KR20230091198A - 스피로시클릭 화합물 - Google Patents

스피로시클릭 화합물 Download PDF

Info

Publication number
KR20230091198A
KR20230091198A KR1020237019818A KR20237019818A KR20230091198A KR 20230091198 A KR20230091198 A KR 20230091198A KR 1020237019818 A KR1020237019818 A KR 1020237019818A KR 20237019818 A KR20237019818 A KR 20237019818A KR 20230091198 A KR20230091198 A KR 20230091198A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
methyl
mmol
fluoro
pyrrolo
reaction mixture
Prior art date
Application number
KR1020237019818A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102624567B1 (ko
Inventor
제임스 마이클 스미스
그레임 리처드 롭
피오트르 안토니 라우보
버나드 크리스토프 바람
이언 알렉산더 커밍
Original Assignee
아스트라제네카 아베
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 아스트라제네카 아베 filed Critical 아스트라제네카 아베
Publication of KR20230091198A publication Critical patent/KR20230091198A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102624567B1 publication Critical patent/KR102624567B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/10—Spiro-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/20—Spiro-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

본 명세서는 하기 화학식 I:
[화학식 I]
Figure pct00173
의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 이들의 제조에 사용되는 방법 및 중간체, 이를 함유하는 제약 조성물 및 세포 증식성 장애의 치료에서의 이들의 용도에 관한 것이다.

Description

스피로시클릭 화합물
본 명세서는 단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라아제 5(PRMT5) 효소를 억제하여 결과적으로 항암 활성을 나타내는 특정 스피로시클릭 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 인간 또는 동물 신체의 치료 방법에서의, 예를 들어, 암의 예방 또는 치료를 위한 상기 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염의 용도에 관한 것이다. 본 명세서는 또한 상기 스피로시클릭 화합물의 제조에 관여하는 공정 및 중간체 화합물 및 이를 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다.
단백질 아르기닌 메틸트랜스퍼라아제 5(PRMT5)는 S-아데노실-L-메티오닌(SAM)을 메틸 도너로 사용하여 아르기닌 잔기의 구아니딘 모티프에 메틸 기를 부가하는 것을 촉매하는 아르기닌 메틸트랜스퍼라아제 효소의 PRMT 패밀리의 구성원이다. PRMT5는 아르기닌 잔기의 구아니딘 기를 대칭적으로 디메틸화하여 아르기닌의 구아니딘 NH2 기를 NMe2 기로 전환시키는 II형 아르기닌 메틸트랜스퍼라아제이다. PRMT5는 히스톤 및 비히스톤 단백질을 포함한 다수의 다양한 기질을 메틸화하고 그렇게 함으로써 RNA 스플라이싱, 세포 증식 및 DNA 복구와 같은 과정을 조절한다. 중요하게도, PRMT5는 다수의 암 유형에서 과발현되며 PRMT5 메틸트랜스퍼라아제 활성을 억제하는 소분자의 개발을 통한 치료적 개입을 위한 후보로 확인되었다(예를 들어 문헌[Kim et al., (2020) Cell Stress 4(8) 199-2151] 참조).
시클린 의존성 키나아제 억제제 2A(CDKN2A)는 암의 약 15%에서 동형접합적으로 결실되는 종양 억제 유전자이다. 9p21 염색체 유전자좌의 손실은 메틸티오아데노신 포스포릴라아제(MTAP)를 코딩하는 유전자를 포함하여 다수의 추가 유전자의 공동 결실을 초래한다. MTAP는 메티오닌 재활용(salvage)에 관여하는 대사 효소이며 MTAP의 손실은 CDKN2A/MTAP 결실 암세포에서 MTAP 기질 메틸티오아데노신(MTA)의 농도를 증가시킨다. MTA 그 자체가 약한 PRMT5 억제제로 작용하고, CDKN2A/MTAP 결실 암 세포주에 MTA가 축적되면 PRMT5 활성이 부분적으로 억제된다. 손상된 PRMT5 활성은 예를 들어 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)를 사용하여, CDKN2A/MTAP 결실 암세포가 PRMT5의 추가 표적화에 민감해지게 만든다. CDKN2A/MTAP 결실 종양이 PRMT5 억제를 통해 선택적으로 표적이 될 수 있는 암의 "부수적 취약성"이 확인되었다(문헌[Marjon et al., (2016) Cell Reports 15, 574-587]; 문헌[Mavrakis et al., (2016) Science 11;351(6278):1208-13]; 문헌[Kryukov et al., (2016) Science 11;351(6278):1214-8] 참조).
암 치료를 위한 "MTA-상승적" PRMT5 억제제(즉, MTA의 존재 하에 우선적으로 PRMT5에 결합하는 억제제)의 개발이 필요하다. 이는 "MTA-상승적" PRMT5 억제제가 건강한 조직이 아닌 CDKN2A/MTAP 결실 종양 세포와 같이 상대적으로 높은 농도의 MTA가 존재하는 환경에서 PRMT5에 대한 더 큰 억제 효과를 발휘하기 때문이다. 결과적으로, "MTA-상승적" PRMT5 억제제는 그의 항증식 활성이 표적화된 CDKN2A/MTAP 결실 종양 세포에서 선택적으로 나타날 것이기 때문에 높은 치료 지수(및 낮은 표적 외(off target) 독성)를 가져야 한다. 지금까지 "MTA-상승적" PRMT5 억제제는 말할 것도 없고 PRMT5의 어떤 억제제도 치료용으로 승인된 적이 없다. 따라서 새로운 PRMT5 억제제, 이상적으로는 "MTA-상승적"이고, 임상 사용에 적합하도록 요구되는 제약적 특성을 갖는 PRMT5 억제제가 필요하며, 그 이유는 상기 억제제가 암 치료를 위한 새로운 옵션을 제공할 것이기 때문이다. 본 명세서의 화합물은 항종양 활성을 보유하며, 악성 질환으로부터 일어나는 제어되지 않는 세포 증식을 억제하는 데 유용함이 밝혀졌다. 본 명세서의 화합물은 최소한 PRMT5의 억제제로 작용함으로써 항종양 효과를 제공한다. 중요하게도, 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제는 "MTA-상승적" PRMT5 억제제이며 높은 치료 지수 낮은 표적 외 독성을 제공해야 하는 고유한 활성 프로파일로 인해 향상된 임상 유용성을 보여줄 것으로 예상된다.
본 명세서의 일 양태에 따르면, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다:
[화학식 I]
Figure pct00001
(여기서,
X 및 Y를 함유하는 고리는 피롤로서 X는 NH이고 Y는 CH이거나 X는 CH이고 Y는 NH이며;
Z는 CH, CF, CCl, 또는 Q가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
Q는 CH, CF, CCl, 또는 Z가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
m은 0, 1 또는 2이며;
n은 0, 1, 또는 2이며;
p는 1 또는 2이며;
R1은 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, CN, Me, CF3, C1-C3 알킬, 시클로프로필, C1-C3 플루오로알킬, OMe 또는 C1-C3 알콕시로부터 선택되며;
R2는 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, Me, MeO 및 CF3으로부터 선택되며;
R3은 H, Me, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 플루오로알킬이며;
R4는 H, Me 또는 C1-C3 알킬이며;
R5는 H, Me, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, CH2OMe, CH2OCHF2, CH2OCF3, CH2O(C1-C3 알킬), CH2O(C1-C3 플루오로알킬), C(CH2CH2)R6, CCR7, CH2R8, R9 또는 CH2R10이며;
R6은 H, Me, CH2F, CHF2, CF3, CH2OH 또는 CH2OMe이며;
R7은 H, Me, 시클로프로필, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 5원 헤테로아릴 기(Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환됨)이며;
R8은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴이며;
R9는 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기이며;
R10은 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기임).
추가 양태에서, 의약으로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
추가 양태에서, 암의 치료 방법으로서, 이를 필요로 하는 환자에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 투여함으로써 암을 치료하는 방법이 제공된다.
추가 양태에서, 암의 치료에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 양태에서, 약제, 예를 들어 암 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 양태에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물 및 암의 치료에서의 그의 사용을 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공된다.
추가 양태에서 화학식 I의 화합물의 제조 방법이 제공된다.
화학식 I의 화합물은 2-피롤리디논 고리(이 단락에서 언급되고 하기에서 고리 A로 예시됨) 및 제2 고리(이 단락에서 언급되고 하기에서 고리 B로 예시됨)(2-피롤리디논 및 2-피페리디논으로부터 선택됨)가 이들을 연결하는 탄소 원자(상기 지점에 키랄 중심이 위치함)를 공유하는 스피로시클릭 코어를 특징으로 한다. 또한, 고리 A의 질소 원자는 메틸렌(즉, CH2) 링커를 통해 4- 또는 -7-아자인돌 모티프에 연결된다. 고리 A는 또한 페닐 또는 피리딘 고리에 융합된다. 고리 B의 질소 원자는 기 CHR4R5로 치환된다.
Figure pct00002
화학식 I의 화합물은 PRMT5를 억제하는 능력으로부터 유래하는 강력한 항종양 활성을 가짐이 밝혀졌다. 위에서 이미 주지된 바와 같이, PRMT5는 아르기닌의 구아니딘 기의 대칭적 탈메틸화를 위한 메틸 도너로서 SAM을 사용하는 효소이므로 세포에서 히스톤 및 비히스톤 기질의 후성유전학적 변형에서 중요한 역할을 한다. PRMT5는 종양 촉진 유전자를 표적화하는 miRNA를 억제하는 히스톤 테일 변형의 촉진을 통해 종양 성장에 관여한다. 연구에 의하면 MTAP 유전자는 암의 약 15%에서 결실되며 이러한 암은 MTAP 유전자 결실이 없는 야생형 세포보다 PRMT5 효소 활성에 더 의존적임이 나타났다. 이 MTAP 결실은 상당한 비율의 암에서 발견되며 치료에 악용될 수 있는 유전적 취약성을 생성한다. 또한, MTAP 결실은 인산화가 차단됨에 따라 암세포가 MTA를 축적하게 하며, MTAP 결실된 세포는 결과적으로 야생형 MTAP 발현 세포에 비해 높은 MTA 농도를 나타낸다.
공지된 PRMT5 억제제와는 대조적으로, 본 명세서에 따른 화합물은 MTA의 존재 하에 PRMT5에 유리하게 결합하고 이를 더욱 효과적으로 억제한다(본 화합물은 "MTA-상승적"이다). MTA와의 이러한 시너지는 본 명세서에 따른 화합물에 의해 관찰되는 PRMT5 억제가 MTAP 결핍 암세포에서 상승하기 때문에 특히 유익하며, 여기서, MTA 수준은 정상 세포에 비해 정상 야생형 세포에 비해 특징적으로 높고 따라서 바람직하지 않은 표적 외 독성이 감소된다. 이 프로파일은 허용할 수 없는 표적 외 독성 없이 표적 세포에서 높은 수준의 PRMT5 억제가 달성되도록 해야 한다. 표적 외 독성은 PRMT5 억제제에 대한 특별한 관심사이며, GSK3326595와 같은 MTA 비선택성 PRMT5 억제제를 사용할 경우 병원에서 용량을 제한하였다. 결과적으로 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제는 이전의 MTA 비선택성 PRMT5 억제제보다 더 큰 치료 창을 갖는데, 이는 최적 수준의 PRMT5 억제가 잘 달성될 수 있게 하고 향상된 치료 이점이 잘 전달될 수 있게 한다.
본 명세서에 따른 화합물은 치료 효과를 전달하기 위해 인간에게 경구 투여하기에 적합할 것임을 나타내는 우수한 물리화학적 특성을 갖는다. 예를 들어, 본 명세서에 따른 화합물은 PRMT5를 억제하는 능력에 더하여, 우수한 용해도 프로파일 및 상대적으로 낮은 분자량(이는 경구 투여에 대한 적합성을 나타냄)을 갖는다. 본원에 추가로 기술된 바와 같이, 본 명세서의 화합물의 입체화학적 배열, 및 특히, 스피로시클릭 중심에서의 그의 키랄성은 그의 PRMT5 억제 활성의 핵심 결정인자이다.
따라서, 본 출원의 화합물은 항종양제로서 가치가 있을 수 있다. 특히, 본 명세서의 화합물은 MTAP 결핍성인 포유동물 암세포의 증식, 생존, 운동성, 파종 및 침습성의 선택적 억제제로서 적용될 수 있다. PRMT5를 억제하는 능력으로 인해, 본 명세서에 따른 화합물을 이용한 대상체의 치료는 종양 성장 억제를 초래하고/하거나, 종양 퇴행을 촉발하고/하거나 전이 형성 및/또는 전이성 종양 성장을 억제할 수 있다. 특히, 본 명세서의 화합물은 고형 종양 질환의 봉쇄 및/또는 치료에서 항-증식제 및 항-침습제로서 가치가 있을 수 있다. 특히, 본 명세서의 화합물은 PRMT5의 억제에 민감하고 PRMT5 활성이 종양 세포의 증식 및 생존을 초래하는 세포 신호전달 사건에 관여하는 종양의 예방 또는 치료에 유용할 수 있다.
따라서, MTAP 결실 세포에서 PRMT5에 대해 선택적 억제 효과를 제공하는 방법이 또한 제공되며, 상기 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
MTA의 존재 하에 PRMT5에 결합할 수 있는 화합물이 본원에 기술되어 있다. 생화학적 및 세포 기반 분석에서 본 명세서의 화합물은 MTA의 존재 하에서 강력한 PRMT5 바인더인 것으로 나타나므로 PRMT5에 의해 매개되는 장애의 치료, 특히 암, 예컨대 폐암(예를 들어 NSCLC), 림프종(예를 들어 DLBCL) 및 위암의 치료에 유용할 수 있다. 특히, 본 명세서에 따른 화합물은 CDKN2A/MTAP 결실 암, 즉 종양 억제 유전자 시클린 의존성 키나아제 억제제 2A(CDKN2A)가 동형접합적으로 결실된 암의 치료에 사용될 수 있다. 본 명세서에 따른 화합물은 CDKN2A/MTAP 결실 암을 가진 환자의 치료 방법에 동일하게 사용될 수 있다.
본 명세서는 또한 상기 화합물의 제조 방법, 이를 함유하는 제약 조성물, 치료 방법으로서 이를 필요로 하는 환자, 예를 들어 인간에게 상기 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법, 예를 들어 과증식성 질환, 예컨대 암을 앓는 환자의 치료에서 사용하기 위한, 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명이 더 잘 이해될 수 있도록, 본원에서 다음의 도면을 참조한다:
도 1: 실시예 1 및 MTA가 PRMT5에 결합된 것의 단백질 결정 구조. 이러한 단백질 결정 구조는 본 명세서의 화합물이 MTA와 함께 PRMT5에 결합함을 예시한다. 스피로시클릭 고리 시스템의 입체화학 및 PRMT5의 Leu312, Glu435, Glu444, Ser578 및 Phe580과 같은 잔기와 억제제의 핵심 상호작용을 또한 볼 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용과 관련된 분야의 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미와 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, 문헌[Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press]; 문헌[The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press]; 및 문헌[Oxford Dictionary of Biochemistry and Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press]은 본 개시내용에 사용된 용어 중 대다수의 용어의 일반적인 사전을 숙련자에게 제공한다.
본 명세서가 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 용어가 아래에서 명시적으로 정의된다. 또한, 정의는 본 명세서 전체에 걸쳐 적절하게 제시된다.
단위, 접두어 및 기호는 이의 국제 단위 체계(SI) 허용 형태로 표시된다. 수치 범위는 범위를 정의하는 수치의 경계를 포함한다.
용어 "제약 조성물"은, 활성 성분의 생물학적 활성이 발현되게 하는 형태로 존재하고, 조성물이 투여될 대상체에게 허용 불가능하게 독성을 나타내는 추가적인 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 조성물은 살균 조성물일 수 있다. 본 명세서에 따른 제약 조성물은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 및 적어도 하나의 제약상 허용가능한 부형제를 포함할 것이다.
"치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위한" 또는 "완화하는" 또는 "완화하기 위한"과 같은 용어는 (1) 진단받은 병리적 병태 또는 장애를 치유하고/하거나, 둔화시키고/시키거나, 이의 증상을 경감시키고/시키거나 이의 진행을 중지시키는 치료적 조치 및 (2) 표적화된 병리적 병태 또는 장애를 예방하고/하거나 이의 발생을 둔화시키는 예방적 또는 방지적 조치 둘 다를 지칭한다. 따라서, 치료를 필요로 하는 대상체에는 이미 장애를 갖고 있는 대상체; 장애를 갖기 쉬운 대상체; 및 장애가 방지되어야 하는 대상체가 포함된다. 특정 양태에서, 대상체는 환자가 예를 들어 특정 유형의 암의 완전한, 부분적인 또는 일시적인 관해를 나타내는 경우, 본 발명의 방법에 따라 암에 대해 성공적으로 "치료된" 것이다.
용어 "대상체"는 특정 치료의 수령자가 되는, 인간, 비-인간 영장류, 설치류 등을 포함하지만 이에 한정되지 않는 임의의 동물(예를 들어, 포유동물)을 지칭한다. 전형적으로, 용어 "대상체" 및 "환자"는 인간 대상체에 대해 본원에서 상호교환가능하게 이용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "알킬"은 특정한 수의 탄소 원자를 갖는 직쇄 및 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼 둘 모두를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 듀테로알킬은 하나 이상의 수소, 선택적으로 모든 수소가 중수소 원자로 대체된 알킬 기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 할로알킬은 하나 이상의 수소, 선택적으로 모든 수소가 염소 또는 불소 원자로 대체된 알킬 기를 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 플루오로알킬은 하나 이상의 수소, 선택적으로 모든 수소가 불소 원자로 대체된 알킬 기를 지칭한다. 바람직한 플루오로알킬 기의 예는 CH2F, CHF2, CF3, CH2CF3, CF2CH3 및 CF2CF3을 포함한다. 용어 시클로알킬은 포화 탄소환, 예를 들어 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실 기를 지칭한다.
용어 아세틸레닐은 에티닐 라디칼, 즉 -CCH 기를 지칭한다. 용어 알키닐은 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 기를 지칭한다.
본 명세서에서, x 및 y가 정수인 Cx-Cy 등과 같은 용어에서 사용되는 접두어 Cx-Cy는 기에 존재하는 탄소 원자의 수치 범위를 나타낸다. 예를 들어, C1-C4 알킬은 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, s-부틸, i-부틸 및 t-부틸을 포함하는 한편, C1-C3 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 및 i-프로필을 포함한다. C1-C4 알콕시 기는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, i-프로폭시, n-부톡시, s-부톡시 및 t-부톡시를 포함한다. C1-C3 알콕시 기의 예는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시 및 i-프로폭시를 포함한다. C1-C3 플루오로알킬 기의 예는 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 1,1-디플루오로에틸 및 2,2,2-트리플루오로에틸을 포함한다. C1-C3 플루오로알콕시 기의 예는 플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 트리플루오로메톡시 및 2,2,2-트리플루오로에톡시를 포함한다. -O(C1-C3듀테리오알킬) 기는 부분적으로 또는 완전히 중수소화된 O-메틸, O-에틸 또는 O-n-프로필 또는 O-i-프로필 기이다. C3-C6시클로알킬 기는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 또는 시클로헥실 기를 지칭한다.
구체적으로 언급되지 않는 한, 원자 또는 기의 결합은 그 기의 임의의 적합한 원자일 수 있으며; 예를 들어, 프로필은 프로프-1-일 및 프로프-2-일을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 헤테로아릴은 N, O 또는 S로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하는 [4n+2] 방향족 고리를 지칭한다. 5원 헤테로아릴 기의 예는 피롤, 이미다졸, 피라졸, 1,2,3-트리아졸, 1,2,4-트리아졸, 옥사졸, 이속사졸, 옥사디아졸, 티아졸, 이소티아졸, 푸란 및 티아졸을 포함한다. 6원 헤테로아릴 기의 예는 피리딘, 피리다진, 피리미딘 및 피라진을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 이환식 헤테로아릴은 하나의 6원 고리가 5원 또는 6원 고리에 융합된 것을 포함하는 [6,5] 또는 [6,6] 이환식 헤테로아릴 기를 지칭하며, 여기서, 상기 2개의 구성 고리 중 적어도 하나는 N, O 또는 S로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 함유하고, 또한, 상기 2개의 구성 고리 중 적어도 하나는 [4n+2] 방향족 고리이다. 이와 관련하여, 이환식 헤테로아릴 기는 2개의 융합 고리를 포함하며, 1개, 2개, 3개 또는 4개의 N 원자, 또는 1개의 O 원자, 또는 1개의 S 원자, 또는 1개의 N 원자 및 1개의 S 원자, 또는 1개의 N 원자 및 1개의 O 원자, 또는 2개의 N 원자 및 1개의 S 원자, 또는 2개의 N 원자 및 1개의 O 원자를 함유하는 방향족 기이다. 이환식 헤테로아릴 기는 두 융합 고리가 모두 방향족인 기, 또는 하나의 융합 고리가 방향족이고, 나머지 하나의 융합 고리는 부분 또는 완전 포화된 기를 포함한다. 상기 부분 또는 완전 포화 융합 고리는 또한 카르보닐 기를 포함할 수 있다. 이환식 헤테로아릴 기는 페닐 기 또는 6원 헤테로아릴 기가 피롤, 이미다졸, 피라졸, 1,2,3-트리아졸, 옥사졸, 이속사졸, 옥사디아졸, 티아졸, 이소티아졸, 푸란 및 티아졸에 융합된 [6,5]-시스템일 수 있다. 이환식 헤테로아릴 기의 예는 인돌릴, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 벤족사졸릴, 벤즈이미다졸릴, 벤조트리아졸릴, 인다졸릴, 아자인돌릴, 아자인다졸릴, 피롤로[1,2-b]피리다지닐, 피롤로[2,3-b]피리디닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 퀴녹살리닐 및 나프티리디닐을 포함한다.
상기 주지된 바와 같이 화학식 I의 화합물은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴 기인 R7 기를 가질 수 있다. 이러한 경우에 5원 헤테로아릴 기는 바람직하게는 선택적 치환 피라졸, 피롤, 이미다졸, 옥사졸 또는 티아졸, 예를 들어 N-메틸 피라졸로부터 선택된다.
상기 주지된 바와 같이 화학식 I의 화합물은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴 기인 R8 기를 가질 수 있다. 이러한 경우에 5원 헤테로아릴 기는 바람직하게는 선택적 치환 피라졸, 피롤, 이미다졸, 옥사졸 또는 티아졸, 예를 들어 메틸 치환 티아졸로부터 선택된다.
상기 주지된 바와 같이 화학식 I의 화합물은 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기인 R9 또는 R10 기를 가질 수 있다. 이러한 경우에 R9 또는 R10은 F, Cl, Me, CN, CF3, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬 또는 5원 헤테로아릴 기로부터 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.
의심의 여지를 없애기 위해, 다수의 치환체가 주어진 군으로부터 독립적으로 선택되는 경우에, 선택된 치환체는 주어진 군 내로부터의 동일한 치환체 또는 상이한 치환체를 포함할 수 있다. 단지 예로서, (R1)m이고 m이 2인 경우, 상기 2개의 R1 치환체는 동일할 수 있거나(예를 들어 둘 다 플루오로), 또는 상이할 수 있다(예를 들어 하나는 플루오로이고 하나는 메틸).
추가 의혹을 피하기 위해, 본 명세서의 화학식에서 "
Figure pct00003
"의 사용은 상이한 기 사이의 부착점을 나타낸다.
본 명세서 내의 임의의 실시 형태가 "선택적으로 치환된"이라고 하는 기를 포함하는 경우, 추가 실시 형태는 상기 기가 비치환된 실시 형태를 포함할 것이다. 기가 선택적으로 치환되는 경우, 선택적 치환체는 Me, C1-C3 알킬, C3-C6 시클로알킬, C1-C3 플루오로알킬, F 또는 Cl, OH, OC1-C3 알콕시, OH, NH2 및 N(C1-C3 알킬)2로부터 선택될 수 있다.
본 명세서에 따른 화학식 I의 예시적인 화합물은 하기 표 1에 열거되어 있다.
[표 1]
Figure pct00004

