CN117916241A - 螺环化合物 - Google Patents
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Abstract
本说明书涉及具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。本说明书还涉及用于制备它们的方法及中间体，含有它们的药物组合物，以及它们在治疗细胞增殖性障碍中的用途。
Description
本说明书涉及抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)并且因此表现出抗癌活性的某些螺环化合物及其药学上可接受的盐。本说明书还涉及所述螺环化合物及其药学上可接受的盐在治疗人体或动物体的方法中，例如用于预防或治疗癌症中的用途。本说明书还涉及在制备所述螺环化合物中所涉及的方法和中间体化合物，并且涉及含有所述螺环化合物的药物组合物。
蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)是精氨酸甲基转移酶PRMT家族的成员，这些精氨酸甲基转移酶使用S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体，催化甲基基团添加至精氨酸残基的胍基序。PRMT5是II型精氨酸甲基转移酶，其将精氨酸残基的胍基团对称地二甲基化，从而将精氨酸的胍NH2基团转化为NMe2基团。PRMT5甲基化许多不同的底物，包括组蛋白和非组蛋白蛋白质，这样一来调节如RNA剪接、细胞增殖和DNA修复等过程。值得注意的是，PRMT5在许多癌症类型中过表达并且已被鉴定为候选物，通过开发抑制PRMT5甲基转移酶活性的小分子用于治疗性干预(参见例如Kim等人,(2020)Cell Stress[细胞应激]4(8)199-2151)。
细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)是在大约15％的癌症中纯合性缺失的肿瘤抑制基因。9p21染色体基因座的丢失导致多个另外的基因(包括编码甲基硫腺苷磷酸化酶(MTAP)的基因)的共缺失。MTAP是参与甲硫氨酸补救的代谢酶，并且MTAP的丢失导致MTAP底物甲基硫腺苷(MTA)在缺失CDKN2A/MTAP的癌细胞中的浓度增加。MTA本身作为弱PRMT5抑制剂并且因此MTA在缺失CDKN2A/MTAP的癌细胞系中的积累导致PRMT5活性的部分抑制。受损的PRMT5活性使得缺失CDKN2A/MTAP的癌细胞对PRMT5的进一步靶向(例如使用短发夹RNA(shRNA))易感。已经鉴定了癌症中的“附带易损性”，其中CDKN2A/MTAP缺失的肿瘤可以通过PRMT5抑制来选择性靶向(参见Marjon等人,(2016)CellReports[细胞报告]15,574-587；Mavrakis等人,(2016)Science[科学]11；351(6278):1208-13；Kryukov等人,(2016)Science[科学]11；351(6278):1214-8)。
需要开发用于治疗癌症的“MTA协同的”PRMT5抑制剂(即在MTA存在下优先结合PRMT5的抑制剂)。这是因为“MTA协同的”PRMT5抑制剂在存在相对高浓度的MTA的环境(例如CDKN2A/MTAP缺失的肿瘤细胞)中而不是在健康组织中对PRMT5发挥更大的抑制作用。因此，“MTA协同的”PRMT5抑制剂应具有高治疗指数(和低脱靶毒性)，因为它们的抗增殖活性将在靶向的、CDKN2A/MTAP缺失的肿瘤细胞中选择性地表现。迄今为止，尚无批准用于治疗用途的PRMT5抑制剂，更不用说“MTA协同的”PRMT5抑制剂。因此，需要新的PRMT5抑制剂，理想地是“MTA协同的”并且具有适于临床使用的所需药物特性的PRMT5抑制剂，因为它们将为癌症治疗提供新选择。已经发现本说明书的化合物具有抗肿瘤活性，可用于抑制由恶性疾病引起的不受控制的细胞增殖。本说明书的这些化合物通过(作为最低限度)充当PRMT5的抑制剂，提供抗肿瘤作用。值得注意的是，根据本说明书的PRMT5抑制剂是“MTA协同的”PRMT5抑制剂并且由于它们应实现高治疗指数和低脱靶毒性的独特的活性谱而预期示出增强的临床效用。
根据本说明书的第一方面，提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
含有X和Y的环是吡咯且X是NH且Y是CH或X是CH且Y是NH；
Z选自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z选自CH、CF、CCl或N；
Q选自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q选自CH、CF、CCl或N；
m是0、1或2；
n是0、1或2；
p是1或2；
R1在每次出现时独立地选自F、Cl、CN、Me、CF3、C1-C3烷基、环丙基、C1-C3氟烷基、OMe或C1-C3烷氧基；
R2在每次出现时独立地选自F、Cl、Me、MeO和CF3；
R3是H、Me、C1-C3烷基或C1-C3氟烷基；
R4是H、Me或C1-C3烷基；
R5是H、Me、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、CH2OMe、CH2OCHF2、CH2OCF3、CH2O(C1-C3烷基)、CH2O(C1-C3氟烷基)、C(CH2CH2)R6、CCR7、CH2R8、R9或CH2R10；
R6是H、Me、CH2F、CHF2、CF3、CH2OH或CH2OMe；
R7是H、Me、环丙基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C3-C6环烷基或任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团；
R8是任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基；
R9是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团；并且
R10是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团。
在另一方面，提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于作为药物使用。
在另一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，提供了一种通过向有需要的患者施用有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐来治疗癌症的方法。
在另一方面，提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在治疗癌症中使用。
在另一方面，提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在制造药物(例如用于治疗癌症的药物)中使用。
在另一方面，提供了包含药物组合物的试剂盒以及其用于治疗癌症的说明书，该药物组合物包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在另一方面，提供了一种用于制造具有式(I)的化合物的方法。
具有式(I)的化合物的特征在于螺环核心，其中2-吡咯烷酮环(在本段中称为且在下文中示为环A)和选自2-吡咯烷酮和2-哌啶酮的第二环(在本段中称为且在下文中示为环B)共用一个碳原子，它们通过该碳原子连接且手性中心位于该点处。此外，环A的氮原子经由亚甲基(即CH2)接头连接至4-氮杂吲哚基序或7-氮杂吲哚基序。
环A还与苯基或吡啶环稠合。环B的氮原子被基团CHR4R5取代。
已经发现，这些具有式(I)的化合物具有有效的抗肿瘤活性，该活性来源于它们抑制PRMT5的能力。如上文已指出，PRMT5是使用SAM作为甲基供体进行精氨酸胍基团的对称去甲基化的酶，因此在细胞中组蛋白和非组蛋白底物的表观遗传修饰中发挥重要作用。PRMT5经由促进组蛋白尾部修饰而参与肿瘤生长，组蛋白的尾部修饰阻遏靶向肿瘤促进基因的miRNA。研究表明，在约15％的癌症中缺失MTAP基因，并且与没有MTAP基因缺失的野生型细胞相比，这样的癌症更依赖于PRMT5酶活性。这种MTAP缺失见于相当大的比例的癌症中并产生可用于其治疗的基因易损性。此外，MTAP缺失导致癌细胞因MTA的磷酸化受阻而积累MTA，缺失MTAP的细胞因此相对于表达MTAP的野生型细胞表现出高MTA浓度。
与已知的PRMT5抑制剂相比，根据本说明书的化合物在MTA存在下有利地、更有效地结合并抑制PRMT5-它们是“MTA协同的”。这种与MTA的协同作用是特别有益的，因为相对于正常细胞，在MTAP缺陷型癌细胞中用根据本说明书的化合物观察到的PRMT5抑制是升高的，在MTAP缺陷型癌细胞中MTA水平相对于正常野生型细胞在特征上是高的，并且因此不希望的脱靶毒性降低。这种特征应允许在靶细胞中实现高水平的PRMT5抑制而没有不可接受的脱靶毒性。脱靶毒性是PRMT5抑制剂的一个特别关注点，并且脱靶毒性在临床上对于非MTA选择性PRMT5抑制剂(例如GSK3326595)一直是剂量限制性的。因此，根据本说明书的PRMT5抑制剂具有比早先的非MTA选择性PRMT5抑制剂更大的治疗窗，这可以很好地允许实现PRMT5抑制的最佳水平并实现增强的治疗益处。
根据本说明书的化合物具有良好的理化特性，指示它们将适合于向人口服施用以实现治疗效果。例如，根据本说明书的化合物除了其抑制PRMT5的能力外，还具有良好的溶解度曲线和相对低的分子量，指示它们适合于口服施用。如本文进一步所述，本说明书化合物的立体化学构型以及特别是它们在螺环中心处的手性是它们的PRMT5抑制活性的关键决定因素。
因此，本说明书的化合物作为抗肿瘤剂可以是有价值的。特别地，本说明书的化合物可用作MTAP缺陷型哺乳动物癌细胞的增殖、存活、运动、传播和侵袭的选择性抑制剂。由于其抑制PRMT5的能力，用根据本说明书的化合物治疗受试者可导致抑制肿瘤生长，触发肿瘤消退和/或抑制转移的形成和/或转移性肿瘤生长。确切地说，本说明书的化合物可以具有在抑制和/或治疗实体肿瘤疾病方面作为抗增殖药剂和抗侵袭性药剂的价值。确切地说，本说明书的化合物可以用于预防或治疗对抑制PRMT5敏感并且其中PRMT5活性参与导致肿瘤细胞增殖和存活的细胞信号传导事件的那些肿瘤。
因此，还提供了一种用于在缺失MTAP的细胞中提供对PRMT5的选择性抑制作用的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的如本文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
本文描述了在MTA存在下可以结合PRMT5的化合物。在生物化学测定和基于细胞的测定中，本说明书的化合物在MTA存在下示出为有效的PRMT5结合剂，并且因此可以用于治疗由PRMT5介导的障碍，特别是治疗癌症，如肺癌(例如NSCLC)、淋巴瘤(例如DLBCL)和胃部癌。特别地，根据本说明书的化合物可以用于治疗缺失CDKN2A/MTAP的癌症，即其中肿瘤抑制基因细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A(CDKN2A)纯合性缺失的那些癌症。根据本说明书的化合物同样可以在患有缺失CDKN2A/MTAP的癌症的患者的治疗方法中使用。
本说明书还涉及用于制造所述化合物的方法、含有这些化合物的药物组合物、包括向有需要的患者(例如人类)施用所述化合物的治疗方法、具有式(I)的化合物用于制造药物(例如用于治疗罹患过度增殖性疾病(如癌症)的患者)的用途。
附图说明
为了更好地理解本发明，本文参考以下附图：
图1：与PRMT5结合的实例1和MTA的蛋白质晶体结构。该蛋白质晶体结构说明本说明书的化合物与MTA一起结合PRMT5。还可见的是螺环系统的立体化学以及抑制剂与PRMT5的残基如Leu312、Glu435、Glu444、Ser578和Phe580的关键相互作用。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有如本披露所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicine andMolecular Biology[简明生物医学和分子生物学词典],Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRCPress[CRC出版社]；Dictionary of Cell and Molecular Biology[细胞和分子生物学词典],第3版,1999,Academic Press[学术出版社]；以及Oxford Dictionary ofBiochemistry and Molecular Biology[生物化学和分子生物学牛津词典]，修订版,2000,Oxford University Press[牛津大学出版社]为技术人员提供在本披露中使用的许多术语的通用词典注释。
为了使本说明书可以更容易理解，在下面明确定义了某些术语。此外，定义在整个说明书中视情况而阐述。
单位、前缀和符号是以它们的国际单位系统(Système International deUnites)(SI)接受的形式表示。数值范围包括限定该范围的数字。
术语“药物组合物”是指如下制剂，该制剂处于允许活性成分的生物活性被表达的形式，并且不含有另外的、对组合物将要施用的受试者具有不可接受的毒性的组分。此类组合物可以是无菌的。根据本说明书的药物组合物将包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种药学上可接受的赋形剂。
术语如“治疗(treating或treatment或to treat)”或“减轻(alleviating或alleviate)”是指(1)使得诊断的病理性病症或障碍被治愈、减缓、减轻症状、和/或停止进展的治疗措施以及(2)防止和/或减缓所靶向的病理学病症或障碍的发展的预防性或防止性措施。因此，需要治疗的那些包括已患有障碍的那些；倾向于患有障碍的那些；以及在他们中需要预防障碍的那些。在某些方面中，如果患者示出例如，总的、部分的、或瞬时的某一类型癌症的缓解，则根据本披露的方法成功“治疗”了该受试者的癌症。
术语“受试者”是指有待成为特定治疗的接受者的任何动物(例如，哺乳动物)，包括但不限于人类、非人类灵长动物、啮齿类等。典型地，术语“受试者”和“患者”在本文关于人类受试者可互换地使用。
如本文所用，术语“烷基”是指具有指定碳原子数的直链和支链饱和烃基。如本文所用，术语氘烷基是指其中一个或多个，任选地所有氢被氘原子替代的烷基基团。如本文所用，术语卤代烷基是指其中一个或多个，任选地所有氢被氯或氟原子替代的烷基基团。如本文所用，术语氟烷基是指其中一个或多个，任选地所有氢被氟原子替代的烷基基团。优选的氟烷基基团的实例包括CH2F、CHF2、CF3、CH2CF3、CF2CH3和CF2CF3。术语环烷基是指饱和碳环，例如环丙基、环丁基、环戊基或环己基基团。
术语乙炔基(acetylenyl)是指乙炔基团，即-CCH基团。术语炔基是指含有碳-碳三键的基团。
在本说明书中，如在术语(例如Cx-Cy烷基等)中所使用的前缀Cx-Cy(其中x和y是整数)指示在该基团中存在的碳原子的数值范围。例如，C1-C4烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基，而C1-C3烷基基团的实例包括甲基、乙基、正丙基和异丙基。C1-C4烷氧基基团包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。C1-C3烷氧基基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基和异丙氧基。C1-C3氟烷基基团的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1,1-二氟乙基和2,2,2-三氟乙基。C1-C3氟烷氧基基团的实例包括氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基和2,2,2-三氟乙氧基。-O(C1-C3氘烷基)基团是部分或完全氘代的O-甲基、O-乙基或O-正丙基或O-异丙基基团。C3-C6环烷基基团是指环丙基、环丁基、环戊基或环己基基团。
除非明确说明，否则基团的键合原子可以是该基团的任何合适的原子；例如，丙基包括丙-1-基和丙-2-基。
如本文所用，杂芳基是指含有至少一个选自N、O或S的杂原子的[4n+2]芳环。5元杂芳基基团的实例包括吡咯、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、噻唑、异噻唑、呋喃和噻唑。6元杂芳基基团的实例包括吡啶、哒嗪、嘧啶和吡嗪。
如本文所用，双环杂芳基是指包含稠合至5元或6元环的一个6元环的[6,5]或[6,6]双环杂芳基基团，其中两个构成环中的至少一个含有至少一个选自N、O或S的杂原子且此外其中两个构成环中的至少一个为[4n+2]芳环。在本文背景中，双环杂芳基基团是芳香族基团，该芳香族基团包含两个稠合环并且含有1、2、3或4个N原子，或一个O原子，或一个S原子，或1个N原子和一个S原子，或1个N原子和一个O原子，或2个N原子和一个S原子，或2个N原子和一个O原子。双环杂芳基基团包括其中两个稠合环均是芳香族，或者其中一个稠合环是芳香族的而另一个稠合环是部分或完全饱和的那些基团。所述部分或完全饱和的稠合环也可以包含羰基基团。双环杂芳基基团可以是[6,5]-系统，其中苯基基团或6元杂芳基基团与吡咯、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、噁唑、异噁唑、噁二唑、噻唑、异噻唑、呋喃和噻唑稠合。双环杂芳基基团的实例包括吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、苯并三唑基、吲唑基、氮杂吲哚基、氮杂吲唑基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、喹喔啉基和萘啶基。
如上所述，具有式(I)的化合物可具有基团R7，其为任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团。在这样的情况下，5元杂芳基基团优选地选自任选取代的吡唑、吡咯、咪唑、噁唑或噻唑，例如N-甲基吡唑。
如上所述，具有式(I)的化合物可具有基团R8，其为任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团。在这样的情况下，5元杂芳基基团优选地选自任选取代的吡唑、吡咯、咪唑、噁唑或噻唑，例如甲基取代的噻唑。
如上所述，具有式(I)的化合物可具有基团R9或R10，其为任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团。在此类情况下，R9或R10可以被1、2或3个独立地选自F、Cl、Me、CN、CF3、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或5元杂芳基基团的取代基取代。
为避免疑义，在多个取代基独立地选自一个给定的组的情况下，所选择的取代基可以包括来自给定的组中的相同的取代基或不同的取代基。仅举例来说，在(R1)m且m为2的情况下，两个R1取代基可以相同(例如均为氟)，或者可以不同(例如一个氟和一个甲基)。
为进一步避免疑义，在本说明书的式中使用的表示不同基团之间的附接点。
在本说明书内的任何实施例包括被称为是“任选取代的”的基团的情况下，则另一个实施例将包括其中所述基团是未取代的实施例。在其中基团被任选取代的情况下，任选的取代基可以选自Me、C1-C3烷基、C3-C6环烷基、C1-C3氟烷基、F或Cl、OH、OC1-C3烷氧基、OH、NH2和N(C1-C3烷基)2。
根据本说明书的具有式I的示例性的化合物列于下表1中。
表1具有式(I)的化合物
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如从表1可以看出，季碳的立体化学总是呈现为具有S构型。尽管每个实例的绝对立体化学尚未明确确定，但在所有可能的情况下，已经证明具有(S)构型的化合物比相应的(R)异构体更具活性。图1的蛋白质晶体结构证实了这一点，并且在许多情况下已经进行了对映异构体合成以获得(S)异构体。然而，本领域的读者将理解，两种可能的异构体都包括在本说明书中，此外，最具活性的异构体是优选的实施例。
本说明书的优选化合物具有如下所示的S构型。
当连同MTA一起结合时，这样的化合物与PRMT5的相互作用可见于图1。更详细地，实例1与PRMT5蛋白的MTA结合形式共结晶，并使用标准技术获得蛋白质结构。蛋白质晶体结构揭示，抑制剂的氮杂吲哚头基在底物活性位点结合并在“精氨酸口袋”中产生关键相互作用(质子化的N-4和5-氨基基团与Glu444具有氢键供体相互作用，且5-氨基基团也与Glu437的骨架羰基基团产生氢键供体相互作用)。似乎这个5-氨基基团与也结合至PRMT5的MTA分子的硫原子也很可能有相互作用，并且这可以至少部分地解释根据本说明书的PRMT5抑制剂化合物的“MTA协同的”性质。实例1与PRMT5蛋白之间的进一步相互作用包括氮杂吲哚的N-1与Ser578的骨架羰基之间的氢键供体相互作用。中心异吲哚啉酮基团的羰基也与Leu312的骨架NH发生氢键受体相互作用。X射线蛋白质晶体结构还表明，S构型的四级中心对于抑制剂在PRMT5口袋中的优化配合是重要的。值得注意的是，螺内酰胺羰基在该构型中能够与Phe580的骨架NH产生氢键受体相互作用。
如上所述，根据本说明书的第一方面，提供了具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
含有X和Y的环是吡咯且X是NH且Y是CH或X是CH且Y是NH；
Z选自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z选自CH、CF、CCl或N；
Q选自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q选自CH、CF、CCl或N；
m是0、1或2；
n是0、1或2；
p是1或2；
R1在每次出现时独立地选自F、Cl、CN、Me、CF3、C1-C3烷基、环丙基、C1-C3氟烷基、OMe或C1-C3烷氧基；
R2在每次出现时独立地选自F、Cl、Me、MeO和CF3；
R3是H、Me、C1-C3烷基或C1-C3氟烷基；
R4是H、Me或C1-C3烷基；
R5是H、Me、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、CH2OMe、CH2OCHF2、CH2OCF3、CH2O(C1-C3烷基)、CH2O(C1-C3氟烷基)、C(CH2CH2)R6、CCR7、CH2R8、R9或CH2R10；
R6是H、Me、CH2F、CHF2、CF3、CH2OH或CH2OMe；
R7是H、Me、环丙基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C3-C6环烷基或任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团；
R8是任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基；
R9是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团；并且
R10是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团。
在实施例中，具有式(I)的化合物是具有如下式(Ia)所表示的S构型的化合物。
为了便于参考，下文中提及具有式(I)或(Ia)的化合物的陈述，例如下文紧接着的具有式(Ib)的化合物的情况，应理解为涉及具有式(I)的化合物，其中立体化学未指定(参考具有式(I)的化合物)或其中立体化学设定为S构型(参考具有式(Ia)的化合物)。
在实施例中，具有式(I)或(Ia)的化合物是具有式(Ib)的化合物，其中p是1
在实施例中，具有式(I)或(Ia)的化合物是具有式(Ic)的化合物，其中p是2。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)或(Ic)的化合物是具有式(Id)的化合物，其中Y是N且p是1
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)或(Id)的化合物是具有式(Ie)的化合物，其中X是N且p是1
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)或(Ie)的化合物是具有式(If)的化合物，其中Z是CF且Q是CH。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)或(If)的化合物是具有式(Ig)的化合物，其中n是0。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)或(Ig)的化合物是具有式(Ih)的化合物，其中R1是F。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)或(Ih)的化合物是具有式(Ii)的化合物，其中m是1。在这样的实施例中，如下所示对于其中Q是CH，Z是CF且p是1的情况，R1基团可以在NH2基团的邻位。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)或(Ii)的化合物是具有式(Ij)的化合物，其中R3是H。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)或(Ij)的化合物是具有式(Ik)的化合物，其中R4是H或Me。
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(Il)的化合物，其中R5是R9且R9选自：
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(Im)的化合物，其中R5是R9且R9选自：
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(In)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(Io)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(Ip)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(If)、(Ig)、(Ih)、(Ii)、(Ij)或(Ik)的化合物是具有式(Iq)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(I)化合物是具有式(Ir)的化合物
其中：
n是0、1或2；
R2在每次出现时独立地选自F、Cl、Me、MeO和CF3；
R3是H、Me、C1-C3烷基或C1-C3氟烷基；
R4是H、Me或C1-C3烷基；
R5是H、Me、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、CH2OMe、CH2OCHF2、CH2OCF3、CH2O(C1-C3烷基)、CH2O(C1-C3氟烷基)、C(CH2CH2)R6、CCR7、CH2R8、R9或CH2R10；
R6是H、Me、CH2F、CHF2、CF3、CH2OH或CH2OMe；
R7是H、Me、环丙基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C3-C6环烷基或任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团；
R8是任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基；
R9是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团；并且
R10是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团。
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(Is)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(It)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(Iu)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(Iv)的化合物，其中R5选自
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(Iw)的化合物，其中R5是R9并选自
在实施例中，具有式(Ir)的化合物是具有式(Ix)的化合物，其中R5是R9并选自
在实施例中，具有式(I)的化合物选自：
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-4-((2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-1'-基)甲基)-2-氟苯甲腈；
(S)-1'-(3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苄基)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,5-二氟苄基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-(氟甲基)环丙基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2-(二氟甲氧基)乙基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((3-氟吡啶-2-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(异噁唑-5-基甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((5-(三氟甲基)哒嗪-3-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(苯并[d]噁唑-2-基甲基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-氟苯氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-甲基噻唑-5-基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((R*)-1-(1-甲基环丙基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(3-环丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮；
(S)-5-氨基-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-7-甲腈；
(S)-2-((5-氨基-6-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
