CN117919316A - 针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，独创地提出了从清热解毒、抗炎消炎、扶正祛邪邪、提高血氧饱和度、改变机体PH值至碱性、提高肠道免疫力以提高整体机能免疫力水平、增加T细胞、NK细胞数量、祛瘀排毒消瘤、抑制新血管生成、阻断雄性激素分泌、诱导癌细胞凋亡、软坚散结、提高通经活血以及减糖等多个方面入手，利用中医疗效结合细胞学原理的全因治疗方案，提供了一种结合中西医的机理互补中医和西医各自的缺陷，提出了一种具有高效抗前列腺癌且无耐药性的创新中药复方组合物，具有较好的社会价值和广阔的市场价值。

Description

针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，特别涉及一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物及其制备方法。

背景技术

前列腺癌(PCA)在全球是男性仅次于肺癌的第二大严重威胁人类健康和生命的恶性肿瘤，近几年全球性的前列腺癌的发病率和死亡率均呈显著上升趋势。前列腺癌作为严重威胁人类健康的恶性肿瘤，其治疗难度历来备受世界医学科技界高度关注，1966年前列腺癌内分泌治疗发现者哈金斯医师荣获泌尿外科唯一诺贝尔奖。据相关调查表明，导致前列腺癌的因素除了生活习惯、饮食外，雄性激素分泌过多也是其中一个诱因。雄性激素分泌过于旺盛，便会导致体内激素失去平衡而引发病变，而饮食、心理和视觉的性刺激过多等则会导致雄性激素分泌旺盛，而雄性激素分泌过多引起的前列腺癌被医学上称之为雄性激素依赖性前列腺癌。

当然除了雄性激素依赖型前列腺癌以外，还有雄性激素非依赖型前列腺癌，这一类前列腺癌患者大部分是由于长期吃了内分泌西药治疗后产生耐药性之后或者其他原因，进而导致由雄性激素依赖型前列腺癌转换为雄性激素非依赖型前列腺癌，。经过研究表明，雄性激素依赖型前列腺癌的靶向细胞是LNCaP，针对雄性激素非依赖型前列腺癌的靶向细胞是PC-3。

针对这两类前列腺癌的治疗目前主要还是依赖于阻断和/或阻止雄性激素分泌的内分泌药和靶向药物，然而此类靶向药物以破坏人体的细胞组织为代价，会引发患者生理机能的破坏并引发系列的并发症和副作用，且此类靶向药物均为单靶向或者单通道机制，其一般耐药期为1-2年，最终大多转为全身转移的晚期前列腺癌，增加患者痛苦和缩短生存期。当然市面上也有一些针对前列腺癌防治的中药配方，但是由于目前的中药配方更侧重于保健茶的功效，以提高患者自身免疫力为出发点，此类中药没有针对前列腺癌细胞的靶向点而导致其疗效差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，结合中西医的机理互补中医和西医各自的缺陷，提出了一种具有高效抗前列腺癌且无耐药性的创新中药复方组合物，具有较好的社会价值和广阔的市场价值。

第一方面，本方案提供一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，包括以下重量份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60，红景天10－30g，亚麻籽10-50g，乌贼墨10-30g。

在一具体的示例中，包括下列重要份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60g，红景天30g，亚麻籽40g，乌贼墨25g。

在一些实施例中，将所述中药复方组合物和药学上可接受的载体制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、糖浆剂、透皮贴剂、胶囊剂、微囊、片剂、颗粒剂或口服液剂型的药物。

本方案提供针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物可被用于制备治疗前列癌的药物，特别的，可被用于制备治疗雄性激素依赖性和非依赖型的前列腺癌的药物。

本发明的中药复方组合物可以作为药物单独使用或与其他药物联合使用。

第二方面，本方案提供了一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物的制备方法：

(1)浸泡：取11味中药复方组合物，加入中药复方组合物的药材量的15倍体积蒸馏水浸泡3小时，得到生药蒸馏水混合物；其中中药复方组合物包括以下重量份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60g，红景天10－30g，亚麻籽10-50g，乌贼墨10-30g；