Figure pct00005

Figure pct00006

Figure pct00007

Figure pct00008

Figure pct00009

Figure pct00010

Figure pct00011

Figure pct00012

Figure pct00013

표 1에서 알 수 있듯이, 4차 탄소의 입체화학은 항상 S-배열을 갖는 것으로 제시된다. 각각의 모든 실시예의 절대 입체화학은 명확하게 확립되지는 않았지만, 가능한 모든 경우에 (S)-배열을 갖는 화합물이 상응하는 (R)-이성질체보다 더 큰 활성을 갖는 것으로 입증되었다. 도 1의 단백질 결정 구조가 이를 확인시켜 주며, (S)-이성질체를 얻기 위한 거울상 이성질체 합성이 많은 경우에 수행되었다. 그럼에도 불구하고 숙련된 독자는 2가지 가능한 이성질체가 본 명세서에 포함되며, 더욱이 가장 활성이 큰 이성질체가 바람직한 실시 형태임을 이해할 것이다. 본 명세서의 바람직한 화합물은 아래에 나타낸 바와 같이 S-배열을 갖는다.
Figure pct00014

MTA와 함께 결합될 때 이러한 화합물과 PRMT5의 상호작용은 도 1에서 알 수 있다. 더 상세하게는, 실시예 1은 MTA가 결합된 형태의 PRMT5 단백질과 함께 공결정화되었고, 단백질 구조는 표준 기술을 사용하여 얻어졌다. 단백질 결정 구조는 억제제의 아자인돌 헤드기가 기질 활성 부위 내에 결합하고 '아르기닌 포켓'에서 핵심 상호작용을 함을 보여준다(양성자화된 N-4 및 5-아미노 기가 Glu444와 수소 결합-도너 상호작용을 가지며, 5-아미노 기가 또한 Glu437의 백본 카르보닐 기와 수소 결합-도너 상호작용을 함). 이 5-아미노 기와, PRMT5에 또한 결합된 MTA 분자의 황 원자와의 상호작용이 또한 충분히 있을 수 있는 것으로 보이며, 이는 적어도 부분적으로, 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제 화합물의 'MTA-상승적' 특성을 설명할 수 있다. 실시예 1과 PRMT5 단백질 사이의 추가적인 상호작용은 아자인돌의 N-1과 Ser578의 백본 카르보닐 사이의 수소 결합 도너 상호작용을 포함한다. 중심 이소인돌리논 기의 카르보닐은 또한 Leu312의 백본 NH와 수소 결합-억셉터 상호작용을 한다. X선 단백질 결정 구조는 또한 S-배열 4차 중심이 PRMT5 포켓에서의 억제제의 최적화된 피팅(fit)에 중요하다는 것을 보여준다. 특히, 스피로 락탐 카르보닐은 이 배열에서 Phe580의 백본 NH와 수소 결합-억셉터 상호작용을 할 수 있다.
상기 주지된 바와 같이, 본 명세서의 일 양태에 따르면, 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다:
[화학식 I]
Figure pct00015

(여기서,
X 및 Y를 함유하는 고리는 피롤로서 X는 NH이고 Y는 CH이거나 X는 CH이고 Y는 NH이며;
Z는 CH, CF, CCl, 또는 Q가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
Q는 CH, CF, CCl, 또는 Z가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
m은 0, 1 또는 2이며;
n은 0, 1, 또는 2이며;
p는 1 또는 2이며;
R1은 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, CN, Me, CF3, C1-C3 알킬, 시클로프로필, C1-C3 플루오로알킬, OMe 또는 C1-C3 알콕시로부터 선택되며;
R2는 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, Me, MeO 및 CF3으로부터 선택되며;
R3은 H, Me, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 플루오로알킬이며;
R4는 H, Me 또는 C1-C3 알킬이며;
R5는 H, Me, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, CH2OMe, CH2OCHF2, CH2OCF3, CH2O(C1-C3 알킬), CH2O(C1-C3 플루오로알킬), C(CH2CH2)R6, CCR7, CH2R8, R9 또는 CH2R10이며;
R6은 H, Me, CH2F, CHF2, CF3, CH2OH 또는 CH2OMe이며;
R7은 H, Me, 시클로프로필, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 5원 헤테로아릴 기(Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환됨)이며;
R8은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴이며;
R9는 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기이며;
R10은 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기임).
실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ia로 제시된 S-배열을 갖는 화합물이다.
[화학식 Ia]
Figure pct00016
.
참조의 용이함을 위해, 바로 아래의 화학식 Ib의 화합물의 경우와 같이, 화학식 I 또는 Ia의 화합물을 언급하는 하기 본원의 진술은 (화학식 I의 화합물의 언급에 의해) 입체화학이 명시되지 않거나 또는 (화학식 Ia의 화합물의 언급에 의해) 입체화학이 S-배열로 설정된 화학식 I의 화합물에 관한 것으로 이해될 것이다.
실시 형태에서, 화학식 I 또는 Ia의 화합물은 p가 1인 화학식 Ib의 화합물이다:
[화학식 Ib]
Figure pct00017
.
실시 형태에서, 화학식 I 또는 Ia의 화합물은 p가 2인 화학식 Ic의 화합물이다.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 Ic의 화합물은 Y가 N이고 p가 1인 화학식 Id의 화합물이다:
[화학식 Id]
Figure pct00018
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic 또는 Id의 화합물은 X가 N이고 p가 1인 화학식 Ie의 화합물이다:
[화학식 Ie]
Figure pct00019
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id 또는 Ie의 화합물은 Z가 CF이고 Q가 CH인 화학식 If의 화합물이다.
[화학식 If]
Figure pct00020
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie 또는 If의 화합물은 n이 0인 화학식 Ig의 화합물이다.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If 또는 Ig의 화합물은 R1이 F인 화학식 Ih의 화합물이다.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig 또는 Ih의 화합물은 m이 1인 화학식 Ii의 화합물이다. 이러한 실시 형태에서 R1 기는 Q가 CH이고 Z가 CF이고 p가 1인 경우에 대해 아래에 나타낸 바와 같이 NH2 기에 대해 오르토-일 수 있다.
Figure pct00021
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih 또는 Ii의 화합물은 R3이 H인 화학식 Ij의 화합물이다.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii 또는 Ij의 화합물은 R4가 H 또는 Me인 화학식 Ik의 화합물이다.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 R9이고 R9가 다음으로부터 선택되는 화학식 Il의 화합물이다:
Figure pct00022

Figure pct00023
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 R9이고 R9가 다음으로부터 선택되는 화학식 Im의 화합물이다:
Figure pct00024
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 In의 화합물이다:
Figure pct00025

Figure pct00026
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Io의 화합물이다:
Figure pct00027
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Ip의 화합물이다:
Figure pct00028
.
실시 형태에서, 화학식 I, Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig, Ih, Ii, Ij 또는 Ik의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Iq의 화합물이다:
Figure pct00029
.
실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ir의 화합물이다:
[화학식 Ir]
Figure pct00030

(여기서,
n은 0, 1, 또는 2이며;
R2는 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, Me, MeO 및 CF3으로부터 선택되며;
R3은 H, Me, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 플루오로알킬이며;
R4는 H, Me 또는 C1-C3 알킬이며;
R5는 H, Me, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, CH2OMe, CH2OCHF2, CH2OCF3, CH2O(C1-C3 알킬), CH2O(C1-C3 플루오로알킬), C(CH2CH2)R6, CCR7, CH2R8, R9 또는 CH2R10이며;
R6은 H, Me, CH2F, CHF2, CF3, CH2OH 또는 CH2OMe이며;
R7은 H, Me, 시클로프로필, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 5원 헤테로아릴 기(Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환됨)이며;
R8은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴이며;
R9는 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기이며;
R10은 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기임).
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Is의 화합물이다:
Figure pct00031

Figure pct00032
.
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 It의 화합물이다:
Figure pct00033
.
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Iu의 화합물이다:
Figure pct00034
.
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 다음으로부터 선택되는 화학식 Iv의 화합물이다:
Figure pct00035
.
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 R9이고 다음으로부터 선택되는 화학식 Iw의 화합물이다:
Figure pct00036

Figure pct00037
.
실시 형태에서, 화학식 Ir의 화합물은 R5가 R9이고 다음으로부터 선택되는 화학식 Ix의 화합물이다:
Figure pct00038
.
실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 다음으로부터 선택된다:
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(부트-2-인-1-일)-5-플루오로스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(프로프-2-인-1-일)스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-4-((2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-1'-일)메틸)-2-플루오로벤조니트릴;
(S)-1'-(3-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)벤질)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2,5-디플루오로벤질)-5-플루오로스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2,2-디플루오로에틸)-5-플루오로스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((1-(플루오로메틸) 시클로프로필)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2-(디플루오로메톡시)에틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(이속사졸-5-일메틸) 스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((5-(트리플루오로메틸) 피리다진-3-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((1-메틸-1H-인다졸-5-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(벤조[d]옥사졸-2-일메틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(4-플루오로페녹시) 에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(4-메틸티아졸-5-일)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((R*)-1-(1-메틸시클로프로필)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(3-시클로프로필프로프-2-인-1-일)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',7-디메틸스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온;
(S)-5-아미노-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘] -2-일)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-7-카르보니트릴;
(S)-2-((5-아미노-6-클로로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시) 에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
(S)-2-((6-아미노-4-메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질) 스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온; 및
(1S,5'S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로 [이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온;
또는 이들의 제약상 허용가능한 염.
본 명세서의 실시 형태에서, 제약상 허용가능한 부형제와 회합된, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하고, 선택적으로, 하나 이상의 다른 입체이성질체 형태의 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 추가로 포함하는 제약 조성물이 제공되며, 여기서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 ≥ 90%, 예를 들어 >95% 또는 >99%의 거울상 이성질체 과잉률(%ee)로 조성물 내에 존재한다.
화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염은 비정질 형태, 결정형 형태, 또는 반-결정형 형태로 제조되거나, 사용되거나, 공급될 수 있고, 임의의 주어진 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 수화된 형태(예를 들어, 반수화물, 1수화물, 2수화물, 3수화물 또는 다른 화학양론의 수화물) 및/또는 용매화된 형태를 포함하는, 하나 초과의 결정형/다형성 형태로 형성되는 것이 가능할 수 있다. 본 명세서는 화학식 I의 화합물의 임의의 및 모든 이러한 고체 형태 및 이의 제약상 허용가능한 염을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
본 명세서의 추가 실시 형태에서 이하에서 '실시예' 섹션에 기술되는 방법에 의해 수득가능한 화학식 I의 화합물이 제공된다.
본 명세서는 본 발명의 화합물에서 나타나는 원자의 모든 동위원소를 포함하고자 한다. 동위원소는 동일한 원자 번호를 갖지만, 상이한 질량수를 갖는 원자를 포함하는 것이 이해될 것이다. 예를 들어, 수소의 동위원소는 삼중수소 및 중수소를 포함한다. 탄소의 동위원소는 13C 및 14C를 포함한다. 동위원소로 표지된 화학식 I의 화합물은 일반적으로 당업자에게 알려진 통상적 기술에 의해 또는 이전에 이용된 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소 표지 시약을 사용하여 동반되는 실시예에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.
화학식 I의 화합물의 적합한 제약상 허용가능한 염은 예를 들어 산 부가염일 수 있다. 화학식 I의 화합물의 적합한 제약상 허용가능한 염은, 예를 들어, 화학식 I의 화합물의 산 부가염, 예를 들어 무기 산 또는 유기 산에 의한 산 부가염일 수 있다. 본 명세서의 화합물은 유리 화합물, 즉 비-염화 상태로 제공될 수 있다.
화학식 I의 화합물의 추가의 적합한 제약상 허용가능한 염은 예를 들어 상기 인간 또는 동물 신체에 화학식 I의 화합물을 투여한 후 인간 또는 동물 신체 내에서 형성되는 염일 수 있다.
화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 공결정 고체 형태로서 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 제약상 허용가능한 공결정이 본 명세서의 하나의 양태를 형성함이 이해되어야 한다.
약학적 맥락에서 사용하기 위해, 다량의 다른 입체이성질체 형태가 존재하지 않는 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염을 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염은 통상적으로 경구 경로를 통해 투여되지만, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하 또는 다른 주사가능한 방식, 협측, 직장, 질, 경피 및/또는 비강 경로 및/또는 흡입을 통한 것(활성 성분 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물, 또는 이러한 염의 용매화물을 포함하는 제약 제제의 형태로, 제약상 허용가능한 투여 형태로)이 가능할 수 있다. 치료받을 장애 및 환자, 그리고 투여 경로에 따라, 조성물은 다양한 용량으로, 예를 들어 1 mg 내지 1,000 mg 또는 100 mg 내지 2,000 mg의 경구 용량으로 투여될 수 있다.
상기 기술된 화학식 I의 화합물의 제약 제형은 예를 들어 비경구, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여용으로 제조될 수 있다.
상기에 기술된 화학식 I의 화합물의 제약 제형은 단위 투여 형태로 편리하게 투여될 수 있으며, 예를 들어 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA., (1985)]에 기술된 바와 같은, 제약 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
경구 투여에 적합한 제약 제형은 하나 이상의 생리학적으로 상용성인 담체들 및/또는 부형제들을 포함할 수 있고 고체 또는 액체 형태일 수 있다. 정제 및 캡슐은 결합제; 충전제; 윤활제; 및 계면활성제를 이용하여 제조될 수 있다. 액체 조성물은 현탁제; 유화제; 및 방부제와 같은 통상적인 첨가제를 함유할 수 있다. 액체 조성물은 단위 투여 형태를 제공하기 위해 예를 들어 젤라틴에 캡슐화될 수 있다. 고체 경구 투여 형태는 정제, 투-피스(two-piece) 경질 쉘 캡슐 및 연질 탄성 젤라틴(SEG) 캡슐을 포함한다. 예시적인 경구 조성물은 화학식 I의 화합물 및 하나 이상의 제약상 허용가능한 부형제가 투-피스 경질 쉘 캡슐 또는 연질 탄성 젤라틴(SEG) 캡슐에 충전된 것을 포함할 것이다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 약제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식 효과의 생성에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환, 예를 들어 MTAP 유전자가 결실된 고형 종양 질환의 방지 및/또는 치료에서 항침습제로서 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, CDKN2A/MTAP 결실 종양을 갖는 인간과 같은 온혈 동물에서 항증식 효과의 생성을 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식 효과의 생성에 사용하기 위한 약제, 예를 들어 CDKN2A/MTAP 결실 종양을 위한 의약의 제조에 있어서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환(선택적으로, 고형 종양 질환은 MTAP 유전자 결실을 갖는 것을 특징으로 함)의 방지 및/또는 치료에서 항침습제로 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 항증식 효과를 생성하는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 항증식 효과를 생성하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 이상에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함한다. 이러한 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 환자는 MTAP 결실 암, 즉 MTAP 유전자가 결실된 암인 것을 특징으로 하는 암을 가질 수 있다.
본 명세서에서, 달리 언급되지 않는 한, 어구 "유효량"은 치료될 증상 및/또는 병태를 유의미하게 및 긍정적으로 변경시키기에(예를 들어, 긍정적인 임상적 반응을 제공하기에) 충분한 화합물 또는 조성물의 양을 의미한다. 제약 조성물에 사용되는 활성 성분의 유효량은 치료될 특정 병태, 병태의 중증도, 치료 지속기간, 동시 요법의 특성, 이용되는 특정 활성 성분(들), 이용된 특정한 제약상 허용가능한 부형제(들)/담체(들), 및 주치의의 지식과 전문 지식 내에 있는 유사 요인에 따라 달라질 것이다. 유효량은 일반적으로 0.1 mg 내지 1,000 mg의 범위일 것이다.
추가 실시 형태에 따르면, 고형 종양 질환의 방지 및/또는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 방지 및/또는 치료에 의한 항침습 효과를 생성하기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 환자는 MTAP 결실 암, 즉 MTAP 유전자가 결실된 암인 것을 특징으로 하는 암을 가질 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 암은 그의 MTAP 결실 상태를 특징으로 할 수 있으며, 즉 암은 MTAP 유전자가 결실된 암이다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암의 방지 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 암은 그의 MTAP 결실 상태를 특징으로 할 수 있으며, 즉 암은 MTAP 유전자가 결실된 암이다.
추가 실시 형태에 따르면, 암의 예방 또는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 암의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 환자는 MTAP 결실 암, 즉 MTAP 유전자가 결실된 암인 것을 특징으로 하는 암을 가질 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 고형 종양 질환은 MTAP 유전자 결손 종양일 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 고형 종양 질환의 예방 또는 치료를 필요로 하는 온혈 동물, 예컨대 인간에서 고형 종양 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 환자는 MTAP 결실 암, 즉 MTAP 유전자가 결실된 암인 것을 특징으로 하는 암을 가질 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 종양은 MTAP 유전자 결실을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 종양은 MTAP 유전자 결실을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료를 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 상기 동물에 투여하는 것을 포함한다. 이러한 실시 형태에서, 종양은 MTAP 유전자 결실을 갖는 것을 특징으로 할 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다. 이러한 실시 형태에서, 억제 효과는 MTA-상승적일 수 있다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 억제 효과를 제공하는 방법이 또한 제공되며, 본 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 선택적 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 선택적 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 대해 선택적 억제 효과를 제공하는 방법이 또한 제공되며, 본 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
PRMT5에 결합할 수 있는 화합물이 본원에서 기술된다. 생화학적 및 세포 기반 분석법에서, 본 명세서의 화합물은 강력한 PRMT5 단백질 바인더인 것으로 나타나며 이에 따라 PRMT5에 의해 매개되는 장애의 치료에서, 특히 PRMT5가 결실된 암, 예컨대 췌장암, 결장직장암, 자궁암, 담관암, 위암, 방광암, 자궁경부암, 고환 배아 세포 암 및 비-소세포 폐암 및 다발성 골수종, 미만성 대형 B 세포 림프종, 횡문근육종 및 피부 편평 세포 암종의 치료에서 유용할 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 용도는 폐(예를 들어 NSCLC) 및 위암 또는 림프종(예를 들어 DLBCL)의 치료를 위한 것일 것이다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 의해 매개되는 장애의 치료에서 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 의해 매개되는 장애를 치료하는 방법이 제공이 제공되며, 본 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시 형태에 따르면, PRMT5에 의해 매개되는 장애의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 위암, 폐암 또는 림프종의 치료에서 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 비-소세포 폐암의 치료에서 사용하기 위한, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
추가 실시 형태에 따르면, 위암, 비-소세포 폐암 또는 림프종을 치료하는 방법이 제공되며, 본 방법은 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시 형태에 따르면, 비-소세포 폐암을 치료하는 방법이 제공되며, 본 방법은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 유효량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
추가 실시 형태에 따르면, 위암, 비-소세포 폐암 또는 림프종 암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
본 명세서의 추가 양태에 따르면, 비-소세포 폐암의 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서의, 본원에서 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
본원에 정의된 항암 치료는 단독 요법으로 적용될 수 있거나, 본 명세서의 화합물에 더하여 통상적인 수술 또는 방사선요법 또는 화학요법을 포함할 수 있다.
따라서 일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 및 암의 병용 치료(conjoint treatment)를 위한 추가 항-종양 물질이 제공된다.
본 명세서의 일 실시 형태에 따르면, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염 및 또 다른 항-종양제를 포함하는, 암 치료에서 사용하기 적합한 조합이 제공된다.
본 명세서의 추가 실시 형태에서, 또 다른 항-종양제와 조합된, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다. 관련 실시 형태에서, 치료 방법으로서 화학식 I의 화합물을 또 다른 항종양제와 조합하여 이를 필요로 하는 환자, 예를 들어 MTAP 유전자가 결실된 암을 앓고 있는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다.
화학식 I의 화합물은 온혈 동물(인간을 포함함)에 사용하기 위한 치료제로서의 가치가 주요하겠지만, 이것은 또한 PRMT5를 억제하는 데 요구될 때에는 어느 경우이든 유용하다. 따라서, 이들은 새로운 생물학적 테스트의 개발 및 새로운 약리학적 제제의 탐색에 사용하기 위한 약리학적 표준으로 유용하다.
또 다른 실시 형태는 환자의 종양의 MTAP 유전자 결실 상태와 화학식 I의 화합물을 이용한 치료에 대한 잠재적 감수성 사이의 연관성 확인을 기반으로 한다. 그 후, MAT 상승적 PRMT5 억제제, 예컨대 화학식 I의 화합물은 다른 요법에 내성이 있을 수 있는 MTAP 유전자가 결실된 종양 환자를 치료하는 데 유리하게 사용될 수 있다. 따라서 이는 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위한 환자, 특히 암 환자를 선택하기 위한 기회, 방법 및 도구를 제공한다. 상기 선택은 치료할 종양 세포가 MTAP 유전자 결실을 보유하는지의 여부를 기반으로 한다. 따라서 MTAP 유전자 결실 상태는 화학식 I의 화합물을 이용한 치료의 선택이 유리할 수 있음을 시사하는 바이오마커로서 사용될 수 있다.
일 실시 형태에 따르면, 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위한 환자를 선택하는 방법이 제공되며, 본 방법은 환자로부터의 종양 세포-함유 샘플을 제공하는 단계; 환자의 종양 세포-함유 샘플에서 MTAP 유전자가 결실되었는지를 결정하는 단계; 및 이에 기반하여 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위한 환자를 선택하는 단계를 포함한다.
상기 방법은 실제 환자 샘플 단리 단계를 포함하거나 배제할 수 있다. 따라서, 일 실시 형태에 따르면, 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위한 환자를 선택하는 방법이 제공되며, 본 방법은 환자로부터 이전에 단리된 종양 세포-함유 샘플에서 MTAP 유전자가 결실되었는지를 결정하는 단계; 및 이에 기반하여 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위한 환자를 선택하는 단계를 포함한다.
실시 형태에서, 환자는 종양 세포가 MTAP 유전자 결실을 갖는 경우 화학식 I의 화합물을 이용한 치료를 위해 선택된다.
또 다른 실시 형태에 따르면, MTAP 유전자 결실을 갖거나 MTA 축적 경향을 갖는 종양 세포를 갖는 암의 치료에서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
또 다른 실시 형태에 따르면, MTA를 축적하는 것으로 확인된 종양 세포를 갖는 암의 치료에서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약상 허용가능한 염이 제공된다.
또 다른 실시 형태에 따르면, MTAP 유전자가 결실된 것으로 확인된 종양 세포를 갖는 암의 예방 및 치료에서 사용하기 위한, 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
하기 실시예는 본 발명의 성질이 완전히 이해될 수 있도록 제공됨이 이해될 것이다. 또한 하기 실시예가 어떠한 방식으로든 기재의 범주를 제한하려는 것이 아님이 이해될 것이다.
실시예
생물학적 분석법
하기 분석법을 이용하여 본 명세서의 화합물의 효과를 측정하였다.
MTase-Glo™ PRMT5 발광 분석(PRMT5 효소 분석)
Mtase-GloTM 메틸트랜스퍼라아제 발광 분석을 이용하여, 5'-메틸티오아데노신(MTA)의 존재 또는 부재 하에 재조합 PRMT5:MEP50 효소 복합체에 의해 S-아데노실 메티오닌(SAM)이 S-아데노실 호모시스테인(SAH)으로 전환되는 것을 모니터링하였다. 효소 반응을 백색 1536웰 마이크로타이터 플레이트(Greiner, #782075)에서 수행하였다. 반응 완충액은 20 mM 바이신(Bicine)(pH 7.60), 25 mM NaCl, 1 mM DTT 및 0.1%(w/v) CHAPS를 함유하였다.
억제 분석의 경우, 12포인트 이중 반치 로그 화합물 농도-반응(최고 농도 100 μM)에 따라 Labcyte Echo 555 어쿠스틱 디스펜서를 사용하여 DMSO 중 기준 대조군 및 관심 화합물을 마이크로플레이트에 분배하였다. 모든 웰을 적절한 부피의 DMSO로 백필링하여(backfilled) 3 μl 최종 분석 부피에서 1%(v/v)의 최종 농도를 달성하였다. 모든 분석 준비가 된 플레이트는 중립 대조군(억제 없음, 1%(v/v) DMSO) 및 억제제 대조군(100% 억제, 분석-특이적 화합물 30 μM)을 포함하였다.
반응 완충액 중 1 nM 인간 헤테로팔량체 PRMT5:MEP50 효소 복합체, 2.5 μM H41-21 히스톤 펩티드(Cayman Chemical Co., #10854) 및 2.5 μM S-아데노실 메티오닌(SAM)(Promega, A120A)을 함유하는 반응 혼합물 3 μL와 함께 억제제를 인큐베이션함으로써 MTA 없이 억제 분석을 수행하였다. 이와 마찬가지로, 2 nM 효소 복합체, 1.5 μM MTA(Sigma, D5011), 2.5 μM H41-21 펩티드 및 2.5 μM SAM으로 이루어진 효소 혼합물 3 μL와 함께 억제제를 인큐베이션함으로써 MTA의 존재 하에서의 분석을 수행하였다. 실온에서 5시간 인큐베이션 후, 1 μL의 0.5%(v/v) TFA를 각 웰에 첨가하여 메틸화 반응을 켄칭하였다. 후속적으로, 5x 농축 MTase-GloTM 시약(Promega, CS175601A) 1 마이크로리터를 각 웰에 첨가하고 실온에서 인큐베이션하여 반응에서 생성된 SAH를 ADP로 전환시켰다. 10분 후, 사전 여과된 Mtase-GloTM 검출 용액(Promega, CS175601B) 2.5 μL를 각 웰에 첨가하고 실온에서 추가 30분 동안 인큐베이션하여 ADP가 발광성으로 전환되는 것을 보장하였으며, 상기 발광을 Evision 2101 Multilabel Plate 판독기를 사용하여 측정하였다.
데이터를 분석하고, IC50 값을 Genedata Screener® 소프트웨어를 이용하여 계산하였다.
PRMT5 세포 SDMA 분석:
HCT116 WT 및 KO-MTAP 세포를 McCoys 배지 (Sigma #M8403), 10%(v/v) 소 태아 혈청 및 1%(v/v) L-글루타민으로 구성된 세포 배지에서 배양하였다. 수확 후, 세포를 흑색 384웰 Costar 플레이트(#3712, Corning)에 분배하여 총 부피 40 μl의 세포 배지 중 웰당 2000개의 세포를 제공하였다. 12포인트 반치 로그 화합물 농도-반응(최고 농도 30 μM)에 따라 Labcyte Echo 555 어쿠스틱 디스펜서를 사용하여 테스트 화합물 및 기준 대조군을 세포 플레이트에 직접적으로 투입하였다.
그 후 세포 플레이트를 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션한 후 PBS/A(최종 농도 4%) 중 8% 파라포름알데히드 40 μl를 첨가하여 고정하고, 이어서 실온에서 10분 동안 인큐베이션하고, 그 후 플레이트를 BioTek ELx406 플레이트워셔를 사용하여 150 μl PBS로 2회 세척하고, 웰당 20 ul의, PBS 중 0.1% 사포닌으로 10분 동안 투과화하고, 다시 세척하고 실온에서 1시간 동안 웰당 20 ul의, PBS-T(Sigma #A8022) 중 2% BSA로 차단하였다.
일차 항-SDMA 히스톤 4 항체(Milipore #07-947)를 PBS-T + 0.05% BSA에 1:1000으로 희석하고, 웰당 20 μl를 첨가하고, 플레이트를 4℃에서 하룻밤 인큐베이션하였다. 세포 플레이트를 200 μl의 PBS/T로 3회 세척한 후, Hoechst 33342의 1:1000 희석액과 함께 20 μl의 Alexa Fluor® 488 염소 항-토끼 IgG 이차 항체(Thermo #A11008,)의 분석 완충액 중 1:500 희석액을 웰마다 첨가하였다. 실온에서 1시간 인큐베이션 후, 플레이트를 200 μl의 PBS/T로 3회 세척하고, 40 μl의, Ca, Mg 및 Na 중탄산염 무함유 PBS (Gibco #14190-094)를 웰마다 첨가하였다.
염색된 세포 플레이트를 흑색 시일로 덮은 후, 10× 대물렌즈를 갖춘 Cell Insight 이미징 플랫폼(Thermo Scientific)에서 판독하였다. 오토포커스(Autofocus) 및 사건의 수를 세는 데 일차 채널(Hoechst 청색 형광 405 nM, BGRFR_386_23)이 사용된다(이는 테스트되는 화합물의 세포독성에 대한 정보를 제공할 것이다). 이차 채널(Green 488 nM, BGRFR_485_20)은 SDMA 염색을 측정한다.
데이터를 분석하고, IC50을 Genedata Screener® 소프트웨어를 이용하여 계산하였다. 분석 창을 최대 신호/상단(비히클 대조군) 및 최소 신호/하단(30 mM의 공지된 표준 강력 억제제 화합물)의 정량화에 의해 Genedata에서 결정하고 IC50을 힐 모델을 사용하여 계산한다.
Figure pct00039