(S)-2-((6-氨基-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；以及
(1S,5'S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮；
或其药学上可接受的盐。
在本说明书的实施例中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的赋形剂；任选地进一步包含具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的一种或多种其他立体异构体形式，其中具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐以对映异构体过量(ee％)≥90％，例如>95％或>99％存在于组合物中。
具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐可以按无定形形式、结晶形式、或半结晶形式制备、使用或提供并且任何给定的具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐可能能够成为多于一种晶体/多晶形形式，包括水合的(例如半水合物、一水合物、二水合物、三水合物或其他化学计量水合物)和/或溶剂化形式。应当理解的是本说明书涵盖了任何以及所有具有式(I)的化合物及其药学上可接受的盐的此类固体形式。
在本说明书的另外的实施例中，提供了具有式(I)的化合物，该化合物通过在以下‘实例’部分中所描述的方法可获得。
本说明书旨在包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的那些原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。碳的同位素包括13C和14C。具有式(I)的同位素标记的化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与在附随的实例中所描述的那些类似的过程使用适当的同位素标记的试剂替代以前采用的非标记的试剂来制备。
具有式(I)的化合物的合适的药学上可接受的盐可以是例如酸加成盐。具有式(I)的化合物的合适的药学上可接受的盐可以是例如具有式(I)的化合物的酸加成盐，例如与无机酸或有机酸的酸加成盐。说明书中的化合物可以作为游离化合物(即处于非盐化状态)来提供。
具有式(I)的化合物的另一种合适的药学上可接受的盐可以是例如在向所述人体或动物体施用具有式(I)的化合物之后在该人体或动物体内所形成的盐。
具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以作为共晶固体形式制备。应当理解的是具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的药学上可接受的共晶体形成本说明书的一个方面。
用于在药学背景下使用，可能优选的是在不存在大量其他立体异构形式的情况下提供具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
具有式(I)的化合物、或其药学上可接受的盐将通常经由口服途径施用，但是以包含活性成分或其药学上可接受的盐或其溶剂化物或这种盐的溶剂化物的药物制剂的形式、以药学上可接受的剂型的肠胃外、静脉内、肌肉内、皮下或其他可注射方式、经颊、直肠、阴道、经皮和/或鼻途径和/或经由吸入的施用也是可以的。取决于有待治疗的障碍和患者以及施用途径，可以按变化的剂量施用这些组合物，例如以从1mg至1,000mg或从100mg至2,000mg的口服剂量施用。
上面所述的具有式(I)的化合物的药物配制品可以被制备例如用于肠胃外、皮下、肌肉内或静脉内施用。
以上所述的具有式(I)的化合物的药物配制品可以方便地以单位剂型施用，并且可以通过制药领域中熟知的任何方法，例如如Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],第17版,Mack Publishing Company,Easton,PA.[马克出版公司,伊斯顿,宾夕法尼亚州],(1985)中所述的制备。
适于口服施用的药物配制品可以包含一种或多种生理上可相容的载体和/或赋形剂，并且可以是呈固体或液体的形式。片剂和胶囊可以用以下物质制备：粘合剂；填充剂；滑润剂；和表面活性剂。液体组合物可以含有常规添加剂，诸如悬浮剂；乳化剂；以及防腐剂。液体组合物可以包封在例如明胶中以提供单位剂型。固体口服剂型包括片剂、两件式硬壳胶囊和软弹性明胶(SEG)胶囊。示例性口服组合物包含填充到两件式硬壳胶囊或软弹性明胶(SEG)胶囊中的具有式(I)的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中作为药物使用。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中产生抗增殖作用。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中作为抑制和/或治疗实体肿瘤疾病(例如其中肿瘤中的MTAP基因缺失的实体肿瘤疾病)的抗侵袭性药剂使用。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐用于在患有CDKN2A/MTAP缺失的肿瘤的如人类的温血动物中产生抗增殖作用的用途。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在如人类的温血动物中产生抗增殖作用的药物(例如用于治疗CDKN2A/MTAP缺失的肿瘤的药物)中的用途。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在如人类的温血动物中作为抑制和/或治疗实体肿瘤疾病的抗侵袭性药剂使用的药物中的用途，任选地其中该实体肿瘤疾病的特征在于具有MTAP基因缺失。
根据另外的实施例，提供了一种用于在需要这种治疗的如人类的温血动物中产生抗增殖作用的方法，该方法包括向所述动物施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在这样的实施例中，需要治疗的患者可能患有以缺失MTAP的癌症(即其中MTAP基因已经缺失的癌症)为特征的癌症。
在本说明书中，除非另外说明，否则短语“有效量”意指化合物或组合物的足以显著和积极地改变待治疗的症状和/或病症(例如，提供积极的临床反应)的量。用于药物组合物中的活性成分的有效量将随所治疗的特定病症、病症的严重程度、治疗的持续时间、同步治疗的性质、所利用的一种或多种特定活性成分、所利用的一种或多种特定药学上可接受的赋形剂/载体、以及处于主治医生的知识和专业知识范围内的类似因素而变化。有效量通常在0.1mg至1,000mg的范围内。
根据另外的实施例，提供了一种用于通过在需要这种治疗的如人类的温血动物中抑制和/或治疗实体肿瘤疾病来产生抗侵袭性作用的方法，该方法包括向所述动物施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在这样的实施例中，需要治疗的患者可能患有以缺失MTAP的癌症(即其中MTAP基因已经缺失的癌症)为特征的癌症。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在如人类的温血动物中预防或治疗癌症。在这样的实施例中，癌症的特征可以在于其缺失MTAP的状态，即癌症是其中MTAP基因已经缺失的癌症。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在如人类的温血动物中预防或治疗癌症的药物中的用途。在这样的实施例中，癌症的特征可以在于其缺失MTAP的状态，即癌症是其中MTAP基因已经缺失的癌症。
根据另外的实施例，提供了一种用于在需要这种治疗的如人类的温血动物中预防或治疗癌症的方法，该方法包括向所述动物施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在这样的实施例中，需要治疗的患者可能患有以缺失MTAP的癌症(即其中MTAP基因已经缺失的癌症)为特征的癌症。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于在如人类的温血动物中预防或治疗实体肿瘤疾病。在这样的实施例中，实体肿瘤疾病可以是缺失MTAP基因的肿瘤。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于在如人类的温血动物中预防或治疗实体肿瘤疾病的药物中的用途。
根据另外的实施例，提供了一种用于在需要这种治疗的如人类的温血动物中预防或治疗实体肿瘤疾病的方法，该方法包括向所述动物施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。。在这样的实施例中，需要治疗的患者可能患有以缺失MTAP的癌症(即其中MTAP基因已经缺失的癌症)为特征的癌症。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防或治疗对PRMT5的抑制敏感的肿瘤。在这样的实施例中，肿瘤的特征可以在于具有MTAP基因缺失。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造预防或治疗对PRMT5的抑制敏感的那些肿瘤的药物中的用途。在这样的实施例中，肿瘤的特征可以在于具有MTAP基因缺失。
根据另外的实施例，提供了一种用于预防或治疗对PRMT5的抑制敏感的那些肿瘤的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在这样的实施例中，肿瘤的特征可以在于具有MTAP基因缺失。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，用于提供对PRMT5的抑制作用。在这样的实施例中，抑制作用可以是MTA协同的。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于提供对PRMT5的抑制作用的药物中的用途。
根据另外的实施例，还提供了一种用于提供对PRMT5的抑制作用的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于提供对PRMT5的选择性抑制作用。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于提供对PRMT5的选择性抑制作用的药物中的用途。
根据另外的实施例，还提供了一种用于提供对PRMT5的选择性抑制作用的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
本文描述了可以结合PRMT5的化合物。在生物化学测定和基于细胞的测定中，本说明书的化合物示出为有效的PRMT5蛋白结合剂，并且因此可以用于治疗由PRMT5介导的障碍，特别是治疗其中MTAP缺失的癌症，如胰腺癌、结直肠癌、子宫癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、宫颈癌、睾丸生殖细胞癌和非小细胞肺癌和多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、横纹肌肉瘤和皮肤鳞状细胞癌。在优选的实施例中，该用途将用于治疗肺癌(例如NSCLC)和胃部癌或淋巴瘤(例如DLBCL)。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗由PRMT5介导的障碍。
根据另外的实施例，提供了一种用于治疗由PRMT5介导的障碍的方法，该方法包括施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗由PRMT5介导的障碍的药物中的用途。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗胃部癌、肺癌或淋巴瘤。
根据另外的实施例，提供了一种如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗非小细胞肺癌。
根据另外的实施例，提供了一种用于治疗胃部癌、非小细胞肺癌或淋巴瘤癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据另外的实施例，提供了一种用于治疗非小细胞肺癌的方法，该方法包括向有需要的患者施用有效量的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据另外的实施例，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗胃部癌、非小细胞肺癌或淋巴瘤癌症的药物中的用途。
根据本说明书的另一方面，提供了如上文所定义的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗非小细胞肺癌的药物中的用途。
本文所定义的抗癌治疗可以作为单独疗法施用，或除本说明书的化合物外，还可以涉及常规外科手术或放射疗法或化学疗法。
因此，在一个实施例中，提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种另外的抗肿瘤物质，用于联合治疗癌症。
根据本说明书的一个实施例，提供了一种适用于治疗癌症的组合，该组合包括具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和另一种抗肿瘤剂。
在本说明书的另一个实施例中，提供了与另一种抗肿瘤剂的组合的具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。在一个相关实施例中，提供了一种治疗方法，其包括将具有式(I)的化合物与另一种抗肿瘤剂组合施用给有需要的患者，例如罹患其中缺失MTAP基因的癌症的患者。
虽然具有式(I)的化合物主要具有作为用于在温血动物(包括人类)中使用的治疗剂的价值，但在需要抑制PRMT5的任何时候它们也是有用的。因此，它们有用于作为用于在开发新生物测试以及寻找新药理学药剂中使用的药理学标准。
另一个实施例是基于鉴定患者肿瘤的MTAP基因缺失状态与对用具有式(I)的化合物治疗的潜在易感性之间的联系。然后可以有利地使用MAT协同的PRMT5抑制剂，例如具有式(I)的化合物来治疗可能对其他疗法有抗性的患有其中缺失MTAP基因的肿瘤的患者。因此，这提供了机会、方法和工具用于选择用具有式(I)的化合物进行治疗的患者，特别是癌症患者。该选择是基于待治疗的肿瘤细胞是否具有MTAP基因缺失。MTAP基因缺失状态因此可以被用作一种生物标记，以表明选择用具有式(I)的化合物的治疗可以是有利的。
根据一个实施例，提供了一种用于选择用具有式(I)的化合物进行治疗的患者的方法，该方法包括提供来自患者的含有肿瘤细胞的样品；确定患者的含肿瘤细胞的样品中的MTAP基因是否已被缺失；以及基于以上来选择用具有式(I)的化合物治疗的患者。
该方法可以包括或不包括实际患者样品分离步骤。因此，根据一个实施例，提供了一种用于选择用具有式(I)的化合物进行治疗的患者的方法，该方法包括确定先前从该患者分离的含有肿瘤细胞的样品中的MTAP基因是否已被缺失；以及基于以上来选择用具有式(I)的化合物治疗的患者。
在实施例中，如果肿瘤细胞缺失了MTAP基因，则选择患者用具有式(I)的化合物治疗。
根据另一个实施例，提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗具有缺失了MTAP基因或有积累MTA倾向的肿瘤细胞的癌症。
根据另一个实施例，提供了一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗具有被鉴定为积累MTA的肿瘤细胞的癌症。
根据另一个实施例，提供了一种包含具有式(I)的化合物的药物组合物，用于预防和治疗具有被鉴定为缺失了MTAP基因的肿瘤细胞的癌症。
应了解，提供了以下实例以使得可以完全理解本发明的性质。还应了解，以下实例不旨在以任何方式限制描述的范围。
实例
生物学测定
使用以下测定来测量本说明书的化合物的作用。
MTase-GloTMPRMT5发光测定(PRMT5酶测定)
使用Mtase-GloTM甲基转移酶发光测定监测在存在或不存在5′-甲基硫腺苷(MTA)下，通过重组PRMT5:MEP50酶复合物将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)转化为S-腺苷高半胱氨酸(SAH)。在白色1536孔微量滴定板(格瑞纳公司(Greiner)，#782075)中进行酶促反应。反应缓冲液含有20mM的N,N-二(羟乙基)甘氨酸(pH7.60)、25mM NaCl、1mM DTT和0.1％(w/v)CHAPS。
对于抑制测定，在最高浓度为100μM的十二点重复半对数化合物浓度-反应之后，使用Labcyte Echo 555声学分配器，将DMSO中的目的化合物和参考对照分配到微板中。用适当体积的DMSO回填所有孔以在3μl最终测定体积中实现1％v/v的最终浓度。所有测定准备板包括中性对照(无抑制，1％v/v DMSO)和抑制剂对照(100％抑制，30μM测定特异性化合物)。
通过将抑制剂与含有1nM人异八聚体PRMT5:MEP50酶复合物、2.5μM H41-21组蛋白肽(开曼化学品公司(Cayman Chemical Co.)，#10854)和2.5μM S-腺苷甲硫氨酸(SAM)(普洛麦格公司(Promega)，A120A)的3μL反应混合物在反应缓冲液中一起孵育来进行不含MTA的抑制测定。同样地，通过将抑制剂与由2nM酶复合物、1.5μM MTA(西格玛公司(Sigma)，D5011)、2.5μM H41-21肽和2.5μM SAM组成的3μL酶混合物一起孵育来进行在MTA存在下的测定。在室温下孵育5h后，将1μL的0.5％(v/v)TFA添加至各孔中以淬灭甲基化反应。随后向各孔中添加一微升的5x浓缩的MTase-GloTM试剂(普洛麦格公司，CS175601A)并在室温下孵育以将反应中产生的SAH转化为ADP。10分钟后，向各孔中添加2.5μL预过滤的Mtase-GloTM检测溶液(普洛麦格公司，CS175601B)，并在室温下再孵育30min以确保ADP转化为发光，这使用Evision2101多标记读板器测量。
分析数据并且使用Genedata软件计算IC50值。
PRMT5细胞SDMA测定：
HCT116WT细胞和KO-MTAP细胞在由McCoys培养基(西格玛公司，#M8403)、10％(v/v)胎牛血清和1％(v/v)L-谷氨酰胺组成的细胞培养基中培养。收获后，将细胞分配到黑色384孔Costar板(#3712，康宁公司(Corning))中，得到2000个细胞/孔，总体积为40μl细胞培养基。在最高浓度为30μM的十二点半对数化合物浓度-反应之后，使用LabcyteEcho555声学分配器，将测试化合物和参考对照直接添加到细胞板中。
然后将细胞板在37℃下孵育48小时，然后通过添加40μl的8％多聚甲醛的PBS/A溶液(4％终浓度)固定，然后在室温下孵育10分钟，然后使用BioTekELx406板洗涤器将板用150μl的PBS洗涤两次，用20ul/孔0.1％皂苷的PBS溶液渗透10min，再次洗涤并用20ul/孔2％BSA的PBS-T(西格玛公司，#A8022)溶液在室温下封闭1小时。
将一抗，即抗SDMA组蛋白4抗体(密理博公司(Milipore)，#07-947)在PBS-T+0.05％BSA中按1:1000稀释，每孔添加20μl，并将板在4℃下孵育过夜。将细胞板用200μlPBS/T洗涤3x，然后向每孔中添加20μl在Alexa488山羊抗兔IgG二抗(赛默科技公司(Thermo)，#A11008)的测定缓冲液中的1:500稀释液，以及Hoechst33342的1:1000稀释液。在室温下孵育1小时后，将板用200μlPBS/T洗涤3x，并将40μl无碳酸氢钾、碳酸氢镁以及碳酸氢钠的PBS(吉博科公司(Gibco)，#14190-094)添加至每孔中。
将染色的细胞板用黑色密封件覆盖，并且然后在CellInsight成像平台(赛默科技公司)上用10x物镜读数。使用主要通道(Hoechst蓝色荧光405nM，BGRFR_386_23)自动对焦并计数事件数目(这将提供关于所测试的化合物的细胞毒性的信息)。第二通道(绿色488nM，BGRFR_485_20)测量SDMA染色。
分析数据并且使用Genedata软件计算IC50。在Genedata中通过定量最大信号/顶部(媒介物对照)和最小信号/底部(30μM的已知标准强抑制剂化合物)来确定测定窗口，并且使用希尔模型计算IC50。
细胞增殖测定：
HCT116WT细胞和KO-MTAP细胞在由McCoys培养基(西格玛公司，#M8403)、10％(v/v)胎牛血清和1％(v/v)L-谷氨酰胺组成的细胞培养基中培养。收获后，将细胞分配到黑色384孔Costar板(#3712，康宁公司)中，得到400个细胞/孔，总体积为40μl细胞培养基。在最高浓度为30μM的十二点重复半对数化合物浓度-反应之后，使用LabcyteEcho555声学分配器，将测试化合物和参考对照直接添加到细胞板中。
在铺板4μl阿尔玛蓝(赛默科技公司，#DAL1100)后，平行产生第0天的板但不添加测试化合物和参考对照，将其在37C、5％CO2下孵育3h。孵育后，用荧光激发波长为540-570nm(峰值激发为570nm)，荧光发射为580-610nm(峰值发射为585nm)的EnVision读板器读板。
然后将添加的细胞板在37℃下孵育5天，然后添加阿尔玛蓝并按照与第一板相同的方案在Envision中读板。分析数据并使用Genedata软件通过归一化至板0计算IG50。
在前述测定中获得的数据呈现于下表2中。
表2实例1至29在MTAP野生型(WT)细胞和MTAP敲除(KO)细胞中抑制PRMT5蛋白的活性以及在MTAP野生型(WT)细胞和MTAP敲除(KO)细胞中抑制细胞增殖的活性
如从表2中呈现的结果可以看出，根据本说明书的实例都是“MTA协同的”PRMT5抑制剂，并且此活性谱在缺失MTAP的细胞中提供增强的抗增殖活性。更详细地，对第2列和第3列的检查揭示，当MTA存在于测定系统中时，对分离的蛋白质(即PRMT5酶)造成50％抑制所需的PRMT5抑制剂的浓度大大减小，与当MTA不存在时的数十至数百nM范围(第3列)相比，当MTA存在时观察到的在MTA存在下的IC50在个位数或数十nM范围中(第2列)。实例1、2和3的数据清楚地说明了在MTA存在下这种增强的活性，在MTA存在下观察到的IC50分别为3.8、6.0和8.5nM，而在MTA不存在下它们的活性为25、27和61nM。
如从对表2的第4列和第5列的检查可以容易地看出，在HCT116细胞测定中观察到相同的、毫无争议更明显的“MTA协同的”抑制作用。再次比较实例1、2和3的结果(分别在第4列和第5列中，5.3、5.9和13nM的IC50相比于290、200和560nM的IC50)，根据本说明书的PRMT5抑制剂的活性在敲除MTAP的HCT116细胞中大得多，敲除MTAP的HCT116细胞因为它们缺乏MTAP而积累MTA。相反，在HCT116野生型细胞(第5列)中，PRMT5抑制大大降低，并且观察到更适度的IC50值。最后，将PRMT5抑制活性翻译为MTAP敲除和野生型HCT116人癌细胞的体外抗增殖作用由第6列和第7列中呈现的数据证实。如从它们的“MTA协同的”PRMT5抑制活性所预期的，根据本说明书的PRMT5抑制剂在MTAP缺陷型细胞(第6列)中比在MTAP野生型细胞中发挥大得多的抗增殖作用，与MTAP WT细胞中已进入微摩尔范围内的IC50(>30、6.1和>30μM)相比，MTAPKO细胞中对于实例1、2和3的IC50(160、240和320nM)在数百纳摩尔范围内。可以容易地理解，根据本说明书的PRMT5抑制剂具有活性谱，该活性谱使它们成为了用于治疗携带MTAP基因缺失并因此积累MTA的约15％的实体肿瘤的有希望的候选物。
实例
本说明书中所描述的这些化合物进一步在以下实例中阐明。化合物使用Chemdraw版本20.0.2.51命名。这些实例仅是通过说明的方式给出并且是非限制性的。通常：
(i)操作在环境温度下进行，即在17℃至25℃的范围内并且在惰性气体如氮气气氛下进行，除非另行说明；
(ii)通过旋转蒸发或利用Genevac设施或拜泰齐(Biotage)v10蒸发器在真空中进行蒸发且在通过过滤去除残余固体之后进行处理程序；
(iii)在自动化TeledyneIscoRf或Teledyne Isco上使用预填充的RediSep Rf GoldTM二氧化硅柱(20-40μm，球形粒子)、GraceResolvTM柱(/>二氧化硅)或Silicycle柱(40-63μm)进行快速色谱法纯化。
(iv)制备型反相HPLC在配备有SQ MS检测器(多模式ESI/APCI源)的Agilent1290Infinity II制备系统上进行，该系统具有沃特斯(Waters)CSH C18 OBD柱(5微米二氧化硅，30mm直径，100mm长度，流速50mL/min)，使用水(含有0.1％-0.3％氨水)或水(含有0.1％甲酸)和乙腈的极性递减的混合物作为洗脱液。在配备有QDa MS检测器的SepiatecP100SFC系统或沃特斯Prep 100SFC系统上进行制备型SFC纯化，使用如相应实验数据中详述的色谱条件。
(v)产率(当存在时)不必是可达到的最大值；
(vi)通常，具有式I的终产物的结构通过核磁共振(NMR)光谱法确认；NMR化学位移值是以δ级测量的[质子磁共振光谱使用Bruker Avance 500(500MHz)或Bruker Avance400(400MHz)仪测定]；除非另外说明，否则在环境温度下进行测量；使用了以下缩写：s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；dd，双二重峰；ddd，双二重峰的双重峰；dt，双三重峰；bs，宽信号
(vii)通常，具有式I的终产物在液相色谱法之后还通过质谱法(LCMS或UPLC)来表征；以1mL/min的流速使用反相C18二氧化硅，并且通过电喷雾质谱法以及通过记录220-320nm的波长范围的UV吸光度进行检测。使用尺寸为2.1x50mm，并且粒度为1.7微米的沃特斯Acquity UPLC CSH C18柱，在CSH C18反相二氧化硅上进行分析性UPLC。使用极性递减混合物作为洗脱液，例如使用水(含有0.1％甲酸或0.1％氨)作为溶剂A和乙腈作为溶剂B的极性递减的混合物进行梯度分析。典型的2分钟UPLC分析方法将采用经1.3分钟的溶剂梯度，以大约1mL/min，分别从溶剂A和B的97:3混合物到溶剂A和B的3:97混合物。除非另外说明，否则报告的分子离子对应于[M+H]+；对于具有多个同位素模式的分子(Br、Cl等)，除非另有说明，否则报告的值是对于最低同位素质量获得的值。
(viii)通常使用SCX-2(拜泰齐(Biotage)，丙磺酸官能化的二氧化硅，使用三官能硅烷制造，未封端的)柱进行离子交换纯化。
(ix)中间体纯度通过薄层色谱、质谱的、HPLC(高效液相色谱法)和/或NMR分析来评估；
(x)除非另有说明，否则制备中使用的分子筛尺寸为
(xi)使用了以下缩写：
aq. 水性
Boc 叔丁氧基羰基
Brettphos 2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯
A 二(1-金刚烷基)-正丁基膦
Conc. 浓缩的
CCl4 四氯化碳
DCM 二氯甲烷
DIBAL 氢化二异丁基铝
DIPEA/DIEA 二异丙基乙胺
DMAP 二甲基氨基吡啶
DMA N,N-二甲基乙酰胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EPhos 二环己基(3-异丙氧基-2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)磷烷
EtOAc 乙酸乙酯
h 小时
HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HPLC 高效液相色谱法
m-CPBA 3-氯过苯甲酸
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MgSO4 硫酸镁
MTBE 甲基叔丁基醚
NaHCO3 碳酸氢钠
Na2SO4 硫酸钠
NH4Cl 氯化铵
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
NIS N-碘代琥珀酰亚胺
外消旋-BINAP (±)-2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
rt/RT 室温
RockPhos第3代预催化剂 [(2-二-叔丁基膦基-3-甲氧基-6-甲基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)-2-(2-氨基联苯基)]甲磺酸钯(II)
Ruphos 2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯
sat. 饱和的
SEM 三甲基甲硅烷基乙氧基甲基
SFC 超临界流体色谱法
sol. 溶液
SPhos 2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯
TBAF 四正丁基氟化铵
TEA 三乙胺
TES 三乙基硅烷
TFA 三氟乙酸
TFAA 三氟乙酸酐
THF 四氢呋喃
THP 四氢吡喃
Tr 三苯甲基
Xantphos 4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨
中间体AA：2-(2-溴-4-氟苯基)乙酸甲酯
在rt下，将亚硫酰氯(31.3mL，429.1mmol)小心地逐滴添加到在MeOH(400mL)中的2-(2-溴-4-氟苯基)乙酸(CAS号61150-59-2)(100g，429.1mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌4小时，冷却并真空除去溶剂。将残余物在EtOAc(250mL)和饱和NaHCO3(200mL)之间分配。有机相用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂，以提供呈无色油状物的标题化合物(105g，99％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.64(3H,s),3.83(2H,s),7.25(1H,td),7.48(1H,dd),7.58(1H,dd))；m/z MH+未观察到。
中间体AB：5-氟-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯
将2-(2-溴-4-氟苯基)乙酸甲酯(45.0g，182.14mmol)和三乙胺(27.90mL，200.35mmol)置于具有MeOH(300mL)的钢制压力容器中。添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(与二氯甲烷复合)(4.46g，5.46mmol)并将容器密封。将容器用一氧化碳吹扫，然后用一氧化碳填充至7巴。将压力容器加热至100℃并搅拌2小时。使反应混合物冷却、排气并过滤以除去催化剂。真空除去溶剂并将残余物溶于EtOAc(250mL)中，用水(2x200mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物(38.40g，93％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.60(3H,s),3.80(3H,s),3.99(2H,s),7.42-7.49(2H,m),7.66(1H,ddd)；m/z MH+227。
