CN117843727A - 环肽毒素α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体及应用 - Google Patents

环肽毒素α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种环肽毒素α‑Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体及应用，属于有机合成领域。本发明提供了一种环肽毒素类化合物α‑Amanitin和Amaninamide的全合成方法，所用原料以及试剂容易通过商业化途径购买，中间体稳定，反应条件温和、操作工艺简便，分离纯化工艺具有很好的可操作性，收率高，具有重要的参考和实用价值，能够实现α‑Amanitin和Amaninamide的克级规模制备，具有良好的工业化前景，本发明的制备方法在环肽毒素合成领域具有显著的应用价值。

Description

环肽毒素α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体 及应用
技术领域
本发明涉及有机合成技术领域，尤其涉及一种环肽毒素α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体及应用。
背景技术
鹅膏毒肽是从剧毒蘑菇中分离出来的一种环肽物质，属于毒伞肽类毒素。鹅膏毒肽为二环八肽结构，包括九种不同的多肽，分别为α-鹅膏毒肽(α-Amanitin)、β-鹅膏毒肽(β-Amanitin)、γ-鹅膏毒(γ-Amanitin)、ε-鹅膏毒肽(ε-Amanitin)、三羟鹅膏肽(amanin)、三羟鹅膏毒肽酰胺(Amaninamide)、二羟鹅膏毒肽酰胺(amanullin)、二羟鹅膏毒肽羧酸(amanullinic acid)和二羟鹅膏毒肽酰胺原(proamanullin)。α-Amanitin是鹅膏毒肽系列中含量最丰富的一种二环八肽，其抗体药物偶联物(antibody-drug conJugates,ADCs)可用于癌症治疗。因此，对其化学性质及其应用的研究备受青睐。
α-Amanitin为真核生物RNA聚合酶II的高效抑制剂，能够阻断mRNA转录和蛋白质合成，同时杀死快速生长和静止的细胞，导致其迅速降解，直至凋亡。目前，α-Amanitin抗体药偶联物已经治愈异种移植小鼠的胰腺癌症，并且正朝人体试验的方向发展。医学研究人员需要足量α-Amanitin才能制备其ADCs药物并用于治疗癌症。α-Amanitin主要从天然毒蘑菇中分离提取，也有生物发酵合成，其天然产物提取及发酵产量低，市场售价极其昂贵（约12000/mg），这严重制约了其抗体药物偶联物对癌症治疗的研究。化学合成α-Amanitin是一种行之有效的方法，有望实现其规模化生产。尽管从20世纪40年代，Heinrich Wieland等已经开始对α-Amanitin及其衍生物的结构和性质进行表征，化学家们也一直在尝试对α-Amanitin进行化学合成。
到目前为止仍然缺乏高效和大量合成α-Amanitin及其衍生物的方法。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种环肽毒素α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法、中间体及应用。本发明提供的制备方法是一种全合成方法，原料易得，中间体稳定，反应条件温和、操作工艺简便，分离纯化工艺具有很好的可操作性，收率高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种环肽毒素类化合物α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法，所述α-Amanitin具有式1a所示的结构，所述Amaninamide具有式1b所示的结构：
式1a、/>式1b；
包括以下步骤：
步骤1：将化合物2进行乙酰化反应和酯化反应，得到化合物3；
步骤2：将所述化合物3进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物4；
步骤3：将所述化合物4进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物5；
步骤4：将所述化合物5进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物6；
步骤5：将所述化合物6进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物7；
步骤6：将所述化合物7进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物8；
步骤7：将所述化合物8进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物9；
步骤8：将所述化合物9进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：将所述化合物10以碘介导的方式进行碳硫键关环，得到化合物11；
步骤10：将所述化合物11进行脱保护反应，得到化合物12；
步骤11：将所述化合物12进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13进行氧化反应，得到化合物14；
步骤13：将所述化合物14进行脱保护反应，得到所述环肽毒素类化合物α-Amanitin和Amaninamide；
所述化合物2~14的结构如下：
所述化合物9~14中R为-H或-OBn。
优选地，所述的制备方法包括以下步骤：
步骤1：将所述化合物2、吡啶、乙酰氯和有机溶剂混合进行乙酰化反应，将所得乙酰化产物与N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯混合进行酯化反应，得到所述化合物3；
步骤2：将所述化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物4；
步骤3：将所述化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物5；
步骤4：将所述化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物6；
步骤5：将所述化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物7；
步骤6：将所述化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物8；
步骤7：将所述化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物9；所述化合物15为N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸或N-Fmoc-色氨酸；
步骤8：将所述化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：保护气氛下，将所述化合物10和碘的有机溶液混合进行碳硫键关环，得到所述化合物11；
步骤10：将所述化合物11和有机溶剂混合进行脱保护反应，得到所述化合物12；
步骤11：将所述化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和有机溶剂混合进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13、间氯过氧苯甲酸和有机溶剂混合进行氧化反应，得到所述化合物14；
步骤13：
当R为-OBn时，将所述化合物14、乙硫醇和三氟化硼乙醚溶液反应，得到粗产物，将所述粗产物和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述α-Amanitin；
当R为-H时，将所述化合物14和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述Amaninamide。
优选地，所述步骤1中化合物2、乙酰氯和吡啶的摩尔比为1:1~3:1~5；所述化合物2、N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:0.1~1:1~5。
优选地，所述步骤2中化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤3中化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤4中化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤5中化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤6中化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤7中化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤8中化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1。
优选地，所述步骤9中化合物10与碘的有机溶液中碘单质的摩尔比为1:4，所述碘的有机溶液的浓度为2mg/mL。
优选地，所述步骤10中有机溶剂为二乙胺的二氯甲烷溶液，所述二乙胺的二氯甲烷溶液中二乙胺的质量分数为50%，所述化合物11在二乙胺的二氯甲烷溶液中的浓度为0.1g/mL。
优选地，所述步骤11中化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯的摩尔比为1:2.2:2。
优选地，所述步骤13中氨的醇溶液的浓度均为7mol/L。
本发明还提供了上述技术方案所述的制备方法得到的中间体，结构如下：
所述化合物9~14中R为-H或-OBn。
本发明还提供了上述技术方案所述的中间体在制备环肽毒素类化合物中的应用。
本发明提供了一种环肽毒素类化合物α-Amanitin和Amaninamide的制备方法，本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：
本发明提供了一种环肽毒素类化合物α-Amanitin和Amaninamide的全合成方法，所用原料以及试剂容易通过商业化途径购买，且原料成本较低，合成方法中得到的中间体稳定，反应条件温和、操作工艺简便，分离纯化工艺具有很好的可操作性，收率高，具有重要的参考和实用价值，能够实现α-Amanitin和Amaninamide的克级规模制备，本发明的制备方法在环肽毒素合成领域具有显著的应用价值。
本发明还提供了一系列中间体，有助于促进环肽毒素及其它多肽化合物的合成，在多肽合成领域具有显著的应用价值。
具体实施方式
本发明提供了一种环肽毒素类化合物α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法，所述α-Amanitin具有式1a所示的结构，所述Amaninamide具有式1b所示的结构：
式1a、/>式1b；
包括以下步骤：
步骤1：将化合物2进行乙酰化反应和酯化反应，得到化合物3；
步骤2：将所述化合物3进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物4；
步骤3：将所述化合物4进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物5；
步骤4：将所述化合物5进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物6；
步骤5：将所述化合物6进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物7；
步骤6：将所述化合物7进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物8；
步骤7：将所述化合物8进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物9；
步骤8：将所述化合物9进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：将所述化合物10以碘介导的方式进行碳硫键关环，得到化合物11；
步骤10：将所述化合物11进行脱保护反应，得到化合物12；
步骤11：将所述化合物12进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13进行氧化反应，得到化合物14；
步骤13：将所述化合物14进行脱保护反应，得到所述环肽毒素类化合物α-Amanitin和Amaninamide；
所述化合物2~14的结构如前文所述。
在本发明中，若无特殊说明，使用的原料均为本领域市售商品或者采用本领域技术人员熟知的制备方法制得。
在本发明中，所述制备方法的原理如下式所示：
。
在本发明中，化合物中的Fmoc为芴甲氧羰基，Ac为乙酰基，Trt为三苯甲基，Bn为苄基。
在本发明中，所述制备方法优选包括以下步骤：
步骤1：将所述化合物2、吡啶、乙酰氯和有机溶剂混合进行乙酰化反应，将所得乙酰化产物、N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯混合进行酯化反应，得到所述化合物3；
