CN1178900C

CN1178900C - 抗肿瘤剂

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Publication number: CN1178900C
Application number: CNB998040908A
Authority: CN
Inventors: Ft; F·T·波伊勒
Original assignee: AstraZeneca UK Ltd
Current assignee: AstraZeneca UK Ltd
Priority date: 1998-03-20
Filing date: 1999-03-16
Publication date: 2004-12-08
Anticipated expiration: 2019-03-16
Also published as: PT1064257E; IL138590A0; IL138590A; ZA200004386B; DK1064257T3; NO20004663L; CA2319335A1; CN1293656A; GB9805868D0; NZ506011A; DE69905143T2; ATE231836T1; KR20010042056A; WO1999048860A1; JP2002507592A; AU2846799A; ES2192036T3; EP1064257B1; EP1064257A1; US6472435B1

Abstract

本发明涉及式(I)的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐，其中R¹、R²和R³中的每一个具有在说明书中的定义，包括氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基和(1-4C)烷氧基的意义；R⁴和R⁵各为(1-4C)烷基；R⁶和R⁷各为氢或(1-4C)烷基；X为N-(1-4C)烷基亚氨基、N-(3-4C)链烯基亚氨基或N-(3-4C)链炔基亚氨基；m为1或2，每个R⁸同说明书中的定义；Y¹和Y²各为卤代、(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基；前提是R¹、R²和R³中的至少一个不是氢；此外，本发明还涉及其制备方法、含其的药用组合物和它们在产生抗增殖效应方面的用途。

Description

抗肿瘤剂

本发明涉及细胞毒性抗肿瘤剂。更具体来说，本发明涉及新的携带包括细胞毒性氮芥部分的取代基的(1，4-醌基)链烷酸衍生物。本发明还涉及制备所述(1，4-醌基)链烷酸衍生物的方法、含有它们的药用组合物以及涉及它们在温血动物如人类中产生抗肿瘤效应的用途。

细胞增生性疾病如癌症和牛皮癣的许多现有疗法采用抑制DNA合成或细胞分裂的细胞毒性剂。这类化合物往往缺乏特异性并对所有细胞均有毒性，因为肿瘤细胞通常只略微不同于正常细胞。细胞毒性剂对快速分裂的肿瘤细胞的毒性效应是有利的，但是对持续细胞分裂的正常细胞如骨髓细胞和肠道上皮细胞可能产生不利的影响。

用细胞毒性剂的化学治疗或放射治疗在实体瘤的毛细血管网缺乏、细胞分裂缓慢或缺乏的肿瘤块内低氧区获得实体瘤的有效治疗特别困难。这样的低氧区在大多数主要类型的实体瘤中均存在，例如膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、头颈部肿瘤、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌。特别是通过临床样品分析表明，较大部分的大多数头颈部肿瘤、乳腺癌和宫颈癌例如所述肿瘤块的10-30％严重低氧，氧张力低于5mmHg(0.0066巴)。

已知在实体瘤中存在这样的低氧区可能为基于前体药物或双前体药物(double-prodrug)法的选择性更高的细胞毒性药物疗法提供了机会。例如，由B.D.Palmer等在 J.Med.Chem.，1992， 35，3214-3222和涉及能够还原为更有效的氨基取代苯胺氮芥的硝基取代苯胺基芥(anilino mustard)化合物的国际专利申请WO 93/11099中公开了前体药物法。关于前体药物法的问题是这些快速酶还原的硝基必需的另外的取代基趋向于使所产生的氨基取代的化合物的细胞毒性效力降低。以双前体药物法阐明该问题。例如，G.J.Atwell等在 J.Med.Chem.，1994， 37，371-380中和B.M.Sykes等在 J.Chem.Soc.Perkin Transact.II，1995，337-342中公开某些 N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-2-硝基苯乙酰胺衍生物能够还原成为相应的2-氨基苯乙酰胺衍生物，该衍生物可以环化释放出苯胺基芥4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯胺。一种替代的双前体药物法涉及醌和氢醌部分的生物体系中的相互转换。例如，由L.A.Carpino等在 J.Org.Chem.，1989， 54，3303-3310中公开，某些(1，4-醌基)链烷酸衍生物能够提供一种传递细胞毒性剂的可行方法。所制备的典型化合物包括用来释放简单的芥子双-(2-氯代乙基)胺的 N， N-双-(2-氯代乙基)-3-(2-甲氧基-3，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺和 N， N-双-(2-氯代乙基)-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺。还从 Proceedings of the American Association for Cancer Research，1997， 38，433-434(文摘第2894号)知道细胞毒性芥子药物苯丙氨酸氮芥可以与(1，4-醌基)链烷酸连接。值得注意的是某些前体药物的体外最快生物还原活化约为每小时25％即t_1/2约2.5小时，这与还原电位范围-480--520mV有关。相反，体外生物还原活化较慢(约每小时10％即t_1/2约6小时)的其它前体药物与还原电位约-730mV有关。

本发明目的之一是提供还原为氢醌时快速分解释放细胞毒性剂的双前体药物醌化合物。

按照本发明，提供下式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐：

其中R¹为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-(1-4C)烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷硫基、(1-4C)烷基亚磺酰基或(1-4C)烷基磺酰基；

R²为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-(1-4C)烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基；

R³为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基、 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-(1-4C)烷基、羟基、(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基、双-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基；

R⁴为(1-4C)烷基；

R⁵为(1-4C)烷基；

R⁶为氢或(1-4C)烷基；

R⁷为氢或(1-4C)烷基；

X为 N-(1-4C)烷基亚氨基、 N-(3-4C)链烯基亚氨基或 N-(3-4C)链炔基亚氨基；

m为1或2，每个R⁸独立为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(2-4C)链烯氧基、(2-4C)链炔氧基、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、氨基、(1-4C)烷基氨基、双-[(1-4C)烷基]氨基、氰基、(2-4C)链烷酰氨基、羧基、(1-4C)烷氧基羰基、氨基甲酰基、 N-(1-4C)烷基氨基甲酰基或 N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基；

Y¹是卤代、(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基；和

Y²是卤代、(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基；

其中R¹、R²或R³中的任何杂环基团任选被1、2或3个(1-4C)烷基取代基取代，其中当Y¹和Y²为苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基时，在Y¹或Y²中的任何一个苯基基团任选被1、2或3个选自卤代、硝基、氰基、三氟甲基、羟基、氨基、(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基和双-[(1-4C)烷基]氨基的取代基取代；

前提是R¹、R²和R³中的至少一个不是氢。

在本发明中将观察到，本发明的抗肿瘤剂可以具有一个或多个不对称碳原子，所以它可能存在非对映异构体、外消旋体和旋光性形式。应该理解的是本发明包括任何具有抗肿瘤活性的所述形式的化合物，如何分离各种非对映异构形式和如何将外消旋化合物分离为其旋光性形式是人所共知的。

还应该理解的是，本发明的化合物能够以溶剂化或非溶剂化形式存在，例如水合形式。当然本发明包括所有这类具有抗肿瘤活性的溶剂化形式。

以下给出上述普通基团的合适值。

术语“烷基”包括直链和枝链烷基，但是对单个烷基例如“丙基”仅特指直链型丙基。类似的常规适用于其它常用术语。

对于当R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷和R⁸中的每个为(1-4C)烷基时，或对于在苯基或杂环基团上的(1-4C)烷基取代基而言，其适当涵义是例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或异丁基。

对于当R¹、R²、R³和R⁸为(1-4C)烷氧基时，或对于在苯基上的(1-4C)烷氧基取代基而言，其适当涵义是例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基或异丁氧基。

对于当R⁸为(1-4C)烷基氨基时，或对于在苯基上的(1-4C)烷基氨基取代基而言，其适当涵义是例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、异丙基氨基、丁基氨基或异丁基氨基。

对于当R⁸为双-[(1-4C)烷基]氨基，或对于在苯基上的双-[(1-4C)烷基]氨基取代基而言，其适当涵义是例如二甲基氨基、二乙基氨基、N-乙基- N-甲基氨基、二丙基氨基或二异丙基氨基。

对于每个R¹、R²或R³基团的适当涵义包括例如：-

(3-4C)链烯基的涵义为：烯丙基、甲基烯丙基、2-丁烯基

和3-丁烯基；

(3-4C)链炔基的涵义为： 2-丙炔基和2-丁炔基；

羟基-(1-4C)烷基的涵义为：羟甲基、1-羟乙基、2-羟乙基和3-

羟丙基；

(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基的涵义

为：甲氧基甲基、乙氧基甲基、1-甲

氧基乙基、2-甲氧基乙基、2-乙

氧基乙基和3-甲氧基丙基；

氨基-(1-4C)烷基的涵义为：氨基甲基、1-氨基乙基、2-氨基

乙基和3-氨基丙基；

(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基的涵

义为：甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、1-

甲基氨基乙基、2-甲基氨基乙基、

2-乙基氨基乙基和3-甲基氨基丙

基；

双-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基

的涵义为：二甲基氨基甲基、二乙基氨基甲

基、1-二甲基氨基乙基、2-二甲

基氨基乙基和3-二甲基氨基丙

基；

吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基的涵义

为：吡咯烷-1-基甲基和2-(吡咯烷-1-

基)乙基；

哌啶子基-(1-4C)烷基的涵义为：哌啶子基甲基和2-哌啶子基乙基

吗啉代-(1-4C)烷基的涵义为：吗啉代甲基和2-吗啉代乙基；

哌嗪-1-基-(1-4C)烷基的涵义为：哌嗪-1-基甲基和2-(哌嗪-1-基)乙

基；

4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷

4-甲基哌嗪-1-基甲基，4-乙基哌

基的涵义为：嗪-1-基甲基，2-(4-甲基哌嗪-1-基)