세포 증식 분석:
HCT116 WT 및 KO-MTAP 세포를 McCoys 배지 (Sigma #M8403), 10%(v/v) 소 태아 혈청 및 1%(v/v) L-글루타민으로 구성된 세포 배지에서 배양하였다. 수확 후, 세포를 흑색 384웰 Costar 플레이트(#3712, Corning)에 분배하여 총 부피 40 μl의 세포 배지 중 웰당 400개의 세포를 제공하였다. 12포인트 이중 반치 로그 화합물 농도-반응(최고 농도 30 μM)에 따라 Labcyte Echo 555 어쿠스틱 디스펜서를 사용하여 테스트 화합물 및 기준 대조군을 세포 플레이트에 직접적으로 투입하였다..
Alamar Blue(Thermo # DAL1100) 4 ml를 플레이팅하고 37℃, 5% CO2에서 3시간 동안 인큐베이션한 후, 0일차 플레이트를 병렬로 생성하지만 투여하지는 않는다. 인큐베이션 후 플레이트를 형광 여기 파장이 540~570 nm(피크 여기는 570 nm)이고 형광 방출이 580~610 nm(피크 방출은 585 nm)인 EnVision 플레이트 판독기를 사용하여 판독한다.
그 후, 투여된 세포 플레이트를 37℃에서 5일 동안 인큐베이션한 후 Alamar blue를 첨가하고 첫 번째 플레이트와 동일한 프로토콜에 따라 Envision에서 판독하였다. 플레이트 0으로 정규화함으로써 Genedata Screener® 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하고 IC50을 계산하였다.
전술한 분석에서 얻어진 데이터는 하기 표 2에 제시되어 있다.
[표 2]
Figure pct00040

Figure pct00041

표 2에 제시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 본 명세서에 따른 실시예는 모두 "MTA-상승적" PRMT5 억제제이고 이 활성 프로파일은 MTAP 결실 세포에서 향상된 항증식 활성을 제공한다. 더욱 상세하게는, 컬럼 2 및 3의 조사는 분석 시스템에 MTA가 존재하는 경우 단리된 단백질(즉, PRMT5 효소)의 50% 억제를 야기하는 데 필요한 PRMT5 억제제의 농도가 크게 감소됨을 보여주며, 이때 MTA의 존재 하에서의 IC50은, MTA가 존재하지 않는 경우 수십 내지 수백 nM 범위(컬럼 3)와 비교하여, MTA가 존재하는 경우 한 자릿수의 nM 또는 수십 nM의 범위(컬럼 2)로 관찰된다. 실시예 1, 2 및 3에 대한 데이터는 MTA의 존재 하에서의 이러한 향상된 활성(각각의 IC50은 각각 3.8, 6.0 및 8.5 nM)이 MTA의 존재 하에서 관찰되는 반면, MTA의 부재 하에서의 이들의 활성은 25, 27 및 61 nM임을 분명히 예시한다.
표 2의 컬럼 4 및 5의 조사에서 쉽게 알 수 있는 바와 같이, HCT116 세포 분석에서 틀림없이 더 두드러진 "MTA-상승적" 억제 효과가 관찰된다. 실시예 1, 2 및 3에 대한 결과를 한 번 더 비교하면(각각 컬럼 4 및 5에서 5.3, 5.9 및 13 nM의 IC50 대 290, 200 및 560 nM의 IC50), MTAP 결여로 인해 MTA를 축적하는 MTAP 녹아웃 HCT116 세포에서 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제의 활성이 훨씬 더 크다. 이와는 대조적으로, HCT116 야생형 세포(컬럼 5)에서는 PRMT5 억제가 크게 감소하고 보다 온건한 IC50 값이 관찰된다. 마지막으로, 시험관 내에서 PRMT5 억제 활성을 MTAP 녹아웃 및 야생형 HCT116 인간 암세포의 항증식 효과로 번역하는 것은 컬럼 6 및 7에 제시된 데이터에 의해 확인된다. 이들의 "MTA-상승적" PRMT5 억제 활성으로부터 예상되는 바와 같이, 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제는 MTAP 야생형 세포보다 MTAP 결핍 세포(컬럼 6)에서 훨씬 더 큰 항증식 효과를 발휘하며, 이때 MTAP KO 세포에서 실시예 1, 2 및 3에 대한 IC50은 MTAP WT 세포에서 마이크로몰 범위에 잘 들어가는 IC50(>30, 6.1 및 >30 mM)과 비교하여 수백 나노몰 범위 내에 있다(160, 240 및 320 nM). 본 명세서에 따른 PRMT5 억제제는 MTAP 유전자 결실을 지니고 그 결과 MTA가 축적되는 약 15%의 고형 종양의 치료를 위한 유망한 후보가 되게 하는 활성 프로파일을 보유한다는 것을 쉽게 이해할 수 있다.
실시예
본 명세서에 기재된 화합물은 하기 실시예에 추가로 예시되어 있다. Chemdraw 버전 20.0.2.51을 사용하여 화합물을 명명하였다. 이 실시예는 오직 예시의 방식으로만 주어지고, 비제한적이다. 일반적으로,
(i) 달리 기재되지 않는 한, 조작은 주위 온도, 즉 17 내지 25℃의 범위에서 및 불활성 가스, 예컨대 질소의 분위기 하에서 수행되었다.
(ii) 증발은 회전 증발에 의해 또는 Genevac 설비 또는 Biotage v10 증발장치를 진공 하에 이용하여 수행하였고 워크업 절차는 여과에 의한 잔여 고형의 제거 후 수행하였다;
(iii) 플래시 크로마토그래피 정제는 사전패킹된 RediSep Rf Gold™ 실리카 컬럼(20 내지 40 μm, 구형 입자), GraceResolv™ 카트리지(Davisil® 실리카) 또는 Silicycle 카트리지(40 내지 63 μm)를 사용하여, 자동화된 Teledyne Isco CombiFlash® Rf 또는 Teledyne Isco CombiFlash® Companion®에서 수행하였다.
(iv) 분취용 역상 HPLC는 용출제로서 물(0.1~0.3% 수성 암모늄 함유) 또는 물(0.1% 포름산 함유)과 아세토니트릴의 점감적 극성 혼합물을 사용하여, Waters CSH C18 OBD 컬럼(5 마이크론 실리카, 30 mm 직경, 100 mm 길이, 50 mL/분의 유량)이 갖추어진, SQ MS 검출기(Multimode ESI/APCI 소스)가 구비된 Agilent 1290 Infinity II Preparative 시스템에서 수행되었다. 분취용 SFC 정제는 상응하는 실험 데이터에 자세히 설명된 바와 같은 크로마토그래피 조건을 사용하여 QDa MS 검출기가 구비된 Sepiatec P100 SFC 시스템 또는 Waters Prep 100 SFC 시스템에서 수행되었다.
(v) 수율은 존재하는 경우 반드시 획득가능한 최대치는 아니다;
(vi) 일반적으로, 화학식 I의 최종 산물의 구조는 핵 자기 공명(NMR) 분광측정에 의해 확인하였다; NMR 화학적 이동값은 델타 척도로 측정하였다[양성자 자기 공명 스펙트럼은 Bruker Avance 500(500 MHz) 또는 Bruker Avance 400(400 MHz) 기기를 사용하여 결정하였음]; 측정치는 달리 명시되지 않는 한 주위 온도에서 취하였다; 하기 약어를 사용하였다: s, 단일선; d, 이중선; t, 삼중선; q, 사중선; m, 다중선; dd, 이중선의 이중선; ddd, 이중선의 이중선의 이중선; dt, 삼중선의 이중선; bs, 브로드 신호
(vii) 일반적으로, 화학식 I의 최종 산물은 또한 액체 크로마토그래피에 이어 질량 분광측정(LCMS 또는 UPLC)으로 특성화하였다; 역상 C18 실리카를 유량 1 mL/분으로 사용하였고 검출은 전기분무 질량 분광측정에 의해 그리고 파장 범위 220 nm 내지 320 nm를 기록하는 UV 흡광도에 의해 수행하였다. 분석용 UPLC는 치수가 2.1 x 50 mm이고 입자 크기가 1.7 마이크론인 Waters Acquity UPLC CSH C18 컬럼을 사용하여 CSH C18 역상 실리카에서 수행되었다. 용출제로서 점감적 극성 혼합물, 예를 들어 용매 A로 물(0.1% 포름산 또는 0.1% 암모니아를 함유) 및 용매 B로 아세토니트릴의 점감적 극성 혼합물을 사용한 구배 분석을 이용하였다. 전형적인 2분 분석용 UPLC 방법은 1.3분에 걸쳐, 대략 1 mL/분으로, 각각 용매 A 및 B의 97:3 혼합물로부터 용매 A 및 B의 3:97 혼합물까지의 용매 구배를 이용할 것이다. 달리 명시되지 않는 한, 보고된 분자 이온은 [M+H]+에 상응한다; 여러 동위원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl 등)에 있어서, 달리 명시되지 않는 한, 보고된 값은 최저 동위원소 질량에 대해 수득된 것이다.
(viii) 이온 교환 정제는 일반적으로 SCX-2(Biotage, 프로필술폰산 작용화된 실리카. 3작용성 실란을 사용하여 제조. 말단 비캡핑됨) 카트리지를 사용하여 수행되었다.
(ix) 박막 크로마토그래피, 질량 스펙트럼, HPLC(고성능 액체 크로마토그래피) 및/또는 NMR 분석에 의해 중간체 순도를 평가하였다.
(x) 달리 명시되지 않는 한, 제조에 사용된 분자체는 크기가 4Å이었다.
(xi) 하기 약어를 사용하였다:
aq. 수성
Boc tert-부톡시카르보닐
Brettphos 2-(디시클로헥실포스피노)3,6-디메톡시-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-바이페닐
CataCXium® A 디(1-아다만틸)-n-부틸포스핀
Conc. 진한
CCl4 사염화탄소
DCM 디클로로메탄
DIBAL 디이소부틸알루미늄 히드라이드
DIPEA / DIEA 디이소프로필에틸아민
DMAP 디메틸아미노피리딘
DMA N,N-디메틸아세트아미드
DMF N,N-디메틸포름아미드
DMSO 디메틸 술폭시드
EPhos 디시클로헥실(3-이소프로폭시-2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-바이페닐]-2-일)포스판
EtOAc 에틸 아세테이트
h 시간
HATU 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸o[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
m-CPBA 3-클로로퍼벤조산
MeCN 아세토니트릴
MeOH 메탄올
MgSO4 황산마그네슘
MTBE tert-부틸 메틸 에테르
NaHCO3 탄산수소나트륨
Na2SO4 황산나트륨
NH4Cl 염화암모늄
NBS N-브로모숙신이미드
NIS N-요오도숙신이미드
rac-BINAP (±)-2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-바이나프탈렌
rt/RT 실온
RockPhos 3세대 전촉매 [(2-디-tert-부틸포스피노-3-메톡시-6-메틸-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-바이페닐)-2-(2-아미노바이페닐)]팔라듐(II) 메탄술포네이트
Ruphos 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디이소프로폭시- 1,1'-바이페닐
sat. 포화된
SEM 트리메틸실릴에톡시메틸
SFC 초임계 유체 크로마토그래피
sol. 용액
SPhos 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디메톡시바이페닐
TBAF 테트라-n-부틸암모늄 플루오라이드
TEA 트리에틸아민
TES 트리에틸실란
TFA 트리플루오로아세트산
TFAA 트리플루오로아세트산 무수물
THF 테트라히드로푸란
THP 테트라히드로피란
Tr 트리틸
Xantphos 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸 잔텐
중간체 AA: 메틸 2-(2-브로모-4-플루오로페닐)아세테이트
Figure pct00042

티오닐 클로라이드 (31.3 mL, 429.1 mmol)를 실온에서 MeOH (400 mL) 중 2-(2-브로모-4-플루오로페닐)아세트산 (CAS 번호 61150-59-2) (100 g, 429.1 mmol)에 조심스럽게 적가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc (250 mL)와 포화 NaHCO3 (200 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 물 (100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (105 g, 99%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.64 (3H, s), 3.83 (2H, s), 7.25 (1H, td), 7.48 (1H, dd), 7.58 (1H, dd) ); m/z MH+는 관찰되지 않음.
중간체 AB: 메틸 5-플루오로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트
Figure pct00043

메틸 2-(2-브로모-4-플루오로페닐)아세테이트 (45.0 g, 182.14 mmol) 및 트리에틸아민 (27.90 mL, 200.35 mmol)을 MeOH (300 mL)와 함께 강철 압력 용기에 넣었다. [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (디클로로메탄과의 복합체) (4.46 g, 5.46 mmol)을 첨가하고, 용기를 밀봉하였다. 용기를 일산화탄소로 퍼지하고, 그 후 일산화탄소로 7 bar까지 충전시켰다. 상기 압력 용기를 100℃까지 가열하고 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 통기시키고, 여과시켜 촉매를 제거하였다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc (250 mL)에 용해시키고, 물 (2 x 200 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (38.40 g, 93%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.60 (3H, s), 3.80 (3H, s), 3.99 (2H, s), 7.42 - 7.49 (2H, m), 7.66 (1H, ddd); m/z MH+ 227.
중간체 AC: rac- 메틸 -2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-5-플루오로벤조에이트
Figure pct00044

메틸 5-플루오로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트 (47.0 g, 207.8 mmol)를 클로로포름 (450 mL)에 용해시켰다. 1-브로모피롤리딘-2,5-디온 (55.5 g, 311 mmol), 이어서 2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (3.41 g, 20.8 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류에서 72시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물 (2 x 250 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~40% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (50.50 g, 80%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.71 (3H, s), 3.86 (3H, s), 6.51 (1H, s), 7.56 (1H, td), 7.66 (1H, dd), 7.81 (1H, dd); m/z MH+는 관찰되지 않음.
중간체 AD: rac- 메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00045

4-메톡시벤질아민 (23.5 g, 171 mmol)을 MeCN (300 mL)과 함께 플라스크에 넣고, 중탄산나트륨 (23.9 g, 285 mmol)을 첨가하였다. MeCN (100 mL)에 용해시킨 rac-메틸 2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-5-플루오로벤조에이트 (43.5 g, 142 mmol)를 적하 깔때기를 통해 반응 혼합물이 80℃까지 되도록 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 대부분의 MeCN을 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc (400 mL)와 물 (400 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc (100 mL)로 재추출하고, 유기물을 합하고, 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (45.3 g, 96%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.69 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.31 (1H, d), 5.04 (1H, d), 5.18 (1H, s), 6.87 - 6.94 (2H, m), 7.17 - 7.24 (2H, m), 7.50 (1H, ddd), 7.57 (1H, dd), 7.62 (1H, dd); m/z MH+ 330.
중간체 AE: rac- 메틸 1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00046

rac-메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (24.0 g, 72.9 mmol), 알릴 아세테이트 (11.8 mL, 109 mmol) , 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (1.67 g, 1.82 mmol) 및 N,N'-((1R,2R)-시클로헥산-1,2-디일)비스(2-(디페닐포스파닐)벤즈아미드) (2.52 g, 3.64 mmol)를 질소 하에 5℃에서 THF (400 mL)에서 교반시켰다. 그 후 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (13.7 mL, 109 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 5℃에서 5분 동안 교반시켰다. THF를 진공에서 제거하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (400 mL)와 물 (400 mL) 사이에 분배하고, 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시켰다. 용매를 진공에서 제거하여 주황색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (25.8 g, 96%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.04 - 3.20 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.52 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.74 - 4.94 (3H, m), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m), 7.45 - 7.58 (2H, m), 7.63 (1H, dd); m/z MH+ 370.
중간체 AF: 메틸 ( S )-1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00047

rac-메틸 1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (원하는 (S) 거울상 이성질체에 유리하도록 대략 70:30) (25.8 g, 69.7 mmol)를 SFC 크로마토그래피로 정제하였다 (컬럼: Phenomenex C1, 30 x 250 mm, 5 마이크론, 이동상: 10% IPA + 0.1% DEA / 90% scCO2, 유량: 90 ml/분, BPR: 120 bar, 컬럼 온도: 40℃, UV max 210 nm). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (15.1 g, 56%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.04 - 3.20 (2H, m), 3.26 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.52 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.74 - 4.94 (3H, m), 6.82 - 6.96 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m), 7.45 - 7.58 (2H, m), 7.63 (1H, dd); m/z MH+ 370
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, (다른 거울상 이성질체를 사용하여 제조한 것과 비교하여) 중간체의 이 거울상 이성질체를 사용하여 제조한 생체활성 화합물의 생물학적 활성을 기반으로 한 이 중간체의 추정된 입체화학적 할당).
중간체 AG: 메틸 ( S )-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00048

1,4-디옥산 (800 mL) 및 물 (200 mL) 중 메틸 (S)-1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (60.0 g, 162 mmol)의 용액에 산화오스뮴(VIII) (물 중 4%) (5.16 mL, 0.81 mmol), 과요오드산나트륨 (87.0 g, 406 mmol) 및 2,6-디메틸피리딘 (37.8 mL, 324 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시켜 염을 제거하고 DCM (500 mL)으로 헹구었다. 여과액을 물 (500 mL)과 함께 분리 깔대기에 넣고 분배하였다. 수성 상을 DCM (300 mL)으로 재추출하고, 유기 상을 합하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (50.1 g, 83%)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.40 (3H, s), 3.42 - 3.56 (2H, m), 3.72 (3H, s), 4.58 (1H, d), 4.74 (1H, d), 6.80 - 6.92 (2H, m), 7.19 - 7.27 (2H, m), 7.52 (1H, ddd), 7.60 (1H, dd), 7.69 (1H, dd), 9.07 (1H, t); m/z MH+ 372.
중간체 AH: rac -메틸 5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00049

중간체 AE: rac-메틸 (R)-1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트를 사용하여 중간체 AG: 메틸 ( S )-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트의 방법에 따라 표제 화합물을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) 3.06 - 3.15 (1H, m), 3.19 - 3.29 (1H, m), 3.58 (3H, s), 3.78 (3H, s), 4.46 (1H, d), 5.11 (1H, d), 6.78 - 6.87 (2H, m), 7.18 - 7.25 (2H, m), 7.25 - 7.34 (1H, m), 7.44 - 7.52 (1H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 9.06 (1H, t)
중간체 AI: 메틸 ( S )-1-알릴-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-
Figure pct00050

메틸 (S)-1-알릴-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (20.0 g, 54.1 mmol)를 MeCN (200 mL) 및 물 (100 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (74.2 g, 135 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. MeCN을 진공에서 제거하고, 반응 혼합물을 DCM (400 mL)과 물 (250 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 DCM (200 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수 (100 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (12.5 g, 93%)을 크림색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 2.79 (1H, dd), 2.94 (1H, dd), 3.68 (3H, s), 4.93 - 5.15 (2H, m), 5.35 - 5.57 (1H, m), 7.37 - 7.46 (1H, m), 7.50 (1H, ddd), 7.63 - 7.79 (1H, m), 9.32 (1H, s); m/z MH+ 250.
중간체 AJ: 메틸 3-브로모-2-(브로모메틸)-5-플루오로벤조에이트
Figure pct00051