步骤2：将所述化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物4；
步骤3：将所述化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物5；
步骤4：将所述化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物6；
步骤5：将所述化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物7；
步骤6：将所述化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物8；
步骤7：将所述化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物9；所述化合物15为N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸或N-Fmoc-色氨酸；
步骤8：将所述化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：保护气氛下，将所述化合物10和碘的有机溶液混合进行碳硫键关环，得到所述化合物11；
步骤10：将所述化合物11和有机溶剂混合进行脱保护反应，得到所述化合物12；
步骤11：将所述化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和有机溶剂混合进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13、间氯过氧苯甲酸和有机溶剂混合进行氧化反应，得到所述化合物14；
步骤13：
当R为-OBn时，将所述化合物14、乙硫醇和三氟化硼乙醚溶液反应，得到粗产物，将所述粗产物和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述α-Amanitin；
当R为-H时，将所述化合物14和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述Amaninamide。
在本发明中，若无特殊说明，使用的原料均为本领域市售商品。
本发明将所述化合物2、吡啶、乙酰氯和有机溶剂混合进行乙酰化反应，将所得乙酰化产物、N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯混合进行酯化反应，得到所述化合物3。
在本发明中，所述步骤1中化合物2、乙酰氯和吡啶的摩尔比优选为1:1~3:1~5，更优选为1:1.5:1.5。
在本发明中，所述有机溶剂优选为二氯甲烷，更优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述乙酰化反应的温度优选为0℃，时间优选为2h。
本发明优选将化合物2溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入所述吡啶和乙酰氯。
所述乙酰化反应完成后，本发明优选用饱和氯化铵溶液淬灭反应，用稀盐酸调所得反应液pH至2，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，记为所述乙酰化反应。
在本发明中，所述化合物2、N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯的摩尔比优选为1:0.1~1:1~5，更优选为1:0.3:2。
在本发明中，所述酯化反应的温度优选为室温，时间优选为0.5h。
本发明优选将所述粗产物用叔丁醇溶解，加入N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯，进行所述酯化反应。
所述酯化反应完成后，本发明优选将所得产物减压除去叔丁醇，得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物3。
得到所述化合物3后，本发明将所述化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物4。
在本发明中，所述化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1；
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物3溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物4。
得到化合物4后，本发明将所述化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物5。
在本发明中，所述化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1；
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物4溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物5。
得到化合物5后，本发明将所述化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物6。
在本发明中，所述化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物5溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物6。
得到化合物6后，本发明将所述化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物7。
在本发明中，所述化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物6溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到化合物7。
得到化合物7后，本发明将所述化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物8。
在本发明中，所述化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物7溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12小时，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到化合物8。
得到化合物8后，本发明将所述化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物9；所述化合物15为N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸或N-Fmoc-色氨酸。
在本发明中，所述的化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
在本发明中，所述化合物15的结构如下式所示：
，
其中R为-OBn或-H，当所述R为-OBn时，所述化合物15为N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸，当所述R为-H时，所述化合物15为N-Fmoc-色氨酸。
本发明优选将所述化合物8溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物9a。
本发明优选将所述化合物8溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入N-Fmoc-色氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液（所述二氯甲烷/二乙胺溶液中二氯甲烷的质量分数优选为50%）中，室温搅拌1h，减压除去溶剂，经柱层析分离，得到所述化合物9b。
得到化合物9后，本发明将所述化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10。
在本发明中，所述化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比优选为1:1.1:1.1:1.1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为干燥的二氯甲烷。
在本发明中，所述缩合反应和脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
在本发明中，所述(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物的结构如式16（化合物16）所示：
式16。
本发明优选将化合物9溶解于干燥的二氯甲烷中，冰浴条件下加入(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐，室温反应12h，用饱和碳酸钠溶液洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物经柱层析分离，得到化合物10。
得到化合物10后，本发明在保护气氛下，将所述化合物10和碘的有机溶液混合进行碳硫键关环，得到所述化合物11。
在本发明中，所述保护气氛优选为氮气。
在本发明中，所述化合物10与碘的有机溶液中碘单质的摩尔比优选为1:4，所述碘的有机溶液的浓度优选为2mg/mL。
在本发明中，所述碘的有机溶液的溶剂优选为N,N-二甲基甲酰胺。
在本发明中，所述碳硫键关环的温度优选为室温，时间优选为1h。
本发明优选在氮气环境下，将所述化合物10加入碘的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，室温反应1h，减压除去并回收N,N-二甲基甲酰胺得到粗产物，将所述粗产物经柱层析分离，得到化合物11。
得到化合物11后，本发明将所述化合物11和有机溶剂混合进行脱保护反应，得到所述化合物12。
在本发明中，所述有机溶剂优选为二乙胺的二氯甲烷溶液，所述二乙胺的二氯甲烷溶液中二乙胺的质量分数优选为50%，所述化合物11在二乙胺的二氯甲烷溶液中的浓度优选为0.1g/mL。
在本发明中，所述脱保护反应的温度优选为室温，时间优选为1h。
本发明优选将所述化合物11溶解于二氯甲烷/二乙胺溶液，室温搅拌1h，减压除去溶剂，将所得粗产物经柱层析分离，得到所述化合物12。
得到化合物12后，本发明将所述化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和有机溶剂混合进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13。
在本发明中，所述有机溶剂优选为N,N-二甲基甲酰胺。
在本发明中，所述化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯的摩尔比优选为1:2.2:2。
在本发明中，所述脱保护反应和缩合反应的温度优选为室温，时间优选为12h。
本发明优选将所述化合物12溶解于三氟乙酸中，所得体系中化合物12的浓度为0.1g/mL，室温搅拌1h，减压除去三氟乙酸，得到粗产物，将所述粗产物溶于干燥的N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙基氨和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯，室温反应12h，减压除去并回收N,N-二甲基甲酰胺，得到粗产物，经柱层析分离，得到化合物13。
得到化合物13后，本发明将所述化合物13、间氯过氧苯甲酸和有机溶剂混合进行氧化反应，得到所述化合物14。
在本发明中，所述化合物13与间氯过氧苯甲酸的摩尔比优选为1:1。
在本发明中，所述有机溶剂优选为异丙醇与乙醇混合溶液，所述异丙醇与乙醇混合溶液中异丙醇与乙醇的体积比优选为2:1。
在本发明中，所述氧化反应的温度优选为室温，时间优选为0.5h。
本发明优选将所述化合物13溶解于异丙醇和乙醇的混合溶液中，所得体系中化合物13的浓度为0.2g/mL，加入间氯过氧苯甲酸，室温反应0.5h，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物经柱层析分离，得到所述化合物14。
得到化合物14后，当R为-OBn时（即化合物14a），本发明将所述化合物14、乙硫醇和三氟化硼乙醚溶液反应，得到粗产物，将所述粗产物和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述α-Amanitin。
本发明优选将所述化合物14a溶于乙硫醇中，加入三氟化硼乙醚溶液，室温反应1h，减压除去乙硫醇得到粗产物，将所述粗产物溶于氨的甲醇溶液中，室温反应2h，减压除去溶剂，将得到的粗产物经柱层析分离，得到化合物1a。
在本发明中，所述化合物14a与三氟化硼乙醚溶液中三氟化硼的摩尔比优选为1:20；所述化合物14a在乙硫醇中的浓度优选为8mg/mL；所述粗产物在氨的甲醇溶液中浓度优选为0.01g/mL。
当R为-H时（即化合物14b），本发明将所述化合物14和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述Amaninamide。