(2)煎煮：将步骤(1)所述的生药蒸馏水混合物进行煎煮，煎煮次数为2次，每次煎煮1小时，得到中药粗提物；

(3)浓缩：将步骤(2)制备得到的中药粗提物蒸发浓缩，得到中药浓缩液，其中，水煎剂母液终浓度为1.5克生药/毫升；

(4)除菌：取步骤(3)制备得到的中药浓缩液通过0.22微米微孔滤膜过滤除菌，即得到所述中药复方组合物。

值得说明的是，不同于传统的前列腺癌中药配方，本方案提供的从清热解毒、抗炎消炎、扶正祛邪、提高血氧饱和度、改变机体PH值至碱性、提高肠道免疫力以提高整体机能免疫力水平、增加T细胞、NK细胞数量、祛瘀排毒消瘤、抑制新血管生成、阻断雄性激素分泌、诱导癌细胞凋亡、软坚散结、提高通经活血以及减糖等多个方面入手进行全因治疗，具体的机理说明：

清热解毒、抗炎消炎：本方案的中药复合物中的“鱼腥草、黄连”等都有显著的抗炎消炎或清热解毒的效果。根据研究报道，肿瘤往往发生在慢性炎症的部位，炎症细胞为肿瘤的生长提供良好的环境，刺激DNA损伤，增加基因不稳定性，重塑细胞外基质和促进肿瘤血管和淋巴管生成。在前列腺癌中普遍存在局灶性萎缩病变，这几乎伴随着炎症反应，故本方案通过“鱼腥草、黄连”的消炎效果来消除机理的炎症，以破坏肿瘤细胞的生长环境。

提高血氧饱和度:本方案的中药复合物中“三七、红景天”等可以很好地增加机体的氧气饱和程度。根据研究报道，增加氧气浓度可以通过改善肿瘤内部缺氧微环境进而改变血管生成开关的异常，从而抑制肿瘤血管的生成，并且可以通过促进ROS的产生诱导肿瘤细胞的凋亡，故本方案通过“三七、红景天”的增氧效果来改善机体的肿瘤生长环境。

调节机体PH值至碱性：本方案的中药复合物中的“黄芪”等有很好地调节机体PH值的效果。根据研究报道，癌症只能在酸性身体中形成，身体组织液酸化，泌尿系统组织细胞处于酸性液体中，进而形成泌尿系统组织细胞溶氧量下降，造成细胞的活性下降，代谢循环减慢，下降至正常值的65％左右时正常细胞就无法生存，进而形成真正的肿瘤实体，而肿瘤实体却无法在弱碱性的人体中形成。因体质酸化身体发生其他组织的癌变，又因泌尿系统组织细胞机能下降，泌尿系统组织细胞酸化，癌细胞乘虚而入，造成前列腺癌，故通过平衡身体PH至弱碱性将极大程度地预防和治疗肿瘤，故本方案通过“黄芪”实现体积PH的弱碱性调节。

提高肠道免疫力以提高免疫力：本方案的中药复合物中的“黄芪、刺五加”等能通过提高肠道免疫力提高机体免疫力的作用。提高机体免疫能力是免疫治疗的本质机理，通过机体自身的免疫能力实现自愈，可最大程度地减少对机体性能的破坏。且值得一提的是，本方案的“薏米仁、茯苓、刺五加、甘草、陈皮”的有效成分是通过提高肠道免疫力、提高整体机能的免疫力水平。从人体结构来说，肠道免疫力的增加是提高整体机体免疫力很重要的一部分，肠道免疫力约占人体免疫力的70％，本方案从肠道免疫力入手去提高机体的免疫力。

