液中也能在后续发挥封闭固相载体的作用。
本发明的化合物和含有本发明化合物的本发明封闭剂的效果测试流程并不限于下文详述的那些。本领域技术人员可以使用本发明提供的化合物和封闭剂，结合市面上已有的各个检测平台和各个检测项目进行验证。虽然下文只列举了ELISA和化学发光共2个检测平台，以及有限数目的检测项目的验证数据。但根据已掌握的数据看，本发明化合物和本发明封闭剂具有普适性，可适用大多数主流检测平台和几乎全部的检测项目。其中，这些检测项目可以以整体解决方案(试剂盒)的形式任意商购获得，例如HIV检测项目试剂整体解决方案可以从菲鹏生物购买(www.faponbiotech.com/solution/details_39_158.html)。菲鹏生物也商业化提供NT-proBNP检测项目(例如货号NT-proBNP McAb10包被，NT-proBNPMcAb2标记；NT-proBNP McAb10包被，NT-proBNP McAb5标记)、HBsAg检测项目(例如货号Sab-31#包被，sag-1-HRP标记)、HIV检测项目(例如货号CMIA-HIV-Ag1包被，CMIA-HIV-Ag14包被，CMIA-HIV-Ag4标记，CMIA-HIV-Ag3标记)、CA724检测项目(例如货号CA724-McAb5#包被，CA724-McAb6#标记；CA724-McAb2#包被，CA724-McAb1#标记)、CA153检测项目(例如货号CA153-REAB-C1-005包被，CA153-REAB-C1-007标记；CA153-REAB-C1-004包被，CA153-REAB-C1-007标记)、Pro-GRP检测项目(例如货号GRP-McAb4包被，GRP-McAb5标记)、SCCA检测项目(例如货号SCC-McAb5#包被，SCC-McAb6#标记)、CK-MB检测项目(例如货号CK-MB-03标记，CK-MB-04包被)、孕酮检测项目、肾素检测项相关的抗体/抗原原料，本领域技术人员可以用这些抗体/抗原原料根据其自身建立的工艺，或根据类似于下文的工艺制备得到检测试剂(例如表面包被抗体/抗原的磁珠、表面包被抗体/抗原的胶乳、表面包被抗体/抗原的荧光微球、表面包被抗体/抗原的胶体金、吖啶酯标记抗体/抗原、碱性磷酸酶标记抗体/抗原、辣根过氧化物酶标记抗体/抗原)。然后本领域技术人员可以根据其自身建立的检测流程，或根据类似于下文的检测流程测试本发明化合物和本发明封闭剂的效果。
化学发光免疫检测(用本发明封闭剂预封闭磁珠)
具体采用shine I2000仪器进行化学发光免疫检测。
将5mg表面包被抗体/抗原的磁珠(NT-proBNP检测项目用表面包被抗体的羧基磁珠、HIV检测项目用表面包被抗原/抗体(HIV-1型抗原、HIV-2型抗原或P24抗体)的Tosyl磁珠、CA724检测项目用表面包被抗体的羧基磁珠、CA153检测项目用表面包被抗体的SA磁珠、HBsAg检测项目用表面包被抗体的tosyl磁珠)分别分散在500μL对照封闭剂和本发明封闭剂中，清洗一次，重新分散，25℃孵育16小时。将封闭完成的磁珠重新分散在500μL工作液中，以双抗体夹心法，借助吖啶酯化学发光的检测手段(也可以根据实际需要采用碱性磷酸酶的酶促发光检测手段)进行噪音RLU0和发光信号RLUn检测，并计算信噪比(表示为符号P/Nn或Sn/C0)。其中，RLU表示化学发光检测仪器读取的相对发光单位，下标数字n表示测试的样本浓度，单位以ng/ml计算；RLU0表示浓度为0的样本即空白样本的检测信号值，可以理解为背景噪声。
对照封闭剂配方如下表所示：
化学发光免疫检测(用本发明化合物作检测试剂稀释液添加成分)
操作流程同上，区别在于不再用本发明封闭剂孵育磁珠，而是将本发明化合物添加到磁珠稀释液、标记蛋白稀释液或样本稀释液中发挥封闭作用。
羧基磁珠表面包被抗体/抗原工艺
(1)取10mg羧基磁珠用50mMMES洗涤4次，每次1mL,之后加0.8mL活化缓冲液，超声分散，加入0.1mL NHS和0.1mL EDC,充分混匀，室温旋转(30rpm)反应10分钟；(2)磁分离，弃去上清，加入50mMMES及抗体/抗原，室温旋转(30rpm)反应4小时；(3)洗涤2次，每次1mL并加入1mL保存液，室温旋转(30rpm)反应4小时；(4)重悬至10mg/mL。