질소 하에 실온에서 2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (1.66 g, 10.1 mmol)을 CCl4 (400 mL) 중 메틸 3-브로모-5-플루오로-2-메틸벤조에이트 (CAS 번호 1187318-53-1) (25.0 g, 101 mmol) 및 NBS (18.9 g, 106 mmol)에 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~4% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (28.0 g, 85%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 3.98 (3H, s), 5.12 (2H, s), 7.51 - 7.58 (1H, m), 7.61 - 7.68 (1H, m); m/z MH+ 질량 이온 없음.
중간체 AK: 메틸 3-브로모-2-(시아노메틸)-5-플루오로벤조에이트
Figure pct00052

트리메틸실릴 시아나이드 (19.7 mL, 147 mmol)를 실온에서 MeCN (200 mL) 중 메틸 3-브로모-2-(브로모메틸)-5-플루오로벤조에이트 (24.0 g, 73.6 mmol) 및 탄산칼륨 (20.4 g, 147 mmol)에 적가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시키고, 그 후 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~20% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (16.5 g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) 4.00 (3H, s), 4.36 (2H, s), 7.57 - 7.64 (1H, m), 7.72 - 7.79 (1H, m); m/z MH+ 272.
중간체 AL: 메틸 3-브로모-5-플루오로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트
Figure pct00053

진한 황산 (3.33 mL, 62.5 mmol)을 0℃에서 MeOH (100 mL) 중 메틸 3-브로모-2-(시아노메틸)-5-플루오로벤조에이트 (17.0 g, 62.5 mmol)에 적가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 5일 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 얼음 (200 mL)에 붓고, 수산화암모늄 (물 중 28~30%)으로 염기성화하고, EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (15.0 g, 79%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) 3.74 (3H, s), 3.91 (3H, s), 4.28 (2H, s), 7.52 - 7.59 (1H, m), 7.65 - 7.73 (1H, m); m/z MH+ 305.
중간체 AM: rac -메틸 7-브로모-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00054

2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (1.82 g, 11.1 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (150 mL) 중 메틸 3-브로모-5-플루오로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트 (11.3 g, 37.0 mmol) 및 NBS (7.25 g, 40.7 mmol)에 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2일 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~5% EtOAc (60~90℃)). 분획을 건조상태까지 증발시켜 rac-메틸 3-브로모-2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-5-플루오로벤조에이트 (12.0 g, 84%)를 무색 액체로서 수득하였다. 중탄산나트륨 (10.5 g, 125 mmol)을 실온에서 MeCN (100 mL) 중 rac-메틸 3-브로모-2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-5-플루오로벤조에이트 (12.0 g, 31.3 mmol) 및 4-메톡시벤질아민 (2.14 g, 15.6 mmol)에 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 Celite®를 통해 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~20% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (2.56 g, 20%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, CDCl3) 3.67 (3H, s), 3.82 (3H, s), 4.26 (1H, d), 4.87 (1H, s), 5.12 (1H, d), 6.89 (2H, d), 7.27 (2H, d), 7.44 (1H, dd), 7.57 (1H, dd); m/z MH+ 408.
중간체 AN: rac -메틸 1-알릴-7-브로모-5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00055

3-브로모프로프-1-엔 (4.03 g, 33.29 mmol)을 DMF (55 mL) 중 메틸 rac-메틸 7-브로모-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (4.53 g, 11.10 mmol) 및 탄산세슘 (10.9 g, 33.3 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (250 mL)와 물 (250 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 물 (2 x 100 mL), 염수 (100 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~20% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4.17 g, 84%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.09 (s, 2H), 3.25 - 3.41 (m, 3H), 3.73 (d, 3H), 4.34 (d, 1H), 4.75 - 5.12 (m, 4H), 6.83 - 6.92 (m, 2H), 7.17 - 7.29 (m, 2H), 7.69 (dd, 1H), 7.91 (dd, 1H); m/z MH+ 448.
중간체 AO: rac -메틸 7-브로모-5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00056

칼륨 오스메이트(VI) 2수화물 (0.07 g, 0.19 mmol)을 디옥산 (90 mL) 및 물 (30 mL) 중 rac-메틸 1-알릴-7-브로모-5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-이소인돌린-1-카르복실레이트 (4.17 g, 9.30 mmol), 2,6-루티딘 (1.99 g, 18.6 mmol) 및 과요오드산나트륨 (5.97 g, 27.9 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (200 ml) 및 물 (200 mL)로 희석시켰다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (3.31 g, 79%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.12 (3H, s), 3.71 (3H, s), 3.73 - 3.78 (2H, m), 4.41 (1H, d), 4.88 (1H, d), 6.83 - 6.91 (2H, m), 7.18 - 7.25 (2H, m), 7.69 - 7.76 (1H, m), 7.85 - 7.93 (1H, m), 9.16 (1H, d); m/z MH+ 450.
중간체 AP: rac 4-브로모-6-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-1'-메틸-스피로[이소인돌린-3,3'-피롤리딘]-1,2'-디온
Figure pct00057

아세트산나트륨 (2.58 g, 31.5 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (70 mL) 중 메틸아민 히드로클로라이드 (1.06 g, 15.7 mmol) 및 rac-메틸 7-브로모-5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (3.54 g, 7.86 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (5.00 g, 23.59 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 석유 에테르 중 0~70% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.20 g, 35%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.16 - 2.29 (1H, m), 2.51 (1H, d), 2.71 (3H, s), 3.56 (2H, t), 3.73 (3H, s), 4.45 (1H, d), 4.62 (1H, d), 6.83 - 6.91 (2H, m), 7.20 - 7.29 (2H, m), 7.65 (1H, dd), 7.87 (1H, dd), m/z MH+ 433
중간체 AQ: tert -부틸 (6-클로로-5-플루오로피리딘-3-일)카르바메이트
Figure pct00058

디옥산 (1 L) 중 5-브로모-2-클로로-3-플루오로피리딘 (100 g, 475.22 mmol)에 tert-부틸 카르바메이트 (61.20 g, 522.74 mmol) 및 탄산세슘 (310.00 g, 950.43 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 진공 하에 탈기시키고, 불활성 질소 분위기로 5분 동안 퍼지하고, 이어서 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (13.06 g, 14.26 mmol) 및 (9,9-디메틸-9H-잔텐-4,5-디일)비스(디페닐포스판) (Xantphos) (11.00 g, 19.01 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 16시간 동안 85℃까지 가열하고, 그 후 실온까지 냉각시켰다. 고체를 여과 제거하고 과량의 디옥산으로 세척하였다. 용매를 진공에서 제거하여 조 표제 화합물 (179 g, 153%)을 짙은 주황색 검으로서 수득하였고, 이는 정치 시에 고화되었다. 조 검을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 1.49 (9H, s), 7.98 (1H, dd), 8.29 (1H, d), 9.98 (1H, s); m/z MH+ 247.
중간체 AR: 6-클로로-5-플루오로피리딘-3-아민
Figure pct00059

1,4-디옥산 중 4 M HCl (137 mL, 547.3 mmol)을 20℃에서 1,4-디옥산 (20 mL) 중 tert-부틸 (6-클로로-5-플루오로피리딘-3-일)카르바메이트 (36 g, 109.5 mmol)의 용액에 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 3일 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (250 mL) 및 EtOAc (100 mL)로 희석시켰다. 유기 상을 분리하고, 더 이상 생성물이 유기 상에 잔존하지 않을 때까지 2 M HCl (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 수성 상을 교반시키고, 빙조에서 0℃까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 50% NaOH 용액으로 pH14까지 염기성화하였다. 그 후 반응 혼합물을 EtOAc (2 x 250 mL)로 추출하고, 합한 유기물을 포화 염수 (50 mL)로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (12.4 g, 77%)을 갈색 고체로서 수득하였다. 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 3.88 (s, 2H), 6.80 (dd, J = 9.6, 2.5 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2.5 Hz, 1H).
중간체 AS 2-브로모-6-클로로-5-플루오로피리딘-3-아민
Figure pct00060

MeCN (250 mL) 중 6-클로로-5-플루오로피리딘-3-아민 (56.8 g, 379.3 mmol)을 5℃까지 냉각시키고, MeCN (500 mL) 중 NBS (67.50 g, 379.3 mmol)의 용액을 15분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고, 45분 동안 교반시켰다. 물 (2 L)을 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반시켰다. 생성된 고체를 여과 제거하고, 물 (400 mL)로 세척하였다. 고체를 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (76 g, 89%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 6.01 (2H, s), 7.12 (1H, d); m/z MH+ 225
중간체 AT: 5-클로로-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실산
Figure pct00061

아세트산팔라듐 (3.35 g, 14.93 mmol), 트리페닐포스핀 (3.92 g, 14.93 mmol), 2-브로모-6-클로로-5-플루오로피리딘-3-아민 (18.0 g, 74.65 mmol) 및 피루브산 (15.57 mL, 224 mmol)을 1,4-디옥산 (88 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 트리에틸아민 (45.80 mL, 328.5 mmol)을 첨가하고, 반응물을 100℃에서 2.5시간 동안 가열하였다 (질소 하에). 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 여과시켜 원치 않는 고체를 제거하였다. 여과액을 2 M NaOH (200 mL)로 희석시키고, MTBE (200 mL)를 첨가하였다. 그 후 반응 혼합물을 격렬하게 교반시키고, 분리하였다. 유기 상을 2 M NaOH (100 mL)로 세척하였다. 합한 염기성 수성 상을 진한 HCl (수성)로 조심스럽게 산성화하고, 침전된 갈색 고체를 여과에 의해 수집하고 건조시켰다. 암갈색 고체를 MeOH (90 mL)에 현탁시키고, 2시간 동안 교반시켰다 (실온에서). 고체를 여과시키고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (14.60 g, 91%)을 베이지색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 7.16 (1H, dd), 7.84 (1H, dd), 12.36 (1H, s), 13.46 (1H, s); m/z MH+ 214.
중간체 AU: 메틸 5-클로로-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00062

황산 (3.08 mL, 57.83 mmol)을 실온에서 MeOH (113 mL) 중 5-클로로-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실산 (14.60 g, 57.83 mmol)에 조심스럽게 적가하였다. 반응 혼합물을 환류에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 포화 NaHCO3 (400 mL)을 잔사에 조심스럽게 첨가하고, 생성된 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (14.20 g, 107%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.91 (3H, s), 7.24 (1H, dd), 7.88 (1H, dd), 12.56 (1H, s); m/z MH+ 229
중간체 AV: 메틸 5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00063

질소 하에 5℃에서 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 (THF 중 1 M) (101 mL, 100.9 mmol)를 15분에 걸쳐 THF (419 mL) 중 메틸 5-클로로-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (21.74 g, 77.60 mmol) 및 (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (18.83 mL, 100.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 5℃에서 30분 동안 교반시켰다. 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 (THF 중 1 M) (15.52 mL, 15.52 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 5℃에서 추가 30분 동안 교반시켰다. (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (1.88 mL, 10.09 mmol)을 첨가하고, 5℃에서 추가 15분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (400 mL)로 켄칭하고, EtOAc (400 mL)로 희석시켰다. 수성 상을 EtOAc (250 mL)로 재추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 물질을 헵탄 (450 mL)에 현탁시키고, 5분 동안 교반시켰다. 불필요한 고체를 여과 제거하고, 헵탄 (50 mL)으로 세척하였다. 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (32.50 g, 117%)을 갈색 검으로서 수득하였고, 이는 정치 시에 고화되었다. 상기 검을 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.13 (9H, s), 0.70 - 0.80 (2H, m), 3.38 - 3.51 (2H, m), 3.89 (3H, s), 5.95 (2H, s), 7.41 (1H, d), 8.40 - 8.54 (1H, m); m/z MH+ 359
중간체 AW: (5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메탄올
Figure pct00064

디이소부틸알루미늄 히드라이드 (톨루엔 중 1 M) (170 mL, 170.42 mmol)를 15분에 걸쳐 5℃에서 DCM (333 mL) 중 메틸 5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (27.80 g, 77.47 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 조심스럽게 2 M NaOH (500 mL)에 붓고, DCM (500 mL)으로 희석시키고, 1시간 동안 교반시켰다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 DCM (2 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~40% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (17.60 g, 68%)을 옅은 주황색 오일로서 수득하였고, 이는 정치 시에 고화되었다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.10 (9H, s), 0.75 - 0.83 (2H, m), 3.36 - 3.56 (2H, m), 4.72 (2H, d), 5.50 (1H, t), 5.60 (2H, s), 6.57 (1H, d), 8.24 (1H, dd); m/z MH+ 331
중간체 AX: 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘
Figure pct00065

티오닐 클로라이드 (13.2 mL, 181.4 mmol)를 실온에서 DCM (200 mL) 중 (5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메탄올 (20.0 g, 60.45 mmol)에 조심스럽게 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 포화 NaHCO3 (500 mL)을 서서히 첨가하였다. 가스 방출이 중단되면 상들을 분리하고, 수성 상을 DCM (300 mL)으로 재추출하였다. 유기 상을 합하고, 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (19.2 g, 91%)을 갈색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) -0.10 (9H, s), 0.75 - 0.9 (2H, m), 3.43 - 3.53 (2H, m), 5.07 (2H, s), 5.66 (2H, s), 6.7 - 6.9 (1H, m), 8.32 (1H, dd); m/z MH+ 349
중간체 AY: 5-클로로-2-(브로모메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘
Figure pct00066

삼브롬화인 (2.57 mL, 27.20 mmol)을 실온에서 THF (30 mL) 중 (5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메탄올 (3.00 g, 9.07 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (150 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (3 x 125 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (3.00 g, 84%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, CDCl3) -0.02 (9H, s), 0.84 - 1.01 (2H, m), 3.44 - 3.61 (2H, m), 4.74 (2H, s), 5.58 (2H, s), 6.73 - 6.79 (1H, m), 7.51 - 7.63 (1H, m); m/z MH+ 395.
중간체 AZ: 메틸 1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00067

티오닐 클로라이드 (11.25 mL, 154.2 mmol)를 실온에서 메탄올 (200 mL) 중 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실산 (CAS 번호 136818-50-3) (25.0 g, 154.2 mmol)에 조심스럽게 적가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 포화 NaHCO3 (250 mL)으로 미분화하였다. 생성된 침전물을 여과 제거하고, 물 (2 x 200 mL)로 세척하고, 그 후 에테르 (200 mL)로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (24.3 g, 90%)을 베이지색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.89 (3H, s), 7.12 - 7.22 (2H, m), 8.12 (1H, dd), 8.42 (1H, dd), 12.48 (1H, s); m/z MH+ 177
중간체 BA: 2-(메톡시카르보닐)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘 7-옥시드
Figure pct00068

메틸 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (24.30 g, 137.93 mmol)를 디에틸 에테르 (500 mL)에 현탁시켰다. 3-클로로벤조퍼옥소산 (61.80 g, 275.86 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 고체를 포화 NaHCO3 (200 mL)에서 미분화하였다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (20.23 g, 76%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.87 (3H, s), 7.16 (1H, dd), 7.30 (1H, s), 7.75 (1H, dd), 8.31 (1H, dd) (NH는 물 신호 하에 상실됨); m/z MH+ 193.
중간체 BB: 메틸 4-브로모-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00069

2-(메톡시카르보닐)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드 (20.0 g, 104.1 mmol) 및 테트라부틸암모늄 브로마이드 (50.3 g, 156.1 mmol)를 1,2-디메톡시에탄 (75 mL)과 함께 플라스크에 넣고, 0℃까지 냉각시켰다. 메탄술폰산 무수물 (36.30 g, 208.1 mmol)을 서서히 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔사를 얼음 상에서 냉각시키고, 포화 NaHCO3 (40 mL)으로 켄칭/미분화하였다. 고체를 여과시키고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (22.80 g, 86%)을 주황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 3.91 (3H, s), 7.07 (1H, d), 7.48 (1H, d), 8.29 (1H, d), 12.95 (1H, s); m/z MH+ 255
중간체 BC: 메틸 4-메틸-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00070

메틸 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (10.0 g, 39.2 mmol), 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (16.44 mL, 117.6 mmol) 및 인산칼륨 (16.64 g, 78.41 mmol)을 디옥산 (100 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. Pd 118 (0.64 g, 0.98 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 100℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 고체를 여과 제거하고, EtOAc (2 x 100 mL)로 세척하였다. 여과액을 합하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc (100 mL)로 미분화하고, 고체를 여과 제거하고, 소량의 EtOAc (20 mL)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (5.58 g, 74%)을 베이지색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.48 - 2.51 (3H, m), 3.83 (3H, s), 6.92 (1H, dd), 7.20 (1H, s), 8.22 (1H, d), 12.34 (1H, s); m/z MH+ 191
중간체 BD: 2-(메톡시카르보닐)-4-메틸-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘 7-옥시드
Figure pct00071

메틸 4-메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (5.05 g, 26.55 mmol)를 디에틸 에테르 (100 mL)에 현탁시켰다. 3-클로로벤조퍼옥소산 (11.90 g, 53.10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 고체를 포화 NaHCO3 (50 mL)에서 미분화하였다. 침전물을 여과 제거하고, 물로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (4.64 g, 85%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.57 (3H, s), 3.92 (3H, s), 7.03 (1H, dd), 7.41 (1H, s), 8.19 - 8.37 (1H, m) (NH (물 피크 하에)); m/z MH+ 207
중간체 BE: 메틸 6-클로로-4-메틸-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00072

2-(메톡시카르보닐)-4-메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드 (4.35 g, 21.10 mmol)를 THF (80 mL)에 현탁시키고, 비스(트리메틸실릴)아민 (4.42 mL, 21.10 mmol)을 첨가하였다. 2,2,2-트리클로로아세틸 클로라이드 (5.65 mL, 50.63 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (200 mL)와 포화 중탄산나트륨 용액 (200 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (5.50 g, 116%)을 백색 고체 (50% 불순도의 트리클로로아세트아미드를 함유)로서 수득하였다. 조 화합물을 다음 반응에서 추가 정제 없이 사용하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.55 (3H, d), 3.89 (3H, s), 7.08 (1H, d), 7.30 (1H, d), 12.66 (1H, s); m/z MH+ 225.
중간체 BF: 메틸 6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00073

메틸 6-클로로-4-메틸-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (5.00 g, 22.26 mmol)를 DMF (25 mL)와 함께 플라스크에 넣었다. 수소화나트륨 (광유 중 60%) (1.33 g, 33.39 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반시켰다. 그 후 (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (5.12 mL, 28.93 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (150 mL)와 물 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 물 (3 x 100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4.80 g, 60%)을 무색 오일로서 수득하였고, 이는 정치 시에 결정화되었다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.14 (9H, s), 0.75 - 0.82 (2H, m), 2.57 (3H, d), 3.41 - 3.49 (2H, m), 3.88 (3H, s), 5.92 (2H, s), 7.19 (1H, d), 7.49 (1H, s); m/z MH+는 관찰되지 않음.
중간체 BG: (6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-일)메탄올
Figure pct00074

톨루엔 중 1 M 디이소부틸알루미늄 히드라이드 (29.8 mL, 29.75 mmol)를 실온에서 DCM (100 mL) 중 메틸 6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-카르복실레이트 (4.80 g, 13.52 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반시키고, 그 후 2 M NaOH (50 mL)와 DCM (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 분리하고, 수성 상을 DCM (100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기물을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~40% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (3.30 g, 74%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.11 (9H, s), 0.83 (2H, dd), 2.49 (3H, d), 3.42 - 3.51 (2H, m), 4.65 - 4.75 (2H, m), 5.38 (1H, t), 5.62 (2H, s), 6.55 (1H, s), 7.02 (1H, d); m/z MH+ 327.
중간체 BH: 6-클로로-2-(클로로메틸)-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘
Figure pct00075

티오닐 클로라이드 (0.67 mL, 9.18 mmol)를 실온에서 DCM (20 mL) 중 (6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)메탄올 (1.00 g, 3.06 mmol)에 조심스럽게 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3으로 켄칭하고, 유기 상을 상 분리기에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.71 g, 67%)을 담황색 오일로서 수득하였고, 이는 서서히 결정화되어 크림색 고체를 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.11 (9H, s), 0.83 - 0.87 (2H, m), 2.51 (3H, s), 3.46 - 3.54 (2H, m), 5.04 (2H, s), 5.67 (2H, s), 6.82 (1H, s), 7.09 (1H, d).
중간체 BI: 7-클로로-2-(에톡시카르보닐)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘 4-옥시드
Figure pct00076

3-클로로벤조퍼옥소산 (5.76 g, 33.39 mmol)을 5분의 기간에 걸쳐 DCM (120 mL) 중 에틸 7-클로로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (5.00 g, 22.26 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (50 mL)으로 희석시키고, 포화 Na2SO3 (100 mL), 포화 NaHCO3 (100 mL), 및 포화 염수 (100 mL)로 세척하였다. 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: DCM 중 0~10% MeOH). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (5.27 g, 98%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.43 (3H, t), 4.41 - 4.51 (2H, m), 7.20 (1H, d), 7.61 (1H, s), 8.19 (1H, d), 9.94 (1H, s); m/z MH+ 241
중간체 BJ: 에틸 5-브로모-7-클로로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00077

포스포릴 트리브로마이드 (12.56 g, 43.80 mmol)를 실온에서 THF (160 mL) 중 7-클로로-2-(에톡시카르보닐)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 4-옥시드 (5.27 g, 21.90 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3으로 중화시키고, EtOAc (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석시켰다. 수성 상을 EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기물을 합하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~25% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4.20 g, 63%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 1.34 (3H, t), 2.52 (1H, s), 4.31 - 4.44 (2H, m), 7.27 (1H, d), 7.69 (1H, s); m/z MH+ 303
중간체 BK: 에틸 5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00078

수소화나트륨 (광유 중 60%) (0.719 g, 17.99 mmol)을 5분의 기간에 걸쳐 0℃에서 THF (70 mL) 중 에틸 5-브로모-7-클로로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (4.20 g, 13.84 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란 (0.60 mL, 3.38 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (20 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~12% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (5.40 g, 90%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.16 (9H, s), 0.74 (2H, t), 1.34 (3H, t), 3.37 - 3.49 (2H, m), 4.30 - 4.46 (2H, m), 6.19 (2H, s), 7.42 (1H, s), 7.77 (1H, s); m/z MH+ 433.
중간체 BL: (5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메탄올
Figure pct00079

디이소부틸알루미늄 히드라이드 (톨루엔 중 1 M) (20.75 mL, 20.75 mmol)를 0℃에서 THF (20 mL) 중 에틸 5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (3.00 g, 6.92 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 Rochelle 염 (포타슘 소듐 타르트레이트 4수화물) (15 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (2.60 g, 96%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.78 (2H, t), 3.51 (2H, t), 4.74 (2H, d), 5.76 (2H, s), 6.58 - 6.66 (1H, m), 7.47 (1H, s); m/z MH+ 391.
중간체 BM: 5-브로모-2-(브로모메틸)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘
Figure pct00080

삼브롬화인 (0.65 mL, 6.89 mmol)을 0℃에서 THF (40 mL) 중 (5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메탄올 (2.25 g, 5.74 mmol)에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (20 mL)으로 켄칭하고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~10% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (2.15 g, 82%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.72 - 0.85 (2H, m), 3.54 (2H, t), 5.01 (2H, s), 5.80 (2H, s), 6.91 (1H, s), 7.55 (1H, s); m/z MH+ 455.
중간체 BN: 에틸 5-클로로-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-카르복실레이트
Figure pct00081