中间体AC：外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-5-氟苯甲酸甲酯
将5-氟-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯(47.0g，207.8mmol)溶解在氯仿(450mL)中。添加1-溴吡咯烷-2,5-二酮(55.5g，311mmol)，然后添加2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(3.41g，20.8mmol)，并将反应混合物在回流下搅拌72小时。冷却反应混合物，用水(2x250mL)、盐水(100mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(50.50g，80％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.71(3H,s),3.86(3H,s),6.51(1H,s),7.56(1H,td),7.66(1H,dd),7.81(1H,dd)；m/z MH+未观察到。
中间体AD：外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将4-甲氧基苄胺(23.5g，171mmol)置于具有MeCN(300mL)的烧瓶中并添加碳酸氢钠(23.9g，285mmol)。通过滴液漏斗缓慢添加溶于MeCN(100mL)中的外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-5-氟苯甲酸甲酯(43.5g，142mmol)，同时使反应混合物达到80℃。将反应混合物在80℃下搅拌3小时。使反应混合物冷却，真空除去大部分MeCN并将残余物在EtOAc(400mL)和水(400mL)之间分配。将水相用EtOAc(100mL)再萃取，将有机物合并并用盐水(50mL)洗涤。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物(45.3g，96％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.69(3H,s),3.73(3H,s),4.31(1H,d),5.04(1H,d),5.18(1H,s),6.87-6.94(2H,m),7.17-7.24(2H,m),7.50(1H,ddd),7.57(1H,dd),7.62(1H,dd)；m/z MH+330。
中间体AE：外消旋-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在5℃下，在氮气下，将外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(24.0g，72.9mmol)、乙酸烯丙酯(11.8mL，109mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(1.67g，1.82mmol)和N,N'-((1R,2R)-环己烷-1,2-二基)双(2-(二苯基磷烷基)苯甲酰胺)(2.52g，3.64mmol)在THF(400mL)中搅拌。然后逐滴添加1,1,3,3-四甲基胍(13.7mL，109mmol)。将反应混合物在5℃下搅拌5分钟。真空除去THF。将反应混合物在EtOAc(400mL)和水(400mL)之间分配并将有机相通过相分离滤纸。真空除去溶剂，以提供橙色油状物。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(25.8g，96％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.04-3.20(2H,m),3.26(3H,s),3.73(3H,s),4.52(1H,d),4.71(1H,d),4.74-4.94(3H,m),6.82-6.96(2H,m),7.28-7.39(2H,m),7.45-7.58(2H,m),7.63(1H,dd)；m/z MH+370。
中间体AF：(S)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
外消旋-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(约70:30，有利于所希望的(S)对映异构体)(25.8g，69.7mmol)通过SFC色谱法(柱：PhenomenexC1，30x250mm，5微米，流动相：10％IPA+0.1％DEA/90％scCO2，流速：90ml/min，BPR：120巴，柱温：40℃UV最大值210nm)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(15.1g，56％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.04-3.20(2H,m),3.26(3H,s),3.73(3H,s),4.52(1H,d),4.71(1H,d),4.74-4.94(3H,m),6.82-6.96(2H,m),7.28-7.39(2H,m),7.45-7.58(2H,m),7.63(1H,dd)；m/z MH+370
(基于使用中间体的该对映异构体制备的生物活性化合物的生物活性(与使用其他对映异构体制备的那些相比)，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该中间体的立体化学分配)。
中间体AG：(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
向(S)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(60.0g，162mmol)在1,4-二噁烷(800mL)和水(200mL)中的溶液中添加氧化锇(VIII)(4％水溶液)(5.16mL，0.81mmol)、高碘酸钠(87.0g，406mmol)和2,6-二甲基吡啶(37.8mL，324mmol)。将该反应混合物在rt下搅拌18小时。将反应混合物过滤以除去盐并用DCM(500mL)彻底冲洗。将滤液置于装有水(500mL)的分液漏斗中并分配。将水相用DCM(300mL)再萃取，将有机相合并，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色结晶固体的标题化合物(50.1g，83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.40(3H,s),3.42-3.56(2H,m),3.72(3H,s),4.58(1H,d),4.74(1H,d),6.80-6.92(2H,m),7.19-7.27(2H,m),7.52(1H,ddd),7.60(1H,dd),7.69(1H,dd),9.07(1H,t)；m/z MH+372。
中间体AH：外消旋-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
根据中间体AG：(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯的方法，使用中间体AE：外消旋-(R)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯制备标题化合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)3.06-3.15(1H,m),3.19-3.29(1H,m),3.58(3H,s),3.78(3H,s),4.46(1H,d),5.11(1H,d),6.78-6.87(2H,m),7.18-7.25(2H,m),7.25-7.34(1H,m),7.44-7.52(1H,m),7.57-7.64(1H,m),9.06(1H,t)
中间体AI：甲基(S)-1-烯丙基-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-
将(S)-1-烯丙基-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(20.0g，54.1mmol)置于具有MeCN(200mL)和水(100mL)的烧瓶中。添加硝酸铈(IV)铵(74.2g，135mmol)并将反应混合物在rt下搅拌30分钟。真空除去MeCN并将反应混合物在DCM(400mL)和水(250mL)之间分配。将水相用DCM(200mL)萃取。合并有机相，用盐水(100mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈膏状结晶固体的标题化合物(12.5mg，93％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)2.79(1H,dd),2.94(1H,dd),3.68(3H,s),4.93-5.15(2H,m),5.35-5.57(1H,m),7.37-7.46(1H,m),7.50(1H,ddd),7.63-7.79(1H,m),9.32(1H,s)；m/z MH+250。
中间体AJ：3-溴-2-(溴甲基)-5-氟苯甲酸甲酯
在rt下，在氮气下，将2,2’-偶氮双(2-甲基丙腈)(1.66g，10.1mmol)一次性添加到在CCl4(400mL)中的3-溴-5-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(CAS号1187318-53-1)(25.0g，101mmol)和NBS(18.9g，106mmol)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至4％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(28.0g，85％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)3.98(3H,s),5.12(2H,s),7.51-7.58(1H,m),7.61-7.68(1H,m)；m/z MH+无质量离子。
中间体AK：3-溴-2-(氰基甲基)-5-氟苯甲酸甲酯
/>
在rt下，将三甲基甲硅烷基氰化物(19.7mL，147mmol)逐滴添加到在MeCN(200mL)中的3-溴-2-(溴甲基)-5-氟苯甲酸甲酯(24.0g，73.6mmol)和碳酸钾(20.4g，147mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌16小时，然后冷却至rt。将反应混合物倾倒入水(200mL)中，并用EtOAc(2x200mL)萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至20％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(16.5g，82％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)4.00(3H,s),4.36(2H,s),7.57-7.64(1H,m),7.72-7.79(1H,m)；m/z MH+272。
中间体AL：3-溴-5-氟-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯
在0℃下，将浓硫酸(3.33mL，62.5mmol)逐滴添加到在MeOH(100mL)中的3-溴-2-(氰基甲基)-5-氟苯甲酸甲酯(17.0g，62.5mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌5天，冷却并真空除去溶剂。将残余物倾倒入冰(200mL)中，用氢氧化铵(28％-30％水溶液)碱化并用EtOAc(3x150mL)萃取。合并有机相，经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(15.0g，79％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)3.74(3H,s),3.91(3H,s),4.28(2H,s),7.52-7.59(1H,m),7.65-7.73(1H,m)；m/z MH+305。
中间体AM：外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在rt下，将2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(1.82g，11.1mmol)一次性添加到在1,2-二氯乙烷(150mL)中的3-溴-5-氟-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯(11.3g，37.0mmol)和NBS(7.25g，40.7mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌2天，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至5％EtOAc)进行纯化。将级分蒸发至干燥，以提供呈无色液体的外消旋-3-溴-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-5-氟苯甲酸甲酯(12.0g，84％)。在rt下，将碳酸氢钠(10.5g，125mmol)一次性添加到在MeCN(100mL)中的外消旋-3-溴-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-5-氟苯甲酸甲酯(12.0g，31.3mmol)和4-甲氧基苄胺(2.14g，15.6mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时并冷却至rt。将反应混合物通过过滤，并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至20％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色胶状物的标题化合物(2.56g，20％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)3.67(3H,s),3.82(3H,s),4.26(1H,d),4.87(1H,s),5.12(1H,d),6.89(2H,d),7.27(2H,d),7.44(1H,dd),7.57(1H,dd)；m/z MH+408。
中间体AN：外消旋-1-烯丙基-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将3-溴丙-1-烯(4.03g，33.29mmol)添加到在DMF(55mL)中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(4.53g，11.10mmol)和碳酸铯(10.9g，33.3mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌1小时。使反应混合物冷却并在EtOAc(250mL)和水(250mL)之间分配。将有机相用水(2x100mL)、盐水(100mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至20％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(4.17g，84％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)3.09(s,2H),3.25-3.41(m,3H),3.73(d,3H),4.34(d,1H),4.75-5.12(m,4H),6.83-6.92(m,2H),7.17-7.29(m,2H),7.69(dd,1H),7.91(dd,1H)；m/z MH+448。
中间体AO：外消旋-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将锇酸钾(VI)二水合物(0.07g，0.19mmol)添加到在二噁烷(90mL)和水(30mL)中的外消旋-1-烯丙基-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-异吲哚啉-1-甲酸甲酯(4.17g，9.30mmol)、2,6-二甲基吡啶(1.99g，18.6mmol)和高碘酸钠(5.97g，27.9mmol)中。将该反应混合物在rt下搅拌3小时。将反应混合物用乙酸乙酯(200ml)和水(200mL)稀释。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(3.31g，79％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)3.12(3H,s),3.71(3H,s),3.73-3.78(2H,m),4.41(1H,d),4.88(1H,d),6.83-6.91(2H,m),7.18-7.25(2H,m),7.69-7.76(1H,m),7.85-7.93(1H,m),9.16(1H,d)；m/z MH+450。
中间体AP：外消旋4-溴-6-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1'-甲基-螺[异吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1,2'-二酮
在rt下，将乙酸钠(2.58g，31.5mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(70mL)中的盐酸甲胺(1.06g，15.7mmol)和外消旋-7-溴-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(3.54g，7.86mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(5.00g，23.59mmol)，将反应混合物在60℃下搅拌16小时并使其冷却至rt。将反应混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，并用EtOAc(200mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至70％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(1.20g，35％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.16-2.29(1H,m),2.51(1H,d),2.71(3H,s),3.56(2H,t),3.73(3H,s),4.45(1H,d),4.62(1H,d),6.83-6.91(2H,m),7.20-7.29(2H,m),7.65(1H,dd),7.87(1H,dd),m/z MH+433
中间体AQ：(6-氯-5-氟吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯
向在二噁烷(1L)中的5-溴-2-氯-3-氟吡啶(100g，475.22mmol)中添加氨基甲酸叔丁酯(61.20g，522.74mmol)和碳酸铯(310.00g，950.43mmol)。将溶液在真空下脱气并用氮气的惰性气氛吹扫5分钟，然后添加三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(13.06g，14.26mmol)和(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-二基)双(二苯基磷烷)(Xantphos)(11.00g，19.01mmol)。将反应混合物在氮气下加热至85℃，持续16小时，然后冷却至rt。滤出固体并用过量二噁烷洗涤。真空除去溶剂，以提供呈深橙色胶状物的粗标题化合物(179g，153％)，其在静置时固化。粗胶状物不经进一步纯化直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)1.49(9H,s),7.98(1H,dd),8.29(1H,d),9.98(1H,s)；m/z MH+247。
中间体AR：6-氯-5-氟吡啶-3-胺
在20℃下，将在1,4-二噁烷(137mL，547.3mmol)中的4M HCl一次性添加到(6-氯-5-氟吡啶-3-基)氨基甲酸叔丁酯(36g，109.5mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的溶液中。将所得悬浮液在20℃下搅拌3天。将反应混合物用水(250mL)和EtOAc(100mL)稀释。分离有机相并用2M HCl(3x100mL)萃取，直到有机相中不再留有产物。将合并的水相搅拌并在冰浴中冷却至0℃。用50％的NaOH溶液将反应混合物碱化至pH14。然后将反应混合物用EtOAc(2x250mL)萃取，将合并的有机物用饱和盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂，以提供呈棕色固体的标题化合物(12.4g，77％)。不经进一步纯化直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)3.88(s,2H),6.80(dd,J＝9.6,2.5Hz,1H),7.68(d,J＝2.5Hz,1H)。
中间体AS2-溴-6-氯-5-氟吡啶-3-胺
将在MeCN(250mL)中的6-氯-5-氟吡啶-3-胺(56.8g，379.3mmol)冷却至5℃并经15分钟添加NBS(67.50g，379.3mmol)在MeCN(500mL)中的溶液。将反应混合物温热至rt并搅拌45分钟。添加水(2L)并将反应混合物搅拌30分钟。将所得固体滤出并用水(400mL)洗涤。将固体真空干燥，以提供呈棕色固体的标题化合物(76g，89％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)6.01(2H,s),7.12(1H,d)；m/z MH+225
中间体AT：5-氯-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸
将乙酸钯(3.35g，14.93mmol)、三苯基膦(3.92g，14.93mmol)、2-溴-6-氯-5-氟吡啶-3-胺(18.0g，74.65mmol)和丙酮酸(15.57mL，224mmol)置于具有1,4-二噁烷(88mL)的烧瓶中。添加三乙胺(45.80mL，328.5mmol)并将反应在氮气下在100℃下加热2.5小时。将反应混合物冷却至rt并过滤以除去不需要的固体。将滤液用2M NaOH(200mL)稀释并添加MTBE(200mL)。然后将反应混合物剧烈搅拌并分离。有机相用2M NaOH(100mL)洗涤。将合并的碱性水相用浓HCl(水溶液)小心酸化，并通过过滤收集沉淀的棕色固体并干燥。将深棕色固体悬浮于MeOH(90mL)中并在rt下搅拌2小时。将固体过滤并真空干燥，以提供呈米色固体的标题化合物(14.60g，91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)7.16(1H,dd),7.84(1H,dd),12.36(1H,s),13.46(1H,s)；m/z MH+214。
中间体AU：5-氯-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
在rt下，将硫酸(3.08mL，57.83mmol)小心地逐滴添加到在MeOH(113mL)中的5-氯-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸(14.60g，57.83mmol)中。将反应混合物在回流下搅拌18小时。使反应混合物冷却并真空除去溶剂。将饱和NaHCO3(400mL)小心地添加到残余物中并将所得沉淀滤出，用水洗涤并真空干燥以提供呈棕色固体的标题化合物(14.20g，107％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.91(3H,s),7.24(1H,dd),7.88(1H,dd),12.56(1H,s)；m/z MH+229
中间体AV：5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯
在5℃下，在氮气下，将双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(1M于THF中)(101mL，100.9mmol)经15分钟逐滴添加到5-氯-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(21.74g，77.60mmol)和(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(18.83mL，100.9mmol)在THF(419mL)中的溶液中。将反应混合物在5℃下搅拌30分钟。添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾(1M于THF中)(15.52mL，15.52mmol)并将反应混合物在5℃下再搅拌30分钟。添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(1.88mL，10.09mmol)并在5℃下再搅拌15分钟。将反应混合物用饱和NH4Cl(400mL)淬灭并用EtOAc(400mL)稀释。将水相用EtOAc(250mL)再萃取。将合并的有机相经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗物质悬浮于庚烷(450mL)中并搅拌5分钟。滤出不需要的固体并用庚烷(50mL)洗涤。真空除去溶剂，以提供呈棕色胶状物的标题化合物(32.50g，117％)，其在静置时固化。该胶状物不经进一步纯化直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.13(9H,s),0.70-0.80(2H,m),3.38-3.51(2H,m),3.89(3H,s),5.95(2H,s),7.41(1H,d),8.40-8.54(1H,m)；m/z MH+359
中间体AW：(5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇
在5℃下，经15分钟将二异丁基氢化铝(1M于甲苯中)(170mL，170.42mmol)逐滴添加到5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸甲酯(27.80g，77.47mmol)在DCM(333mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在rt下搅拌30分钟。将反应混合物小心地倾倒入2MNaOH(500mL)中，用DCM(500mL)稀释并搅拌1小时。将有机相分离并且将水相用DCM(2x200mL)萃取。将合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡橙色油状物的标题化合物(17.60g，68％)，其在静置时固化。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.10(9H,s),0.75-0.83(2H,m),3.36-3.56(2H,m),4.72(2H,d),5.50(1H,t),5.60(2H,s),6.57(1H,d),8.24(1H,dd)；m/z MH+331
中间体AX：5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶
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在rt下，将亚硫酰氯(13.2mL，181.4mmol)小心地逐滴添加到在DCM(200mL)中的(5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇(20.0g，60.45mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。然后缓慢添加饱和NaHCO3(500mL)。一旦气体逸出停止，分离相并将水相用DCM(300mL)再萃取。合并有机相，用盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂，以提供呈棕色结晶固体的标题化合物(19.2g，91％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)-0.10(9H,s),0.75-0.9(2H,m),3.43-3.53(2H,m),5.07(2H,s),5.66(2H,s),6.7-6.9(1H,m),8.32(1H,dd)；m/z MH+349
中间体AY：5-氯-2-(溴甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶
在rt下，将三溴化磷(2.57mL，27.20mmol)添加到在THF(30mL)中的(5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇(3.00g，9.07mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NaHCO3(150mL)淬灭，并用EtOAc(3x125mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色固体的标题化合物(3.00g，84％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)-0.02(9H,s),0.84-1.01(2H,m),3.44-3.61(2H,m),4.74(2H,s),5.58(2H,s),6.73-6.79(1H,m),7.51-7.63(1H,m)；m/z MH+395。
中间体AZ：1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯
在rt下，将亚硫酰氯(11.25mL，154.2mmol)小心地逐滴添加到在甲醇(200mL)中的1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸(CAS号136818-50-3)(25.0g，154.2mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌18小时。使反应混合物冷却并真空除去溶剂。将残余物用饱和NaHCO3(250mL)研磨。将所得沉淀滤出，用水(2x200mL)洗涤，然后用醚(200mL)洗涤并真空干燥，以提供呈米色固体的标题化合物(24.3g，90％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.89(3H,s),7.12-7.22(2H,m),8.12(1H,dd),8.42(1H,dd),12.48(1H,s)；m/z MH+177