乙基和2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙

基；

羧基-(1-4C)烷基的涵义为：羧甲基，1-羧乙基，2-羧乙基和3-

羧丙基；

(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基的

涵义为：甲氧基羰基甲基，乙氧基羰基甲

基，叔丁氧基羰基甲基，1-甲氧

基羰基乙基，1-乙氧基羰基乙基，

2-甲氧基羰基乙基，2-乙氧基羰

基乙基，3-甲氧基羰基丙基和3-

乙氧基羰基丙基；

氨基甲酰基-(1-4C)烷基的涵义

为：氨基甲酰基甲基，1-氨基甲酰基

乙基，2-氨基甲酰基乙基和3-氨

基甲酰基丙基；

N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)

烷基的涵义为： N-甲基氨基甲酰基甲基， N-乙基

氨基甲酰基甲基， N-丙基氨基甲

酰基甲基，1-( N-甲基氨基甲酰基)

乙基，1-( N-乙基氨基甲酰基)乙

基，2-( N-甲基氨基甲酰基)乙基，

2-( N-乙基氨基甲酰基)乙基和3-

( N-甲基氨基甲酰基)丙基；

N， N-双-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-

(1-4C)烷基的涵义为： N， N-二甲基氨基甲酰基甲基， N-

乙基- N-甲基氨基甲酰基甲基，

N， N-二乙基氨基甲酰基甲基，1-

( N， N-二甲基氨基甲酰基)乙基，1-

( N， N-二乙基氨基甲酰基)乙基，2-

( N， N-二甲基氨基甲酰基)乙基，2-

( N， N-二乙基氨基甲酰基)乙基和

3-( N， N-二甲基氨基甲酰基)丙基；

羟基-(2-4C)烷氧基的涵义为： 2-羟基乙氧基，3-羟基丙氧基和4-

羟基丁氧基；

(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基的涵

义为： 2-甲氧基乙氧基，2-乙氧基乙氧

基，3-甲氧基丙氧基和3-乙氧基

丙氧基；

氨基-(2-4C)烷氧基的涵义为： 2-氨基乙氧基和3-氨基丙氧基；

(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基的

涵义为： 2-甲基氨基乙氧基，2-乙基氨基

乙氧基，2-丙基氨基乙氧基，3-

甲基氨基丙氧基和3-乙基氨基丙

氧基；

二-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧

基的涵义为： 2-二甲基氨基乙氧基，2-( N-乙基-

N-甲基氨基)乙氧基，2-二乙基氨

基乙氧基，2-二丙基氨基乙氧基，

3-二甲基氨基丙氧基和3-二乙基

氨基丙氧基；

吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基的涵义

为： 2-(吡咯烷-1-基)乙氧基和3-(吡咯

烷-1-基)丙氧基；

哌啶子基-(2-4C)烷氧基的涵义

为： 2-哌啶子基乙氧基和3-哌啶子基

丙氧基；

吗啉代-(2-4C)烷氧基的涵义为： 2-吗啉代乙氧基和3-吗啉代丙氧

基；

哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基的涵义

为： 2-(哌嗪-1-基)乙氧基和3-(哌嗪-1-

基)丙氧基；

4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷

氧基的涵义为： 2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基和3-

(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基。

当R⁸、Y¹或Y²为卤代时或对在苯基上的卤代取代基而言，其适当涵义为例如氟代、氯代、溴代或碘代。

当X为 N-(1-4C)烷基亚氨基时，它的涵义为例如 N-甲基亚氨基(即式-N(Me)-的二价基团)， N-乙基亚氨基或 N-丙基亚氨基；当其为N-(3-4C)链烯基亚氨基时，X的涵义为例如 N-烯丙基亚氨基(即式-N(CH₂-CH＝CH₂)-的二价基团)、 N-甲基烯丙基亚氨基或 N-(2-丁烯基)亚氨基；和当其为 N-(3-4C)链炔基亚氨基时，X的涵义为例如 N-(2-丙炔基)亚氨基(即式-N(CH₂-C≡CH)-的二价基团)或 N-(2-丁炔基)亚氨基。

每个R⁸基团的适当涵义包括例如：-

(2-4C)链烯氧基的适当涵义为：乙烯氧基，烯丙氧基，甲基烯丙

氧基和2-丁烯氧基；

(2-4C)链炔氧基的适当涵义为：乙炔氧基和2-丙炔氧基；

(3-4C)链烯基的适当涵义为：烯丙基，甲基烯丙基，3-丁烯基

和3-丁烯基；

(3-4C)链炔基的适当涵义为： 2-丙炔基和2-丁炔基；

(2-4C)链烷酰基的适当涵义为：乙酰基，丙酰基和丁酰基；

(1-4C)烷氧基羰基的适当涵义

为：甲氧基羰基，乙氧基羰基和叔丁

氧基羰基；

N-(1-4C)烷基氨基甲酰基的适当

涵义为： N-甲基氨基甲酰基和 N-乙基氨基

甲酰基；

N， N-二-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基

的适当涵义为： N， N-二甲基氨基甲酰基和 N， N-二

乙基氨基甲酰基。

当Y¹或Y²为(1-4C)烷基磺酰氧基时，其适当涵义为例如甲基磺酰氧基、乙基磺酰氧基或丙基磺酰氧基；当其为例如苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基时，其适当涵义为例如苯基甲基磺酰氧基或2-苯基乙基磺酰氧基。

应该认识到，一般认为当在R¹、R²或R³中的杂环基团可任选被取代时，所述杂环基团包括在R¹、R²和R³定义中规定的基团例如吡咯烷-1-基、吗啉代、哌啶子基-(1-4C)烷基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基基团。

本发明抗肿瘤剂的合适的药学上可接受的盐为例如足够碱性的本发明抗肿瘤剂的酸加成盐，例如与如无机酸或有机酸(如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、柠檬酸或马来酸)的酸加成盐。另外，足够酸性的本发明抗肿瘤剂的适当的药学上可接受的盐为碱金属盐例如钠盐或钾盐、碱土金属盐如钙盐或镁盐、铵盐、或与提供生理上可接受的阳离子的有机碱的盐如与甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(2-羟乙基)胺的盐。

特别新的本发明抗肿瘤剂包括例如式I的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

(a)R¹、R²或R³独立为氢、(1-4C)烷基、(3-4C)链烯基、(3-4C)链炔基、羟基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基-(1-4C)烷基、氨基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷基氨基-(1-4C)烷基、二-[(1-4C)烷基]氨基-(1-4C)烷基、吡咯烷-1-基-(1-4C)烷基、哌啶子基-(1-4C)烷基、吗啉代-(1-4C)烷基、哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(1-4C)烷基、羧基-(1-4C)烷基、(1-4C)烷氧基羰基-(1-4C)烷基、氨基甲酰基-(1-4C)烷基、N-(1-4C)烷基氨基甲酰基-(1-4C)烷基或 N， N-二-[(1-4C)烷基]氨基甲酰基-(1-4C)烷基，前提是：R¹、R²或R³中至少一个不是氢；而R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、m、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(b)R¹、R²或R³独立为(1-4C)烷氧基、羟基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷氧基-(2-4C)烷氧基、氨基-(2-4C)烷氧基、(1-4C)烷基氨基-(2-4C)烷氧基、二-[(1-4C)烷基]氨基-(2-4C)烷氧基、吡咯烷-1-基-(2-4C)烷氧基、哌啶子基-(2-4C)烷氧基、吗啉代-(2-4C)烷氧基、哌嗪-1-基-(2-4C)烷氧基或4-(1-4C)烷基哌嗪-1-基-(2-C)烷氧基；而R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、m、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(c)每个R⁴和R⁵独立为甲基、乙基、丙基或异丙基和R¹、R²、R³、R⁶、R⁷、R⁸、m、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(d)R⁶为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基而R⁷为氢或甲基；R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁸、m、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(e)X为 N-(1-4C)烷基亚氨基或 N-(3-4C)链烯基亚氨基；R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、m、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(f)m为1或2，每个R⁸独立为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基、氨基、(1-4C)烷基氨基、二-[(1-4C)烷基]氨基或氰基；R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(g)m为1而R⁸为氢、卤代、羟基、(1-4C)烷氧基、(1-4C)烷基、氨基、(1-4C)烷基氨基、二-[(1-4C)烷基]氨基或氰基；R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

(h)Y¹和Y²各为卤代或Y¹和Y²各为(1-4C)烷基磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基-(1-4C)烷基磺酰氧基；R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、m和X中的每一个具有此前或在涉及特别新的本发明抗肿瘤剂的部分所定义的任何涵义；

