CN117903950A - 一种用于烟草靶斑病的弱毒菌株by168及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168及其应用，涉及烟草靶斑菌的技术领域，包括所述弱毒菌株BY168为立枯丝核菌，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年9月25日；保藏编号为CGMCC No.40886，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类学命名为Rhizoctonia solani。
Description
技术领域
本发明涉及烟草靶斑菌的技术领域，具体而言，涉及一种用于烟草靶斑病弱毒菌株BY168株及其应用。
背景技术
立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)是一种臭名昭著的土源性植物病原体，对全球范围内的农田作物、树种和观赏植物造成严重的经济损失，如引起植物的烂种、苗期猝倒、立枯病、烟草靶斑病和水稻纹枯病以及马铃薯黑痣病等。
烟草靶斑病由立枯丝核菌引起，在烟草叶片上产生环带状坏死斑点而得名，从苗期到大田期均可发生，发生严重时病斑连片，迅速蔓延，使得烟叶质量和产量的降低，对烟草生产构成了严重威胁。最早于20世纪初在美国烟区被发现，2006年在国内首次发现并被报道。近年来，烟草靶斑病的扩散传播十分迅猛，特别是在我国多个地区烟草上爆发成灾，延蔓迅速，已经成为危害湖南及全国烟草生产的烟草主要叶部病害。
因此有必要提供一种能够有效防治烟草靶斑病的生防菌株。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于烟草靶斑病防治的弱毒菌株BY168及其应用，
包括所述弱毒菌株BY168为立枯丝核菌，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年9月25日；保藏编号为CGMCC No.40886，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类学命名为Rhizoctonia solani。
一种用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168的生防菌剂，包括含有所述的烟草靶斑病弱毒菌株BY168或其菌株发酵物或其菌悬液或其代谢产物。
为了更好的实现本发明，进一步的，所述菌悬液的浓度为106/mL。
为了更好的实现本发明，进一步的，所述生防菌剂还包括菌剂可接受的辅料。
一种生防菌剂的应用，所述生防菌剂在烟草靶斑病防治中的应用。
为了更好的实现本发明，进一步的，所述烟草靶斑病是由立枯丝核菌引起的。
一种所述的用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168在烟草靶斑病防治中的应用。
本发明的有益效果是：
本发明通过分离筛选出具有烟草靶斑病病原菌弱毒菌株BY168，该菌株易获得和培养，还能用作于病害防治的疫苗菌株，该弱毒菌株BY168为环境友好型，分离来自烟草，并在土壤中自然存在，对烟草致病力极弱，对人畜、作物和昆虫都相对安全，对环境无害。
本发明提供的弱毒菌株BY168根据室内生物测定、根植物表型测定、防御酶测定等技术手段发现，证实弱毒菌株BY168具有较好的抗病促生效果，具体是该弱毒菌株BY168能够对烟苗具有促生能力，可促进烟草生长，另外弱毒菌株BY168能激发了植物免疫相关酶活，如苯丙氨酸解氨酶和过氧化氢酶等，从而诱导烟草抗病性提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对本发明中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的烟草靶斑病弱毒菌株BY168的生物学测定图；
图2为本发明提供的烟草靶斑病弱毒菌株BY168的防效试验实验图；
图3为本发明提供的烟草靶斑病弱毒菌株BY168的促进生长实验图；
图4为本发明提供的烟草靶斑病弱毒菌株BY168的抗病能力实验图；
图5为本发明提供的烟草靶斑病弱毒菌株BY168激发抗酶活性的实验图。
具体实施方式
下面将结合本发明中的附图，对本发明中的技术方案进行描述。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。同时，在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
实验例
样品采集与分离