tosyl磁珠表面包被抗体/抗原工艺
(1)用1mL的磷酸缓冲液洗涤Tosyl磁珠，磁分离，弃上清液。
(2)加入200μL CB缓冲液、0.1mg抗体/抗原(15μg/mg Tosyl磁珠)和100μL硫酸铵，在37℃环境下，置于旋转混匀仪上以20rpm的转速旋转20-28小时，使抗体/抗原与磁珠偶联。
(3)用1mL的磷酸缓冲液洗涤磁珠三次后磁吸弃上清液。
(4)加入磁珠保存液，在37℃环境下，置于旋转混匀仪上以20rpm的转速旋转24小时。
(5)用含有Tween-20的tris缓冲液洗涤。
(6)磁珠重悬在含BSA的tris缓冲液中，2-8℃保存。
吖啶酯偶联抗体/抗原工艺
抗体/抗原(5mg/mL)用ZebaTM脱盐柱(10K MWCO)置换到PBS(10mM PB，50mM氯化钠，pH7.4,5mM EDTA)缓冲液中。10mM的NHS-AE(10eq,DMSO溶解)，添加到30uM的抗体溶液中，25℃条件下反应1个小时。反应完后，脱盐除去多余的试剂，得到抗体-吖啶酯缀合物，置于4℃下保存备用。
碱性磷酸酶(AP)偶联抗体/抗原工艺
(1)抗体/抗原的巯基化修饰：
抗体/抗原(5mg/mL)用ZebaTM脱盐柱(10K MWCO)置换到PBS(100mM PB，50mM氯化钠，pH8.0，5mM EDTA)。Traut’s reagent(Pierce)用PBS(100mM PB，50mM氯化钠，pH7.4,1mMEDTA)配置成10mM溶液。在抗体溶液中加入10eq的Traut’s reagent，25℃下温和振荡(400rpm)反应2个小时。脱盐除去多余的试剂，巯基化修饰的抗体/抗原置于4℃下保存备用。
(2)碱性磷酸酶的马来酰亚胺修饰：
碱性磷酸酶(5mg/mL)用ZebaTM脱盐柱(10K MWCO)置换到PBS(10mM PB，50mM氯化钠，pH7.4,5mM EDTA)缓冲液中。10mM的SMCC(10eq,DMSO溶解)，添加到40uM的碱性磷酸酶溶液中，25℃条件下反应1个小时。脱盐除去多余的试剂，马来酰亚胺修饰的AP置于4℃保存备用。
(3)巯基化的抗体/抗原和马来酰亚胺化的碱性磷酸酶交联：
巯基修饰的抗体/抗原(4mg/mL)和马来酰亚胺修饰的AP(4mg/mL)在PBS(10mM PB，50mM氯化钠，pH7.4)缓冲液中25℃反应1个小时。反应完后，置于4℃下保存备用。
ELISA检测(预封闭)：
(1)用针对抗原的包被抗体/抗原来包被ELISA板，使用pH9.6的磷酸盐缓冲液稀释包被抗体/抗原，包被抗体/抗原的包被浓度为3μg/mL。
将稀释后的包被抗体/抗原加在ELISA板上，加入量为100μL/孔，4℃过夜包被。用PBST溶液清洗4次，再用本发明封闭剂或者BSA蛋白封闭剂或者其它竞品封闭剂封闭2h。用PBST溶液清洗4次后，干燥保存，即得包被抗体/抗原包被的ELISA板。
分别将50μL待测样品和对照样本加入至由包被抗体/抗原包被的ELISA板的相应孔中，对待测样品采用二倍稀释法，利用PBS缓冲液稀释。添加完后的ELISA板置于37℃温育30min，温育后甩去溶液，PBS缓冲液洗涤5次后甩干。
每孔加入100μL含有标记抗体/抗原的AP酶标物工作液，添加完后ELISA板置于37℃温育30min，温育后甩去溶液，PBS缓冲液洗涤5次后甩干。
每孔加入50μL底物A液(10％H2O2)及50μL底物B液(0.05m/v％TMB，3,3’,5,5’-四甲基联苯胺)，震荡混匀后室温避光孵15min。每孔加入50μL终止液(2mol/L硫酸)，测定OD450处的吸光值(也可按实际需要，采用HRP的酶促发光策略)。
其中，包被抗体和标记抗体分别是指原料抗体推荐配对(例如上文引用的菲鹏生物商业化提供的原料抗体配对)中的包被抗体和标记抗体，包被抗原和标记抗原是指原料抗原推荐配对中的包被抗原和标记抗原(例如上文引用的菲鹏生物商业化提供的原料抗原配对)。
术语说明：