本发明优选的化合物为式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐，

其中R¹、R²和R³独立为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙基、2-羟基乙基、3-羟基丙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、3-甲氧基丙基、3-乙氧基丙基、2-羧乙基、3-羧丙基、2-甲氧基羰基乙基、2-乙氧基羰基乙基、3-甲氧基羰基丙基、3-乙氧基羰基丙基、2-( N-甲基氨基甲酰基)乙基、3-( N-甲基氨基甲酰基)丙基、2-( N， N-二甲基氨基甲酰基)乙基、3-( N， N-二甲基氨基甲酰基)丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴和R⁵中的每一个独立为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁶为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁷为氢或甲基；

X为 N-甲基亚氨基、 N-乙基亚氨基、 N-丙基亚氨基或 N-烯丙基亚氨基；

m为1或2，每个R⁸独立为氢、氟代、氯代、溴代、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、丙基、异丙基或氰基；和

Y¹和Y²中的各自独立为氯代、溴代、碘代、甲磺酰氧基、苯磺酰氧基或苯基甲磺酰氧基；

前提是：R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

本发明进一步优选的化合物为式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐：

其中R¹为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R²为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R³为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁵为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁶为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁷为氢或甲基；

m为1或2，每个R⁸独立为氢、氟代、氯代、溴代、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、丙基或异丙基；

Y¹为氯代、溴代、碘代或甲磺酰氧基；和

Y²为氯代、溴代、碘代或甲磺酰氧基；

前提是：R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

其中R¹为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R²为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R³为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴为甲基或乙基；

R⁵为甲基或乙基；

R⁶为氢、甲基或乙基；

R⁷为氢；

m为1，R⁸位于X的间位，而且R⁸为氢、氟代、氯代、甲基、乙基、丙基或异丙基；

Y¹和Y²各为氯代、溴代或碘代；

前提是：R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

本发明更优选的化合物为式I的抗肿瘤剂及其药学上可接受的盐，其中：

R¹为氢、甲基或甲氧基；

R²为氢、甲基、烯丙基或甲氧基；

R³为甲基、乙基、丙基或烯丙基；

R⁴和R⁵各为甲基；

R⁶和R⁷各为氢；

X为 N-甲基亚氨基；

m为1而R⁸为氢；和

每个Y¹和Y²均为氯代。

特别优选的本发明化合物为式I的以下抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐：-

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基-3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)丁酰胺，

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺，或

N-烯丙基- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺。

本发明再一方面的目的是提供一组新的具有平衡还原电位(即还原电位既不是太低使得1.4-醌基还原率明显减慢，也不是太高使得在肿瘤块的低氧区发生大量还原)的(1，4-醌基)链烷酸衍生物。

按照本发明的这个方面，提供以上定义的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐，其中所述化合物的还原电位范围为例如-300--600mV、优选范围-300--500mV、更优选范围为例如-300--475mV。

用来测定本发明化合物的还原电位的方法学在下文进行详细描述。

可以用任何用于制备化学相关的化合物的已知方法制备式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐。按照本发明的又一方面提供此后定义的用于制备式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐的方法，其中，除非另作说明，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、m、X、Y¹和Y²中的每一个具有此前所定义的任何涵义。通过标准的有机化学方法可以获得必需的原料。在此后的附属实施例中描述这些原料的制备。通过类似于所述方法的方法可获得替代的必需原料，而用有机化学家的一般技术就可获得所述类似的方法。

按照本发明的这个方面，提供制备以上定义的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括：-

使式II的酸或其活性衍生物

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷中的每一个具有此前所定义的任何涵义，

与式III的化合物反应，

其中X、R⁸、m、Y¹和Y²中的每一个具有此前所定义的任何涵义。

式II的酸的合适活性衍生物为例如酰卤，例如所述酸与无机酸氯化物反应形成的酰氯如亚硫酰氯；混合的酸酐，例如所述酸与氯甲酸酯反应形成的酸酐如氯甲酸异丁酯；活性酯，例如所述酸与酚如五氟苯酚反应形成的酯，如五氟苯基三氟乙酸酯的酯，如1-羟基苯并三唑的醇或如2-(1-苯并三唑基)-1，1，3，3-四甲基铀六氟磷酸盐(V)的铀盐；酰基叠氮，例如所述酸与叠氮化物反应形成的酰基叠氮如二苯基磷酰叠氮；酰基氰，例如酸和氰化物反应形成的氰化物如二乙基磷酰基氰；或所述酸与碳二亚胺反应形成的产物如 N， N’-二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。

优选在存在以下合适的碱的情况下进行所述反应，所述碱有例如碱金属或碱土金属的碳酸盐、醇盐、氢氧化物或氢化物，例如碳酸钠、碳酸钾、氢化钠或氰化钾；或有机金属碱如烷基-锂，例如二异丙基氨化锂，或例如有机胺碱如吡啶、2，6-卢剔啶、可力丁、4-二甲基氨基吡啶、三乙胺、吗啉或二氮杂二环-[5.4.0]十一碳-7-烯。所述反应也可以优选在合适的惰性溶剂或稀释剂存在下于-78℃至-150℃温度范围、通常于室温或接近室温下进行，所述惰性溶剂或稀释剂有例如二氯甲烷、乙腈、四氢呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、 N， N-二甲基甲酰胺、 N， N-二甲基乙酰胺、 N-甲基吡咯烷-2-酮、二甲亚砜或丙酮。

任选的是，当在R¹、R²、R³或R⁸中有氨基、烷基氨基、羟基或羧基基团时，所述任何基团可以在需要时用常规方法可以去除的常规保护基团进行保护。

氨基或烷基氨基的合适保护基团有例如酰基基团，例如链烷酰基如乙酰基；烷氧基羰基如甲氧基羰基、乙氧基羰基或叔丁氧基羰基；芳基甲氧基羰基如苄氧基羰基；或芳酰基如苯甲酰基。上述保护基团的去保护条件当然随所选择的保护基团而不同。因此，例如诸如链烷酰基或烷氧基羰基或芳酰基的酰基基团可以通过例如与合适的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解去除。另一方面，诸如叔丁氧基羰基的酰基基团可以例如用合适的酸(如盐酸、硫酸或磷酸或三氟乙酸)处理去除，而诸如苄氧基羰基的芳基甲氧基羰基基团可以例如通过催化剂(如披钯碳)下的氢化作用去除或用Lewis酸如三(三氟乙酸)硼处理去除。伯氨基的合适替代保护基团为例如可以用烷基胺(例如二甲基氨基丙胺)或肼处理去除的邻苯二甲酰基基团。

羟基的合适保护基团为例如酰基如苄酰基，或芳基甲基基团如苄基。上述保护基团的去保护条件必然随所选择的保护基而不同。因此，例如诸如链烷酰基或芳酰基的酰基基团可以例如通过与合适的碱如碱金属氢氧化物(例如氢氧化锂或氢氧化钠)水解去除。另一方面，诸如苄基的芳基甲基基团可以例如通过在催化剂(如披钯碳)上氢化去除。

羧基的合适保护基为例如酯化基团，如可以用碱如氢氧化钠水解去除的甲基或乙基；或例如可以用酸(例如有机酸如三氟乙酸)处理去除的叔丁基；或例如可以通过催化剂(如披钯碳)下的氢化去除的苄基。

式II和III的原料可以市售获得或可以通过有机化学标准方法制得。例如，通过水解式IV的3，4-二氢香豆素及随后氧化这样形成的氢醌可以制备式II的原料。

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷中的每一个具有此前所定义的任何涵义。

用于由式IV的3，4-二氢香豆素制备式II的原料的水解和随后的氧化反应的合适条件包括例如本领域已知的关于这类转化的任何试剂素。例如，可以用合适的碱例如碱金属的氢氧化物如氢氧化锂或氢氧化钠进行所述水解步骤。如果所述水解步骤在空气或氧的气氛下进行，则所述氢醌的氧化作用自然发生。另外，在氧化剂例如卤化铁(如氯化铁)存在下可以用水水解3，4-二氢香豆素。一般来说，在合适的惰性溶剂或稀释剂例如水、乙腈、 N， N-二甲基甲酰胺、甲醇或乙醇存在下于例如15℃-100℃温度范围、通常为例如20℃-80℃范围内进行所述反应。

当需要式I化合物的药学上可接受的盐时，例如采用常规的方法通过使所述化合物与合适的酸或碱反应可以获得。当需要旋光性形式的式I化合物时，可以通过用旋光性原料实施前述方法或通过用常规方法折分外消旋形式的所述化合物获得。

如上所述，本发明式I的化合物具有抗肿瘤活性、尤其是借助于在肿瘤块的低氧区释放细胞毒性剂的活性。例如利用一种或多种以下给出的方法可以评价本发明化合物的细胞毒性活性和抗肿瘤活性。

(a)一种体外检测法，该方法利用从Sunter等( Biochemical Pharmacology，1992， 44，59-64)的著作改进的方法检测试验化合物引起DNA片段交联的能力。通过其使线性化³²P标记的质粒的DNA链交联的能力评价试验化合物的作用。使所述DNA变性并检测其在中性琼脂糖凝胶上的凝胶电泳的迁移率，从而检测交联。根据分子大小分离双链和单链DNA片段。所述详细方法学如下：-