在云南、湖南等地采集了168份烟草靶斑病病样。选取烟叶的病健交界处用消毒的剪刀剪成0.4×0.4cm的小方块，置于75％的酒精消毒1min，再用1.0％的次氯酸钠进行消毒30s，用灭菌水洗3次，每次时间不少于1min。然后用灭菌的吸水纸沾干表面的水分，置于9cm的培养皿中，25℃培养。最终获得436个烟草靶斑病病原菌。对疑似烟草靶斑病病原菌的菌落，及时转移至直径为7cm的培养皿中培养，然后观察其菌落的形态学特征。
生物学测定
将分离得到的烟草靶斑病病原菌于PDA培养基上26℃恒温培养，病原菌菌丝初期为白色，表面蓬松、整齐，后变为黄褐色。与强毒菌株BY168-1相比，弱毒菌株BY168生长速度更慢。利用菌饼离体接种云烟87品种烟草叶片，强毒菌株BY168-1三天后叶片出现明显坏死症状，而弱毒菌株BY168则基本不表现症状，如图1中所示。
室内盆栽防效测定
将26℃恒温培养3天的烟草靶斑病病原菌BY168的菌落边缘利用直径为0.5cm的打孔器打取菌饼，接种于PDB培养基并在28℃，180rpm条件下培养。培养3天后制成菌丝碎片均匀喷洒于烟草叶面，以等量清水当对照，24小时后再将强毒菌株BY168-1菌饼接种于烟草叶片上。3天后统计结果如表1所示：与对照组相比，BY168菌悬液(106/mL)处理后病情指数显著降低，对烟草靶斑病的相对防效达到64.78％，烟草叶片实验图如图2所示)。
表1弱毒菌株BY168对烟草靶斑病的预防效果
Table 1Preventive effect of attenuated strain BY168 on tobacco targetspot
disease
注：V代表弱毒菌株BY168处理，F代表强毒菌株处理，CK代表清水处理，对照。字母a，b用于表示不同处理组之间是否具有显著性差异。
对烟草幼苗抗病促生能力测定
通过室内盆栽试验，在烟株生长期用弱毒菌株BY168菌悬液(106/mL)对烟草进行每周一次的灌根处理，总共进行三次灌根处理，以清水和强毒菌株BY168-1当对照进行相同的处理，一个月后统计烟草的生长状况，包括根长、株高、最大叶长、最大叶宽、鲜重等指标(表2)，结果表明该弱毒菌株BY168可以明显的促进烟株的生长，如图3所示。
表2不同处理对烟草的促生效果及对烟草靶斑病预防效果
注：V代表弱毒菌株BY168处理，F代表强毒菌株处理，CK代表清水处理，对照。字母a，b用于表示不同处理组之间是否具有显著性差异。
此外，我们对处理后的烟草进行靶斑病原菌接种处理，三天后观察各处理发病情况，很显然，弱毒菌株BY168处理后可烟草的抗病能力得到显著提升，如图4所示，与清水处理相比，相对防效达到45.41％。
与此同时，我们收集各处理组的叶片进行与抗病相关的部分酶活的测定，包括苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和超氧化物歧化酶(SOD)，结果表明，该弱毒菌株BY168同样可以增强这些抗病相关的酶的酶活，如图5所示)，其中以苯丙氨酸解氨酶和过氧化氢酶尤为显著。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。
Claims (7)
1.一种用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168，其特征在于，包括所述弱毒菌株BY168为立枯丝核菌，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2023年9月25日；保藏编号为CGMCC No.40886，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类学命名为Rhizoctonia solani。
2.一种用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168的生防菌剂，其特征在于，包括含有权利要求1所述的烟草靶斑病弱毒菌株BY168或其菌株发酵物或其菌悬液或其代谢产物。
3.根据权利要求2所述的用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168的生防菌剂，其特征在于，所述菌悬液的浓度为106/mL。
4.根据权利要求2所述的用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂还包括菌剂可接受的辅料。
5.一种如权利要求2所述的生防菌剂的应用，其特征在于，所述生防菌剂在烟草靶斑病防治中的应用。
6.根据权利要求5所述的生防菌剂的应用，其特征在于，所述烟草靶斑病是由立枯丝核菌引起的。
7.一种权利要求1所述的用于烟草靶斑病的弱毒菌株BY168在烟草靶斑病防治中的应用。
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