本发明优选将所述化合物14b溶于氨的醇溶液中，室温反应2h，减压除去溶剂得到粗产物，将所述粗产物经柱层析分离，得到化合物1b。
在本发明中，所述化合物14b在氨的醇溶液中浓度优选为0.01g/mL。
在本发明中，所述氨的醇溶液的浓度均优选为7mol/L；所述氨的醇溶液优选为氨的甲醇溶液。
本发明还提供了一系列中间体，结构如下：
所述化合物9~14中R为-H或-OBn。
本发明还提供了上述技术方案所述的中间体的制备方法，所述中间体的制备方法与上述方案制备所述化合物4~14的方法一致，在此不再赘述。
本发明还提供了上述技术方案所述的中间体在制备环肽毒素类化合物中的应用。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：化合物3的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物2（N-Fmoc-4-羟基脯氨酸）(35.31 g, 100 mmol)，加入200 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴搅拌5min。用注射器加入吡啶 (11.86 g, 150 mmol)，搅拌5 min。用注射器缓慢滴加乙酰氯(11.70 g, 150 mmol)，冰水浴30 min，室温反应1h。待反应结束，用1 N盐酸调节pH至2，并用500 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去二氯甲烷，得到粗产物。粗产物未经进一步纯化，直接用于下一步合成反应。粗产物用400 mL叔丁醇溶解，加入DMAP (1.84 g, 30 mol%)，室温搅拌。将100 mL叔丁醇溶解的(Boc)2O (43.62g, 200mmol)溶液滴加至反应液中，室温反应，TLC监测反应至原料消耗完。待反应结束，减压下除去溶剂叔丁醇，得到粗产物。粗产物用150 mL二氯甲烷溶解，加入150 mL二乙胺脱去Fmoc保护基。TLC监测，至原料消耗殆尽，停止反应。减压除去二氯甲烷和二乙胺混合溶液，得到粗产物，用200~300目硅胶柱层析(体积比乙酸乙酯/石油醚= 40%~50%)得到黄色油状液体15.46 g，收率67.5%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 5.07 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 3.65 (t,J= 7.6 Hz, 1H), 3.15 (dd, J = 12.0, 5.2 Hz, 1H), 2.76 (dd, J = 12.0, 1.5 Hz,1H), 2.00-1.98 (m, 5H), 1.40 (s, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 173.1, 170.1,80.2, 75.0, 59.1, 52.2, 36.4, 27.6, 20.9. HRMS (ESI+) calcd. for C11H20NO4 +(M+H)+: 230.1387; found: 230.1399.
实施例 2：化合物4的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物N-Fmoc-天冬酰胺 (65.60 g, 0.11 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴30 min。随后滴加化合物3 (35.70 g, 0.1 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相三次，用1000mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比乙酸乙酯/石油醚= 50%~60%)得到白色固体化合物4，52.00 g，收率89%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 9.27 (s, 1H), 7.31 – 7.15 (m, 15H), 5.25 (s,1H), 4.24 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 16.9, 11.3 Hz, 2H), 3.68 (dd, J= 11.3, 3.8 Hz, 1H), 2.41 (dd, J = 14.5, 10.9 Hz, 1H), 2.34 – 2.26 (m, 1H),2.20 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 2.11 – 2.03 (m, 1H), 2.01 (s, 3H), 1.89 (d, J =10.8 Hz, 2H), 1.38 (s, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 173.1, 170.3, 169.9,169.6, 145.0, 128.5, 127.4, 126.3, 80.6, 72.7, 69.4, 58.2, 51.5, 49.9, 40.8,33.9, 27.5, 20.9. HRMS (ESI+) calcd. for C34H40N3O6 +(M+H)+: 586.2912; found:586.2896.
实施例 3：化合物5的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物N-Fmoc-半胱氨酸 (64.40 g, 0.11 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物4 (70.70 mg, 0.11 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比乙酸乙酯/石油醚= 75%~80%)得到白色固体化合物5，76.30g，收率82%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.73 (s, 1H), 8.25 (d, J = 7.8 Hz, 1H),7.34 -7.29 (m, 12H), 7.23 (dd, J = 15.4, 7.2 Hz, 10H), 7.16 (d, J = 7.4 Hz,8H), 5.20 (s, 1H), 4.65 (dd, J = 13.0, 8.0 Hz, 1H), 4.21 (t, J = 8.1 Hz, 1H),3.74 (dt, J = 11.6, 7.9 Hz, 2H), 3.13 (dd, J = 7.7, 5.0 Hz, 1H), 2.65 (dd, J= 14.8, 8.9 Hz, 1H), 2.50-2.48 (m, 2H), 2.25 (ddd, J = 20.0, 11.6, 7.1 Hz,2H), 2.05 (ddd, J = 13.4, 7.8, 5.3 Hz, 1H), 1.93 (s, 3H), 1.70 (s, 2H), 1.39(s, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.8, 170.1, 169.9, 169.6, 168.3, 144.7,144.5, 129.1, 128.5, 127.9, 127.4, 126.7, 126.3, 80.7, 72.4, 69.5, 65.9,58.1, 53.8, 51.7, 47.9, 38.0, 37.1, 33.9, 27.5, 20.8. HRMS (ESI+) calcd. forC34H40N3O6 +(M+H)+: 931.4099; found: 931.4084.
实施例 4： 化合物6的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物N-Fmoc-甘氨酸 (32.70 g, 0.11 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物5 (108.70 g, 0.11 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷=0%~0.5%)得到白色固体化合物6，68.10 g，收率69%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.66 (s, 1H), 8.55 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.13(s, 1H), 7.39 – 7.29 (m, 12H), 7.28 – 7.21 (m, 10H), 7.20 – 7.13 (m, 8H),5.21 (s, 1H), 4.73 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.23 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 3.75 (dt, J = 11.5, 8.1 Hz, 2H), 3.13 – 3.05 (m, 2H), 2.63(dd, J = 15.2, 8.5 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 15.1, 4.9 Hz, 1H), 2.40 (d, J = 5.9Hz, 2H), 2.28 – 2.22 (m, 1H), 2.10 – 2.03 (m, 1H), 1.93 (s, 3H), 1.86 (s,2H), 1.41 (s, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.4, 170.1, 170.0, 169.4, 169.3,168.2, 144.7, 144.272, 129.1, 128.5, 128.0, 127.4, 126.7, 126.3, 80.6, 72.4,69.5, 65.7, 58.2, 51.7, 50.2, 47.9, 44.5, 39.5, 37.8, 34.5, 33.8, 27.6, 20.7.HRMS (ESI+) calcd. for C58H62N5O8S+(M+H)+: 988.4314; found: 988.4307.
实施例 5： 化合物7的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物N-Fmoc-异亮氨酸 (35.30 g, 0.11 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物6 (98.70 g, 0.10 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 0%~1%) 得到白色固体化合物7，80.30 g，收率73%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.67 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.16(s, 1H), 8.10 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.33 – 7.30 (m, 12H), 7.25 – 7.23 (m,10H), 7.18 (d, J = 6.7 Hz, 8H), 5.19 (s, 1H), 4.72 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.48(d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.21 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.76 – 3.73 (m, 4H), 3.36 (s,1H), 3.06 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 2.68 – 2.54 (m, 2H), 2.42 (d, J = 5.6 Hz, 1H),2.38 – 2.28 (m, 1H), 2.23 ‒ 2.21 (m, 1H), 2.11 – 2.01 (m, 1H), 1.91 (s, 3H),1.69 (d, J = 30.6 Hz, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.12 – 1.02 (m, 1H), 0.85 (d, J =6.4 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.0 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 174.9, 170.1,169.9, 169.3, 169.1, 168.6, 168.3, 144.6, 144.2, 129.0, 128.5, 127.9, 127.4,126.6, 126.3, 80.6, 72.2, 69.5, 65.7, 59.3, 58.1, 51.6, 50.9, 47.9, 41.9,38.1, 34.1, 33.8, 27.6, 23.7, 20.7, 15.8, 11.6. HRMS (ESI+) calcd. forC64H73N6O9S+(M+H)+: 1101.5104; found: 1101.5122.