用Hind III限制性核酸内切核酸酶使PBR322环形质粒DNA(Pharmacia Biotech.，St.Albans，Hertfordshire，UK)线性化，用碱性磷酸酶使末端去磷酸化后，用T4多核苷酸激酶(Biolabs，Hitchin，Hertfordshire，UK)来将[γ-³²P]ATP添加到所述DNA的5’端。

将每种试验化合物溶解于DMSO，并加入所述质粒DNA(每次测定为12.5ng)和包括25mM三乙醇胺缓冲剂和1mM EDTA的pH 7.2缓冲液的混合物中。在有氧(aerobic)条件(用空气充气溶液)或低氧条件(用氮气鼓泡过夜使溶液脱气，然后保持在加入3-10倍超量的还原剂连二亚硫酸钠的无氧室内)下于30℃-37℃温度范围处理长达3小时。加入0.6M乙酸钠、20mM EDTA和100ug/mltRNA(Sigma，Poole，Dorset，UK)的冰冷混合物终止所述反应。加入95％乙醇沉淀所述DNA，分离并贮藏于-20℃过夜。

将每一个质粒DNA样品重悬浮于30％DMSO水溶液和1mM EDTA的混合物中，并加热至90℃变性2小时。所变性的DNA样品与包括20％Ficoll 400(Sigma，Poole，Dorset，UK)、0.1MEDTA和0.25％溴酚蓝的pH 8.0缓冲液混合，并加样于电泳凝胶(0.8％琼脂糖的pH 8.2三硼酸盐EDTA缓冲液)。各个凝胶于30伏(3v/cm)极化3小时或直到所述溴酚蓝达到凝胶末端为止。干燥凝胶，用磷成像仪(phosphoimager)(Molecular Dynamics Limited，Kemsing，England)定量单链和双链DNA。标准单链和双链DNA样品也在每个凝胶上电泳，并计算试验样品中的双链DNA的百分率。用不同浓度的各个试验化合物绘制剂量反应曲线以确定产生50％双链DNA的试验剂量。

(b)一种体外检测法，该方法测定试验化合物在有氧(oxic)的条件下抑制细胞培养物中的T18小鼠乳腺癌细胞生长的能力。所述细胞单层生长于96孔板中，用化合物在90％空气和10％CO₂的气氛下处理2小时。然后所述细胞继续生长6天，用3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)终点评价增殖程度。该试验类似于 J.Immunological Methods，1983， 65，55-63中所述的方法。所述详细方法学如下：-

从指数生长期的单层培养物收获T18小鼠乳腺癌细胞(得自于Balb/c小鼠群中自然发生的乳腺肿瘤，Zeneca Pharmaceuticals，Mereside，Macclesfield，UK)。计数细胞，在RPMI 1640培养基(Gibco BRL，Life Technologies，Paisley，UK；添加15％胎牛血清、谷酰胺、丙酮酸、青霉素和链霉素)中稀释细胞，并以500个细胞/每孔50ul转移到96孔板。细胞在CO₂培养箱(即在90％空气和10％CO₂的气氛下)于37℃培养2天。再于每孔加入新鲜培养基。将每种试验化合物溶解于DMSO中，并在水中稀释到所需要的试验浓度。每孔加入25ul的各个试验溶液。然后将板放回所述培养箱2小时。结束时，去除含有试验化合物的上清培养基。每孔中留下的细胞用200ul磷酸缓冲盐溶液(PBSA)洗涤一次，加入新鲜的培养基(200ul)。再将板放回CO₂培养箱中生长6天。每孔中加入50ul MTT(5mg/ml)，并将所述板再温育4小时，在此期间活细胞将MTT转化为不溶性、贮留在细胞内的蓝色甲，转化的程度与孔中的活细胞数成正比。去除含有过量MTT的上清培养基，加入DMSO(100ul)以溶解甲，在540nm检测光密度来确定其浓度。测定不同浓度的每个试验化合物以确定引起50％抑制(IC₅₀)的浓度。

(c)一种体外检测法，该方法测定试验化合物抑制EMT6小鼠乳腺癌细胞球形聚集物(直径～400um)在充氧的培养基中生长的能力。因为通过组织的氧扩散能距离约120-150微米，所以所述球形体具有慢性低氧中心细胞群和供氧充分的外细胞层。作为供氧充分的悬浮培养物，用试验化合物处理所述多细胞球体2小时。随后在不含试验化合物的情况下洗涤球体，将选定的球体转移到静止培养物中，以便检测对体积增长的处理效果。详细的方法学如下：-

从指数生长期的单层培养物收获EMT6小鼠乳腺癌细胞(得自于P.R.Twentyman，MRC Oncology and Radiotherpertics Unit，Cambridge，UK)，约1×10⁶细胞用来接种到装有Eagles基本必需培养基(200ml；添加10％胎牛血清、谷酰胺、非必需氨基酸、青霉素和链霉素)的旋转培养容器中。旋转培养容器用90％空气和10％CO₂的混合气体充气，密封，缓慢搅拌下(最初24小时为50rpm，此后为40rpm)于37℃培养4-5天。所述细胞聚集成团块，并生长为紧密的球体，平均直径约400微米。将等份(5ml)含有球体的培养基转移到锥形瓶(已硅化，25ml)，用90％空气和10％CO₂的混合气体充气，用橡皮塞密封。将锥形瓶放于37℃的CO₂培养箱中的轨道式摇动器中，并轻轻振摇至少15分钟。将每种试验化合物溶解于DMSO中并用水稀释到所需要的试验浓度。用注射器将200ul的每种试验溶液加入各个密封瓶。所得的混合物培养2小时，将每一个转移到离心管并让其沉降。倾析含有所述试验化合物的上清培养基，每管加入新鲜的培养基(5ml)。然后将每管内容物转移到塑料培养皿(直径35mm)，在配有校准的目镜测微尺的解剖显微镜下观察。从每一处理组选择6个形状一致约400微米直径的球体转移到24孔板的单独的孔中，此前24孔板的每孔中已经加入了1％琼脂(0.3ml；形成防止球体附着的基底层)和1ml培养基。用图像分析仪测量每个球体的面积，将24孔板转移到37℃的CO₂培养箱中。然后每2-3天重复测量所述球体，持续长达21天，每3天向每孔中加入新鲜的培养基(250ul)。根据面积测量结果计算(假定为球形)球体体积并绘制体积增长曲线，据此评价处理效果。注意在2-3周内引起停滞(无球体体积的增加或球体体积缩小)的试验剂量。

(d)在一组Balb/c小鼠中的体内试验，该试验检测试验化合物延迟T18小鼠乳腺肿瘤生长的能力。详细方法学如下：-

通过动物到动物的传代常规维持T18小鼠乳腺肿瘤组织。为了制备一批试验用肿瘤，从几只供体Balb/c小鼠取出肿瘤组织并放于盐水中。去除外部组织，将看起来健康的肿瘤区域切割成约1mm³的肿瘤块，用套管针将其皮下植入麻醉的雌性Balb/c小鼠的左侧肋腹。2-3周后大多数植入物生长至约8mm直径。随机将动物分为6-7组，排除任何具有极大或极小肿瘤的动物。将各个试验化合物溶解于DMSO中，用Cremophor EL然后用盐水稀释，获得DMSO、Cremophor EL和盐水的1∶1∶3混合物。以单次大剂量(0.1ml/10g体重/动物)经腹膜内途径给予每个试验化合物。对照动物只接受溶媒。所有小鼠每天称重，用游标双脚规每2-3天测量各个肿瘤的大小(长和宽)。假定为长椭圆形(体积＝π/6×长×宽²)，将所述测量结果用来估算每个肿瘤的体积。绘制生长曲线，用生长延迟终点评价处理效果。

尽管式I化合物的药理性质随预期的结构变化而变化，但是一般来说在以上一种或多种试验方法中在以下浓度或剂量可以证实式I化合物具有的活性：-

试验(a)：- 在低氧条件下，例如IC₅₀为1-20μM；

在有氧条件下，一般IC₅₀高3倍；

试验(b)：- 在低氧条件下，例如IC₅₀为1-30μM；

试验(c)：- 对于生长停滞而言；例如ED₅₀为1-16μM；和

试验(d)：- 例如腹膜内30-100mg/kg剂量引起例如4-15天的

生长延迟

因此，作为实例，以下的实施例1的化合物在试验(c)中停滞的ED₅₀剂量约4uM，在试验(d)中单次大剂量20mg/kg腹腔内给予的生长延迟约9天。

如前所述，本发明的一个方面的目的是提供当它们在低氧张力的区域如实体瘤的低氧区时快速释放细胞毒性药物的双前体药物化合物。例如用以下试验方法可以评价该性质。

将每个试验化合物溶解于乙腈中(约2mg/ml)，并在pH 7.4磷酸缓冲液中稀释(如果遇到溶解困难，加入额外的最小量乙腈)，得到约5×10^-5M的试验浓度。在氦气下对每个试验溶液进行充分脱气，温热至37℃的恒温控制的反应温度。将连二亚硫酸钠(NaS₂O₄)溶液(100μl 100mg/ml脱气水溶液)加入到一部分(1.4ml)各个试验溶液。以规律的间隔取出等份的反应溶液，用高效液相层析(HPLC)分析释放的细胞毒性药物部分和形成的合适的3，4-二氢香豆素。典型的HPLC条件包括使用S5ODS1反相柱(250×4.6mm，装填5微米十八烷基硅烷包被的Spherisorb颗粒，得自Jones Chromatography，Hengoed，Glamorgan，UK)，采用乙腈、水和三氟乙酸的75∶25∶0.1混合物作洗脱剂，流速为1.5ml/分钟。