HIV-I型磁珠表示用HIV-1型抗原包被表面的磁珠。HIV病毒常见类型为HIV-1型，少见类型为HIV-2型。而HIV-1型又有很多亚型，可归类为M、O和N三个组。P24蛋白为HIV的核衣壳蛋白，其氨基酸序列在HIV各毒株之间高度保守，可作为抗原应用于全部类型HIV感染的检测。高值指相对高浓度的校准品，低值指相对低浓度的校准品，用于样本对照。
验证1.本发明封闭剂在化学发光平台的封闭性能验证(预封闭)
1.1不同连接键M的影响验证
采用shine I2000仪器按上述方法在NT-proBNP检测项目进行化学发光免疫检测，不同连接键M对封闭性能的影响结果如下表1所示：
表1
表1示出了化合物中存在不同的连接键M时，对封闭效果的影响不大，连接键M的选 择不是化合物性能决定因素。从数据可以看出，无论连接键是何种化学基团，所有的本发明封闭剂均比BSA封闭剂抑制噪音的能力更强，同时带有部分提升发光信号的效果，进而较明显的增强信噪比，提升试剂检测灵敏度。
1.2不同X与Y基团的影响验证
采用shine I2000仪器按上述方法在NT-proBNP检测项目进行化学发光免疫检测，不同X与Y基团对封闭性能的影响结果如下表2所示：
表2
从表2结果可知，不同的Y基团对化合物的封闭性能有较大影响，该化合物的封闭机理主要是通过疏水的Y基团封闭固相载体表面的疏水性位点，再通过亲水的X基团形成阻挡干扰蛋白非特异性吸附的水和层，从而降低噪音，提升灵敏度。当Y基团过小，例如Y基团含C2时，化合物封闭疏水位点的作用弱化，进而导致噪音上升，灵敏度下降。而当Y基团过大，例如Y基团含C12时，基团柔性大，空间位阻强，会在影响封闭作用的同时阻挡抗体抗原复合物的结合，进而影响实际灵敏度。因此Y基团不可过大或过小，当Y基团含C6时，化合物封闭性能最优。
另外，当X基团选择羟基或是羧基，对整体的封闭效果影响较小，因此非特殊情况下，X基团的具体选择不重要，只要是X基团亲水性足够即可保证封闭效果。当然，X基团若进行进一步的化学修饰，其碳链长度和空间位阻效应需要得到注意和有效控制。
1.3本发明封闭剂在宽浓度范围具有良好封闭性能
不同浓度的O-CN-C6对封闭性能的影响， 采用shine I2000仪器按上述方法调整O-CN-C6的浓度为下表1所示进行化学发光免疫检测， 结果如下表3所示：
表3
由表3可以看出，本发明封闭剂在较大区间的浓度范围内都能有效发挥封闭作用，这体现了本发明封闭剂的强效作用。
1.4本发明封闭剂与竞品的对比验证(以O-CN-C6作为具体的本发明化合物/封闭 剂进行后文验证过程)
1.4.1 HBsAg检测项目
选取本发明封闭剂FP MAP、和市场上的封闭剂CandorPlate Block、JSRBlockmaster CE510、日油206(也写作Bio Lipidure 206)以及蛋白封闭剂BSA，用shineI2000仪器在HBsAg检测项目进行化学发光免疫检测，与本发明的封闭剂进行对比，具体结果如下表4所示：
表4
使用本发明封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度最优异。
1.4.2 HIV检测项目
选取3种BSA蛋白封闭剂和4种竞品封闭剂与本发明的封闭剂进行效果对比， 结果如下表5所示。
表5
由表5可以看出， 采用本申请的封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度和本底消除最优异。
1.4.3 CA724检测项目
采用化学发光检测方法， 对梯度浓度的CA724校准品(0-201.4U/mL)进行相关检测， 结果如下表所示。
表6
由表6可以看出，采用本申请的封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度和本底消除最优异。
1.4.4NT-proBNP检测项目
采用化学发光检测方法，对梯度浓度的NT-proBNP校准品(0、107.09、38369.72pg/mL)和梯度浓度的阳性临床样本(﹤10-33296pg/mL,由罗氏诊断公司测定赋值的阳性临床样本)进行相关检测，结果如下表所示。
表7