扶正祛邪以提高免疫力：本方案的中药复合物中的“刺五加、红景天、三七”等发挥扶正祛邪的效果，能明显提高免疫力及T细胞、NK细胞的数量。

抑制前列腺癌的新血管生成：本方案的中药复合物中的“鱼腥草、三七、乌贼墨”等都能起到抑制前列腺癌的新血管生成的效果。根据研究报道，实体肿瘤的侵袭、转移以及壮大离不开血液供应的增长，交感神经系统的神经能刺激新血管，促进前列腺癌生长，故本方案通过“鱼腥草、三七、乌贼墨”去抑制新血管的生成，以起到抑制前列腺癌生长的作用。

阻断雄性激素分泌：本方案的中药复合物中的“亚麻籽、补骨脂”等可以起到很好的阻断雄性激素分泌的效果，其主要作用是阻断雄性激素分泌，双向调节并增加AR表达，有利于减少内分泌西药的耐药性，减缓LNCaP、PC3细胞向DU145细胞转化，提高患者的总生存期。本方案特别针对的是雄性激素依赖性和雄性非依赖性的前列腺癌，而此类前列腺癌的病因中很重要的部分就是“雄性激素分泌过多”，本方案通过“亚麻籽、补骨脂”的添加来阻断雄性激素的分泌。

祛邪排毒消瘤以促进癌细胞凋亡：本方案的中药复合物中的“王不留行、白花蛇舌草、鱼腥草”等都能起到有效成分促使PC癌细胞凋亡的作用，杀死肿瘤细胞是最直接的治疗肿瘤的手段，本方案采用缓和的中药配方杀死肿瘤细胞也可避免破坏机体的正常性能。

通经活血以及软坚散乱：本方案的中药复合物中的“三七”等都可以提到通经活血的效果。正如现代中医认为前列腺癌是“积之成也，正气不足而后邪气踞之”，“正气虚则成岩”，按照中医理论而言，前列腺癌同血管闭塞有直接关系，故本方案通过对“三七”的添加来提高通经活血的效果。

减糖：本方案的各类中药复合物“黄连、黄芪”等有效下降血糖，减少癌细胞葡萄糖供应和糖酵解。德国著名科学家诺贝尔奖获得者瓦伯格早在20世纪初期，提出了“有氧糖酵解理论”理论，其认为“有氧糖酵解”是肿瘤细胞的一种特殊代谢特征，其中癌细胞和普通细胞的区别是：癌细胞通过有氧糖酵解，而正常细胞还可通过无氧糖酵解。当线粒体出现细胞呼吸功能障碍后，再加上一些外部环境刺激因素可能会形成肿瘤。而那些细胞呼吸功能正常的细胞，会因为能量衰竭而正常死亡，不会形成肿瘤细胞。所以，癌细胞的形成主要是因为细胞呼吸功能障碍。

根据该效应研究，肿瘤细胞在内的所有细胞都需要将有效的ATP合成维持在相对恒定的水平上，从而维持自身活力。这似乎是独立于细胞起源或功能的生物学定律。癌细胞中的能量代谢与正常细胞中的能量代谢存在明显不同。与通过氧化磷酸化产生大部分可用能量的正常细胞相比，癌细胞更依赖于酵解反应，它通过非氧化性的底物水平磷酸化作用来合成ATP.底物水平磷酸化在细胞质通过糖酵解，而在线粒体通过琥珀酰辅酶A合成酶来完成。葡萄糖和谷氨酰胺都可以通过底物水平磷酸化向癌细胞提供能量。虽然肿瘤细胞线粒体似乎能够呼吸，因为其氧化磷酸化是减少或完全消失的。只要肿瘤细胞具有可酵解的燃料并能够从细胞外获得胆固醇，它就可以在低氧环境中生长。呼吸是正常细胞的生物能量学特征，而酵解是癌细胞的生物能量学特征。无论是存在氧气，酵解均驱动癌细胞生长。所以根据该效应可通过减糖的方式来减少甚至切断癌细胞唯一葡萄糖能源供应，进而抑制癌细胞的增长。