一般来说，发现在还原条件下式I的本发明化合物以t_1/2低于2小时、优选低于1小时、更优选低于20分钟而特别优选低于10分钟快速释放细胞毒性药物部分。一般对于其中X为烷基亚氨基的许多式I的本发明化合物而言，发现还原条件引起细胞毒性药物迅速释放以至于检测不到还原步骤的氢醌产物。在这样的情况下，细胞毒性药物释放的t_1/2显著低于10分钟。

如前所述，本发明另一方面的目的是提供具有平衡还原电位(即还原电位既不是太高使得大部分的还原发生于低氧张力区外也不是太低使得大部分的还原甚至不发生在低氧张力区内)双-前体药物化合物。例如用以下试验方法可以评价本发明化合物的还原电位：-

将每个试验化合物(2mg)溶解于DMF中，用配有铂工作电极、第二电极和标准饱和甘汞参比电极(SCE)以及叔丁基溴化铵(在DMF中的0.1摩尔/L)作电解质(参见例如G.A.Mabbott， J Chem.Ed，1983，60，697和J.G.Dick等，Metrohm Monographs，Eletrode ReactionKinetics determined by Cyclic Sweep Triangular Wave Voltammetry，1983)的Luggin Cell进行循环伏安法。在一般的试验中，例如，以每秒100mV从起始电位到切换电位再回到初始电位对相对于参比电极控制的工作电极电位进行扫描。以所产生的电流作为电位的函数进行绘图，阴极峰电位(Epc)用来测定DMF溶液的还原电位。通过基于测定一组已知水溶液的pH 7 Eaq值的标准醌化合物的DMF溶液的Epc值的校准曲线，确定每个试验化合物水溶液的Eaq值(P.Wardman，J.Phys.Chem.参考资料，1989 18，1637)。校准曲线使得确定了以下等式：-

Eaq(V)＝1.23 Epc(V)+0.62

一般来说，所计算的式I的本发明化合物Eaq值为例如-300--600mV、优选为例如-300--500mV、更优选为例如-300--475mV。

按照本发明的又一方面，提供包含以上定义的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体的药用组合物。

所述组合物可以是适合于经口给予的形式，例如为片剂或胶囊剂；胃肠外注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的形式如无菌溶液、悬浮液或乳液；局部给予形式如软膏或霜剂；或直肠给予的形式如栓剂。

一般来说，可以用常规赋形剂以常规方式制备上述组合物。

所述抗肿瘤剂通常将以在每平方米动物体表面积50-10000mg范围内的单位剂量即约1-200mg/kg给予温血动物，而且这通常提供治疗有效量。单位剂型如片剂或胶囊剂将通常含有例如1-250mg活性成分。优选使用的日剂量在1-50mg/kg范围内。然而，所述日剂量必然随所治疗的宿主、具体的给予途径和需要治疗的疾病的严重程度而定。因此，可以由治疗任何具体病人的执业医师确定最适剂量。

按照本发明的再一方面提供在治疗处理人体或动物体的方法中使用的以上定义的式I的抗肿瘤剂。

我们已经发现，本发明的化合物具有抗增殖特性如认为由所述式I的双-前体药物低氧选择性释放细胞毒性剂产生的抗肿瘤特性。因此，预期本发明化合物可用于治疗具有低氧区的足够大小的肿瘤，以便1，4-醌基部分发生还原，因此迅速释放细胞毒性部分。

本领域技术人员应该认识到，本发明化合物抑制EMT6小鼠乳腺癌细胞的球形聚合物的上述抗增殖活性不仅证实了本发明化合物是低氧选择性前体药物的细胞毒性剂，而且证实了所述细胞毒性剂释放后能够扩散入附近的细胞聚集物低氧区以持续破坏癌细胞。因此，能够释放足够的细胞毒性活性使癌细胞球形聚集物生长停滞。

因此，按照本发明的该方面提供以上定义的式I抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐用于生产药物的用途，所述药物用于在温血动物如人类产生抗增殖效应。

按照本发明该方面的又一特性，提供在需要该治疗的温血动物如人类中产生抗增殖效应的方法，该方法包括给予所述动物有效量的以上定义的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐。

如上所述，治疗或预防治疗具体增殖性疾病需要的剂量大小必然将随所治疗的宿主、给予途径和需要治疗的疾病的严重程度而不同。设计了例如1-200mg/kg、优选1-100mg/kg、更优选1-10mg/kg范围内的单位剂量。

本发明化合物的抗肿瘤作用可以用作唯一的治疗或可以包括另外的一种或多种其它物质和/或治疗。通过同时、序贯或分开给予各个治疗部分可以达到这样的联合治疗。在医学肿瘤学领域中，常规联合使用不同形式的治疗法治疗各个癌症病人，例如联合外科手术、放射治疗和/或化学治疗。具体来说，已知辐射或用抗血管生成剂和/或血管渗透性减少剂(vascular permeability reducing agents)的治疗能够增加肿瘤中的低氧组织数量。因此，预期与放射治疗和/或抗血管生成剂的联合治疗将提高本发明化合物的功效。

一般来说，所述化学治疗包括三个主要类型的治疗药物：-

(i)抗血管生成剂：包括认为通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)起作用的药物的抗血管生成剂，例如国际专利申请WO 97/22596、WO97/30035和WO 97/32856中公开的化合物；以及通过不同机制起作用的抗血管生成剂例如linomide、具有整联蛋白αvβ3功能的抑制剂、制管张素、razoxin和酞胺哌啶酮。

(ii)细胞抑制剂：例如抗雌激素(如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和iodoxyfene)、孕激素(如甲地孕酮醋酸盐)、芳香酶(aromatase)抑制剂(如anastrozole、letrazole、vorazole和依西美坦)、抗孕激素、抗雄激素(如氟利坦、尼鲁米特、比卡鲁胺和环丙孕酮醋酸盐)、LHRH激动剂和拮抗剂(如戈舍瑞林醋酸盐、luprolide和布舍瑞林)、睾酮5α-二氢还原酶抑制剂(如非那雄胺)、抗侵袭剂(例如金属蛋白酶抑制剂如marimastat和尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑制剂)和生长因子抑制剂(如表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板衍生生长因子和肝细胞生长因子的抑制剂，例如EGF受体酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；和

(iii)用于医学肿瘤学的抗增生、抗肿瘤药物及其组合物：例如抗代谢剂(例如抗叶酸盐剂如氨甲喋呤和raltitrexed、氟嘧啶如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷类似物以及胞嘧啶和阿糖胞苷)；抗肿瘤抗生素(例如博来霉素和anthracycline如多柔比星、柔红霉素、表柔比星、和伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素D(dactinomycin)和普卡霉素)；铂衍生物(例如顺铂和卡铂)；烷化剂(例如氮芥、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、白消安、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝脲和塞替派)；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱如长春新碱和taxoid如紫杉醇和taxotere)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素类如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶和托泊替堪)。

现在以下列非限制性实施例说明本发明，除非另作说明，否则其中：-

(i)通过真空旋转蒸发进行蒸发和在通过过滤去除残留的固体如干燥剂后进行后处理方法；

(ii)除非另作说明，否则在室温即在18-25℃范围内和惰性气体如氩的气氛下进行操作；

(iii)在得自E.Merck，Darmstadt，德国的Merck Kieselgel二氧化硅(Art.9385)或Merck Lichroprep RP-18(Art.9303)反相二氧化硅上进行柱层析(快速法)和中压液相色谱法(MPLC)；

(iv)仅说明性给出得率而不一定是最大可获得的得率；

(v)利用Mettler SP62自动熔点装置、油浴装置或Koffler热板装置测定熔点；

(vi)用核(一般为质子)磁共振(NMR)和质谱技术确定式I终产物的结构；以δ尺度检测质子核磁共振化学位移值，峰裂数表示如下：s，单峰；d，双峰；t，三重峰；m，多重峰；除非另作说明，否则将式I的终产物溶解于CD₃SOCD₃以测定NMR值；

(vii)中间体一般未完全进行特征鉴定，纯度用薄层层析(TLC)、红外(IR)或NMR分析评价；

(viii)使用了以下简写：-

DMF N， N-二甲基甲酰胺；

DMA N， N-二甲基乙酰胺；

DMSO 二甲基亚砜；

EDTA 乙二胺四乙酸。

实施例1

将1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.185g)加入3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.17g)、4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐( Chem.Abs.， 73，120373和 J.Chem.Soc. Perkin Trans.I，1973，2397-2401；0.17g)、1-羟基苯并三唑(0.087g)、三乙胺(0.277ml)和二氯甲烷(7ml)的搅拌混合物中。生成的混合物在室温下搅拌16小时。蒸发混合物，残留物利用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。如此获得 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基)-3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.105g)；