由表7可以看出，采用本申请的封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度和本底消除最优异。
1.4.5孕酮检测项目
采用化学发光检测方法(竞争法)，对孕酮临床样品进行相关检测，结果如下表8所示。
表8
临床样品浓度(ng/mL) BSA封闭剂 FP MAP封闭剂
0(S0) 2896835 2878042
0.067(S1) 2626481 2600846
47.296(S2) 188894 180160
58.616(S3) 162438 135229
S2/S3 1.16 1.33
S1/S3 16.2 19.2
S0/S3 17.8 21.3
由表8可以看出，采用本申请的封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度和本底消除优于使用BSA封闭剂。
1.4.6肾素检测项目
采用化学发光检测方法(竞争法)，对肾素临床样品进行相关检测，结果如下表9所示。
临床样品浓度(ng/mL) BSA封闭剂 FP MAP封闭剂
0(S0) 1389 1097
8.021(S1) 12498 11827
40.72(S2) 35289 35463
S1/C1 8.99 10.78
S2/C1 25.4 32.3
由表9可以看出，采用本申请的封闭剂进行预封闭的试验组的检测灵敏度和本底消除优于使用BSA封闭剂。
综合表4-表9的竞品封闭剂与本发明封闭剂的性能对比数据可看出，根据项目不同，市场主流封闭剂的封闭效果或接近持平于本发明封闭剂，或远不本发明封闭剂。因此，通过本发明通过化学合成手段合成的化合物的封闭效果在同类试剂中应属优秀。
1.5本发明封闭剂的噪音CV值与加速稳定性测试
加速稳定性测试：将5mg表面包被抗体的磁珠分散在500μL本发明封闭剂中，清洗一次，重新分散，25℃孵育16小时。将封闭完成的磁珠重新分散在500μL工作液中，分别置于37℃孵育3，5和7天，以双抗体夹心法，借助吖啶酯化学发光的检测手段进行噪音RLU0和发光信号RLUn检测，计算发光信号衰减趋势。
噪音CV值测试：将5mg表面包被抗体的磁珠分散在500μL本发明封闭剂中，清洗一次，重新分散，25℃孵育16小时。将封闭完成的磁珠重新分散在500μL工作液中，以双抗体夹心法，借助吖啶酯化学发光的检测手段进行噪音RLU0检测，连续测定30次，计算CV值。
采用SCCA检测项目进行连续30次测定噪音RLU0的实验，进行计算后，其30组数据CV值为3.11％，低于5％，属于较优范围。
采用NT-proBNP检测项目进行加速稳定性测试，结果如图1所示。
由图1可以看出，经过37℃热加速7天的试剂，相当于在4℃的冰箱中存放一年，其发光信号降幅5.74％，低于10％，故本发明封闭剂热稳定性强，试剂性能可以通过试剂检验标准。
1.6本发明封闭剂对不同厂家和类型磁珠的封闭效果验证
选取市场上购买的不同磁珠，用shine I2000仪器在NT-proBNP检测项目、GRP检测项目、SCCA检测项目、CK-MB检测项目、ST II检测项目进行化学发光免疫检测，与本发明的封闭剂进行对比，具体结果如下表10所示：
表10
从表10看出，在不同品牌的不同羧基磁珠、Tosyl磁珠或链霉亲和素磁珠进行各个检测项目的测试，可判断使用本发明封闭剂的封闭效果都优于BSA封闭剂或至少持平BSA封闭剂。
可见，本发明的化合物低、提纯简单，以其为主要成分配制的本发明封闭剂可以替换BSA封闭剂，达到节省成本且优化试剂检测灵敏度的效果。
验证2.本发明封闭剂在ELISA平台的封闭性能验证(预封闭)
进行HIV检测项目的ELISA多孔板的封闭效果测试(抑制AE标记物和AP标记物的非特异性吸附的测试)。
该项目中抗原-AE为HIV I型抗原标记吖啶酯，抗原-AP为HIV I型抗原标记碱性磷酸酶，抗体-AE为HIV p24抗体标记吖啶酯，抗体-AP为HIV p24抗体标记碱性磷酸酶。BSA S、BSA P、BSA B为三种不同厂家生产的BSA封闭剂；DB1130、日油206(也写作Bio Lipidure206)、Candor P以及Candor S均为市场上购买得到的封闭剂。
