CN117969696A - 一种检测血清中类固醇激素的试剂盒及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及一种检测血清中类固醇激素的试剂盒及其应用。该试剂盒包括淋洗液A，其为含有氨水的甲醇水溶液；淋洗液B，其为含有甲酸的甲醇水溶液；以及洗脱液C，其为乙腈甲醇溶液。采用该试剂盒中的试剂配合PEP板进行前处理时，能够大幅降低待测样本中的磷脂含量，显著提高样本的测试准确度以及灵敏度；前处理后的样本无需氮吹和复溶即可上机检测，大幅提高检测效率。该试剂盒及配套的检测方法能满足线性范围、重复性、批间差、准确度等多方面的要求。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及一种检测血清中类固醇激素的试剂盒及其应用。
背景技术
荷尔蒙(Hormone)又称激素，是指体内的某一细胞、腺体或器官所产生的可以影响机体内其他细胞活动的化学物质，仅需很小剂量的荷尔蒙便可以改变细胞的新陈代谢。类固醇激素又称甾体激素，由性腺及肾上腺分泌，包括雄性激素、雌性激素和肾上腺皮质素，其分泌极其微量，并且随年龄、性别的不同而异，一般在nmol/L和pmol/L数量级，但其作用极为重要，在维持生命、生长发育、生育、炎症、肿瘤发生和情绪控制等方面具有广泛的调节作用。人体的内分泌系统分泌各种荷尔蒙，和神经系统一起调节人体的代谢和生理功能。正常情况下各种荷尔蒙处于平衡状态，如因某种原因使这种平衡被打破而造成内分泌紊乱，就会对身体和精神造成不良影响，甚至危及生命，因此临床上将测定类固醇激素水平作为很多疾病的诊断参考指标。
对于体内类固醇激素的超微量、高灵敏度、精确定量检测，近年来国际上首选液相色谱-串联质谱法(Liquid Chromatography tandem Mass Spectrometry，LC-MS/MS)。其中，待测样本中的磷脂含量会显著地影响到液相色谱-串联质谱法检测的准确度及灵敏度。
现有技术中，CN 111398446 A提供了一种超高效液相色谱-串联质谱技术检测血清中12种类固醇激素的方法，但是其前处理采用液相萃取的方式，杂质去除不够干净，而且萃取后的上清液体积多，需要花费较长的氮吹时间才能够吹干样品，前处理时间较长不适合临床上对于大批量样本的快速检测。CN 112051348 A公开了一种血清或血浆中类固醇激素的固相萃取方法，该前处理方法对于磷脂的去除效果仍然不佳。
发明内容
为解决上述现有技术的不足，特提出本发明。
首先，本发明提供了一种检测血清中类固醇激素的试剂盒，包括：
淋洗液A，其为含有氨水的甲醇水溶液；其中，氨水占淋洗液A的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液A的体积百分比为30％～40％；
淋洗液B，其为含有甲酸的甲醇水溶液；其中，甲酸占淋洗液B的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液B的体积百分比为30％～40％；
以及洗脱液C，其为乙腈甲醇溶液；其中，乙腈占洗脱液C的体积百分比为80％～85％。
本发明通过对淋洗液和洗脱液组合的大量摸索尝试后发现，采用上述特定浓度的淋洗液A、淋洗液B以及洗脱液C配合PEP板进行固相萃取血清样本时，能够使得进入液相色谱的待测样本中的磷脂含量大幅降低，同时对于皮质醇(COR)、睾酮(T)、17-α羟孕酮(17-OHP)、双氢睾酮(DHT)、雄烯二酮(A4)、脱氢表雄酮(DHEA)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)这7种类固醇激素的富集效果好，从而显著提高样本的测试准确度以及灵敏度。
优选地，所述淋洗液A中，氨水占淋洗液A的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液A的体积百分比为32％～38％。
优选地，所述淋洗液B中，甲酸占淋洗液B的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液B的体积百分比为32％～38％。
优选地，所述洗脱液C中，乙腈占洗脱液C的体积百分比为82％～85％。
采用上述含量的两种淋洗液淋洗PEP板，对于磷脂的去除效果更佳；采用上述含量的洗脱液C洗脱，对于上述7种类固醇激素的富集效果更佳。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包括：
内标萃取液，其中包含目标浓度为2～6ng/mL的睾酮氘代物、800～1200ng/mL的硫酸脱氢表雄酮氘代物、5～15ng/mL的17-α羟孕酮氘代物、15～25ng/mL的双氢睾酮氘代物、5～15ng/mL的雄烯二酮氘代物、5～15ng/mL的皮质醇氘代物以及120～180ng/mL的脱氢表雄酮氘代物；所述内标萃取液的溶剂为甲醇。