NMR谱：(CDCl₃)0.97(t，3H)，1.32(s，6H)，1.46(m，2H)，1.98(s，3H)，2.52(m，2H)，2.78(m，2H)，3.12(s，3H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，6.52(s，1H)，6.68(d，2H)，7.03(d，2H)；

质谱：(M+Na⁺)519，517，515。

如下获得用作原料的3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸：-

将6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素( J.Amer.Chem.Soc.，1983，105，2752-2760；10g)、烯丙基溴(12.6ml)、碳酸钾(20g)和DMF(100ml)的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配于乙醚和水之间。用饱和氯化物水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO₄)并蒸发。因此获得6-烯丙氧基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(12g)； NMR谱：(CDCl₃)1.32(s，6H)，2.22(s，3H)，2.58(s，2H)，4.53(m，2H)，5.35(m，2H)，6.05(m，2H)，6.71(s，1H)，6.85(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(96ml)的混合物搅拌并加热至200℃5小时。蒸发混合物，残留物利用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。因此获得5-烯丙基-6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(3.7g)； NMR谱：(CDCl₃)1.42(s，6H)，2.22(s，3H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H)4.87(s，1H)，5.2(m，2H)，6.08(m，1H)，6.8(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(1g)、10％披钯木炭催化剂(0.15g)和乙醇(60ml)的混合物在3个大气压的氢下搅拌30分钟。将混合物过滤，蒸发滤液得到6-羟基-5-丙基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(1g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.06(t，3H)，1.46(s，6H)，1.66(m，2H)，2.21(s，3H)，2.56(s，2H)，2.72(m，2H)，4.57(s，1H)，6.72(s，1H)。

将由此获得的物质的乙腈(12ml)溶液搅拌并加热至回流。在2小时内分批加入在乙腈(10ml)和水(10ml)的混合物中的氯化铁六水合物(2.18g)溶液。将该混合物冷却至室温并分配在乙醚和5％碳酸氢钠水溶液之间。水相加入2N盐酸水溶液酸化并用乙醚提取。干燥(MgSO₄)并蒸发生成的有机相。由此获得作为油的3-(5-甲基-3-丙基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.335g)； NMR谱：(CDCl₃)0.99(t，3H)，1.42(m，2H)，1.46(s，6H)，1.97(s，3H)，2.6(m，2H)，3.03(s，2H)，6.45(s，1H)。

实施例2

将3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(1.38g)、4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(1.6g)、2-(1-苯并三唑基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓(uronium)六氟代磷酸盐(V)(1.99g)、三乙胺(1.52g)和乙腈(30ml)的混合物在室温下搅拌18小时。蒸发该混合物，残留物用己烷和乙酸乙酯的17∶3混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.88g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.3(s，6H)，2.0(s，3H)，2.1(s，3H)，2.73(s，3H)，3.2(d，2H)，3.62-3.82(m，8H)，5.04(m，2H)，5.8(m，1H)，6.65-7.1(m，4H)。

质谱：(M+H⁺)509，507，505。

如下获得用作原料的3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：-

将烯丙基溴(8.45g)加入6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素( J. Org.Chem，1989， 54，3303-3310；5g)、碳酸钾(9.4g)和DMF(50ml)的混合物中。所生成的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配在乙醚和水之间。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(硫酸镁)并蒸发。由此获得6-烯丙氧基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素(5.2g)； NMR谱：(CDCl₃)1.48(s，6H)，2.28(s，3H)，2.34(s，3H)，2.57(s，2H)，4.5(m，2H)，5.36(m，2H)，6.07(m，1H)，6.63(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(40ml)的混合物搅拌并加热至180℃18小时。将该混合物冷却至室温，加入5N盐酸水溶液酸化并用乙酸乙酯提取。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得7-烯丙基-6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素(2.9g)； NMR谱：(CDCl₃)1.48(s，6H)，2.24(s，3H)，2.37(s，3H)，2.58(s，2H)，3.44(d，2H)，4.84(宽s，1H)，5.12(m，2H)，5.98(m，1H)。

将由此获得物质的一部分(2.6g)、1N氢氧化钠水溶液(17.5ml)和乙腈(50ml)的混合物在室温下的空气中搅拌4天。加入5N盐酸水溶液酸化该混合物并用乙酸乙酯提取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得作为油的3-(3-丙烯基-2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(2.7g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.44(s，6H)，1.95(s，3H)，2.14(s，3H)，3.0(s，2H)，3.19(d，2H)，5.0(m，2H)，5.77(m，1H)。

实施例3

将3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(0.65g)、4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(0.716g)、2-(1-苯并三唑基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟代磷酸盐(V)(0.935g)、三乙胺(0.709g)和乙腈(15ml)的混合物在室温下搅拌40小时。蒸发该混合物，残留物用己烷和乙酸乙酯的17∶3混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得作为树胶的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.464g)；

NMR谱：(CDCl₃)0.97(t，3H)，1.32(s，6H)，1.47(m，2H)，2.01(s，3H)，2.1(s，3H)，2.4(t，2H)，2.75(s，2H)，3.1(s，3H)，3.64-3.82(m，8H)，6.7(d，2H)，7.06(d，2H)；

质谱：(M+H⁺)511，509，507。

如下获得用作原料的3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：

将7-烯丙基-6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素(3g)、10％披钯木炭催化剂(0.5g)和甲醇(75ml)的混合物在氢气氛下搅拌1小时。过滤混合物，蒸发滤液。由此获得6-羟基-4，4，5，8-四甲基-7-丙基-3，4-二氢香豆素(1.06g)； NMR谱：(CDCl₃)1.03(t，3H)，1.46(s，6H)，1.57(s，2H)，2.23(s，3H)，2.36(s，3H)，2.6(m，4H)，4.58(s，1H)。

将由此获得的物质、1N氢氧化钠水溶液(4.5ml)和乙腈(15ml)的混合物在室温下的空气中搅拌4天。加入2N盐酸水溶液酸化该混合物并用乙酸乙酯提取。有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得作为油的3-(2，5-二甲基-3-丙基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(1.12g)； NMR谱：(CDCl₃)0.93(t，3H)，1.38-1.5(m，8H)，1.95(s，3H)，2.14(s，3H)，2.39(m，2H)，3.0(s，2H)。

实施例4

将 N， N’-二环己基碳二亚胺(0.285g)加入到3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(0.297g)、 N-羟基苯并三唑(0.02g)和二氯甲烷(20ml)的已经在冰浴中冷却的搅拌混合物中，搅拌所获得的混合物5分钟。依次加入三乙胺(0.267g)和4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐物(0.423g)，于0℃搅拌反应混合物1.5小时，然后在室温下搅拌4小时。蒸发混合物，残留物用己烷和乙酸乙酯的极性逐渐升高的混合物作为洗脱剂在矾土上经柱层析纯化。由此获得作为树胶的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.028g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.3(s，6H)，2.05(d，3H)，2.08(s，3H)，2.75(s，2H)，3.1(s，3H)，3.65-3.85(m，8H)，6.4(d，1H)，6.7(d，2H)，7.05(d，2H)；

质谱：(M+H⁺)465。

如下获得用作原料的3-(2，5-二甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：-

将6-羟基-4，4，5，8-四甲基-3，4-二氢香豆素( J.Org.Chem.，1989， 54，3303-3310；2.2g)、1N氢氧化钠水溶液(10ml)和乙腈(20ml)的混合物在室温下的空气中搅拌2天。加入5N盐酸水溶液酸化该混合物并用乙酸乙酯提取。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得所需要的不需要进一步纯化就可使用的原料(1.8g)； NMR谱：(CDCl₃)1.44(s，6H)，2.12(s，3H)，2.4(s，3H)，3.02(d，2H)，7.25(s，1H)。

实施例5

将在二氯甲烷(2ml)中的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.126g)溶液加入3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.115g)、4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐(0.146g)、三乙胺(0.13ml)和二氯甲烷(4ml)的搅拌混合物中。所得的混合物在室温下搅拌16小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺(0.06g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.32(s，6H)，1.99(s，3H)，2.78(s，2H)，3.12(s，3H)，3.43(m，2H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，5-5.8(m，3H)，5.87(m，1H)，6.56(s，1H)，6.68(d，2H)，7.04(d，2H)。

如下获得用作原料的3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸：

将6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素( J.Amer.Chem.Soc.，1983，105，2752-2760；10g)、烯丙基溴(12.6ml)、碳酸钾(20g)和DMF(100ml)的混合物在室温下搅拌2小时。所述混合物分配在乙醚和水之间。有机相用饱和氯化物水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得6-烯丙氧基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(12g)； NMR谱：(CDCl₃)1.32(s，6H)，2.22(s，3H)，2.58(s，2H)，4.53(m，2H)，5.35(m，2H)，6.05(m，2H)，6.71(s，1H)，6.85(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(6g)和 N， N-二甲基苯胺(96ml)的混合物搅拌并加热至200℃5小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的4∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得5-烯丙基-6-羟基-4，4，7-三甲基-3，4-二氢香豆素(3.7g)； NMR谱：(CDCl₃)1.42(S，6H)，2.22(s，3H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H)，4.87(S，1H)，5.2(m，2H)，6.08(m，1H)，6.8(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(3g)的乙腈(30ml)溶液搅拌并加热至回流。在2小时内分批加入在乙腈(60ml)和水(60ml)的混合物中的氯化铁六水合物(13g)溶液。将该混合物冷却至室温并分配在乙醚和5％碳酸氢钠水溶液之间。水相加入2N盐酸水溶液酸化并用乙醚提取。所生成的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-醌-2-基)-3-甲基丁酸(0.97g)；NMR 谱：(CDCl₃)1.47(s，6H)，1.99(s，3H)，3.04(s，2H)，3.48(m，2H)，5.02(m，2H)，5.85(m，1H)，6.49(s，1H)。