相较现有技术，本方案具有显著的进步和突出的特点，具体体现在：

本方案提供的中药复合组合物独创地提出了从清热解毒、抗炎消炎、扶正祛邪、提高血氧饱和度、改变机体PH值至碱性、提高肠道免疫力以提高整体机能免疫力水平、增加T细胞、NK细胞数量、祛瘀排毒消瘤、抑制新血管生成、阻断雄性激素分泌、诱导癌细胞凋亡、软坚散结、提高通经活血以及减糖等多个方面入手，利用中医疗效结合细胞学原理的全因治疗方案，以中医手段并结合西医的细胞学原理从多个病因入手消灭癌细胞，在经前列腺癌晚期患者使用和动物实验，均已取得超过同类阳性西药的疗效且无耐药性及明显毒副作用。其中前列腺癌晚期患者服用后51天肿瘤完全消失并达到治愈病例指标；动物实验(委托浙江中医药大学药学院)结论：分别高中低阳性对照五组动物实验显示：肿瘤抑制率达50％并超过阳性比卡鲁胺组，也超过国家一类抗癌新药26％的要求。方案依据前列腺癌流行病病因和肿瘤细胞学、肿瘤免疫学、肿瘤循证学、肿瘤代谢学的治愈原理，结合中国中医药学扶正祛邪的抗癌机理和中药毒副作用少无耐药性等优势，创造性设计了前列腺癌多靶点中药组方，即有效提高了抗癌治疗效果，同时还解决了内分泌化学药无法克服的耐药性和毒副药性的重大国际医药学难题，具有显著的专有创新性和领先性。

在中医理论里面认为前列腺癌的主要原因有以下几点：1.阳盛阴衰，属于邪不压正的体征状态；2.机体内部有淤堵堵塞的情况，机体存在湿毒、湿气等。所以中医理论里面针对这两类特征采取的方式是：扶正祛邪以及活血化瘀，本方案的中药复合组合物通过增加机体免疫力的方式来扶正祛邪，通过一些特定中药物来活血化瘀。另外本方案还增加了可以清热解毒的药物以及软坚散结的药物。本方案提供的中药复合组合物相较于同类内分泌化学药物而言，可提高10％-30％的肿瘤抑制率，提高机体整体免疫力水平，促进免疫细胞(NK)增值，提升机体代谢水平，提升机体血氧水平，具有明显的扶正祛邪效果，毒副作用少，有利于机体快速恢复体能支持抗癌，具有显著的抗炎消炎作用，提升氧化应激水平，无明显耐药性，减少转移复发的几率，可长期安全服用。

附图说明

图1是根据本方案的复方剂量组、比卡鲁胺组、模型组对应不同治疗天数的肿瘤大小的示意图。

图2是是根据本方案的复方剂量组、比卡鲁胺组、模型组的肿瘤大小的示意图。

图3是是根据本方案的复方剂量组、比卡鲁胺组、模型组的肿瘤重量的示意图。

图4是根据本方案的复方剂量组、比卡鲁胺组、模型组的体重增长率的示意图。

图5是是根据本方案的复方剂量组、比卡鲁胺组、模型组的抑瘤率的示意图。

图6是复方中药对PC-3前列腺癌组织凋亡因子和AR表达的影响。

图7是复方中药对小鼠前列腺癌组织免疫相关CD4+和CD8+表达的影响

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了验证本方案提供的全因中药复方组合物能够有效地抑制前列腺癌，本申请人开展了如下实验：

一、材料准备

细胞：人前列腺癌PC-3细胞，购自美国ATCC公司，由本实验室长期传代保存。

动物：SPF级5-6周龄雄性Balc/c裸鼠，体重16-18g，购自上海计划生育科学研究所，动物合格证：SCXK(沪)2018-0006。

药品与试剂：中药复方，自制。比卡鲁胺(>98％，索莱宝公司，IB0830-100mg)。

仪器：全自动生化分析仪，酶标仪、低温离心机等。

二、中药水提物制备：

(1)取11味中药复方组合物，加入中药复方组合物的药材量的15倍体积蒸馏水浸泡3小时，得到生药蒸馏水混合物；其中中药复方组合物包括以下重量份数的中药材：鱼腥草30g，王不留行40g，三七15g，黄连20g，白花蛇舌草50g,黄芪30g，刺五加30g，补骨脂40g，红景天20g，亚麻籽30g，乌贼墨20g。