优选地，所述睾酮氘代物为T-d3、硫酸脱氢表雄酮氘代物为DHEAS-d6、17-α羟孕酮氘代物为17-OHP-d8、双氢睾酮氘代物为DHT-d4、雄烯二酮氘代物为A4-d7、皮质醇氘代物为COR-d4、脱氢表雄酮氘代物为DHEA-d6。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包括：校准品和/或质控品；所述校准品和/或质控品的溶剂为BSA水溶液。
优选地，溶剂为0.4％～0.6％BSA水溶液。
在一些实施方案中，所述校准品包括校准品C1～C6；
C1中包含目标浓度为0.05～0.1ng/mL的睾酮、40～60ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.15～0.25ng/mL的17-α羟孕酮、0.3～0.5ng/mL的双氢睾酮、0.05～0.12ng/mL的雄烯二酮、3～5ng/mL的皮质醇以及3～5ng/mL的脱氢表雄酮；
C2中包含目标浓度为0.12～0.2ng/mL的睾酮、80～120ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.3～0.6ng/mL的17-α羟孕酮、0.6～1ng/mL的双氢睾酮、0.15～0.3ng/mL的雄烯二酮、6～12ng/mL的皮质醇以及6～12ng/mL的脱氢表雄酮；
C3中包含目标浓度为0.3～0.6ng/mL的睾酮、200～300ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.8～1.5ng/mL的17-α羟孕酮、1.5～3ng/mL的双氢睾酮、0.4～0.8ng/mL的雄烯二酮、15～25ng/mL的皮质醇以及15～25ng/mL的脱氢表雄酮；
C4中包含目标浓度为0.8～1.5ng/mL的睾酮、600～650ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、2～3ng/mL的17-α羟孕酮、4～8ng/mL的双氢睾酮、1～3ng/mL的雄烯二酮、40～80ng/mL的皮质醇以及40～80ng/mL的脱氢表雄酮；
C5中包含目标浓度为2～5ng/mL的睾酮、2000～3000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、8～15ng/mL的17-α羟孕酮、15～25ng/mL的双氢睾酮、4～6ng/mL的雄烯二酮、150～250ng/mL的皮质醇以及150～250ng/mL的脱氢表雄酮；
C6中包含目标浓度为6～10ng/mL的睾酮、4000～6000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、18～25ng/mL的17-α羟孕酮、30～50ng/mL的双氢睾酮、8～15ng/mL的雄烯二酮、300～500ng/mL的皮质醇以及300～500ng/mL的脱氢表雄酮。
在一些实施方案中，所述质控品包括质控品Q1～Q3；
Q1中包含目标浓度为0.2～0.5ng/mL的睾酮、100～200ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.5～2ng/mL的17-α羟孕酮、0.8～2ng/mL的双氢睾酮、0.1～1ng/mL的雄烯二酮、8～20ng/mL的皮质醇以及8～20ng/mL的脱氢表雄酮；
Q2中包含目标浓度为2～4ng/mL的睾酮、1500～2800ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、5～10ng/mL的17-α羟孕酮、10～18ng/mL的双氢睾酮、2～6ng/mL的雄烯二酮、100～200ng/mL的皮质醇以及100～200ng/mL的脱氢表雄酮；
Q3中包含目标浓度为5～10ng/mL的睾酮、3000～4000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、12～18ng/mL的17-α羟孕酮、25～35ng/mL的双氢睾酮、7～10ng/mL的雄烯二酮、250～350ng/mL的皮质醇以及250～350ng/mL的脱氢表雄酮。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包括流动相添加剂；所述流动相添加剂为浓度为0.03～0.08mM的氟化铵水溶液。
在一些实施方案中，所述试剂盒还包括洗针液；所述洗针液为体积百分比为40％～60％的甲醇水溶液。
进一步，本发明还提供了上述任一方案中的试剂盒在液相色谱-串联质谱法检测血清中类固醇激素中的应用；
所述类固醇激素为皮质醇、睾酮、17-α羟孕酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮中的至少一种。