中间体BA：2-(甲氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物
将1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(24.30g，137.93mmol)悬浮于二乙醚(500mL)中。添加3-氯过氧苯甲酸(61.80g，275.86mmol)并将反应混合物在rt下搅拌5小时。真空除去溶剂，并将固体在饱和NaHCO3(200mL)中研磨。滤出沉淀，用水洗涤并干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(20.23g，76％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.87(3H,s),7.16(1H,dd),7.30(1H,s),7.75(1H,dd),8.31(1H,dd)(NH在水信号下丢失)；m/zMH+193。
中间体BB：4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯
将2-(甲氧基羰基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物(20.0g，104.1mmol)和四丁基溴化铵(50.3g，156.1mmol)置于具有1,2-二甲氧基乙烷(75mL)的烧瓶中并冷却至0℃。缓慢添加甲磺酸酐(36.30g，208.1mmol)并将反应混合物在rt下搅拌3小时。真空除去溶剂，将残余物在冰上冷却并用饱和NaHCO3(40mL)淬灭/研磨。将固体过滤，用水洗涤并干燥，以提供呈橙色固体的标题化合物(22.80g，86％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)3.91(3H,s),7.07(1H,d),7.48(1H,d),8.29(1H,d),12.95(1H,s)；m/z MH+255
中间体BC：4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯
将4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(10.0g，39.2mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(borinane)(16.44mL，117.6mmol)和磷酸钾(16.64g，78.41mmol)置于具有二噁烷(100mL)的烧瓶中。添加Pd118(0.64g，0.98mmol)并将反应混合物加热至100℃，持续2小时。使反应混合物冷却，滤出固体且用EtOAc(2x100mL)洗涤。合并滤液并真空除去溶剂。将残余物用EtOAc(100mL)研磨，并滤出固体，用少量EtOAc(20mL)洗涤并干燥，以提供呈米色固体的标题化合物(5.58g，74％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.48-2.51(3H,m),3.83(3H,s),6.92(1H,dd),7.20(1H,s),8.22(1H,d),12.34(1H,s)；m/z MH+191。
中间体BD：2-(甲氧基羰基)-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物
将4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(5.05g，26.55mmol)悬浮于二乙醚(100mL)中。添加3-氯过氧苯甲酸(11.90g，53.10mmol)并将反应混合物在rt下搅拌2小时。真空除去溶剂并将固体在饱和NaHCO3(50mL)中研磨。滤出沉淀，用水洗涤并干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(4.64g，85％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.57(3H,s),3.92(3H,s),7.03(1H,dd),7.41(1H,s),8.19-8.37(1H,m)(NH在水峰下)；m/z MH+207。
中间体BE：6-氯-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯
将2-(甲氧基羰基)-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶7-氧化物(4.35g，21.10mmol)悬浮于THF(80mL)中并添加双(三甲基甲硅烷基)胺(4.42mL，21.10mmol)。逐滴添加2,2,2-三氯乙酰氯(5.65mL，50.63mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物在EtOAc(200mL)和饱和碳酸氢钠溶液(200mL)之间分配。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(5.50g，116％)，其含有50％的三氯乙酰胺杂质。将粗化合物不经进一步纯化即用于下一反应。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.55(3H,d),3.89(3H,s),7.08(1H,d),7.30(1H,d),12.66(1H,s)；m/z MH+225。
中间体BF：6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯
将6-氯-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(5.00g，22.26mmol)置于具有DMF(25mL)的烧瓶中。添加氢化钠(60％于矿物油中)(1.33g，33.39mmol)并将反应混合物在rt下搅拌5分钟。然后添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(5.12mL，28.93mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物在EtOAc(150mL)与水(100mL)之间分配。将有机相用水(3x100mL)和盐水(100mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(4.80g，60％)，其在静置时结晶。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.14(9H,s),0.75-0.82(2H,m),2.57(3H,d),3.41-3.49(2H,m),3.88(3H,s),5.92(2H,s),7.19(1H,d),7.49(1H,s)；m/z MH+未观察到。
中间体BG：(6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲醇
在rt下，将在甲苯(29.8mL，29.75mmol)中的二异丁基氢化铝1M逐滴添加到6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-甲酸甲酯(4.80g，13.52mmol)在DCM(100mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟，然后在2MNaOH(50mL)和DCM(100mL)之间分配。分离有机相并用DCM(100mL)萃取水相。将合并的有机物通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色油状物的标题化合物(3.30g，74％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.11(9H,s),0.83(2H,dd),2.49(3H,d),3.42-3.51(2H,m),4.65-4.75(2H,m),5.38(1H,t),5.62(2H,s),6.55(1H,s),7.02(1H,d)；m/z MH+327。
中间体BH：6-氯-2-(氯甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶
在rt下，将亚硫酰氯(0.67mL，9.18mmol)小心地逐滴添加到在DCM(20mL)中的(6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲醇(1.00g，3.06mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NaHCO3淬灭，将有机相通过相分离器并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物(0.71g，67％)，其缓慢结晶，得到膏状固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.11(9H,s),0.83-0.87(2H,m),2.51(3H,s),3.46-3.54(2H,m),5.04(2H,s),5.67(2H,s),6.82(1H,s),7.09(1H,d)。
中间体BI：7-氯-2-(乙氧基羰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶4-氧化物
经5分钟的时间段将3-氯过氧苯甲酸(5.76g，33.39mmol)添加到在DCM(120mL)中的7-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯(5.00g，22.26mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，用饱和Na2SO3(100mL)、饱和NaHCO3(100mL)和饱和盐水(100mL)洗涤。真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为DCM中的0至10％MeOH)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(5.27g，98％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)1.43(3H,t),4.41-4.51(2H,m),7.20(1H,d),7.61(1H,s),8.19(1H,d),9.94(1H,s)；m/z MH+241
中间体BJ：5-溴-7-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯
在rt下，将磷酰基三溴化物(12.56g，43.80mmol)添加到在THF(160mL)中的7-氯-2-(乙氧基羰基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶4-氧化物(5.27g，21.90mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物用饱和NaHCO3中和并用EtOAc(100mL)和水(100mL)稀释。将水相用EtOAc(2x100mL)萃取。合并有机物，经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至25％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(4.20g，63％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.34(3H,t),2.52(1H,s),4.31-4.44(2H,m),7.27(1H,d),7.69(1H,s)；m/z MH+303
中间体BK：5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，经5分钟的时间段，将氢化钠(60％于矿物油中)(0.719g，17.99mmol)添加到在THF(70mL)中的5-溴-7-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯(4.20g，13.84mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。添加(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(0.60mL，3.38mmol)并将反应混合物搅拌16小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(20mL)淬灭，并且用EtOAc(3x20mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至12％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(5.40g，90％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.16(9H,s),0.74(2H,t),1.34(3H,t),3.37-3.49(2H,m),4.30-4.46(2H,m),6.19(2H,s),7.42(1H,s),7.77(1H,s)；m/z MH+433。
中间体BL：(5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇
在0℃下，将二异丁基氢化铝(1M于甲苯中)(20.75mL，20.75mmol)添加到在THF(20mL)中的5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯(3.00g，6.92mmol)中。将所得溶液在rt下搅拌1小时。将反应混合物用饱和罗谢尔盐(酒石酸钾钠四水合物)(15mL)淬灭并用EtOAc(3x20mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂，以提供呈黄色油状物的标题化合物(2.60g，96％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.12(9H,s),0.78(2H,t),3.51(2H,t),4.74(2H,d),5.76(2H,s),6.58-6.66(1H,m),7.47(1H,s)；m/z MH+391。
中间体BM：5-溴-2-(溴甲基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶
在0℃下，将三溴化磷(0.65mL，6.89mmol)逐滴添加到在THF(40mL)中的(5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇(2.25g，5.74mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌2小时。将反应混合物用饱和NaHCO3(20mL)淬灭，并且用EtOAc(3x25mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至10％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(2.15g，82％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.12(9H,s),0.72-0.85(2H,m),3.54(2H,t),5.01(2H,s),5.80(2H,s),6.91(1H,s),7.55(1H,s)；m/z MH+455。
中间体BN：5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，将氢化钠(60％于矿物油中)(0.21g，5.34mmol)添加到在DMF(12mL)中的5-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯(1.00g，4.45mmol)中。30分钟后，添加4-甲苯磺酰氯(1.02g，5.34mmol)。将该反应混合物在rt下搅拌3小时。将反应混合物用NH4Cl淬灭并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(0.90g，53％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)1.33(3H,t),2.38(3H,s),4.30-4.46(2H,m),7.42-7.53(3H,m),7.58(1H,d),7.91-8.02(2H,m),8.47-8.56(1H,m)；m/z MH+379
中间体BO：(5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇
将5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲酸乙酯(0.90g，2.38mmol)添加到在THF(6mL)中的二异丁基氢化铝(1M于甲苯中)(7.13mL，7.13mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌2小时。将反应混合物用饱和盐水(100mL)淬灭，并且用EtOAc(3x50mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂，以提供呈白色固体的标题化合物(0.78g，97％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.34(3H,s),4.90(2H,d),5.75(1H,t),6.78-6.85(1H,m),7.34-7.46(3H,m),7.83-7.94(2H,m),8.37-8.46(1H,m)；m/z MH+337。
中间体BP：2-(溴甲基)-5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶
将三溴化磷(0.33mL，3.47mmol)添加到在THF(12mL)中的(5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲醇(780mg，2.32mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物倾倒入饱和NaHCO3(25mL)中，并用EtOAc(3x15mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0至20％石油醚)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(0.76g，82％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.34(3H,s),5.19(2H,s),7.21(1H,d),7.35-7.44(2H,m),7.47(1H,d),7.86-7.97(2H,m),8.37-8.50(1H,m)；m/z MH+399
中间体BQ：(S)-1-烯丙基-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将(S)-1-烯丙基-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(11.80g，47.34mmol)和5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(16.9g，48.3mmol)置于具有无水DMF(60mL)的烧瓶中。添加碳酸铯(38.60g，118.4mmol)并将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却并在水(300mL)和EtOAc(300mL)之间分配。将水相用EtOAc(200mL)再萃取。合并有机相，用水(3x200mL)、盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色胶状物的标题化合物(22.2g，83％)，其缓慢固化/结晶，得到黄色固体。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)-0.09(9H,s),0.79-0.88(2H,m),3.03(3H,s),3.16-3.29(2H,m),3.46-3.60(2H,m),4.73(1H,d),4.89(1H,dd),4.94-5.10(2H,m),5.26(1H,d),5.59(1H,d),5.68(1H,d),6.76(1H,s),7.49-7.56(1H,m),7.58-7.68(2H,m),8.25(1H,dd)；m/zMH+562
中间体BR：(S)-1-烯丙基-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将(S)-1-烯丙基-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(15g，26.69mmol)、碳酸铯(21.74g，66.72mmol)、BrettPhos PdG3(2.42g，2.67mmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基-3,6-二甲氧基-[1,1'-联苯基]-2-基)磷烷(1.43g，2.67mmol)和氨基甲酸叔丁酯(6.25g，53.37mmol)置于具有脱气的2-甲基四氢呋喃(150mL)的烧瓶中。将氮气鼓泡通过反应混合物10分钟，然后将反应混合物回流3小时。将反应混合物冷却，用水(400mL)稀释并用EtOAc(2x300mL)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色泡沫的标题化合物(11.68g，68％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)-0.08(9H,s),0.82-0.86(2H,m),1.42(9H,s),2.99(3H,s),3.15-3.30(2H,m),3.52(2H,dtd),4.71(1H,d),4.88(1H,dd),4.94-5.10(2H,m),5.26(1H,d),5.55(1H,d),5.64(1H,d),6.69(1H,s),7.46-7.56(1H,m),7.57-7.66(2H,m),7.99(1H,d),9.18(1H,s)；m/z MH+643
中间体BS：(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
向(S)-1-烯丙基-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(11.50g，17.89mmol)在1,4-二噁烷(240mL)和水(60mL)中的溶液中添加氧化锇(VIII)(4％水溶液)(1.14mL，0.18mmol)、高碘酸钠(9.57g，44.73mmol)和2,6-二甲基吡啶(4.17mL，35.78mmol)。将该反应混合物在rt下搅拌18小时。将反应混合物在DCM(200mL)与水(100mL)之间分配。将水相用DCM(100mL)再萃取，合并有机相，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈米色泡沫的标题化合物(8.70mg，75％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)-0.07(9H,s),0.82(2H,ddd),1.42(9H,s),3.25(3H,s),3.46-3.54(2H,m),3.67(2H,s),4.92(1H,d),5.06(1H,d),5.52(1H,d),5.61(1H,d),6.57(1H,s),7.48-7.57(1H,m),7.64(1H,dd),7.68(1H,dd),8.00(1H,d),9.16(1H,s),9.25(1H,s)；m/z MH+645
(通用方法A)：
实例1：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(45g，121.2mmol)和4-氟苄胺(22.75g，181.8mmol)置于具有1,2-二氯乙烷(600mL)的烧瓶中并搅拌1小时。将反应混合物置于冰浴中并添加乙酸(13.87mL，242.4mmol)，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(51.4g，242.4mmol)。将该反应混合物在rt下搅拌18小时。将反应混合物用2M NaOH中和，用水(200mL)稀释，并用DCM(2x200mL)萃取。将合并的有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物。在下一反应中使用粗制品，假定100％产率。m/z MH+449
步骤2；(S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(54.30g，121.08mmol)置于具有MeCN(500mL)和水(250mL)的烧瓶中。添加硝酸铈(IV)铵(199.0g，363.2mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物在DCM(500mL)和水(500mL)之间分配。将有机相用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％(10％MeOH于EtOAc中))进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(30.50g，77％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.37-2.44(1H,m),2.45-2.49(1H,m),3.48(1H,ddd),3.60(1H,dt),4.49(2H,s),7.19-7.25(2H,m),7.32-7.37(2H,m),7.46(3H,d),9.11(1H,s)；m/z MH+329
步骤3；(S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(27g，82.24mmol)和5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(30.20g，86.35mmol)置于具有无水DMF(120mL)的烧瓶中。添加碳酸铯(67.00g，205.6mmol)并将反应混合物在50℃下搅拌1小时。将反应混合物在水(500mL)和EtOAc(500mL)之间分配并将水相用EtOAc(250mL)再萃取。合并有机相，用水(3x250mL)、盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将残余物用二乙醚(200mL)研磨，并将所得固体过滤，用醚洗涤并干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(42.20g，80％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.13(9H,s),0.55-0.80(2H,m),2.32-2.41(1H,m),2.52(1H,d),3.30-3.38(1H,m),3.41-3.51(2H,m),3.57-3.69(1H,m),4.22-4.36(2H,m),4.75(1H,d),5.11(1H,d),5.53(1H,d),5.61(1H,d),6.53(1H,s),7.13-7.23(4H,m),7.45-7.54(2H,m),7.57-7.64(1H,m),8.28(1H,dd)；m/z MH+641
步骤4；(S)-2-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(41.80g，65.19mmol)、二苯基甲亚胺(14.18g，78.23mmol)和2-甲基丙-2-醇钠(12.53g，130.4mmol)置于具有甲苯(300mL)的烧瓶中，并通过使氮气鼓泡通过混合物10分钟使反应混合物脱气。添加tBuXPhos(2.77g，6.52mmol)和三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(2.99g，3.26mmol)，然后将反应混合物在65℃下搅拌30分钟。使反应混合物冷却并在EtOAc(600mL)和水(600mL)之间分配。将有机相用盐水(200mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(49.50g，97％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.15(9H,s),0.57-0.76(2H,m),2.29-2.39(1H,m),2.39-2.48(1H,m),3.26-3.29(1H,m),3.34-3.45(2H,m),3.53-3.66(1H,m),4.24(2H,s),4.67(1H,d),5.04(1H,d),5.44(2H,q),6.32(1H,s),7.11(2H,dd),7.17-7.26(7H,m),7.43-7.54(4H,m),7.55-7.61(2H,m),7.68-7.76(2H,m),7.81(1H,d)；m/z MH+786
步骤5；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-2-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(49.50g，62.98mmol)置于具有2,2,2-三氟乙酸(96mL，1259.63mmol)的烧瓶中。添加0.50mL水并将反应混合物在40℃下搅拌4小时。真空除去2,2,2-三氟乙酸并将残余物溶于MeCN(75mL)中。添加氢氧化铵(28％-30％水溶液)(73.60mL，1889.45mmol)且将反应混合物在40℃下搅拌4小时，然后在rt下搅拌过夜。滤出所得固体并用MeCN(100mL)洗涤，以提供约20g所希望的化合物。将滤液减少至约200mL并通过反相色谱法(Interchim C18-HP快速柱，2x415g，100mL加载溶液/运行)进行纯化，使用水(含有按体积计1％NH4OH(28％-30％H2O溶液))和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱液(30％-60％梯度)。合并含有所希望的化合物的级分并添加先前获得的固体(约20g)。将浆液搅拌1小时，然后真空除去MeCN，导致形成淡黄色沉淀。滤出固体并真空干燥2小时。然后将固体悬浮在MeCN(150mL)中，并将浆液温和回流2小时，然后使其冷却过夜。滤出固体并真空干燥，以提供呈膏状结晶固体的标题化合物(19.54g，63％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.34-2.40(2H,m),3.36(1H,ddd),3.60(1H,dt),4.29(1H,d),4.39-4.52(2H,m),5.03(1H,d),5.48(2H,s),6.02(1H,d),7.18-7.27(2H,m),7.27-7.39(3H,m),7.46-7.55(2H,m),7.59(1H,ddd),10.69(1H,d)；m/z MH+492