(2)煎煮：将步骤(1)所述的生药蒸馏水混合物进行煎煮，煎煮次数为2次，每次煎煮1小时，得到中药粗提物；

(3)浓缩：将步骤(2)制备得到的中药粗提物蒸发浓缩，得到中药浓缩液，其中，水煎剂母液终浓度为1.5g生药/毫升；

(4)除菌：取步骤(3)制备得到的中药浓缩液通过0.22微米微孔滤膜过滤除菌，即得到所述中药复方组合物。

三、实验方法

3.1细胞培养与建模：人前列腺癌PC-3细胞，在含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中培养，37℃、饱和湿度、5％CO₂条件细胞培养箱中培养，用常规方法进行消化、传代。取培养至对数生长期的PC-3细胞悬液(2×106个，0.2mL/只)，接种于小鼠后肢右侧皮下接种，复制荷瘤小鼠模型。

3.2分组与给药

1kg中药水提物(2L)得到104g提取物，按人(70kg)与小鼠(20g)的体表面积比值为0.0026。所以小鼠(20g)的给药剂量为：104g*0.0026＝0.27g，即0.27g/20g＝13.5g/kg。按每只小鼠灌胃0.5ml计算，配制浓度为0.27g/0.5ml＝0.54g/ml。实际给药高剂量：药物最大浓度为100mg/ml，体积0.26ml/只，小鼠体重约为26g。即高剂量组1.0g/kg，中剂量组0.5g/kg，低剂量组0.25g/kg。

每4天观察裸鼠肿瘤生长情况，并用游标卡尺测量裸鼠肿瘤的最长径(a)和最短径(b)，按照公式V＝0.5ab²计算肿瘤体积，式中V为肿瘤体积，a为通过肿瘤中心量取的最长径，b为通过肿瘤中心量取的最短径。待所有裸鼠肿瘤体积范围为100-300mm³，用SAS程序生成随机数据表，根据荷瘤大小将建模成功的小鼠随机分为6组，每组6只：模型组、阳性药组、中药复方高、中、低剂量组，每组10只。另设正常对照组。

正常对照组和模型组给予0.5％羧甲基纤维素钠(0.5％CMC-Na)水溶液灌胃，阳性药组给予比卡鲁胺(CDX)25mg/kg，以0.5％CMC-Na配制成所需浓度溶液；高(100mg/mL)、中(50mg/mL)、低(25mg/mL)剂量组灌胃中药复方，1次/天，共7-10天。

3.3称量瘤重并计算抑瘤率

采用摘眼球取血法取血，取血后脱臼处死小鼠，剥离肿瘤组织，用天平称量肿瘤重量。抑瘤率＝(瘤重模型组-瘤重药物干预组)/瘤重模型组×100％。

3.4血清生化指标测定

小鼠摘眼球取血，3000rmp离心20min离心取血清，全自动生化分析仪检测小鼠血液生化指标(肝功能、肾功能、血糖、血脂、电解质、心肌酶类)。

3.5酶联免疫吸附法(ELISA)法测定前列腺癌组织中VEGF，HIF-α，IL-6，TNF-α含量

取前列腺癌组织，加PBS(pH7.4)适量，组织破碎仪破碎组织，制备10％癌组织匀浆上清液，总蛋白定量后，按照试剂盒说明书中的操作步骤，用ELISA法测定癌组织中VEGF，HIF-α，IL-6，TNF-α含量。

3.6蛋白免疫印迹法测定前列腺癌组织中

取前列腺癌组织，加RIPA裂解液适量，制备10％癌组织匀浆上清液，总蛋白定量后，用蛋白免疫印迹法测定

3.7统计学分析

所有数据均采用形式表示，采用GraphPad Prism 9.0软件进行数据的处理统计，采用单因素方差分析(One-way ANOVA)及Tukey’s multiple comparisons test法进行组间比较。P<0.05、0.01表示显著性差异，具有统计学意义。