优选地，所述应用的方法包括：
(1)将待测样本与内标萃取液和水混合后，离心分离获得上清液；
(2)采用PEP板纯化所述上清液后，依次采用淋洗液A和淋洗液B淋洗PEP板；
(3)采用洗脱液C洗脱所述PEP板，收集洗脱液；
(4)将所述洗脱液与水混合后，采用液相色谱-串联质谱进行检测。
优选地，所述PEP板在使用前，依次采用甲醇和水活化所述PEP板。
优选地，步骤(4)中，所述洗脱液与水按照体积比为1：(0.8～1.5)混合。
优选地，液相色谱的检测条件包括：
色谱柱为C18柱，规格为(2～3)×(80～100)mm，(3～5)μm；
流动相A为含有氟化铵的水溶液，流动相B为含有氟化铵的甲醇溶液。
优选地，液相色谱的洗脱程序为：
洗脱过程中，流动相A和流动相B的体积百分比之和为100％。
本发明进一步针对上述前处理后的样本，对流动相以及洗脱程序进行配套优化，发现在上述液相色谱的组合条件下，能够同时使得多种类固醇激素的峰型和响应值更佳。
优选地，流动相A包括体积比为1L：(0.3～0.7)mL的水和氟化铵水溶液；氟化铵水溶液的浓度为0.03～0.08mM。
更优选地，流动相A包括体积比为1L：(0.4～0.6)mL的水和氟化铵水溶液；氟化铵水溶液的浓度为0.04～0.06mM。
优选地，流动相B包括体积比为1L：(0.3～0.7)mL的甲醇和氟化铵水溶液；氟化铵水溶液的浓度为0.03～0.08mM。
更优选地，流动相B包括体积比为1L：(0.4～0.6)mL的甲醇和氟化铵水溶液；氟化铵水溶液的浓度为0.04～0.06mM。
优选地，洗脱过程中的流速为0.4～0.8mL/min；和/或，色谱柱的柱温为38～42℃。
在一些实施方案中，所述方法还包括：将待测样本替换为质控品或校准品进行检测。
在一些实施方案中，所述待测样本为人血清或血浆。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种血清中类固醇激素的液相色谱-串联质谱检测试剂盒，采用该试剂盒中的试剂配合PEP板进行前处理时，能够大幅降低待测样本中的磷脂含量，显著提高样本的测试准确度以及灵敏度；前处理后的样本无需氮吹和复溶即可上机检测，大幅提高检测效率。该试剂盒及配套的检测方法能满足线性范围、重复性、批间差、准确度等多方面的要求。
附图说明
图1是皮质醇(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图2是睾酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图3是17-羟孕酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图4是双氢睾酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图5是雄烯二酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图6是脱氢表雄酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
图7是硫酸脱氢表雄酮(左图)及其内标物(右图)的色谱图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例中未注明具体技术或条件者，均为常规方法或者按照本领域的文献所描述的技术或条件进行，或者按照产品说明书进行。所用试剂和仪器等未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
下述实施例中的试剂和材料如下：
1、试剂和重要耗材如表1所示。
表1
2、仪器设备如表2所示。
表2
实施例1
本实施例提供了一种检测血清中类固醇激素的试剂盒。试剂盒产品的主要组成如表3所示。
表3产品的主要组成
实施例2
本实施例提供了采用实施例1的试剂盒同时采用液相色谱-串联质谱仪检测人血清中的类固醇激素的方法。
(一)、前处理步骤：
(1)预处理：所有校准品、质控品及人血清样本各取400μL至2mL离心管中，分别加入400μL内标萃取液，2000rpm涡旋混匀10min，然后加入400μL水，2000rpm涡旋混匀5min，最后在4℃，12000rpm条件下离心5min，上清液待用。
(2)PEP板活化：依次用300μL甲醇和300μL水活化PEP板，废液弃去。
(3)加载样本：取800μL步骤(1)预处理后的上清液于活化后的PEP板中，缓慢通过，废液弃去。
(4)淋洗：依次用300μL淋洗液A和300μL淋洗液B淋洗PEP板，废液弃去。
(5)洗脱：在PEP板下放置新的96孔板，使用60μL洗脱液C洗脱，洗脱过后，再加入50μL水，混合均匀，4000rpm离心5min后即可上机检测。
(6)检测：于液相色谱-串联质谱仪上机检测。