通用方法B：
实例2：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-(2-((1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(9.50g，14.73mmol)和丁-2-炔-1-胺盐酸盐(2.33g，22.10mmol)置于具有1,2-二氯乙烷(100mL)的烧瓶中。添加三乙胺(3.08mL，22.10mmol)并将反应混合物在rt下搅拌30分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(6.25g，29.47mmol)并将反应混合物在rt下搅拌过夜。将反应混合物用DCM(250mL)稀释并用饱和NaHCO3(100mL)、水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂，以提供标题化合物。粗制化合物不经进一步纯化即用于下一反应，假定100％产率。m/z MH+666。
步骤2；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-(2-((1'-(丁-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(9.81g，14.73mmol)置于具有2,2,2-三氟乙酸(22.55mL，294.7mmol)的烧瓶中并将溶液在rt下搅拌2小时。真空除去2,2,2-三氟乙酸并将残余物溶于MeCN(20mL)中。添加氢氧化铵(28％-30％水溶液)(22.95mL，589.4mmol)并将反应混合物在40℃下搅拌2小时。将粗产物通过反相色谱法(InterchimC18-HP快速柱，415g)进行纯化，使用水(含有按体积计1％NH4OH(28％-30％H2O溶液))和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱液(30％-60％梯度)。将含有所希望的化合物的级分合并，真空除去MeCN，将所得固体滤出并干燥，以提供呈膏状结晶固体的标题化合物(3.74g，58％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)1.88(3H,t),2.36-2.44(2H,m),3.54(1H,ddd),3.76(1H,dt),4.08(2H,qq),4.24(1H,d),5.03(1H,d),5.49(2H,s),6.11(1H,d),7.36(1H,dd),7.49-7.64(3H,m),10.69(1H,d)；m/z MH+436
通用方法C：
实例3：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-(6-氟-2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将丙-2-炔-1-胺(0.10g，1.87mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(5mL)中的(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(0.40g，0.62mmol)中并在rt下搅拌1小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.40g，1.87mmol)并且将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭，并且用EtOAc(3x25mL)萃取。将合并的有机物经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.37g，90％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)0.12(9H,s),0.61-0.78(2H,m),1.43(9H,s),2.36-2.48(2H,m),3.37-3.47(2H,m),3.48-3.56(1H,m),3.78(1H,q),3.99(2H,d),4.62(1H,d),5.17(1H,d),5.44-5.63(2H,m),5.77(1H,s),6.55(1H,s),7.43-7.69(3H,m),8.03(1H,d),9.18(1H,s)；m/z MH+652
步骤2；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将2,2,2-三氟乙酸(3.00mL)添加到在DCM(3mL)中的(S)-(6-氟-2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.08mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。真空除去溶剂。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。使用7MNH3/MeOH将所希望的产物从柱上洗脱，将纯级分蒸发至干燥，以提供粗产物。将粗产物通过快速C18-快速色谱法(洗脱梯度为水(0.1％NH4HCO3)中的0至100％MeCN)进行纯化。将级分蒸发至干燥，以提供粗产物。将产物进一步通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(15mg，46％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.34-2.43(2H,m),3.38(1H,m),3.47-3.58(1H,m),3.70-3.81(1H,m),4.07-4.26(3H,m),5.00(1H,d),5.49(2H,s),6.09(1H,s),7.29-7.40(1H,m),7.45-7.62(3H,m),10.68(1H,s)；m/z MH+422
通用方法D：
实例4：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-炔-1-基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)丙-2-炔-1-胺(42mg，0.31mmol)添加在1,2-二氯乙烷(2mL)中的(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(100mg，0.16mmol)中并在rt下搅拌1小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(66mg，0.31mmol)，并且将反应混合物在40℃下搅拌16小时。将反应混合物冷却，添加2,2,2-三氟乙酸(2.00mL)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。将所希望的产物使用7M NH3/MeOH从柱上洗脱并且将级分蒸发至干燥。将产物进一步通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(30mg，38％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.35-2.45(1H,m),2.51-2.68(1H,m),3.52-3.64(1H,m),3.82(4H,d),4.19-4.41(3H,m),5.04(1H,d),5.51(2H,s),6.10(1H,d),7.35(1H,d),7.47-7.56(1H,m),7.56-7.63(2H,m),7.65(1H,s),8.04(1H,s),10.70(1H,d)；m/z MH+502
通用方法E：
实例5：(S)-4-((2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-1'-基)甲基)-2-氟苯甲腈
在rt下，将4-(氨基甲基)-2-氟苯甲腈盐酸盐(58mg，0.31mmol)和乙酸钠(25mg，0.31mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(1.50mL)中的(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(100mg，0.16mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(66mg，0.31mmol)并将反应混合物在rt下搅拌16小时。添加2,2,2-三氟乙酸(1.50mL)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。在减压下除去溶剂并将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。使用7MNH3/MeOH将所希望的产物从柱上洗脱并将级分蒸发至干燥，以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(49mg，61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.35-2.50(2H,m),3.44(1H,td),3.65-3.76(1H,m),4.35(1H,d),4.53(1H,d),4.59(1H,d),5.01(1H,d),5.51(2H,s),6.07(1H,d),7.28(1H,dd),7.36(1H,d),7.44(1H,dd),7.52(1H,td),7.57-7.65(2H,m),7.95(1H,dd),10.71(1H,d)；m/z MH+517
实例6：(S)-1'-(3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苄基)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法E，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和3-(2H-1,2,3-三唑-2-基)苄胺盐酸盐制备标题化合物(27mg，32％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.39(2H,t),3.43(1H,dt),3.67(1H,dt),4.30(1H,d),4.55(1H,d),4.66(1H,d),5.09(1H,d),5.51(2H,s),6.03(1H,d),7.30-7.38(2H,m),7.49(1H,td),7.54-7.65(3H,m),7.95(1H,t),8.01(1H,dt),8.17(2H,s),10.72(1H,d)；m/z MH+541
实例7：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,5-二氟苄基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和2,5-二氟苄胺制备标题化合物(33mg，42％，淡黄色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO)2.39(2H,t),3.36-3.46(1H,m),3.60-3.71(1H,m),4.25(1H,d),4.47(1H,d),4.56(1H,d),5.05(1H,d),5.51(2H,s),6.03(1H,d),7.15-7.24(1H,m),7.21-7.32(1H,m),7.29-7.39(2H,m),7.47-7.62(3H,m),10.71(1H,d)；m/z MH+510
实例8：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-(2-((1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
在rt下，经1小时的时间段，将三乙酰氧基硼氢化钠(3.94g，18.61mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(50mL)中的(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(4.00g，6.20mmol)和2,2-二氟乙-1-胺(1.01g，12.41mmol)中。将反应混合物在40℃下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，并且用EtOAc(3x100mL)萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(4.20g，100％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,23℃)-0.24(9H,s),0.50-0.60(2H,m),1.30(9H,s),2.18-2.36(2H,m),3.26-3.42(3H,m),3.91(3H,q),4.48(2H,d),5.06(2H,d),5.82-5.90(1H,m),7.91(2H,d),8.13(1H,s),9.07(2H,s),11.82(1H,s)；m/z MH+678
步骤2；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将2,2,2-三氟乙酸(30mL)添加到(S)-(2-((1'-(2,2-二氟乙基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(4.00g，5.90mmol)中，并将反应混合物在rt下搅拌1小时。真空除去2,2,2-三氟乙酸并将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。将所希望的产物使用7M NH3/MeOH从柱上洗脱并且将级分蒸发至干燥。将粗产物通过快速C18-快速色谱法(洗脱梯度为以在水(0.1％NH4HCO3)中的0至50％MeCN)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(2.00g，76％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.32-2.49(2H,m),3.54-3.92(4H,m),4.30(1H,d),5.02(1H,d),5.52(2H,s),6.03-6.43(2H,m),7.31-7.41(1H,m),7.51-7.63(3H,m),10.71(1H,d)；m/z MH+448
实例9：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-(氟甲基)环丙基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法C，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和(1-(氟甲基)环丙基)甲胺盐酸盐制备标题化合物(70mg，17％，黄色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,23℃)0.65(4H,s),2.41(2H,t),3.12-3.23(1H,m),3.47(1H,d),3.55(1H,s),3.81(1H,t),4.07-4.40(3H,m),5.02(1H,d),5.52(2H,s),6.08(1H,s),7.36(1H,d),7.46-7.67(3H,m),10.70(1H,s)；m/z MH+470
实例10：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；外消旋-6-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1'-甲基-螺[异吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1,2'-二酮
在rt下，将乙酸钠(19.88g，242.4mmol)一次性添加到在1,2-二氯乙烷(400mL)中的外消旋-5-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(30.00g，80.78mmol)和盐酸甲胺(16.36g，242.4mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(51.40g，242.4mmol)并将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物倾倒入饱和NaHCO3(1L)中，并且用DCM(3x750mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至60％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(10.00g，35％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.29-2.40(2H,m),2.72-2.86(3H,m),3.28-3.36(2H,m),3.72(3H,d),4.20(1H,d),4.80(1H,d),6.78-6.91(2H,m),7.18-7.31(2H,m),7.43-7.58(2H,m),7.60-7.67(1H,m)；m/z MH+355
步骤2；(S)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将硝酸铈铵(30.90g，56.44mmol)添加到在MeCN(80mL)和水(40mL)中的外消旋-6-氟-2-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1'-甲基-螺[异吲哚啉-3,3'-吡咯烷]-1,2'-二酮(10.00g，28.22mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物倾倒入水(250mL)中并用EtOAc(250mL)萃取。将有机相经MgSO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为DCM中的0至10％MeOH)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色油状物的标题化合物(5.60g，85％)。将对映异构体混合物通过手性HPLC进行纯化，柱：CHIRALART纤维素-SB，4.6*100mm，3.0um；流动相A：，流动相B：MEOH(0.1％DEA)；流速：2mL/min；梯度：10％B；220nm。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(2.90g，52％)。
(基于使用中间体的该对映异构体制备的生物活性化合物的生物活性(与使用其他对映异构体制备的那些相比)，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该中间体的立体化学分配)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.29-2.51(2H,m),2.87(3H,s),3.47-3.60(1H,m),3.64-3.78(1H,m),7.38-7.51(2H,m),7.53-7.64(1H,m),9.03(1H,s)；m/z MH+235
步骤3；(S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在0℃下，将氢化钠(60％于矿物油中)(0.13g，3.30mmol)添加到在DMF(15mL)中的(S)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(0.595g，2.54mmol)中。1小时后，添加2-(溴甲基)-5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(1.00g，2.54mmol)，并将反应混合物在rt下搅拌2小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，并且用EtOAc(100mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色油状物的标题化合物(1.18g，85％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.11(9H,d),0.65-0.85(2H,m),2.32-2.45(1H,m),2.63(3H,s),2.89(1H,s),3.36-3.53(3H,m),3.66-3.81(1H,m),4.75(1H,d),5.07(1H,d),5.52(1H,d),5.56-5.69(1H,m),6.64(1H,s),7.44-7.56(1H,m),7.53-7.68(2H,m),8.28(1H,d)；m/zMH+547
步骤4；(S)-2-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在氮气下，在rt下，将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.092g，0.10mmol)添加到在甲苯(15mL)中的(S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(1.10g，2.01mmol)、二苯基甲亚胺(0.44g，2.41mmol)、叔丁醇钠(0.39g，4.02mmol)和2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯(0.085g，0.20mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌2小时。将反应混合物冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(1.26g，91％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.12(9H,s),0.63-0.80(2H,m),2.43(3H,s),2.51(2H,s),3.34(3H,s),3.62-3.76(1H,m),4.80(1H,d),4.94(1H,d),5.36(1H,d),5.45(1H,d),6.46(1H,s),7.08-7.18(2H,m),7.21-7.32(3H,m),7.43-7.66(6H,m),7.66-7.76(2H,m),7.83(1H,d)；m/z MH+692
步骤5；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将2,2,2-三氟乙酸(20mL)添加到(S)-2-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(1.20g，1.73mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。真空除去溶剂并将残余物用NaHCO3碱化。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并依次用水(2x50mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(30mg，44％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.32-2.47(2H,m),2.84(3H,s),3.40-3.54(1H,m),3.66-3.81(1H,m),4.30(1H,d),4.97(1H,d),5.58(2H,s),6.12(1H,d),7.39(1H,d),7.46-7.59(2H,m),7.64-7.71(1H,m),10.71(1H,s)；m/z MH+398
实例11：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(2-(二氟甲氧基)乙基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法B，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(二氟甲氧基)乙-1-胺盐酸盐制备标题化合物(14mg，38％，膏状固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)2.36-2.45(2H,m),3.44-3.66(3H,m),3.75-3.85(1H,m),3.94-4.08(2H,m),4.27(1H,d),5.01(1H,d),5.49(2H,s),6.10(1H,d),6.75(1H,t),7.36(1H,d),7.51(1H,td),7.55-7.62(2H,m),10.67(1H,s)；m/z MH+478
实例12：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((3-氟吡啶-2-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法C，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和(3-氟吡啶-2-基)甲胺盐酸盐制备标题化合物(16mg，40％，黄色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,22℃)2.38(2H,t),3.43-3.56(1H,m),3.77(1H,q),4.36(1H,d),4.6-4.81(2H,m),5.06(1H,d),5.49(2H,s),6.04-6.11(1H,m),7.34(1H,d),7.48-7.61(3H,m),7.70-7.83(2H,m),8.44-8.53(1H,m),10.69(1H,d)；m/z MH+493
实例13：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(异噁唑-5-基甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和异噁唑-5-基甲胺盐酸盐制备标题化合物(23mg，40％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.39-2.47(2H,m),3.50(1H,d),3.67-3.81(1H,m),4.27(1H,d),4.59-4.79(2H,m),5.02(1H,d),5.50(2H,s),6.06(1H,s),6.51(1H,d),7.30-7.40(1H,m),7.46-7.64(3H,m),8.59(1H,d),10.70(1H,s)；m/z MH+465
实例14：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((5-(三氟甲基)哒嗪-3-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和(5-(三氟甲基)哒嗪-3-基)甲胺制备标题化合物(19mg，23％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.44(2H,d),3.56-3.66(1H,m),3.82-3.93(1H,m),4.41(1H,d),4.87-5.13(3H,m),5.49(2H,s),6.17(1H,d),7.35(1H,d),7.48-7.56(1H,m),7.56-7.63(1H,m),7.72-7.80(1H,m),8.12(1H,t),9.70(1H,d),10.68(1H,d)；m/z MH+544
实例15：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((1-甲基-1H-吲唑-5-基)甲基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和(1-甲基-1H-吲唑-5-基)甲胺制备标题化合物(42mg，51％，白色固体)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.35(2H,t),3.33(1H,s),3.51-3.65(1H,m),4.07(3H,s),4.30(1H,d),4.47-4.66(2H,m),5.05(1H,d),5.51(2H,s),6.02(1H,d),7.20-7.29(1H,m),7.35(1H,d),7.40-7.60(2H,m),7.56-7.71(3H,m),8.08(1H,s),10.71(1H,s)；m/z MH+528
实例16：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(苯并[d]噁唑-2-基甲基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法C，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和苯并[d]噁唑-2-基甲胺盐酸盐制备标题化合物(20mg，52％，米色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)2.43-2.49(2H,m),3.67(1H,ddd),3.84-3.98(1H,m),4.40(1H,d),4.85(1H,d),4.94(1H,d),5.10(1H,d),5.49(2H,s),6.16(1H,d),7.31-7.40(1H,m),7.39-7.48(2H,m),7.61(2H,ddq),7.75-7.85(3H,m),10.72(1H,d)；m/z MH+515
实例17：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-氟苯氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法C，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(4-氟苯氧基)乙-1-胺制备标题化合物(32mg，69％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)2.35-2.48(2H,m),3.52-3.67(2H,m),3.72(1H,ddd),3.78-3.88(1H,m),4.13(2H,tt),4.30(1H,d),5.01(1H,d),5.49(2H,s),6.05(1H,d),6.93-7.04(2H,m),7.11-7.20(2H,m),7.32-7.38(1H,m),7.39-7.49(1H,m),7.57(2H,td),10.66(1H,d)；m/z MH+522