四、实验结果

4.1复方中药对PC-3前列腺癌荷瘤小鼠瘤重和抑瘤率的影响

为了评估复方中药在体内的抗肿瘤能力，我们通过将前列腺癌PC-3细胞皮下注射到小鼠体内建立了异种移植模型。如图1所示，与模型组相比，复方中药各剂量组及阳性药组均能抑制肿瘤生长，肿瘤体积均显著减少(P<0.01或P<0.05)。图2和3所示，与模型组相比，复方中药各剂量组及阳性药组均能降低肿瘤重量，其中复方中药高剂量组效果最为显著，存在显著性差异(P<0.05)。图4所示，各组小鼠体重均有所增长，且与肿瘤增长率保持一致。初步推测复方中药高中低剂量下对小鼠的副作用较小。

4.2复方中药对小鼠血脂和血糖相关血清生化指标影响

血清生化指标中，血清BUN、CREA、UA的水平变化可以反映出机体的肾的生理状态。由表1可知，与正常组相比，模型组小鼠血清BUN显著增高(P<0.05)，CREA和UA无显著影响。与模型组相比，复方各剂量组及阳性药组小鼠血清BUN浓度无显著性差异。与模型组相比，复方低剂量组对小鼠血清CREA显著升高，复方高剂量组对小鼠血清UA显著升高。肿瘤存在使肾脏功能下降导致血中BUN、CREA、UA等代谢产物的清除和排泄受阻，在血液中积累致使血清水平升高。但考虑到复方中药引起的肌酐和尿酸异常并未呈现剂量依赖性，可排除其对肾功能的影响。

表1复方对小鼠血脂和血糖相关血清生化指标影响(n＝6)

注：与正常组比较，·P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

4.3复方中药对小鼠心功能相关血清生化指标影响

血清生化指标中，血清CK、LDH、CK-MB的水平变化可以反映出机体的心脏的生理状态。由表2可知，与正常组相比，模型组小鼠血清LDH显著增高(P<0.05)。与模型组相比，复方低剂量组对小鼠血清CK、CK-MB显著升高，但无剂量依赖性。肿瘤可引起的肌酸激酶、乳酸脱氢酶和肌酸激酶同工酶的升高，因此，复方中药低剂量组引起的CK和CK-MB升高，但无剂量依赖关系，可能是肿瘤引起的个体差异。

表2复方对小鼠心功能相关血清生化指标影响(n＝6)

4.4复方中药对小鼠血清电解质生化指标影响

血清生化指标中，血清Ca、P、Mg的水平变化可以反映出机体的血清电解质状况。由表4可知，与正常组相比，模型组小鼠血清Mg显著增高(P<0.05)，其余指标无显著差异。与模型组相比，复方高中低剂量组及阳性药组小鼠血清Ca、P、Mg浓度的影响范围有所变化，但总体变化无显著性差异。

表3复方对小鼠血清电解质生化指标影响(n＝6)

注：模型组与正常组比较，·P＜0.05；其他组与模型组比较，*P＜0.05。

4.5复方中药对小鼠前列腺癌组织VEGF、HIF-α表达的影响

血管内皮生长因子VEGF和缺氧诱导因子HIF-α反映癌组织血管形成，为肿瘤提供持续的营养支持，在前列腺癌中高表达。另外，HIF-α是细胞缺氧时产生的一种特异性核蛋白，参与缺氧条件下肿瘤的迁移侵袭。由表4可知，与模型组相比，阳性药比卡鲁胺组前列腺癌组织VEGF和HIF-α水平降低，中药复方各剂量组前列腺癌组织VEGF和HIF-α水平降低，且呈剂量依赖性，高剂量组效果最佳。

表4复方对小鼠肿瘤组织VEGF、HIF-α影响(n＝6)