수소화나트륨 (광유 중 60%) (0.21 g, 5.34 mmol)을 0℃에서 DMF (12 mL) 중 에틸 5-클로로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (1.00 g, 4.45 mmol)에 첨가하였다. 30분 후 4-톨루엔술포닐 클로라이드 (1.02 g, 5.34 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 NH4Cl로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.90 g, 53%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz,DMSO-d6) 1.33 (3H, t), 2.38 (3H, s), 4.30 - 4.46 (2H, m), 7.42 - 7.53 (3H, m), 7.58 (1H, d), 7.91 - 8.02 (2H, m), 8.47 - 8.56 (1H, m); m/z MH+ 379
중간체 BO: (5-클로로-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메탄올
Figure pct00082

에틸 5-클로로-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르복실레이트 (0.90 g, 2.38 mmol)를 THF (6 mL) 중 디이소부틸알루미늄 히드라이드 (톨루엔 중 1 M) (7.13 mL, 7.13 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 염수 (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (0.78 g, 97%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz,DMSO-d6) 2.34 (3H, s), 4.90 (2H, d), 5.75 (1H, t), 6.78 - 6.85 (1H, m), 7.34 - 7.46 (3H, m), 7.83 - 7.94 (2H, m), 8.37 - 8.46 (1H, m); m/z MH+ 337.
중간체 BP: 2-(브로모메틸)-5-클로로-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘
Figure pct00083

삼브롬화인 (0.33 mL, 3.47 mmol)을 THF (12mL) 중 (5-클로로-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메탄올 (780 mg, 2.32 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (25 mL)에 붓고, EtOAc (3 x 15 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: EtOAc 중 0~20% 석유 에테르). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.76 g, 82%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz,DMSO-d6) 2.34 (3H, s), 5.19 (2H, s), 7.21 (1H, d), 7.35 - 7.44 (2H, m), 7.47 (1H, d), 7.86 - 7.97 (2H, m), 8.37 - 8.50 (1H, m); m/z MH+ 399
중간체 BQ: 메틸 ( S )-1-알릴-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00084

메틸 (S)-1-알릴-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (11.80 g, 47.34 mmol) 및 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (16.9 g, 48.3 mmol)을 건조 DMF (60 mL)와 함께 플라스크에 넣었다. 탄산세슘 (38.60 g, 118.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 물 (300 mL)과 EtOAc (300 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 EtOAc (200 mL)로 재추출하였다. 유기 상을 합하고, 물 (3 x 200 mL), 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (22.2 g, 83%)을 황색 검으로서 수득하였고, 이는 서서히 고화/결정화되어 황색 고체를 제공하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) -0.09 (9H, s), 0.79 - 0.88 (2H, m), 3.03 (3H, s), 3.16 - 3.29 (2H, m), 3.46 - 3.60 (2H, m), 4.73 (1H, d), 4.89 (1H, dd), 4.94 - 5.10 (2H, m), 5.26 (1H, d), 5.59 (1H, d), 5.68 (1H, d), 6.76 (1H, s), 7.49 - 7.56 (1H, m), 7.58 - 7.68 (2H, m), 8.25 (1H, dd); m/z MH+ 562
중간체 BR: 메틸 ( S )-1-알릴-2-((5-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00085

메틸 (S)-1-알릴-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (15 g, 26.69 mmol), 탄산세슘 (21.74 g, 66.72 mmol), BrettPhos Pd G3 (2.42 g, 2.67 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-3,6-디메톡시-[1,1'-바이페닐]-2-일)포스판 (1.43 g, 2.67 mmol) 및 tert-부틸 카르바메이트 (6.25 g, 53.37 mmol)를 탈기 2-메틸테트라히드로푸란 (150 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 10분 동안 반응 혼합물을 통해 질소를 버블링하고, 그 후 반응 혼합물을 3시간 동안 환류시키고, 반응 혼합물을 냉각시키고, 물 (400 mL)로 희석시키고, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 포화 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (11.68 g, 68%)을 담황색 폼으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) -0.08 (9H, s), 0.82 - 0.86 (2H, m), 1.42 (9H, s), 2.99 (3H, s), 3.15 - 3.30 (2H, m), 3.52 (2H, dtd), 4.71 (1H, d), 4.88 (1H, dd), 4.94 - 5.10 (2H, m), 5.26 (1H, d), 5.55 (1H, d), 5.64 (1H, d), 6.69 (1H, s), 7.46 - 7.56 (1H, m), 7.57 - 7.66 (2H, m), 7.99 (1H, d), 9.18 (1H, s); m/z MH+ 643
중간체 BS: 메틸 ( S )-2-((5-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 카르복실레이트
Figure pct00086

1,4-디옥산 (240 mL) 및 물 (60 mL) 중 메틸 (S)-1-알릴-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (11.50 g, 17.89 mmol)의 용액에 산화오스뮴(VIII) (물 중 4%) (1.14 mL, 0.18 mmol), 과요오드산나트륨 (9.57 g, 44.73 mmol) 및 2,6-디메틸피리딘 (4.17 mL, 35.78 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (200 mL)과 물 (100 mL) 사이에 분배하였다. 수성 상을 DCM (100 mL)으로 재추출하고, 유기 상을 합하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~50% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (8.70 g, 75%)을 베이지색 폼으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) -0.07 (9H, s), 0.82 (2H, ddd), 1.42 (9H, s), 3.25 (3H, s), 3.46 - 3.54 (2H, m), 3.67 (2H, s), 4.92 (1H, d), 5.06 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.57 (1H, s), 7.48 - 7.57 (1H, m), 7.64 (1H, dd), 7.68 (1H, dd), 8.00 (1H, d), 9.16 (1H, s), 9.25 (1H, s); m/z MH+ 645
( 일반적 방법 A):
실시예 1: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; ( S )-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)-2-(4-메톡시벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00087

메틸 (S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (45 g, 121.2 mmol) 및 4-플루오로벤질아민 (22.75 g, 181.8 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (600 mL)과 함께 플라스크에 넣고, 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 빙조에 넣고, 아세트산 (13.87 mL, 242.4 mmol), 이어서 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (51.4 g, 242.4 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 2 M NaOH로 중화시키고, 물 (200 mL)로 희석시키고, DCM (2 x 200 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물을 담황색 오일로서 수득하였다. 100% 수율을 가정하여 다음 반응에서 조 물질을 사용하였다. m/z MH+ 449
단계 2; ( S )-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00088

(S)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)-2-(4-메톡시벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (54.30 g, 121.08 mmol)을 MeCN (500 mL) 및 물 (250 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (199.0 g, 363.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (500 mL)과 물 (500 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 물 (200 mL) 및 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% (EtOAc 중 10% MeOH)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (30.50 g, 77%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.37 - 2.44 (1H, m), 2.45 - 2.49 (1H, m), 3.48 (1H, ddd), 3.60 (1H, dt), 4.49 (2H, s), 7.19 - 7.25 (2H, m), 7.32 - 7.37 (2H, m), 7.46 (3H, d), 9.11 (1H, s); m/z MH+ 329
단계 3; ( S )-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00089

(S)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (27 g, 82.24 mmol) 및 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (30.20 g, 86.35 mmol)을 건조 DMF (120 mL)와 함께 플라스크에 넣었다. 탄산세슘 (67.00 g, 205.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (500 mL)과 EtOAc (500 mL) 사이에 분배하고, 수성 상을 EtOAc (250 mL)로 재추출하였다. 유기 상을 합하고, 물 (3 x 250 mL), 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 디에틸 에테르 (200 mL)로 미분화하고, 생성된 고체를 여과시키고, 에테르로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (42.20 g, 80%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.13 (9H, s), 0.55 - 0.80 (2H, m), 2.32 - 2.41 (1H, m), 2.52 (1H, d), 3.30 - 3.38 (1H, m), 3.41 - 3.51 (2H, m), 3.57 - 3.69 (1H, m), 4.22 - 4.36 (2H, m), 4.75 (1H, d), 5.11 (1H, d), 5.53 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.53 (1H, s), 7.13 - 7.23 (4H, m), 7.45 - 7.54 (2H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 8.28 (1H, dd); m/z MH+ 641
단계 4; ( S )-2-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00090

(S)-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (41.80 g, 65.19 mmol), 디페닐메탄이민 (14.18 g, 78.23 mmol) 및 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (12.53 g, 130.4 mmol)를 톨루엔 (300 mL)과 함께 플라스크에 넣고, 반응 혼합물을 10분 동안 상기 혼합물을 통해 질소를 버블링함으로써 탈기시켰다. tBuXPhos (2.77 g, 6.52 mmol) 및 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (2.99 g, 3.26 mmol)을 첨가하고, 그 후 반응 혼합물을 65℃에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (600 mL)와 물 (600 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 염수 (200 mL)로 세척하고, 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (49.50 g, 97%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.15 (9H, s), 0.57 - 0.76 (2H, m), 2.29 - 2.39 (1H, m), 2.39 - 2.48 (1H, m), 3.26 - 3.29 (1H, m), 3.34 - 3.45 (2H, m), 3.53 - 3.66 (1H, m), 4.24 (2H, s), 4.67 (1H, d), 5.04 (1H, d), 5.44 (2H, q), 6.32 (1H, s), 7.11 (2H, dd), 7.17 - 7.26 (7H, m), 7.43 - 7.54 (4H, m), 7.55 - 7.61 (2H, m), 7.68 - 7.76 (2H, m), 7.81 (1H, d); m/z MH+ 786
단계 5; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00091

(S)-2-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (49.50 g, 62.98 mmol)을 2,2,2-트리플루오로아세트산 (96 mL, 1259.63 mmol)과 함께 플라스크에 넣었다. 0.50 mL의 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산을 진공에서 제거하고, 잔사를 MeCN (75 mL)에 용해시켰다. 수산화암모늄 (물 중 28~30%) (73.60 mL, 1889.45 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 및 그 후 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 생성된 고체를 여과 제거하고, MeCN (100 mL)으로 세척하오 대략 20 g의 원하는 화합물을 수득하였다. 여과액을 대략 200 mL까지 감소시키고, 용출제로서 물 (1 부피%의 NH4OH (H2O 중 28~30%)를 함유함)과 MeCN의 점감적 극성 혼합물 (30~60% 구배)을 사용하여, 역상 크로마토그래피로 정제하였다 (Interchim C18-HP Flash 컬럼, 2 x 415 g, 실행당 용액 100 mL 로딩). 원하는 화합물을 함유하는 분획을 합하고, 이전에 수득된 고체 (대략 20 g)를 첨가하였다. 슬러리를 1시간 동안 교반시키고, 그 후 MeCN을 진공에서 제거하여 담황색 침전물을 형성하였다. 고체를 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켰다 (2시간 동안). 그 후 고체를 MeCN (150 mL)에 현탁시키고, 슬러리를 2시간 동안 부드럽게 환류시킨 후 하룻밤 냉각시켰다. 고체를 여과 제거하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (19.54 g, 63%)을 크림색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.34 - 2.40 (2H, m), 3.36 (1H, ddd), 3.60 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.39 - 4.52 (2H, m), 5.03 (1H, d), 5.48 (2H, s), 6.02 (1H, d), 7.18 - 7.27 (2H, m), 7.27 - 7.39 (3H, m), 7.46 - 7.55 (2H, m), 7.59 (1H, ddd), 10.69 (1H, d); m/z MH+ 492
일반적 방법 B:
실시예 2: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(부트-2-인-1-일)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; tert -부틸 ( S )-(2-((1'-(부트-2-인-1-일)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00092

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (9.50 g, 14.73 mmol) 및 부트-2-인-1-아민 히드로클로라이드 (2.33 g, 22.10 mmol)를 1,2-디클로로에탄 (100 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 트리에틸아민 (3.08 mL, 22.10 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (6.25 g, 29.47 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (250 mL)으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 (100 mL), 물 (100 mL) 및 염수 (100 mL)로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 100% 수율로 가정하여 다음 반응에서 추가 정제 없이 사용하였다. m/z MH+ 666.
단계 2; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(부트-2-인-1-일)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00093

tert-부틸 (S)-(2-((1'-(부트-2-인-1-일)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (9.81 g, 14.73 mmol)를 2,2,2-트리플루오로아세트산 (22.55 mL, 294.7 mmol)과 함께 플라스크에 넣고, 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산을 진공에서 제거하고, 잔사를 MeCN (20 mL)에 용해시켰다. 수산화암모늄 (물 중 28~30%) (22.95 mL, 589.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 용출제로서 물 (1 부피%의 NH4OH (H2O 중 28~30%)를 함유함)과 MeCN의 점감적 극성 혼합물 (30~60% 구배)을 사용하여, 역상 크로마토그래피로 조 생성물을 정제하였다 (Interchim C18-HP Flash 컬럼, 415 g). 원하는 화합물을 함유하는 분획을 합하고, MeCN을 진공에서 제거하고, 생성된 고체를 여과 제거하고, 건조시켜 표제 화합물 (3.74 g, 58%)을 크림색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 1.88 (3H, t), 2.36 - 2.44 (2H, m), 3.54 (1H, ddd), 3.76 (1H, dt), 4.08 (2H, qq), 4.24 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.11 (1H, d), 7.36 (1H, dd), 7.49 - 7.64 (3H, m), 10.69 (1H, d); m/z MH+ 436
일반적 방법 C:
실시예 3: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; tert -부틸 ( S )-(6-플루오로-2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00094

프로프-2-인-1-아민 (0.10 g, 1.87 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (5 mL) 중 메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (0.40 g, 0.62 mmol)에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (0.40 g, 1.87 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 합한 유기물을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~50% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.37 g, 90%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.12 (9H, s), 0.61 - 0.78 (2H, m), 1.43 (9H, s), 2.36 - 2.48 (2H, m), 3.37 - 3.47 (2H, m), 3.48 - 3.56 (1H, m), 3.78 (1H, q), 3.99 (2H, d), 4.62 (1H, d), 5.17 (1H, d), 5.44 - 5.63 (2H, m), 5.77 (1H, s), 6.55 (1H, s), 7.43 - 7.69 (3H, m), 8.03 (1H, d), 9.18 (1H, s); m/z MH+ 652
단계 2; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00095

2,2,2-트리플루오로아세트산 (3.00 mL)을 DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (S)-(6-플루오로-2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (50 mg, 0.08 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 물 (0.1% NH4HCO3) 중 0~100% MeCN). 분획을 건조상태까지 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 생성물을 분취용 HPLC로 추가로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (15 mg, 46%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.34 - 2.43 (2H, m), 3.38 (1H, m), 3.47 - 3.58 (1H, m), 3.70 - 3.81 (1H, m), 4.07 - 4.26 (3H, m), 5.00 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.09 (1H, s), 7.29 - 7.40 (1H, m), 7.45 - 7.62 (3H, m), 10.68 (1H, s); m/z MH+ 422
일반적 방법 D:
실시예 4: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(3-(1-메틸-1 H -피라졸-4-일)프로프-2-인-1-일)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00096

3-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)프로프-2-인-1-아민 (42 mg, 0.31 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (2 mL) 중 메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.16 mmol)에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반시켰다 . 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (66 mg, 0.31 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 2,2,2-트리플루오로아세트산 (2.00 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 건조상태까지 증발시켰다. 생성물을 분취용 HPLC로 추가로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (30 mg, 38%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.35 - 2.45 (1H, m), 2.51 - 2.68 (1H, m), 3.52 - 3.64 (1H, m), 3.82 (4H, d), 4.19 - 4.41 (3H, m), 5.04 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.10 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.47 - 7.56 (1H, m), 7.56 - 7.63 (2H, m), 7.65 (1H, s), 8.04 (1H, s), 10.70 (1H, d); m/z MH+ 502
일반적 방법 E:
실시예 5: ( S )-4-((2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-1'-일)메틸)-2-플루오로벤조니트릴
Figure pct00097

4-(아미노메틸)-2-플루오로벤조니트릴 히드로클로라이드 (58 mg, 0.31 mmol) 및 아세트산나트륨 (25 mg, 0.31 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (1.50 mL) 중 메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.16 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (66 mg, 0.31 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산 (1.50 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 건조상태까지 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (49 mg, 61%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.35 - 2.50 (2H, m), 3.44 (1H, td), 3.65 - 3.76 (1H, m), 4.35 (1H, d), 4.53 (1H, d), 4.59 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.07 (1H, d), 7.28 (1H, dd), 7.36 (1H, d), 7.44 (1H, dd), 7.52 (1H, td), 7.57 - 7.65 (2H, m), 7.95 (1H, dd), 10.71 (1H, d); m/z MH+ 517
실시예 6: ( S )-1'-(3-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)벤질)-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00098

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 3-(2H-1,2,3-트리아졸-2-일)벤질아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 E 에 따라 표제 화합물 (27 mg, 32%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.39 (2H, t), 3.43 (1H, dt), 3.67 (1H, dt), 4.30 (1H, d), 4.55 (1H, d), 4.66 (1H, d), 5.09 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.03 (1H, d), 7.30 - 7.38 (2H, m), 7.49 (1H, td), 7.54 - 7.65 (3H, m), 7.95 (1H, t), 8.01 (1H, dt), 8.17 (2H, s), 10.72 (1H, d); m/z MH+ 541
실시예 7: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2,5-디플루오로벤질)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00099

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 2,5-디플루오로벤질아민을 사용하여 일반적 방법 D 에 따라 표제 화합물 (33 mg, 42%, 담황색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO) 2.39 (2H, t), 3.36 - 3.46 (1H, m), 3.60 - 3.71 (1H, m), 4.25 (1H, d), 4.47 (1H, d), 4.56 (1H, d), 5.05 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.03 (1H, d), 7.15 - 7.24 (1H, m), 7.21 - 7.32 (1H, m), 7.29 - 7.39 (2H, m), 7.47 - 7.62 (3H, m), 10.71 (1H, d); m/z MH+ 510
실시예 8: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2,2-디플루오로에틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; tert -부틸 ( S )-(2-((1'-(2,2-디플루오로에틸)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00100

소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (3.94 g, 18.61 mmol)를 1시간의 기간에 걸쳐 실온에서 1,2-디클로로에탄 (50 mL) 중 메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (4.00 g, 6.20 mmol) 및 2,2-디플루오로에탄-1-아민 (1.01 g, 12.41 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4.20 g, 100%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 23℃) -0.24 (9H, s), 0.50-0.60 (2H, m), 1.30 (9H, s), 2.18-2.36 (2H, m), 3.26-3.42 (3H, m), 3.91 (3H, q), 4.48 (2H, d), 5.06 (2H, d), 5.82-5.90 (1H, m), 7.91 (2H, d), 8.13 (1H, s), 9.07 (2H, s), 11.82 (1H, s); m/z MH+ 678
단계 2; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2,2-디플루오로에틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00101

2,2,2-트리플루오로아세트산 (30 mL)을 실온에서 tert-부틸 (S)-(2-((1'-(2,2-디플루오로에틸)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (4.00 g, 5.90 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산을 진공에서 제거하고, 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 건조상태까지 증발시켰다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 물 (0.1% NH4HCO3) 중 0~50% MeCN). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (2.00 g, 76%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.32-2.49 (2H, m), 3.54-3.92 (4H, m), 4.30 (1H, d), 5.02 (1H, d), 5.52 (2H, s), 6.03-6.43 (2H, m), 7.31-7.41 (1H, m), 7.51-7.63 (3H, m), 10.71 (1H, d); m/z MH+ 448
실시예 9: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((1-(플루오로메틸)시클로프로필)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00102

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 (1-(플루오로메틸)시클로프로필)메탄아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 C 에 따라 표제 화합물 (70 mg, 17%, 황색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 23℃) 0.65 (4H, s), 2.41 (2H, t), 3.12-3.23 (1H, m), 3.47 (1H, d), 3.55 (1H, s), 3.81 (1H, t), 4.07-4.40 (3H, m), 5.02 (1H, d), 5.52 (2H, s), 6.08 (1H, s), 7.36 (1H, d), 7.46-7.67 (3H, m), 10.70 (1H, s); m/z MH+ 470
실시예 10: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; rac -6-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-1'-메틸-스피로[이소인돌린-3,3'-피롤리딘]-1,2'-디온
Figure pct00103

아세트산나트륨 (19.88 g, 242.4 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (400 mL) 중 rac-메틸 5-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (30.00 g, 80.78 mmol) 및 메틸아민 히드로클로라이드 (16.36 g, 242.4 mmol)에 한꺼번에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (51.40 g, 242.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (1 L)에 붓고, DCM (3 x 750 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~60% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (10.00 g, 35%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.40 (2H, m), 2.72 - 2.86 (3H, m), 3.28 - 3.36 (2H, m), 3.72 (3H, d), 4.20 (1H, d), 4.80 (1H, d), 6.78 - 6.91 (2H, m), 7.18 - 7.31 (2H, m), 7.43 - 7.58 (2H, m), 7.60 - 7.67 (1H, m); m/z MH+ 355
단계 2; ( S )-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00104

질산제이세륨암모늄 (30.90 g, 56.44 mmol)을 실온에서 MeCN (80 mL) 및 물 (40 mL) 중 rac-6-플루오로-2-[(4-메톡시페닐)메틸]-1'-메틸-스피로[이소인돌린-3,3'-피롤리딘]-1,2'-디온 (10.00 g, 28.22 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (250 mL)에 붓고, EtOAc (250 mL)로 추출하였다. 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: DCM 중 0~10% MeOH). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (5.60 g, 85%)을 황색 오일로서 수득하였다. 거울상 이성질체 혼합물을 키랄 HPLC로 정제하였다 (컬럼: CHIRAL ART Cellulose-SB, 4.6*100 mm, 3.0 um; 이동상 A:, 이동상 B:MEOH(0.1% DEA); 유량:2 mL/분;구배:10% B; 220 nm). 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (2.90 g, 52%)을 황색 고체로서 수득하였다.
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, (다른 거울상 이성질체를 사용하여 제조한 것과 비교하여) 중간체의 이 거울상 이성질체를 사용하여 제조한 생체활성 화합물의 생물학적 활성을 기반으로 한 이 중간체의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.51 (2H, m), 2.87 (3H, s), 3.47 - 3.60 (1H, m), 3.64 - 3.78 (1H, m), 7.38 - 7.51 (2H, m), 7.53 - 7.64 (1H, m), 9.03 (1H, s); m/z MH+ 235
단계 3; ( S )-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00105

수소화나트륨 (광유 중 60%) (0.13 g, 3.30 mmol)을 0℃에서 DMF (15 mL) 중 (S)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (0.595 g, 2.54 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 2-(브로모메틸)-5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (1.00 g, 2.54 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고, EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~40% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.18 g, 85%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.11 (9H, d), 0.65 - 0.85 (2H, m), 2.32 - 2.45 (1H, m), 2.63 (3H, s), 2.89 (1H, s), 3.36 - 3.53 (3H, m), 3.66 - 3.81 (1H, m), 4.75 (1H, d), 5.07 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.56 - 5.69 (1H, m), 6.64 (1H, s), 7.44 - 7.56 (1H, m), 7.53 - 7.68 (2H, m), 8.28 (1H, d); m/z MH+ 547
단계 4; ( S )-2-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00106

질소 하에 실온에서 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.092 g, 0.10 mmol)을 톨루엔 (15 mL) 중 (S)-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (1.10 g, 2.01 mmol), 디페닐메탄이민 (0.44 g, 2.41 mmol), 소듐 t-부톡시드 (0.39 g, 4.02 mmol) 및 2-디-t-부틸포스피노-2',4',6'-트리-i-프로필-1,1'-바이페닐 (0.085 g, 0.20 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.26 g, 91%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.12 (9H, s), 0.63 - 0.80 (2H, m), 2.43 (3H, s), 2.51 (2H, s), 3.34 (3H, s), 3.62 - 3.76 (1H, m), 4.80 (1H, d), 4.94 (1H, d), 5.36 (1H, d), 5.45 (1H, d), 6.46 (1H, s), 7.08 - 7.18 (2H, m), 7.21 - 7.32 (3H, m), 7.43 - 7.66 (6H, m), 7.66 - 7.76 (2H, m), 7.83 (1H, d); m/z MH+ 692
단계 5; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00107