实例18：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(4-甲基噻唑-5-基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和2-(4-甲基噻唑-5-基)乙-1-胺制备标题化合物(27mg，69％，白色固体)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)2.31-2.43(5H,m),3.05(2H,t),3.49(3H,dq),3.66-3.8(1H,m),4.17(1H,d),4.95(1H,d),5.48(2H,s),6.09(1H,d),7.36(1H,d),7.38-7.52(2H,m),7.57(1H,dd),8.86(1H,s),10.64(1H,s)；m/z MH+509
实例19：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-((R*)-1-(1-甲基环丙基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
根据通用方法D，使用(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯和外消旋-1-(1-甲基环丙基)乙-1-胺盐酸盐制备2种非对映异构体的混合物。非对映异构体通过手性柱进行分离：CHIRALPAK IF，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：IPA--HPLC；流速：20mL/min；梯度：在42min内从50％B到50％B；波长：220/254nm；RT1(min)：26.51；RT2(min)：34.77。将含有第二洗脱异构体2的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(28mg，13％，95％ee)。
(注意实例19在甲基环丙基位置处具有未知的立体化学构型，在四级中心处具有固定的推测的S立体化学构型(鉴于使用的中间体具有推测的S立体化学构型))
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)0.21-0.33(2H,m),0.40(1H,d),0.55-0.62(1H,m),0.99-1.06(6H,m),2.31-2.46(2H,m),3.53(1H,t),3.66-3.77(1H,m),3.80-3.90(1H,m),4.19-4.28(1H,m),4.99(1H,d),5.49(2H,s),6.08(1H,s),7.31-7.39(1H,m),7.49-7.58(1H,m),7.54-7.61(2H,m),10.71(1H,s)；m/z MH+466
实例20：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(3-环丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-(2-((1'-(3-环丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(100mg，0.16mmol)和3-环丙基丙-2-炔-1-胺盐酸盐(30mg，0.23mmol)置于具有1,2-二氯乙烷(2mL)的烧瓶中。添加三乙胺(32.4μl，0.23mmol)并将反应混合物在rt下搅拌15分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(66mg，0.31mmol)并将反应混合物在rt下搅拌6小时。将反应混合物用DCM(25mL)稀释并用饱和NaHCO3(25mL)洗涤。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。合并纯级分并真空除去溶剂，以提供呈米色泡沫的标题化合物(63mg，59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,27℃)-0.13(9H,s),0.64-0.67(2H,m),0.68-0.77(2H,m),0.77-0.83(2H,m),1.35(1H,ddt),1.42(9H,s),2.39(2H,t),3.37-3.52(3H,m),3.69-3.80(1H,m),3.86-4.00(2H,m),4.52(1H,d),5.19(1H,d),5.49-5.59(2H,m),6.52(1H,s),7.50-7.62(3H,m),8.02(1H,d),9.15(1H,s)；m/z MH+692
步骤2；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(3-环丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-(2-((1'-(3-环丙基丙-2-炔-1-基)-5-氟-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.06mmol)置于具有甲酸(250μL，0.06mmol)的烧瓶中且将溶液在rt下放置72小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色干燥薄膜的标题化合物(10mg，35％)(m/z MH+492)。将中间体溶解在DMF(0.50mL)中。添加乙-1,2-二胺(12mg，0.20mmol)并且将反应混合物在rt下搅拌1小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈无色干燥薄膜的标题化合物(4mg，45％)。
1H NMR(400MHz,CD3CN,27℃)0.63-0.69(2H,m),0.78-0.84(2H,m),1.31(1H,dddd),2.39(1H,ddd),2.53-2.61(1H,m),3.64(1H,td),3.78(1H,dt),3.97(1H,dd),4.13(1H,dd),4.45(1H,d),4.86(2H,d),6.23(1H,d),7.34-7.41(2H,m),7.45(1H,dd),7.49(1H,dd),8.10(1H,s),9.44(1H,s)；m/z MH+462
实例21：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；2-氯-6-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯
在rt下，在一氧化碳下，将1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯钯(II)DCM加合物(1.55g，1.90mmol)添加到在MeOH(80mL)中的2-(2-溴-3-氯苯基)乙酸甲酯(CAS号1021089-12-2)(5.00g，18.97mmol)和TEA(7.93mL，56.92mmol)中。将反应混合物在130℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至20％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(2.36g，51％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)3.61(3H,d),3.73(2H,s),3.85(3H,d),7.34-7.43(1H,m),7.44-7.54(2H,m)；m/z MH+未观察到。
步骤2；外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-6-氯苯甲酸甲酯
在rt下，将2,2'-偶氮双(2-甲基丙腈)(0.63g，3.82mmol)添加到在CCl4(50mL)中的5-氯-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯(2.32g，9.54mmol)和NBS(3.40g，19.09mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时。使反应混合物冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至20％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈无色油状物的标题化合物(1.75g，57％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)3.66(3H,d),3.90(3H,s),5.90(1H,s),7.59(3H,d)；m/zMH+321
步骤3；外消旋-7-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
/>
将4-甲氧基苄胺(0.77g，5.73mmol)添加到在MeCN(28mL)中的外消旋-2-(1-溴-2-甲氧基-2-氧代乙基)-6-氯苯甲酸甲酯(1.75g，5.45mmol)和碳酸氢钠(1.83g，21.82mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌3小时。使反应混合物冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(1.29g，68％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)3.63-3.76(6H,m),4.29(1H,d),4.99(1H,d),5.18(1H,s),6.85-6.96(2H,m),7.17-7.26(2H,m),7.49-7.69(3H,m)；m/z MH+346
步骤4；外消旋-1-烯丙基-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在5℃下，在氮气下，将1,1,3,3-四甲基胍(0.67mL，5.38mmol)逐滴添加到在THF(16mL)中的外消旋-7-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(1.24g，3.59mmol)、乙酸烯丙酯(0.58mL，5.38mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(0.08g，0.09mmol)和N,N'-((1R,2R)-环己烷-1,2-二基)双(2-(二苯基磷烷基)苯甲酰胺)(0.12g，0.18mmol)中。将所得溶液在5℃下搅拌10分钟。将反应混合物倾倒入水(300mL)中，并用EtOAc(2x300mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(1.31g，94％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)3.05-3.14(1H,m),3.14-3.22(1H,m),3.24(3H,s),3.73(3H,s),4.49(1H,d),4.71(1H,d),4.76-4.89(2H,m),4.86-4.97(1H,m),6.84-6.93(2H,m),7.30-7.38(2H,m),7.52-7.59(2H,m),7.59-7.67(1H,m)；m/z MH+386
步骤5；外消旋-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将锇酸钾(VI)二水合物(0.02g，0.07mmol)添加到在二噁烷(15mL)和水(5mL)中的外消旋-1-烯丙基-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(1.28g，3.32mmol)、2,6-二甲基吡啶(0.71g，6.63mmol)和高碘酸钠(2.13g，9.95mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物用EtOAc(100mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(1.01g，78％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)3.37(3H,s),3.49(1H,s),3.53(1H,s),3.70(3H,s),4.54(1H,d),4.68(1H,d),6.78-6.89(2H,m),7.17-7.27(2H,m),7.53-7.68(3H,m),9.05(1H,s)；m/z MH+388
步骤6；外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将4-氟苄胺(0.650g，5.19mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(16mL)中的外消旋-4-氯-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(1.01g，2.60mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.10g，5.19mmol)并将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(10mL)淬灭，并用EtOAc(3x25mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至70％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(1.00g，83％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.24-2.42(2H,m),3.35-3.40(1H,m),3.49-3.66(1H,m),3.70(3H,s),4.11(1H,d),4.40(2H,s),4.82(1H,d),6.80-6.90(2H,m),7.05-7.35(6H,m),7.35-7.42(1H,m),7.51-7.60(1H,m),7.55-7.66(1H,m)；m/z MH+465
步骤7；外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将2,2,2-三氟乙酸(13mL)添加到外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)-2-(4-甲氧基苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(0.96g，2.06mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物用饱和NaHCO3中和并用水(20mL)和EtOAc(3x50mL)稀释。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(0.61g，86％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.29-2.50(2H,m),3.39-3.52(1H,m),3.53-3.65(1H,m),4.46(2H,s),7.14-7.26(2H,m),7.27-7.39(3H,m),7.46-7.53(1H,m),7.57(1H,t),9.09(1H,s)；m/z MH+345
步骤8；外消旋-4-氯-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在0℃下，将氢化钠(60％于矿物油中)(0.10g，2.57mmol)添加到在THF(12mL)中的外消旋-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(0.59g，1.71mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。添加5-氯-2-(溴甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(0.88g，2.23mmol)，并将反应混合物在rt下搅拌6小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(2mL)淬灭并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.71g，63％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.15(9H,s),0.55-0.79(2H,m),2.19-2.42(1H,m),2.50(1H,s),3.31-3.39(1H,m),3.40-3.52(2H,m),3.53-3.68(1H,m),4.20-4.38(2H,m),4.70(1H,d),5.08(1H,d),5.52(1H,d),5.61(1H,d),6.54(1H,s),7.09-7.25(4H,m),7.34-7.42(1H,m),7.53-7.62(1H,m),7.57-7.68(1H,m),8.29(1H,d)；m/z MH+658
步骤9；外消旋-2-((4-氯-1'-(4-氟苄基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气下，在rt下，将外消旋-4-氯-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(400mg，0.61mmol)添加到在二噁烷(4.5mL)中的三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(111mg，0.12mmol)、氨基甲酸叔丁酯(64mg，0.55mmol)、9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)呫吨(70mg，0.12mmol)和碳酸铯(396mg，1.22mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌4小时。真空除去溶剂并将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为DCM中0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.18g，40％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.15(9H,s),0.67(2H,s),1.40(9H,s),2.22-2.39(2H,m),3.58(2H,d),4.14-4.40(3H,m),4.67(1H,d),5.07(1H,s),5.36-5.61(2H,m),6.43(1H,s),7.14-7.30(4H,m),7.40(1H,d),7.45-7.69(3H,m),8.01(1H,d),9.20(1H,s)；m/z MH+738
步骤10：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在氮气下，在rt下，将外消旋-2-((4-氯-1'-(4-氟苄基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(172mg，0.23mmol)在2,2,2-三氟乙酸(2.5mL)中搅拌1小时。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。使用7MNH3/MeOH将所希望的产物从柱上洗脱，并将纯级分蒸发至干燥，以提供外消旋-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-4-氯-1'-(4-氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮。对映异构体通过手性柱进行分离：CHIRALPAKIF，2*25cm，5um；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2MNH3-MeOH)-HPLC，流动相B：EtOH；流速：15mL/min；梯度：在30分钟内从50B到50B；254/220nm；RT1：7.28；RT2：23.02。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(31mg，27％)。
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该化合物的立体化学分配)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.38(2H,t),3.39(1H,d),3.53-3.67(1H,m),4.28(1H,d),4.45(2H,s),5.01(1H,d),5.55(2H,s),6.02(1H,s),7.17-7.45(6H,m),7.53-7.71(2H,m),10.72(1H,d)；m/z MH+508。
实例22：(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮
步骤1；外消旋-3-(((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)氨基)-1-(4-氟苄基)吡咯烷-2-酮
将3-氨基-1-(4-氟苄基)吡咯烷-2-酮(167mg，0.80mmol)在DCM(5mL)中的溶液添加到5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-甲醛(264mg，0.80mmol)的搅拌溶液中，并将混合物搅拌2小时。添加硼氢化钠(46mg，1.22mmol)，然后添加MeOH(5mL)。将反应混合物搅拌15分钟并添加更多的硼氢化钠(46mg，1.22mmol)。将反应混合物再搅拌15分钟并用饱和NaHCO3(5mL)淬灭并用DCM(5x10mL)萃取。使用相分离柱分离有机相并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化，以提供呈胶状物的标题化合物(318mg，76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)-0.05(9H,s),0.84-0.95(2H,m),1.69(1H,dq),2.20(2H,dddd),3.16(2H,ddd),3.49(3H,ddd),4.10(1H,d),4.23(1H,d),4.42(2H,s),5.58(2H,d),6.58(1H,s),6.97-7.05(2H,m),7.19(2H,ddd),7.53(1H,dd)；m/z MH+521。
步骤2；外消旋-N-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-N-(1-(4-氟苄基)-2-氧代吡咯烷-3-基)烟酰胺
将烟酰氯盐酸盐(72mg，0.40mmol)添加到外消旋-3-(((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)氨基)-1-(4-氟苄基)吡咯烷-2-酮(97mg，0.19mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(200μl，1.12mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化，以提供呈胶状物的标题化合物(114mg，97％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,90℃)-0.10(9H,s),0.71(2H,t),2.22(1H,s),2.29-2.38(1H,m),3.19(2H,t),3.39(2H,t),4.29(1H,d),4.44(1H,d),4.52(1H,t),4.70(1H,d),4.99(1H,d),5.45-5.57(2H,m),6.92(1H,s),7.04-7.14(2H,m),7.29(2H,dd),7.43(1H,dd),7.90(1H,d),8.17(1H,d),8.64(1H,dd),8.69-8.71(1H,m)；m/z MH+626。
步骤3；外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮。
在-78℃下，将1M双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾在THF(401μl，0.40mmol)中的溶液逐滴添加到外消旋-N-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-N-(1-(4-氟苄基)-2-氧代吡咯烷-3-基)烟酰胺(114mg，0.18mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟，缓慢温热至-20℃(约60分钟)并用甲酸(40μl，1.04mmol)淬灭。将反应混合物真空浓缩并再溶于DCM(5mL)中。添加氧化锰(IV)(237mg，2.73mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1.5小时。将反应混合物通过垫过滤，并且将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化，以提供呈胶状物的标题化合物(23mg，20％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)-0.00(9H,s),0.82(1H,ddd),0.91(1H,ddd),2.30(1H,ddd),2.57(1H,ddd),3.43(1H,td),3.52(1H,dt),3.61(2H,dddd),4.03(1H,d),4.48(1H,d),5.08(1H,d),5.15(1H,d),5.52(1H,d),5.58(1H,d),6.53-6.59(1H,m),7.07(1H,dd),7.1-7.23(4H,m),7.66(1H,dd),8.82(1H,d),9.23(1H,d)；m/z MH+624。
步骤4；外消旋-2'-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮
将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(10mg，0.01mmol)添加到外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮(48mg，0.08mmol)、二苯基甲亚胺(42mg，0.23mmol)、tBuXPhos(10mg，0.02mmol)和2-甲基丙-2-醇钠(30mg，0.31mmol)在甲苯(3mL)中的脱气溶液中。将反应混合物密封在微波管中并在加热块中在70℃下加热1小时。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化，以提供标题化合物(24mg，40％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)-0.10(9H,s),0.66-0.84(2H,m),2.19(1H,ddd),2.44(1H,ddd),3.30(1H,td),3.33-3.43(1H,m),3.43-3.55(2H,m),3.79(1H,d),4.39(1H,d),5.00(2H,s),5.33(1H,d),5.41(1H,d),6.39(1H,s),6.96(1H,dd),7.04-7.12(2H,m),7.15(5H,td),7.20-7.25(2H,m),7.28-7.33(1H,m),7.36-7.45(2H,m),7.46-7.53(1H,m),7.83(2H,d),8.73(1H,d),9.15(1H,d)；m/z MH+769。
步骤5；(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮
将外消旋-2'-((5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮(33mg，0.04mmol)在2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)和水(0.05mL)中的溶液在70℃下搅拌20分钟并真空浓缩。将残余物再溶于MeCN(2mL)中并添加30％NH3水溶液(0.5mL)。将反应混合物在微波反应器中在70℃下搅拌30分钟，冷却并通过制备型HPLC纯化，以提供外消旋产物(20mg，100％)。两种对映异构体使用SFC条件进行分离：柱：Phenomenex Lux iC5，21.2x250mm，5微米，流动相：50％MeOH+0.1％NH3/50％scCO2，流速：60mL/min；BPR：120巴，柱温：40℃，UV最大值220nm(保留时间：异构体1-11.9分钟和异构体2-14.4分钟)以提供异构体1(10mg，>99纯度，>99％ee)和异构体2(10mg，>99纯度，>99％ee)。
异构体1(实例22)-(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的实例22的立体化学分配)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)2.29(1H,ddd),2.65(1H,dt),3.44-3.60(2H,m),4.33(1H,d),4.37(1H,d),4.40(2H,s),4.71(1H,d),5.03(1H,d),6.24(1H,d),7.01(1H,dd),7.06-7.14(2H,m),7.21-7.29(3H,m),8.74(1H,d),9.12(1H,d),9.15(1H,s)；m/z MH+475。
异构体2-(R)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,1'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-2,3'(2'H)-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)2.29(1H,ddd),2.65(1H,dt),3.44-3.60(2H,m),4.33(1H,d),4.37(1H,d),4.40(2H,s),4.71(1H,d),5.03(1H,d),6.24(1H,d),7.01(1H,dd),7.06-7.14(2H,m),7.21-7.29(3H,m),8.74(1H,d),9.12(1H,d),9.15(1H,s)；m/z MH+475。
实例23：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt，氮气下，将Pd118(63mg，0.09mmol)添加到在二噁烷(5mL)中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(400mg，0.92mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(232mg，1.85mmol)和磷酸三钾(392mg，1.85mmol)中。将反应混合物在90℃下搅拌4小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(30mg，88％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.20(3H,s),2.71(3H,s),3.33(2H,s),3.46-3.60(2H,m),3.72(3H,s),4.42(1H,d),4.59(1H,d),6.82-6.90(2H,m),7.18-7.27(2H,m),7.28-7.39(2H,m)；m/z MH+369。