(7)结果计算：以校准品标示浓度与对应内标的浓度比为x，相应峰面积的比值为y绘制校准曲线，根据待测样本中的类固醇激素及对应内标的峰面积的比值，即可计算出样本中皮质醇(COR)、睾酮(T)、17-α羟孕酮(17-OHP)、双氢睾酮(DHT)、雄烯二酮(A4)、脱氢表雄酮(DHEA)、硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)的含量。
(二)、液相色谱-串联质谱条件
1、液相色谱条件如表4所示。
表4液相色谱条件
2、质谱条件如表5和表6所示。
表5离子源参数
表6离子对参数
皮质醇、睾酮、17-羟孕酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮及其内标物的色谱图分别如图1～图7所示。
实施例3
本实施例对实施例1的试剂盒的外观、装量进行检测。
1、外观
(1)验证方法：随机取试剂盒中校准品各1瓶，在自然光下以矫正视力目视观察。
接受标准：包装完整、无破损；最小包装标签的文字、内容应清晰、准确，封口严密，无渗漏；组分应澄清，无沉淀、颗粒或絮状物。
(2)实验结果：
(a)试剂盒的各组份齐全、完整、无破损。
(b)最小包装标签的文字、内容清晰、准确，封口严密，无渗漏。
(c)液体组分澄清、透明，无沉淀、颗粒或絮状物。
(3)结论：满足接受标准。
2、装量
(1)验证方法：随机取一个试剂盒，用通用量具测量各液体组分的净含量。
(2)接受标准：试剂盒中各液体试剂的净含量应不少于标示值。
(3)实验结果如表7所示。
表7
| 装量 | 实测值 | 标示值 | 判定 |
| 校准品C1 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 校准品C2 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 校准品C3 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 校准品C4 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 校准品C5 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 校准品C6 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 质控品Q1 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 质控品Q2 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 质控品Q3 | 2.1mL | ≥2mL | 合格 |
| 内标萃取液 | 57mL | ≥55mL | 合格 |
| 淋洗液A | 46mL | ≥40mL | 合格 |
| 淋洗液B | 46mL | ≥40mL | 合格 |
| 洗脱液C | 16mL | ≥15mL | 合格 |
| 流动相添加剂 | 3mL | ≥3mL | 合格 |
(4)结论：试剂盒中各液体试剂的净含量不少于标示值，满足接受标准。
实施例4
本实施例对实施例1的试剂盒进行性能验证。
1、线性
(1)验证方法：用试剂盒中提供的校准品，按照说明书进行操作，连续进样3个批次。以稀释浓度为自变量，以检测结果为因变量求出线性回归方程，按下列公式和数据分析软件计算线性回归的相关系数r。
(2)接受标准：线性回归的相关系数r均≥0.990。
(3)实验结果如表8所示。
表8
(4)结论：COR，T，17-OHP，DHT，A4，DHEA及DHEAS的线性回归的相关系数r均≥0.990，满足接受标准。
2、方法准确度(加标回收率)
(1)验证方法：将已知浓度的高水平待测物A液(包含COR，T，17-OHP，DHT，A4，DHEA及DHEAS共7种化合物，A液可以直接选用合适的高浓度参考物质，若无参考物质，也可用与被测量一致的纯品进行配制，配制时应采用重量法，以减小配制过程中的不确定度)，加入到人的血清样本B液中，配制成至少3个不同浓度的回收样本，所加待测物A液与人的血清样本B液之间的体积比例为1：9，计算回收率，各样本各化合物的回收率(R)应在85％-115％范围内。
R＝(C实测值-C本底值)/C理论值×100％
R：回收率；
C实测值：根据线性拟合计算出的测量值的平均值；
C本底值：人的血清样本的本底值；
C理论值：配制后的样本的理论浓度。
(2)接受标准：COR，T，17-OHP，DHT，A4，DHEA及DHEAS的回收率(R)应在85％-115％范围内。
(3)实验结果如表9所示。
表9加标回收率结果
(4)结论：COR，T，17-OHP，DHT，A4，DHEA及DHEAS的低、高浓度样本回收率均在85～115％以内。
3、重复性