2,2,2-트리플루오로아세트산 (20 mL)을 실온에서 (S)-2-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (1.20 g, 1.73 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 잔사를 NaHCO3으로 염기성화하였다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, 순차적으로 물 (2 x 50 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (30 mg, 44%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.32 - 2.47 (2H, m), 2.84 (3H, s), 3.40 - 3.54 (1H, m), 3.66 - 3.81 (1H, m), 4.30 (1H, d), 4.97 (1H, d), 5.58 (2H, s), 6.12 (1H, d), 7.39 (1H, d), 7.46 - 7.59 (2H, m), 7.64 - 7.71 (1H, m), 10.71 (1H, s); m/z MH+ 398
실시예 11: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(2-(디플루오로메톡시)에틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00108

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 2-(디플루오로메톡시)에탄-1-아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 B 에 따라 표제 화합물 (14 mg, 38%, 크림색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 2.36 - 2.45 (2H, m), 3.44 - 3.66 (3H, m), 3.75 - 3.85 (1H, m), 3.94 - 4.08 (2H, m), 4.27 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.10 (1H, d), 6.75 (1H, t), 7.36 (1H, d), 7.51 (1H, td), 7.55 - 7.62 (2H, m), 10.67 (1H, s); m/z MH+ 478
실시예 12: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((3-플루오로피리딘-2-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00109

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 (3-플루오로피리딘-2-일)메탄아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 C 에 따라 표제 화합물 (16 mg, 40%, 황색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6, 22℃) 2.38 (2H, t), 3.43-3.56 (1H, m), 3.77 (1H, q), 4.36 (1H, d), 4.6-4.81 (2H, m), 5.06 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.04-6.11 (1H, m), 7.34 (1H, d), 7.48-7.61 (3H, m), 7.70-7.83 (2H, m), 8.44-8.53 (1H, m), 10.69 (1H, d); m/z MH+ 493
실시예 13: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(이속사졸-5-일메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00110

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 이속사졸-5-일메탄아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 D 에 따라 표제 화합물 (23 mg, 40%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.39 - 2.47 (2H, m), 3.50 (1H, d), 3.67 - 3.81 (1H, m), 4.27 (1H, d), 4.59 - 4.79 (2H, m), 5.02 (1H, d), 5.50 (2H, s), 6.06 (1H, s), 6.51 (1H, d), 7.30 - 7.40 (1H, m), 7.46 - 7.64 (3H, m), 8.59 (1H, d), 10.70 (1H, s); m/z MH+ 465
실시예 14: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((5-(트리플루오로메틸)피리다진-3-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00111

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 (5-(트리플루오로메틸)피리다진-3-일)메탄아민을 사용하여 일반적 방법 D 에 따라 표제 화합물 (19 mg, 23%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.44 (2H, d), 3.56 - 3.66 (1H, m), 3.82 - 3.93 (1H, m), 4.41 (1H, d), 4.87 - 5.13 (3H, m), 5.49 (2H, s), 6.17 (1H, d), 7.35 (1H, d), 7.48 - 7.56 (1H, m), 7.56 - 7.63 (1H, m), 7.72 - 7.80 (1H, m), 8.12 (1H, t), 9.70 (1H, d), 10.68 (1H, d); m/z MH+ 544
실시예 15: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((1-메틸-1 H -인다졸-5-일)메틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00112

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 (1-메틸-1H-인다졸-5-일)메탄아민을 사용하여 일반적 방법 D 에 따라 표제 화합물 (42 mg, 51%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.35 (2H, t), 3.33 (1H, s), 3.51 - 3.65 (1H, m), 4.07 (3H, s), 4.30 (1H, d), 4.47 - 4.66 (2H, m), 5.05 (1H, d), 5.51 (2H, s), 6.02 (1H, d), 7.20 - 7.29 (1H, m), 7.35 (1H, d), 7.40 - 7.60 (2H, m), 7.56 - 7.71 (3H, m), 8.08 (1H, s), 10.71 (1H, s); m/z MH+ 528
실시예 16: (S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(벤조[d]옥사졸-2-일메틸)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00113

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 벤조[d]옥사졸-2-일메탄아민 히드로클로라이드를 사용하여 일반적 방법 C 에 따라 표제 화합물 (20 mg, 52%, 베이지색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 2.43 - 2.49 (2H, m), 3.67 (1H, ddd), 3.84 - 3.98 (1H, m), 4.40 (1H, d), 4.85 (1H, d), 4.94 (1H, d), 5.10 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.16 (1H, d), 7.31 - 7.40 (1H, m), 7.39 - 7.48 (2H, m), 7.61 (2H, ddq), 7.75 - 7.85 (3H, m), 10.72 (1H, d); m/z MH+ 515
실시예 17: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(4-플루오로페녹시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00114

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 2-(4-플루오로페녹시)에탄-1-아민을 사용하여 일반적 방법 C 에 따라 표제 화합물 (32 mg, 69%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 2.35 - 2.48 (2H, m), 3.52 - 3.67 (2H, m), 3.72 (1H, ddd), 3.78 - 3.88 (1H, m), 4.13 (2H, tt), 4.30 (1H, d), 5.01 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.05 (1H, d), 6.93 - 7.04 (2H, m), 7.11 - 7.20 (2H, m), 7.32 - 7.38 (1H, m), 7.39 - 7.49 (1H, m), 7.57 (2H, td), 10.66 (1H, d); m/z MH+ 522
실시예 18: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(4-메틸티아졸-5-일)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00115

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 2-(4-메틸티아졸-5-일)에탄-1-아민을 사용하여 일반적 방법 D 에 따라 표제 화합물 (27 mg, 69%, 백색 고체)을 제조하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) 2.31 - 2.43 (5H, m), 3.05 (2H, t), 3.49 (3H, dq), 3.66 - 3.8 (1H, m), 4.17 (1H, d), 4.95 (1H, d), 5.48 (2H, s), 6.09 (1H, d), 7.36 (1H, d), 7.38 - 7.52 (2H, m), 7.57 (1H, dd), 8.86 (1H, s), 10.64 (1H, s); m/z MH+ 509
실시예 19: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-((R*)-1-(1-메틸시클로프로필)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00116

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 및 rac-1-(1-메틸시클로프로필)에탄-1-아민 히드로클로라이드를 사용하여, 일반적 방법 D 에 따라 상기 2가지 부분입체 이성질체의 혼합물을 제조하였다. 부분입체 이성질체들을 다음에 의해 분리하였다: 키랄 컬럼: CHIRALPAK IF, 2*25 cm, 5 μm; 이동상 A: Hex: DCM=3: 1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동상 B: IPA--HPLC; 유량: 20 mL/분; 구배: 42분 내에 50% B에서 50% B까지; 파장: 220/254 nm; RT1(분): 26.51; RT2(분): 34.77. 두 번째 용출 이성질체 2를 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (28 mg, 13%, 95% ee)을 백색 고체로서 수득하였다.
(실시예 19는 메틸시클로프로필 위치에서 미지의 입체화학 배열을 가짐을 유념하며, 이때 사용된 중간체가 추정 S 입체화학 배열을 갖는 경우 4차 중심에서 고정된 추정 S 입체화학 배열을 가짐)
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.21-0.33 (2H, m), 0.40 (1H, d), 0.55-0.62 (1H, m), 0.99-1.06 (6H, m), 2.31-2.46 (2H, m), 3.53 (1H, t), 3.66-3.77 (1H, m), 3.80-3.90 (1H, m), 4.19-4.28 (1H, m), 4.99 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.08 (1H, s), 7.31-7.39 (1H, m), 7.49-7.58 (1H, m), 7.54-7.61 (2H, m), 10.71 (1H, s); m/z MH+ 466
실시예 20: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(3-시클로프로필프로프-2-인-1-일)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; tert -부틸 ( S )-(2-((1'-(3-시클로프로필프로프-2-인-1-일)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00117

메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (100 mg, 0.16 mmol) 및 3-시클로프로필프로프-2-인-1-아민 히드로클로라이드 (30 mg, 0.23 mmol)를 1,2-디클로로에탄 (2 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 트리에틸아민 (32.4 μl, 0.23 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반시켰다. 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (66 mg, 0.31 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (25 mL)으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 (25 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 합하고, 용매를 진공에서 제거하여 표제 화합물 (63 mg, 59%)을 베이지색 폼으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 27℃) -0.13 (9H, s), 0.64 - 0.67 (2H, m), 0.68 - 0.77 (2H, m), 0.77 - 0.83 (2H, m), 1.35 (1H, ddt), 1.42 (9H, s), 2.39 (2H, t), 3.37 - 3.52 (3H, m), 3.69 - 3.80 (1H, m), 3.86 - 4.00 (2H, m), 4.52 (1H, d), 5.19 (1H, d), 5.49 - 5.59 (2H, m), 6.52 (1H, s), 7.50 - 7.62 (3H, m), 8.02 (1H, d), 9.15 (1H, s); m/z MH+ 692
단계 2; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(3-시클로프로필프로프-2-인-1-일)-5-플루오로스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00118

tert-부틸 (S)-(2-((1'-(3-시클로프로필프로프-2-인-1-일)-5-플루오로-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (40 mg, 0.06 mmol)를 포름산 (250 μL, 0.06 mmol)과 함께 플라스크에 넣고, 용액을 실온에 72시간 동안 두었다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (10 mg, 35%)을 무색 건성 필름으로서 수득하였다 (m/z MH+ 492). 중간체를 DMF (0.50 mL)에 용해시켰다. 에탄-1,2-디아민 (12 mg, 0.20 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4 mg, 45%)을 무색 건성 필름으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CD3CN, 27℃) 0.63 - 0.69 (2H, m), 0.78 - 0.84 (2H, m), 1.31 (1H, dddd), 2.39 (1H, ddd), 2.53 - 2.61 (1H, m), 3.64 (1H, td), 3.78 (1H, dt), 3.97 (1H, dd), 4.13 (1H, dd), 4.45 (1H, d), 4.86 (2H, d), 6.23 (1H, d), 7.34 - 7.41 (2H, m), 7.45 (1H, dd), 7.49 (1H, dd), 8.10 (1H, s), 9.44 (1H, s); m/z MH+ 462
실시예 21: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; 메틸 2-클로로-6-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트
Figure pct00119

일산화탄소 하에 실온에서 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센디클로로팔라듐 (II) DCM 부가물 (1.55 g, 1.90 mmol)을 MeOH (80 mL) 중 메틸 2-(2-브로모-3-클로로페닐)아세테이트 (CAS 번호 1021089-12-2) (5.00 g, 18.97 mmol) 및 TEA (7.93 mL, 56.92 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 130℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~20% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (2.36 g, 51%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.61 (3H, d), 3.73 (2H, s), 3.85 (3H, d), 7.34 - 7.43 (1H, m), 7.44 - 7.54 (2H, m); m/z MH+는 관찰되지 않음.
단계 2; rac-메틸 2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-6-클로로벤조에이트
Figure pct00120

2,2'-아조비스(2-메틸프로피오니트릴) (0.63 g, 3.82 mmol)을 실온에서 CCl4 (50 mL) 중 메틸 5-클로로-2-(2-메톡시-2-옥소에틸)벤조에이트 (2.32 g, 9.54 mmol) 및 NBS (3.40 g, 19.09 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~20% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.75 g, 57%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.66 (3H, d), 3.90 (3H, s), 5.90 (1H, s), 7.59 (3H, d); m/z MH+ 321
단계 3; rac -메틸 7-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00121

4-메톡시벤질아민 (0.77 g, 5.73 mmol)을 MeCN (28 mL) 중 rac-메틸 2-(1-브로모-2-메톡시-2-옥소에틸)-6-클로로벤조에이트 (1.75 g, 5.45 mmol) 및 중탄산나트륨 (1.83 g, 21.82 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~40% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.29 g, 68%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.63 - 3.76 (6H, m), 4.29 (1H, d), 4.99 (1H, d), 5.18 (1H, s), 6.85 - 6.96 (2H, m), 7.17 - 7.26 (2H, m), 7.49 - 7.69 (3H, m); m/z MH+ 346
단계 4; rac -메틸 1-알릴-4-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00122

질소 하에 5°C에서 1,1,3,3-테트라메틸구아니딘 (0.67 mL, 5.38 mmol)를 THF (16 mL) 중 rac-메틸 7-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (1.24 g, 3.59 mmol), 알릴 아세테이트 (0.58 mL, 5.38 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.08 g, 0.09 mmol) 및 N,N'-((1R,2R)-시클로헥산-1,2-디일)비스(2-(디페닐포스파닐)벤즈아미드) (0.12 g, 0.18 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 5℃에서 10분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (300 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 300 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.31 g, 94%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 3.05 - 3.14 (1H, m), 3.14 - 3.22 (1H, m), 3.24 (3H, s), 3.73 (3H, s), 4.49 (1H, d), 4.71 (1H, d), 4.76 - 4.89 (2H, m), 4.86 - 4.97 (1H, m), 6.84 - 6.93 (2H, m), 7.30 - 7.38 (2H, m), 7.52 - 7.59 (2H, m), 7.59 - 7.67 (1H, m); m/z MH+ 386
단계 5; rac -메틸 4-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00123

칼륨 오스메이트(VI) 2수화물 (0.02 g, 0.07 mmol)을 디옥산 (15 mL) 및 물 (5 mL) 중 rac-메틸 1-알릴-4-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (1.28 g, 3.32 mmol), 2,6-루티딘 (0.71 g, 6.63 mmol) 및 과요오드산나트륨 (2.13 g, 9.95 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~40% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.01 g, 78%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 3.37 (3H, s), 3.49 (1H, s), 3.53 (1H, s), 3.70 (3H, s), 4.54 (1H, d), 4.68 (1H, d), 6.78 - 6.89 (2H, m), 7.17 - 7.27 (2H, m), 7.53 - 7.68 (3H, m), 9.05 (1H, s); m/z MH+ 388
단계 6; rac -4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)-2-(4-메톡시벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00124

4-플루오로벤질아민 (0.650 g, 5.19 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (16 mL) 중 rac-메틸 4-클로로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (1.01 g, 2.60 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (1.10 g, 5.19 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~70% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.00 g, 83%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.24 - 2.42 (2H, m), 3.35 - 3.40 (1H, m), 3.49 - 3.66 (1H, m), 3.70 (3H, s), 4.11 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.82 (1H, d), 6.80 - 6.90 (2H, m), 7.05 - 7.35 (6H, m), 7.35 - 7.42 (1H, m), 7.51 - 7.60 (1H, m), 7.55 - 7.66 (1H, m); m/z MH+ 465
단계 7; rac -4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00125

2,2,2-트리플루오로아세트산 (13 mL)을 실온에서 rac-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)-2-(4-메톡시벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (0.96 g, 2.06 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3으로 중화시키고, 물 (20 mL) 및 EtOAc (3 x 50 mL)로 희석시켰다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.61 g, 86%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.29 - 2.50 (2H, m), 3.39 - 3.52 (1H, m), 3.53 - 3.65 (1H, m), 4.46 (2H, s), 7.14 - 7.26 (2H, m), 7.27 - 7.39 (3H, m), 7.46 - 7.53 (1H, m), 7.57 (1H, t), 9.09 (1H, s); m/z MH+ 345
단계 8; rac -4-클로로-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00126

수소화나트륨 (광유 중 60%) (0.10 g, 2.57 mmol)을 0℃에서 THF (12 mL) 중 rac-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (0.59 g, 1.71 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 5-클로로-2-(브로모메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (0.88 g, 2.23 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (2 mL)로 켄칭하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~50% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.71 g, 63%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.15 (9H, s), 0.55 - 0.79 (2H, m), 2.19 - 2.42 (1H, m), 2.50 (1H, s), 3.31 - 3.39 (1H, m), 3.40 - 3.52 (2H, m), 3.53 - 3.68 (1H, m), 4.20 - 4.38 (2H, m), 4.70 (1H, d), 5.08 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.61 (1H, d), 6.54 (1H, s), 7.09 - 7.25 (4H, m), 7.34 - 7.42 (1H, m), 7.53 - 7.62 (1H, m), 7.57 - 7.68 (1H, m), 8.29 (1H, d); m/z MH+ 658
단계 9; rac-tert -부틸 2-((4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00127

질소 하에 실온에서 rac-4-클로로-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (400 mg, 0.61 mmol)을 디옥산 (4.5 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (111 mg, 0.12 mmol), tert-부틸 카르바메이트 (64 mg, 0.55 mmol), 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐포스피노)잔텐 (70 mg, 0.12 mmol) 및 탄산세슘 (396 mg, 1.22 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: DCM 중 0~40% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.18 g, 40%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.15 (9H, s), 0.67 (2H, s), 1.40 (9H, s), 2.22 - 2.39 (2H, m), 3.58 (2H, d), 4.14 - 4.40 (3H, m), 4.67 (1H, d), 5.07 (1H, s), 5.36 - 5.61 (2H, m), 6.43 (1H, s), 7.14 - 7.30 (4H, m), 7.40 (1H, d), 7.45 - 7.69 (3H, m), 8.01 (1H, d), 9.20 (1H, s); m/z MH+ 738
단계 10: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00128

rac-tert-부틸 2-((4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (172 mg, 0.23 mmol)를 질소 하에 실온에서 1시간 동안 2,2,2-트리플루오로아세트산 (2.5 mL)에서 교반시켰다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 rac-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-4-클로로-1'-(4-플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온을 수득하였다. 거울상 이성질체들을 다음에 의해 분리하였다: 키랄 컬럼: CHIRALPAK IF, 2*25 cm, 5 um; 이동상 A:Hex:DCM=3:1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동상 B:EtOH; 유량:15 mL/분; 구배:30분 내에 50 B에서 50 B까지; 254/220 nm; RT1:7.28; RT2:23.02; 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (31 mg, 27%)을 황색 고체로서 수득하였다.
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 이 화합물의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.38 (2H, t), 3.39 (1H, d), 3.53 - 3.67 (1H, m), 4.28 (1H, d), 4.45 (2H, s), 5.01 (1H, d), 5.55 (2H, s), 6.02 (1H, s), 7.17 - 7.45 (6H, m), 7.53 - 7.71 (2H, m), 10.72 (1H, d); m/z MH+ 508.
실시예 22: ( S )-2'-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온
단계 1; rac -3-(((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)아미노)-1-(4-플루오로벤질)피롤리딘-2-온
Figure pct00129

DCM (5 mL) 중 3-아미노-1-(4-플루오로벤질)피롤리딘-2-온 (167 mg, 0.80 mmol)의 용액을 5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-카르브알데히드 (264 mg, 0.80 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 혼합물을 2시간 동안 교반시켰다. 소듐 보로히드라이드 (46 mg, 1.22 mmol), 이어서 MeOH (5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반시키고, 추가의 소듐 보로히드라이드 (46 mg, 1.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가 15분 동안 교반시키고, 포화 NaHCO3 (5 mL)으로 켄칭하고, DCM (5 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지를 사용하여 분리하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc), 표제 화합물 (318 mg, 76%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) -0.05 (9H, s), 0.84 - 0.95 (2H, m), 1.69 (1H, dq), 2.20 (2H, dddd), 3.16 (2H, ddd), 3.49 (3H, ddd), 4.10 (1H, d), 4.23 (1H, d), 4.42 (2H, s), 5.58 (2H, d), 6.58 (1H, s), 6.97 - 7.05 (2H, m), 7.19 (2H, ddd), 7.53 (1H, dd); m/z MH+ 521.
단계 2; rac - N -((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)- N -(1-(4-플루오로벤질)-2-옥소피롤리딘-3-일)니코틴아미드
Figure pct00130

니코티노일 클로라이드 히드로클로라이드 (72 mg, 0.40 mmol)를 DCM (3 mL) 중 rac-3-(((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)아미노)-1-(4-플루오로벤질)피롤리딘-2-온 (97 mg, 0.19 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (200 μl, 1.12 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (114 mg, 97%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 90℃) -0.10 (9H, s), 0.71 (2H, t), 2.22 (1H, s), 2.29 - 2.38 (1H, m), 3.19 (2H, t), 3.39 (2H, t), 4.29 (1H, d), 4.44 (1H, d), 4.52 (1H, t), 4.70 (1H, d), 4.99 (1H, d), 5.45 - 5.57 (2H, m), 6.92 (1H, s), 7.04 - 7.14 (2H, m), 7.29 (2H, dd), 7.43 (1H, dd), 7.90 (1H, d), 8.17 (1H, d), 8.64 (1H, dd), 8.69 - 8.71 (1H, m); m/z MH+ 626.
단계 3; rac -2'-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-2,3'(2' H )-디온.
Figure pct00131

THF 중 1 M 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (401 μl, 0.40 mmol)을 -78℃에서 THF (5 mL) 중 rac-N-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-N-(1-(4-플루오로벤질)-2-옥소피롤리딘-3-일)니코틴아미드 (114 mg, 0.18 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반시키고, 서서히 -20℃까지 가온하고 (대략 60분), 포름산 (40 μl, 1.04 mmol)으로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, DCM (5 mL)에 재용해시켰다. 산화망간(IV) (237 mg, 2.73 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 Celite® 패드를 통해 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (23 mg, 20%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) -0.00 (9H, s), 0.82 (1H, ddd), 0.91 (1H, ddd), 2.30 (1H, ddd), 2.57 (1H, ddd), 3.43 (1H, td), 3.52 (1H, dt), 3.61 (2H, dddd), 4.03 (1H, d), 4.48 (1H, d), 5.08 (1H, d), 5.15 (1H, d), 5.52 (1H, d), 5.58 (1H, d), 6.53 - 6.59 (1H, m), 7.07 (1H, dd), 7.1 - 7.23 (4H, m), 7.66 (1H, dd), 8.82 (1H, d), 9.23 (1H, d); m/z MH+ 624.
단계 4; rac -2'-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-2,3'(2' H )-디온
Figure pct00132

트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (10 mg, 0.01 mmol)을 톨루엔 (3 mL) 중 rac-2'-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온 (48 mg, 0.08 mmol), 디페닐메탄이민 (42 mg, 0.23 mmol), tBuXPhos (10 mg, 0.02 mmol) 및 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (30 mg, 0.31 mmol)의 탈기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 튜브에 넣어 밀봉하고, 히팅 블록에서 70℃에서 1시간 동안 가열하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (24 mg, 40%)을 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) -0.10 (9H, s), 0.66 - 0.84 (2H, m), 2.19 (1H, ddd), 2.44 (1H, ddd), 3.30 (1H, td), 3.33 - 3.43 (1H, m), 3.43 - 3.55 (2H, m), 3.79 (1H, d), 4.39 (1H, d), 5.00 (2H, s), 5.33 (1H, d), 5.41 (1H, d), 6.39 (1H, s), 6.96 (1H, dd), 7.04 - 7.12 (2H, m), 7.15 (5H, td), 7.20 - 7.25 (2H, m), 7.28 - 7.33 (1H, m), 7.36 - 7.45 (2H, m), 7.46 - 7.53 (1H, m), 7.83 (2H, d), 8.73 (1H, d), 9.15 (1H, d); m/z MH+ 769.
단계 5; ( S )-2'-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-2,3'(2' H )-디온
Figure pct00133

2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.5 mL) 및 물 (0.05 mL) 중 rac-2'-((5-((디페닐메틸렌)아미노)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온 (33 mg, 0.04 mmol)의 용액을 70℃에서 20분 동안 교반시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 MeCN (2 mL)에 재용해시키고, 30% 수성 NH3 (0.5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 70℃에서 30분 동안 교반시키고, 냉각시키고, 분취용 HPLC로 정제하여 라세미 생성물 (20 mg, 100%)을 수득하였다. 두 거울상 이성질체를 SFC 조건: 컬럼: Phenomenex Lux iC5, 21.2 x 250 mm, 5 마이크론, 이동상: 50% MeOH + 0.1% NH3 / 50% scCO2, 유량: 60 mL/분; BPR: 120 bar, 컬럼 온도: 40℃, UV max 220 nm (체류 시간: 이성질체 1 - 11.9분 및 이성질체 2 - 14.4분)를 사용하여 분리하여 이성질체 1 (10 mg, >99 순도, > 99% ee) 및 이성질체 2 (10 mg, >99 순도, > 99% ee)를 수득하였다.
이성질체 1 (실시예 22) - (S)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 실시예 22의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 2.29 (1H, ddd), 2.65 (1H, dt), 3.44 - 3.60 (2H, m), 4.33 (1H, d), 4.37 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.71 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.24 (1H, d), 7.01 (1H, dd), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.21 - 7.29 (3H, m), 8.74 (1H, d), 9.12 (1H, d), 9.15 (1H, s); m/z MH+ 475.
이성질체 2 - (R)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,1'-피롤로[3,4-c]피리딘]-2,3'(2'H)-디온
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 2.29 (1H, ddd), 2.65 (1H, dt), 3.44 - 3.60 (2H, m), 4.33 (1H, d), 4.37 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.71 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.24 (1H, d), 7.01 (1H, dd), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.21 - 7.29 (3H, m), 8.74 (1H, d), 9.12 (1H, d), 9.15 (1H, s); m/z MH+ 475.
실시예 23: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; rac -5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00134