4.6复方中药对小鼠前列腺癌组织炎症因子IL-6、TNF-α表达的影响

慢性炎症是肿瘤的先兆，而免疫细胞的相互作用可通过刺激肿瘤细胞增殖和血管生成而促进肿瘤细胞的增殖。由表4可知，与模型组相比，阳性药比卡鲁胺组前列腺癌组织IL-6、TNF-α水平降低，中药复方各剂量组前列腺癌组织IL-6、TNF-α水平均显著降低，且呈剂量依赖性，高剂量组效果最好。

4.7复方中药对小鼠前列腺癌组织凋亡因子表达的影响

抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡是治疗肿瘤的重要策略。肿瘤细胞凋亡包括内源性线粒体细胞色素释放途径和外源性死亡受体途径，其中caspase3是最终凋亡执行分子，caspase8是外源性凋亡途径的执行者激活caspase 8酶活性能促进细胞发生凋亡。此外在细胞内，Bcl蛋白家族被认为是细胞凋亡过程中主要的内源性调节因子，B淋巴细胞瘤2基因(Bcl 2)可抑制细胞凋亡，而Bcl 2相关的X基因(Bax)则促进细胞凋亡，Bcl2与Bax的比例与细胞凋亡发生有关。由图2可知，与模型组相比，阳性药比卡鲁胺组抑制前列腺癌组织NF-κB的表达，同时也抑制促凋亡因子Caspase8、Caspase3和Bax的表达，上调抑凋亡因子Bcl-2表达，说明在PC-3异种移植肿瘤组织中，其可能通过抑制肿瘤生长而非抑制肿瘤凋亡发挥抗前列腺癌作用。中药复方不同剂量组对前列腺癌组织NF-κB的表达无显著影响，但能够剂量依赖性促进促凋亡因子Caspase8、Caspase3和Bax的表达，降低抑凋亡因子Bcl-2表达，说明在PC-3异种移植肿瘤组织中，中药复方通过抑制肿瘤组织凋亡发挥抗前列腺癌作用。

4.8复方中药对小鼠前列腺癌组织雄激素受体(AR)表达的影响

对于进展期激素非依赖性前列腺癌，约20-30％的肿瘤有AR表达缺失，被认为可能与AR启动子附近岛异常甲基化相关所致的转录休止有关。在雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-03，DU-145细胞株中AR表达是阴性的。使AR基因再表达，恢复AR信号途径，可能成为激素非依赖性前列腺癌重新对内分泌治疗敏感的治疗新思路。由图6可知，模型组和比卡鲁胺组AR表达均为阴性，复方中药高中低剂量组均能促进AR的重新表达，且呈剂量依赖性，高剂量组AR表达最高。有文献报道，前列腺癌细胞种的AR水平越高，激素治疗后病情稳定期越长。4.9复方中药对小鼠前列腺癌组织免疫相关CD4+和CD8+表达的影响

T细胞，特别是CD4+T细胞，是肿瘤免疫炎症微环境的重要组成部分。CD4+诱导性T细胞/辅助性T细胞，调控免疫反应重要的枢纽细胞。越来越多的证据表明，CD4+T细胞可能有助于肿瘤免疫逃避和肿瘤进展。研究表明，前列腺肿瘤微环境中的CD4+T细胞增加有助于前列腺癌进展，并且能够促进前列腺癌对化疗的抗性[8]。由图5可知，免疫组化结果发现，CD4+蛋白在前列腺癌组织高表达，且出现浸润现象；比卡鲁胺组CD4+蛋白表达在前列腺癌组织表达有所减弱，但也存在浸润现象。中药复方高剂量组CD4+表达在前列腺癌组织中明显减弱。

CD8+抑制性T细胞/细胞毒性T细胞，是免疫反应中直接杀伤性细胞。也是前列腺癌肿瘤微环境中高浸润的免疫细胞。随着肿瘤分期的增高，癌旁组织也趋向于免疫抑制状态，CD8+T细胞明显减少，表明肿瘤细胞逃避免疫杀伤的作用越强[9]。由图5可知，CD8+在模型组前列腺癌组织中几乎不表达，比卡鲁胺组中在癌旁组织有少量表达，中药复方各剂量组均能促进CD8+在前列腺癌组织中的表达。