(1)验证方法：在重复性条件下，按照实施例1的检测方法，对于质控品Q1～Q3重复测试10次。按照下列公式计算重复性的变异系数(CV)。
CV：重复性的变异系数；
10次测量结果的平均值；
S：10次测量结果的标准差。
(2)接受标准：质控品Q1的变异系数CV≤20％，质控品Q2和3的变异系数CV≤15％。
(3)实验结果如表10所示。
表10重复性结果
(4)结论：质控品Q1的变异系数CV≤20％，质控品Q2和Q3的变异系数CV≤15％，满足接受标准。
4、批间差
(1)验证方法：使用三个不同批号的试剂盒测试质控品，分别测试10次，共30次。按照下列公式计算重复性的变异系数(CV)。
CV：重复性的变异系数；
30次测量结果的平均值；
S：30次测量结果的标准差。
(2)接受标准：质控品Q1的变异系数CV≤20％，质控品Q2和Q3的变异系数CV≤15％。
(3)实验结果如表11所示。
表11批间差结果
(4)结论：低值质控品的变异系数CV≤20％，高值质控品的变异系数CV≤15％，满足接受标准。
5、试剂盒质控品预期结果
(1)验证方法：在校准品拟合的曲线下，测定试剂盒内质控品，重复检测3次。
接受标准：质控品的检测结果应在该质控品定值的可接受范围内。
(2)实验结果如表12所示。
表12
(3)结论：质控品的检测结果在该质控品定值的可接受范围内。
综上，本发明的试剂盒T线性范围为0.08～8ng/mL，DHEAS线性范围为50～5000ng/mL，DHEA线性范围为4～400ng/mL，A4线性范围为0.1～10ng/mL，17-OHP线性范围为0.2～20ng/mL，DHT线性范围为0.4～40ng/mL，COR线性范围为4～400ng/mL，相关系数均r≥0.990；7种类固醇激素的加标回收率(R)均在85％-115％范围内；质控品Q1的重复性的变异系数(CV)≤20％，质控品Q2和Q3的重复性的变异系数(CV)≤15％；质控品Q1的批间变异系数(CV)≤20％，质控品Q2和Q3的批间变异系数(CV)≤20％；质控品Q1～Q3的预期结果都在可接受范围内。
对比例1
本对比例提供了一种类固醇激素的检测方法，其与实施例2的不同之处仅在于：
淋洗液A：含体积百分比0.05％氨水和35％甲醇的水溶液。
对比例2
本对比例提供了一种类固醇激素的检测方法，其与实施例2的不同之处仅在于：
淋洗液B：含体积百分比0.05％甲酸和35％甲醇的水溶液。
对比例3
本对比例提供了一种类固醇激素的检测方法，其与实施例2的不同之处仅在于：
洗脱液C替换为体积比50：50的乙腈甲醇溶液。
效果例
取对比例1～3检测方法前处理后的样本参照实施例4加标回收率测定方法进行加标回收率的测定。
测试结果如表13所示。
表13
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (10)
1.一种检测血清中类固醇激素的试剂盒，其特征在于，包括：
淋洗液A，其为含有氨水的甲醇水溶液；其中，氨水占淋洗液A的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液A的体积百分比为30％～40％；
淋洗液B，其为含有甲酸的甲醇水溶液；其中，甲酸占淋洗液B的体积百分比为0.1％～0.15％，甲醇占淋洗液B的体积百分比为30％～40％；
以及洗脱液C，其为乙腈甲醇溶液；其中，乙腈占洗脱液C的体积百分比为80％～85％。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，
所述淋洗液A中，氨水占淋洗液A的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液A的体积百分比为32％～38％；
所述淋洗液B中，甲酸占淋洗液B的体积百分比为0.1％～0.12％，甲醇占淋洗液B的体积百分比为32％～38％；
所述洗脱液C中，乙腈占洗脱液C的体积百分比为82％～85％。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：
内标萃取液，其中包含目标浓度为2～6ng/mL的睾酮氘代物、800～1200ng/mL的硫酸脱氢表雄酮氘代物、5～15ng/mL的17-α羟孕酮氘代物、15～25ng/mL的双氢睾酮氘代物、5～15ng/mL的雄烯二酮氘代物、5～15ng/mL的皮质醇氘代物以及120～180ng/mL的脱氢表雄酮氘代物；所述内标萃取液的溶剂为甲醇。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述睾酮氘代物为T-d3、硫酸脱氢表雄酮氘代物为DHEAS-d6、17-α羟孕酮氘代物为17-OHP-d8、双氢睾酮氘代物为DHT-d4、雄烯二酮氘代物为A4-d7、皮质醇氘代物为COR-d4、脱氢表雄酮氘代物为DHEA-d6。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：校准品和/或质控品；所述校准品和/或质控品的溶剂为BSA水溶液。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述校准品包括校准品C1～C6；