질소 하에 실온에서 Pd118 (63 mg, 0.09 mmol)을 디옥산 (5 mL) 중 rac-7-브로모-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (400mg, 0.92 mmol), 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (232 mg, 1.85 mmol) 및 제3인산칼륨 (392 mg, 1.85 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 4시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (30 mg, 88%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.20 (3H, s), 2.71 (3H, s), 3.33 (2H, s), 3.46 - 3.60 (2H, m), 3.72 (3H, s), 4.42 (1H, d), 4.59 (1H, d), 6.82 - 6.90 (2H, m), 7.18 - 7.27 (2H, m), 7.28 - 7.39 (2H, m); m/z MH+ 369.
단계 2; rac -5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00135

암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (446 mg, 0.81 mmol)를 실온에서 물 (1.50 mL) 및 MeCN (3 mL) 중 rac-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (300 mg, 0.81 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (120 mg, 59%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.22 (3H, s), 2.49 (1H, d), 2.51 (1H , d), 2.86 (3H, s), 3.53-3.65 (2H, m), 7.21 - 7.33 (2H, m), 9.16 (1H, s); m/z MH+ 249
단계 4; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00136

질소 하에 실온에서 rac-5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (120 mg, 0.48 mmol)을 DMF (3 mL) 중 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (169 mg, 0.48 mmol) 및 탄산세슘 (315 mg, 0.97 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~4% EtOAc (60~90℃)). 분획을 건조상태까지 증발시켜 rac-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (100 mg, 37%)을 불순한 황색 고체로서 수득하였다.
EPhos Pd G4 (13 mg, 0.01 mmol)를 질소 하에 1,4-디옥산 (2 mL) 중 rac-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',7-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (80 mg, 0.14 mmol), tert-부틸 카르바메이트 (17 mg, 0.14 mmol), 탄산세슘 (93 mg, 0.29 mmol) 및 EPhos (8 mg, 0.01 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 Celite®를 통해 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 2,2,2-트리플루오로아세트산 (2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 라세미 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 합하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 거울상 이성질체들을 다음에 의해 분리하였다: 키랄 컬럼: CHIRALPAK ID, 2*25 cm, 5 um; 이동상 A:MTBE(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동상 B:EtOH--HPLC; 유량:18 mL/분; 구배:10분 내에 30 B에서 30 B까지; 220/254 nm. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4 mg, 7%)을 백색 고체로서 수득하였다.
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 이 화합물의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.21 (4H, s), 2.59 - 2.71 (1H, m), 2.74 (3H, s), 3.48 - 3.65 (2H, m), 4.58 (1H, d), 4.78 (1H, d), 6.28 (1H, d), 6.80 (2H, 브로드), 7.30 - 7.41 (2H, m), 7.76 (1H, d), 11.34 (1H, s); m/z MH+ 412
실시예 24: ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; rac -5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00137

Rockphos Pd G3 (0.19 g, 0.23 mmol)을 질소 하에 MeOH (10 mL) 중 rac-7-브로모-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (1.00 g, 2.31 mmol) 및 탄산세슘 (1.50 g, 4.62 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 물 (0.1% FA) 중 0~60% MeOH). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 rac-(R)-5-플루오로-7-메톡시-2-(4-메톡시벤질)-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (0.22 g, 25%)을 불순한 백색 고체로서 수득하였다. 질산제이세륨암모늄 (0.86 g, 1.56 mmol)을 실온에서 물 (1 mL) 및 MeCN (2mL) 중 중간체 (0.20 g, 0.52 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.13 g, 95%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.23 - 2.35 (1H, m), 2.52 - 2.59 (1H, m), 2.83 (3H, s), 3.44 - 3.61 (2H, m), 3.85 (3H, s), 6.96 - 7.03 (1H, m), 7.10 - 7.18 (1H, m), 9.05 (1H, s); m/z MH+ 265
단계 2; rac -2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00138

수소화나트륨 (광유 중 60%) (36 mg, 0.91 mmol)을 질소 하에 실온에서 THF (3 mL) 중 rac-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (200 mg, 0.76 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반시켰다. 그 후 2-(브로모메틸)-5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (298 mg, 0.76 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc (25 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~60% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (200 mg, 46%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz,DMSO-d6) -0.11 (9H, s), 0.67 - 0.77 (2H, m), 2.34 - 2.46 (2H, m), 2.70 (3H, s), 3.27 - 3.47 (1H, m), 3.43 - 3.50 (1H, m), 3.47 - 3.60 (2H, m), 3.84 (3H, s), 4.71 - 4.84 (1H, m), 4.95 - 5.11 (1H, m), 5.45 - 5.56 (1H, m), 5.58 (1H, t), 6.65 (1H, d), 7.12 - 7.16 (1H, m), 7.45 - 7.67 (1H, m), 8.25 - 8.32 (1H, m); m/z MH+ 577
단계 3; rac - tert -부틸 (6-플루오로-2-((5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00139

EPhos Pd (28 mg, 0.03 mmol)를 질소 하에 1,4-디옥산 (3 mL) 중 rac-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (200 mg, 0.30 mmol), tert-부틸 카르바메이트 (36 mg, 0.30 mmol), 탄산세슘 (297 mg, 0.91 mmol) 및 EPhos (16 mg, 0.03 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~60% EtOAc (60~90℃)). 분획을 건조상태까지 증발시켜 조 표제 화합물 (150 mg, 75%)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z MH+ 658.
단계 4; ( S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00140

2,2,2-트리플루오로아세트산 (2 mL)을 rac-tert-부틸 (6-플루오로-2-((5-플루오로-7-메톡시-1'-메틸-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (150 mg, 0.23 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 합하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 거울상 이성질체들을 다음에 의해 분리하였다: 키랄 컬럼: CHIRALPAK ID, 2*25 cm, 5 μm; 이동상 A: Hex: DCM=3: 1(0.5% 2 M NH3-MeOH)--HPLC, 이동상 B: EtOH--HPLC; 유량: 15 mL/분; 구배: 47분 내에 50% B에서 50% B까지; 파장: 220/254 nm. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (23 mg, 24%)을 백색 고체로서 수득하였다.
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 이 화합물의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.19 - 2.31 (1H, m), 2.38 - 2.49 (1H, m), 2.78 (3H, s), 3.37 - 3.47 (1H, m), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.86 (3H, s), 4.28 (1H, d), 4.89 (1H, d), 5.49 (2H, s), 6.11 (1H, d), 7.08 - 7.15 (1H, m), 7.15 - 7.23 (1H, m), 7.36 (1H, d), 10.65 (1H, d); m/z MH+ 428
실시예 25: ( S )-2'-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2' H )-디온
단계 1; rac-1-(4-플루오로벤질)-3-((4-메톡시벤질)아미노)피롤리딘-2-온
Figure pct00141

4-메톡시벤즈알데히드 (251 μl, 2.06 mmol)를 DCM (5 mL) 중 3-아미노-1-(4-플루오로벤질)피롤리딘-2-온 (430 mg, 2.06 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 소듐 보로히드라이드 (138 mg, 3.65 mmol), 이어서 MeOH (5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 45분 동안 교반시키고, 포화 NaHCO3 (15 mL)으로 켄칭하고, DCM (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지를 사용하여 분리하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc, 그 후 용출 구배: EtOAc 중 0~20% MeOH), 표제 화합물 (0.64 g, 94%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.78 (1H, dq), 2.22 (1H, dddd), 3.07 - 3.23 (2H, m), 3.45 (1H, t), 3.80 (1H, d), 3.80 (3H, s), 3.84 (1H, d), 4.34 - 4.50 (2H, m), 6.83 - 6.88 (2H, m), 6.96 - 7.04 (2H, m), 7.19 (2H, ddd), 7.24 - 7.29 (2H, m); m/z MH+ 329.
단계 2; rac - N -(1-(4-플루오로벤질)-2-옥소피롤리딘-3-일)- N -(4-메톡시벤질)이소니코틴아미드
Figure pct00142

이소니코티노일 클로라이드 히드로클로라이드 (136 mg, 0.76 mmol)를 DCM (3 mL) 중 1-(4-플루오로벤질)-3-((4-메톡시벤질)아미노)피롤리딘-2-온 (125 mg, 0.38 mmol) 및 DIPEA (332 μl, 1.90 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 교반시키고, 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (159 mg, 96%)을 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6, 90℃) 2.02 - 2.12 (1H, m), 2.11 - 2.22 (2H, m), 3.11 - 3.22 (2H, m), 3.76 (3H, s), 4.29 (1H, d), 4.32 - 4.41 (1H, m), 4.45 (1H, d), 4.60 (1H, s), 6.89 (2H, d), 7.11 (2H, t), 7.24 (2H, d), 7.26 - 7.34 (2H, m), 7.38 (2H, d), 8.65 (2H, d); m/z MH+ 434.
단계 3; rac -1-(4-플루오로벤질)-2'-(4-메톡시벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-1',2(2' H )-디온
Figure pct00143

포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (THF 중 1 M) (807 μl, 0.81 mmol)을 -78℃에서 THF (3 mL) 중 rac-N-(1-(4-플루오로벤질)-2-옥소피롤리딘-3-일)-N-(4-메톡시벤질)이소니코틴아미드 (140 mg, 0.32 mmol)의 교반 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반시키고, 4시간에 걸쳐 -20℃까지 가온하였다. 반응 혼합물을 -20℃에서 2일 동안 유지하였다. 반응 혼합물을 포름산 (50 μl, 1.30 mmol)으로 켄칭하고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 DCM (3 mL)에 용해시켰다. 산화망간(IV) (440 mg, 5.06 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반시켰다. 무기 고체를 여과 제거하고, 여과액을 진공에서 농축시켰다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (26 mg, 19%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 2.24 (1H, ddd), 2.34 (1H, ddd), 3.24 - 3.34 (1H, m), 3.49 (1H, dt), 3.78 (3H, s), 4.06 (1H, d), 4.41 (1H, d), 4.61 (1H, d), 5.25 (1H, d), 6.75 - 6.85 (2H, m), 7.06 - 7.17 (4H, m), 7.25 - 7.3 (2H, m), 7.81 (1H, dd), 8.52 (1H, d), 8.81 (1H, d); m/z MH+ 432.
단계 4; rac -1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-1',2(2' H )-디온
Figure pct00144

암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (182 mg, 0.33 mmol)를 MeCN (1 mL) 및 물 (0.5 mL) 중 rac-1-(4-플루오로벤질)-2'-(4-메톡시벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온 (26 mg, 0.06 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반시키고, 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (14 mg, 75%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, MeOD-d 4, 27℃) 2.56 (1H, ddd), 2.65 (1H, ddd), 3.60 (1H, ddd), 3.74 (1H, dt), 4.55 (1H, d), 4.61 (1H, d), 7.09 - 7.16 (2H, m), 7.33 - 7.40 (2H, m), 7.79 (1H, dd), 8.67 (1H, d), 8.79 (1H, d); m/z MH+ 312.
단계 5; rac -2'-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-1',2(2' H )-디온
Figure pct00145

rac-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온 (14 mg, 0.04 mmol), 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (27 mg, 0.08 mmol), 탄산세슘 (51 mg, 0.16 mmol) 및 DMA (1 mL)의 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반시키고, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (23 mg, 80%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) -0.07 (9H, s), 0.75 (1H, ddd), 0.84 (1H, ddd), 2.28 (1H, ddd), 2.55 (1H, ddd), 3.37 (1H, td), 3.45 - 3.60 (3H, m), 4.00 (1H, d), 4.42 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.10 (1H, d), 5.44 (1H, d), 5.50 (1H, d), 6.51 (1H, s), 7.03 - 7.14 (4H, m), 7.59 (1H, dd), 7.81 (1H, dd), 8.43 - 8.52 (1H, m), 8.83 (1H, d); m/z MH+ 624.
단계 6; ( S )-2'-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4- c ]피리딘]-1',2(2' H )-디온
Figure pct00146

트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (5 mg, 5.41 μmol)을 톨루엔 (2 mL) 중 rac-2'-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온 (22 mg, 0.04 mmol), 디페닐메탄이민 (20 mg, 0.11 mmol), tBuXPhos (5 mg, 10.81 μmol) 및 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (14 mg, 0.15 mmol)의 탈기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 튜브에 넣어 밀봉하고, 히팅 블록에서 80℃에서 1시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후 반응 혼합물을 1 드롭의 포름산으로 켄칭하고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.5 mL) 및 물 (0.05 mL)에 재용해시켰다. 반응 혼합물을 40℃에서 30분 동안 교반시키고, 진공에서 농축시켰다. MeCN (1 mL), 이어서 30% 수성 NH3 (0.5 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 밀봉하고 70℃에서 30분 동안 교반시켰다. 조 혼합물을 분취용 HPLC로 정제하여 rac-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온 (13 mg, 78%)을 검으로서 수득하였다. 거울상 이성질체들을 SFC 조건: 컬럼: YMC Amylose C, 20 x 250 mm, 5 마이크론, 이동상: 45% MeOH + 0.1% NH3 / 55% scCO2: 60 mL/분; BPR: 120 bar, 컬럼 온도: 40℃, UV max 210 nm (체류 시간: 이성질체 1 - 3.3분 및 이성질체 2 - 11.8분)를 사용하여 분리하여 이성질체 1 (6 mg, >99 순도, > 99% ee) 및 이성질체 2 (5 mg, >99 순도, > 99% ee)를 수득하였다.
이성질체 1 - (R)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 2.33 (1H, ddd), 2.71 (1H, dt), 3.48 - 3.66 (2H, m), 4.34 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.40 (1H, d), 4.76 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.27 (1H, d), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.26 (3H, s), 7.78 (1H, dd), 8.49 (1H, d), 8.82 (1H, d), 9.11 (1H, s); m/z MH+ 475.
이성질체 2 (실시예 25) - (S)-2'-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-1-(4-플루오로벤질)스피로[피롤리딘-3,3'-피롤로[3,4-c]피리딘]-1',2(2'H)-디온
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 이 화합물의 추정된 입체화학적 할당).
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 27℃) 2.33 (1H, ddd), 2.71 (1H, dt), 3.48 - 3.66 (2H, m), 4.34 (1H, d), 4.40 (2H, s), 4.40 (1H, d), 4.76 (1H, d), 5.03 (1H, d), 6.27 (1H, d), 7.06 - 7.14 (2H, m), 7.26 (3H, s), 7.78 (1H, dd), 8.49 (1H, d), 8.82 (1H, d), 9.11 (1H, s); m/z MH+ 475
실시예 26: ( S )-5-아미노-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-7-카르보니트릴
단계 1: 메틸 ( S )-1-알릴-2-((5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00147

수소화나트륨 (광유 중 60%) (0.29 g, 7.26 mmol)을 0℃에서 DMF (20 mL) 중 메틸 (S)-1-알릴-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (1.73 g, 6.93 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 5-브로모-2-(브로모메틸)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (3.00 g, 6.60 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc (2 x 100 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~50% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (3.85 g, 94%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.09 (9H, s), 0.77 - 0.88 (2H, m), 3.08 (3H, s), 3.12 - 3.32 (2H, m), 3.52 - 3.65 (2H, m), 4.77 (1H, d), 4.83 - 5.12 (3H, m), 5.25 (1H, d), 5.67 (1H, d), 5.92 (1H, d), 6.85 (1H, s), 7.41 - 7.70 (4H, m); m/z MH+ 622
단계 2: 메틸 ( S )-1-알릴-2-((5-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00148

질소 하에 실온에서 메틸 (S)-1-알릴-2-((5-브로모-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (3.80 g, 6.10 mmol)를 디옥산 (20 mL) 중 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (1.12 g, 1.22 mmol), tert-부틸 카르바메이트 (0.71 g, 6.10 mmol), 9,9-디메틸-4,5-비스(디페닐포스피노)잔텐 (0.71 g, 1.22 mmol) 및 탄산세슘 (3.97 g, 12.20 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~30% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (3.00 g, 75%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.06 (9H, d), 0.84 - 0.89 (2H, m), 1.48 (9H, s), 3.01 - 3.10 (3H, m), 3.13 - 3.33 (2H, m), 3.54 - 3.71 (2H, m), 4.67 - 4.81 (1H, m), 4.84 - 5.15 (3H, m), 5.28 (1H, d), 5.63 (1H, d), 5.90 (1H, d), 6.69 (1H, s), 7.47 - 7.59 (1H, m), 7.59 - 7.71 (2H, m), 7.76 (1H, s), 9.84 (1H, s); m/z MH+ 659
단계 3: 메틸 ( S )-2-((5-(( tert -부톡시카르보닐)아미노)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00149

포타슘 디옥시도디옥소오스뮴 2수화물 (0.08 g, 0.20 mmol)을 실온에서 디옥산 (75 mL) 및 물 (25 mL) 중 메틸 (S)-1-알릴-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (2.70 g, 4.10 mmol), 과요오드산나트륨 (3.50 g, 16.38 mmol) 및 2,6-디메틸피리딘 (0.88 g, 8.19 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (150 mL)에 붓고, EtOAc (2 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 합하고, 포화 염수로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~60% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.80 g, 66%)을 황색 폼으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3) -0.03 (9H, s), 0.72 - 0.92 (2H, m), 1.54 (9H, s), 3.27 - 3.41 (2H, m), 3.54 - 3.61 (5H, m), 4.96 (1H, d), 5.22 - 5.38 (1H, m), 5.71 (1H, d), 5.89 (1H, d), 6.38 (1H, s), 7.29 - 7.37 (2H, m), 7.48 - 7.55 (1H, m), 7.57 - 7.64 (1H, m), 7.95 (1H, s), 9.20 (1H, d); m/z MH+ 661
단계 4: tert -부틸 ( S )-(7-클로로-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00150

아세트산나트륨 (112 mg, 1.36 mmol)을 실온에서 1,2-디클로로에탄 (10 mL) 중 메틸 (S)-2-((5-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-7-클로로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (450 mg, 0.68 mmol) 및 (1-메틸시클로프로필)메탄아민 히드로클로라이드 (99 mg, 0.82 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (288 mg, 1.36 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 제거하고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.42 g, 88%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) -0.10 (9H, s), 0.24 - 0.46 (4H, m), 0.60 - 0.82 (2H, m), 0.90 (3H, s), 1.47 (9H, s), 2.35 - 2.49 (2H, m), 2.76 (1H, d), 3.19 (1H, d), 3.42 - 3.63 (3H, m), 3.83 (1H, q), 4.62 (1H, d), 5.18 (1H, d), 5.61 (1H, d), 5.74 - 5.88 (1H, m), 6.48 (1H, s), 7.42 - 7.83 (4H, m), 9.77 (1H, s); m/z MH+ 698
단계 5: ( S )-5-아미노-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-7-카르보니트릴
Figure pct00151

트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (108 mg, 0.12 mmol)을 질소 하에 실온에서 디옥산 (0.5 mL) 중 tert-부틸 (S)-(7-클로로-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (410 mg, 0.59 mmol), 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센 (130 mg, 0.23 mmol), 시안화아연 (69 mg, 0.59 mmol) 및 아연 (8 mg, 0.12 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, Celite® 패드를 통해 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~100% EtOAc (60~90℃)). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 tert-부틸 (S)-(7-시아노-2-((5-플루오로-1'-((1-메틸시클로프로필)메틸)-2',3-디옥소스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트를 갈색 검으로서 수득하였다. 2,2,2-트리플루오로아세트산 (10 mL, 129.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하고, 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (85 mg, 32%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 0.25 - 0.55 (4H, m), 0.97 (3H, s), 2.37 - 2.50 (2H, m), 2.93 (1H, d), 3.36 (1H, d), 3.48 - 3.58 (1H, m), 3.79 - 3.90 (1H, m), 4.30 (1H, d), 5.03 (1H, d), 5.78 (2H, s), 6.13 (1H, s), 6.59 (1H, s), 7.39 - 7.79 (3H, m), 11.60 (1H, s); m/z MH+ 459
실시예 27: ( S )-2-((5-아미노-6-클로로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1: ( S )-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00152

2-(트리플루오로메톡시)에탄-1-아민 (2.92 g, 22.62 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (80 mL) 중 메틸 (S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (8.00 g, 21.54 mmol)에 첨가하였다. 1시간 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (10.96 g, 51.70 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: EtOAc 중 0~60% 석유 에테르). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 rac-(R)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (9.50 g, 97%)을 수득하였다. 상기 물질을 실온에서 MeCN (70 mL) 및 물 (35 mL) 중 암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (23.02 g, 42.00 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물 (70 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 석유 에테르 중 0~60% EtOAc (60~90℃), 및 용출 구배: DCM 중 0~25% MeOH). 라세미 조 생성물을 분취용 키랄 HPLC로 정제하였다. 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (4.50 g, 65%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.36 - 2.50 (2H, m), 3.50 - 3.61 (1H, m), 3.58 - 3.68 (1H, m), 3.68 - 3.84 (2H, m), 4.21 - 4.34 (2H, m), 7.41 - 7.55 (3H, m), 9.10 (1H, s); m/z MH+ 333
단계 2: (( S )-2-((5-클로로-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00153

수소화나트륨 (광유 중 60%) (66 mg, 1.66 mmol)을 0℃에서 THF (15 mL) 중 (S)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (460 mg, 1.39 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 2-(브로모메틸)-5-클로로-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (720 mg, 1.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl로 켄칭하고, 포화 NaHCO3 (25 mL)으로 염기성화하고, EtOAc (3 x 25 mL)로 추출하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: DCM 중 0~40% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.45 g, 50%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.38 (3H, s), 2.52 - 2.63 (2H, m), 3.49 - 3.61 (2H, m), 3.73 - 3.84 (1H, m), 3.84 - 3.95 (1H, m), 4.20 - 4.34 (2H, m), 4.68 (1H, d), 5.24 (1H, d), 6.73 (1H, s), 7.40 (1H, d), 7.43 - 7.50 (2H, m), 7.51 - 7.67 (3H, m), 7.86 - 7.93 (2H, m), 8.38 - 8.44 (1H, m); m/z MH+ 651
단계 3: tert -부틸 ( S )-(2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-5-일)카르바메이트
Figure pct00154

질소 하에 실온에서 XPhos Pd G2 (53 mg, 0.07 mmol)를 1,4-디옥산 (0.5 mL) 중 (S)-2-((5-클로로-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (443 mg, 0.68 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-바이페닐]-2-일)포스판 (32 mg, 0.07 mmol), 탄산세슘 (443 mg, 1.36 mmol) 및 tert-부틸 카르바메이트 (239 mg, 2.04 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: DCM 중 0~30% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.26 g, 51%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.46 (9H, s), 1.99 (1H, s), 2.36 (3H, s), 3.51 - 3.58 (2H, m), 3.74 - 3.90 (2H, m), 4.04 (1H, q), 4.24 - 4.30 (2H, m), 4.63 (1H, d), 5.23 (1H, d), 6.51 (1H, s), 7.43 (2H, d), 7.53 - 7.63 (3H, m), 7.78 (1H, d), 7.82 - 7.86 (2H, m), 8.30 (1H, d), 9.74 (1H, s); m/z MH+ 732
단계 4: ( S )-2-((5-아미노-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00155

tert-부틸 (S)-(2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-5-일)카르바메이트 (246 mg, 0.34 mmol)를 DCM (5 mL) 및 2,2,2-트리플루오로아세트산 (5 mL)에 용해시켰다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. 원하는 생성물을 7 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 분획을 건조상태까지 증발시켰다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 물 (0.1% NH4HCO3) 중 0~100% MeOH). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.13 g, 62%)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z MH+ 632.
단계 5: ( S )-2-((5-아미노-6-클로로-1-토실-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00156