实施例6

采用类似于实施例2中所述的方法，使3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸与4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反应。产物用己烷和乙酸乙酯的9∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得为固体的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}- N-甲基-3-甲基-3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)丁酰胺，得率为30％；

NMR谱：(CDCl₃)1.32(s，6H)，1.95(s，3H)，2.0(s，3H)，2.1(s，2H)，2.75(s，2H)，3.1(s，3H)，3.64-3.82(m，8H)，6.66-7.1(m，4H)。

质谱：(M+H⁺)479。

如下获得用作原料的3-(2，3，5-三甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：

将3，3-二甲基丙烯酸甲酯(6g)加入2，3，5-三甲基氢醌(7.6g)和甲磺酸(40ml)的已经加热至75℃的搅拌混合物中，混合物在75℃搅拌1小时。将混合物倾入冰和水的混合物中，用乙酸乙酯的提取生成的混合物。有机相用5％碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得6-羟基-4，4，5，7，8-五甲基-3，4-二氢香豆素(10.7g)； NMR谱：(CDCl₃)1.48(s，6H)，2.18(s，3H)，2.22(s，3H)，2.37(s，3H)，2.55(s，2H)，4.6(s，1H)。

将由此获得物质的一部分(5.85g)、0.5N氢氧化钠水溶液(50ml)和乙腈(100ml)的混合物在室温下的空气中搅拌18小时。加入5N盐酸水溶液酸化并用乙酸乙酯提取混合物。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。由此获得所需要的不需要进一步纯化就可使用的原料(4.1g)； NMR谱：(CDCl₃)1.46(s，6H)，1.93(s，3H)，1.96(s，3H)，2.15(s，3H)，2.15(s，3H)，3.02(s，2H)。

实施例7

用类似于实施例4中所述的方法，将3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸( J.Org.Chem，1989， 54，3303-3310)与4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反应。产物用己烷和乙酸乙酯的极性增加的混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得为油的 N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺，得率为7％；

NMR谱：(CDCl₃)1.31(s，6H)，2.1(s，3H)，2.78(s，2H)，3.11(s，3H)，3.67-3.82(m，8H)，3.95(s，3H)，3.99(s，3H)，6.72(d，2H)，7.06(d，2H)；

质谱：(M+H⁺)511。

实施例8

用类似于实施例5中所述的方法，将3-(5-烯丙基-2，3-二甲氧基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸与4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-甲基苯胺二盐酸盐反应。产物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的极性增加的混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得为油的3-(5-烯丙基-2，3-二甲氧基-1，4-醌基)- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺，得率为29％；

NMR谱：(CDCl₃)1.32(s，6H)，2.76(s，2H)，3.11(s，3H)，3.39(d，2H)，3.68(t，4H)，3.77(t，4H)，3.96(s，3H)，3.97(s，3H)，5.02-5.06(m，2H)，5.76-5.86(m，1H)，6.69(d，2H)，7.04(d，2H)；

质谱：(M+Na⁺)559，561 & 563。

如下获得用作原料的3-(5-烯丙基-2，3-二甲氧基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸：

将连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄，26g)分批加入在甲醇(50ml)和水(100ml)的混合物中的2，3-二甲氧基-1，4-苯醌( J.Med.Chem.，1971， 14，45；5g)的搅拌溶液中。生成的混合物在室温下搅拌1小时。混合物在乙酸乙酯和水之间分配。干燥(MgSO₄)并蒸发有机相得到2，3-二甲氧基氢醌(2g)； NMR谱：(CD₃SOCD₃)3.71(s，6H)，6.37(s，2H)，8.47(s，2H)。

将2，3-二甲氧基氢醌(3.6g)、3，3-二甲基丙烯酸甲酯(3.2ml)和甲磺酸(36ml)的混合物搅拌并加热至70℃2小时。将混合物倾入冰和水的混合物中，用乙酸乙酯的提取生成的混合物。有机相用5％碳酸氢钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的3∶2混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(2.3g)；

NMR谱：(CDCl₃)1.3(s，6H)，2.59(s，2H)，3.95(s，6H)，5.58(s，1H)，6.64(s，1H)。

将6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.6g)、烯丙基溴(1.65ml)、碳酸钾(2.63g)和DMF(15ml)的混合物搅拌并加热至70℃1小时。使混合物在乙醚和水之间分配。用饱和氯化钠水溶液洗涤有机相，干燥(MgSO₄)并蒸发。残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙醚的3∶2混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得6-烯丙氧基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.51g)；NMR 谱：(CDCl₃)1.31(s，6H)，2.59(s，2H)，3.9(s，3H)，3.95(s，3H)，4.57(d，2H)，5.37(m，2H)，6.08(m，1H)，6.58(s，1H)。

将由此获得的物质和 N， N-二甲基苯胺(20ml)的混合物搅拌并加热至200℃4小时。蒸发混合物，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙醚的1∶1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得5-烯丙基-6-羟基-7，8-二甲氧基-4，4-二甲基-3，4-二氢香豆素(1.4g)；NMR谱：(CDCl₃)1.44(s，6H)，2.56(s，2H)，3.58(m，2H)，3.91(s，2H)，3.97(s，3H)，5.02(m，2H)，5.73(s，1H)，6.02(m，1H)。

将由此获得物质的一部分(0.65g)、2N氢氧化钠水溶液(1ml)和水(50ml)的混合物在室温下的空气中搅拌1.5小时。用乙醚提取混合物。有机相用水和用饱和氯化钠水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)并蒸发。残留物用石油醚(沸点40-60℃)、乙醚和乙酸的50∶50∶0.1混合物作为洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得所需要的原料(0.112g)； NMR谱：(CDCl₃)1.46(s，6H)，3.03(s，2H)，3.44(s，2H)，3.9(s，3H)，3.95(s，3H)，5.02(m，2H)，5.83(m，1H)。

实施例9

将氯代甲酸乙酯(0.060ml)加入3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酸(0.14g)、三乙胺(0.087ml)和二氯甲烷(5ml)的已经冷却至0℃的搅拌混合物中，搅拌混合物30分钟。依次加入 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐酸盐(0.173g)和三乙胺(0.14ml)，在室温下搅拌所生成的混合物3天。蒸发混合物，残留物用二氯甲烷和乙醚的19∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得 N-烯丙基- N-{4-[双(2-氯乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-醌基)-3-甲基丁酰胺(0.11g)； NMR谱：(CDCl₃)1.31(s，6H)，2.09(s，3H)，2.77(s，2H)，3.67(t，4H)，3.77(t，4H)，3.93(s，3H)，3.98(s，3H)，4.13(d，2H)，5.04(m，2H)，5.73(m，1H)，6.67(d，2H)，7.01(d，2H)，。

如下获得用作原料的 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐酸盐：

将2-(叔丁氧基羰基氧基亚氨基)苯基乙腈(BOC-ON；13.5g)加入4-[双(2-羟乙基)氨基]苯胺[10g，通过中和相应的二盐酸盐制备( J.Org. Chem.，1961， 26，1933)]、丙酮(100ml)和水(100ml)的混合物中，生成的混合物在室温下搅拌16小时。用乙酸乙酯提取混合物。有机相用2N盐酸水溶液提取。加入2N氢氧化钠水溶液中和水相，并用乙酸乙酯提取。蒸发有机相，残留物用乙酸乙酯作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得4-[双(2-羟乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(11.84g)； NMR谱：(CDCl₃)1.59(s，9H)，3.56(t，4H)，3.84(t，4H)，6.5(宽s，1H)，6.71(d，2H)，7.24(d，2H)。

将由此获得物质的一部分(2g)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯(2.5g)、咪唑(2.3g)和DMF(20ml)的混合物在室温下搅拌2天。加入水，并用乙酸乙酯提取混合物。蒸发有机提取物，残留物用二氯甲烷和乙醚的19∶1混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(3.86g)； NMR谱：(CDCl₃)0.0(s，12H)，0.85(s，18H)，1.47(s，9H)，3.42(t，4H)，3.69(t，4H)，6.18(宽s，1H)，6.58(d，2H)，7.13(d，2H)。

将氢化钠(在矿物油中的60％分散物；0.265g)加入在DMF(20ml)中的4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(3.15g)的已经冷却至0℃的搅拌溶液中。生成的混合物在室温下搅拌1小时。加入烯丙基溴(0.625ml)，混合物在室温下搅拌12小时。加水(5ml)，混合物在乙醚和水之间分配。干燥(MgSO₄)并蒸发有机相获得 N-烯丙基-4-[双(2-叔丁基二甲基甲硅烷基氧基乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(3.5g)； NMR谱：(CDCl₃)0.0(s，12H)，0.81(s，9H)，0.82(s，9H)，1.4(s，9H)，3.43(t，4H)，3.71(t，4H)，4.11(d，2H)，5.07(m，2H)，5.87(m，1H)，6.58(d，2H)，6.93(d，2H)。