C1中包含目标浓度为0.05～0.1ng/mL的睾酮、40～60ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.15～0.25ng/mL的17-α羟孕酮、0.3～0.5ng/mL的双氢睾酮、0.05～0.12ng/mL的雄烯二酮、3～5ng/mL的皮质醇以及3～5ng/mL的脱氢表雄酮；
C2中包含目标浓度为0.12～0.2ng/mL的睾酮、80～120ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.3～0.6ng/mL的17-α羟孕酮、0.6～1ng/mL的双氢睾酮、0.15～0.3ng/mL的雄烯二酮、6～12ng/mL的皮质醇以及6～12ng/mL的脱氢表雄酮；
C3中包含目标浓度为0.3～0.6ng/mL的睾酮、200～300ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.8～1.5ng/mL的17-α羟孕酮、1.5～3ng/mL的双氢睾酮、0.4～0.8ng/mL的雄烯二酮、15～25ng/mL的皮质醇以及15～25ng/mL的脱氢表雄酮；
C4中包含目标浓度为0.8～1.5ng/mL的睾酮、600～650ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、2～3ng/mL的17-α羟孕酮、4～8ng/mL的双氢睾酮、1～3ng/mL的雄烯二酮、40～80ng/mL的皮质醇以及40～80ng/mL的脱氢表雄酮；
C5中包含目标浓度为2～5ng/mL的睾酮、2000～3000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、8～15ng/mL的17-α羟孕酮、15～25ng/mL的双氢睾酮、4～6ng/mL的雄烯二酮、150～250ng/mL的皮质醇以及150～250ng/mL的脱氢表雄酮；
C6中包含目标浓度为6～10ng/mL的睾酮、4000～6000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、18～25ng/mL的17-α羟孕酮、30～50ng/mL的双氢睾酮、8～15ng/mL的雄烯二酮、300～500ng/mL的皮质醇以及300～500ng/mL的脱氢表雄酮。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述质控品包括质控品Q1～Q3；
Q1中包含目标浓度为0.2～0.5ng/mL的睾酮、100～200ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、0.5～2ng/mL的17-α羟孕酮、0.8～2ng/mL的双氢睾酮、0.1～1ng/mL的雄烯二酮、8～20ng/mL的皮质醇以及8～20ng/mL的脱氢表雄酮；
Q2中包含目标浓度为2～4ng/mL的睾酮、1500～2800ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、5～10ng/mL的17-α羟孕酮、10～18ng/mL的双氢睾酮、2～6ng/mL的雄烯二酮、100～200ng/mL的皮质醇以及100～200ng/mL的脱氢表雄酮；
Q3中包含目标浓度为5～10ng/mL的睾酮、3000～4000ng/mL的硫酸脱氢表雄酮、12～18ng/mL的17-α羟孕酮、25～35ng/mL的双氢睾酮、7～10ng/mL的雄烯二酮、250～350ng/mL的皮质醇以及250～350ng/mL的脱氢表雄酮。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括流动相添加剂；所述流动相添加剂为浓度为0.03～0.08mM的氟化铵水溶液。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括洗针液；所述洗针液为体积百分比为40％～60％的甲醇水溶液。
10.权利要求1～9中任一项所述的试剂盒在液相色谱-串联质谱法检测血清中类固醇激素中的应用；
所述类固醇激素为皮质醇、睾酮、17-α羟孕酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮中的至少一种。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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