按上述方法获得相应的检测试剂后，采用ELISA检测方法进行HIV检测项目相关检测，分别用上述BSA封闭剂、竞品封闭剂和本发明封闭剂预封闭Elisa多孔板，然后加入上述AE标记物或AP标记物，检测反应信号。结果如图2所示，其中图1中的柱状图表示不同封闭剂的在ELISA板上非特异性吸附抑制情况：
由图2可以看出，采用本发明化合物制备得到的封闭剂的在ELISA板上非特异性吸附抑制效果最优异。
验证3.本发明化合物作为检测试剂中的添加成分的效果验证(不预封闭)
在化学发光平台，进行多个检测项目的固相载体封闭效果测试。分别采用本发明化合物和BSA蛋白以及其它竞品封闭剂作为检测试剂稀释液中的添加成分，即加入磁珠稀释液中，或加入AE稀释液(吖啶酯标记抗体/抗原)中，或加入样本稀释液(校准品稀释液)中，原始磁珠稀释液的组成为：25mM MES、0.15mol/L NaCl、1.0％(m/v)酪蛋白钠盐、0.05％(v/v)Tween-20、0.05％(v/v)Tritonx-100；原始AE稀释液的组成为：25mM PB、0.03mol/LNaCl、1.0％(m/v)酪蛋白钠盐/0.1％(v/v)Tween-20和0.05v/v％-0.2v/v％proclin 300。采用shine I2000仪器按上述方法进行化学发光免疫检测。
3.1HIV检测项目验证
采用化学发光检测方法对阴性临床样本和阳性临床样本进行相关检测，测试封闭效果。
其中，检测结果如表11所示，表11中，P1/N、P2/N、P3/N、P4/N、分别对应于血清质控品中HIV-1M组低值组(阳性临床样本)、HIV-2高值组(阳性临床样本)、HIV-1O组低值组(阳性临床样本)以及P24(用阴性血清配制的P24抗原-含量625IU/mL)组的信躁比。高值组样本是从医院收购的检测值异常高的阳性血清，而低值组样本是稀释5倍的高值组样本。
表11
由表11可以看出，通过往稀释液中添加BSA或本发明化合物的实验可以看出，往AE稀释液或磁珠稀释液中加入本发明化合物能以比BSA更大的程度降低本底(即阴性质控RLU值)，当在AE稀释液和在磁珠稀释液中都加入本发明封闭剂，能最大程度抑制固相载体表面非特异吸附，降低检测本底值。
另外，对103份阴性随机临床血清样本进行检测，比较各种封闭剂降低检测本底的效果，如图3所示。结果表明，在AE稀释液和在磁珠稀释液中都加入本发明封闭剂能最显著地降低检测本底。
3.2CA724检测项目验证
采用化学发光检测方法，对梯度浓度的CA724校准品(0-201.4U/mL)进行相关检测，结果如下表12所示。
表12
由表12可以看出，通过往稀释液中添加本发明化合物或竞品对照封闭剂的实验可以看出，采用本发明化合物的试验组的封闭效果最优。另外，发现有些厂家生产的BSA封闭剂会极大增加检测本底，这说明BSA作为生物技术制品存在生产批间差难控制的问题，有些厂家生产的BSA封闭剂存在干扰物质，会极大折损应用价值。
3.3NT-proBNP项目检测
采用化学发光检测方法，对梯度浓度的NT-proBNP校准品(0、107.09、38369.72pg/mL)和梯度浓度的阳性临床样本(﹤10-33296pg/mL,由罗氏诊断公司测定赋值的阳性临床样本)进行相关检测，结果如下表13所示。
表13
由表13可以看出，通过往稀释液中添加本发明化合物或竞品对照封闭剂的实验可以看出，采用本发明化合物的试验组的本底最低，灵敏度最高。
需要说明的是，尽管以具体实例介绍了本发明的技术方案，但本领域技术人员能够理解，本发明应不限于此。
以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。本文中所用术语的选择，旨在最好地解释各实施例的原理、实际应用或对市场中的技术改进，或者使本技术领域的其它普通技术人员能理解本文披露的各实施例。

Claims (12)

1.一种化合物，其特征在于，所述化合物具有如下式(I)所示的结构或其衍生物：
其中，结构单元A位于化合物的骨架结构中，所述结构单元A源自于含有氨基酸分子的化合物单体，或源自于杂环化合物；