将由此获得的物质和四正丁基氟化铵(1.1M在THF中；55ml)的混合物在室温下搅拌30分钟。蒸发溶剂，残留物用乙酸乙酯作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-羟乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(2.09g)； NMR谱：(CDCl₃)1.44(s，9H)，3.55(t，4H)，3.83(t，4H)，4.13(d，2H)，5.11(m，2H)，5.89(m，1H)，6.61(d，2H)，7.04(d，2H)。

将由此获得的物质、四氯化碳(12ml)、三苯基膦(4.92g)和乙腈(40ml)的混合物在室温下搅拌30分钟。蒸发溶剂，残留物用石油醚(沸点40-60℃)和乙酸乙酯的17∶3混合物作洗脱剂在二氧化硅上经柱层析纯化。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]- N-(叔丁氧基羰基)苯胺(1.49g)； NMR谱：(CDCl₃)1.44(s，9H)，3.61(t，4H)，3.7(t，4H)，4.14(d，2H)，5.12(m，2H)，5.88(m，1H)，6.61(d，2H)，7.08(d，2H)。

将在乙酸乙酯(6.5ml)中的氯化氢气体的饱和溶液加入到由此获得的物质在乙酸乙酯(5ml)中的溶液中，在室温下搅拌混合物30分钟。分离沉淀物。由此获得 N-烯丙基-4-[双(2-氯乙基)氨基]苯胺二盐酸盐(0.56g)； NMR谱：(CD₃SOCD₃)3.75(s，8H)，3.87(d，2H)，5.37(d，1H)，5.45(d，1H)，5.95(m，1H)，6.86(d，2H)，7.37(d，2H)。

实施例10

药用组合物

以下说明本文定义的典型的本发明药物剂型(活性成分称为“混合物X”)，所述剂型用于在人类的治疗或预防用途。

(a)片剂I mg/片

化合物X 100

乳糖Ph.Eur. 182.75

交联羧甲基纤维素钠 12.0

玉米淀粉糊(5％(w/v)糊) 2.25

硬脂酸镁 3.0

(b)片剂II mg/片

化合物X 50

乳糖Ph.Eur. 223.75

交联羧甲基纤维素钠 6.0

玉米淀粉 15.0

聚乙烯吡咯烷酮(5％(w/v)糊) 2.25

硬脂酸镁 3.0

(c)片剂III mg/片

化合物X 1.0

乳糖Ph.Eur. 93.25

交联羧甲基纤维素钠 4.0

玉米淀粉糊(5％(w/v)糊) 0.75

硬脂酸镁 1.0

(d)胶囊剂 mg/胶囊

化合物X 10

乳糖Ph.Eur. 488.5

镁 1.5

(e)注射剂I (50mg/ml)

化合物X 5.0％(w/v)

1M氢氧化钠溶液 15.0％(v/v)

0.1M盐酸

(调节pH至7.6)

聚乙二醇400 4.5％(w/v)

注射用水至100％

(f)注射剂II (10mg/ml)

化合物X 1.0％(w/v)

磷酸钠BP 3.6％(w/v)

0.1M氢氧化钠溶液 15.0％(v/v)

注射用水至100％

(g)注射剂III (1mg/ml，缓冲至pH6)

化合物X 0.1％(w/v)

磷酸钠BP 2.26％(w/v)

枸橼酸 0.38％(w/v)

聚乙二醇400 3.5％(w/v)

注射用水至100％

(h)气雾剂I mg/ml

化合物X 10.0

失水山梨醇三油酸酯 13.5

三氯氟甲烷 910.0

二氯二氟甲烷 490.0

(i)气雾剂II mg/ml

化合物X 0.2

失水山梨醇三油酸酯 0.27

三氯氟甲烷 70.0

二氯二氟甲烷 280.0

二氯四氟乙烷 1094.0

(j)气雾剂III mg/ml

化合物X 2.5

失水山梨醇三油酸酯 3.38

三氯氟甲烷 67.5

二氯二氟甲烷 1086.0

二氯四氟乙烷 191.6

(k)气雾剂IV mg/ml

化合物X 2.5

大豆卵磷脂 2.7

三氯氟甲烷 67.5

二氯二氟甲烷 1086.0

二氯四氟乙烷 191.6

(l)软膏 ml

化合物X 40mg

乙醇 300ul

水 300ul

1-十二烷基氮杂环庚-2-酮 50ul

丙二醇至1ml

注释

用药学领域公知的常规方法可以获得上述制剂。可以用例如提供苯二甲酸醋酸纤维素包衣的常规方法包衣片剂(a)-(c)。气雾剂(h)-(k)可以与标准计量剂量的气雾剂仪器一起使用，而且悬浮剂失水山梨醇三油酸酯和大豆卵磷脂可以用替代的悬浮剂如山梨糖醇酐单油酸酯、失水山梨醇醇倍半油酸酯、聚山梨醇酯80、聚甘油油酸酯或油酸替代。

Claims

1.式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐：

其中R¹为氢、C₁-C₄烷基、C₃-C₄链烯基、C₃-C₄链炔基或C₁-C₄烷氧基；

R²为氢、C₁-C₄烷基、C₃-C₄链烯基、C₃-C₄链炔基或C₁-C₄烷氧基；

R³为氢、C₁-C₄烷基、C₃-C₄链烯基、C₃-C₄链炔基或C₁-C₄烷氧基；

R⁴为C₁-C₄烷基；

R⁵为C₁-C₄烷基；

R⁶为氢或C₁-C₄烷基；

R⁷为氢或C₁-C₄烷基；

X为 N-C₁-C₄烷基亚氨基、 N-C₃-C₄链烯基亚氨基或 N-C₃-C₄链炔基亚氨基；

m为1或2，每个R⁸独立为氢、卤代、羟基、C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄烷基或氰基；

Y¹是卤代；和

Y²是卤代；

其前提是R¹、R²和R³中的至少一个不是氢。

2.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐其中R¹、R²和R³中的每一个独立为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴和R⁵中的每一个独立地为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁶为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁷为氢或甲基；

m为1或2，每个R⁸独立地为氢、氟代、氯代、溴代、甲氧基、乙氧基、甲基、乙基、丙基、异丙基或氰基；和

Y¹和Y²中的每一个独立地为氯代、溴代或碘代；

其前提是：R¹、R²和R³中至少一个不是氢。

3.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐其中R¹为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲基烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁵为甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁶为氢、甲基、乙基、丙基或异丙基；

R⁷为氢或甲基；

Y¹是氯代、溴代或碘代；和

Y²是氯代、溴代或碘代；

前提是R¹、R²和R³中的至少一个不是氢。

4.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐其中R¹为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R²为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R³为氢、甲基、乙基、丙基、烯丙基、甲氧基或乙氧基；

R⁴为甲基或乙基；

R⁵为甲基或乙基；

R⁶为氢、甲基或乙基；

R⁷为氢；

m为1，R⁸位于X的间位而且R⁸为氢、氟代、氯代、甲基、乙基、丙基或异丙基；

Y¹和Y²中的每一个为氯代、溴代或碘代；

其前提是R¹、R²和R³中的至少一个不是氢。

5.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐其中R¹为氢、甲基或甲氧基；

R²为氢、甲基、烯丙基或甲氧基；

R³为甲基、乙基、丙基或烯丙基；

R⁴和R⁵各为甲基；

R⁶和R⁷各为氢；

X为 N-甲基亚氨基；

m为1，R⁸为氢；和

Y¹和Y²各为氯代。

6.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂选自：-

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(5-甲基-3-丙基-1，4-苯醌-2-基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-2，5-二甲基-1，4-苯醌基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，5-二甲基-1，4-苯醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

3-(3-烯丙基-5-甲基-1，4-苯醌-2-基)- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基丁酰胺；

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-甲基- N-甲基-3-(2，3，5-三甲基-1，4-苯醌基)丁酰胺，

N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-苯醌基)-3-甲基- N-甲基丁酰胺，或

N-烯丙基- N-{4-[双(2-氯代乙基)氨基]苯基}-3-(2，3-二甲氧基-5-甲基-1，4-苯醌基)-3-甲基丁酰胺；

或它们的药学上可接受的盐。

7.权利要求1-6中的任一项要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐，其中所述化合物的还原电位的范围为-300--475mV。

8.制备权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐的方法，该方法包括：-

使式II的酸或其活性衍生物

其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和R⁷中的每一个具有权利要求1所定义的任何涵义，

与式III的化合物反应，

其中X、R⁸、m、Y¹和Y²中的每一个具有权利要求1所定义的任何涵义；

当需要式I化合物的药学上可接受的盐时，可采用常规方法通过使所述化合物与合适的酸或碱反应获得；当需要旋光性形式的式I化合物时，可通过用旋光性原料实施前述方法或通过用常规方法折分外消旋形式的所述化合物获得。

9.一种药用组合物，该组合物包含权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐和药学上可接受的稀释剂或载体。

10.权利要求1要求保护的式I的抗肿瘤剂或其药学上可接受的盐在生产在温血动物产生抗增殖效应的药物中的用途。