实施例 6： 化合物8的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物N-Fmoc-甘氨酸 (32.60 g, 0.11 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物7 (110.00 g, 0.10 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 0%~1.5%) 得到白色固体化合物8，70.60g，收率61%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 8.68 (s, 1H), 8.46 (d, J = 7.4 Hz, 1H),8.32 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.35 – 7.28(m, 12H), 7.25 – 7.23 (m, 10H), 7.18 (d, J = 7.7 Hz, 8H), 5.19 (s, 1H), 4.72(dd, J = 13.7, 7.0 Hz, 1H), 4.46 (dd, J = 13.8, 7.0 Hz, 1H), 4.26 (s, 1H),4.21 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 3.79 – 3.73 (m, 4H), 3.45 – 3.30 (m, 1H), 3.11 (d,J = 6.6 Hz, 2H), 2.65 (dd, J = 15.1, 5.1 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 15.2, 7.4 Hz,1H), 2.50 (s, 1H), 2.40 (dd, J = 11.0, 5.1 Hz, 1H), 2.37 – 2.28 (m, 1H), 2.22(t, J = 9.3 Hz, 1H), 2.10 – 2.03 (m, 1H), 1.98 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 1.90 (d,J = 6.2 Hz, 3H), 1.76 (t, J = 14.7 Hz, 1H), 1.50 – 1.43 (m, 1H), 1.41 (s,9H), 1.10 – 1.00 (m, 1H), 0.84 (d, J = 6.7 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.3 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.7, 171.4, 170.1, 169.9, 169.4, 169.7, 168.4,168.3, 144.7, 144.2, 129.1, 128.6, 128.5, 128.0, 127.4, 126.7, 126.3, 80.6,72.3, 69.5, 65.7, 58.1, 56.5, 51.7, 51.0, 47.8, 44.5, 41.8, 37.9, 37.1, 34.2,33.8, 27.6, 24.3, 20.7, 15.4, 11.2. HRMS (ESI+) calcd. for C66H76N7O10S+(M+H)+:1158.5369; found: 1158.5354.
实施例 7：化合物9a和9b的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸(68.90 g, 0.10 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(12.70 g, 0.11 mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物8 (143.80 g, 0.11 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。未经纯化的粗产物被直接用于下一步脱保护基反应。将粗产物溶解于50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液中，室温搅拌，TLC监测原料消耗完，停止反应。减压除去溶剂和二乙胺，用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 0%~2%) 得到白色固体化合物9a，100.00g，收率69%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.65 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.46 (d, J =7.4 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.02 (d, J = 7.9 Hz,1H), 7.92 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 7.42 (d, J = 8.6 Hz,1H), 7.38 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 7.32- 7.28 (m, 12H), 7.24 – 7.22 (m, 10H),7.18 – 7.15 (m, 8H), 7.10 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.91 (s, 1H),6.72 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.10 – 5.08 (m, 2H), 4.73 – 4.67 (m,1H), 4.48 – 4.42 (m, 1H), 4.24 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 4.19 (t, J = 7.9 Hz, 1H),3.82 – 3.78 (m, 1H), 3.78 – 3.74 (m, 2H), 3.70 (s, 2H), 3.46 (dd, J = 8.6,4.1 Hz, 1H), 3.07 (dd, J = 14.1, 3.7 Hz, 1H), 2.72 – 2.58 (m, 2H), 2.56 -2.52 (m, 1H), 2.37 (dd, J = 11.1, 5.1 Hz, 1H), 2.33 – 2.27 (m, 1H), 2.25 –2.15 (m, 1H), 2.05 (dd, J = 13.6, 6.6 Hz, 1H), 1.88 (s, 3H), 1.73 (s, 2H),1.45 (s, 1H), 1.40 (s, 9H), 1.12 – 1.02 (m, 1H), 0.83 (d, J = 6.7 Hz, 3H),0.78 (t, J = 7.2 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 174.9, 171.2, 170.1, 169.9,169.3, 169.1, 168.7, 168.3, 168.2, 154.4, 144.6, 144.2, 137.7, 136.8, 129.0,128.5, 128.3, 127.9, 127.5, 127.4, 126.6, 126.3, 122.5, 118.9, 110.6, 109.1,96.0, 80.6, 72.2, 69.5, 65.7, 58.1, 56.9, 55.2, 51.6, 50.9, 47.8, 41.9, 41.8,37.9, 36.7, 34.2, 33.8, 30.9, 27.6, 24.2, 20.7, 15.3, 11.1. HRMS (ESI+)calcd. for C84H92N9O12S+(M+H)+: 1450.6581; found: 1450.6591.
参照化合物9a的合成方法，化合物8 (143.80 g, 0.11 mol) 和N-Fmoc-色氨酸(42.60 g, 0.10 mol)反应，并脱去Fmoc保护基得到白色固体化合物9b，104.80g， 78%。1HNMR (600 MHz, DMSO) δ 10.87 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H),8.28 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.06 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.1 Hz,1H), 7.56 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 – 7.31 (m, 13H), 7.24 – 7.23 (m, 8H),7.18 (d, J = 6.9 Hz, 10H), 7.12 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.07 (t, J = 7.2 Hz,1H), 6.97 (t, J = 7.1 Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.73 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.48(d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.26 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 4.21 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 3.82– 3.73 (m, 5H), 3.54 – 3.47 (m, 1H), 3.38 (s, 2H), 3.19 – 3.08 (m, 1H), 2.74(dd, J = 13.8, 9.0 Hz, 1H), 2.64 (d, J = 10.5 Hz, 1H), 2.56 (dd, J = 14.5,7.0 Hz, 1H), 2.39 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 2.37 – 2.27 (m, 1H), 2.22 (s, 1H),2.11 – 2.02 (m, 1H), 1.94 – 1.84 (m, 3H), 1.76 (s, 2H), 1.47 (s, 1H), 1.41(s, 9H), 1.15 – 1.04 (m, 1H), 0.85 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.0 Hz,3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 174.9, 171.3, 170.1, 169.9, 169.4, 169.2, 168.8,168.3, 168.2, 144.7, 144.2, 136.3, 129.1, 128.6, 128.5, 128.0, 127.4, 126.7,126.3, 123.8, 120.9, 118.4, 118.3, 111.3, 110.7, 80.7, 72.3, 69.5, 65.7,58.1, 56.9, 55.3, 51.7, 50.9, 47.8, 41.9, 41.8, 37.9, 36.8, 34.3, 33.8, 30.9,27.6, 24.2, 20.7, 15.4, 11.2. HRMS (ESI+) calcd. for C77H86N9O11S+(M+H)+:1344.6162; found: 1344.6189.