步骤2；外消旋-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将硝酸铈(IV)铵(446mg，0.81mmol)添加到在水(1.50mL)和MeCN(3mL)中的外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(300mg，0.81mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(120mg，59％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.22(3H,s),2.49(1H,d),2.51(1H,d),2.86(3H,s),3.53-3.65(2H,m),7.21-7.33(2H,m),9.16(1H,s)；m/zMH+249
步骤4；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在氮气下，在rt下，将外消旋-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(120mg，0.48mmol)添加到在DMF(3mL)中的5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(169mg，0.48mmol)和碳酸铯(315mg，0.97mmol)中。将反应混合物在60℃下搅拌16小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至4％EtOAc)进行纯化。将级分蒸发至干燥，以提供呈不纯的黄色固体的外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(100mg，37％)。
在氮气下，将EPhosPdG4(13mg，0.01mmol)添加到在1,4-二噁烷(2mL)中的外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',7-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(80mg，0.14mmol)、氨基甲酸叔丁酯(17mg，0.14mmol)、碳酸铯(93mg，0.29mmol)和EPhos(8mg，0.01mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌1小时。将反应混合物通过过滤，并真空除去溶剂。添加2,2,2-三氟乙酸(2mL)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。使用7MNH3/MeOH从柱上洗脱外消旋产物，合并级分并真空除去溶剂。对映异构体通过手性柱进行分离：CHIRALPAK ID，2*25cm，5um；流动相A：MTBE(0.5％2MNH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：18mL/min；梯度：在10min内从30B到30B；220/254nm。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(4mg，7％)。
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该化合物的立体化学分配)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.21(4H,s),2.59-2.71(1H,m),2.74(3H,s),3.48-3.65(2H,m),4.58(1H,d),4.78(1H,d),6.28(1H,d),6.80(2H,broad),7.30-7.41(2H,m),7.76(1H,d),11.34(1H,s)；m/zMH+412
实例24：(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；外消旋-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在氮气下，将RockphosPdG3(0.19g，0.23mmol)添加到在MeOH(10mL)中的外消旋-7-溴-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(1.00g，2.31mmol)和碳酸铯(1.50g，4.62mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌1小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速C18快速色谱法(洗脱梯度为水(0.1％FA)中的0至60％MeOH)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈不纯的白色固体的外消旋-(R)-5-氟-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苄基)-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(0.22g，25％)。在rt下，将硝酸铈铵(0.86g，1.56mmol)添加到在水(1mL)和MeCN(2mL)中的中间体(0.20g，0.52mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.13g，95％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.23-2.35(1H,m),2.52-2.59(1H,m),2.83(3H,s),3.44-3.61(2H,m),3.85(3H,s),6.96-7.03(1H,m),7.10-7.18(1H,m),9.05(1H,s)；m/z MH+265
步骤2；外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在氮气下，在rt下，将氢化钠(60％于矿物油中)(36mg，0.91mmol)添加到在THF(3mL)中的外消旋-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(200mg，0.76mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌20分钟。然后添加2-(溴甲基)-5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(298mg，0.76mmol)，并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，并用EtOAc(25mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至60％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(200mg，46％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)-0.11(9H,s),0.67-0.77(2H,m),2.34-2.46(2H,m),2.70(3H,s),3.27-3.47(1H,m),3.43-3.50(1H,m),3.47-3.60(2H,m),3.84(3H,s),4.71-4.84(1H,m),4.95-5.11(1H,m),5.45-5.56(1H,m),5.58(1H,t),6.65(1H,d),7.12-7.16(1H,m),7.45-7.67(1H,m),8.25-8.32(1H,m)；m/z MH+577
步骤3；外消旋-(6-氟-2-((5-氟-7-甲氧基-1'-甲基-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气下，将EPhosPd(28mg，0.03mmol)添加到在1,4-二噁烷(3mL)中的外消旋-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(200mg，0.30mmol)、氨基甲酸叔丁酯(36mg，0.30mmol)、碳酸铯(297mg，0.91mmol)和EPhos(16mg，0.03mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌1小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至60％EtOAc)进行纯化。将级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的粗标题化合物(150mg，75％)。m/z MH+658。
步骤4；(S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-7-甲氧基-1'-甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将2,2,2-三氟乙酸(2mL)添加到外消旋-(6-氟-2-((5-氟-7-甲氧基-1'-甲基-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.23mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌1小时并真空除去溶剂。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。使用7M NH3/MeOH将所希望的产物从柱上洗脱，合并级分并真空除去溶剂。对映异构体通过手性柱进行分离：CHIRALPAK ID，2*25cm，5μm；流动相A：Hex:DCM＝3:1(0.5％2M NH3-MeOH)--HPLC，流动相B：EtOH--HPLC；流速：15mL/min；梯度：在47min内从50％B到50％B；波长：220/254nm。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(23mg，24％)。
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该化合物的立体化学分配)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.19-2.31(1H,m),2.38-2.49(1H,m),2.78(3H,s),3.37-3.47(1H,m),3.48-3.58(1H,m),3.86(3H,s),4.28(1H,d),4.89(1H,d),5.49(2H,s),6.11(1H,d),7.08-7.15(1H,m),7.15-7.23(1H,m),7.36(1H,d),10.65(1H,d)；m/z MH+428
实例25：(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
步骤1；外消旋-1-(4-氟苄基)-3-((4-甲氧基苄基)氨基)吡咯烷-2-酮
将4-甲氧基苯甲醛(251μl，2.06mmol)添加到3-氨基-1-(4-氟苄基)吡咯烷-2-酮(430mg，2.06mmol)在DCM(5mL)中的搅拌溶液中，并将反应混合物在rt下搅拌2小时。添加硼氢化钠(138mg，3.65mmol)，然后添加MeOH(5mL)。将反应混合物搅拌45分钟，用饱和NaHCO3(15mL)淬灭并用DCM(3x50mL)萃取。使用相分离柱分离有机相并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc，然后洗脱梯度为EtOAc中的0至20％MeOH)进行纯化，以提供呈无色胶状物的标题化合物(0.64g，94％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.78(1H,dq),2.22(1H,dddd),3.07-3.23(2H,m),3.45(1H,t),3.80(1H,d),3.80(3H,s),3.84(1H,d),4.34-4.50(2H,m),6.83-6.88(2H,m),6.96-7.04(2H,m),7.19(2H,ddd),7.24-7.29(2H,m)；m/z MH+329。
步骤2；外消旋-N-(1-(4-氟苄基)-2-氧代吡咯烷-3-基)-N-(4-甲氧基苄基)异烟酰胺
将异烟酰氯盐酸盐(136mg，0.76mmol)添加到1-(4-氟苄基)-3-((4-甲氧基苄基)氨基)吡咯烷-2-酮(125mg，0.38mmol)和DIPEA(332μl，1.90mmol)在DCM(3mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌15分钟并真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化，以提供呈固体的标题化合物(159mg，96％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,90℃)2.02-2.12(1H,m),2.11-2.22(2H,m),3.11-3.22(2H,m),3.76(3H,s),4.29(1H,d),4.32-4.41(1H,m),4.45(1H,d),4.60(1H,s),6.89(2H,d),7.11(2H,t),7.24(2H,d),7.26-7.34(2H,m),7.38(2H,d),8.65(2H,d)；m/z MH+434。
步骤3；外消旋-1-(4-氟苄基)-2'-(4-甲氧基苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
在-78℃下，将双(三甲基甲硅烷基)酰胺钾溶液(1M于THF中)(807μl，0.81mmol)逐滴添加到外消旋-N-(1-(4-氟苄基)-2-氧代吡咯烷-3-基)-N-(4-甲氧基苄基)异烟酰胺(140mg，0.32mmol)在THF(3mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在-78℃下搅拌30分钟并经4小时温热至-20℃。将反应混合物在-20℃下保持2天。将反应混合物用甲酸(50μl，1.30mmol)淬灭并真空浓缩。将残余物溶于DCM(3mL)中。添加氧化锰(IV)(440mg，5.06mmol)并将反应混合物搅拌1小时。滤出无机固体并真空浓缩滤液。将粗产物通过制备型HPLC纯化以提供呈胶状物的标题化合物(26mg，19％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)2.24(1H,ddd),2.34(1H,ddd),3.24-3.34(1H,m),3.49(1H,dt),3.78(3H,s),4.06(1H,d),4.41(1H,d),4.61(1H,d),5.25(1H,d),6.75-6.85(2H,m),7.06-7.17(4H,m),7.25-7.3(2H,m),7.81(1H,dd),8.52(1H,d),8.81(1H,d)；m/zMH+432。
步骤4；外消旋-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
将硝酸铈(IV)铵(182mg，0.33mmol)添加到外消旋-1-(4-氟苄基)-2'-(4-甲氧基苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮(26mg，0.06mmol)在MeCN(1mL)和水(0.5mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物在rt下搅拌45分钟并通过制备型HPLC进行纯化，以提供呈白色固体的标题化合物(14mg，75％)。
1H NMR(400MHz,MeOD-d4,27℃)2.56(1H,ddd),2.65(1H,ddd),3.60(1H,ddd),3.74(1H,dt),4.55(1H,d),4.61(1H,d),7.09-7.16(2H,m),7.33-7.40(2H,m),7.79(1H,dd),8.67(1H,d),8.79(1H,d)；m/zMH+312。
步骤5；外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
将外消旋-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮(14mg，0.04mmol)、5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(27mg，0.08mmol)，碳酸铯(51mg，0.16mmol)和DMA(1mL)的混合物在85℃下搅拌3小时并冷却至rt。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC进行纯化以提供呈胶状物的标题化合物(23mg，80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)-0.07(9H,s),0.75(1H,ddd),0.84(1H,ddd),2.28(1H,ddd),2.55(1H,ddd),3.37(1H,td),3.45-3.60(3H,m),4.00(1H,d),4.42(1H,d),5.03(1H,d),5.10(1H,d),5.44(1H,d),5.50(1H,d),6.51(1H,s),7.03-7.14(4H,m),7.59(1H,dd),7.81(1H,dd),8.43-8.52(1H,m),8.83(1H,d)；m/z MH+624。
步骤6；(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
/>
将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(5mg，5.41μmol)添加到外消旋-2'-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮(22mg，0.04mmol)、二苯基甲亚胺(20mg，0.11mmol)、tBuXPhos(5mg，10.81μmol)和2-甲基丙-2-醇钠(14mg，0.15mmol)在甲苯(2mL)中的脱气溶液中。将反应混合物密封在微波管中并在加热块中在80℃下加热1小时。冷却至rt后，将反应混合物用1滴甲酸淬灭并真空浓缩。将残余物再溶解于2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)和水(0.05mL)中。将反应混合物在40℃下搅拌30分钟并真空浓缩。添加MeCN(1mL)，然后添加30％NH3水溶液(0.5mL)。将混合物密封并在70℃下搅拌30分钟。将粗制混合物通过制备型HPLC进行纯化，以提供呈胶状物的外消旋-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮(13mg，78％)。对映异构体使用SFC条件进行分离：柱：YMC直链淀粉C，20x250mm，5微米，流动相：45％MeOH+0.1％NH3/55％scCO2：60mL/min；BPR：120巴，柱温：40℃，UV最大值210nm(保留时间：异构体1-3.3分钟和异构体2-11.8分钟)，以提供异构体1(6mg，>99纯度，>99％ee)和异构体2(5mg，>99纯度，>99％ee)。
异构体1-(R)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)2.33(1H,ddd),2.71(1H,dt),3.48-3.66(2H,m),4.34(1H,d),4.40(2H,s),4.40(1H,d),4.76(1H,d),5.03(1H,d),6.27(1H,d),7.06-7.14(2H,m),7.26(3H,s),7.78(1H,dd),8.49(1H,d),8.82(1H,d),9.11(1H,s)；m/z MH+475。
异构体2(实例25)-(S)-2'-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-1-(4-氟苄基)螺[吡咯烷-3,3'-吡咯并[3,4-c]吡啶]-1',2(2'H)-二酮
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该化合物的立体化学分配)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,27℃)2.33(1H,ddd),2.71(1H,dt),3.48-3.66(2H,m),4.34(1H,d),4.40(2H,s),4.40(1H,d),4.76(1H,d),5.03(1H,d),6.27(1H,d),7.06-7.14(2H,m),7.26(3H,s),7.78(1H,dd),8.49(1H,d),8.82(1H,d),9.11(1H,s)；m/z MH+475
实例26：(S)-5-氨基-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-7-甲腈
步骤1：(S)-1-烯丙基-2-((5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在0℃下，将氢化钠(60％于矿物油中)(0.29g，7.26mmol)添加到在DMF(20mL)中的(S)-1-烯丙基-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(1.73g，6.93mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌30分钟。添加5-溴-2-(溴甲基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(3.00g，6.60mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，并用EtOAc(2x100mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至50％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(3.85g，94％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.09(9H,s),0.77-0.88(2H,m),3.08(3H,s),3.12-3.32(2H,m),3.52-3.65(2H,m),4.77(1H,d),4.83-5.12(3H,m),5.25(1H,d),5.67(1H,d),5.92(1H,d),6.85(1H,s),7.41-7.70(4H,m)；m/z MH+622
步骤2：(S)-1-烯丙基-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在氮气下，在rt下，将(S)-1-烯丙基-2-((5-溴-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(3.80g，6.10mmol)添加到在二噁烷(20mL)中的三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(1.12g，1.22mmol)、氨基甲酸叔丁酯(0.71g，6.10mmol)、9,9-二甲基-4,5-双(二苯基膦基)呫吨(0.71g，1.22mmol)和碳酸铯(3.97g，12.20mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌4小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(3.00g，75％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.06(9H,d),0.84-0.89(2H,m),1.48(9H,s),3.01-3.10(3H,m),3.13-3.33(2H,m),3.54-3.71(2H,m),4.67-4.81(1H,m),4.84-5.15(3H,m),5.28(1H,d),5.63(1H,d),5.90(1H,d),6.69(1H,s),7.47-7.59(1H,m),7.59-7.71(2H,m),7.76(1H,s),9.84(1H,s)；m/z MH+659
步骤3：(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
在rt下，将二氧化二氧代锇钾二水合物(0.08g，0.20mmol)添加到在二噁烷(75mL)和水(25mL)中的(S)-1-烯丙基-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(2.70g，4.10mmol)、高碘酸钠(3.50g，16.38mmol)和2,6-二甲基吡啶(0.88g，8.19mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌16小时。将反应混合物倾倒入水(150mL)中并用EtOAc(2x200mL)萃取。合并有机相，用饱和盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至60％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色泡沫的标题化合物(1.80g，66％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)-0.03(9H,s),0.72-0.92(2H,m),1.54(9H,s),3.27-3.41(2H,m),3.54-3.61(5H,m),4.96(1H,d),5.22-5.38(1H,m),5.71(1H,d),5.89(1H,d),6.38(1H,s),7.29-7.37(2H,m),7.48-7.55(1H,m),7.57-7.64(1H,m),7.95(1H,s),9.20(1H,d)；m/z MH+661
步骤4：(S)-(7-氯-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
在rt下，将乙酸钠(112mg，1.36mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(10mL)中的(S)-2-((5-((叔丁氧基羰基)氨基)-7-氯-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(450mg，0.68mmol)和(1-甲基环丙基)甲胺盐酸盐(99mg，0.82mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(288mg，1.36mmol)并将反应混合物在rt下搅拌16小时。除去溶剂并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色固体的标题化合物(0.42g，88％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)-0.10(9H,s),0.24-0.46(4H,m),0.60-0.82(2H,m),0.90(3H,s),1.47(9H,s),2.35-2.49(2H,m),2.76(1H,d),3.19(1H,d),3.42-3.63(3H,m),3.83(1H,q),4.62(1H,d),5.18(1H,d),5.61(1H,d),5.74-5.88(1H,m),6.48(1H,s),7.42-7.83(4H,m),9.77(1H,s)；m/z MH+698
步骤5：(S)-5-氨基-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-7-甲腈
在rt下，在氮气下，将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(108mg，0.12mmol)添加到在二噁烷(0.5mL)中的(S)-(7-氯-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(410mg，0.59mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁(130mg，0.23mmol)、氰化锌(69mg，0.59mmol)和锌(8mg，0.12mmol)中。将反应混合物在100℃下搅拌4小时，冷却，通过垫过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈棕色胶状物的(S)-(7-氰基-2-((5-氟-1'-((1-甲基环丙基)甲基)-2',3-二氧代螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯。添加2,2,2-三氟乙酸(10mL，129.80mmol)并将反应混合物在rt下搅拌1小时。真空除去溶剂并将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)纯化。使用7MNH3/MeOH将所希望的产物从柱上洗脱，将纯级分蒸发至干燥，以提供粗产物。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色固体的标题化合物(85mg，32％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)0.25-0.55(4H,m),0.97(3H,s),2.37-2.50(2H,m),2.93(1H,d),3.36(1H,d),3.48-3.58(1H,m),3.79-3.90(1H,m),4.30(1H,d),5.03(1H,d),5.78(2H,s),6.13(1H,s),6.59(1H,s),7.39-7.79(3H,m),11.60(1H,s)；m/z MH+459
实例27：(S)-2-((5-氨基-6-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1：(S)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将2-(三氟甲氧基)乙-1-胺(2.92g，22.62mmol)添加到在1,2-二氯乙烷(80mL)中的(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(8.00g，21.54mmol)中。1小时后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(10.96g，51.70mmol)并将反应混合物在rt下搅拌16小时。真空除去溶剂。将粗产物通过快速硅胶色谱法(洗脱梯度为EtOAc中0至60％石油醚)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供外消旋-(R)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(9.50g，97％)。在rt下，将该物质添加到在MeCN(70mL)和水(35mL)中的硝酸铈(IV)铵(23.02g，42.00mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌2小时。将反应混合物用水(70mL)稀释，并用EtOAc(3x200mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为石油醚(60℃-90℃)中0至60％EtOAc，以及洗脱梯度为DCM中0至25％MeOH)进行纯化。将外消旋粗产物通过制备型手性HPLC进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(4.50g，65％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.36-2.50(2H,m),3.50-3.61(1H,m),3.58-3.68(1H,m),3.68-3.84(2H,m),4.21-4.34(2H,m),7.41-7.55(3H,m),9.10(1H,s)；m/z MH+333