M、Z相同或不同；相互独立地表示直接键或二价连接基团；
X表示亲水基团，且X通过亚烷基或单键连接在结构单元A上；
Y表示疏水基团，且Y通过亚烷基或单键与M相连接；
n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数；并且，
当n>1时，A每次出现时相同或不同，X每次出现时相同或不同，Y每次出现时相同或不同，M每次出现时相同或不同，以及Z每次出现时相同或不同。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，M和Z各自独立的表示单键、双键、酰胺键、醚键、硫醚键或碳氮单键；
X表示羟基、醛基、氨基或羧基；
Y表示酯基、取代基取代或未取代的碳原子数为2-15的烃基、取代基取代或未取代的芳香基、硝基或卤素原子；
优选地，所述亚烷基的碳原子数为1-10个；
优选地，Y表示取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烷基、取代基取代或未取代的碳原子数为5-10的烯基、取代基取代或未取代的碳原子数为6-12的芳香基、硝基或卤素原子。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，所述化合物的重均分子量为0.2-40kD；优选为0.2kD-10KD；和/或，
所述杂环化合物包括五元杂环化合物或六元杂环化合物；和/或，所述杂环化合物中的杂原子为O或S。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有如下结构之一：
其中，n为大于0的自然数，优选n为5-100的自然数。
5.一种根据权利要求1-4任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括利用化学合成的方法制备得到化合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，结构单元A源自于杂环化合物，所述制备方法包括以下步骤：
步骤1)对所述杂环化合物进行开环处理，得到开环产物；
步骤2)利用取代反应、加成反应、缩合反应、氧化反应或还原反应中的至少一种对所述开环产物进行后处理，得到化合物；
优选地，所述开环处理包括通过氧化反应或还原反应对所述杂环化合物进行开环处理。
7.一种封闭剂，其特征在于，包括根据权利要求1-4任一项所述的化合物。
8.根据权利要求7所述的封闭剂，其特征在于，所述封闭剂还包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠和叠氮化钠中的至少一种。
9.一种稀释液，其特征在于，包括根据权利要求1-4任一项所述的化合物；优选地，所述稀释液选自磁珠稀释液、胶体金稀释液、胶乳稀释液、AE标记物稀释液、鲁米诺标记物稀释液、异鲁米诺标记物稀释液、AP标记物稀释液、HRP标记物稀释液、荧光标记物稀释液、量子点标记物稀释液、上转发光材料标记物稀释液、电化学发光材料标记物稀释液或样本稀释液中的至少一种。
10.一种检测试剂，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的化合物；优选地，所述检测试剂还包括选自磁珠、胶体金、胶乳、AE标记物、鲁米诺标记物、异鲁米诺标记物、AP标记物、HRP标记物、荧光材料标记物、量子点材料标记物、上转发光材料标记物、电化学发光材料标记物中的至少一种。
11.一种试剂盒，其特征在于，包括根据权利要求1-4任一项所述的化合物。
12.一种根据权利要求1-4任一项所述的化合物或权利要求7-8任一项所述的封闭剂或权利要求9所述的稀释液或权利要求10所述的检测试剂或权利要求11所述的试剂盒在封闭固相载体中的应用；优选地，所述固相载体选自微球、板和膜中的至少一种；更优选地，所述固相载体选自磁珠、塑料微球、胶乳微粒、微孔板、玻璃、毛细管、尼龙和硝酸纤维素膜中的至少一种。
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