实施例 8：化合物10a和10b的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物16(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物(46.90g, 0.10 mol)，加入500 mL干燥二氯甲烷搅拌溶解，冰水浴反应5 min。加入1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺EDC (12.70 g, 0.11mol)和1-羟基苯并三唑(14.90 g, 0.11 mol)冰水浴反应30 min。随后滴加化合物9a(183.10 g, 0.11 mol)，冰水浴反应30 min。室温反应过夜，TLC监测反应至原料消耗完。饱和碳酸氢钠洗涤有机相，用1000 mL二氯甲烷萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 0%~2%) 得到白色固体化合物10a，152.00 g，收率80%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.66(s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.16 – 8.05(m, 1H), 8.07 – 8.03 (m, 2H), 7.90 – 7.89 (m, 3H), 7.75 (dd, J = 13.3, 7.3Hz, 2H), 7.58 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.55 – 7.49 (m, 2H), 7.47 (d, J = 7.2 Hz,2H), 7.45 – 7.37 (m, 5H), 7.35 – 7.30 (m, 13H), 7.26 – 7.24 (d, J = 6.7 Hz,10H), 7.20 (d, J = 7.0 Hz, 8H), 7.14 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.94(s, 1H), 6.76 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.20 (s, 1H), 5.11 – 5.08 (d, J = 16.4 Hz,3H), 4.84 – 4.74 (m, 2H), 4.71 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 4.55 – 4.46 (m, 2H), 4.38(dd, J = 24.5, 10.2 Hz, 2H), 4.31 (s, 1H), 4.24 (dt, J = 14.8, 7.4 Hz, 2H),4.19 – 4.11 (m, 1H), 4.04 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 4H), 3.75 (s, 2H),3.41 (s, 1H), 3.17 (d, J = 11.0 Hz, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.67 (d, J = 10.7 Hz,1H), 2.60 (s, 1H), 2.42 (s, 1H), 2.35 (s, 1H), 2.23 (s, 1H), 2.13 – 2.04 (m,1H), 1.98 (dd, J = 16.9, 6.9 Hz, 6H), 1.91 (d, J = 8.7 Hz, 3H), 1.79 (s, 1H),1.47 (d, J = 26.7 Hz, 1H), 1.42 (s, 9H), 1.14 (d, J = 26.1 Hz, 1H), 0.87 (s,3H), 0.80 (t, J = 20.4 Hz, 3H), 0.76 (d, J = 5.5 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz,DMSO) δ 171.6, 171.3, 170.5, 170.2, 170.1, 169.9, 169.7, 169.4, 169.2, 168.5,168.4, 168.3, 156.3, 154.5, 144.7, 144.3, 144.0, 143.7, 140.7, 140.6, 137.7,136.7, 129.1, 128.6, 128.5, 128.3, 128.0, 127.7, 127.6, 127.4, 127.2, 126.7,126.3, 125.6, 125.3, 122.5, 122.1, 120.1, 119.0, 109.8, 109.1, 95.9, 80.7,72.3, 71.6, 69.6, 69.5, 66.2, 65.7, 62.9, 58.1, 56.9, 54.9, 54.7, 53.5, 51.7,50.9, 47.9, 46.7, 42.1, 41.8, 39.5, 37.9, 36.8, 35.3, 34.3, 33.9, 27.6, 27.5,24.2, 20.8, 20.7, 20.6, 15.4, 11.2, 10.3. HRMS (ESI+) calcd. forC109H116N10NaO19S+(M+Na)+: 1923.8031; found: 1923.8068.
参照化合物10a的合成方法，化合物9b (180.00 g, 0.11 mol) 和化合物16(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物 (46.90g, 0.10 mol)，反应，并脱去Fmoc保护基得到白色固体化合物10b，147.20 g，收率82%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 10.86 (s, 1H),8.70 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.90(d, J = 6.5 Hz, 3H), 7.77 (dd, J = 16.4, 6.9 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 7.2 Hz,1H), 7.60 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.43 (s, 2H), 7.34 (s, 14H), 7.28 – 7.19 (m,20H), 7.08 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.74 (s, 2H), 5.22 (s, 1H),4.86 – 4.69 (m, 3H), 4.53 (s, 2H), 4.42 (d, J = 11.0 Hz, 2H), 4.33 (s, 1H),4.26 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 4.17 (s, 1H), 4.05 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 3.81 (d, J= 33.7 Hz, 6H), 3.44 (s, 1H), 3.24 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 3.12 (s, 1H), 2.66(d, J = 39.3 Hz, 2H), 2.57 – 2.50 (m, 1H), 2.42 (d, J = 46.2 Hz, 2H), 2.24(s, 1H), 2.08 (s, 1H), 2.00 (d, J = 11.4 Hz, 6H), 1.91 (s, 3H), 1.82 (s, 1H),1.51 (s, 1H), 1.43 (s, 9H), 1.14 (s, 1H), 0.82 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO)δ 171.7, 171.3, 170.6, 170.2, 170.1, 169.9, 169.7, 169.4, 169.2, 168.6,168.4, 168.3, 156.3, 144.7, 144.3, 144.1, 143.7, 140.8, 140.7, 136.2, 129.1,128.6, 128.0, 127.7, 127.6, 127.4, 127.2, 126.7, 126.4, 125.6, 125.3, 123.7,120.8, 120.1, 118.4, 118.2, 111.3, 109.9, 80.7, 72.3, 71.6, 69.6, 66.2, 65.8,63.0, 58.2, 56.9, 54.9, 54.7, 53.5, 51.7, 51.0, 47.9, 46.7, 42.2, 41.9, 39.5,38.0, 36.8, 35.4, 34.3, 33.9, 28.0, 27.6, 24.3, 20.8, 20.7, 20.6, 15.4, 11.2,10.4. HRMS (ESI+) calcd. for C102H110N10NaO18S+(M+Na)+: 1817.7612; found:1817.7625.
实施例 9： 化合物11a和11b的合成，原理如下所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子，Schlenk技术置换气三次。N2气环境下向2500 mL圆底烧瓶加入化合物10a (57.00 g, 0.03 mol)，加入500 mL干燥N,N-二甲基甲酰胺搅拌溶解，室温搅拌。配置2 mg/mL的碘单质DMF溶液，并用注射器向反应瓶中缓慢滴加4equiv碘溶液。室温反应2h，反应停止加入过量硫代硫酸钠溶液淬灭反应。减压除去DMF，2000 mL乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂，得到粗产物。用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 0%~2%)，得到白色固体化合物11a，30.60 g，收率62%。1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.06 (d, J = 49.8 Hz, 1H), 8.63(s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.28 (d, J = 45.1 Hz, 1H), 8.18 – 7.98 (m, 3H), 7.89(s, 2H), 7.74 – 7.74 (m, 2H), 7.65 – 7.60 (m, 1H), 7.52 – 7.32 (m, 10H), 7.26– 7.24 (m, 6H), 7.16 (t, J = 13.4 Hz, 9H), 6.85 (s, 1H), 6.77 (d, J = 9.1 Hz,1H), 5.20 (s, 1H), 5.13 – 5.09 (m, 2H), 4.77 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.48 –4.26 (m, 3H), 4.25 – 4.21 (m, 2H), 4.17 – 4.09 (m, 1H), 4.03 (s, 2H), 3.88(s, 2H), 3.71 (d, J = 20.8 Hz, 4H), 3.32 (s, 2H), 2.94 (d, J = 8.9 Hz, 2H),2.61 (s, 2H), 2.53 – 2.46 (m, 1H), 2.37 (s, 1H), 2.28 (s, 1H), 2.06 (s, 1H),2.01 – 1.83 (m, 10H), 1.54 (s, 1H), 1.39 (s, 9H), 1.20 – 1.06 (m, 1H), 0.96 –0.60 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.1, 172.1, 171.4, 170.5, 170.4,170.2, 170.1, 169.9, 169.9, 169.6, 168.7, 168.6, 168.3, 156.3, 155.3, 152.3,144.7, 144.6, 144.0, 143.7, 143.6, 140.7, 140.6, 139.4, 137.7, 137.5, 132.2,128.9, 128.6, 128.4, 128.3, 127.8, 127.6, 127.5, 127.4, 127.3, 127.1, 126.3,125.5, 125.3, 123.8, 121.8, 121.4, 120.1, 116.8, 111.6, 109.7, 95.3, 80.7,72.5, 71.5, 70.0, 69.5, 69.4, 66.2, 62.9, 59.7, 58.8, 58.2, 54.9, 54.7, 51.8,48.1, 46.7, 42.9, 42.4, 39.5, 37.7, 35.2, 33.9, 27.6, 24.5, 20.7, 20.5, 15.5,11.0, 10.2, 10.0. HRMS (ESI+) calcd. for C90H100N10NaO19S+(M+Na)+: 1679.6779;found: 1679.6795.