五.结论

(1)复方中药能够显著降低前列腺癌PC-3荷瘤小鼠的肿瘤生长，且呈现剂量依赖性性，其中复方高剂量组(1g/kg)抑瘤效果最好，复方高、中剂量组抑瘤效果好于阳性药比卡鲁胺组。其作用机制与抑制血管生成，抑制炎症、促进前列腺癌组织细胞凋亡、调节免疫细胞浸润。

(2)复方中药对肾功能，心肌功能、血脂代谢及电解质代谢无显著性影响。

(3)复方中药可能引起血糖降低。

(4)复方中药可以降低异种移植前列腺癌组织炎症因子IL-6、TNF-α表达。

(5)复方中药可以降低异种移植前列腺癌组织血管生成相关因子VEGF、HIF-α表达。

(6)复方中药可以促进异种移植前列腺癌组织细胞凋亡。

(7)复方中药可以促进异种移植前列腺癌组织细胞AR重新表达，有利于雄激素阻断药物发挥作用。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，其特征在于，包括以下重量份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60g，红景天10－30g，亚麻籽10-50g，乌贼墨10-30g。

2.根据权利要求1所述的针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，其特征在于，包括下列重量份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60g，红景天30g，亚麻籽40g，乌贼墨25g。

3.根据权利要求1所述的针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，其特征在于，“鱼腥草、黄连”发挥抗炎消炎、清热解毒以及降低IL-6、TNF水平的效果，“三七、红景天”增加机体的氧气饱和程度，“黄芪”调节机体PH值至弱碱性，“鱼腥草、三七、乌贼墨”抑制前列腺癌细胞新血管生成，“黄芪、刺五加”能提高肠道免疫力以提高整体机能的免疫力水平“亚麻籽、补骨脂”发挥阻断雄性激素分泌，双向调节并增加AR表达，有利于减少内分泌西药的耐药性，减缓LNCaP、PC3细胞向DU145细胞转化，提高患者的总生存期的效果，“王不留行、白花蛇舌草、鱼腥草”发挥祛瘀排毒消瘤，促使PC癌细胞凋亡的效果，“三七”发挥通经活血以及软坚散结的效果，“、刺五加、红景天、三七、”发挥扶正祛邪的效果，能明显提高免疫力及T细胞、NK细胞的数量，“黄连、黄芪”有效下降血糖，减少癌细胞葡萄糖供应和糖酵解。

4.根据权利要求1所述的针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，其特征在于，所述中药复方组合物和药学上可接受的载体制成可注射流体、气雾剂、乳膏、凝胶剂、丸剂、糖浆剂、透皮贴剂、胶囊剂、微囊、片剂、颗粒剂或口服液剂型的药物。

5.一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物，其特征在于，用于制备治疗LNCaP、PC-3靶点向的前列腺癌的药物。

6.一种针对前列腺癌的多靶点全因中药复方组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)浸泡：取11味中药复方组合物，加入中药复方组合物的药材量的15倍体积蒸馏水浸泡3小时，得到生药蒸馏水混合物；其中中药复方组合物包括以下重量份数的中药材：鱼腥草20-60g，王不留行20-50g，三七6-20g，黄连6-30g，白花蛇舌草30-90g,黄芪20-50g，刺五加20-50g，补骨脂10-60g，红景天10－30g，亚麻籽10-50g，乌贼墨10-30g；

(2)煎煮：将步骤(1)所述的生药蒸馏水混合物进行煎煮，煎煮次数为2次，每次煎煮1小时，得到中药粗提物；

(3)浓缩：将步骤(2)制备得到的中药粗提物蒸发浓缩，得到中药浓缩液，其中，水煎剂母液终浓度为1.5克生药/毫升；

(4)除菌：取步骤(3)制备得到的中药浓缩液通过0.22微米微孔滤膜过滤除菌，即得到所述中药复方组合物。