步骤2：((S)-2-((5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在0℃下，将氢化钠(60％于矿物油中)(66mg，1.66mmol)添加到在THF(15mL)中的(S)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(460mg，1.39mmol)中并将反应混合物在rt下搅拌1小时。添加2-(溴甲基)-5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(720mg，1.80mmol)并将反应混合物在rt下搅拌3小时。将反应混合物用饱和NH4Cl淬灭，用饱和NaHCO3(25mL)碱化并用EtOAc(3x25mL)萃取。将有机相经Na2SO4干燥并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为DCM中的0至40％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.45g，50％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)2.38(3H,s),2.52-2.63(2H,m),3.49-3.61(2H,m),3.73-3.84(1H,m),3.84-3.95(1H,m),4.20-4.34(2H,m),4.68(1H,d),5.24(1H,d),6.73(1H,s),7.40(1H,d),7.43-7.50(2H,m),7.51-7.67(3H,m),7.86-7.93(2H,m),8.38-8.44(1H,m)；m/zMH+651
步骤3：(S)-(2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气下，在rt下，将XPhosPdG2(53mg，0.07mmol)添加到在1,4-二噁烷(0.5mL)中的(S)-2-((5-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(443mg，0.68mmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)磷烷(32mg，0.07mmol)、碳酸铯(443mg，1.36mmol)和氨基甲酸叔丁酯(239mg，2.04mmol)中。将反应混合物在90℃下搅拌6小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为DCM中的0至30％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈黄色固体的标题化合物(0.26g，51％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.46(9H,s),1.99(1H,s),2.36(3H,s),3.51-3.58(2H,m),3.74-3.90(2H,m),4.04(1H,q),4.24-4.30(2H,m),4.63(1H,d),5.23(1H,d),6.51(1H,s),7.43(2H,d),7.53-7.63(3H,m),7.78(1H,d),7.82-7.86(2H,m),8.30(1H,d),9.74(1H,s)；m/z MH+732
步骤4：(S)-2-((5-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-(2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-5-基)氨基甲酸叔丁酯(246mg，0.34mmol)溶于DCM(5mL)和2,2,2-三氟乙酸(5mL)中。将反应混合物在rt下搅拌2小时并真空除去溶剂。将粗产物通过离子交换色谱法(使用SCX柱)进行纯化。将所希望的产物使用7MNH3/MeOH从柱上洗脱并且将级分蒸发至干燥。将粗产物通过快速C18快速色谱法(洗脱梯度为水(0.1％NH4HCO3)中0至100％MeOH)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(0.13g，62％)。m/z MH+632。
步骤5：(S)-2-((5-氨基-6-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将N-氯代琥珀酰亚胺(19mg，0.14mmol)添加到在DMF(5mL)中的(S)-2-((5-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(93mg，0.14mmol)中。将反应混合物在rt下搅拌12小时。真空除去溶剂。将残余物用EtOAc(50mL)稀释，并且依次用水(2x50mL)和饱和盐水(20mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为EtOAc中的0至30％DCM)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(60mg，64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)1.23(2H,s),2.37(3H,s),3.50-3.57(2H,m),3.75-3.91(2H,m),4.25(2H,dd),4.53(1H,d),5.17(1H,d),6.24(2H,s),6.34(1H,s),7.44(2H,d),7.57-7.60(2H,m),7.80(2H,d),8.07(1H,d)(1H在DMSO信号下)；m/z MH+666
步骤6；(S)-2-((5-氨基-6-氯-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
在rt下，将四丁基氟化铵三水合物(78mg，0.25mmol)添加到在MeCN(1mL)中的(S)-2-((5-氨基-6-氯-1-甲苯磺酰基-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2-(三氟甲氧基)乙基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(55mg，0.08mmol)中。将反应混合物在80℃下搅拌2小时，冷却并真空除去溶剂。将粗产物通过快速C18-快速色谱法(洗脱梯度为水(0.1％NH4HCO3)中的0至100％MeCN)进行纯化。将级分蒸发至干燥并将不纯的产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈白色固体的标题化合物(5mg，12％)。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)2.40(2H,d),3.47-3.74(4H,m),3.76-3.88(1H,m),4.20-4.35(3H,m),5.01(1H,d),5.73(1H,s),6.10(1H,s),7.46-7.64(4H,m),10.84(1H,s)；m/z MH+512
实例28：(S)-2-((6-氨基-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；(S)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代乙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(1.50g，4.04mmol)和2,4,5-三氟苄胺(0.78g，4.85mmol)置于具有1,2-二氯乙烷(30mL)的烧瓶中。添加乙酸(0.46mL，8.08mmol)，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.71g，8.08mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2小时，冷却，用DCM(100mL)稀释并用饱和NaHCO3(100mL)洗涤。将有机相通过相分离滤纸，并真空除去溶剂，以提供呈白色泡沫的粗制(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(1.96g，4.04mmol)。将粗制(S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(1.96g，4.04mmol)置于具有MeCN(30mL)和水(15mL)的烧瓶中。添加硝酸铈(IV)铵(6.64g，12.12mmol)并将反应混合物在rt下搅拌30分钟。将反应混合物在DCM(100mL)与水(100mL)之间分配。将有机相通过相分离滤纸并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥至呈灰白色结晶固体的标题化合物(1.06g，72％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.41(1H,ddd),2.52-2.56(1H,m),3.53(1H,td),3.66(1H,dt),4.52(2H,s),7.45(3H,qt),7.50-7.57(1H,m),7.61(1H,ddd),9.11(1H,s)；m/z MH+365。
步骤2；(S)-2-((6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(200mg，0.55mmol)置于具有无水DMF(2mL)的烧瓶中。添加碳酸铯(537mg，1.65mmol)，然后添加溶解在无水DMF(2mL)中的6-氯-2-(氯甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶(209mg，0.60mmol)，并将反应混合物在110℃下搅拌1小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(50mL)淬灭，并萃取到EtOAc(50mL)中。将有机相用水(2x50mL)，盐水(50mL)洗涤，通过相分离器并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物(320mg，87％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.12(9H,s),0.71(2H,dddd),2.43(5H,s),3.35(1H,ddd),3.43(2H,dtd),3.62-3.73(1H,m),4.36(2H,s),4.57(1H,d),5.16(1H,d),5.50(1H,d),5.62(1H,d),6.45(1H,s),7.02(1H,d),7.37-7.45(1H,m),7.49-7.63(4H,m)；m/zMH+673
步骤3；(S)-(2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯
将(S)-2-((6-氯-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(350mg，0.52mmol)、氨基甲酸叔丁酯(305mg，2.60mmol)和碳酸铯(508mg，1.56mmol)置于具有1,4-二噁烷(2mL)的烧瓶中。将反应脱气15分钟，添加XPhosPdG2(40.9mg，0.05mmol)并将反应混合物在100℃下加热1小时。使反应混合物冷却，用EtOAc(20mL)稀释，用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机相通过相分离过滤器并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈淡黄色油状物的标题化合物(330mg，84％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)-0.13(9H,s),0.54-0.65(1H,m),0.71(1H,dt),1.27-1.31(1H,m),1.46(9H,s),2.37(4H,d),3.32(1H,d),3.37-3.43(2H,m),3.60-3.71(1H,m),4.29-4.41(2H,m),4.50(1H,d),5.17(1H,d),5.43(1H,d),5.57(1H,d),6.28(1H,s),7.36-7.40(1H,m),7.41-7.47(1H,m),7.48-7.67(4H,m),9.36(1H,s)；m/z MH+754
步骤4：(S)-2-((6-氨基-4-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将(S)-(2-((5-氟-2',3-二氧代-1'-(2,4,5-三氟苄基)螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2-基)甲基)-4-甲基-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-6-基)氨基甲酸叔丁酯(330mg，0.44mmol)置于具有2,2,2-三氟乙酸(1997mg，17.51mmol)的烧瓶中。将反应混合物在rt下搅拌1小时。真空除去2,2,2-三氟乙酸并将残余物溶于MeCN(4mL)中。添加氢氧化铵(28％-30％水溶液)(2045μl，52.53mmol)并将反应混合物在40℃下搅拌4小时，然后在rt下放置过夜。将粗产物通过制备型HPLC进行纯化。将含有所希望的化合物的级分蒸发至干燥，以提供呈膏状固体的标题化合物(14mg，61％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,30℃)2.22(3H,d),2.35-2.42(2H,m),3.31-3.38(1H,m),3.59-3.69(1H,m),4.14(1H,d),4.51(2H,q),4.97-5.09(1H,m),5.41(2H,s),5.97(1H,d),6.04(1H,d),7.45-7.53(2H,m),7.56(2H,dt),7.64(1H,ddd),10.66(1H,d)；m/z MH+524
实例29：(1S,5'S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
步骤1；外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1-(2-甲基烯丙基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯EN11657-70-01
将3-溴-2-甲基丙-1-烯(350μl，3.45mmol)添加到外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(508mg，1.54mmol)、碳酸钾(682mg，4.94mmol)的搅拌混合物中，并将反应混合物在70℃下搅拌90分钟，然后在rt下搅拌36小时。将反应混合物用饱和NH4Cl(10mL)和水(10mL)淬灭，然后用DCM(3x15mL)萃取。将有机相通过相分离柱并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至60％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈蜡状固体的标题化合物(0.53g，89％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.17-1.23(3H,m),3.07(3H,s),3.09(1H,d),3.17(1H,d),3.77(3H,s),4.26(1H,d),4.45-4.53(1H,m),4.67(1H,p),5.13(1H,d),6.80-6.85(2H,m),7.22(1H,td),7.28-7.35(3H,m),7.54(1H,dd)；m/z MH+384
步骤2；外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代丙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯
将外消旋-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1-(2-甲基烯丙基)-3-氧代异吲哚啉-1-甲酸甲酯(515mg，1.34mmol)在DCM(5mL)中的溶液添加到高碘酸钠(1149mg，5.37mmol)在水(5mL)中的溶液中。添加氯化钌(III)水合物(7mg，0.03mmol)并将混合物在rt下搅拌18小时。将反应混合物用焦亚硫酸钠溶液(10％水溶液，15mL)小心地淬灭并萃取到DCM(10mL)中。将有机相通过相分离柱并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至60％EtOAc)进行纯化。将纯级分蒸发至干燥，以提供呈固体的标题化合物(0.38g，74％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.52(3H,s),2.82(1H,d),3.37(1H,d),3.68(3H,s),3.76(3H,s),4.37(1H,d),5.27(1H,d),6.73-6.85(2H,m),7.11(2H,d),7.25(1H,td),7.52(1H,dd),7.57(1H,dd)；m/zMH+386
步骤3；rel-(1S,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将三乙酰氧基硼氢化钠(458mg，2.16mmol)添加到在微波管中的5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-3-氧代-1-(2-氧代丙基)异吲哚啉-1-甲酸甲酯(380mg，0.99mmol)、乙酸钠(404mg，4.93mmol)和甲胺盐酸盐(333mg，4.93mmol)的搅拌溶液中。将微波管密封并将反应混合物在微波反应器中加热至70℃持续13小时并冷却至rt。将反应混合物用饱和NaHCO3(5mL)淬灭并用DCM(3x10mL)萃取。将有机相通过相分离柱并真空除去溶剂。将粗产物通过制备型HPLC纯化，以提供呈白色固体的rel-(1S,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(32mg，9％)，呈白色固体的rel-(1R,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(43mg，12％)。
(注意：这些化合物的相对立体化学分配通过2DNMR实验确定)
rel-(1S,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.25(3H,d),1.93(1H,dd),2.28(1H,dd),2.96(3H,s),3.79(3H,s),3.80-3.89(1H,m),3.98(1H,d),5.30(1H,d),6.81-6.87(2H,m),7.13-7.25(4H,m),7.56(1H,ddd)；m/z MH+369。
rel-(1R,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.33(3H,d),2.01(1H,dd),2.48(1H,dd),2.73(3H,s),3.45-3.55(1H,m),3.79(3H,s),4.37(1H,d),4.84(1H,d),6.81-6.86(2H,m),7.18-7.27(4H,m),7.56(1H,ddd)；m/z MH+369。
步骤4；rel-(1S,5'S)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将硝酸铈(IV)铵(208mg，0.38mmol)添加到rel-(1S,5'S)-5-氟-2-(4-甲氧基苄基)-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(28mg，0.08mmol)在MeCN(2mL)和水(1mL)中的搅拌溶液中。将反应混合物搅拌30分钟，然后萃取到DCM(3x10mL)中。将有机相通过相分离柱并真空除去溶剂。将粗产物通过快速二氧化硅色谱法(洗脱梯度为庚烷中的0至100％EtOAc)进行纯化，以提供呈胶状物的标题化合物(16mg，83％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.42(3H,d),2.11(1H,dd),2.70(1H,dd),2.96(3H,s),3.93(1H,h),6.92(1H,s),7.21-7.25(2H,m),7.47-7.53(1H,m)；m/z MH+249。
JACS 1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.42(d,J＝6.2Hz,3H),2.11(dd,J＝13.5,7.7Hz,1H),2.70(dd,J＝13.5,6.7Hz,1H),2.96(s,3H),3.93(h,J＝6.3Hz,1H),6.92(s,1H),7.21-7.25(m,2H),7.47-7.53(m,1H)。
步骤5；rel-(1S,5'S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将rel-(1S,5'S)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(15.7mg，0.06mmol)、5-氯-2-(氯甲基)-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶(38mg，0.11mmol)、碳酸铯(72mg，0.22mmol)和DMA(1mL)的混合物在85℃下搅拌3小时，然后冷却至rt。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型HPLC进行纯化以提供呈胶状物的标题化合物(27mg，75％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)-0.08(9H,s),0.74(1H,ddd),0.84(1H,ddd),1.28(3H,d),1.99-2.06(1H,m),2.33(1H,dd),2.75(3H,s),3.46-3.58(2H,m),3.85(1H,dt),4.95(1H,d),5.11(1H,d),5.46(1H,d),5.52(1H,d),6.52(1H,s),7.17(1H,dd),7.23(1H,td),7.54-7.60(2H,m)；m/z MH+561。
步骤6；(1S,5'S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
将三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(6mg，6.68μmol)添加到在微波管中的rel-(1S,5'S)-2-((5-氯-6-氟-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮(25mg，0.04mmol)、二苯基甲亚胺(16mg，0.09mmol)、tBuXPhos(6mg，0.01mmol)和2-甲基丙-2-醇钠(17mg，0.18mmol)在甲苯(3mL)中的脱气溶液中。将反应混合物在微波反应器中加热至80℃，持续1小时，然后在加热块中在70℃下搅拌17小时。将反应混合物真空浓缩。添加2,2,2-三氟乙酸(0.5mL)和水(0.05mL)，将反应混合物在rt下搅拌2小时并真空浓缩。将残余物再溶于MeCN(1mL)中并添加28％-30％氨水溶液(1mL)。将反应混合物搅拌3.5小时，过滤并通过制备型HPLC进行纯化，以提供外消旋产物(8mg，41％)。对映异构体使用SFC条件进行分离：柱：PhenomenexLuxiC5，21.2x250mm，5微米，流动相：45％MeOH+0.1％NH3/55％scCO2，流速：60mL/min；BPR：120巴，柱温：40℃，UV最大值220nm(保留时间：异构体1-6.8分钟和异构体2-8.5分钟)，以提供异构体1(1.6mg，>99纯度，>99％ee)和异构体2(2.5mg，>99纯度，>99％ee)。
异构体1-(1R,5'R)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.45(3H,d),2.29(1H,dd),2.44(1H,dd),3.00(3H,s),3.94(1H,dt),4.29(1H,d),4.37(2H,s),5.04(1H,d),6.28(1H,d),7.17-7.25(3H,m),7.53(1H,dd),9.34(1H,s)；m/z MH+411。
异构体2(实例29)-(1S,5'S)-2-((5-氨基-6-氟-1H-吡咯并[3,2-b]吡啶-2-基)甲基)-5-氟-1',5'-二甲基螺[异吲哚啉-1,3'-吡咯烷]-2',3-二酮
1H NMR(400MHz,CDCl3,30℃)1.45(3H,d),2.29(1H,dd),2.44(1H,dd),3.00(3H,s),3.94(1H,dt),4.29(1H,d),4.37(2H,s),5.04(1H,d),6.28(1H,d),7.17-7.25(3H,m),7.53(1H,dd),9.34(1H,s)；m/z MH+411。
(基于相对于其他对映异构体的生物活性，以及S对映异构体是优选的并且比R对映异构体更具活性的X射线结构证据，推测的该化合物在四级中心处的立体化学分配；实例29的相对立体化学构型已经从步骤3的先前中间体的NMR分析中得到证实)。
Claims (17)
1.一种具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，
其中：
含有X和Y的环是吡咯且X是NH且Y是CH或X是CH且Y是NH；
Z选自CH、CF、CCl，如果Q不是N，Z选自CH、CF、CCl或N；
Q选自CH、CF、CCl，如果Z不是N，Q选自CH、CF、CCl或N；
m是0、1或2；
n是0、1或2；
p是1或2；
R1在每次出现时独立地选自F、Cl、CN、Me、CF3、C1-C3烷基、环丙基、C1-C3氟烷基、OMe或C1-C3烷氧基；
R2在每次出现时独立地选自F、Cl、Me、MeO和CF3；
R3是H、Me、C1-C3烷基或C1-C3氟烷基；
R4是H、Me或C1-C3烷基；
R5是H、Me、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、CH2OMe、CH2OCHF2、CH2OCF3、CH2O(C1-C3烷基)、CH2O(C1-C3氟烷基)、C(CH2CH2)R6、CCR7、CH2R8、R9或CH2R10；
R6是H、Me、CH2F、CHF2、CF3、CH2OH或CH2OMe；
R7是H、Me、环丙基、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基、C3-C6环烷基或任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基基团；
R8是任选地被Me、C1-C3烷基、F或Cl取代的5元杂芳基；
R9是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团；并且
R10是任选取代的苯基、5元或6元杂芳基或双环杂芳基基团。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中Y是N。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中X是N。
4.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中p是1。
5.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中Z是CF且Q是CH、CF或CCl。
6.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中m是1或2且其中至少一个R1基团是F。
7.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中R3是H。
8.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中n是0。
9.根据任一前述权利要求所述的化合物，其中R5是R9。
10.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中R5是CH2R8或CH2R10。
11.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中R5是CCR7。
12.一种药物组合物，其包含根据任一前述权利要求所述的化合物。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其用于作为药物使用。
14.一种治疗有需要的患者的方法，该方法包括施用根据权利要求1至11中任一项所述的化合物。
15.根据权利要求1至11中任一项所述的化合物，其用于在制造药物中使用。
16.根据权利要求13或权利要求15所述的用途或根据权利要求14所述的方法，其中该用途、药物或方法用于治疗癌症，任选地其中该癌症选自胰腺癌、结直肠癌、子宫癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、宫颈癌、睾丸生殖细胞癌和非小细胞肺癌和多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、横纹肌肉瘤和皮肤鳞状细胞癌。
17.根据权利要求13或权利要求15所述的用途或根据权利要求14所述的方法，其中该用途、药物或方法用于治疗具有MTAP基因缺失的癌症，任选地其中该癌症选自胰腺癌、结直肠癌、子宫癌、胆管癌、胃癌、膀胱癌、宫颈癌、睾丸生殖细胞癌和非小细胞肺癌和多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、横纹肌肉瘤和皮肤鳞状细胞癌。
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