参照化合物11a的合成方法，得到白色固体化合物11b，34.40 g，收率74%。1H NMR(600 MHz, DMSO) δ 11.18 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.25(d, J = 40.3 Hz, 1H), 8.10 (d, J = 34.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 14.3 Hz, 1H),7.89 (s, 2H), 7.73 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 7.47 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 7.41 (d, J= 3.0 Hz, 2H), 7.37 – 7.28 (m, 3H), 7.26 – 7.24 (m, 7H), 7.18 – 7.15 (m, 9H),7.12 - 7.09 (m, 1H), 7.03 – 6.94 (m, 1H), 5.18 (s, 1H), 4.98 – 4.83 (m, 1H),4.75 (s, 1H), 4.67 (d, J = 5.9 Hz, 1H), 4.41 – 4.29 (m, 3H), 4.26 – 4.16 (m,3H), 4.16 – 4.04 (m, 1H), 4.05 – 4.01 (m, 3H), 3.89 – 3.86 (d, J = 15.7 Hz,2H), 3.70 (d, J = 18.8 Hz, 4H), 3.18 – 3.16 (m, 1H), 3.04 – 2.90 (m, 2H),2.62 – 2.50 (m, 2H), 2.31 (d, J = 54.1 Hz, 2H), 2.07 (s, 1H), 1.99 – 1.97 (m,5H), 1.94 – 1.92 (m, 4H), 1.89 – 1.84 (m, 1H),1.53 (s, 1H), 1.37 (s, 9H),1.15 – 1.12 (m, 1H), 0.90 – 0.81 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.0,171.4, 170.4, 170.3, 170.2, 170.1, 169.9, 169.8, 169.7, 169.7, 168.6, 168.3,162.3, 144.7, 143.9, 140.7, 136.8, 128.6, 127.6, 127.4, 127.1, 126.3, 125.3,121.9, 120.0, 118.6, 116.2, 110.9, 80.7, 72.5, 71.9, 71.5, 69.5, 66.2, 65.9,62.9, 62.9, 59.7, 58.8, 58.1, 54.8, 51.8, 48.1, 46.6, 42.8, 42.4, 37.9, 37.7,35.76, 35.2, 33.9, 30.7, 27.6, 24.5, 20.7, 20.6, 15.4, 14.1, 11.0, 10.0. HRMS(ESI+) calcd. for C83H94N10NaO18S+(M+Na)+: 1573.6360; found: 1573.6369.
实施例 10： 化合物12a和12b的合成，原理如下式所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物11a(49.70 g, 0.03 mol)，加入过量50wt%二乙胺的二氯甲烷溶液，室温反应2 h，反应结束，减压除去溶剂得到粗产物。用200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 2%~4%) 得到白色固体化合物12a，34.80 g，收率81%。
1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.10 – 10.94 (m, 1H), 11.00 (s, 1H), 8.60(s, 1H), 8.41 – 8.35 (m, 1H), 8.05 – 8.02 (m, 1H), 7.94 (d, J = 37.2 Hz, 1H),7.88 – 7.80 (m, 1H), 7.78 – 7.68 (m, 1H), 7.57 (d, J = 22.5 Hz, 1H), 7.51 (d,J = 12.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.33(dd, J = 13.5, 6.7 Hz, 2H), 7.26 -724 (m, 6H), 7.18 – 7.13 (m, 9H), 6.84 (s,1H), 6.78 – 6.71 (m, 1H), 5.17 (s, 1H), 5.14 – 5.01 (m, 2H), 4.71 – 4.59 (m,2H), 4.44 – 4.25 (m, 1H), 4.21 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 4.06 (dd, J = 15.8, 9.1Hz, 2H), 3.96 – 3.82 (m, 3H), 3.69 (d, J = 16.5 Hz, 4H), 3.28 (s, 2H), 3.18(s, 1H), 2.98 – 2.81 (m, 2H), 2.58 (s, 2H), 2.28 (s, 1H), 2.10 – 2.03 (m,1H), 2.02 – 1.86 (m, 10H), 1.83 – 1.74 (m, 2H), 1.53 (s, 1H), 1.39 (s, 9H),1.14 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 0.76 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.4, 171.3,170.9, 170.4, 170.3, 170.0, 169.9, 169.8, 169.6, 169.5, 168.6, 168.3, 155.2,144.7, 137.5, 128.6, 128.4, 128.3, 127.8, 127.6, 127.4, 127.3, 126.3, 123.7,117.0, 111.5, 109.7, 95.3, 80.7, 72.4, 70.0, 69.5, 66.3, 58.6, 58.1, 54.8,51.7, 48.1, 42.3, 39.5, 35.2, 33.9, 27.6, 24.3, 22.4, 20.7, 15.5, 11.1, 10.4,9.5. HRMS (ESI+) calcd. for C75H91N10O17S+(M+H)+: 1435.6279; found: 1435.6289.
参照化合物12a的合成方法，得到白色固体化合物12b，22.32 g，收率84%。1H NMR(600 MHz, DMSO) δ 11.23 (d, J = 31.1 Hz, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.61 (d, J = 30.2Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.33 – 8.24 (m, 1H), 8.05 – 7.97 (m, 2H), 7.89 – 7.79(m, 1H), 7.76 – 7.72 (m, 1H), 7.68 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.30 –7.24 (m, 6H), 7.20 – 7.12 (m, 9H), 7.04 – 6.98 (m, 1H), 5.19 (s, 1H), 4.89 –4.79 (m, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.69 – 4.51 (m, 2H), 4.28 (d, J = 11.4 Hz, 1H),4.21 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 4.15 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 4.09 – 3.99 (m, 1H), 3.97– 3.81 (m, 3H), 3.78 – 3.59 (m, 4H), 3.53 – 3.40 (m, 1H), 3.27 (d, J = 11.6Hz, 1H), 3.23 – 3.11 (m, 1H), 3.00 – 2.84 (m, 1H), 2.74 (s, 1H), 2.59 (s,1H), 2.36 – 2.24 (m, 1H), 2.15 – 1.99 (m, 4H), 1.98 – 1.90 (m, 8H), 1.84 (d,J = 14.4 Hz, 1H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 1.39 (s, 9H), 1.20 – 1.08 (m,1H), 0.96 – 0.64 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 173.6, 171.8, 171.6, 171.4,170.8, 170.6, 170.6, 170.5, 170.31, 170.2, 170.1, 170.0, 169.1, 168.9, 168.8,168.7, 145.2, 145.2, 137.6, 129.1, 127.9, 126.8, 125.7, 122.6, 119.5, 118.9,117.4, 111.4, 81.2, 73.0, 72.5, 69.9, 68.6, 66.9, 63.5, 60.2, 58.6, 55.4,54.4, 52.3, 48.6, 44.2, 42.6, 38.1, 35.9, 35.6, 34.4, 28.1, 24.4, 22.9, 21.2,16.1, 11.7, 10.0, 8.7. HRMS (ESI+) calcd. for C68H85N10O16S+(M+H)+: 1329.5860;found: 1329.5867.
实施例 11：化合物13a和13b的合成，原理如下式所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物12a(28.70 g, 0.02 mol)，加入200 mL三氟乙酸，室温搅拌0.5 h，减压除去三氟乙酸得到粗产物。粗产物未进一步纯化，直接用于下一步合成。粗产物溶解于干燥的干燥N,N-二甲基甲酰胺，零度搅拌5 min，随后加入二异丙基乙胺(6.90 g, 2 equiv)和2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(15.20 g, 2 equiv)。升温至室温，反应12 h。待反应结束，减压除去N,N-二甲基甲酰胺，得到粗产物。粗产物通过200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 4%~6%) 纯化得到白色固体化合物13a，13.56 g，收率61%。1H NMR (600MHz, DMSO) δ 11.08 (d, J = 42.1 Hz, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.33 (d,J = 12.6 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 11.8 Hz, 2H), 8.00 – 7.93 (m, 1H), 7.92 – 7.83(m, 2H), 7.52 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.46 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.40 (t, J = 7.4Hz, 2H), 7.33 – 7.31 (m, 2H), 7.16 (dd, J = 17.6, 8.8 Hz, 2H), 6.82 – 6.76(m, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.15 – 5.07 (m, 3H), 4.92 – 4.81 (m, 2H), 4.75 (s,1H), 4.57 (d, J = 9.8 Hz, 1H), 4.36 – 4.26 (m, 2H), 4.24 – 4.17 (m, 1H), 4.13– 4.01 (m, 43H), 3.89 (dd, J = 17.0, 6.7 Hz, 1H), 3.72 (s, 1H), 3.52 – 3.42(m, 2H), 3.21 – 3.16 (m, 2H), 3.05 – 2.91 (m, 3H), 2.65 -2.59 (m, 1H), 2.26(s, 1H), 2.11 (t, J = 11.0 Hz, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.95 (s, 3H),1.56 (s, 2H), 1.13 – 1.06 (m, 2H), 0.95 (dd, J = 20.7, 9.5 Hz, 3H), 0.83 (t,J = 6.9 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 6.0 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.9,171.9, 171.8, 171.1, 171.1, 170.6, 170.2, 169.9, 169.8, 169.8, 169.7, 169.6,168.1, 167.5, 162.2, 158.7, 155.3, 151.9, 137.2, 128.4, 127.8, 127.4, 124.9,123.6, 122.5, 121.7, 116.4, 109.9, 72.3, 71.0, 70.2, 69.5, 62.9, 61.8, 59.1,54.9, 54.3, 53.0, 52.8, 52.5, 50.5, 39.5, 35.7, 34.4, 30.8, 28.9, 25.2, 20.9,20.7, 20.6, 14.8, 11.2, 10.6. HRMS (ESI+) calcd. for C52H66N10O16NaS+(M+Na)+:1141.4271; found: 1141.4280.
参照化合物13a的合成方法，得到白色固体化合物13b，6.25 g，收率62%。1H NMR(600 MHz, DMSO) δ 11.25 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.35 (s, 1H),8.06 (d, J = 14.9 Hz, 2H), 7.98 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 7.0 Hz,2H), 7.58 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.26 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.12(t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.05 – 6.96 (m, 1H), 5.36 (s, 1H), 5.18 (d, J = 13.7 Hz,1H), 4.91 (s, 1H), 4.86 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.59(t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.37 – 4.28 (m, 2H), 4.19 (dd, J = 18.4, 7.9 Hz, 1H),4.06 (dd, J = 14.9, 9.6 Hz, 3H), 3.90 (dd, J = 17.1, 6.9 Hz, 1H), 3.73 (s,1H), 3.46 (d, J = 17.8 Hz, 2H), 3.29 – 3.19 (m, 1H), 3.17 (s, 1H), 3.09 –2.98 (m, 2H), 2.90 (dd, J = 14.0, 7.3 Hz, 2H), 2.77 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 2.73(s, 1H), 2.62 (s, 1H), 2.27 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 2.20 – 2.07 (m, 1H), 2.03(s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.56 (d, J = 6.9 Hz, 2H), 1.10 (d, J =6.4 Hz, 2H), 0.95 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 6.8 Hz, 3H), 0.79 (d, J =6.0 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.0, 171.9, 171.1, 170.7, 170.2,169.9, 169.8, 169.7, 169.6, 168.2, 167.5, 136.5, 127.0, 124.3, 122.3, 120.1,118.7, 116.1, 111.2, 72.3, 71.2, 62.9, 61.9, 59.1, 54.9, 53.0, 52.9, 52.5,50.5, 42.3, 41.4, 38.3, 34.9, 34.4, 34.3, 33.6, 30.6, 29.0, 25.2, 21.0, 20.7,20.6, 14.8, 11.2, 11.0, 10.6. HRMS (ESI+) calcd. for C45H60N10NaO15S+(M+Na)+:1035.3853; found: 1035.3869.
实施例 12：化合物14的合成，原理如下式所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物13a (5.60g, 0.005 mol)，加入300 mL异丙醇和乙醇的混合溶液(异丙醇和乙醇体积比= 2:1)，冰水浴搅拌10 min。间氯过氧苯甲酸的异丙醇和乙醇的混合溶液滴加到反应液中，零度反应30min。待反应结束，减压除去异丙醇和乙醇的混合得到粗产物。粗产物通过200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 5%~6%)纯化得到白色固体化合物14a，3.90 g，收率70%。
参照化合物14a的合成方法，得到白色固体化合物14b，3.00 g，收率73%。1H NMR(600 MHz, DMSO) δ 11.67 (s, 1H), 8.88 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.30(s, 1H), 8.26 (d, J = 10.5 Hz, 2H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J =10.4 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.44 – 7.38(m, 2H), 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.09 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.33 (s, 1H),5.21 (dd, J = 19.6, 8.7 Hz, 1H), 5.04 – 4.99 (m, 1H), 4.91 (s, 1H), 4.85 (dd,J = 10.4, 3.3 Hz, 1H), 4.76 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.32 – 4.24 (m, 3H), 4.07 –4.00 (m, 3H), 3.89 (dd, J = 17.3, 7.1 Hz, 1H), 3.70 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 3.48(d, J = 17.0 Hz, 2H), 3.41 (d, J = 18.1 Hz, 1H), 3.25 (dd, J = 15.1, 6.8 Hz,2H), 3.10 (t, J = 13.3 Hz, 1H), 2.93 (dd, J = 10.1, 6.6 Hz, 2H), 2.79 – 2.69(m, 1H), 2.57 – 2.51 (m, 1H), 2.24 (dd, J = 13.6, 6.7 Hz, 1H), 2.12 (d, J =12.8 Hz, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.98 (s, 3H), 1.95 (s, 3H), 1.58 – 1.50 (m, 2H),1.12 – 1.03 (m, 2H), 0.92 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.79(d, J = 6.5 Hz, 3H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 172.0, 171.7, 171.2, 170.5,170.3, 170.2, 170.1, 169.8, 169.7, 169.6, 167.9, 166.9, 137.4, 132.3, 127.2,123.2, 121.3, 119.5, 112.3, 110.8, 72.3, 71.1, 62.9, 61.9, 59.1, 52.9, 52.6,52.4, 50.7, 49.9, 42.3, 41.1, 39.5, 36.8, 34.7, 34.6, 34.5, 32.9, 29.2, 25.2,20.9, 20.7, 20.5, 14.8, 11.1, 10.8. HRMS (ESI+) calcd. for C45H60N10O16NaS+(M+Na)+: 1051.3802; found: 1051.3816.
实施例 13：化合物1a的合成，原理如下式所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物14a (4.00g, 0.0045 mol)，加入乙硫醇溶液，随后加入三氟化硼乙醚。反应2h后，减压除去溶剂得到脱去苄基的粗产物。随后将粗产物加入7N氨甲醇溶液，室温搅拌2h。TLC监测反应情况至原料耗尽，减压除去氨甲醇溶液得到产物α-Amanitin 1a 1.883 g，收率为50%。
1H NMR (600 MHz, DMSO) δ 11.25 (s, 1H), 9.21 (s, 1H), 8.77 (t, J =5.5 Hz, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.24 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 8.21 (s,1H), 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 9.8 Hz,1H), 7.42 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.61 (d, J = 8.6Hz, 1H), 5.18 (s, 1H), 5.09 (dd, J = 19.7, 8.4 Hz, 1H), 4.98 – 4.92 (m, 1H),4.84 (dd, J = 9.8, 4.2 Hz, 1H), 4.65 (s, 1H), 4.41 – 4.36 (m, 3H), 4.25 (ddd,J = 27.6, 14.9, 8.0 Hz, 2H), 3.90 (dd, J = 17.3, 7.3 Hz, 1H), 3.81 (d, J =9.3 Hz, 1H), 3.73 (d, J = 11.1 Hz, 1H), 3.68 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.45 – 3.44(m, 3H), 3.41 (s, 1H), 3.32 – 3.27 (m, 1H), 3.23 – 3.18 (m, 1H), 3.17 – 3.15(m, 1H), 3.07 (t, J = 13.2 Hz, 1H), 2.98 – 2.91 (m, 2H), 2.74 (t, J = 13.8Hz, 1H), 2.22 – 2.15 (m, 2H), 1.86 (t, J = 11.0 Hz, 1H), 1.59 – 1.50 (m, 2H),1.15 – 1.06 (m, 1H), 0.85 – 0.77 (m, 9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.9,171.7, 171.1, 171.0, 170.8, 170.2, 169.9, 167.8, 167.0, 154.6, 138.8, 129.7,122.0, 120.7, 111.5, 110.7, 96.7, 71.9, 68.6, 63.5, 62.1, 59.2, 55.8, 54.9,53.9, 52.7, 50.8, 50.0, 48.6, 42.4, 41.3, 37.8, 37.3, 34.6, 33.4, 29.2, 25.2,14.7, 11.4, 10.7.
化合物1b的合成，原理如下式所示：
取2500 mL圆底烧瓶，放入磁力搅拌子。向2500 mL圆底烧瓶加入化合物14b (3.00g, 0.003mol)，加入7N氨甲醇溶液，室温搅拌2h。TLC监测反应情况至原料耗尽，减压除去氨甲醇溶液得到粗产物。粗产物通过200~300目硅胶柱层析(体积比甲醇/二氯甲烷= 10%~15%)纯化得到白色固体化合物Amaninamide 1b，1.92 g，收率74%。1H NMR (600 MHz,DMSO) δ 11.80 – 11.03 (m, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.57 (s,1H), 8.40 (s, 1H), 8.29(d, J = 10.3 Hz, 1H), 8.22 (d, J = 23.3 Hz, 1H), 7.94 (t, J = 12.5 Hz, 1H),7.86 (dd, J = 26.5, 7.9 Hz, 1H), 7.69 – 7.62 (m, 2H), 7.40 (d, J = 7.7 Hz,2H), 7.18 (dd, J = 19.6, 11.9 Hz, 1H), 7.08 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 5.33 – 5.22(m, 1H), 5.16 (dd, J = 19.6, 8.3 Hz, 1H), 5.04 – 4.96 (m, 1H), 4.85 (dd, J =9.7, 4.2 Hz, 1H), 4.66 (s, 1H), 4.44 – 4.369 (m, 3H), 4.30 – 4.18 (m, 2H),3.90 (dd, J = 17.3, 7.3 Hz, 1H), 3.79 (dd, J = 29.6, 10.1 Hz, 2H), 3.68 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 3.50 – 3.35 (m, 8H), 3.31 (dd, J = 10.9, 5.7 Hz, 8H), 3.28 –3.19 (m, 11H), 3.13 (d, J = 13.2 Hz, 1H), 2.95 (t, J = 10.5 Hz, 2H), 2.79(dd, J = 27.3, 10.7 Hz, 2H), 2.23 – 2.16 (m, 2H), 1.86 (t, J = 10.9 Hz, 1H),1.55 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 1.13 – 1.04 (m, 2H), 0.80 (dd, J = 22.1, 5.0 Hz,9H).13C NMR (151 MHz, DMSO) δ 171.9, 171.7, 171.21, 171.0, 170.8, 170.2,169.9, 167.9, 167.0, 137.4, 132.4, 127.2, 123.1, 121.5, 119.4, 112.3, 110.9,71.9, 68.7, 63.5, 62.10, 59.2, 58.9, 55.8, 54.0, 52.6, 50.9, 49.9, 42.4,41.7, 41.0, 39.5, 37.3, 34.6, 33.4, 29.2, 25.2, 14.8, 11.4, 10.7. HRMS (ESI+)calcd. for C39H54N10NaO13S+(M+Na)+: 925.3482; found: 925.3489.
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并非对本发明作任何形式上的限制。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种环肽毒素类化合物α-Amanitin和/或Amaninamide的制备方法，所述α-Amanitin具有式1a所示的结构，所述Amaninamide具有式1b所示的结构：
式1a、/>式1b；
其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将化合物2进行乙酰化反应和酯化反应，得到化合物3；
步骤2：将所述化合物3进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物4；
步骤3：将所述化合物4进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物5；
步骤4：将所述化合物5进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物6；
步骤5：将所述化合物6进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物7；
步骤6：将所述化合物7进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物8；
步骤7：将所述化合物8进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物9；
步骤8：将所述化合物9进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：将所述化合物10以碘介导的方式进行碳硫键关环，得到化合物11；
步骤10：将所述化合物11进行脱保护反应，得到化合物12；
步骤11：将所述化合物12进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13进行氧化反应，得到化合物14；
步骤13：将所述化合物14进行脱保护反应，得到所述环肽毒素类化合物α-Amanitin和Amaninamide；
所述化合物2~14的结构如下：
所述化合物9~14中R为-H或-OBn。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将所述化合物2、吡啶、乙酰氯和有机溶剂混合进行乙酰化反应，将所得乙酰化产物与N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯混合进行酯化反应，得到所述化合物3；
步骤2：将所述化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物4；
步骤3：将所述化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物5；
步骤4：将所述化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物6；
步骤5：将所述化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物7；
步骤6：将所述化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物8；
步骤7：将所述化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到所述化合物9；所述化合物15为N-Fmoc-6-苄氧基色氨酸或N-Fmoc-色氨酸；
步骤8：将所述化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和有机溶剂混合进行缩合反应和脱保护反应，得到化合物10；
步骤9：保护气氛下，将所述化合物10和碘的有机溶液混合进行碳硫键关环，得到所述化合物11；
步骤10：将所述化合物11和有机溶剂混合进行脱保护反应，得到所述化合物12；
步骤11：将所述化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和有机溶剂混合进行脱保护反应和缩合反应，得到化合物13；
步骤12：将所述化合物13、间氯过氧苯甲酸和有机溶剂混合进行氧化反应，得到所述化合物14；
步骤13：
当R为-OBn时，将所述化合物14、乙硫醇和三氟化硼乙醚溶液反应，得到粗产物，将所述粗产物和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述α-Amanitin；
当R为-H时，将所述化合物14和氨的醇溶液混合进行脱保护反应，得到所述Amaninamide。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中化合物2、乙酰氯和吡啶的摩尔比为1:1~3:1~5；所述化合物2、N,N-二甲基吡啶和二碳酸二叔丁酯的摩尔比为1:0.1~1:1~5。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中化合物3、N-Fmoc-天冬酰胺、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤3中化合物4、N-Fmoc-半胱氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤4中化合物5、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤5中化合物6、N-Fmoc-异亮氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤6中化合物7、N-Fmoc-甘氨酸、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤7中化合物8、化合物15、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1；
所述步骤8中化合物9、(2S,3R,4R)-4,5-二羟基异亮氨酸衍生物、1-羟基苯并三唑和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1.1:1.1:1.1。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤9中化合物10与碘的有机溶液中碘单质的摩尔比为1:4，所述碘的有机溶液的浓度为2mg/mL。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤10中有机溶剂为二乙胺的二氯甲烷溶液，所述二乙胺的二氯甲烷溶液中二乙胺的质量分数为50%，所述化合物11在二乙胺的二氯甲烷溶液中的浓度为0.1g/mL。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤11中化合物12、二异丙基乙基氨、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯的摩尔比为1:2.2:2。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤13中氨的醇溶液的浓度均为7mol/L。
9.根据权利要求1所述的制备方法得到的中间体，其特征在于，结构如下：
所述化合物9~14中R为-H或-OBn。
10.权利要求9所述的中间体在制备环肽毒素类化合物中的应用。
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