N-클로로숙신이미드 (19 mg, 0.14 mmol)를 실온에서 DMF (5 mL) 중 (S)-2-((5-아미노-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (93 mg, 0.14 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반시켰다. 용매를 진공에서 제거하였다. 잔사를 EtOAc (50 mL)로 희석시키고, 순차적으로 물 (2 x 50 mL) 및 포화 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: EtOAc 중 0~30% DCM). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (60 mg, 64%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.23 (2H, s), 2.37 (3H, s), 3.50 - 3.57 (2H, m), 3.75 - 3.91 (2H, m), 4.25 (2H, dd), 4.53 (1H, d), 5.17 (1H, d), 6.24 (2H, s), 6.34 (1H, s), 7.44 (2H, d), 7.57 - 7.60 (2H, m), 7.80 (2H, d), 8.07 (1H, d) (1H (DMSO 신호 하에)); m/z MH+ 666
단계 6; ( S )-2-((5-아미노-6-클로로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00157

테트라부틸암모늄 플루오라이드 3수화물 (78 mg, 0.25 mmol)을 실온에서 MeCN (1mL) 중 (S)-2-((5-아미노-6-클로로-1-토실-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2-(트리플루오로메톡시)에틸)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (55 mg, 0.08 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 물 (0.1% NH4HCO3) 중 0~100% MeCN). 분획을 건조상태까지 증발시키고, 불순한 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (5 mg, 12%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (300 MHz, DMSO-d6) 2.40 (2H, d), 3.47 - 3.74 (4H, m), 3.76 - 3.88 (1H, m), 4.20 - 4.35 (3H, m), 5.01 (1H, d), 5.73 (1H, s), 6.10 (1H, s), 7.46 - 7.64 (4H, m), 10.84 (1H, s); m/z MH+ 512
실시예 28: ( S )-2-((6-아미노-4-메틸-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; ( S )-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00158

메틸 (S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소에틸)이소인돌린-1-카르복실레이트 (1.50 g, 4.04 mmol) 및 2,4,5-트리플루오로벤질아민 (0.78 g, 4.85 mmol)을 1,2-디클로로에탄 (30 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 아세트산 (0.46 mL, 8.08 mmol), 이어서 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (1.71 g, 8.08 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2시간 동안 교반시키고, 냉각시키고, DCM (100 mL)으로 희석시키고, 포화 NaHCO3 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하여 조 (S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온을 백색 폼으로서 수득하였다 (1.96 g, 4.04 mmol). 조 (S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (1.96 g, 4.04 mmol)을 MeCN (30 mL) 및 물 (15 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (6.64 g, 12.12 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)과 물 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 상을 상 분리 여과지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (1.06 g, 72%)을 황백색 결정질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.41 (1H, ddd), 2.52 - 2.56 (1H, m), 3.53 (1H, td), 3.66 (1H, dt), 4.52 (2H, s), 7.45 (3H, qt), 7.50 - 7.57 (1H, m), 7.61 (1H, ddd), 9.11 (1H, s); m/z MH+ 365.
단계 2; ( S )-2-((6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00159

(S)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (200 mg, 0.55 mmol)을 건조 DMF (2 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 탄산세슘 (537 mg, 1.65 mmol), 이어서 6-클로로-2-(클로로메틸)-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (209 mg, 0.60 mmol)을 첨가하고, 건조 DMF (2 mL)에서 용해시키고, 반응 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc (50 mL)로 추출하였다. 유기 상을 물 (2 x 50 mL), 염수 (50 mL)로 세척하고, 상 분리기에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (320 mg, 87%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.12 (9H, s), 0.71 (2H, dddd), 2.43 (5H, s), 3.35 (1H, ddd), 3.43 (2H, dtd), 3.62 - 3.73 (1H, m), 4.36 (2H, s), 4.57 (1H, d), 5.16 (1H, d), 5.50 (1H, d), 5.62 (1H, d), 6.45 (1H, s), 7.02 (1H, d), 7.37 - 7.45 (1H, m), 7.49 - 7.63 (4H, m); m/z MH+ 673
단계 3; tert -부틸 ( S )-(2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-6-일)카르바메이트
Figure pct00160

(S)-2-((6-클로로-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (350 mg, 0.52 mmol), tert-부틸 카르바메이트 (305 mg, 2.60 mmol) 및 탄산세슘 (508 mg, 1.56 mmol)을 1,4-디옥산 (2 mL)과 함께 플라스크에 넣었다. 반응물을 15분 동안 탈기시키고, XPhos Pd G2 (40.9 mg, 0.05 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc (20 mL)로 희석시키고, 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 상을 상 분리 필터에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (330 mg, 84%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) -0.13 (9H, s), 0.54 - 0.65 (1H, m), 0.71 (1H, dt), 1.27 - 1.31 (1H, m), 1.46 (9H, s), 2.37 (4H, d), 3.32 (1H, d), 3.37 - 3.43 (2H, m), 3.60 - 3.71 (1H, m), 4.29 - 4.41 (2H, m), 4.50 (1H, d), 5.17 (1H, d), 5.43 (1H, d), 5.57 (1H, d), 6.28 (1H, s), 7.36 - 7.40 (1H, m), 7.41 - 7.47 (1H, m), 7.48 - 7.67 (4H, m), 9.36 (1H, s); m/z MH+ 754
단계 4: ( S )-2-((6-아미노-4-메틸-1 H -피롤로[2,3- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00161

tert-부틸 (S)-(2-((5-플루오로-2',3-디옥소-1'-(2,4,5-트리플루오로벤질)스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2-일)메틸)-4-메틸-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-6-일)카르바메이트 (330 mg, 0.44 mmol)를 2,2,2-트리플루오로아세트산 (1997 mg, 17.51 mmol)과 함께 플라스크에 넣었다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산을 진공에서 제거하고, 잔사를 MeCN (4 mL)에 용해시켰다. 수산화암모늄 (물 중 28~30%) (2045 μl, 52.53 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃에서 4시간 동안 교반시키고, 그 후 실온에 하룻밤 두었다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (14 mg, 61%)을 크림색 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, DMSO-d6, 30℃) 2.22 (3H, d), 2.35 - 2.42 (2H, m), 3.31 - 3.38 (1H, m), 3.59 - 3.69 (1H, m), 4.14 (1H, d), 4.51 (2H, q), 4.97 - 5.09 (1H, m), 5.41 (2H, s), 5.97 (1H, d), 6.04 (1H, d), 7.45 - 7.53 (2H, m), 7.56 (2H, dt), 7.64 (1H, ddd), 10.66 (1H, d); m/z MH+ 524
실시예 29: (1 S ,5' S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
단계 1; rac -메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1-(2-메틸알릴)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 EN11657-70-01
Figure pct00162

3-브로모-2-메틸프로프-1-엔 (350 μl, 3.45 mmol)을 rac-메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (508 mg, 1.54 mmol), 탄산칼륨 (682 mg, 4.94 mmol)의 교반 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 90분 동안 및 그 후 실온에서 36시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 포화 NH4Cl (10 mL) 및 물 (10 mL)로 켄칭하고, 그 후 DCM (3 x 15 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~60% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.53 g, 89%)을 왁스질 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.17 - 1.23 (3H, m), 3.07 (3H, s), 3.09 (1H, d), 3.17 (1H, d), 3.77 (3H, s), 4.26 (1H, d), 4.45 - 4.53 (1H, m), 4.67 (1H, p), 5.13 (1H, d), 6.80 - 6.85 (2H, m), 7.22 (1H, td), 7.28 - 7.35 (3H, m), 7.54 (1H, dd); m/z MH+ 384
단계 2; rac -메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소프로필)이소인돌린-1-카르복실레이트
Figure pct00163

DCM (5 mL) 중 rac-메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1-(2-메틸알릴)-3-옥소이소인돌린-1-카르복실레이트 (515 mg, 1.34 mmol)의 용액을 물 (5 mL) 중 과요오드산나트륨 (1149 mg, 5.37 mmol)의 용액에 첨가하였다. 염화루테늄(III) 수화물 (7 mg, 0.03 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 조심스럽게 메타중아황산나트륨 용액 (10% 수성, 15 mL)으로 켄칭하고, DCM (10 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다 (용출 구배: 헵탄 중 0~60% EtOAc). 순수한 분획을 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (0.38 g, 74%)을 고체로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.52 (3H, s), 2.82 (1H, d), 3.37 (1H, d), 3.68 (3H, s), 3.76 (3H, s), 4.37 (1H, d), 5.27 (1H, d), 6.73 - 6.85 (2H, m), 7.11 (2H, d), 7.25 (1H, td), 7.52 (1H, dd), 7.57 (1H, dd); m/z MH+ 386
단계 3; rel -(1 S ,5' S )-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00164

소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (458 mg, 2.16 mmol)를 마이크로웨이브 튜브 내의 메틸 5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-3-옥소-1-(2-옥소프로필)이소인돌린-1-카르복실레이트 (380 mg, 0.99 mmol), 아세트산나트륨 (404 mg, 4.93 mmol) 및 메탄아민 히드로클로라이드 (333 mg, 4.93 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 마이크로웨이브 튜브를 밀봉하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 13시간 동안 70℃까지 가열하고, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 (5 mL)으로 켄칭하고, DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 분취용 HPLC로 정제하여 rel-(1S,5'S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (32 mg, 9%)을 백색 고체로서 수득하고, rel-(1R,5'S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (43 mg, 12%)을 백색 고체로서 수득하였다.
(주: 이들 화합물에 대한 상대적인 입체화학적 할당은 2D NMR 실험에 의해 결정되었음)
rel -(1 S ,5' S )-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00165

1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.25 (3H, d), 1.93 (1H, dd), 2.28 (1H, dd), 2.96 (3H, s), 3.79 (3H, s), 3.80 - 3.89 (1H, m), 3.98 (1H, d), 5.30 (1H, d), 6.81 - 6.87 (2H, m), 7.13 - 7.25 (4H, m), 7.56 (1H, ddd); m/z MH+ 369.
rel -(1 R ,5' S )-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00166

1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.33 (3H, d), 2.01 (1H, dd), 2.48 (1H, dd), 2.73 (3H, s), 3.45 - 3.55 (1H, m), 3.79 (3H, s), 4.37 (1H, d), 4.84 (1H, d), 6.81 - 6.86 (2H, m), 7.18 - 7.27 (4H, m), 7.56 (1H, ddd); m/z MH+ 369.
단계 4; rel -(1 S ,5' S )-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00167

암모늄 세륨(IV) 니트레이트 (208 mg, 0.38 mmol)를 MeCN (2 mL) 및 물 (1 mL) 중 rel-(1S,5'S)-5-플루오로-2-(4-메톡시벤질)-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (28 mg, 0.08 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반시키고, 그 후 DCM (3 x 10 mL)으로 추출하였다. 유기 상을 상 분리 카트리지에 통과시키고, 용매를 진공에서 제거하였다. 조 생성물을 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하여 (용출 구배: 헵탄 중 0~100% EtOAc), 표제 화합물 (16 mg, 83%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.42 (3H, d), 2.11 (1H, dd), 2.70 (1H, dd), 2.96 (3H, s), 3.93 (1H, h), 6.92 (1H, s), 7.21 - 7.25 (2H, m), 7.47 - 7.53 (1H, m); m/z MH+ 249.
JACS 1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.42 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 2.11 (dd, J = 13.5, 7.7 Hz, 1H), 2.70 (dd, J = 13.5, 6.7 Hz, 1H), 2.96 (s, 3H), 3.93 (h, J = 6.3 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 7.21 - 7.25 (m, 2H), 7.47 - 7.53 (m, 1H).
단계 5; rel -(1 S ,5' S )-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00168

rel-(1S,5'S)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (15.7 mg, 0.06 mmol), 5-클로로-2-(클로로메틸)-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘 (38 mg, 0.11 mmol), 탄산세슘 (72 mg, 0.22 mmol) 및 DMA (1 mL)의 혼합물을 85℃에서 3시간 동안 교반시키고, 그 후 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 분취용 HPLC로 정제하여 표제 화합물 (27 mg, 75%)을 검으로서 수득하였다.
1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) -0.08 (9H, s), 0.74 (1H, ddd), 0.84 (1H, ddd), 1.28 (3H, d), 1.99 - 2.06 (1H, m), 2.33 (1H, dd), 2.75 (3H, s), 3.46 - 3.58 (2H, m), 3.85 (1H, dt), 4.95 (1H, d), 5.11 (1H, d), 5.46 (1H, d), 5.52 (1H, d), 6.52 (1H, s), 7.17 (1H, dd), 7.23 (1H, td), 7.54 - 7.60 (2H, m); m/z MH+ 561.
단계 6; (1 S ,5' S )-2-((5-아미노-6-플루오로-1 H -피롤로[3,2- b ]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00169

트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (6 mg, 6.68 μmol)을 마이크로웨이브 튜브 내의 톨루엔 (3 mL) 중 rel-(1S,5'S)-2-((5-클로로-6-플루오로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온 (25 mg, 0.04 mmol), 디페닐메탄이민 (16 mg, 0.09 mmol), tBuXPhos (6 mg, 0.01 mmol) 및 소듐 2-메틸프로판-2-올레이트 (17 mg, 0.18 mmol)의 탈기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 마이크로웨이브 반응기에서 1시간 동안 80℃까지 가열하고, 그 후 히팅 블록에서 70℃에서 17시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 2,2,2-트리플루오로아세트산 (0.5 mL) 및 물 (0.05 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 MeCN (1 mL)에 재용해시키고, 물 중 28~30% 암모니아를 첨가하였다 (1 mL). 반응 혼합물을 3.5시간 동안 교반시키고, 여과시키고, 분취용 HPLC로 정제하여 라세미 생성물 (8 mg, 41%)을 수득하였다. 거울상 이성질체들을 SFC 조건: 컬럼: Phenomenex Lux iC5, 21.2 x 250 mm, 5 마이크론, 이동상: 45% MeOH + 0.1% NH3 / 55% scCO2, 유량: 60 mL/분; BPR: 120 bar, 컬럼 온도: 40℃, UV max 220 nm (체류 시간: 이성질체 1 - 6.8분 및 이성질체 2 - 8.5분)를 사용하여 분리하여 이성질체 1 (1.6 mg, >99 순도, > 99% ee) 및 이성질체 2 (2.5 mg, >99 순도, > 99% ee)를 수득하였다.
이성질체 1 - (1R,5'R)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00170

1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.45 (3H, d), 2.29 (1H, dd), 2.44 (1H, dd), 3.00 (3H, s), 3.94 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.37 (2H, s), 5.04 (1H, d), 6.28 (1H, d), 7.17 - 7.25 (3H, m), 7.53 (1H, dd), 9.34 (1H, s); m/z MH+ 411.
이성질체 2 (실시예 29) - (1S,5'S)-2-((5-아미노-6-플루오로-1H-피롤로[3,2-b]피리딘-2-일)메틸)-5-플루오로-1',5'-디메틸스피로[이소인돌린-1,3'-피롤리딘]-2',3-디온
Figure pct00171

1 H NMR (400 MHz, CDCl3, 30℃) 1.45 (3H, d), 2.29 (1H, dd), 2.44 (1H, dd), 3.00 (3H, s), 3.94 (1H, dt), 4.29 (1H, d), 4.37 (2H, s), 5.04 (1H, d), 6.28 (1H, d), 7.17 - 7.25 (3H, m), 7.53 (1H, dd), 9.34 (1H, s); m/z MH+ 411.
(S 거울상 이성질체가 R 거울상 이성질체보다 더 큰 활성을 가지며 바람직하다는 X선 구조적 증거와 함께, 다른 거울상 이성질체에 대비한 생물학적 활성을 기반으로 한 이 화합물에 있어서의 4차 중심에서의 추정 입체화학 배열; 실시예 29의 상대적인 입체화학 배열은 단계 3으로부터의 이전 중간체의 NMR 분석으로부터 이미 확인됨).

Claims (17)

  1. 하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약상 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    Figure pct00172

    (여기서,
    X 및 Y를 함유하는 고리는 피롤로서 X는 NH이고 Y는 CH이거나 X는 CH이고 Y는 NH이며;
    Z는 CH, CF, CCl, 또는 Q가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
    Q는 CH, CF, CCl, 또는 Z가 N이 아닌 경우, N으로부터 선택되며;
    m은 0, 1 또는 2이며;
    n은 0, 1, 또는 2이며;
    p는 1 또는 2이며;
    R1은 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, CN, Me, CF3, C1-C3 알킬, 시클로프로필, C1-C3 플루오로알킬, OMe 또는 C1-C3 알콕시로부터 선택되며;
    R2는 각각의 경우에 독립적으로 F, Cl, Me, MeO 및 CF3으로부터 선택되며;
    R3은 H, Me, C1-C3 알킬 또는 C1-C3 플루오로알킬이며;
    R4는 H, Me 또는 C1-C3 알킬이며;
    R5는 H, Me, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, CH2OMe, CH2OCHF2, CH2OCF3, CH2O(C1-C3 알킬), CH2O(C1-C3 플루오로알킬), C(CH2CH2)R6, CCR7, CH2R8, R9 또는 CH2R10이며;
    R6은 H, Me, CH2F, CHF2, CF3, CH2OH 또는 CH2OMe이며;
    R7은 H, Me, 시클로프로필, C1-C3 알킬, C1-C3 플루오로알킬, C3-C6 시클로알킬 또는 5원 헤테로아릴 기(Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환됨)이며;
    R8은 Me, C1-C3 알킬, F 또는 Cl로 선택적으로 치환된 5원 헤테로아릴이며;
    R9는 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기이며;
    R10은 선택적 치환 페닐, 5원 또는 6원 헤테로아릴, 또는 이환식 헤테로아릴 기임).
  2. 제1항에 있어서, Y는 N인 화합물.
  3. 제1항에 있어서, X는 N인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, p는 1인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Z는 CF이며, Q는 CH, CF 또는 CCl인 화합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, m은 1 또는 2이며, 적어도 하나의 R1 기는 F인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 H인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, n은 0인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 R9인 화합물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 CH2R8 또는 CH2R10인 화합물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R5는 CCR7인 화합물.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하는 제약 조성물.
  13. 약제로 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물.
  14. 치료를 필요로 하는 환자의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  15. 의약의 제조에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 화합물.
  16. 제13항 또는 제15항에 따른 용도 또는 제14항에 따른 방법으로서, 상기 용도, 약제 또는 방법은 암의 치료를 위한 것이며, 선택적으로, 암은 췌장암, 결장직장암, 자궁암, 담관암, 위암, 방광암, 자궁경부암, 고환 생식 세포 및 비-소세포 폐암 및 다발성 골수종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 횡문근육종 및 피부 편평 세포 암종으로부터 선택되는 용도 또는 방법.
  17. 제13항 또는 제15항에 따른 용도 또는 제14항에 따른 방법으로서, 상기 용도, 약제 또는 방법은 MTAP 유전자 결실을 갖는 암의 치료를 위한 것이며, 선택적으로, 암은 췌장암, 결장직장암, 자궁암, 담관암, 위암, 방광암, 자궁경부암, 고환 생식 세포 및 비-소세포 폐암 및 다발성 골수종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 횡문근육종 및 피부 편평 세포 암종으로부터 선택되는 용도 또는 방법.
KR1020237019818A 2021-09-13 2022-09-12 스피로시클릭 화합물 KR102624567B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163243267P 2021-09-13 2021-09-13
US63/243,267 2021-09-13
PCT/EP2022/075248 WO2023036974A1 (en) 2021-09-13 2022-09-12 Spirocyclic compounds

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20230091198A true KR20230091198A (ko) 2023-06-22
KR102624567B1 KR102624567B1 (ko) 2024-01-11

Family

ID=83688613

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237019818A KR102624567B1 (ko) 2021-09-13 2022-09-12 스피로시클릭 화합물

Country Status (13)

Country Link
US (1) US11939344B2 (ko)
JP (1) JP7406674B2 (ko)
KR (1) KR102624567B1 (ko)
CN (1) CN117916241A (ko)
AR (1) AR127050A1 (ko)
AU (1) AU2022343903A1 (ko)
CA (1) CA3230648A1 (ko)
CO (1) CO2024002844A2 (ko)
DO (1) DOP2024000041A (ko)
IL (1) IL311254A (ko)
PE (1) PE20240886A1 (ko)
TW (1) TW202330538A (ko)
WO (1) WO2023036974A1 (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024038004A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Astrazeneca Ab Mta-cooperative prmt5 inhibitors for use in the treatment of cancer

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5324483B1 (en) * 1992-10-08 1996-09-24 Warner Lambert Co Apparatus for multiple simultaneous synthesis
AU2009279936A1 (en) * 2008-08-05 2010-02-11 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic compounds
BR112018070549A2 (pt) * 2016-04-06 2019-02-12 The Regents Of The University Of Michigan degradantes de proteína mdm2
WO2020076660A1 (en) * 2018-10-08 2020-04-16 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule mdm2 protein degraders

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anthony Pesquet 등, Organic & Biomolecular Chemistry, 2019, 제17권, 페이지 2798-2808 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP7406674B2 (ja) 2023-12-27
IL311254A (en) 2024-05-01
US11939344B2 (en) 2024-03-26
AU2022343903A1 (en) 2024-05-02
AR127050A1 (es) 2023-12-13
WO2023036974A1 (en) 2023-03-16
CO2024002844A2 (es) 2024-03-18
JP2023549418A (ja) 2023-11-24
DOP2024000041A (es) 2024-04-15
CA3230648A1 (en) 2023-03-16
PE20240886A1 (es) 2024-04-24
TW202330538A (zh) 2023-08-01
US20230357279A1 (en) 2023-11-09
KR102624567B1 (ko) 2024-01-11
CN117916241A (zh) 2024-04-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7453989B2 (ja) 抗癌剤として有用な縮合三環式化合物
AU2019267008B2 (en) Tetracyclic heteroaryl compounds
KR101428346B1 (ko) 벤즈옥사제핀 ｐｉ3ｋ 억제 화합물 및 사용 방법
AU2008292390B2 (en) Polycyclic compound
CA2845159C (en) Compounds and compositions as c-kit kinase inhibitors
TW201938561A (zh) 化學化合物
DK2769980T3 (en) Pyrazolquinolinderivat as pde9 inhibitors
KR101696525B1 (ko) Btk 활성 억제제로서의 8-플루오로프탈라진-1(2h)-온 화합물
AU2014228175A1 (en) Tricyclic heterocycles as BET protein inhibitors
CA2767097A1 (en) Pyrazolopyrimidine jak inhibitor compounds and methods
AU2020410470B2 (en) Triazolopyridazine derivative, preparation method therefor, pharmaceutical composition thereof, and use thereof
KR20150132170A (ko) 야누스 키나제 억제제로서의 비-시클릭 시아노에틸피라졸로 피리돈
AU2021282596A1 (en) Inhibitors of fibroblast growth factor receptor kinases
CA3188446A1 (en) Eif4e-inhibiting 4-oxo-3,4-dihydropyrido[3,4-d]pyrimidine compounds
CA3210594A1 (en) Fgfr3 inhibitor compounds
KR102624567B1 (ko) 스피로시클릭 화합물
CN116670144A (zh) 三环类化合物及用途
WO2012064269A1 (en) COMPOUNDS AND THEIR USE FOR TREATMENT OF Αβ-RELATED DISEASES
KR20160086930A (ko) 피롤로피롤론 유도체 및 bet 억제제로서의 그의 용도
KR20190077327A (ko) 피리도 5원 방향족 고리계 화합물, 이의 제조 방법 및 용도

Legal Events

Date Code Title Description
A302 Request for accelerated examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant