CN117813321A - 视网膜病症 - Google Patents

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CN117813321A CN202280055899.XA CN202280055899A CN117813321A CN 117813321 A CN117813321 A CN 117813321A CN 202280055899 A CN202280055899 A CN 202280055899A CN 117813321 A CN117813321 A CN 117813321A
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本发明涉及视网膜病症，并且涉及基因构建体和包含此类构建体的重组载体，以及它们在用于治疗、预防或改善多种视网膜病症的基因治疗方法中的用途。所述构建体和载体尤其可用于治疗湿性年龄相关性黄斑变性(湿性‑AMD)，即新生血管性年龄相关性黄斑变性。本发明还涉及所述构建体和载体用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤的用途。本发明还涉及药物组合物本身，以及它们用于治疗、预防或改善视网膜病症以及用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤的用途。

Description

视网膜病症
本发明涉及视网膜病症，并且涉及基因构建体和包含此类构建体的重组载体，以及它们在用于治疗、预防或改善多种视网膜病症的基因治疗方法中的用途。所述构建体和载体尤其但不排他地可用于治疗湿性年龄相关性黄斑变性(湿性AMD)，即新生血管性年龄相关性黄斑变性。本发明还涉及构建体和载体用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤的用途。本发明还涉及药物组合物本身，以及它们在治疗、预防或改善视网膜病症以及用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤中的用途。
黄斑变性，也称为年龄相关性黄斑变性(AMD)，是50岁及以上人群中的一种常见眼部疾病，影响黄斑(视网膜的一小部分)[1-3]。黄斑用于中央精细视力(central anddetailed vision)，这是诸如阅读和驾驶的活动所必需的。AMD是导致发达国家成年人永久性、不可逆的视力丧失的主要原因[4]，影响英国约600,000人[5]，2013年估计是继白内障、早产和青光眼之后第四大最常见的失明原因[6]。2015年，AMD预计影响全球620万人[7]。50岁至60岁之间的人中有约0.4％患有AMD，60岁至70岁的人中这一比例上升到0.7％，70岁至80岁的人中这一比例为2.3％，80岁以上的人中这一比例接近12％[1]。因此，随着人口老龄化，AMD的发病率也在上升[8]。AMD可诊断为“干性”(非新生血管性)或“湿性”(渗出性或新生血管性)AMD[1,2]。干性AMD或地图样萎缩是AMD的较常见形式，占病例的90％。干性AMD通常会导致较慢的视力丧失，而湿性AMD会导致视力相对突然的变化，导致严重的视力丧失[1,2]。
加拿大的一项研究得出结论，中度AMD导致生活质量下降40％，这种下降类似于与永久性肾透析或严重心绞痛相关的生活质量下降。非常严重的AMD会导致生活质量下降63％，这种下降与患有晚期前列腺癌、遭受无法控制的疼痛或严重中风导致卧床不起、大小便失禁并需要持续护理的个体的生活质量下降相当[9]。症状可能发展缓慢，特别是如果疾病仅出现在一只眼睛中，但随着病情的进展，视敏度(visual acuity)会恶化，导致个体视野中出现间隙或黑点(像眼镜上的污点)。此外，阅读时文字可能会消失，诸如门框和灯柱的直线可能会变形或弯曲，并且颜色会出现褪色。当从黑暗环境移动到明亮环境时，受试者也可能会发现难以适应。虽然AMD不会导致完全失明，但中心视力的丧失使日常活动极具挑战性。例如，识别面孔、驾驶和阅读变得困难[1-3]，并且已有报道称，有些个体会出现视觉幻视[10]。
湿性AMD是黄斑下新血管生长(新血管形成)的结果，在血管形成过程中，血液和液体渗漏到视网膜中，导致组织损伤[11]。预防措施包括锻炼、良好饮食和不吸烟[12]。抗氧化维生素和矿物质的作用有限[13]，并且目前尚无可以使丧失视力恢复的治愈方法或治疗方法[1-3]。
VEGF-A是一种同二聚体糖蛋白，其由神经胶质细胞、神经节细胞和上皮细胞(包括眼睛的视网膜色素上皮(RPE))和星形胶质细胞产生和分泌[14,15]。由单个8-外显子的VEGF-A的mRNA的选择性剪接产生多种VEGF-A同工型，包括四种主要形式VEGF-121、VEGF-165、VEGF-189和VEGF-206，它们表现出不同水平的肝素结合[14,15]。VEGF-A同工型在血管发育中发挥着关键的生理作用，并且对于神经元的存活也很重要。
目前靶向血管内皮生长因子(VEGF)途径的治疗包括单克隆抗体或其他VEGF中和片段(雷珠单抗(ranibizumab)、/贝伐珠单抗(bevacizumab)、/>/布洛赛珠单抗/>)、DNA适配体(aptamer)(哌加他尼)或重组VEGF捕获蛋白(阿柏西普(aflibercept)，/>)，这些都已被证明可以限制视力的丧失[16-19]。现在这些治疗比更具侵入性的激光凝固术或者光动力早期治疗选项都更有利。
然而，一些患者表现出对抗-VEGF治疗的内在耐药性，伴有持续性液体或反复渗出[20]。此外，进展期疾病还涉及视网膜色素上皮(RPE)局灶区域损失、视网膜下或RPE下出血以及视网膜下纤维化。目前仅靶向VEGF途径的策略并不能解决这些问题，因此还有很大的改进空间[20,21]。
此外，最近的一项多中心研究检查了抗VEGF治疗在1185名湿性AMD患者中的效果，结果发现，截止到第一年，用抗-VEGF药物治疗的眼睛中有约三分之一出现视网膜下瘢痕，截止到第二年年底，患者中这一比例上升至约一半[21]。诱导新血管形成可导致炎性细胞和成纤维细胞的募集，损伤触发了上皮细胞向肌成纤维细胞的转化[22]。总之，这些细胞产生上皮-间质转化(EMT)，在此它们可以增殖并覆盖损伤区域[22]。慢性炎症会导致持久的瘢痕。
黄斑纤维化会在新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)中引起不可挽回的视力丧失，即使在采用抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗的情况下。纤维化病理生理学中涉及的一个因素是结缔组织生长因子/细胞通讯网络-2(CTGF/CCN2)[23]。CTGF是一种38kDa的富含半胱氨酸的分泌型蛋白，首先发现于人脐静脉内皮细胞中，并且是生长因子CCN家族的成员[24-27]。CTGF由四个相连的富含半胱氨酸的结构域(I–IV)组成，排序是从N-端的胰岛素样生长因子结合蛋白结构域(IGFBP，结构域I)、von Willebrand C型重复序列(vWC，结构域II)，然后是血小板应答蛋白1型重复序列(hrombospondin type1 repeat)(TSP，结构域III)，最后是具有半胱氨酸结基序的C-端结构域IV[24-27]。
已经证明CTGF可诱导成纤维细胞聚集的胶原基质收缩并增加包括胶原蛋白和纤连蛋白在内的细胞外基质组分[26,27]。CTGF的产生和释放通过转化生长因子β(TGF-β)来诱导，导致包括胆道纤维化和糖尿病性视网膜病变在内的疾病中的纤维化[28-30]。尚未确定负责促纤维化作用的具体CTGF受体，但是CTGF已被证明与其他几种生长因子受体非特异性结合，例如胰岛素生长因子-2受体[31]、成纤维细胞生长因子受体-2[32]、表皮生长因子受体[33]、整合素[34-36]和TrkA受体[37]。CTGF持续存在于视网膜脱离后视网膜下腔中积聚的液体中[38]。对于完全活性，全长CTGF似乎必须被细胞外内肽酶切割。切割释放出蛋白的C-端部分(包含结构域III-IV)和N-端部分(由结构域I-II组成)。N-端结构域被认为可以作为CTGF活性的抑制剂起作用[39]。
越来越多的证据表明，补体参与黄斑纤维化的进展。在AMD患者中已经观察到了C3a、C3d、Bb和C5a血浆水平的升高[40-42]。特别是，在一项96名nAMD患者的研究中，显示补体C3a、C4a和C5a的血浆水平显著高于对照组，尤其是在患有视网膜下纤维化的个体中[42]。此外，在部分响应于抗VEGF治疗的nAMD中检测到较高的C3a血浆水平。
此外，补体系统(CS)是抵抗微生物等外来病原体的先天免疫系统的一部分[43-45]。补体系统(CS)由三种生物化学途径组成：经典途径(CP)、凝集素途径(LP)和旁路途径(AP)，每条途径具有不同的触发因素。虽然每条途径都可以由单独的组分激活，但这些途径都汇聚于一种称为补体因子3(C3)的关键蛋白组分。
AP的活性可以通过补体因子I(CFI)进行调节[46,47]，CFI也因为其切割C3b和C4b的细胞结合相或流体相而被称为C3b/C4b灭活剂。另一种调节因子是CD55或衰变加速因子(DAF)[48-50]，它是一种膜结合蛋白，也可以保护细胞免受补体介导的裂解。CD55的主要功能是通过将C3转化酶解离成其组成蛋白而使C3转化酶失活[48]。另一种调节蛋白称为补体因子H-相关蛋白-1(CFHR1)，它是补体因子H的剪接变体[51-53]，也通过靶向由C3b和因子B组成的C3转化酶的衰变而参与减少补体激活。另一种能够减少补体激活的因子称为膜辅因子蛋白或CD46，它是膜结合性的。一旦与C3b结合，因子H和CFHL-1就会占据C3b中的因子B结合位点，加速衰变并阻止形成新的C3转化酶。此外，因子H、CFHL-1和CD46充当蛋白酶因子I的辅因子，将C3b切割为iC3b，并在CD46的情况下作为用于C4b的辅因子。CFHR-1不介导因子I辅因子活性的加速衰变。与H因子一样，CFHR-1与C3b结合，通过与糖胺聚糖结合来识别自身表面，并抑制C5转化酶和末端补体复合物的形成[53]。
因此，迫切需要一种改进的疗法来治疗视网膜病症，例如AMD，特别是湿性年龄相关性黄斑变性(湿性-AMD)，该疗法可以中和VEGF并预防炎症和视网膜下纤维化的发展。
发明人利用大量创造性努力精心设计并构建了新的基因构建体，其在单个启动子的控制下编码抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白(anti-fibrotic protein)，即它是双顺反子的。所述构建体的启动子可用于确保抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白均最大限度地表达，以减少血管渗漏、纤维化、瘢痕形成(scarring)和炎症。
因此，根据本发明的第一方面，提供了包含可操作地连接至编码抗VEGF蛋白的第一编码序列和编码抗纤维化蛋白的第二编码序列的启动子的基因构建体。
如实施例中所述，发明人令人惊讶地证明，可以将编码抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白两者的开放阅读框(ORF)组合在单个基因构建体中。考虑到每个组件都是大尺寸，这尤其具有挑战性。无法预测是否可能在单个启动子的控制下从单个表达盒以生理学上有用的浓度共表达这两种大蛋白，并且该表达盒需要能够被AAV载体(例如rAAV-2载体)容纳。有利的是，利用本发明的构建体，不需要如现有技术中所述地注射重组蛋白。此外，现有技术中仍然需要定期将蛋白注射到眼中，这显然是不利的，而本发明的构建体令人惊讶地只需要单次施用即可实现长期治疗效果，从而向患者提供了显著的益处。
优选地，本发明的基因构建体包含表达盒，其一个实施方案如图2所示。如图2所示，在一个实施方案中，所述构建体包含启动子、编码抗VEGF蛋白的第一核苷酸序列以及编码抗纤维化蛋白的第二核苷酸序列。因此，优选地，所述基因构建体和表达盒可以是指双顺反子的。
编码抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白的第一和第二编码序列可以从5'至3'以任何顺序放置。例如，在一个实施方案中，抗VEGF蛋白的编码序列放置在抗纤维化蛋白的编码序列的5'，优选其间具有间隔序列(spacer sequence)。或者，在另一个实施方案中，抗纤维化蛋白的编码序列可以放置在抗VEGF蛋白的编码序列的5'，优选其间具有间隔序列。
第一方面的基因构建体中的启动子可以是能够诱导RNA聚合酶结合并转录第一和第二编码序列的任何核苷酸序列。
启动子可以是组成型的或组织特异性的。
合适的组成型启动子可以是巨细胞病毒启动子。编码巨细胞病毒(CMV)启动子的核苷酸序列的一个实施方案(508bp)在本文中称为SEQ ID No：1，如下：
在另一个实施方案中，启动子优选是CMV启动子的截短形式。编码CMV启动子的截短形式的核苷酸序列的一个实施方案(60bp)在本文中称为SEQ IDNo：2，如下：
在另一个实施方案中，启动子是巨细胞病毒(CMV)早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白基因(CAG)的第一内含子的融合体。编码巨细胞病毒早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白基因的第一内含子的核苷酸序列的一个实施方案(583bp)在本文中称为SEQ ID No：3，如下：
合适的组织特异性启动子可以是卵黄样黄斑营养不良蛋白-2(VMD2)启动子(有时称为bestrophin-1)。有利地，该启动子将转基因表达限制在RPE细胞中。编码VMD2启动子的核苷酸序列的一个实施方案(2039bp)在本文中称为SEQ ID No：4，如下：
在另一个优选的实施方案中，启动子是VMD2启动子的截短形式。编码VMD2启动子的截短形式的核苷酸序列的一个实施方案(623bp)在本文中称为SEQ ID No：5，如下：
在另一个优选的实施方案中，编码VMD2启动子的截短形式的核苷酸序列(462bp)在本文中称为SEQ ID No：6，如下：
在另一个实施方案中，启动子是人磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子。编码人PGK-1启动子的核苷酸序列的一个实施方案(500bp)在本文中称为SEQ IDNo：7，如下：
在进一步的实施方案中，启动子是衍生自表达真核延伸因子1的α亚基的人EEF1A1基因的EF1α。编码EF1α启动子的核苷酸序列的一个实施方案(1182bp)在本文中称为SEQ IDNo：8，如下：
在进一步的实施方案中，启动子是没有大内含子的EF1α。编码EF1α启动子的核苷酸序列的一个实施方案(230bp)在本文中称为SEQ ID No：9，如下：
因此，优选地，启动子包含基本上如SEQ ID No：1、2、3、4、5、6、7、8或9所示的核酸序列或其片段或变体。
发明人认真考虑了抗VEGF蛋白的序列，并产生了可以由第一方面的基因构建体中的第一编码序列编码的蛋白的几个优选实施方案。
优选地，抗VEGF蛋白能够捕获所有可溶形式的VEGF，包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和/或胎盘生长因子(PIGF)。更优选地，抗VEGF蛋白特异性捕获VEGF-A。优选地，在该实施方案中，抗VEGF蛋白捕获VEGF-A的所有同工型，包括VEGF-121、VEGF-145、VEGF-165、VEGF-183、VEGF-189和/或VEGF-206。
优选地，抗VEGF蛋白是抗VEGF抗体或其抗原结合片段。
所述其抗原结合片段可以包含选自以下的任何片段或由选自以下的任何片段组成：结合VEGF的VH、VL、Fd、Fv、Fab、Fab'、scFv、F(ab')2和Fc片段。所述抗原结合片段可以包括结合VEGF表位的互补决定区(CDR)。
在一个优选的实施方案中，抗VEGF蛋白是单链可变片段(SCVF)。也就是说，在这个优选的实施方案中，抗VEGF蛋白是抗VEGF单链可变片段。
因此，在第一实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和最常见的VEGF-A同工型的抗VEGF单链可变片段(SCVF-1)的核苷酸序列。优选地，SCVF-1包含本文中称为SEQ IDNo：10的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ ID No：11的核苷酸序列(756bp)或其片段或变体，如下：
在第二优选实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和最常见的VEGF-A同工型的抗VEGF单链可变片段(SCVF-2)的核苷酸序列。优选地，SCVF-2包含本文中称为SEQ IDNo：12的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，在这个第二实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ IDNo：13的核苷酸序列(756bp)或其片段或变体，如下：
在第三优选实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和最常见的VEGF-A同工型的抗VEGF单链可变片段(SCFV-3)的核苷酸序列。优选地，SCFV-3包含本文中称为SEQ IDNo：14的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，在这个第三优选实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ ID No：15的核苷酸序列(765bp)或其片段或变体，如下：
在第四优选实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和最常见的VEGF-A同工型的抗VEGF单链可变片段(SCVF-4)的核苷酸序列。优选地，SCVF-4包含本文中称为SEQ IDNo：16的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，在这个第四实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ IDNo：17的核苷酸序列(747bp)或其片段或变体，如下：
在第五优选实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和所有可溶形式的VEGF的抗VEGF蛋白(VEGF捕获蛋白-1)的核苷酸序列。优选地，VEGF捕获蛋白-1包含本文中称为SEQID No：18的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个第五实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ IDNo：19的核苷酸序列(1293bp)或其片段或变体，如下：
在第六优选实施方案中，第一编码序列包含编码能够中和所有可溶形式的VEGF的抗VEGF蛋白(VEGF捕获蛋白-2)的核苷酸序列。有利地且优选地，VEGF捕获蛋白-2具有较低的与人IgG-Fc-γ受体I、II和III结合的亲和力。优选地，VEGF捕获蛋白-2包含本文中称为SEQ ID No：20的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个第六实施方案中，第一编码序列包含本文中称为SEQ IDNo：21的核苷酸序列(1293bp)或其片段或变体，如下：
因此，在优选的实施方案中，第一编码序列包含基本上如SEQ ID No：11、13、15、17、19或21中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，抗VEGF蛋白包含基本上如SEQ ID No：10、12、14、16、18或20所示的氨基酸序列或其片段或变体。
应当理解，第二编码序列编码抗纤维化蛋白。
在一个实施方案中，抗纤维化蛋白是抗补体蛋白。优选地，抗补体蛋白能够中和或减弱补体激活。甚至更优选地，抗补体蛋白能够靶向补体系统的旁路途径(AP)。优选地，抗补体蛋白最小程度地影响补体系统的经典途径(CP)和/或凝集素途径(LP)。优选地，抗补体蛋白不靶向补体系统的经典途径(CP)和/或凝集素途径(LP)。
优选地，抗补体蛋白能够中和补体因子C3b和/或Bb。因此，在这个实施方案中，抗补体蛋白是抗C3b或抗Bb抗体或其抗原结合片段。
所述其抗原结合片段可以包含选自以下的任何片段或由选自以下的任何片段组成：结合C3b和/或Bb的VH、VL、Fd、Fv、Fab、Fab'、scFv、F(ab')2和Fc片段。所述抗原结合片段可以包括结合C3b和/或Bb表位的互补决定区(CDR)。
甚至更优选地，抗补体蛋白是单链可变片段(SCVF)。换句话说，在这个优选实施方案中，所抗补体蛋白为抗C3b单链可变片段或抗Bb单链可变片段。
或者，在另一个优选的实施方案中，抗补体蛋白是CD55(衰变加速因子(decayaccelerating factor)，DAF)。优选地，抗补体蛋白是非膜附着性CD55。CD55(DAF)会使补体蛋白复合物不稳定，从而降低该生化途径的活性。
在另一优选实施方案中，抗补体蛋白为补体因子H相关蛋白-1(CFHR1)。优选地，CFHR1使补体系统活性级联减弱。
在另一优选实施方案中，抗补体蛋白为CD46。优选地，在这个实施方案中，抗补体蛋白是可溶性(非膜结合性)人补体调节蛋白CD46(sCD46)。
在另一个优选的实施方案中，抗补体蛋白是补体因子H样蛋白1(CFHL1)，其是因子H的剪接变体，包括调节结构域并在中央补体组分C3水平及更上级水平上抑制补体激活。
在一个优选的实施方案中，抗C3b单链可变片段的氨基酸序列在本文中称为SEQID No：22或其片段或变体，如下：
在一个优选的实施方案中，编码抗C3b单链可变片段的核酸序列(726bp)在本文中称为SEQ ID No：23或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，抗Bb单链可变片段的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：24或其片段或变体，如下：
在一个优选的实施方案中，编码抗Bb单链可变片段的核酸序列(750bp)在本文中称为SEQ ID No：25或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，可溶性(非膜结合性)形式的CD55(sCD55，有时也称为衰变加速因子，DAF)的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：26或其片段或变体，如下：
在一个优选的实施方案中，编码可溶性(非膜结合性)形式的CD55(sCD55)(有时也称为衰变加速因子，DAF)的960核酸序列(960bp)在本文中称为SEQ ID No：27或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，人补体因子H相关蛋白-1(CFHR1)的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：28或其片段或变体，如下：
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在一个优选的实施方案中，编码人补体因子H相关蛋白-1(CFHR1)的核酸序列(936bp)在本文中称为SEQ ID No：29或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，编码人补体因子H相关蛋白-1(CFHR1)的密码子优化的核酸序列(936bp)在本文中称为SEQ ID No：30或其片段或变体，如下：
在进一步的实施方案中，可溶性(非膜结合性)形式的CD46(sCD46)的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：31或其片段或变体，如下：
在优选的实施方案中，编码可溶性(非膜结合性)形式的CD46(sCD46)的核酸序列(930bp)在本文中称为SEQ ID No：32或其片段或变体，如下：
在一个优选的实施方案中，CFHL1的氨基酸序列在本文中称为SEQ IDNo：97或其片段或变体，如下：
在一个优选的实施方案中，编码CFHL1的核酸序列(1278bp)在本文中称为SEQ IDNo：98或其片段或变体，如下：
或者，在另一个实施方案中，抗纤维化蛋白能够中和结缔组织生长因子(CTGF)。优选地，抗纤维化蛋白是抗结缔组织生长因子(抗CTGF)抗体或其抗原结合片段。优选地，抗CTGF抗体或其抗原结合片段能够中和结缔组织生长因子(CTGF)。
所述其抗原结合片段可以包含选自以下的任何片段或由选自以下的任何片段组成：结合CTGF的VH、VL、Fd、Fv、Fab、Fab'、scFv、F(ab')2和Fc片段。所述抗原结合片段可以包括结合CTGF表位的互补决定区(CDR)。
最优选地，抗CTGF抗体是抗CTGF单链可变片段(抗CTGF SCVF)。
由于尚未鉴定出CTGF的特异性受体或结合位点，发明人利用了能够中和整个CTGF序列的单链可变片段(SCVF)(抗CTGF SCVF-1)或能够中和C-末端CTGF片段的SCVF(抗CTGFSCVF-2)。
发明人仔细考虑了能够中和CTGF的SCVF的序列，并产生了可以由第一方面的基因构建体中的第二编码序列编码的蛋白的优选实施方案。
在一个优选的实施方案中，抗CTGF单链可变片段(抗CTGF SCVF-1)的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：33或其片段或变体，如下：
在优选的实施方案中，编码抗CTGF SCVF-1的核酸序列(747bp)在本文中称为SEQID No：34或其片段或变体，如下：
在另一优选实施方案中，抗CTGF单链可变片段(抗CTGF SCVF-2)的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：35或其片段或变体，如下：
在优选的实施方案中，编码抗CTGF SCVF-2的核酸序列(723bp)在本文中称为SEQID No：36或其片段或变体，如下：
因此，在优选的实施方案中，第二编码序列包含基本上如SEQ ID No：23、25、27、29、30、32、34、36或98中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，抗补体蛋白包含基本上如SEQ ID No：22、24、26、28、31、33、35或97所示的氨基酸序列或其片段或变体。
科学文献中提出的许多表达两个或更多个基因的基因治疗构建体具有(i)双启动子，以分别驱动两个或更多个基因的表达，或(ii)内部核糖体进入位点(IRES)，以连接基因，例如来自脑心肌炎病毒(EMCV)，从而能够从由重组病毒载体内的单个启动子驱动的单个转录物中翻译基因。然而，依赖于IRES的翻译的效率在不同的细胞和组织中差异很大，并且依赖于IRES的翻译可能显著低于依赖于cap的翻译，这意味着IRES下游基因的表达通常低于位于一个表达盒的基因。此外，rAAV载体有限的编码能力(通常<5kb)阻止了大基因/ORF的并入，例如使用双启动子和/或IRES接头的抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白之一的编码序列(其中EMCV IRES长度为553个核苷酸)。
因此，在优选的实施方案中，基因构建体包含放置于第一和第二编码序列之间的间隔序列。例如，参见图3，其中间隔序列(v2A)放置于第一和第二编码序列之间。该间隔序列编码肽间隔区(peptide spacer)，其经配置而产生作为单独分子的抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白。这是可能的，因为间隔区经配置而跳过线性核糖体序列转录以产生单独的分子或肽。应当理解，单独的分子是有活性的。
优选地，间隔序列包含并编码病毒肽间隔序列，最优选病毒-2A肽间隔序列。在一个实施方案中，该病毒-2A肽间隔序列包含F2A、E2A、T2A或P2A序列。
优选地，病毒-2A肽序列将第一编码序列与第二编码序列连接。这使得构建体能够克服在各种载体中表达时出现的尺寸限制，并且使得由第一方面的构建体编码的所有肽的表达能够在单个启动子的控制下作为单个mRNA转录物发生。
因此，在一个实施方案中，在编码抗VEGF蛋白、病毒-2A肽和抗纤维化蛋白的序列的单个mRNA转录物转录后，翻译跳跃可发生在病毒-2A肽的末端甘氨酸-脯氨酸之间的病毒-2A肽序列处。这种翻译跳跃将由此产生两种蛋白，即抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白(参见图3)。
发明人已经产生了间隔序列的四个实施方案。肽间隔序列的一个重要部分是C-末端，这对于本文描述的所有实施方案来说均是如此。
在一个实施方案中，肽间隔序列是P2A。优选地，P2A肽间隔序列编码本文中称为SEQ ID No：37的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，肽间隔序列的消化或切割位点设置于SEQ ID No：37中的末端甘氨酸和末尾脯氨酸之间。
在这个第一实施方案中，P2A肽间隔序列包含本文中称为SEQ ID No：38的核苷酸序列(57bp)或其片段或变体，如下：
在第二实施方案中，肽间隔序列是E2A。优选地，E2A肽间隔序列编码本文中称为SEQ ID No：39的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，肽间隔序列的消化或切割位点设置于SEQ ID No：39中的末端甘氨酸和末尾脯氨酸之间。
在这个第二实施方案中，E2A肽间隔序列包含本文中称为SEQ ID No：40的核苷酸序列(60bp)或其片段或变体，如下：
在第三实施方案中，肽间隔序列是T2A。优选地，T2A肽间隔序列编码本文中称为SEQ ID No：41的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，肽间隔序列的消化或切割位点设置于SEQ ID No：41中的末端甘氨酸和末尾脯氨酸之间。
在这个第三实施方案中，T2A肽间隔序列包含本文中称为SEQ ID No：42的核苷酸序列(54bp)或其片段或变体，如下：
在第四优选实施方案中，肽间隔序列是F2A。优选地，F2A肽间隔序列编码本文中称为SEQ ID No：43的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
优选地，肽间隔序列的消化或切割位点设置于SEQ ID No：43中的末端甘氨酸和末尾脯氨酸之间。
在这个第四实施方案中，F2A肽间隔序列包含本文中称为SEQ ID No：44的核苷酸序列(66bp)或其片段或变体，如下：
因此，在一个优选的实施方案中，肽间隔序列包含基本上如SEQ ID No：38、40、42或44中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，肽间隔序列编码基本上如SEQID No：37、39、41或43所示的氨基酸序列或其片段或变体。
翻译跳跃后，病毒-2A肽序列保持融合至上游蛋白(例如抗VEGF蛋白)的C端，而脯氨酸保持融合至下游蛋白(例如抗纤维化蛋白)的N端。这会带来免疫原性风险，并可能干扰细胞内信号传导能力。因此，发明人已在病毒-2A肽序列的上游(directly upstream)引入了酶切割编码序列，使得来自两种编码蛋白(即抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白)的剩余病毒-2A肽序列被去除。酶切割位点的引入具有在释放分泌蛋白之前(在弗林蛋白酶的情况下)或在蛋白从靶(视网膜)细胞分泌后不久(在基质金属蛋白-2(MMP-2)或肾素的酶识别位点的情况下)在细胞内去除病毒-2A肽的作用。MMP-2和弗林蛋白酶是已知由Müller胶质细胞分泌的酶，因此可在分泌后从神经视网膜内的抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白切割和去除病毒-2A肽序列。
因此，在一个实施方案中，构建体还包含病毒-2A去除序列。优选地，病毒-2A去除序列设置于病毒-2A序列的5'。优选地，病毒-2A去除序列通过包含甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸序列(G-S-G)的三肽的接头序列与病毒-2A序列分隔开。
发明人引入了弗林蛋白酶识别序列，以酶促方式从蛋白C末端去除病毒-2A肽序列。因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列是弗林蛋白酶识别序列。
目前，弗林蛋白酶识别序列通常被认为包含三个或四个碱性氨基酸(精氨酸或赖氨酸)，在位置2处具有任选的非碱性氨基酸，并且在最后一个碱性氨基酸之后被弗林蛋白酶切割。然而，使用各种质粒构建体，发明人确定了该碱性弗林蛋白酶识别序列并不总是导致酶促活性以及病毒-2A序列的分离。因此，发明人产生了优选的弗林蛋白酶识别序列用于本发明的基因构建体。
因此，在优选的实施方案中，基因构建体包含编码本文中称为SEQ ID No：45的氨基酸序列或其片段或变体的病毒-2A去除序列，其中：B＝碱性氨基酸，X＝亲水性氨基酸，S＝丝氨酸，如下：
BB(X)BBS
[SEQ ID No：45]
优选地，亲水性氨基酸(X)是丝氨酸(S)或苏氨酸(T)。因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：45所示的氨基酸序列或其片段或变体。
在一个实施方案中，病毒-2A去除序列编码本文中称为SEQ ID No：46的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
在这个第一实施方案中，病毒-2A去除序列包含本文中称为SEQ ID No：47的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
在第二实施方案中，病毒-2A去除序列编码本文中称为SEQ ID No：48的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
/>
在这个第二实施方案中，病毒-2A去除序列包含本文中称为SEQ ID No：49的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
在第三实施方案中，病毒-2A去除序列编码本文中称为SEQ ID No：50的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
在这个第三实施方案中，病毒-2A去除序列包含本文中称为SEQ ID No：51的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列包含基本上如SEQ ID No：47、49或51所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：46、48或50所示的氨基酸序列或其片段或变体。
或者，在另一个实施方案中，病毒-2A去除序列是明胶酶MMP-2识别序列。优选地，在这个实施方案中，病毒-2A去除序列编码氨基酸序列GPQGIAGQ[SEQ ID No：52]、GPLGIAGA[SEQ ID No：53]或GPQGLLGQ[SEQ ID No：54]或其片段或变体。切割优选发生在第二甘氨酸残基之后。
发明人已经产生了本文中称为SEQ ID No：55的优选氨基酸序列，其包含明胶酶MMP-2识别序列和三肽GSG接头序列。
因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列编码本文中称为SEQ ID No：55的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
在这个实施方案中，病毒-2A去除序列包含本文中称为SEQ ID No：56的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列包含基本上如SEQ ID No：56所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：55所示的氨基酸序列或其片段或变体。
或者，在另一个实施方案中，病毒-2A去除序列是肾素识别序列。优选地，在该实施方案中，病毒-2A去除序列编码氨基酸序列HPFHLVYS[SEQ IDNo：57]或HPFHLLVYS[SEQ IDNo：58]或其片段或变体。切割优选发生在亮氨酸残基之后。
发明人产生了本文中称为SEQ ID No：59的优选氨基酸序列，其包含肾素识别序列和三肽GSG接头序列。
因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列编码本文中称为SEQ ID No：59的氨基酸序列或其片段或变体，如下：
在这个实施方案中，病毒-2A去除序列包含本文中称为SEQ ID No：60的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
因此，在一个实施方案中，病毒-2A去除序列包含基本上如SEQ ID No：60所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：59所示的氨基酸序列或其片段或变体。
如图2所示，表达盒还包含编码肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)的序列、编码poly-A尾的序列以及左(left-hand)和右(right-hand)反向末端重复序列(ITR)。优选地，基因构建体包含编码土拨鼠肝炎病毒(WHP)转录后调节元件(WPRE)的核苷酸序列，其增强转基因(即抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白)的表达。优选地，WPRE编码序列位于转基因编码序列的3'。
土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)的一个实施方案是592个核苷酸长，包括γ-α-β元件，并且在本文中称为SEQ ID No：61，如下：
优选地，WPRE包含基本上如SEQ ID No：61所示的核酸序列或其片段或变体。
然而，在优选的实施方案中，使用截短的WPRE，其由于缺失β-元件而长247个核苷酸，并且在本文中称为SEQ ID No：62，如下：
因此，优选地，截短的WPRE包含基本上如SEQ ID No：62所示的核酸序列或其片段或变体。
有利地，构建体中使用的截短的WPRE序列总共节省了约300个核苷酸，而不会对转基因表达产生负面影响。因此，优选地，WPRE包含基本上如SEQ ID No：62所示的核酸序列或其片段或变体。
优选地，基因构建体包含编码poly-A尾的核苷酸序列。优选地，poly-A尾编码序列设置于转基因编码序列的3'，并且优选设置于WPRE编码序列的3'。polyA尾对于mRNA的核输出、翻译和稳定性很重要。该尾会随着时间的推移而变短，当它足够短时，mRNA就会被酶促降解。
优选地，poly-A尾包含猿猴病毒-40poly-A 224核苷酸序列。poly-A尾的一个实施方案在本文中称为SEQ ID No：63，如下：
在另一个实施方案中，poly-A尾包含169个核苷酸的序列的poly-A组分，其在本文中称为SEQ ID No：64，如下：
在进一步的实施方案中，poly-A尾包含牛生长激素poly-A 225核苷酸序列，其在本文中称为SEQ ID No：99，如下：
因此，优选地，poly-A尾包含基本上如SEQ ID No：63、64或99所示的核酸序列或其片段或变体。
优选地，基因构建体包含左和/或右反向末端重复序列(ITR)。优选地，每个ITR设置在构建体的5'和/或3'端。ITR可以特异于病毒(例如AAV或慢病毒)血清型，并且可以是任何序列，只要它在其二级结构中形成发夹环即可。
ITR的一个实施方案(左ITR序列，取自市售的重组AAV基因组质粒)的DNA序列在本文中表示为SEQ ID No：65，如下：
ITR的另一个实施方案(右ITR序列，取自市售的重组AAV基因组质粒)的DNA序列在本文中表示为SEQ ID No：66，如下：
优选地，左和/或右反向末端重复序列包含基本上如SEQ ID No：65或66所示的核酸序列或其片段或变体。
最近发现位于启动子和基因之间(靠近启动子的3'端和基因的5'端)的非编码内含子可以通过mRNA积累促进某些基因组序列中的基因表达[51，52]。因此，当与组成型或调节型启动子组合使用时，将内含子包含到病毒载体的基因构建体中可以促进更大的转基因表达和随后成熟蛋白的产生。
因此，在一个实施方案中，基因构建体包含非编码内含子。优选地，非编码内含子位于启动子和第一编码序列之间。换句话说，非编码内含子设置于启动子的3'和第一编码序列的5'。
在一个实施方案中，非编码内含子是小鼠微小病毒(minute virus of mice，MVM)小(121bp)内含子[53]，本文中称为SEQ ID No：67，如下：
在另一个实施方案中，非编码内含子是来自人β-珠蛋白基因的第一内含子的5'-供体位点(donor site)和分支以及免疫球蛋白基因重链可变区的内含子的3'-受体位点(acceptor site)的序列(133bp)，本文中称为SEQ ID No：68，如下：
在另一个实施方案中，非编码内含子是兔β-球蛋白基因1的剪接受体(spliceacceptor)的5'和3'核苷酸组分的融合体(210bp)，本文中称为SEQ ID No：69，如下：
因此，优选地，非编码内含子包含基本上如SEQ ID No：67、68或69所示的核酸序列或其片段或变体。
为了允许由基因构建体编码的多肽的正确折叠、抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白的细胞内运输和从靶细胞的分泌，这些蛋白的编码序列之前有一个新的N-末端最小信号肽编码序列，其衍生自已知的分泌性人蛋白的序列。分泌性信号肽包含甲硫氨酸起始氨基酸、一系列2个或更多个碱性氨基酸(精氨酸或赖氨酸)、随后的一系列疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸或苯丙氨酸)和最后的切割序列，以允许信号肽从最终成熟的分泌蛋白上切割下来。
因此，在一个实施方案中，基因构建体包含信号肽编码序列。有利地，本发明人产生的这种新的信号肽编码序列优化了细胞内分泌蛋白的细胞内切割和运输。优选地，基因构建体包含设置在第一编码序列之前的第一信号肽编码序列和设置在第二编码序列之前的第二信号肽编码序列。优选地，第一和第二信号肽编码序列分别设置在第一和第二编码序列的5'。
在一个实施方案中，信号肽编码序列编码本文中称为SEQ ID No：70的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个实施方案中，信号肽编码序列衍生自人胰蛋白酶，并且优选地包含本文中称为SEQ ID No：71的核苷酸序列(57bp)或其片段或变体，如下所示：
在可选的实施方案中，信号肽编码序列被修饰以增强从靶细胞分泌。在这个实施方案中，信号肽编码序列编码本文中称为SEQ ID No：72的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个实施方案中，信号肽编码序列包含本文中称为SEQ ID No：73的核苷酸序列或其片段或变体，如下所示：
在另一个实施方案中，信号肽编码序列编码本文中称为SEQ ID No：74的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个实施方案中，信号肽编码序列包含本文中称为SEQ ID No：75的核苷酸序列或其片段或变体，如下所示：
在另一个实施方案中，信号肽编码序列编码本文中称为SEQ ID No：76的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个实施方案中，信号肽编码序列包含本文中称为SEQ ID No：77的核苷酸序列或其片段或变体，如下所示：
在另一个实施方案中，信号肽编码序列编码本文中称为SEQ ID No：78的氨基酸序列或其片段或变体，如下所示：
优选地，在这个实施方案中，信号肽编码序列包含本文中称为SEQ ID No：79的核苷酸序列或其片段或变体，如下所示：
因此，优选地，信号肽编码序列包含基本上如SEQ ID No：71、73、75、77或79中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体。优选地，信号肽编码序列编码基本上如SEQ ID No：70、72、74、76或78所示的氨基酸序列或其片段或变体。
在优选的实施方案中，基因构建体可以按该以下特定顺序包含5'启动子，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，以及编码抗纤维化蛋白的3'第二编码序列。5'和3'的使用指示所述特征是上游或下游，并且并不旨在指示所述特征必须是末端特征。此外，技术人员将理解，编码抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白的第一和第二编码序列可以以任何5'至3'顺序设置。
在具体的实施方案中，基因构建体可以按照该以下特定顺序包含5'启动子，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，间隔序列，以及编码抗纤维化蛋白的3'第二编码序列。
在具体的实施方案中，基因构建体可以按照该以下特定顺序包含5'启动子，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，病毒-2A去除序列，间隔序列，以及编码抗纤维化蛋白的3'第二编码序列。
在具体的实施方案中，基因构建体可以按照该以下特定顺序包含5'ITR，启动子，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，病毒-2A去除序列，间隔序列，编码抗纤维化蛋白的第二编码序列，编码WPRE的序列，编码poly A尾的序列，和3'ITR。
在具体的实施方案中，基因构建体可以按照该以下特定顺序包含5'ITR，启动子，非编码内含子，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，病毒-2A去除序列，间隔序列，编码抗纤维化蛋白的第二编码序列，编码WPRE的序列，编码poly A尾的序列，和3'ITR。
在具体的实施方案中，基因构建体可以按照该以下特定顺序包含5'ITR，启动子，非编码内含子，第一信号肽编码序列，编码抗VEGF蛋白的第一编码序列，病毒-2A去除序列，间隔序列，第二信号肽编码序列，编码抗纤维化蛋白的第二编码序列，编码WPRE的序列，编码poly A尾的序列，和3'ITR。
从上文中，技术人员将理解第一方面的构建体的实施方案的核苷酸序列，以及所编码的转基因的氨基酸序列。然而，为了避免疑问，在一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-1]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：80，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：81的2241个核苷酸的序列(包含在质粒IKC153P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-2]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：82或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：83的2217个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC154P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗C3b SCVF]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：84或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：85的2220个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC129P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗Bb SCVF]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：86或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：87的2244个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC130P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD55的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：88或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：89的2454个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC131P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[sCD55-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：90或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：91的2454个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC132P内)或其片段或变体，如下：
/>
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHR1]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：92或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：93的2430个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC133P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[CFHR1-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：94或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：95的2430个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC134P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHL1]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：100或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：101的2769个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC144P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[CFHL1-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：102或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：103的2766个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC175P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD46]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：104或其片段或变体，如下：
/>
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：105的2424个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC176P内)或其片段或变体，如下：
在另一个实施方案中，[sCD46-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2]的氨基酸序列在本文中称为SEQ ID No：106或其片段或变体，如下：
优选地，在这个实施方案中，构建体包含在本文中称为SEQ ID No：107的2421个核苷酸的序列(如包含在质粒IKC177P内)或其片段或变体，如下：
/>
因此，在优选的实施方案中，构建体编码基本上如SEQ ID No：80、82、84、86、88、90、92、94、100、102、104或106所示的氨基酸序列，或片段或其变体。
优选地，构建体包含基本上如SEQ ID No：81、83、85、87、89、91、93、95、101、103、105或107所示的核苷酸序列或其片段或变体。
发明人已经创建了一系列包含本发明构建体的重组表达载体。
因此，根据第二方面，提供了包含根据第一方面的基因构建体的重组载体。
在一个实施方案中，重组载体(例如称为“IKC153P”)包含本文中称为SEQ ID No：96的核苷酸序列或其片段或变体，如下：
/>
因此，在一个实施方案中，重组载体包含基本上如SEQ ID No：96所示的核苷酸序列或其片段或变体。
重组载体可以是重组AAV(rAAV)载体。rAAV可以是天然存在的载体或具有杂合AAV血清型的载体。rAAV可以是AAV-1、AAV-2、AAV-2.7m8、AAV-3A、AAV-3B、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-7、AAV-8、AAV-9、AAV-10和AAV-11。优选地，rAAV是rAAV血清型2。
有利地，重组AAV2在宿主生物体中引起最小的免疫应答并介导长期转基因表达，在施用载体后可以在视网膜中维持至少一年。
术语“重组AAV(rAAV)载体”可以指重组AAV衍生的核酸。它可以包含至少一个末端重复序列。
已知AAV和重组载体的衣壳外壳包含称为VP1、VP2和VP3的三种衣壳蛋白，它们之间均包含大量的重叠氨基酸，但具有独特的N-端序列。AAV病毒含有60个亚基，其中VP1、VP2和VP3衣壳蛋白的比例为1:1:10，它们共同形成二十面体结构。已鉴定出许多AAV血清型，它们的氨基酸组成不同，因此赋予宿主细胞上受体不同的结合特性。已鉴定出几种天然存在的AAV血清型，例如AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11和AAV12以及已通过从衣壳编码序列文库中筛选DNA变体所鉴定的对氨基酸序列进行进一步修饰的许多人工变体。因此，不同的血清型可以表现出向性(tropism)，并且交换一种假型的各种氨基酸可以改变不同靶细胞的向性或感染性。因此，可以设计特定的AAV假型来针对一种特定的细胞类型或极大地限制在对特定器官的感染性。在一些实施方案中，rAAV载体是衍生自AAV血清型(包括AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAV12)的载体。rAAV颗粒可包含衍生自任何AAV血清型的衣壳蛋白，包括AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11或AAV12衣壳。rAAV颗粒可包含相同血清型或混合血清型的病毒蛋白和病毒核酸。
本发明的衣壳蛋白或重组病毒颗粒可以包含天然存在的蛋白(例如，天然存在的AAV衣壳蛋白，例如AAV血清型AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11或AAV12的衣壳蛋白)的氨基酸序列或由其组成，或者可以是天然存在的衣壳蛋白的衍生物或嵌合体，其与天然存在的衣壳蛋白的氨基酸序列相比包含一个或多个氨基酸取代、缺失或添加，从而例如赋予对目标组织类型或细胞类型(例如视网膜神经节细胞、光感受器或视网膜色素上皮细胞)的趋向性，或降低重组病毒颗粒的免疫原性。
在一些实施方案中，本发明的重组病毒颗粒的衣壳蛋白具有在其整个长度上与天然存在的衣壳蛋白的氨基酸序列具有至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸同一性的氨基酸序列，所述天然存在的衣壳蛋白例如是血清型AAV1、AAV2、AAV2.7m8、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11或AAV12的天然存在的AAV衣壳蛋白。
本文所述的构建体和表达载体可用于治疗视网膜病症，特别是湿性年龄相关性黄斑变性或糖尿病性视网膜病变，包括糖尿病性黄斑水肿(DMO)，更通常地减少血管渗漏和视网膜细胞损伤。
因此，根据第三方面，提供了第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体，用作药物或用于治疗中。
根据第四方面，提供了第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体，用于治疗、预防或改善视网膜病症，或用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤。
根据第五方面，提供了一种治疗、预防或改善受试者的视网膜病症，或减少血管渗漏和视网膜细胞损伤的方法，该方法包括向需要这样的治疗的受试者施用或已经向需要这样的治疗的受试者施用治疗有效量的第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体。
优选地，本发明的基因构建体或重组载体用于基因治疗技术。由构建体或载体编码的抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白中和了VEGF和CTGF或补体蛋白，从而防止新血管形成，减少血管渗漏，并减少炎症、纤维化和瘢痕形成。
在一个实施方案中，所治疗的视网膜病症可以是湿性年龄相关性黄斑变性。或者，在另一个实施方案中，所治疗的视网膜病症可以是糖尿病性视网膜病，或与糖尿病相关的任何其他视网膜病症，例如糖尿病性黄斑水肿(DMO)。另外，所治疗的视网膜病症可以是涉及血管渗漏和由此产生的视网膜结构损伤的任何病理生理学疾病。
在另一个实施方案中，构建体和载体可用于减少血管渗漏激活和视网膜细胞损伤。构建体和载体可用于治疗与以下疾病相关的血管渗漏和视网膜细胞损伤；糖尿病性视网膜病变、癌症、系统性毛细血管渗漏综合征(systemic capillary leak syndrome，SCLS)/克拉克森综合征(Clarkson’s syndrome)、血管性水肿、严重创伤、休克、脓毒症、多器官功能障碍综合征(MODS)、慢性肾病、末期肾病、川崎病(Kawasaki disease)、严重埃博拉病毒病、登革热病毒感染和/或分枝杆菌感染。
应当理解，第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体可用于药物中，所述药物可用作单一治疗(即，本发明的第一方面的基因构建体或第二方面的载体的用途)，用于治疗、改善或预防视网膜病症，或用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤。或者，本发明的基因构建体或重组载体可用作已知疗法的辅助或与其组合，用于治疗、改善或预防视网膜病症，或用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤。
根据治疗目的施用有效量的重组病毒载体。例如，当低百分比的转导可以实现期望的治疗效果时，则治疗的目标通常是达到或超过该转导水平。在一些情况下，这种转导水平可以通过仅转导约1至5％的靶细胞来实现，在一些实施方案中，通过转导至少约20％的目标组织类型，在一些实施方案中通过转导至少约50％、在一些实施方案中至少约80％、在一些实施方案中至少约95％、在一些实施方案中至少约99％的目标组织类型的细胞。在本发明的一些实施方案中，施用于受试者的病毒颗粒的剂量在1×108至1×1014个基因组拷贝之间。
重组病毒颗粒可以通过一次或多次注射来施用，在同一过程中或者间隔几天、几周、几个月或几年。在一些实施方案中，可以使用多种载体来治疗受试者。在一些实施方案中，至少2％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％或75％至100％的目标组织的细胞(例如眼睛的视网膜细胞)被转导。鉴定由包含重组病毒颗粒衣壳的重组病毒颗粒转导的细胞的方法是本领域已知的。例如，免疫组织化学或使用商品例如增强型绿色荧光蛋白可用于检测重组病毒颗粒的转导。
在一些实施方案中，将重组载体施用(例如通过注射或输注)至目标组织(例如眼睛)中的一个或多个位置。在一些实施方案中，将重组载体施用(例如通过注射或输注)至组织中的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或多于10个位置。在一些实施方案中，将重组载体同时或依次施用至多于1个位置。在一些实施方案中，重组载体的多次注射间隔不超过1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、9小时、12小时或24小时。
本发明的基因构建体或重组载体可以组合在具有多种不同形式的组合物中，具体取决于组合物的使用方式。因此，例如，组合物可以是粉剂、片剂、胶囊、液体、软膏(ointment)、霜剂(cream)、凝胶、水凝胶、气雾剂(aerosol)、喷雾剂(spray)、胶束溶液、透皮贴剂、脂质体悬液的形式或可施用于需要治疗的人或动物的任何其他合适的形式。应当理解，本发明的药物的媒介物(vehicle)应由对于被给予其的受试者来说耐受良好。
本发明的基因构建体或重组载体还可以并入到缓释或延迟释放装置中。此类装置可以例如插入皮肤上或皮肤下，并且药物可以在数周甚至数月内释放。该装置可置于至少邻近治疗部位的位置。当需要用基因构建体或重组载体进行长期治疗，并且通常需要频繁施用，例如至少每天注射时，此类装置可能特别有利。
在优选的实施方案中，本发明的药物可以通过注射到血流、神经中或直接注射到需要治疗的部位而施用于受试者。例如，可以将药物注射到至少临近视网膜。注射可以是玻璃体内、脉络膜上、视网膜下、视网膜内、静脉内(推注(bolus)或输注)或皮下(推注或输注)或皮内(推注或输注)。
应当理解，所需的基因构建体或重组载体的量由其生物活性和生物利用度决定，这又取决于施用模式、基因构建体或重组载体的理化性质以及它是否被用作单一疗法或联合疗法。施用频率也将受到正在治疗的受试者体内转基因蛋白的半衰期的影响。待施用的最佳剂量可由本领域技术人员确定，并且将随着使用的特定基因构建体或重组载体、药物组合物的强度、施用方式以及视网膜水肿的进展或由此产生的视网膜损伤或视网膜神经元损失而变化。取决于所治疗的特定受试者的其他因素将导致需要调整剂量，这些因素包括受试者年龄、体重、性别、饮食和施用时间。
基因构建体或重组载体可以在视网膜病症发作之前、期间或之后施用。每日剂量可以作为单次施用(例如每日单次注射或吸入鼻喷雾剂)来给予。或者，基因构建体或重组载体可能需要在一天内施用两次或更多次。作为实例，基因构建体或重组载体可以施用两剂每日剂量(或更多剂，取决于治疗的视网膜病症或视网膜毛细血管功能障碍的严重程度)0.001μg/kg体重至10mg/kg体重的DNA质粒，或1x 108GC/mL至1x 1013GC/mL病毒载体(即假设体重为70kg)。接受治疗的患者可以在醒来时服用第一剂，然后在晚上服用第二剂(如果采用两剂方案)或此后以3或4小时间隔服用。或者，可以使用缓释装置向患者提供最佳剂量的本发明的基因构建体或重组载体，而不需要施用重复剂量。
已知的程序，例如制药业常规采用的程序(例如，体内实验、临床试验等)，可用于形成本发明的基因构建体或重组载体的特定制剂和精确的治疗方案(例如药剂的每日剂量和施用频率)。发明人相信，他们是第一个提出编码可操作地连接至编码序列的启动子的双顺反子基因构建体，所述编码序列将降低VEGF浓度至低于其产生病理生理学的水平，同时通过CTGF中和或减弱补体激活而降低或消除视网膜下纤维化。
根据第六方面，提供了药物组合物，其包含第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体，以及药学上可接受的媒介物。
根据第七方面，提供了一种制备第六方面的药物组合物的方法，该方法包括使第一方面的基因构建体或第二方面的重组载体与药学上可接受的媒介物接触。
“受试者”可以是脊椎动物、哺乳动物或家养动物。因此，本发明的组合物和药物可以用于治疗任何哺乳动物，例如家畜(例如马)、宠物，或者可以用于其他兽医应用。然而，最优选地，受试者是人类。
基因构建体、重组载体或药物组合物的“治疗有效量”是当施用于受试者时治疗干性年龄相关性黄斑水肿或GA所需的前述量的任何量。
例如，所使用的基因构建体、重组载体或药物组合物的治疗有效量可以是约1×108个载体颗粒(vector particle)至约1×1015个载体颗粒，优选约1×1011个载体颗粒至约1x1012个载体颗粒。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物的病毒滴度为每毫升5×1010至5×1013个基因组拷贝之间。
在一些实施方案中，本发明的药物组合物的病毒滴度为每毫升5×1010至5×1013个转导单位(transducing unit)之间。针对病毒滴度使用的术语“转导单位”是指导致产生功能性转基因产物的感染性重组载体颗粒的数量，如在功能测定中测量的，例如[57,58]中所述。
本文提及的“药学上可接受的媒介物”是本领域技术人员已知可用于配制药物组合物的任何已知化合物或已知化合物的组合。
在一个实施方案中，药学上可接受的媒介物可以是固体，并且组合物可以是粉剂或片剂的形式。固体的药学上可接受的媒介物可以包括一种或多种物质，这些物质也可以用作调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、染料、填充剂、助流剂、压缩助剂、惰性粘合剂、甜味剂、防腐剂、染料、包衣剂或片剂崩解剂。媒介物还可以是封装物质。在粉剂中，媒介物是与本发明的细碎活性剂混合的细碎固体。在片剂中，活性剂(例如本发明的基因构建体或重组载体)可以与具有必要压缩特性的媒介物以合适的比例混合并压制成所需的形状和尺寸。粉剂和片剂优选含有高达99％的活性剂。合适的固体媒介物包括例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡和离子交换树脂。在另一个实施方案中，药物媒介物可以是凝胶并且组合物可以是霜剂等形式。
然而，药物媒介物可以是液体，并且药物组合物是颗粒悬浮溶液的形式。液体媒介物用于制备溶液、悬浮液、乳液、糖浆、酏剂和加压组合物。本发明的基因构建体或重组载体可以溶解或悬浮在药学上可接受的液体媒介物中，例如水、离子缓冲溶液、有机溶剂、两者的混合物或药学上可接受的油或脂肪。液体媒介物可以含有其他合适的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂或渗透压调节剂。用于口服和胃肠外施用的液体媒介物的合适实例包括水(部分含有上述添加剂，例如纤维素衍生物，优选羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇)及其衍生物，以及油(例如分级的椰子油和花生油)。对于胃肠外施用，媒介物还可以是油性酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体媒介物可用于用于胃肠外施用的无菌液体形式组合物。用于加压组合物的液体媒介物可以是卤代烃或其他药学上可接受的推进剂(propellant)。
作为无菌溶液或悬液的液体药物组合物可通过例如玻璃体内、脉络膜上、视网膜下、视网膜内、前房内、肌内、鞘内、硬膜外、腹膜内、静脉内且特别是皮下注射来使用。基因构建体或重组载体可以制备为无菌固体组合物，其可以在施用时使用无菌水、盐水或其他合适的无菌可注射介质进行溶解或悬浮。
药学上可接受的载体、赋形剂和稀释剂是促进施用的相对惰性的物质或药学上有效的物质，并且可以以液体溶液或悬浮液、乳液或适合在使用前溶解或悬浮在液体中的固体形式提供。例如，赋形剂可以提供适合的形式或稠度，或充当稀释剂。合适的赋形剂包括但不限于稳定剂、润湿剂和乳化剂、用于改变渗透压的盐、包封剂、pH缓冲物质和缓冲剂。此类赋形剂包括适合直接递送至受试者(例如玻璃体内或视网膜下)的任何药物试剂，其可以在没有过度毒性的情况下施用。药学可接受的赋形剂包括但不限于山梨糖醇、各种TWEEN化合物中的任一种以及液体例如水、盐水、甘油和乙醇。其中可以包括药学上可接受的盐，例如矿物酸盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；以及有机酸盐，例如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐或苯甲酸盐。
在一些实施方案中，药学可接受的赋形剂可包括药学可接受的载体。此类药学上可接受的载体可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些油，例如花生油、大豆油、矿物油。盐水溶液和水性右旋糖、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是对于注射溶液。还可以使用其他组分，例如防腐剂、缓冲剂、张力剂(tonicity agent)、抗氧化剂和稳定剂、非离子润湿剂或澄清剂或增粘剂。药学上可接受的赋形剂和载体的全面讨论见于Remington’s Pharmaceutical Sciences(Ed Remington JPand Gennaro AR；Mack Pub.Co.Easton,Pa 1990)。
应当理解，本发明涵盖了任何核酸或肽或其变体、衍生物或类似物，其基本上包含本文提及的任何序列的氨基酸或核酸序列，包括其变体或片段。术语“基本上氨基酸/核苷酸/肽序列”、“变体”和“片段”可以是与本文所提及的任一序列的氨基酸/核苷酸/肽序列具有至少40％序列同一性的序列，例如与SEQ ID No：1-107所示的序列有40％的同一性，等等。
还涵盖了与所提及的任何序列具有大于65％、更优选大于70％、甚至更优选大于75％、还更优选大于80％序列同一性的氨基酸/多核苷酸/多肽序列。优选地，氨基酸/多核苷酸/多肽序列与所提及的任何序列具有至少85％同一性，更优选地与本文提及的任何序列具有至少90％同一性，甚至更优选至少92％同一性，甚至更优选至少95％同一性，甚至更优选至少97％同一性，甚至更优选至少98％同一性，最优选至少99％同一性。
技术人员理解如何计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比。为了计算两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比，必须首先准备两个序列的比对，然后计算序列同一性值。两个序列的同一性百分比可能取不同的值，这取决于：(i)用于比对序列的方法，例如ClustalW、BLAST、FASTA、Smith-Waterman(在不同程序中实施)或来自3D比较的结构比对；(ii)比对方法使用的参数，例如局部比对相比于全局比对、使用的配对得分矩阵(例如BLOSUM62、PAM250、Gonnet等)以及空位罚分，例如函数形式和常数。
进行比对后，有许多不同的方法来计算两个序列之间的同一性百分比。例如，可以将同一的数量除以：(i)最短序列的长度；(ii)比对长度；(iii)序列的平均长度；(iv)无空位位置的数量；或(iv)不包括悬突(overhang)的等价位置的数量。此外，应当理解，同一性百分比也强烈依赖于长度。因此，一对序列越短，预期偶然发生的序列同一性就越高。
因此，应当理解，蛋白或DNA序列的精确比对是一个复杂的过程。流行的多重比对程序ClustalW[59,60]是本发明产生蛋白或DNA的多重比对的优选方式。ClustalW的合适参数如下：对于DNA比对：空位开放罚分＝15.0，空位延伸罚分＝6.66，Matrix＝Identity。对于蛋白比对：空位开放罚分＝10.0，空位延伸罚分＝0.2，Matrix＝Gonnet。对于DNA和蛋白比对：ENDGAP＝-1，GAPDIST＝4。本领域技术人员知晓，可能需要改变这些和其他参数以实现最佳序列比对。
优选地，两个氨基酸/多核苷酸/多肽序列之间的同一性百分比的计算然后可以根据(N/T)*100的比对来计算，其中N是序列具有相同残基的位置的数目，T是比较的位置总数，包括空位并且包含或排除悬突。优选地，在计算中包括悬突。因此，用于计算两个序列之间的同一性百分比的最优选方法包括(i)使用ClustalW程序使用一组合适的参数来准备序列比对，例如，如上所述；和(ii)将N和T的值代入以下公式：-序列同一性＝(N/T)*100。
用于鉴定相似序列的替代方法是本领域技术人员已知的。例如，基本相似的核苷酸序列将由在严格条件下与DNA序列或其互补物杂交的序列编码。严格条件是指核苷酸在约45℃、3x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中与过滤器结合的DNA或RNA杂交，然后在约20-65℃、0.2x SSC/0.1％ SDS中洗涤至少一次。或者，基本相似的多肽可以与本文所示的序列有至少1个但少于5、10、20、50或100个氨基酸的差异。
由于遗传密码的简并性，显然，可以更改或改变本文所述的任何核酸序列，而基本上不影响由此编码的蛋白的序列，以提供其功能变体。合适的核苷酸变体具有通过替换序列内编码相同氨基酸的不同密码子(从而产生沉默变化)而改变的序列。其他合适的变体具有同源核苷酸序列但包含全部或部分通过不同密码子的取代而改变的序列，所述密码子编码具有与其取代的氨基酸具有相似生物物理特性的侧链的氨基酸，以产生保守的改变。例如，小的非极性疏水性氨基酸包括甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甲硫氨酸。大的非极性疏水性氨基酸包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸。极性中性氨基酸包括丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。带正电荷的(碱性)氨基酸包括赖氨酸、精氨酸和组氨酸。带负电荷的(酸性)氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸。因此，应当理解哪些氨基酸可以被具有相似生物物理性质的氨基酸替代，并且技术人员将知道编码这些氨基酸的核苷酸序列。本文描述的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合与上述方面中的任何一个组合，除了其中至少一些此类特征和/或步骤相互排斥的组合。
本文描述的所有特征(包括任何所附权利要求、摘要和附图)和/或如此公开的任何方法或过程的所有步骤可以以任何组合与上述方面中的任何一个组合，除了其中至少一些此类特征和/或步骤相互排斥的组合。
为了更好地理解本发明，并且为了显示如何实施本发明的实施方案，以下将通过例示的方式引用附图，其中：
图1是本发明的基因治疗病毒载体(图顶部)的一个实施方案的说明，所述载体表达多种转基因蛋白(即抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白)以及它们在减少与视网膜病症(例如湿性AMD)相关的病理生理学方面的生物学效果。在该图中，抗纤维化蛋白显示为抗CTGF(结缔组织生长因子)蛋白或抗补体蛋白。
图2是本发明的基因构建体的一个实施方案的示意图。转基因盒实质上编码单个mRNA转录物，从该转录物将产生两种独立分泌的蛋白：VEGF中和组分和抗纤维化组分。这些组分可以是任一位置(方向)，通过酶靶点/病毒-2A切割/跳跃位点连接。
图3示出了双顺反子构建体从单个mRNA转录物到两种成熟的治疗蛋白的细胞内生化加工。步骤1是通过单个启动子转录信使RNA，然后翻译单个大编码序列。步骤2是病毒-2A序列引导的核糖体的翻译跳跃，产生两个独立的蛋白原(pro-protein)。步骤3发生在高尔基体水平，其中病毒-2A序列通过弗林蛋白酶/酶的活性在上游切割位点从蛋白原上切割下来。步骤4是去除分泌蛋白信号肽，其在从靶视网膜细胞分泌之前从下游组分N末端去除了剩余的脯氨酸氨基酸。
图4显示了用包含以下不同启动子序列的rAAV2载体转导后24小时采集的HEK293细胞中的增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因表达的图像：小的鸡β-肌动蛋白启动子/巨细胞病毒增强子启动子(sCAG)、sCAG启动子随后是添加通过融合衍生自兔β-球蛋白内含子5'和3'的短核苷酸段而产生的内含子(sCAG-内含子)、巨细胞病毒启动子(CMV)、鼠磷酸甘油酸激酶启动子(mPGK)和人突触素-1启动子(hSYN1)。
图5显示小鼠视网膜的横切面和平封片(flatmount)图像，以说明玻璃体内注射含有以下不同启动子的rAAV2载体后三周的eGFP表达水平：小的鸡β-肌动蛋白启动子/巨细胞病毒增强子启动子(sCAG)、巨细胞病毒增强子元件加上鸡β-肌动蛋白启动子和衍生自兔β-球蛋白内含子5'和3'的短核苷酸段(sCAG-内含子)、巨细胞病毒启动子(CMV)、鼠磷酸甘油酸激酶-1启动子(mPGK)和人突触素-1(hSYN1)启动子。符号“*”表示神经节细胞层。
图6显示蛋白质印迹，表明用一系列表达质粒(A和B)转染或用一系列rAAV2/2载体(C和D)转导后24小时从HEK293T细胞收获的上清液中VEGF捕获-2蛋白的表达。图6A和6C显示了用检测分泌的VEGF捕获-2蛋白的IgG-Fc抗体探测上清液的结果。图6B和D显示了用检测病毒-2A蛋白的抗体探测上清液的结果。虚线上方显示了仍然附着有病毒-2A氨基酸序列的VEGF捕获-2蛋白，并且它存在于一些泳道中。
图7A显示蛋白质印迹，表明来自用IKC153P和IKC144P质粒转染的HEK293T细胞的表达盒的细胞内加工，通过翻译跳过病毒-2A序列和随后通过弗林蛋白酶裂解去除，以分别分泌VEGF捕获-2蛋白和抗纤维化组分抗CTGF SCVF-1或CFHL1。图7B显示用对照(IKC166P)或IKC154P(VEGFCap-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-2)转染的HEK293T细胞的免疫细胞化学，显示VEGF捕获-2蛋白和抗CTGF SCVF的检测。抗纤维化组分的实例是抗CTGF SCVF-1和抗CTGF SCVF-2(IKC153P和IKC154P)以及CFHL1蛋白(IKC144P)。
图8示出了在用一系列质粒转染后24小时由HEK293T细胞产生的细胞培养基中通过ELISA测量的VEGF-165的浓度。将能够中和VEGF-165的分泌蛋白与来自未接受任何质粒(无质粒)的细胞或来自用IKC036P(空对照(Null-control)质粒)转染的细胞的培养基进行比较。IKC112P仅包含新的VEGF捕获蛋白-2，IKC115P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF-1，IKC116P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF-2。
图9证明了通过增加的MTS吸光度所测量的VEGF-165A(图9A)或VEGF-121B(图9B)诱导人脐带血管内皮细胞(HUVEC)增殖的能力。添加来自先前用各种质粒构建体转染的HEK293T细胞的培养基表明，与未转染的对照HEK293T细胞或用空对照质粒(IKC036P)或仅表达抗CTGF SCVF-1的质粒(IKC118P)转染的HEK293T细胞相比，从用IKC053P、IKC112P、IKC115P和IKC116P质粒转染的HRK293T细胞中释放的转基因蛋白能够防止外源VEGF-165A或VEGF-121B诱导的HUVEC细胞增殖。HUVEC抗增殖功效的机制是通过用IKC053P、IKC112P、IKC115P和IKC116P转染的HEK293T细胞产生和释放VEGF中和蛋白而实现的。
图10进一步说明当在人成纤维细胞床(层)上生长时(HUVEC-成纤维细胞共培养物)，质粒构建体产生能够阻止HUVEC增殖的蛋白的能力。图10A显示HUVEC表达eGFP标记蛋白并且通过用抗eGFP抗体染色改善了信噪比。与两者均表达抗VEGF转基因蛋白的IKC115P和IKC116P暴露组相比，IKC036P对照组中形成了更长的小管(tubule)。图10B和图10C显示在10ng/mL VEGF-165A(对照和IKC036P空对照)存在下形成具有分支(在影响下)的较长HUVEC小管，这在添加来自用产生VEGF中和蛋白的质粒(IKC112P、IKC115P和IKC116P)转染的HEK293T细胞的培养基时受到显著抑制。
图11是蛋白质印迹的定量，以比较用IKC153P(前体是IKC115P)或IKC154P(前体是IKC116P)转染后相比于用IKC036P空质粒转染后ARPE-19细胞中纤维化标志物的水平。图11A显示了血清饥饿条件下细胞分泌的促纤维化酶MMP2的水平。图11B显示了在用转化生长因子-β2(TGF-β2)刺激后从细胞分泌的MMP2的水平。图11C显示了培养基中纤连蛋白的分泌水平，图11D显示了细胞(细胞裂解物)内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的水平(相对于β-肌动蛋白进行标准化)。
图12是用IKC036V(空对照)、IKC115V或IKC116V转导并针对纤连蛋白染色(灰色)后，汇合的血清饥饿的ARPE-19单层。请注意，与IKC036V空对照相比，经IKC115V和IKC116V处理的细胞中沉积的纤连蛋白支架减少。
图13显示了本发明载体的质粒图谱(IKC153P)的实施方案。
图14是C3b切割测定，以证明IKC144P质粒中CFHL1组分的活性。HEK293T细胞用空对照质粒(IKC036P)或CFHL1双顺反子质粒(IKC144P)转染，未转染的HEK293T细胞用作额外对照(PBS)。转染后，收集HEK293T上清液并与重组C3b和重组CFI蛋白一起孵育，然后进行蛋白质印迹并用C3抗体进行探测。图14显示C3b切割仅在存在IKC144P质粒的情况下发生，而在任一对照(IKC036P或仅PBS)存在的情况下不发生。
图15显示了本发明载体的质粒图谱(IKC115P)的实施方案。
图16显示小鼠激光诱导脉络膜新血管形成(CNV)研究的结果，其中用PBS对照或IKC115V或IKC116V载体对小鼠进行玻璃体内治疗。图16A显示了荧光素施用后1、2和3分钟时脉络膜焦平面的系列图像，以证明每个激光部位(圆圈)的渗漏水平。图16B是显示CNV后第14天的荧光素渗漏面积的图，显示IKC115V和IKC116V治疗组与PBS治疗组相比具有显著较低的CNV渗漏面积。
图17说明了通过对在载体施用后3周采集的样品进行IgG ELISA测量的，与IKC166V空载体处理的小鼠相比，在小鼠中玻璃体内注射rAAV2 IKC151V或IKC152V双顺反子载体显著增加了VEGF-捕获-2蛋白的玻璃体浓度(****P<0.0001；单向ANOVA)。此外，双顺反子载体IKC151V和IKC152V产生的VEGF-捕获-2的玻璃体浓度与仅产生阿柏西普(aflibercept)的单顺反子载体IKC163V产生的相似。重要的是，在推注后6周测量的患者中，表达的VEGF-捕获-2蛋白水平高于建模的单次阿柏西普(2mg)剂量后阿柏西普药代动力学范围的基线[61]。这项研究表明，纳入减弱视网膜下纤维化进展并可能逆转视网膜下纤维化的第二编码组分不会降低载体中和可溶性VEGF的常见同工型的能力。
实施例
参考图1和图2，发明人设计并构建了新的基因构建体，其在单个启动子的控制下编码(i)抗VEGF蛋白和(ii)抗纤维化蛋白(抗补体蛋白或抗CTGF蛋白，例如抗体或其抗原结合片段)。如图2所示，发明人还将间隔序列引入基因构建体中(例如病毒-2A肽间隔序列)，这有利地使得由该构建体编码的所有肽的表达能够在单个启动子的控制下作为单个mRNA转录物发生。另外，为了从蛋白C端酶促去除病毒-2A肽序列，发明人在构建体中引入病毒-2A去除序列，例如弗林蛋白酶识别序列。
如图3所示，双顺反子表达盒产生两种成熟的治疗蛋白，即抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白。抗VEGF蛋白作用是防止新血管形成并减少血管渗漏。抗纤维化蛋白减少纤维化、瘢痕形成和炎症。
然后，发明人将基因构建体引入到重组表达载体例如rAAV2中(例如，参见图13和15)。
材料和方法
DNA质粒设计和生产
使用工具(http://www.jcat.de)或Genscript在线工具对DNA序列进行密码子优化。使用标准分子生物学技术进行合成DNA block和克隆。所有DNA质粒在SURE感受态细胞(Agilent Technologies)中进行过夜放大，然后进行内毒素含量最少的maxi-prep纯化。
IKC036P是空对照，IKC053P是设计用于仅产生和分泌VEGF捕获蛋白-1的参考质粒。IKC112P仅包含新的VEGF捕获蛋白-2，IKC115P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF-1，IKC116P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF-2、IKC097P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF(未优化)，IKC102P包含VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-病毒P2A-抗CTGF-SCVF-1(未优化)，IKC118P包含抗CTGF-SCVF-1。
重组AAV载体生产
使用DNA质粒制造重组AAV2载体。用总共500μg的三种质粒(Rep-2-Cap2、pHelper以及含有ORF和ITR的质粒)转导HEK293T细胞(2.5x108)。冻融HEK293T细胞以释放病毒载体颗粒，然后进行碘克沙醇梯度超速离心和脱盐。将载体悬浮在来自Thermo Fisher/Gibco的按照cGMP标准制造的Dulbecco磷酸盐缓冲盐水(DPBS)缓冲液中(目录号14190250，由8g/LNaCl、1.15g/L Na2HPO4、0.2g/L KCl和0.2g/L K2HPO4组成，不含钙或镁；pH 7.0-7.3，270-300mOsm/kg)，使用识别ITR区的引物通过qPCR获得以下载体滴度。
图4显示了用含有不同启动子序列sCAG、CMV、hSYN1、mPGK和sCAG-内含子的构建体进行质粒转染后24小时，HEK293T细胞中的增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因表达。如图4所示，sCAG和CMV两者在HEK293T细胞中均显示出高水平的eGFP转基因表达。
图5显示了小鼠视网膜的横截面和平封片图像，说明了玻璃体内注射含有不同启动子序列sCAG、CMV、hSYN1、mPGK和sCAG-内含子的5x10^9GC/眼的rAAV2载体后三周的eGFP表达水平。从图5可以看出，与没有内含子的相同启动子(即sCAG)相比，sCAG-内含子启动子中的内含子添加增加了视网膜表达。
实施例1–弗林蛋白酶活性和病毒-2A肽切割的检测
简言之，通过将质粒与Opti-MEM(FisherSci)和lipofectamine 3000(FisherSci)混合，将DNA质粒转染至细胞中。HEK293T细胞在6孔板中以80％汇合度进行最佳转染，使得每孔接收2μg质粒DNA和3.75μL lipofectamine。细胞在37℃、5％CO2下孵育24小时。
对收获的上清液进行蛋白质印迹以可视化分泌的VEGF捕获-2蛋白与抗CTGF/补体蛋白的分离。使用HRP缀合的抗人IgG Fc抗体(山羊抗IgG Fc(HRP缀合，ab98624；Abcam，以1：7000稀释))，检测含有野生型或修饰的人IgG-Fc部分的VEGF捕获蛋白。抗体(NBP2-59627；NovusBio，1:1000)用于检查病毒-2A肽从第一转基因蛋白C末端的去除情况。
如上所述用质粒转染HEK293T细胞。为了确认病毒-2A肽从C末端的切割，使用IgG-Fc抗体检测所有评估的上清液中的分泌的VEGF捕获-2蛋白。如图6A和6C所示，大部分VEGF捕获-2蛋白在弗林蛋白酶位点被切割，并且在不存在病毒-2A的情况下检测。重要的是，经切割的VEGF捕获-2蛋白与源自不包含病毒-2A序列的IKC112P转染细胞的VEGF捕获-2蛋白大小相同。
此外，如图6B所示，还用检测病毒-2A蛋白的抗体对细胞进行了探测。可以在与VEGF捕获-2蛋白(IKC036P和IKC036V空载体泳道)相同的分子量处看到交叉反应性(非特异性染色)，其源自不包含病毒2A序列的IKC112P转染细胞。病毒2A抗体还在IKC115P和IKC116P上清液中检测到(两条)较重的分子量条带(图6B)，表明大多数但不是所有病毒-2A序列已在弗林蛋白酶位点被切割。条带在较早期的表达构建体IKC097P和IKC102P的上清液中较弱，表明病毒-2A序列已在弗林蛋白酶位点处被切割。
进一步的蛋白质印迹和免疫细胞化学(图7)证实了用双顺反子质粒构建体转染的细胞中两种转基因的表达和分离。在图7A中，用IKC153P和IKC144P质粒转染的HEK293T细胞表达VEGF-捕获-2蛋白(山羊抗IgG Fc(HRP缀合，ab98624；Abcam，稀释1:2000)和Ikarovec委托的抗CTGF SCVF-1(兔多克隆(肽1)；GenScript，稀释1:500)或CFHL-1(兔抗-CFH，ab133536；Abcam，稀释1:1000)。在图7B中，转染的细胞用上述IgG Fc抗体(1:1000)或抗CTGF SCVF-1(1:1000)共标记。请注意，抗CTGF SCVF-1(兔多克隆(肽1))未对质粒IKC154P中的抗CTGF SCVF-2进行免疫标记，并且在空对照(IKC166P)中未检测到非特异性染色。
实施例2–用各种质粒构建体转染后HEK293T细胞中的VEGF浓度
如上所述用质粒转染HEK293T细胞。收集HEK293T细胞孵育培养基并离心以去除任何细胞碎片，随后使用商业的人VEGF ELISA试剂盒(ab222510；Abcam)测量从细胞产生的VEGF-165浓度。将结果与来自未用质粒转染的细胞(无质粒)和用IKC036P(空质粒)转染的细胞的培养基进行比较。测量VEGF-165浓度，并将结果与来自未用质粒转染的细胞(无质粒)和用IKC036P(空质粒)转染的细胞的培养基(上清液)进行比较。如图8所示，在用包含抗VEGF蛋白组分的质粒转染的细胞中观察到VEGF浓度显著降低。
实施例3-用质粒转基因产物减少VEGF诱导的人脐带血管内皮细胞(HUVEC)生长
将来自HEK293T细胞孵育培养基的培养基添加至生长在96孔板中含1xPen-Strep的内皮细胞培养基(ECM，C22010；PromoCell)中的HUVEC(3,000个细胞/孔)，所述HEK293T细胞孵育培养基先前已在Opti-MEM中用无质粒(对照)或测试质粒DNA转染6小时，然后更换至无血清DMEM、高葡萄糖、GlutaMAX(FisherSci)24小时。然后将重组的额外的VEGF(5-100ng/mL，Caltag-Medsystems)添加到每个孔中，并将HUVEC孵育72小时。使用MTS(G3580，aqueous One solution；Promega)通过分光光度法测量细胞生长。在490nm处读取吸光度。
如图9所示，来自先前已用质粒转染的HEK293T细胞的培养基在50ng/mL VEGF-165A或VEGF-121B的存在下没有显示HUVEC增殖(图9C和D)。这证明抗VEGF质粒构建体完全中和VEGF。
实施例4–HUVEC-成纤维细胞共培养和血管网络的生成
使用Caltag-Medsystems血管生成内皮/成纤维细胞共培养试剂盒，该试剂盒由1:30比例的表达eGFP的HUVEC和人成纤维细胞组成。内皮细胞最初在培养基质内形成小岛，随后增殖，最终在凝胶基质中形成线状小管结构，以在培养10天内形成交织(anastomosing)的小管网络。已知血管生成共培养物对已知的血管生成的小分子和大分子抑制剂和刺激剂有反应。将先前已用质粒转染(使用上述方案)的HEK293T细胞的培养基添加到共培养物中，并从第2天开始每2-3天补充10μg/mL重组人VEGF(ab9571；Abcam)。对照培养物接受sumarin，其阻断成纤维细胞生长因子和成纤维细胞产生的其他生长因子的作用。在实验结束时，将管状HUVEC结构固定并使用荧光显微镜术对表达eGFP的细胞成像，并另外用抗GFP抗体(A11122；Invitrogen，稀释1:2,000)染色。使用MetaLabs FastTrack小管形成AI程序计算平均小管长度和分支化(branching)。
如图10A所示，与空对照IKC036P相比，在暴露于来自用表达质粒IKC0115P和IKC116P转染的HEK293T细胞的培养基后，HUVEC扩增受到显著抑制。另外，如图10B和10C所示，与对照相比，在暴露于来自用IKC115P和IKC116P转染的HEK293T细胞的培养基后，HUVEC小管长度和分支化显著减少。
实施例5–用各种质粒转染后ARPE-19细胞中纤维化标志物蛋白表达的减少
ARPE-19细胞用如上所述的质粒在Opti-MEM中转染24小时。第2天，将培养基更换为DMEM/F12+5％ FBS，然后在第3天更换为无血清DMEM/F12。在第5天，将TGF beta 2(10ng/mL，ab84070；Abcam)或新鲜无血清DMEM/F12添加至汇合的转染细胞，以及在第7天收集上清液和裂解物。来自血清饥饿细胞的上清液的蛋白质印迹显示纤连蛋白(ab268020；Abcam，稀释1:500)(图11A)和MMP2(ab92536；Abcam，稀释1:1000)(图11C)的减少，IKC154P(前体称为IKC116P)显示显著性。在来自TGFβ2刺激的细胞的上清液中观察到MMP2的类似减少，IKC153P(前体称为IKC115P)和IKC154P(前体称为IKC116P)均显示显著性(图11B)。裂解物样品显示，与IKC036P(空对照)相比，使用质粒IKC153P(前体称为IKC115P)和IKC154P(前体称为IKC116P)的TGFβ2刺激组中的alphaSMA(ab5694；Abcam，稀释1:500)略有下降(图11D)。
如图12所示，转导后5天，与IKC037V(空对照)相比，在用载体IKC115V和IKC116V转导的ARPE-19中可以看到纤连蛋白(ab268020；Abcam，稀释1:200)免疫标记的减少。
实施例6–用于评估CFHL1的C3b切割测定
如上所述用质粒转染HEK293T细胞。收集HEK293T细胞孵育培养基并离心以去除任何细胞碎片，然后将50μL新鲜上清液与42nM重组C3b和1.2nM重组CFI在37℃下孵育1小时。孵育后，使用C3抗体(山羊抗人-C3，AHP1752，1:2000和二抗驴抗山羊，705-035-147，1:10,000)通过蛋白质印迹对样品进行评估。
如图14所示，在来自用表达CFHL1组分的IKC144P质粒转染的HEK293T细胞的上清液存在的情况下，发生C3b切割成iC3b 68和43kDa片段，但在对照(IKC036P)或未转染的上清液存在的情况下则不发生C3b切割成iC3b 68和43kDa片段。这些结果表明由双顺反子IKC144P质粒表达的CFHL1组分具有酶促活性。
实施例7-双顺反子rAAV载体在小鼠激光CNV模型中的功效
小鼠接受单侧玻璃体内注射(2μL)rAAV载体IKC115V(8.7x109个基因组拷贝)(GC)/眼)或IKC116V(8.7x109 GC/眼)或对照PBS，并且在3周后使用532nm二极管激光器(光斑尺寸：10μm；功率：130mW；时间：120ms Oculight TX.Iridex Corp)通过激光光凝术在经治疗的眼中诱导脉络膜新血管形成。使用Heidelberg Spectralis HRA系统(HeidelbergEngineering)和皮下注射(30μL/10g)而施用的2.5％荧光素钠溶液(Sigma-Aldrich)，在激光后2周使用荧光素血管造影(FA)对小鼠眼睛进行成像。施用荧光素后5分钟内，每60秒从脉络膜聚焦水平拍摄连续荧光图像(灵敏度：45；ART平均值：5帧)。
如图16所示，与PBS对照处理的小鼠相比，玻璃体内施用双顺反子rAAV IKC115V和IKC116V显著减少了在CNV后两周由FA图像检测的CNV渗漏面积。
实施例8–在体内检测由双顺反子rAAV载体表达的VEGF捕获-2的临床相关水平。
与阿柏西普蛋白(由IKC163V表达)的浓度相比，玻璃体内递送IKC151V和IKC152VrAAV载体后小鼠玻璃体中VEGF捕获-2蛋白的浓度如图17所示。
向小鼠玻璃体内注射(2μL)IKC151V(2.3x1010 GC/眼)、IKC152V(2.7x1010GC/眼)、IKC163V(7.8x109 GC/眼)或IKC166V(2.1x1010 GC/眼)。21天后，将它们的眼睛解剖并提取玻璃体样品(4-5μL)。使用商业IgG ELISA试剂盒(Abcam)测量玻璃体内VEGF捕获-2或阿柏西普蛋白的浓度。值得注意的是，在双顺反子(IKC151V和IKC152V)治疗的眼中在注射后3周玻璃体中的VEGF捕获-2浓度高于如图17中虚线所示的基于患者中阿柏西普2mg推注的第4周和第6周的数据预测的阿柏西普的治疗相关临床水平。这表明，纳入减弱视网膜下纤维化进展并可能逆转视网膜下纤维化的第二编码组分不会降低载体中和可溶性VEGF的常见同工型的能力。
讨论与结论
如实施例中所示，发明人已经令人惊讶地证明，可以将编码抗VEGF蛋白和抗纤维化蛋白的开放阅读框(ORF)组合在单个基因构建体中。考虑到基因的尺寸大，这尤其具有挑战性，并且无法预测可以从单个表达盒以生理学上有用的浓度共表达这些组分，并且该表达盒可以被rAAV-2载体容纳。
如实施例中所证明的，请求保护的构建体和载体的抗VEGF蛋白能够降低VEGF浓度，从而防止新血管形成并减少血管渗漏。此外，抗纤维化蛋白的存在减少了纤维化、瘢痕形成和炎症。有利的是，采用本发明的构建体，不需要如现有技术中所述地注射重组蛋白，并且所述构建体仅需要单次施用即可实现长期治疗效果。
参考文献
1.Mehta S(2015).Age-Related Macular Degeneration.Prim.Care,vol.42(3),PP:377-391.
2.Cheung LK,Eaton A(2013).Age-related maculardegeneration.Pharmacotherapy,vol.33(8),PP:838-855.
3.Lim LS,Mitchell P,Seddon JM,Holz FG,Wong TY(2012).Age-relatedmacular degeneration.Lancet,vol.379(9827),PP:1728-1738.
4.Congdon N,O'Colmain B,Klaver CC,Klein R,B,Friedman DS,KempenJ,Taylor HR,Mitchell P,Eye Diseases Prevalence Research Group(2004).Causesand prevalence of visual impairment among adults in the United States.ArchOphthalmol.,vol.122,PP:477–485./>
5.Lotery A,Griner R,Ferreira A,Milnes F,Dugel P(2017).Prevalence ofage-related macular degeneration in an elderly UK Caucasian population-TheBridlington Eye Assessment Project:a cross-sectional study.Eye(Lond).Vol.31(12),PP:1697-1706.
6.Global burden of disease study 2013 collaborators(2015).Global,regional,and national incidence,prevalence,and years lived with disabilityfor 301acute and chronic diseases and injuries in 188 countries,1990-2013:asystematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.Lancet,vol.386(9995),PP:743-800.
7.GBD 2015 disease and injury incidence and prevalence collaborators(2016).Global,regional,and national incidence,prevalence,and years lived withdisability for 310 diseases and injuries,1990-2015:a systematic analysis forthe Global Burden of Disease Study 2015.Lancet,vol.8(388),PP:1545-1602.
8.Wong WL,Su X,Li X,Cheung CM,Klein R,Cheng CY,Wong TY(2014).Globalprevalence of age-related macular degeneration and disease burden projectionfor 2020 and 2040:a systemic review and meta-analysis.Lancet Glob.Health,vol.2(2),e106-e116.
9.Brown MM,Brown GC,Stein JD,Roth Z,Campanella J,Beauchamp GR(2205).Age-related macular degeneration:economic burden and value-based medicineanalysis.Can.J.Ophthalmol.,vol.40(3),PP:277-287.
10.Cunningham J(2017).Recognizing age-related macular degeneration inprimary care.JAAPA.,vol.30,PP:18-22.
11.Hernández-Zimbrón LF,Zamora-Alvarado R,Ochoa-De la Paz L,Velez-Montoya R,Zenteno E,Gulias-R,Quiroz-Mercado H,Gonzalez-Salinas R(2018).Age-Related Macular Degeneration:New Paradigms for Treatment andManagement of AMD.Oxid.Med.Cell Longev.,e8374647.
12.Thorton J,Edwards R,Mitchell P Harrison RA,Buchan I,Kelly SP(2005).Smoking and age-related macular degeneration:a review ofassociation.Eye(Lond.),vol.19(9),PP:935-944.
13.Evans JR,Lawrenson JG(2017).Antioxidant vitamin and mineralsupplements for preventing age-related macular degeneration.Cochrane DatabaseSyst.Rev.,vol.7,CD000253.
14.Shibuya M(2011).Vascular endothelial growth factor(VEGF)and itsreceptor(VEGFR)signaling in angiogenesis:a crucial target for anti-and pro-angiogenic therapies.Genes and Cancer vol.2(12),PP:1097-1105.
15.Apte RS,Chen DS,Ferrara N(2019)VEGF in signaling and disease:beyond discovery and development.Cell,vol.176,PP:1248-121264.
16.Schmidt-Erfurth U,Chong V,Loewenstein A,Larsen M,Souied E,Schlingemann R,Eldem B,Monés J,Richard G,Bandello F(2014).Guidelines for themanagement of neovascular age-related macular degeneration by the EuropeanSociety of Retina Specialists(EURETINA).Brit.J.Ophthamol.,vol.98(9),PP:1144-1167.
17.Sophie R,Akhtar A,Sepah YJ,Ibrahim M,Bittencourt M,Do DV,Nguyen QD(2012).Aflibercept:A potent vascular endothelial growth factor antagonist forneovascular age-related macular degeneration and other retinal vasculardiseases.Biol.Ther.,vol.2(1),PP:3.
18.Rosefield PJ,Brown DM,Heier JS,Boyer DS,Kaiser PK,Chung CY,and KimRY,MARINA Study Group(2006).Ranibizumab for neovascular age-related maculardegeneration.New Engl.J.Med.,vol.355,PP:1419-1431.
19.Lotery A,Griner R,Ferreira A,Milnes F,Dugel P(2017).Real-worldvisual acuity outcomes between ranibizumab and aflibercept in treatment ofneovascular AMD in a large US data set.Eye(Lond.)vol.31(12),PP:1697-1706.
20.Yang S,Zhao J,Sun X(2016).Resistance to anti-VEGF therapy inneovascular age-related macular degeneration:a comprehensive review.DrugDesign,Dev.And Ther.,vol.10,PP:1857-1867.
21.Daniel E,Toth CA,Grunwald JE,Jaffe GJ,Martin DF,Fine SL,Huang J,Ying GS,Hagstrom SA,Winter K,Maguire MG,Comparison of Age-related MacularDegeneration Treatments Trials Research Group(2014).Risk of scar in thecomparison of age-related macular degeneration treatments trials.Ophthamol.,vol.121(3),PP:656-666.
22.Ishikawa K,Kannan R,Hinton DR(2016)Molecular mechanisms ofsubretinal fibrosis in age-related macular degeneration.Exp.Eye Res.,vol.142,PP:19-25.
23.Bradham DM,Igarashi A,Potter RL,Grotendorst GR(1991).Connectivetissue growth factor:a cysteine-rich mitogen secreted by human vascularendothelial cells is related to the SRC-induced immediate early gene productCEF-10,J.Cell Biol.vol.114(6),PP:1285-1294.
24.DeWinter P,Leoni P,Abraham D(2008).Connective tissue growthfactor:Structure-function relationship of a mosaic,multifunctionalprotein.Growth Factors,vol.26,PP:80-91.
25.Holbourn KP,Acharya KR,Perbal B(2008).The CCN family of proteins:structure-function relationships.Trendds Biochem.Sci.vol.33(10),PP:461-473.
26.Igarashi A,Okochi H,Bradham DM,Grotendorst GR(1993).Regulation ofconnective tissue growth factor gene expression in human skin fibroblasts andduring wound repair.Mol.Biol.Cell.,vol.4(6),PP:637–645.
27.Lipson KE,Wong C,Teng Y,Spong S(2012).CTGF is a central mediatorof tissue remodelling and fibrosis and its inhibition can reverse the processof fibrosis.Fibrogenesis&Tissue Repair,vol.5(Suppl 1),S24.
28.Tamatani T,Kobayashi K,Tesuka K,Sakamoto S,Suzuki K,Nakanishi T,Takigawa M,Miyano T(1998).Establishment of the enzyme-linked immunosorbentassay for connective tissue growth factor(CTGF)and itsdetection in the seraof biliary atresia.Biochem.Biophys.Res.Commun.,vol.251(3),PP:748-752.
29.Wunderlich K,Pech M,Eberle AN,Mihatsch M,Flammer J,Meyer P(2000).Expression of connective tissue growth factor(CTGF)mRNA in plaques of humananterior subcapsular cataracts and membranes of posterior capsuleopacification Curr.Eye Res.vol.21(2),PP:627-636.
30.Winkler JL,Kedees MH,Guz Y,Teitelman G(2012).Inhibition ofconnective tissue growth factor by small interfering ribonucleic acidprevents increase in extracellular matrix molecules in a rodent model ofdiabetic retinopathy.Mol.Vis.,vol.18,PP:874-886.
31.Blalock TD,Gibson DJ,Duncan MR,Tuli SS,Grotendorst GR,Schultz GS(2012).A connective tissue growth factor signalling receptor in corneal fibroblasts.Invest.Ophthamol.Vis.Sci.,vol.53(7),PP:3387-3394.
32.Aoyama E,Kubota S,Takigawa M(2012).CCN2/CTGF binds to fibroblastgrowth factor receptor 2 and modulates its signalling.FEBS Letts.,vol.586,PP:4270-4275.
33.Rayego-Mateos S,Rodrigues-Diez R,Morgado-Pascual JL,Rodrigues DiezRR,Mas S,Lavoz C,Alique M,Pato J,Keri G,Ortiz A,Egido J,Ruiz-Ortega M(2013).Connective tissue growth factor is a new ligand of epidermal growth factorreceptor.J.Mol.Cell Biol.,vol.5,PP:323-335.
34.Babic AM,Chen C-C,Lau LF(1999).Fisp12/Mouse Connective TissueGrowth Factor Mediates Endothelial Cell Adhesion and Migration throughIntegrinαvβ3,Promotes Endothelial Cell Survival,and Induces Angiogenesis InVivo.Mol.Cell Biol.,vol 19(4),PP:2958-2966.
35.Jedsadayanmata A,Chen CC,Kireeva ML,Lau LF,Lam SC-T(1999).Activation-dependent Adhesion of Human Platelets to Cyr61 and Fisp12/MouseConnective Tissue Growth Factor Is Mediated through IntegrinαIIbβ3.J.Biol.Chem.,vol.274,PP:24321-24327.
36.Schober JM,Chen N,Grzeszkiewicz TM,Jonanovic I,Emeson EE,UgarovaTP,Ye RD,Lau LF,Lam SC-T(2002).Identification of integrinαMβ2 as an adhesionreceptor on peripheral blood monocytes for Cyr61(CCN1)and connective tissuegrowth factor(CCN2):immediate-early gene products expressed inatherosclerotic lesions.Blood,vol.99(12),PP:4457-4465.
37.Wahab NA,Weston BS,Mason RM(2005).Connective Tissue Growth FactorCCN2 Interacts with and Activates the Tyrosine Kinase ReceptorTrkA.J.Am.Soc.Nephrol.,vol.16,PP:340-351.
38.van Setten G,Berglin L,Blalock TD,Schultz G(2005).Detection ofconnective tissue growth factor in subretinal Fluid following retinaldetachment:possible contribution to subretinal scar formation,preliminaryresults.Ophthalmic Res.,vol.37(6),PP:289-292.
39.JO,Gadicherla AK,Wang J-H,Monsen VT,Hagelin EMV,Dong M-Q,Attramadal H(2018).Connective tissue growth factor(CCN2)is a matricellularpreproprotein controlled by proteolytic activation.J.Biol.Chem.,vol.293(16),PP:17953-17970.
40.Reynolds R,Hartnett ME,Atkinson JP,Giclas PC,Rosner B,Seddon JM(2009).Plasma complement components and activation fragments:associationswith age-related macular degeneration genotypes and phenotypes.Invest.Ophthamol.Vis.Sci.,vol.50(12),PP:5818-5827.
41.Scholl HPN,Issa PC,Walier M,Janzer S,Poolok-Kopp B,Borncke F,Fritsche LG,Chong NV,Fimmers R,Wienker T,Holz FG,Weber BHF,Oppermann M(2008).Systemic complement activation in age-related macular degeneration.PLoS One,vol.3(7),e2593.
42.Lechner J,Chen M,Hogg RE,Toth L,Silvestri G,Chakravarthy U,Xu H(2016).Higher plasma levels of complement C3a,C4a and C5a increase the riskof subretinal fibrosis in neovascular age-related macular degeneration:Complement activation in AMD.Immun.Ageing,vol.13(4),s12979-016-0060-5.
43.Trou LA,Pickering MC,Blom AM(2017).The complement system as apotential therapeutic target in rheumatic disease.Nature Rev.,vol.13,PP:538-547.
44.Anderson DH,Radeke MJ,Gallo NB,Chapin EA,Johnson PT,Curletti CR,Hancox LS,Hu J,Ebright JN,Malek G,Hauser MA,Rickman CB,Bok D,Hageman GS,Johnson LV(2010).The pivotal role of the complement system in aging and age-related macular degeneration:hypothesis re-visited.Prog.Retin.Eye Res.,vol.29,PP:95-112.
45.Scholl HPN,Issa PC,Walier M,Janzer S,Pollok-Kopp B,F,Fritsche LG,Chong NV,Fimmers R,Wienker T,Holz FG,Weber BH,Oppermann M(2008).Systemic complement activation in age related macular degeneration.PLoS ONE,vol.3(7)P:e2593.
46.Nilsson SC,Sim RB,Lea SM,Fremeaux-Bacchi V,Blom Am(2011)Complementfactor I in health and disease.Mol.Immunol.Vol.,48(14),PP:1611-1620.
47.Lachmann PJ(2019)The story of complement factor I.Immunology,vol.224(4),PP:511-517.
48.Lubin DM,Atkinson JP(1998).Decay-accelerating factor:Biochemistry,molecular-biology,and function.Ann.Rev.Immunol.,vol.7,PP:35-58.
49.Williams P,Chaudry Y,Goodfellow IG,Billington J,Powell R,SpillerOB,Evans DJ,Lea S(2003).Mapping CD55 function.J.Biol.Chem.,vol.12,PP:10691-10696.
50.Dho SH,Lim JC,Kim LK(2018).Beyond the role of CD55 as a complementcomponent.Innune Netw.,Vol.18(1),e11.
51.Skerka C,Chen Q,Fremeaux-Bacchi V,Roumenina LT(2013).Complementfactor H related proteins(CFHRs).Mol.Immunol.,vol.56(3),PP:170-180.
52.Cipriani V,Lores-Motta L,He F,Fathalla D,Tilakaratna V,McHarg S,Bayatti N,Acar IE,Hoyng CB,Fauser S,Moore AT,Yates JRW,de Jong EK,Morgan BP,den Hollander AI,Bishop PN,Clark SJ(2020)Increased circulating levels ofFactor H-related Protein 4 are strongly associated with age-related maculardegeneration.Nat.Commun.Vol.11(1),PP778.
53.Lako M,Kavangh D,(2021).Revisiting the role of factor H in age-related macular degeneration:Insights from complement-mediated renal diseaseand rare genetic variants.Surv.Ophthamol.,vol.66(2),PP:378-401.
54.Callis,J.,Fromm,M.,and Walbot,V.(1987).Introns increase geneexpression in cultured maize cells.Genes Dev.1,1183–1200.
55.Rose AB(2019).Introns as gene regulators:a brick on theaccelerator.Front.Genet.,vol.9；672.
56.Haut DD,Pintel DJ(1998).Intron definition is required for excisionof the minute virus of mice small intron and definition of the upstreamexon.J.Virol.,vol.72(3),PP:1834-1843.
57.Thomas J,Storm TA,Huang Z,Kay MA(2004).Rapid uncoating of vectorgenomes is the key to efficient liver transduction with pseudotyped adeno-associated virus vectors.J.Virol.,vol.78(6),PP:3110-3122.
58.Fisher KJ,Gao GP,Weiitzman MD,DeMatteo R,Burda.JF,Wilson JM(1996).Transduction with recombinant adeno-associated virus for gene therapy islimited by leading-strand synthesis.J.Virol.,vol.70(1),PP:520-532.
59.Thompson JD,Higgins DG,Gibson TJ(1994).CLUSTAL W:improving thesensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequenceweighting,position-specific gap penalties and weight matric choice.NucleicAcids Res.,22(22),4673-4680.
60.Thompson JD,Gibson TJ,Plewniak F,Jeanmougin F,Higgins DG(1997).TheCLUSTAL_X windows interface:flexible strategies for multiple sequencealignment aided by quality analysis tools.Nucleic Acids Res.,25(24),4876-4882.
61.Do DV,Rhoades W,Nguyen QD(2020).Pharmacokinetic study ofintravitreal aflibercept in humans with neovascular age-related maculardegeneration.Retina.,40(4):643-647.
序列表
<110> 伊卡罗维克有限公司（Ikarovec Limited）
<120> 视网膜病症
<130> AXH/CKW/117964PCT1
<150> GB2108760.6
<151> 2021-06-18
<150> GB2204234.5
<151> 2022-03-25
<160> 107
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 508
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 巨细胞病毒(CMV)启动子
<400> 1
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300
catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg 360
atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg 420
ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt 480
acggtgggag gtctatataa gcagagct 508
<210> 2
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CMV启动子的截短形式
<400> 2
aggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct ggtttagtga accgtcagat 60
<210> 3
<211> 583
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CMV早期增强子元件和鸡β-肌动蛋白基因(CAG)的第一内含子的融合体
<400> 3
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120
atgggtggac tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac 300
catggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc atctcccccc cctccccacc 360
cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg cggggggggg 420
gggggggcgc gcgccaggcg gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggag 480
aggtgcggcg gcagccaatc agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg 540
gcggcggcgg cggccctata aaaagcgaag cgcgcggcgg gcg 583
<210> 4
<211> 2039
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 卵黄样黄斑营养不良蛋白-2 (VMD2)启动子
<400> 4
aattctgtca ttttactagg gtgatgaaat tcccaagcaa caccatcctt ttcagataag 60
ggcactgagg ctgagagagg agctgaaacc tacccggcgt caccacacac aggtggcaag 120
gctgggacca gaaaccagga ctgttgactg cagcccggta ttcattcttt ccatagccca 180
cagggctgtc aaagacccca gggcctagtc agaggctcct ccttcctgga gagttcctgg 240
cacagaagtt gaagctcagc acagccccct aacccccaac tctctctgca aggcctcagg 300
ggtcagaaca ctggtggagc agatccttta gcctctggat tttagggcca tggtagaggg 360
ggtgttgccc taaattccag ccctggtctc agcccaacac cctccaagaa gaaattagag 420
gggccatggc caggctgtgc tagccgttgc ttctgagcag attacaagaa gggactaaga 480
caaggactcc tttgtggagg tcctggctta gggagtcaag tgacggcggc tcagcactca 540
cgtgggcagt gccagcctct aagagtgggc aggggcactg gccacagagt cccagggagt 600
cccaccagcc tagtcgccag accttctgtg ggatcatcgg acccacctgg aaccccacct 660
gtgagtacaa ggtgccccag gtggactggg ctggggcttt gaggccttca gggttggatg 720
gccatcttgc gtatttgtgt gggatatgca cacacaggca gcacatgcgc aggtgtgtgg 780
gcacctgtgt gtctgtgcaa atgccctgag gtgggaatga gcttggtgtg catcaggcac 840
agccagccag tgtggctgca gcaaaacaca cagggaaaga atggaggggg catcaatcac 900
tgcttcagta aatttttatt gagcgccttc tacgagaaca caagaggagc ttccattctg 960
aggaggaaac aggcaggaaa caggcagata tcctgtataa tttcaagtag tgataagtgc 1020
tctctagaaa tatcaagcaa ggtgaggaga cacagagcac cggtggcagt ggggctctat 1080
ttccaggttg gatggttggg aacatccttt ctaaagggaa cctggagtgg gaaggaacca 1140
tgcaggtatc tcaggaagag cttcctccag gcaggaagat cagcaggtgg aaaggccctg 1200
gagccaccat tcagtaaaca tcatttgagc atctctacca gctaggttcc attatgggaa 1260
tgggaatatg gtggtggaca gggctgcctg gtcccttcca tacttctcac actagggtgg 1320
ttgagagagc ttgggagcta acgaacaaga tgggctgaga acactgccta gcccagagga 1380
cctgagctta gtgtgtagac attgctgctg ttactgcctt tgtcattgta ttatttattt 1440
atttatttat ttatttttag acagagtttt gctcttctta cccaggctgg agtgcaatgg 1500
cgtgatctca gctcactgca acctccacct cctgggttca agcgattctc ctgcctcagc 1560
ctcctgagta gctgggatta caggcacccg caccacgcct ggataatttt tttgtatttt 1620
tagtagagac agggtttcac catgttggcc aggctggtct cgaactcctg accttaggtg 1680
atccacctgc ctcgacttcc caaagtgctg ggattatagg catgagccac tgcgcccagt 1740
gattatagaa agttaaaggc acatggcaat gcacacgcct atctacgtct tccctgccaa 1800
agcaaagggc agcctctggg ctcactttct tgcgtttcta cttccaaaag gcagtcagaa 1860
ctggcagggc cttggagacc acttcatcca cctcctaggg tccctatggg agagttgagg 1920
tccagagcag ggaagggtcc tgacaggctc tgaccagggc ctctgatccc tacaaacccc 1980
caatcggtgt ccctctctac caggacccaa gcccacctgc tgcagcccac tgcctggcc 2039
<210> 5
<211> 623
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VMD2启动子的截短形式
<400> 5
aattctgtca ttttactagg gtgatgaaat tcccaagcaa caccatcctt ttcagataag 60
ggcactgagg ctgagagagg agctgaaacc tacccggcgt caccacacac aggtggcaag 120
gctgggacca gaaaccagga ctgttgactg cagcccggta ttcattcttt ccatagccca 180
cagggctgtc aaagacccca gggcctagtc agaggctcct ccttcctgga gagttcctgg 240
cacagaagtt gaagctcagc acagccccct aacccccaac tctctctgca aggcctcagg 300
ggtcagaaca ctggtggagc agatccttta gcctctggat tttagggcca tggtagaggg 360
ggtgttgccc taaattccag ccctggtctc agcccaacac cctccaagaa gaaattagag 420
gggccatggc caggctgtgc tagccgttgc ttctgagcag attacaagaa gggactaaga 480
caaggactcc tttgtggagg tcctggctta gggagtcaag tgacggcggc tcagcactca 540
cgtgggcagt gccagcctct aagagtgggc aggggcactg gccacagagt cccagggagt 600
cccaccagcc tagtcgccag acc 623
<210> 6
<211> 462
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> VMD2启动子的截短形式
<400> 6
tcattctttc catagcccac agggctgtca aagaccccag ggcctagtca gaggctcctc 60
cttcctggag agttcctggc acagaagttg aagctcagca cagcccccta acccccaact 120
ctctctgcaa ggcctcaggg gtcagaacac tggtggagca gatcctttag cctctggatt 180
ttagggccat ggtagagggg gtgttgccct aaattccagc cctggtctca gcccaacacc 240
ctccaagaag aaattagagg ggccatggcc aggctgtgct agccgttgct tctgagcaga 300
ttacaagaag ggactaagac aaggactcct ttgtggaggt cctggcttag ggagtcaagt 360
gacggcggct cagcactcac gtgggcagtg ccagcctcta agagtgggca ggggcactgg 420
ccacagagtc ccagggagtc ccaccagcct agtcgccaga cc 462
<210> 7
<211> 500
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人磷酸甘油酸激酶-1 (PGK)启动子
<400> 7
gggtagggga ggcgcttttc ccaaggcagt ctggagcatg cgctttagca gccccgctgg 60
gcacttggcg ctacacaagt ggcctctggc ctcgcacaca ttccacatcc accggtaggc 120
gccaaccggc tccgttcttt ggtggcccct tcgcgccacc ttctactcct cccctagtca 180
ggaagttccc ccccgccccg cagctcgcgt cgtgcaggac gtgacaaatg gaagtagcac 240
gtctcactag tctcgtgcag atggacagca ccgctgagca atggaagcgg gtaggccttt 300
ggggcagcgg ccaatagcag ctttgctcct tcgctttctg ggctcagagg ctgggaaggg 360
gtgggtccgg gggcgggctc aggggcgggc tcaggggcgg ggcgggcgcc cgaaggtcct 420
ccggaggccc ggcattctgc acgcttcaaa agcgcacgtc tgccgcgctg ttctcctctt 480
cctcatctcc gggcctttcg 500
<210> 8
<211> 1182
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EF1alpha启动子
<400> 8
gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag aagttggggg 60
gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg 120
atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag 180
tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag gtaagtgccg 240
tgtgtggttc ccgcgggcct ggcctcttta cgggttatgg cccttgcgtg ccttgaatta 300
cttccacgcc cctggctgca gtacgtgatt cttgatcccg agcttcgggt tggaagtggg 360
tgggagagtt cgaggccttg cgcttaagga gccccttcgc ctcgtgcttg agttgaggcc 420
tggcttgggc gctggggccg ccgcgtgcga atctggtggc accttcgcgc ctgtctcgct 480
gctttcgata agtctctagc catttaaaat ttttgatgac ctgctgcgac gctttttttc 540
tggcaagata gtcttgtaaa tgcgggccaa gatctgcaca ctggtatttc ggtttttggg 600
gccgcgggcg gcgacggggc ccgtgcgtcc cagcgcacat gttcggcgag gcggggcctg 660
cgagcgcggc caccgagaat cggacggggg tagtctcaag ctggccggcc tgctctggtg 720
cctggcctcg cgccgccgtg tatcgccccg ccctgggcgg caaggctggc ccggtcggca 780
ccagttgcgt gagcggaaag atggccgctt cccggccctg ctgcagggag ctcaaaatgg 840
aggacgcggc gctcgggaga gcgggcgggt gagtcaccca cacaaaggaa aagggccttt 900
ccgtcctcag ccgtcgcttc atgtgactcc acggagtacc gggcgccgtc caggcacctc 960
gattagttct cgagcttttg gagtacgtcg tctttaggtt ggggggaggg gttttatgcg 1020
atggagtttc cccacactga gtgggtggag actgaagtta ggccagcttg gcacttgatg 1080
taattctcct tggaatttgc cctttttgag tttggatctt ggttcattct caagcctcag 1140
acagtggttc aaagtttttt tcttccattt caggtgtcgt ga 1182
<210> 9
<211> 230
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 没有大内含子启动子的EF1alpha
<400> 9
gctccggtgc ccgtcagtgg gcagagcgca catcgcccac agtccccgag aagttggggg 60
gaggggtcgg caattgaacc ggtgcctaga gaaggtggcg cggggtaaac tgggaaagtg 120
atgtcgtgta ctggctccgc ctttttcccg agggtggggg agaaccgtat ataagtgcag 180
tagtcgccgt gaacgttctt tttcgcaacg ggtttgccgc cagaacacag 230
<210> 10
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗VEGF单链可变片段(SCVF-1)
<400> 10
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His
145 150 155 160
Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp
180 185 190
Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 11
<211> 756
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SCVF-1的核酸序列
<400> 11
gatatccagc tgacccagag cccttctagc ctgtccgcct ctgtgggcga cagggtgacc 60
atcacatgta gcgcctccca ggatatctcc aactatctga attggtacca gcagaagcca 120
ggcaaggccc ccaaggtgct gatctatttc acctcctctc tgcacagcgg cgtgccatcc 180
agattctctg gcagcggctc cggcaccgac tttaccctga caatcagctc cctgcagcca 240
gaggatttcg ccacatacta ttgccagcag tacagcaccg tgccctggac atttggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gaggggagga ggaggaggat ctggaggagg aggcagcggc 360
ggcggcggct ccggcggcgg cggctctgag gtgcagctgg tggagtccgg aggaggcctg 420
gtgcagccag gaggatctct gaggctgagc tgtgccgcct ccggctatga cttcacccac 480
tacggaatga actgggtgcg ccaggcacct ggcaagggac tggagtgggt gggctggatc 540
aatacctata caggcgagcc aacctacgcc gccgacttta agcggcggtt caccttcagc 600
ctggatacct ctaagagcac agcctacctg cagatgaact ccctgagggc agaggacacc 660
gccgtgtact attgcgccaa gtatccttac tattacggca caagccactg gtacttcgac 720
gtgtggggac agggcaccct ggtgacagtg tctagc 756
<210> 12
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗VEGF单链可变片段 (SCVF-2)
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn
145 150 155 160
Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp
180 185 190
Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp
225 230 235 240
Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 13
<211> 756
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SCVF-2的核酸序列
<400> 13
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaaggtgct gatctacttc accagcagcc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaccg tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgcggcggc ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcggc 360
ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcgag gtgcagctgg tggagagcgg cggcggcctg 420
gtgcagcccg gcggcagcct gcgcctgagc tgcgccgcca gcggctacac cttcaccaac 480
tacggcatga actgggtgcg ccaggccccc ggcaagggcc tggagtgggt gggctggatc 540
aacacctaca ccggcgagcc cacctacgcc gccgacttca agcgccgctt caccttcagc 600
ctggacacca gcaagagcac cgcctacctg cagatgaaca gcctgcgcgc cgaggacacc 660
gccgtgtact actgcgccaa gtacccccac tactacggca gcagccactg gtacttcgac 720
gtgtggggcc agggcaccct ggtgaccgtg agcagc 756
<210> 14
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗VEGF单链可变片段 (SCFV-3)
<400> 14
Met Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Ile Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Ile Ile His Ser
20 25 30
Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Ala Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn Val Tyr Leu Ala Ser
85 90 95
Thr Asn Gly Ala Asn Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr
180 185 190
Ala Ala Asp Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp
225 230 235 240
Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210> 15
<211> 765
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SCFV-3的核酸序列
<400> 15
atggagatcg tgatgaccca gagccccagc accctgagcg ccagcgtggg cgaccgcgtg 60
atcatcacct gccaggccag cgagatcatc cacagctggc tggcctggta ccagcagaag 120
cccggcaagg cccccaagct gctgatctac ctggccagca ccctggccag cggcgtgccc 180
agccgcttca gcggcagcgg cagcggcgcc gagttcaccc tgaccatcag cagcctgcag 240
cccgacgact tcgccaccta ctactgccag aacgtgtacc tggccagcac caacggcgcc 300
aacttcggcc agggcaccaa gctgaccgtg ctgggcggcg gcggcggcag cggcggcggc 360
ggcagcggcg gcggcggcag cggcggcggc ggcagcgagg tgcagctggt ggagagcggc 420
ggcggcctgg tgcagcccgg cggcagcctg cgcctgagct gcgccgccag cggctacacc 480
ttcaccaact acggcatgaa ctgggtgcgc caggcccccg gcaagggcct ggagtgggtg 540
ggctggatca acacctacac cggcgagccc acctacgccg ccgacttcaa gcgccgcttc 600
accttcagcc tggacaccag caagagcacc gcctacctgc agatgaacag cctgcgcgcc 660
gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaag tacccccact actacggcag cagccactgg 720
tacttcgacg tgtggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gcagc 765
<210> 16
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗VEGF单链可变片段 (SCVF-4)
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asp
145 150 155 160
Tyr Tyr Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
165 170 175
Trp Val Gly Phe Ile Asp Pro Asp Asp Asp Pro Tyr Tyr Ala Thr Trp
180 185 190
Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu
195 200 205
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Gly Gly Asp His Asn Ser Gly Trp Gly Leu Asp Ile Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 17
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SCVF-4的核酸序列
<400> 17
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgca gcgccagcca ggacatcagc aactacctga actggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaaggtgct gatctacttc accagcagcc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacagcaccg tgccctggac cttcggccag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgcggcggc ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcggc 360
ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcgag gtgcagctgg tggagagcgg cggcggcctg 420
gtgcagcccg gcggcagcct gcgcctgagc tgcaccgcca gcggcttcag cctgaccgac 480
tactactaca tgacctgggt gcgccaggcc cccggcaagg gcctggagtg ggtgggcttc 540
atcgaccccg acgacgaccc ctactacgcc acctgggcca agggccgctt caccatcagc 600
cgcgacaaca gcaagaacac cctgtacctg cagatgaaca gcctgcgcgc cgaggacacc 660
gccgtgtact actgcgccgg cggcgaccac aacagcggct ggggcctgga catctggggc 720
cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc 747
<210> 18
<211> 431
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白-1
<400> 18
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
1 5 10 15
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
20 25 30
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
35 40 45
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
50 55 60
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65 70 75 80
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg
85 90 95
Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile
100 105 110
Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr
115 120 125
Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys
130 135 140
His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly
145 150 155 160
Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr
165 170 175
Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met
180 185 190
Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr
195 200 205
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
210 215 220
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
225 230 235 240
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
245 250 255
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
260 265 270
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
275 280 285
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
290 295 300
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
305 310 315 320
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
325 330 335
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
340 345 350
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
355 360 365
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
370 375 380
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
385 390 395 400
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
405 410 415
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
420 425 430
<210> 19
<211> 1293
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白-1的核酸序列
<400> 19
agcgacaccg gccgcccctt cgtggagatg tacagcgaga tccccgagat catccacatg 60
accgagggcc gcgagctggt gatcccctgc cgcgtgacca gccccaacat caccgtgacc 120
ctgaagaagt tccccctgga caccctgatc cccgacggca agcgcatcat ctgggacagc 180
cgcaagggct tcatcatcag caacgccacc tacaaggaga tcggcctgct gacctgcgag 240
gccaccgtga acggccacct gtacaagacc aactacctga cccaccgcca gaccaacacc 300
atcatcgacg tggtgctgag ccccagccac ggcatcgagc tgagcgtggg cgagaagctg 360
gtgctgaact gcaccgcccg caccgagctg aacgtgggca tcgacttcaa ctgggagtac 420
cccagcagca agcaccagca caagaagctg gtgaaccgcg acctgaagac ccagagcggc 480
agcgagatga agaagttcct gagcaccctg accatcgacg gcgtgacccg cagcgaccag 540
ggcctgtaca cctgcgccgc cagcagcggc ctgatgacca agaagaacag caccttcgtg 600
cgcgtgcacg agaaggacaa gacccacacc tgccccccct gccccgcccc cgagctgctg 660
ggcggcccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagccgc 720
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc 780
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagccccg cgaggagcag 840
tacaacagca cctaccgcgt ggtgagcgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 900
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgc ccgcccccat cgagaagacc 960
atcagcaagg ccaagggcca gccccgcgag ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgc 1020
gacgagctga ccaagaacca ggtgagcctg acctgcctgg tgaagggctt ctaccccagc 1080
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1140
cccgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagagc 1200
cgctggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1260
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggc 1293
<210> 20
<211> 431
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白-2
<400> 20
Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu
1 5 10 15
Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val
20 25 30
Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr
35 40 45
Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe
50 55 60
Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu
65 70 75 80
Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg
85 90 95
Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile
100 105 110
Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr
115 120 125
Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys
130 135 140
His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly
145 150 155 160
Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr
165 170 175
Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met
180 185 190
Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr
195 200 205
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser
210 215 220
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
225 230 235 240
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
245 250 255
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
260 265 270
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
275 280 285
Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
290 295 300
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr
305 310 315 320
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
325 330 335
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
340 345 350
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
355 360 365
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
370 375 380
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
385 390 395 400
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
405 410 415
Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
420 425 430
<210> 21
<211> 1293
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白-2的核酸序列
<400> 21
agcgacaccg gccgcccctt cgtggagatg tacagcgaga tccccgagat catccacatg 60
accgagggcc gcgagctggt gatcccctgc cgcgtgacca gccccaacat caccgtgacc 120
ctgaagaagt tccccctgga caccctgatc cccgacggca agcgcatcat ctgggacagc 180
cgcaagggct tcatcatcag caacgccacc tacaaggaga tcggcctgct gacctgcgag 240
gccaccgtga acggccacct gtacaagacc aactacctga cccaccgcca gaccaacacc 300
atcatcgacg tggtgctgag ccccagccac ggcatcgagc tgagcgtggg cgagaagctg 360
gtgctgaact gcaccgcccg caccgagctg aacgtgggca tcgacttcaa ctgggagtac 420
cccagcagca agcaccagca caagaagctg gtgaaccgcg acctgaagac ccagagcggc 480
agcgagatga agaagttcct gagcaccctg accatcgacg gcgtgacccg cagcgaccag 540
ggcctgtaca cctgcgccgc cagcagcggc ctgatgacca agaagaacag caccttcgtg 600
cgcgtgcacg agaaggacaa gacccacacc tgccccccct gccccgcccc cgaggccgcc 660
ggcggcccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagccgc 720
acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg aggaccccga ggtgaagttc 780
aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagccccg cgaggagcag 840
tacaacagca cctaccgcgt ggtgagcgtg ctgaccgtgc tggcccagga ctggctgaac 900
ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgg gcgcccccat cgagaagacc 960
atcagcaagg ccaagggcca gccccgcgag ccccaggtgt acaccctgcc ccccagccgc 1020
gacgagctga ccaagaacca ggtgagcctg acctgcctgg tgaagggctt ctaccccagc 1080
gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1140
cccgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagagc 1200
cgctggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaacgcc 1260
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggc 1293
<210> 22
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗C3b单链可变片段
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ala Thr Leu Pro
85 90 95
Thr Phe Glu Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Thr Ser
145 150 155 160
Ser Ser Val Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Leu Ile Tyr
165 170 175
Pro Tyr Asn Gly Phe Asn Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
180 185 190
Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
195 200 205
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Ala Leu Tyr Gly Ser Gly
210 215 220
Gly Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
225 230 235 240
Ser Ser
<210> 23
<211> 726
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗C3b单链可变片段的核酸序列
<400> 23
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcgccagcca ggacgtaagc accgccgtgg cctggtacca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ccaagctgct gatctacagc gccagcttcc tgtacagcgg cgtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag agctacgcca ccctgcccac cttcgagcag 300
ggcaccaagg tggagatcaa gcgcggcggc ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcggc 360
ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcgag gtgcagctgg tggagagcgg cggcggcctg 420
gtgcagcccg gcggcagcct gcgcctgagc tgcgccgcca gcggcttcag cttcaccagc 480
agcagcgtga gccccggcaa gggcctggag tgggtgggcc tgatctaccc ctacaacggc 540
ttcaactact acgccgacag cgtgaagggc cgcttcacca tcagcgccga caccagcctg 600
cagatgaaca gcctgcgcgc cgaggacacc gccgtgtact actgcgcccg caacgccctg 660
tacggcagcg gcggctacta cgccatggac tactggggcc agggcaccct ggtgaccgtg 720
agcagc 726
<210> 24
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗Bb单链可变片段
<400> 24
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Tyr Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Asp Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Glu Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly
130 135 140
Ala Ser Val Arg Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn
145 150 155 160
Tyr Trp Ile His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Asn Thr Gly Tyr Asn Asp Tyr Asn Gln Lys
180 185 190
Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val
195 200 205
Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Arg Gly Gly Gln Leu Gly Leu Arg Arg Ala Met Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 25
<211> 750
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗Bb单链可变片段的核酸序列
<400> 25
gacgtgcaga tcacccagag ccccagctac ctggccgcca gccccggcga gaccatcacc 60
atcaactgcc gcgccagcaa gagcatcagc aagtacctgg cctggtacca ggacaagccc 120
ggcaagacca acaagctgct gatctacagc ggcagcaccc tgcagagcgg catccccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctggagccc 240
gaggacttcg ccatgtacta ctgccagcag cacgacgagt acccctggac cttcggcggc 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgcggcggc ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcggc 360
ggcggcggca gcggcggcgg cggcagccag gtgcagctgc agcagagcgg cgccgagctg 420
gccaagcccg gcgccagcgt gcgcatgagc tgcaaggcca gcggctacac cttcaccaac 480
tactggatcc actgggtgaa gcagcgcccc ggccagggcc tggagtggat cggctacatc 540
aaccccaaca ccggctacaa cgactacaac cagaagttca aggacaaggc caccctgacc 600
gccgacaaga gcagcagcac cgtgtacatg cagctgagca gcctgaccag cgaggacagc 660
gccgtgtact actgcgcccg cggcggccag ctgggcctgc gccgcgccat ggactactgg 720
ggccagggca ccagcgtgac cgtgagcagc 750
<210> 26
<211> 320
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD55的可溶（非膜结合）形式 (sCD55)
<400> 26
Asp Cys Gly Leu Pro Pro Asp Val Pro Asn Ala Gln Pro Ala Leu Glu
1 5 10 15
Gly Arg Thr Ser Phe Pro Glu Asp Thr Val Ile Thr Tyr Lys Cys Glu
20 25 30
Glu Ser Phe Val Lys Ile Pro Gly Glu Lys Asp Ser Val Ile Cys Leu
35 40 45
Lys Gly Ser Gln Trp Ser Asp Ile Glu Glu Phe Cys Asn Arg Ser Cys
50 55 60
Glu Val Pro Thr Arg Leu Asn Ser Ala Ser Leu Lys Gln Pro Tyr Ile
65 70 75 80
Thr Gln Asn Tyr Phe Pro Val Gly Thr Val Val Glu Tyr Glu Cys Arg
85 90 95
Pro Gly Tyr Arg Arg Glu Pro Ser Leu Ser Pro Lys Leu Thr Cys Leu
100 105 110
Gln Asn Leu Lys Trp Ser Thr Ala Val Glu Phe Cys Lys Lys Lys Ser
115 120 125
Cys Pro Asn Pro Gly Glu Ile Arg Asn Gly Gln Ile Asp Val Pro Gly
130 135 140
Gly Ile Leu Phe Gly Ala Thr Ile Ser Phe Ser Cys Asn Thr Gly Tyr
145 150 155 160
Lys Leu Phe Gly Ser Thr Ser Ser Phe Cys Leu Ile Ser Gly Ser Ser
165 170 175
Val Gln Trp Ser Asp Pro Leu Pro Glu Cys Arg Glu Ile Tyr Cys Pro
180 185 190
Ala Pro Pro Gln Ile Asp Asn Gly Ile Ile Gln Gly Glu Arg Asp His
195 200 205
Tyr Gly Tyr Arg Gln Ser Val Thr Tyr Ala Cys Asn Lys Gly Phe Thr
210 215 220
Met Ile Gly Glu His Ser Ile Tyr Cys Thr Val Asn Asn Asp Glu Gly
225 230 235 240
Glu Trp Ser Gly Pro Pro Pro Glu Cys Arg Gly Lys Ser Leu Thr Ser
245 250 255
Lys Val Pro Pro Thr Val Gln Lys Pro Thr Thr Val Asn Val Pro Thr
260 265 270
Thr Glu Val Ser Pro Thr Ser Gln Lys Thr Thr Thr Lys Thr Thr Thr
275 280 285
Pro Asn Ala Gln Ala Thr Arg Ser Thr Pro Val Ser Arg Thr Thr Lys
290 295 300
His Phe His Glu Thr Thr Pro Asn Lys Gly Ser Gly Thr Thr Ser Gly
305 310 315 320
<210> 27
<211> 960
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码sCD55的核酸序列
<400> 27
gactgcggcc tgccccccga cgtgcccaac gcccagcccg ccctggaggg ccgcaccagc 60
ttccccgagg acaccgtgat cacctacaag tgcgaggaga gcttcgtgaa gatccccggc 120
gagaaggaca gcgtgatctg cctgaagggc agccagtgga gcgacatcga ggagttctgc 180
aaccgcagct gcgaggtgcc cacccgcctg aacagcgcca gcctgaagca gccctacatc 240
acccagaact acttccccgt gggcaccgtg gtggagtacg agtgccgccc cggctaccgc 300
cgcgagccca gcctgagccc caagctgacc tgcctgcaga acctgaagtg gagcaccgcc 360
gtggagttct gcaagaagaa gagctgcccc aaccccggcg agatccgcaa cggccagatc 420
gacgtgcccg gcggcatcct gttcggcgcc accatcagct tcagctgcaa caccggctac 480
aagctgttcg gcagcaccag cagcttctgc ctgatcagcg gcagcagcgt gcagtggagc 540
gaccccctgc ccgagtgccg cgagatctac tgccccgccc ccccccagat cgacaacggc 600
atcatccagg gcgagcgcga ccactacggc taccgccaga gcgtgaccta cgcctgcaac 660
aagggcttca ccatgatcgg cgagcacagc atctactgca ccgtgaacaa cgacgagggc 720
gagtggagcg gccccccccc cgagtgccga ggcaagagcc tgaccagcaa ggtgcccccc 780
accgtgcaga agcccaccac cgtgaacgtg cccaccaccg aggtgagccc caccagccag 840
aagaccacca ccaagaccac cacccccaac gcccaggcca cccgcagcac ccccgtgagc 900
cgcaccacca agcacttcca cgagaccacc cccaacaagg gcagcggcac caccagcggc 960
<210> 28
<211> 312
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人补体因子H相关蛋白-1 (CFHR1)
<400> 28
Glu Ala Thr Phe Cys Asp Phe Pro Lys Ile Asn His Gly Ile Leu Tyr
1 5 10 15
Asp Glu Glu Lys Tyr Lys Pro Phe Ser Gln Val Pro Thr Gly Glu Val
20 25 30
Phe Tyr Tyr Ser Cys Glu Tyr Asn Phe Val Ser Pro Ser Lys Ser Phe
35 40 45
Trp Thr Arg Ile Thr Cys Thr Glu Glu Gly Trp Ser Pro Thr Pro Lys
50 55 60
Cys Leu Arg Leu Cys Phe Phe Pro Phe Val Glu Asn Gly His Ser Glu
65 70 75 80
Ser Ser Gly Gln Thr His Leu Glu Gly Asp Thr Val Gln Ile Ile Cys
85 90 95
Asn Thr Gly Tyr Arg Leu Gln Asn Asn Glu Asn Asn Ile Ser Cys Val
100 105 110
Glu Arg Gly Trp Ser Thr Pro Pro Lys Cys Arg Ser Thr Asp Thr Ser
115 120 125
Cys Val Asn Pro Pro Thr Val Gln Asn Ala His Ile Leu Ser Arg Gln
130 135 140
Met Ser Lys Tyr Pro Ser Gly Glu Arg Val Arg Tyr Glu Cys Arg Ser
145 150 155 160
Pro Tyr Glu Met Phe Gly Asp Glu Glu Val Met Cys Leu Asn Gly Asn
165 170 175
Trp Thr Glu Pro Pro Gln Cys Lys Asp Ser Thr Gly Lys Cys Gly Pro
180 185 190
Pro Pro Pro Ile Asp Asn Gly Asp Ile Thr Ser Phe Pro Leu Ser Val
195 200 205
Tyr Ala Pro Ala Ser Ser Val Glu Tyr Gln Cys Gln Asn Leu Tyr Gln
210 215 220
Leu Glu Gly Asn Lys Arg Ile Thr Cys Arg Asn Gly Gln Trp Ser Glu
225 230 235 240
Pro Pro Lys Cys Leu His Pro Cys Val Ile Ser Arg Glu Ile Met Glu
245 250 255
Asn Tyr Asn Ile Ala Leu Arg Trp Thr Ala Lys Gln Lys Leu Tyr Leu
260 265 270
Arg Thr Gly Glu Ser Ala Glu Phe Val Cys Lys Arg Gly Tyr Arg Leu
275 280 285
Ser Ser Arg Ser His Thr Leu Arg Thr Thr Cys Trp Asp Gly Lys Leu
290 295 300
Glu Tyr Pro Thr Cys Ala Lys Arg
305 310
<210> 29
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码CFHR1的核酸序列
<400> 29
gaagcaacat tttgtgattt tccaaaaata aaccatggaa ttctatatga tgaagaaaaa 60
tataagccat tttcccaggt tcctacaggg gaagttttct attactcctg tgaatataat 120
tttgtgtctc cttcaaaatc attttggact cgcataacat gcacagaaga aggatggtca 180
ccaacaccaa agtgtctcag actgtgtttc tttccttttg tggaaaatgg tcattctgaa 240
tcttcaggac aaacacatct ggaaggtgat actgtgcaaa ttatttgcaa cacaggatac 300
agacttcaaa acaatgagaa caacatttca tgtgtagaac ggggctggtc cacccctccc 360
aaatgcaggt ccactgacac ttcctgtgtg aatccgccca cagtacaaaa tgctcatata 420
ctgtcgagac agatgagtaa atatccatct ggtgagagag tacgttatga atgtaggagc 480
ccttatgaaa tgtttgggga tgaagaagtg atgtgtttaa atggaaactg gacagaacca 540
cctcaatgca aagattctac gggaaaatgt gggccccctc cacctattga caatggggac 600
attacttcat tcccgttgtc agtatatgct ccagcttcat cagttgagta ccaatgccag 660
aacttgtatc aacttgaggg taacaagcga ataacatgta gaaatggaca atggtcagaa 720
ccaccaaaat gcttacatcc gtgtgtaata tcccgagaaa ttatggaaaa ttataacata 780
gcattaaggt ggacagccaa acagaagctt tatttgagaa caggtgaatc agctgaattt 840
gtgtgtaaac ggggatatcg tctttcatca cgttctcaca cattgcgaac aacatgttgg 900
gatgggaaac tggagtatcc aacttgtgca aaaaga 936
<210> 30
<211> 936
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码CFHR1的密码子优化的核酸序列
<400> 30
gaggccacct tctgcgactt ccccaagatc aaccacggca tcctgtacga cgaggagaag 60
tacaagccct tcagccaggt gcccaccggc gaggtgttct actacagctg cgagtacaac 120
ttcgtgagcc ccagcaagag cttctggacc cgcatcacct gcaccgagga gggctggagc 180
cccaccccca agtgcctgcg cctgtgcttc ttccccttcg tggagaacgg ccacagcgag 240
agcagcggcc agacccacct ggagggcgac accgtgcaga tcatctgcaa caccggctac 300
cgcctgcaga acaacgagaa caacatcagc tgcgtggagc gcggctggag cacccccccc 360
aagtgccgca gcaccgacac cagctgcgtg aaccccccca ccgtgcagaa cgcccacatc 420
ctgagccgcc agatgagcaa gtaccccagc ggcgagcgcg tgcgctacga gtgccgcagc 480
ccctacgaga tgttcggcga cgaggaggtg atgtgcctga acggcaactg gaccgagccc 540
ccccagtgca aggacagcac cggcaagtgc ggcccccccc cccccatcga caacggcgac 600
atcaccagct tccccctgag cgtgtacgcc cccgccagca gcgtggagta ccagtgccag 660
aacctgtacc agctggaggg caacaagcgc atcacctgcc gcaacggcca gtggagcgag 720
ccccccaagt gcctgcaccc ctgcgtgatc agccgcgaga tcatggagaa ctacaacatc 780
gccctgcgct ggaccgccaa gcagaagctg tacctgcgca ccggcgagag cgccgagttc 840
gtgtgcaagc gcggctaccg cctgagcagc cgcagccaca ccctgcgcac cacctgctgg 900
gacggcaagc tggagtaccc cacctgcgcc aagcgc 936
<210> 31
<211> 310
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD46的可溶(非膜结合)形式 (sCD46)
<400> 31
Cys Glu Glu Pro Pro Thr Phe Glu Ala Met Glu Leu Ile Gly Lys Pro
1 5 10 15
Lys Pro Tyr Tyr Glu Ile Gly Glu Arg Val Asp Tyr Lys Cys Lys Lys
20 25 30
Gly Tyr Phe Tyr Ile Pro Pro Leu Ala Thr His Thr Ile Cys Asp Arg
35 40 45
Asn His Thr Trp Leu Pro Val Ser Asp Asp Ala Cys Tyr Arg Glu Thr
50 55 60
Cys Pro Tyr Ile Arg Asp Pro Leu Asn Gly Gln Ala Val Pro Ala Asn
65 70 75 80
Gly Thr Tyr Glu Phe Gly Tyr Gln Met His Phe Ile Cys Asn Glu Gly
85 90 95
Tyr Tyr Leu Ile Gly Glu Glu Ile Leu Tyr Cys Glu Leu Lys Gly Ser
100 105 110
Val Ala Ile Trp Ser Gly Lys Pro Pro Ile Cys Glu Lys Val Leu Cys
115 120 125
Thr Pro Pro Pro Lys Ile Lys Asn Gly Lys His Thr Phe Ser Glu Val
130 135 140
Glu Val Phe Glu Tyr Leu Asp Ala Val Thr Tyr Ser Cys Asp Pro Ala
145 150 155 160
Pro Gly Pro Asp Pro Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr Ile Tyr Cys
165 170 175
Gly Asp Asn Ser Val Trp Ser Arg Ala Ala Pro Glu Cys Lys Val Val
180 185 190
Lys Cys Arg Phe Pro Val Val Glu Asn Gly Lys Gln Ile Ser Gly Phe
195 200 205
Gly Lys Lys Phe Tyr Tyr Lys Ala Thr Val Met Phe Glu Cys Asp Lys
210 215 220
Gly Phe Tyr Leu Asp Gly Ser Asp Thr Ile Val Cys Asp Ser Asn Ser
225 230 235 240
Thr Trp Asp Pro Pro Val Pro Lys Cys Leu Lys Val Leu Pro Pro Ser
245 250 255
Ser Thr Lys Pro Pro Ala Leu Ser His Ser Val Ser Thr Ser Ser Thr
260 265 270
Thr Lys Ser Pro Ala Ser Ser Ala Ser Gly Pro Arg Pro Thr Tyr Lys
275 280 285
Pro Pro Val Ser Asn Tyr Pro Gly Tyr Pro Lys Pro Glu Glu Gly Ile
290 295 300
Leu Asp Ser Leu Asp Val
305 310
<210> 32
<211> 930
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码sCD46的核酸序列
<400> 32
tgcgaggagc cccccacctt cgaggccatg gagctgatcg gcaagcccaa gccctactac 60
gagatcggcg agcgcgtgga ctacaagtgc aagaagggct acttctacat cccccccctg 120
gccacccaca ccatctgcga ccgcaaccac acctggctgc ccgtgagcga cgacgcctgc 180
taccgcgaga cctgccccta catccgcgac cccctgaacg gccaggccgt gcccgccaac 240
ggcacctacg agttcggcta ccagatgcac ttcatctgca acgagggcta ctacctgatc 300
ggcgaggaga tcctgtactg cgagctgaag ggcagcgtgg ccatctggag cggcaagccc 360
cccatctgcg agaaggtgct gtgcaccccc ccccccaaga tcaagaacgg caagcacacc 420
ttcagcgagg tggaggtgtt cgagtacctg gacgccgtga cctacagctg cgaccccgcc 480
cccggccccg accccttcag cctgatcggc gagagcacca tctactgcgg cgacaacagc 540
gtgtggagcc gcgccgcccc cgagtgcaag gtggtgaagt gccgcttccc cgtggtggag 600
aacggcaagc agatcagcgg cttcggcaag aagttctact acaaggccac cgtgatgttc 660
gagtgcgaca agggcttcta cctggacggc agcgacacca tcgtgtgcga cagcaacagc 720
acctgggacc cccccgtgcc caagtgcctg aaggtgctgc cccccagcag caccaagccc 780
cccgccctga gccacagcgt gagcaccagc agcaccacca agagccccgc cagcagcgcc 840
agcggccccc gccccaccta caagcccccc gtgagcaact accccggcta ccccaagccc 900
gaggagggca tcctggacag cctggacgtg 930
<210> 33
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CTGF单链可变片段 (抗CTGF SCVF-1)
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser
145 150 155 160
Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Ser Thr Asp Ser Val
180 185 190
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
195 200 205
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Phe Phe Asp Cys Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 34
<211> 747
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗CTGF SCVF-1的核酸序列
<400> 34
gacatccaga tgacccagag ccccagcagc ctgagcgcca gcgtgggcga ccgcgtgacc 60
atcacctgcc gcgccagcca gggcatcagc agctggctgg cctggtacca gcagaagccc 120
gagaaggccc ccaagagcct gatctacgcc gccagcagcc tccagagcgg cgtgcccagc 180
cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctccagccc 240
gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag tacaacagct acccccccac cttcggccag 300
ggcaccaagc tggagatcaa gcgcggcggc ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcggc 360
ggcggcggca gcggcggcgg cggcagcgag ggccagctgg tgcagagcgg cggcggcctg 420
gtgcaccccg gcggcagcct gcgcctgagc tgcgccggca gcggcttcac cttcagcagc 480
tacggcatgc actgggtgcg ccaggccccc ggcaagggcc tggagtgggt gagcggcatc 540
ggcaccggcg gcggcaccta cagcaccgac agcgtgaagg gccgcttcac catcagccgc 600
gacaacgcca agaacagcct gtacctccag atgaacagcc tgcgcgccga ggacatggcc 660
gtgtactact gcgcccgcgg cgactactac ggcagcggca gcttcttcga ctgctggggc 720
cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc 747
<210> 35
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗CTGF单链可变片段 (抗CTGF SCVF-2)
<400> 35
Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp
20 25 30
Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Ile Thr Glu Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser
115 120 125
Ala Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro
130 135 140
Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly
145 150 155 160
Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp
210 215 220
Ser Leu Gly Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
225 230 235 240
Ala
<210> 36
<211> 723
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码抗CTGF SCVF-2的核酸序列
<400> 36
gccgaggtgc agctggtgga gagcggcggc ggcgtggtgc ggcctggcgg cagcctgcgc 60
ctgagctgcg ccgccagcgg cttcaccttc gacgactacg gcatgagctg ggtgcgccag 120
gctccaggca agggcctgga gtgggtgagc tacatcagca gcagcggcag caccatctac 180
tacgccgaca gcgtgaaggg ccgcttcacc atcagccgcg acaacgccaa gaacagcctg 240
tacctgcaga tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgccg tgtactactg cgcacgaggc 300
atcaccgaga cctggggcca gggcaccctg gtgaccgtga gcagcggcgg cggcggcagc 360
ggcggcggcg gcagcggcgg cagcgccctg cagagcgtgc tgacccagcc acccagcgcc 420
agcggcaccc ctggccagcg cgtgaccatc agctgcagcg gcagcagcag caacatcggc 480
agcaacaccg tgaactggta ccagcagctg cccggcaccg cgcctaagct gctgatctac 540
agcaacaacc agcgccccag cggcgtgccc gaccgcttca gcggcagcaa gagcggcacc 600
agcgccagcc tggccatcag cggcctgcag agcgaggacg aggccgacta ctactgcgcc 660
gcctgggacg acagcctggg cgccgtgttc ggcggcggca ccaagctgac cgtgctgggc 720
gcc 723
<210> 37
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A肽间隔序列
<400> 37
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 38
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码P2A肽间隔序列的核酸序列
<400> 38
gccaccaact tcagcctgct gaagcaggcc ggcgacgtgg aggagaaccc cggcccc 57
<210> 39
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A肽间隔序列
<400> 39
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 40
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码E2A肽间隔序列的核酸序列
<400> 40
cagtgcacca actacgccct gctgaagctg gccggcgacg tggagagcaa ccccggcccc 60
<210> 41
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽间隔序列
<400> 41
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 42
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码T2A肽间隔序列的核酸序列
<400> 42
gagggccgcg gcagcctgct gacctgcggc gacgtggagg agaaccccgg cccc 54
<210> 43
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A肽间隔序列
<400> 43
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 44
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码F2A肽间隔序列的核酸序列
<400> 44
gtgaagcaga ccctgaactt cgacctgctg aagctggccg gcgacgtgga gagcaacccc 60
ggcccc 66
<210> 45
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 病毒-2A去除序列共有序列
<220>
<221> 变体
<222> (1)..(1)
<223> X = 碱性氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (2)..(2)
<223> X = 碱性氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (3)..(3)
<223> X = 亲水性氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)..(4)
<223> X = 碱性氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> X = 碱性氨基酸
<400> 45
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 病毒-2A去除序列，其中亲水性氨基酸是丝氨酸(S)
<400> 46
Arg Arg Ser Lys Arg Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码病毒-2A去除序列的核酸序列，其中亲水性氨基酸
是丝氨酸(S)
<400> 47
cgccgcagca agcgcagcgg cagcggc 27
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 病毒-2A去除序列，其中亲水性氨基酸是苏氨酸(T)
<400> 48
Arg Arg Thr Lys Arg Ser Gly Ser Gly
1 5
<210> 49
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码病毒-2A去除序列的核酸序列，其中亲水性氨基酸
是苏氨酸(T)
<400> 49
cgccgcacca agcgcagcgg cagcggc 27
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 病毒-2A去除序列
<400> 50
Arg Val Arg Arg Gly Ser Gly
1 5
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 50的病毒-2A去除序列的核酸序列
<400> 51
cgcgtgcgcc gcggcagcgg c 21
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 明胶酶MMP-2识别序列
<400> 52
Gly Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln
1 5
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 明胶酶MMP-2识别序列
<400> 53
Gly Pro Leu Gly Ile Ala Gly Ala
1 5
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 明胶酶MMP-2识别序列
<400> 54
Gly Pro Gln Gly Leu Leu Gly Gln
1 5
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 明胶酶MMP-2识别序列和三肽GSG接头序列
<400> 55
Gly Pro Gln Gly Ile Ala Gly Gln Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 56
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码明胶酶MMP-2识别序列和三肽GSG接头序列的核酸序列
<400> 56
ggccccctgg gcatcgccgg ccagggcagc ggc 33
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肾素识别序列
<400> 57
His Pro Phe His Leu Val Tyr Ser
1 5
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肾素识别序列
<400> 58
His Pro Phe His Leu Leu Val Tyr Ser
1 5
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肾素识别序列和三肽GSG接头序列
<400> 59
His Pro Phe His Leu Leu Val Tyr Ser Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 60
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码肾素识别序列和三肽GSG接头序列的核酸序列
<400> 60
cgccccttcc acctgctggt catccacggc agcggc 36
<210> 61
<211> 592
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)
<400> 61
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaagctga cgtcctttcc atggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgcc tg 592
<210> 62
<211> 247
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的WPRE
<400> 62
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttag ttcttgccac ggcggaactc 180
atcgccgcct gccttgcccg ctgctggaca ggggctcggc tgttgggcac tgacaattcc 240
gtggtgt 247
<210> 63
<211> 224
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 猿猴病毒-40 poly-A核苷酸序列
<400> 63
agcagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa 60
aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg 120
caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt 180
gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggta 224
<210> 64
<211> 169
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 核苷酸序列polyA组分
<400> 64
ttcgagcaac ttgtttattg cagcttataa tggttacaaa taaagcaata gcatcacaaa 60
tttcacaaat aaagcatttt tttcactgca ttctagttgt ggtttgtcca aactcatcaa 120
tgtatcttat catgtctgga tcgtctagca tcgaagatcc cccgatctg 169
<210> 65
<211> 128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 左ITR序列，取自市售的重组AAV基因组质粒
<400> 65
cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg gcaaagcccg ggcgtcgggc gacctttggt 60
cgcccggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag tggccaactc catcactagg 120
ggttcctt 128
<210> 66
<211> 128
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 右ITR序列，取自市售的重组AAV基因组质粒
<400> 66
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgc 128
<210> 67
<211> 121
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠微小病毒(MVM)小内含子
<400> 67
aggtacgatg gcgcctccag ctaaaagagc taaaagaggt aagggtttaa gggatggttg 60
gttggtgggg tattaatgtt taattacctg ttttacaggc ctgaaatcac ttggttttag 120
g 121
<210> 68
<211> 133
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 来自人β-珠蛋白基因的第一内含子的5'-供体位点和分支以及
免疫球蛋白基因重链可变区的内含子的3'-受体位点的序列
<400> 68
gtaagtatca aggttacaag acaggtttaa ggagaccaat agaaactggg cttgtcgaga 60
cagagaagac tcttgcgttt ctgataggca cctattggtc ttactgacat ccactttgcc 120
tttctctcca cag 133
<210> 69
<211> 210
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 兔β-球蛋白基因1的剪接受体的5'和3'核苷酸组分的融合体
<400> 69
gtgagcgggc gggacggccc ttctcctccg ggctgtaatt agcgcttggt ttaatgacgg 60
cttgtttctt ttctgtggct gcgtgaaagc cttgaggggc tccgggaggc tagagcctct 120
gctaaccatg ttcatgcctt cttctttttc ctacagctcc tgggcaacgt gctggttatt 180
gtgctgtctc atcattttgg caaagaattc 210
<210> 70
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 70
Met Arg Arg Phe Leu Thr Val Ile Ser Phe Leu Leu Tyr Phe Gly Cys
1 5 10 15
Ala Phe Ala
<210> 71
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码信号肽的核酸序列
<400> 71
atgcgccgct tcctgaccgt gatcagcttc ctgctgtact tcggctgcgc cttcgcc 57
<210> 72
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 经修饰以增强从靶细胞分泌的信号肽
<400> 72
Met Arg Arg Leu Val Leu Leu Leu Cys Ile Gly Ala Leu Leu Gly His
1 5 10 15
Ser Lys Ala
<210> 73
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码经修饰以增强从靶细胞分泌的信号肽的核酸序列
<400> 73
atgcgccgcc tggtgctgct gctgtgcatc ggcgccctgc tgggccacag caaggcc 57
<210> 74
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 74
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala
1 5 10
<210> 75
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 74的信号肽的核酸序列
<400> 75
atgaagaagc tgctgatcct ggccctggtg ggcgccgccg tggcc 45
<210> 76
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 76
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
Phe Ala
<210> 77
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 76的信号肽的核酸序列
<400> 77
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgcctt cgcc 54
<210> 78
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 78
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Phe Ala
<210> 79
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码SEQ ID NO: 78的信号肽的核酸序列
<400> 79
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgcc 57
<210> 80
<211> 746
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-1
<400> 80
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu
20 25 30
Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro
35 40 45
Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro
50 55 60
Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg
65 70 75 80
Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu
85 90 95
Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu
100 105 110
Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser
115 120 125
His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr
130 135 140
Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr
165 170 175
Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp
180 185 190
Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Arg Ser Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
450 455 460
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg
465 470 475 480
Arg Phe Leu Thr Val Ile Ser Phe Leu Leu Tyr Phe Gly Cys Ala Phe
485 490 495
Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
500 505 510
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser
515 520 525
Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu
530 535 540
Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
545 550 555 560
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
565 570 575
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro
580 585 590
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Gly Gly Gly
595 600 605
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
610 615 620
Gly Ser Glu Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro
625 630 635 640
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser
645 650 655
Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
660 665 670
Trp Val Ser Gly Ile Gly Thr Gly Gly Gly Thr Tyr Ser Thr Asp Ser
675 680 685
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu
690 695 700
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr
705 710 715 720
Cys Ala Arg Gly Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Phe Phe Asp Cys Trp
725 730 735
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
740 745
<210> 81
<211> 2241
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-1的核酸序列
<400> 81
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgccagc 60
gacaccggcc gccccttcgt ggagatgtac agcgagatcc ccgagatcat ccacatgacc 120
gagggccgcg agctggtgat cccctgccgc gtgaccagcc ccaacatcac cgtgaccctg 180
aagaagttcc ccctggacac cctgatcccc gacggcaagc gcatcatctg ggacagccgc 240
aagggcttca tcatcagcaa cgccacctac aaggagatcg gcctgctgac ctgcgaggcc 300
accgtgaacg gccacctgta caagaccaac tacctgaccc accgccagac caacaccatc 360
atcgacgtgg tgctgagccc cagccacggc atcgagctga gcgtgggcga gaagctggtg 420
ctgaactgca ccgcccgcac cgagctgaac gtgggcatcg acttcaactg ggagtacccc 480
agcagcaagc accagcacaa gaagctggtg aaccgcgacc tgaagaccca gagcggcagc 540
gagatgaaga agttcctgag caccctgacc atcgacggcg tgacccgcag cgaccagggc 600
ctgtacacct gcgccgccag cagcggcctg atgaccaaga agaacagcac cttcgtgcgc 660
gtgcacgaga aggacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgcccccga ggccgccggc 720
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagccgcacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccgcga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gagcgtgctg accgtgctgg cccaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgggcg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgcgac 1080
gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccccccc 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagccgc 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caacgcctac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc cgccgcagca agcgcagcgg cagcggcgcc 1380
accaacttca gcctgctgaa gcaggccggc gacgtggagg agaaccccgg ccccatgcgc 1440
cgcttcctga ccgtgatcag cttcctgctg tacttcggct gcgccttcgc cgacatccag 1500
atgacccaga gccccagcag cctgagcgcc agcgtgggcg accgcgtgac catcacctgc 1560
cgcgccagcc agggcatcag cagctggctg gcctggtacc agcagaagcc cgagaaggcc 1620
cccaagagcc tgatctacgc cgccagcagc ctccagagcg gcgtgcccag ccgcttcagc 1680
ggcagcggca gcggcaccga cttcaccctg accatcagca gcctccagcc cgaggacttc 1740
gccacctact actgccagca gtacaacagc taccccccca ccttcggcca gggcaccaag 1800
ctggagatca agcgcggcgg cggcggcggc agcggcggcg gcggcagcgg cggcggcggc 1860
agcggcggcg gcggcagcga gggccagctg gtgcagagcg gcggcggcct ggtgcacccc 1920
ggcggcagcc tgcgcctgag ctgcgccggc agcggcttca ccttcagcag ctacggcatg 1980
cactgggtgc gccaggcccc cggcaagggc ctggagtggg tgagcggcat cggcaccggc 2040
ggcggcacct acagcaccga cagcgtgaag ggccgcttca ccatcagccg cgacaacgcc 2100
aagaacagcc tgtacctcca gatgaacagc ctgcgcgccg aggacatggc cgtgtactac 2160
tgcgcccgcg gcgactacta cggcagcggc agcttcttcg actgctgggg ccagggcacc 2220
ctggtgaccg tgagcagcta a 2241
<210> 82
<211> 738
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-2
<400> 82
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu
20 25 30
Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro
35 40 45
Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro
50 55 60
Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg
65 70 75 80
Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu
85 90 95
Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu
100 105 110
Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser
115 120 125
His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr
130 135 140
Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr
165 170 175
Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp
180 185 190
Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Arg Ser Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
450 455 460
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg
465 470 475 480
Arg Phe Leu Thr Val Ile Ser Phe Leu Leu Tyr Phe Gly Cys Ala Phe
485 490 495
Ala Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro
500 505 510
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp
515 520 525
Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
530 535 540
Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp
545 550 555 560
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser
565 570 575
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
580 585 590
Tyr Cys Ala Arg Gly Ile Thr Glu Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
595 600 605
Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
610 615 620
Ser Ala Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr
625 630 635 640
Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile
645 650 655
Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro
660 665 670
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp
675 680 685
Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser
690 695 700
Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp
705 710 715 720
Asp Ser Leu Gly Ala Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
725 730 735
Gly Ala
<210> 83
<211> 2217
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白-2-弗林蛋白酶-P2A-抗CTGF SCVF-2的核酸序列
<400> 83
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgccagc 60
gacaccggcc gccccttcgt ggagatgtac agcgagatcc ccgagatcat ccacatgacc 120
gagggccgcg agctggtgat cccctgccgc gtgaccagcc ccaacatcac cgtgaccctg 180
aagaagttcc ccctggacac cctgatcccc gacggcaagc gcatcatctg ggacagccgc 240
aagggcttca tcatcagcaa cgccacctac aaggagatcg gcctgctgac ctgcgaggcc 300
accgtgaacg gccacctgta caagaccaac tacctgaccc accgccagac caacaccatc 360
atcgacgtgg tgctgagccc cagccacggc atcgagctga gcgtgggcga gaagctggtg 420
ctgaactgca ccgcccgcac cgagctgaac gtgggcatcg acttcaactg ggagtacccc 480
agcagcaagc accagcacaa gaagctggtg aaccgcgacc tgaagaccca gagcggcagc 540
gagatgaaga agttcctgag caccctgacc atcgacggcg tgacccgcag cgaccagggc 600
ctgtacacct gcgccgccag cagcggcctg atgaccaaga agaacagcac cttcgtgcgc 660
gtgcacgaga aggacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgcccccga ggccgccggc 720
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagccgcacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccgcga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gagcgtgctg accgtgctgg cccaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgggcg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgcgac 1080
gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccccccc 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagccgc 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caacgcctac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc cgccgcagca agcgcagcgg cagcggcgcc 1380
accaacttca gcctgctgaa gcaggccggc gacgtggagg agaaccccgg ccccatgcgc 1440
cgcttcctga ccgtgatcag cttcctgctg tacttcggct gcgccttcgc cgccgaggtg 1500
cagctggtgg agagcggcgg cggcgtggtg cggcctggcg gcagcctgcg cctgagctgc 1560
gccgccagcg gcttcacctt cgacgactac ggcatgagct gggtgcgcca ggctccaggc 1620
aagggcctgg agtgggtgag ctacatcagc agcagcggca gcaccatcta ctacgccgac 1680
agcgtgaagg gccgcttcac catcagccgc gacaacgcca agaacagcct gtacctgcag 1740
atgaacagcc tgcgcgccga ggacaccgcc gtgtactact gcgcacgagg catcaccgag 1800
acctggggcc agggcaccct ggtgaccgtg agcagcggcg gcggcggcag cggcggcggc 1860
ggcagcggcg gcagcgccct gcagagcgtg ctgacccagc cacccagcgc cagcggcacc 1920
cctggccagc gcgtgaccat cagctgcagc ggcagcagca gcaacatcgg cagcaacacc 1980
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗C3b SCVF
<400> 84
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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<212> DNA
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<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗C3b SCVF的核酸序列
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<210> 86
<211> 747
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗Bb SCVF
<400> 86
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
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<210> 87
<211> 2244
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-抗Bb SCVF的核酸序列
<400> 87
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgccagc 60
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<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD55
<400> 88
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
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Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
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355 360 365
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<210> 89
<211> 2454
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD55的核酸序列
<400> 89
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgccagc 60
gacaccggcc gccccttcgt ggagatgtac agcgagatcc ccgagatcat ccacatgacc 120
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aagaagttcc ccctggacac cctgatcccc gacggcaagc gcatcatctg ggacagccgc 240
aagggcttca tcatcagcaa cgccacctac aaggagatcg gcctgctgac ctgcgaggcc 300
accgtgaacg gccacctgta caagaccaac tacctgaccc accgccagac caacaccatc 360
atcgacgtgg tgctgagccc cagccacggc atcgagctga gcgtgggcga gaagctggtg 420
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agcagcaagc accagcacaa gaagctggtg aaccgcgacc tgaagaccca gagcggcagc 540
gagatgaaga agttcctgag caccctgacc atcgacggcg tgacccgcag cgaccagggc 600
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gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
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<220>
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485 490 495
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565 570 575
Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp
580 585 590
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Gly
<210> 91
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码sCD55-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2的核酸序列
<400> 91
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<210> 92
<211> 809
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHR1
<400> 92
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
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770 775 780
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<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHR1的核酸序列
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ctggagtatc caacttgtgc aaaaagataa 2430
<210> 94
<211> 809
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CFHR1-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2
<400> 94
Met Arg Arg Phe Leu Thr Val Ile Ser Phe Leu Leu Tyr Phe Gly Cys
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195 200 205
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Leu Tyr Gln Leu Glu Gly Asn Lys Arg Ile Thr Cys Arg Asn Gly Gln
245 250 255
Trp Ser Glu Pro Pro Lys Cys Leu His Pro Cys Val Ile Ser Arg Glu
260 265 270
Ile Met Glu Asn Tyr Asn Ile Ala Leu Arg Trp Thr Ala Lys Gln Lys
275 280 285
Leu Tyr Leu Arg Thr Gly Glu Ser Ala Glu Phe Val Cys Lys Arg Gly
290 295 300
Tyr Arg Leu Ser Ser Arg Ser His Thr Leu Arg Thr Thr Cys Trp Asp
305 310 315 320
Gly Lys Leu Glu Tyr Pro Thr Cys Ala Lys Arg Arg Arg Ser Lys Arg
325 330 335
Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp
340 345 350
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser
355 360 365
Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala Ala Phe Ala Ser Asp Thr Gly Arg Pro
370 375 380
Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu
385 390 395 400
Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr
405 410 415
Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys
420 425 430
Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr
435 440 445
Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His
450 455 460
Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile
465 470 475 480
Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu
485 490 495
Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile
500 505 510
Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu
515 520 525
Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe
530 535 540
Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu
545 550 555 560
Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr
565 570 575
Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
580 585 590
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
595 600 605
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
610 615 620
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
625 630 635 640
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
645 650 655
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
660 665 670
Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
675 680 685
Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
690 695 700
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
705 710 715 720
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
725 730 735
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
740 745 750
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
755 760 765
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
770 775 780
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
785 790 795 800
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
805
<210> 95
<211> 2430
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码CFHR1-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2的核酸序列
<400> 95
atgcgccgct tcctgaccgt gatcagcttc ctgctgtact tcggctgcgc cttcgccgaa 60
gcaacatttt gtgattttcc aaaaataaac catggaattc tatatgatga agaaaaatat 120
aagccatttt cccaggttcc tacaggggaa gttttctatt actcctgtga atataatttt 180
gtgtctcctt caaaatcatt ttggactcgc ataacatgca cagaagaagg atggtcacca 240
acaccaaagt gtctcagact gtgtttcttt ccttttgtgg aaaatggtca ttctgaatct 300
tcaggacaaa cacatctgga aggtgatact gtgcaaatta tttgcaacac aggatacaga 360
cttcaaaaca atgagaacaa catttcatgt gtagaacggg gctggtccac ccctcccaaa 420
tgcaggtcca ctgacacttc ctgtgtgaat ccgcccacag tacaaaatgc tcatatactg 480
tcgagacaga tgagtaaata tccatctggt gagagagtac gttatgaatg taggagccct 540
tatgaaatgt ttggggatga agaagtgatg tgtttaaatg gaaactggac agaaccacct 600
caatgcaaag attctacggg aaaatgtggg ccccctccac ctattgacaa tggggacatt 660
acttcattcc cgttgtcagt atatgctcca gcttcatcag ttgagtacca atgccagaac 720
ttgtatcaac ttgagggtaa caagcgaata acatgtagaa atggacaatg gtcagaacca 780
ccaaaatgct tacatccgtg tgtaatatcc cgagaaatta tggaaaatta taacatagca 840
ttaaggtgga cagccaaaca gaagctttat ttgagaacag gtgaatcagc tgaatttgtg 900
tgtaaacggg gatatcgtct ttcatcacgt tctcacacat tgcgaacaac atgttgggat 960
gggaaactgg agtatccaac ttgtgcaaaa agacgccgca gcaagcgcag cggcagcggc 1020
gccaccaact tcagcctgct gaagcaggcc ggcgacgtgg aggagaaccc cggccccatg 1080
cgccgcctgc tgaccttcat cagcatcctg gccctggtgg gcgccgcctt cgccagcgac 1140
accggccgcc ccttcgtgga gatgtacagc gagatccccg agatcatcca catgaccgag 1200
ggccgcgagc tggtgatccc ctgccgcgtg accagcccca acatcaccgt gaccctgaag 1260
aagttccccc tggacaccct gatccccgac ggcaagcgca tcatctggga cagccgcaag 1320
ggcttcatca tcagcaacgc cacctacaag gagatcggcc tgctgacctg cgaggccacc 1380
gtgaacggcc acctgtacaa gaccaactac ctgacccacc gccagaccaa caccatcatc 1440
gacgtggtgc tgagccccag ccacggcatc gagctgagcg tgggcgagaa gctggtgctg 1500
aactgcaccg cccgcaccga gctgaacgtg ggcatcgact tcaactggga gtaccccagc 1560
agcaagcacc agcacaagaa gctggtgaac cgcgacctga agacccagag cggcagcgag 1620
atgaagaagt tcctgagcac cctgaccatc gacggcgtga cccgcagcga ccagggcctg 1680
tacacctgcg ccgccagcag cggcctgatg accaagaaga acagcacctt cgtgcgcgtg 1740
cacgagaagg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgaggc cgccggcggc 1800
cccagcgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgatgatcag ccgcaccccc 1860
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 1920
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgcgagga gcagtacaac 1980
agcacctacc gcgtggtgag cgtgctgacc gtgctggccc aggactggct gaacggcaag 2040
gagtacaagt gcaaggtgag caacaaggcc ctgggcgccc ccatcgagaa gaccatcagc 2100
aaggccaagg gccagccccg cgagccccag gtgtacaccc tgccccccag ccgcgacgag 2160
ctgaccaaga accaggtgag cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc cagcgacatc 2220
gccgtggagt gggagagcaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 2280
ctggacagcg acggcagctt cttcctgtac agcaagctga ccgtggacaa gagccgctgg 2340
cagcagggca acgtgttcag ctgcagcgtg atgcacgagg ccctgcacaa cgcctacacc 2400
cagaagagcc tgagcctgag ccccggctaa 2430
<210> 96
<211> 4246
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组载体(例如称为"IKC153P")
<400> 96
cgcgctcgct cgctcactga ggccgcccgg gcaaagcccg ggcggcctca gtgagcgagc 60
gagcgcgcag agagggagtg gccaactcca tcactagggg ttccttgtag ttaatgatta 120
acccgccatg ctacttatct acgtagccat gctctagaca tggctcgaca gatcgagctc 180
caccgggtac cctagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata 240
tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga 300
cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt 360
ccattgacgt caatgggtgg actatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt 420
gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca 480
ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt 540
catcgctatt accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc 600
cccctcccca cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg 660
ggcggggggg gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg 720
ggcgaggcgg agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt 780
tatggcgagg cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcgggagt 840
cgctgcgacg ctgccttcgc cccgtgcccc gctccgccgc cgcctcgcgc cgcccgcccc 900
ggctctgact gaccgcgtta ctcccacagg tgagcgggcg ggacggccct tctcctccgg 960
gctgtaatta gcgcttggtt taatgacggc ttgtttcttt tctgtggctg cgtgaaagcc 1020
ttgaggggct ccgggaggct agagcctctg ctaaccatgt tcatgccttc ttctttttcc 1080
tacagctcct gggcaacgtg ctggttattg tgctgtctca tcattttggc aaagaattcc 1140
ggactcgacc cgctagcgcc accatgcgcc gcctgctgac cttcatcagc atcctggccc 1200
tggtgggcgc cgccttcgcc agcgacaccg gccgcccctt cgtggagatg tacagcgaga 1260
tccccgagat catccacatg accgagggcc gcgagctggt gatcccctgc cgcgtgacca 1320
gccccaacat caccgtgacc ctgaagaagt tccccctgga caccctgatc cccgacggca 1380
agcgcatcat ctgggacagc cgcaagggct tcatcatcag caacgccacc tacaaggaga 1440
tcggcctgct gacctgcgag gccaccgtga acggccacct gtacaagacc aactacctga 1500
cccaccgcca gaccaacacc atcatcgacg tggtgctgag ccccagccac ggcatcgagc 1560
tgagcgtggg cgagaagctg gtgctgaact gcaccgcccg caccgagctg aacgtgggca 1620
tcgacttcaa ctgggagtac cccagcagca agcaccagca caagaagctg gtgaaccgcg 1680
acctgaagac ccagagcggc agcgagatga agaagttcct gagcaccctg accatcgacg 1740
gcgtgacccg cagcgaccag ggcctgtaca cctgcgccgc cagcagcggc ctgatgacca 1800
agaagaacag caccttcgtg cgcgtgcacg agaaggacaa gacccacacc tgccccccct 1860
gccccgcccc cgaggccgcc ggcggcccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg 1920
acaccctgat gatcagccgc acccccgagg tgacctgcgt ggtggtggac gtgagccacg 1980
aggaccccga ggtgaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga 2040
ccaagccccg cgaggagcag tacaacagca cctaccgcgt ggtgagcgtg ctgaccgtgc 2100
tggcccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtgagcaac aaggccctgg 2160
gcgcccccat cgagaagacc atcagcaagg ccaagggcca gccccgcgag ccccaggtgt 2220
acaccctgcc ccccagccgc gacgagctga ccaagaacca ggtgagcctg acctgcctgg 2280
tgaagggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga 2340
acaactacaa gaccaccccc cccgtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca 2400
agctgaccgt ggacaagagc cgctggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc 2460
acgaggccct gcacaacgcc tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggccgccgca 2520
gcaagcgcag cggcagcggc gccaccaact tcagcctgct gaagcaggcc ggcgacgtgg 2580
aggagaaccc cggccccatg cgccgcttcc tgaccgtgat cagcttcctg ctgtacttcg 2640
gctgcgcctt cgccgacatc cagatgaccc agagccccag cagcctgagc gccagcgtgg 2700
gcgaccgcgt gaccatcacc tgccgcgcca gccagggcat cagcagctgg ctggcctggt 2760
accagcagaa gcccgagaag gcccccaaga gcctgatcta cgccgccagc agcctccaga 2820
gcggcgtgcc cagccgcttc agcggcagcg gcagcggcac cgacttcacc ctgaccatca 2880
gcagcctcca gcccgaggac ttcgccacct actactgcca gcagtacaac agctaccccc 2940
ccaccttcgg ccagggcacc aagctggaga tcaagcgcgg cggcggcggc ggcagcggcg 3000
gcggcggcag cggcggcggc ggcagcggcg gcggcggcag cgagggccag ctggtgcaga 3060
gcggcggcgg cctggtgcac cccggcggca gcctgcgcct gagctgcgcc ggcagcggct 3120
tcaccttcag cagctacggc atgcactggg tgcgccaggc ccccggcaag ggcctggagt 3180
gggtgagcgg catcggcacc ggcggcggca cctacagcac cgacagcgtg aagggccgct 3240
tcaccatcag ccgcgacaac gccaagaaca gcctgtacct ccagatgaac agcctgcgcg 3300
ccgaggacat ggccgtgtac tactgcgccc gcggcgacta ctacggcagc ggcagcttct 3360
tcgactgctg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag ctaagtatac tactagtacg 3420
cggccgcacc ggtgtacaat caacctctgg attacaaaat ttgtgaaaga ttgactggta 3480
ttcttaacta tgttgctcct tttacgctat gtggatacgc tgctttaatg cctttgtatc 3540
atgctattgc ttcccgtatg gctttcattt tctcctcctt gtataaatcc tggttagttc 3600
ttgccacggc ggaactcatc gccgcctgcc ttgcccgctg ctggacaggg gctcggctgt 3660
tgggcactga caattccgtg gtgtgaattc gagctaggta cagcttatcg ataccgtcga 3720
cagcagacat gataagatac attgatgagt ttggacaaac cacaactaga atgcagtgaa 3780
aaaaatgctt tatttgtgaa atttgtgatg ctattgcttt atttgtaacc attataagct 3840
gcaataaaca agttaacaac aacaattgca ttcattttat gtttcaggtt cagggggagg 3900
tgtgggaggt tttttaaagc aagtaaaacc tctacaaatg tggtatgctc gagggcatgc 3960
aacaacaaca attgcattca ttttatgttt caggttcagg gggagatgtg ggaggttttt 4020
taaagcaagt aaaacctcta caaatgtggt aaaatccgat aaggactaga gcatggctac 4080
gtagataagt agcatggcgg gttaatcatt aactacaagg aacccctagt gatggagttg 4140
gccactccct ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa ggtcgcccga 4200
cgcccgggct ttgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgca 4246
<210> 97
<211> 426
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CFHL1
<400> 97
Glu Asp Cys Asn Glu Leu Pro Pro Arg Arg Asn Thr Glu Ile Leu Thr
1 5 10 15
Gly Ser Trp Ser Asp Gln Thr Tyr Pro Glu Gly Thr Gln Ala Ile Tyr
20 25 30
Lys Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Val Ile Met Val Cys
35 40 45
Arg Lys Gly Glu Trp Val Ala Leu Asn Pro Leu Arg Lys Cys Gln Lys
50 55 60
Arg Pro Cys Gly His Pro Gly Asp Thr Pro Phe Gly Thr Phe Thr Leu
65 70 75 80
Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly Val Lys Ala Val Tyr Thr Cys
85 90 95
Asn Glu Gly Tyr Gln Leu Leu Gly Glu Ile Asn Tyr Arg Glu Cys Asp
100 105 110
Thr Asp Gly Trp Thr Asn Asp Ile Pro Ile Cys Glu Val Val Lys Cys
115 120 125
Leu Pro Val Thr Ala Pro Glu Asn Gly Lys Ile Val Ser Ser Ala Met
130 135 140
Glu Pro Asp Arg Glu Tyr His Phe Gly Gln Ala Val Arg Phe Val Cys
145 150 155 160
Asn Ser Gly Tyr Lys Ile Glu Gly Asp Glu Glu Met His Cys Ser Asp
165 170 175
Asp Gly Phe Trp Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Val Glu Ile Ser Cys
180 185 190
Lys Ser Pro Asp Val Ile Asn Gly Ser Pro Ile Ser Gln Lys Ile Ile
195 200 205
Tyr Lys Glu Asn Glu Arg Phe Gln Tyr Lys Cys Asn Met Gly Tyr Glu
210 215 220
Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys Thr Glu Ser Gly Trp Arg Pro
225 230 235 240
Leu Pro Ser Cys Glu Glu Lys Ser Cys Asp Asn Pro Tyr Ile Pro Asn
245 250 255
Gly Asp Tyr Ser Pro Leu Arg Ile Lys His Arg Thr Gly Asp Glu Ile
260 265 270
Thr Tyr Gln Cys Arg Asn Gly Phe Tyr Pro Ala Thr Arg Gly Asn Thr
275 280 285
Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys Thr Leu
290 295 300
Lys Pro Cys Asp Tyr Pro Asp Ile Lys His Gly Gly Leu Tyr His Glu
305 310 315 320
Asn Met Arg Arg Pro Tyr Phe Pro Val Ala Val Gly Lys Tyr Tyr Ser
325 330 335
Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly Ser Tyr Trp Asp
340 345 350
His Ile His Cys Thr Gln Asp Gly Trp Ser Pro Ala Val Pro Cys Leu
355 360 365
Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr Asn Gln Asn Tyr
370 375 380
Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Lys Ser Ile Asp Val Ala Cys His Pro
385 390 395 400
Gly Tyr Ala Leu Pro Lys Ala Gln Thr Thr Val Thr Cys Met Glu Asn
405 410 415
Gly Trp Ser Pro Thr Pro Arg Cys Ile Arg
420 425
<210> 98
<211> 1278
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码CFHL1的核酸序列
<400> 98
gaggactgca acgagctgcc cccccgccgc aacaccgaga tcctgaccgg cagctggagc 60
gaccagacct accccgaggg cacccaggcc atctacaagt gccgccccgg ctaccgcagc 120
ctgggcaacg tgatcatggt gtgccgcaag ggcgagtggg tggccctgaa ccccctgcgc 180
aagtgccaga agcgcccctg cggccacccc ggcgacaccc ccttcggcac cttcaccctg 240
accggcggca acgtgttcga gtacggcgtg aaggccgtgt acacctgcaa cgagggctac 300
cagctgctgg gcgagatcaa ctaccgcgag tgcgacaccg acggctggac caacgacatc 360
cccatctgcg aggtggtgaa gtgcctgccc gtgaccgccc ccgagaacgg caagatcgtg 420
agcagcgcca tggagcccga ccgcgagtac cacttcggcc aggccgtgcg cttcgtgtgc 480
aacagcggct acaagatcga gggcgacgag gagatgcact gcagcgacga cggcttctgg 540
agcaaggaga agcccaagtg cgtggagatc agctgcaaga gccccgacgt gatcaacggc 600
agccccatca gccagaagat catctacaag gagaacgagc gcttccagta caagtgcaac 660
atgggctacg agtacagcga gcgcggcgac gccgtgtgca ccgagagcgg ctggcgcccc 720
ctgcccagct gcgaggagaa gagctgcgac aacccctaca tccccaacgg cgactacagc 780
cccctgcgca tcaagcaccg caccggcgac gagatcacct accagtgccg caacggcttc 840
taccccgcca cccggggcaa caccgccaag tgcaccagca ccggctggat ccccgccccc 900
cgctgcaccc tgaagccctg cgactacccc gacatcaagc acggcggcct gtaccacgag 960
aacatgcgcc gcccctactt ccccgtggcc gtgggcaagt actacagcta ctactgcgac 1020
gagcacttcg agacccccag cggcagctac tgggaccaca tccactgcac ccaggacggc 1080
tggagccccg ccgtgccctg cctgcgcaag tgctacttcc cctacctgga gaacggctac 1140
aaccagaact acggccgcaa gttcgtgcag ggcaagagca tcgacgtggc ctgccacccc 1200
ggctacgccc tgcccaaggc ccagaccacc gtgacctgca tggagaacgg ctggagcccc 1260
accccccgct gcatccgc 1278
<210> 99
<211> 225
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 牛生长激素poly-A核苷酸序列
<400> 99
ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc 60
tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc 120
tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt 180
gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg cggtgggctc tatgg 225
<210> 100
<211> 922
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHL1
<400> 100
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
1 5 10 15
Ala Phe Ala Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu
20 25 30
Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro
35 40 45
Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro
50 55 60
Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg
65 70 75 80
Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu
85 90 95
Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu
100 105 110
Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser
115 120 125
His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr
130 135 140
Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr
165 170 175
Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp
180 185 190
Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser
195 200 205
Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Arg Arg Ser Lys Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser
450 455 460
Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg
465 470 475 480
Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala Phe Ala
485 490 495
Glu Asp Cys Asn Glu Leu Pro Pro Arg Arg Asn Thr Glu Ile Leu Thr
500 505 510
Gly Ser Trp Ser Asp Gln Thr Tyr Pro Glu Gly Thr Gln Ala Ile Tyr
515 520 525
Lys Cys Arg Pro Gly Tyr Arg Ser Leu Gly Asn Val Ile Met Val Cys
530 535 540
Arg Lys Gly Glu Trp Val Ala Leu Asn Pro Leu Arg Lys Cys Gln Lys
545 550 555 560
Arg Pro Cys Gly His Pro Gly Asp Thr Pro Phe Gly Thr Phe Thr Leu
565 570 575
Thr Gly Gly Asn Val Phe Glu Tyr Gly Val Lys Ala Val Tyr Thr Cys
580 585 590
Asn Glu Gly Tyr Gln Leu Leu Gly Glu Ile Asn Tyr Arg Glu Cys Asp
595 600 605
Thr Asp Gly Trp Thr Asn Asp Ile Pro Ile Cys Glu Val Val Lys Cys
610 615 620
Leu Pro Val Thr Ala Pro Glu Asn Gly Lys Ile Val Ser Ser Ala Met
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Glu Pro Asp Arg Glu Tyr His Phe Gly Gln Ala Val Arg Phe Val Cys
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Asn Ser Gly Tyr Lys Ile Glu Gly Asp Glu Glu Met His Cys Ser Asp
660 665 670
Asp Gly Phe Trp Ser Lys Glu Lys Pro Lys Cys Val Glu Ile Ser Cys
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Lys Ser Pro Asp Val Ile Asn Gly Ser Pro Ile Ser Gln Lys Ile Ile
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Tyr Lys Glu Asn Glu Arg Phe Gln Tyr Lys Cys Asn Met Gly Tyr Glu
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Tyr Ser Glu Arg Gly Asp Ala Val Cys Thr Glu Ser Gly Trp Arg Pro
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Gly Asp Tyr Ser Pro Leu Arg Ile Lys His Arg Thr Gly Asp Glu Ile
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Ala Lys Cys Thr Ser Thr Gly Trp Ile Pro Ala Pro Arg Cys Thr Leu
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Lys Pro Cys Asp Tyr Pro Asp Ile Lys His Gly Gly Leu Tyr His Glu
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820 825 830
Tyr Tyr Cys Asp Glu His Phe Glu Thr Pro Ser Gly Ser Tyr Trp Asp
835 840 845
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850 855 860
Arg Lys Cys Tyr Phe Pro Tyr Leu Glu Asn Gly Tyr Asn Gln Asn Tyr
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Gly Arg Lys Phe Val Gln Gly Lys Ser Ile Asp Val Ala Cys His Pro
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<210> 101
<211> 2769
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-CFHL1的核酸序列
<400> 101
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850 855 860
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
885 890 895
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900 905 910
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<210> 103
<211> 2766
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码CFHL1-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2的核酸序列
<400> 103
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gtgctgaccg tgctggccca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgagc 2400
aacaaggccc tgggcgcccc catcgagaag accatcagca aggccaaggg ccagccccgc 2460
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cccggc 2766
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD46
<400> 104
Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu Ala Leu Val Gly Ala
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785 790 795 800
Ile Leu Asp Ser Leu Asp Val
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<210> 105
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码VEGF捕获蛋白2-弗林蛋白酶-P2A-sCD46的核酸序列
<400> 105
atgcgccgcc tgctgacctt catcagcatc ctggccctgg tgggcgccgc cttcgccagc 60
gacaccggcc gccccttcgt ggagatgtac agcgagatcc ccgagatcat ccacatgacc 120
gagggccgcg agctggtgat cccctgccgc gtgaccagcc ccaacatcac cgtgaccctg 180
aagaagttcc ccctggacac cctgatcccc gacggcaagc gcatcatctg ggacagccgc 240
aagggcttca tcatcagcaa cgccacctac aaggagatcg gcctgctgac ctgcgaggcc 300
accgtgaacg gccacctgta caagaccaac tacctgaccc accgccagac caacaccatc 360
atcgacgtgg tgctgagccc cagccacggc atcgagctga gcgtgggcga gaagctggtg 420
ctgaactgca ccgcccgcac cgagctgaac gtgggcatcg acttcaactg ggagtacccc 480
agcagcaagc accagcacaa gaagctggtg aaccgcgacc tgaagaccca gagcggcagc 540
gagatgaaga agttcctgag caccctgacc atcgacggcg tgacccgcag cgaccagggc 600
ctgtacacct gcgccgccag cagcggcctg atgaccaaga agaacagcac cttcgtgcgc 660
gtgcacgaga aggacaagac ccacacctgc cccccctgcc ccgcccccga ggccgccggc 720
ggccccagcg tgttcctgtt cccccccaag cccaaggaca ccctgatgat cagccgcacc 780
cccgaggtga cctgcgtggt ggtggacgtg agccacgagg accccgaggt gaagttcaac 840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcacaac gccaagacca agccccgcga ggagcagtac 900
aacagcacct accgcgtggt gagcgtgctg accgtgctgg cccaggactg gctgaacggc 960
aaggagtaca agtgcaaggt gagcaacaag gccctgggcg cccccatcga gaagaccatc 1020
agcaaggcca agggccagcc ccgcgagccc caggtgtaca ccctgccccc cagccgcgac 1080
gagctgacca agaaccaggt gagcctgacc tgcctggtga agggcttcta ccccagcgac 1140
atcgccgtgg agtgggagag caacggccag cccgagaaca actacaagac cacccccccc 1200
gtgctggaca gcgacggcag cttcttcctg tacagcaagc tgaccgtgga caagagccgc 1260
tggcagcagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caacgcctac 1320
acccagaaga gcctgagcct gagccccggc cgccgcagca agcgcagcgg cagcggcgcc 1380
accaacttca gcctgctgaa gcaggccggc gacgtggagg agaaccccgg ccccatgcgc 1440
cgcttcctga ccgtgatcag cttcctgctg tacttcggct gcgccttcgc ctgcgaggag 1500
ccccccacct tcgaggccat ggagctgatc ggcaagccca agccctacta cgagatcggc 1560
gagcgcgtgg actacaagtg caagaagggc tacttctaca tcccccccct ggccacccac 1620
accatctgcg accgcaacca cacctggctg cccgtgagcg acgacgcctg ctaccgcgag 1680
acctgcccct acatccgcga ccccctgaac ggccaggccg tgcccgccaa cggcacctac 1740
gagttcggct accagatgca cttcatctgc aacgagggct actacctgat cggcgaggag 1800
atcctgtact gcgagctgaa gggcagcgtg gccatctgga gcggcaagcc ccccatctgc 1860
gagaaggtgc tgtgcacccc cccccccaag atcaagaacg gcaagcacac cttcagcgag 1920
gtggaggtgt tcgagtacct ggacgccgtg acctacagct gcgaccccgc ccccggcccc 1980
gaccccttca gcctgatcgg cgagagcacc atctactgcg gcgacaacag cgtgtggagc 2040
cgcgccgccc ccgagtgcaa ggtggtgaag tgccgcttcc ccgtggtgga gaacggcaag 2100
cagatcagcg gcttcggcaa gaagttctac tacaaggcca ccgtgatgtt cgagtgcgac 2160
aagggcttct acctggacgg cagcgacacc atcgtgtgcg acagcaacag cacctgggac 2220
ccccccgtgc ccaagtgcct gaaggtgctg ccccccagca gcaccaagcc ccccgccctg 2280
agccacagcg tgagcaccag cagcaccacc aagagccccg ccagcagcgc cagcggcccc 2340
cgccccacct acaagccccc cgtgagcaac taccccggct accccaagcc cgaggagggc 2400
atcctggaca gcctggacgt gtaa 2424
<210> 106
<211> 807
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> sCD46-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2
<400> 106
Met Arg Arg Phe Leu Thr Val Ile Ser Phe Leu Leu Tyr Phe Gly Cys
1 5 10 15
Ala Phe Ala Cys Glu Glu Pro Pro Thr Phe Glu Ala Met Glu Leu Ile
20 25 30
Gly Lys Pro Lys Pro Tyr Tyr Glu Ile Gly Glu Arg Val Asp Tyr Lys
35 40 45
Cys Lys Lys Gly Tyr Phe Tyr Ile Pro Pro Leu Ala Thr His Thr Ile
50 55 60
Cys Asp Arg Asn His Thr Trp Leu Pro Val Ser Asp Asp Ala Cys Tyr
65 70 75 80
Arg Glu Thr Cys Pro Tyr Ile Arg Asp Pro Leu Asn Gly Gln Ala Val
85 90 95
Pro Ala Asn Gly Thr Tyr Glu Phe Gly Tyr Gln Met His Phe Ile Cys
100 105 110
Asn Glu Gly Tyr Tyr Leu Ile Gly Glu Glu Ile Leu Tyr Cys Glu Leu
115 120 125
Lys Gly Ser Val Ala Ile Trp Ser Gly Lys Pro Pro Ile Cys Glu Lys
130 135 140
Val Leu Cys Thr Pro Pro Pro Lys Ile Lys Asn Gly Lys His Thr Phe
145 150 155 160
Ser Glu Val Glu Val Phe Glu Tyr Leu Asp Ala Val Thr Tyr Ser Cys
165 170 175
Asp Pro Ala Pro Gly Pro Asp Pro Phe Ser Leu Ile Gly Glu Ser Thr
180 185 190
Ile Tyr Cys Gly Asp Asn Ser Val Trp Ser Arg Ala Ala Pro Glu Cys
195 200 205
Lys Val Val Lys Cys Arg Phe Pro Val Val Glu Asn Gly Lys Gln Ile
210 215 220
Ser Gly Phe Gly Lys Lys Phe Tyr Tyr Lys Ala Thr Val Met Phe Glu
225 230 235 240
Cys Asp Lys Gly Phe Tyr Leu Asp Gly Ser Asp Thr Ile Val Cys Asp
245 250 255
Ser Asn Ser Thr Trp Asp Pro Pro Val Pro Lys Cys Leu Lys Val Leu
260 265 270
Pro Pro Ser Ser Thr Lys Pro Pro Ala Leu Ser His Ser Val Ser Thr
275 280 285
Ser Ser Thr Thr Lys Ser Pro Ala Ser Ser Ala Ser Gly Pro Arg Pro
290 295 300
Thr Tyr Lys Pro Pro Val Ser Asn Tyr Pro Gly Tyr Pro Lys Pro Glu
305 310 315 320
Glu Gly Ile Leu Asp Ser Leu Asp Val Arg Arg Ser Lys Arg Ser Gly
325 330 335
Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu
340 345 350
Glu Asn Pro Gly Pro Met Arg Arg Leu Leu Thr Phe Ile Ser Ile Leu
355 360 365
Ala Leu Val Gly Ala Ala Phe Ala Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val
370 375 380
Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg
385 390 395 400
Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr
405 410 415
Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile
420 425 430
Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys
435 440 445
Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr
450 455 460
Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val
465 470 475 480
Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu
485 490 495
Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe
500 505 510
Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu Val Asn
515 520 525
Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser
530 535 540
Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr
545 550 555 560
Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val
565 570 575
Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
580 585 590
Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
595 600 605
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
610 615 620
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
625 630 635 640
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
645 650 655
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln
660 665 670
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
675 680 685
Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
690 695 700
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
705 710 715 720
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
725 730 735
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
740 745 750
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
755 760 765
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
770 775 780
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys
785 790 795 800
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
805
<210> 107
<211> 2421
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码sCD46-弗林蛋白酶-P2A-VEGF捕获蛋白2的核酸序列
<400> 107
atgcgccgct tcctgaccgt gatcagcttc ctgctgtact tcggctgcgc cttcgcctgc 60
gaggagcccc ccaccttcga ggccatggag ctgatcggca agcccaagcc ctactacgag 120
atcggcgagc gcgtggacta caagtgcaag aagggctact tctacatccc ccccctggcc 180
acccacacca tctgcgaccg caaccacacc tggctgcccg tgagcgacga cgcctgctac 240
cgcgagacct gcccctacat ccgcgacccc ctgaacggcc aggccgtgcc cgccaacggc 300
acctacgagt tcggctacca gatgcacttc atctgcaacg agggctacta cctgatcggc 360
gaggagatcc tgtactgcga gctgaagggc agcgtggcca tctggagcgg caagcccccc 420
atctgcgaga aggtgctgtg cacccccccc cccaagatca agaacggcaa gcacaccttc 480
agcgaggtgg aggtgttcga gtacctggac gccgtgacct acagctgcga ccccgccccc 540
ggccccgacc ccttcagcct gatcggcgag agcaccatct actgcggcga caacagcgtg 600
tggagccgcg ccgcccccga gtgcaaggtg gtgaagtgcc gcttccccgt ggtggagaac 660
ggcaagcaga tcagcggctt cggcaagaag ttctactaca aggccaccgt gatgttcgag 720
tgcgacaagg gcttctacct ggacggcagc gacaccatcg tgtgcgacag caacagcacc 780
tgggaccccc ccgtgcccaa gtgcctgaag gtgctgcccc ccagcagcac caagcccccc 840
gccctgagcc acagcgtgag caccagcagc accaccaaga gccccgccag cagcgccagc 900
ggcccccgcc ccacctacaa gccccccgtg agcaactacc ccggctaccc caagcccgag 960
gagggcatcc tggacagcct ggacgtgcgc cgcagcaagc gcagcggcag cggcgccacc 1020
aacttcagcc tgctgaagca ggccggcgac gtggaggaga accccggccc catgcgccgc 1080
ctgctgacct tcatcagcat cctggccctg gtgggcgccg ccttcgccag cgacaccggc 1140
cgccccttcg tggagatgta cagcgagatc cccgagatca tccacatgac cgagggccgc 1200
gagctggtga tcccctgccg cgtgaccagc cccaacatca ccgtgaccct gaagaagttc 1260
cccctggaca ccctgatccc cgacggcaag cgcatcatct gggacagccg caagggcttc 1320
atcatcagca acgccaccta caaggagatc ggcctgctga cctgcgaggc caccgtgaac 1380
ggccacctgt acaagaccaa ctacctgacc caccgccaga ccaacaccat catcgacgtg 1440
gtgctgagcc ccagccacgg catcgagctg agcgtgggcg agaagctggt gctgaactgc 1500
accgcccgca ccgagctgaa cgtgggcatc gacttcaact gggagtaccc cagcagcaag 1560
caccagcaca agaagctggt gaaccgcgac ctgaagaccc agagcggcag cgagatgaag 1620
aagttcctga gcaccctgac catcgacggc gtgacccgca gcgaccaggg cctgtacacc 1680
tgcgccgcca gcagcggcct gatgaccaag aagaacagca ccttcgtgcg cgtgcacgag 1740
aaggacaaga cccacacctg ccccccctgc cccgcccccg aggccgccgg cggccccagc 1800
gtgttcctgt tcccccccaa gcccaaggac accctgatga tcagccgcac ccccgaggtg 1860
acctgcgtgg tggtggacgt gagccacgag gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg 1920
gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagccccgcg aggagcagta caacagcacc 1980
taccgcgtgg tgagcgtgct gaccgtgctg gcccaggact ggctgaacgg caaggagtac 2040
aagtgcaagg tgagcaacaa ggccctgggc gcccccatcg agaagaccat cagcaaggcc 2100
aagggccagc cccgcgagcc ccaggtgtac accctgcccc ccagccgcga cgagctgacc 2160
aagaaccagg tgagcctgac ctgcctggtg aagggcttct accccagcga catcgccgtg 2220
gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc cgtgctggac 2280
agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagccg ctggcagcag 2340
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaacgccta cacccagaag 2400
agcctgagcc tgagccccgg c 2421

Claims (51)

1.一种基因构建体，其包含可操作地连接至编码抗VEGF蛋白的第一编码序列和编码抗纤维化蛋白的第二编码序列的启动子。
2.根据权利要求1所述的基因构建体，其中所述启动子是巨细胞病毒(CMV)启动子、CMV早期增强子元件与鸡β-肌动蛋白基因(CAG)的第一内含子的融合体、卵黄样黄斑营养不良蛋白-2(VMD2)启动子、人磷酸甘油酸激酶-1(PGK-1)启动子或EF1α启动子，任选地，其中所述启动子包含基本上如SEQ ID No：1、2、3、4、5、6、7、8或9所示的核苷酸序列或其片段或变体。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的基因构建体，其中所述第一编码序列包含编码能够捕获所有可溶形式的VEGF的抗VEGF蛋白的核苷酸序列，所述可溶形式的VEGF包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和/或胎盘生长因子(PIGF)。
4.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述第一编码序列包含编码特异性捕获VEGF-A的抗VEGF蛋白的核苷酸序列，任选地，其中所述抗VEGF蛋白能够捕获VEGF-A的所有同工型，包括VEGF-121、VEGF-145、VEGF-165、VEGF-183、VEGF-189和/或VEGF-206。
5.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述抗VEGF蛋白是抗VEGF抗体或其抗原结合片段，任选地，其中所述抗VEGF蛋白是单链可变片段(SCVF)。
6.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述第一编码序列包含基本上如SEQ ID No：11、13、15、17、19或21中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第一编码序列编码基本上如SEQ ID No：10、12、14、16、18或20所示的氨基酸序列或其片段或变体。
7.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述抗纤维化蛋白是抗补体蛋白。
8.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白能够中和或减弱补体激活。
9.根据权利要求7或8所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白能够靶向补体系统的旁路途径(AP)，优选地，其中所述抗补体蛋白不靶向补体系统的经典途径(CP)和/或凝集素途径(LP)。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白是抗C3b或抗Bb抗体或其抗原结合片段，任选地，其中所述抗补体蛋白是单链可变片段(SCVF)。
11.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ ID No：23或25所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQ ID No：22或24所示的氨基酸序列或其片段或变体。
12.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白是CD55，优选是可溶性CD55(sCD55)。
13.根据权利要求12所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ IDNo：27所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQID No：26所示的氨基酸序列或其片段或变体。
14.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白是补体因子H相关蛋白-1(CFHR1)。
15.根据权利要求14所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ IDNo：29或30所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQ ID No：28所示的氨基酸序列或其片段或变体。
16.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白是CD46，优选是可溶性CD46(sCD46)。
17.根据权利要求16所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ IDNo：32所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQID No：31所示的氨基酸序列或其片段或变体。
18.根据权利要求7所述的基因构建体，其中所述抗补体蛋白是补体因子H样蛋白1(CFHL1)。
19.根据权利要求18所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ IDNo：98所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQID No：97所示的氨基酸序列或其片段或变体。
20.根据权利要求1-6中任一项所述的基因构建体，其中所述抗纤维化蛋白能够中和结缔组织生长因子(CTGF)。
21.根据权利要求20所述的基因构建体，其中所述抗纤维化蛋白是抗结缔组织生长因子(抗CTGF)抗体或其抗原结合片段，优选地，其中所述抗CTGF抗体是抗CTGF单链可变片段(抗CTGF SCVF)。
22.根据权利要求21所述的基因构建体，其中所述第二编码序列包含基本上如SEQ IDNo：34或36所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述第二编码序列编码基本上如SEQ ID No：33或35所示的氨基酸序列或其片段或变体。
23.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含设置于所述第一编码序列和所述第二编码序列之间的间隔序列，所述间隔序列编码肽间隔区，所述肽间隔区经配置以产生作为单独分子的所述抗VEGF蛋白和所述抗纤维化蛋白。
24.根据权利要求23所述的基因构建体，其中所述间隔序列包含并编码病毒肽间隔序列，最优选病毒-2A肽间隔序列。
25.根据权利要求24所述的基因构建体，其中所述病毒-2A肽间隔序列包含F2A、E2A、T2A或P2A序列。
26.根据权利要求23-25中任一项所述的基因构建体，其中所述间隔序列包含基本上如SEQ ID No：38、40、42或44所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述间隔序列编码基本上如SEQ ID No：37、39、41或43所示的氨基酸序列或其片段或变体。
27.根据权利要求23-25中任一项所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含病毒-2A去除序列，任选地，其中所述病毒-2A去除序列设置在所述病毒-2A序列的5'。
28.根据权利要求27所述的基因构建体，其中所述病毒-2A去除序列通过包含甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸三肽序列(GSG)的接头序列与病毒-2A肽间隔序列分隔开。
29.根据权利要求27或权利要求28所述的基因构建体，其中所述病毒-2A去除序列是弗林蛋白酶识别序列，任选地，其中所述病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：45所示的氨基酸序列或其片段或变体。
30.根据权利要求29所述的基因构建体，其中所述病毒-2A去除序列包含基本上如SEQID No：47、49或51所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：46、48或50所示的氨基酸序列或其片段或变体。
31.根据权利要求27或权利要求28所述的基因构建体，其中所述病毒-2A去除序列是明胶酶MMP-2识别序列，任选地，其中所述病毒-2A去除序列包含基本上如SEQ ID No：56中所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ IDNo：55所示的氨基酸序列或其片段或变体。
32.根据权利要求27或权利要求28所述的基因构建体，其中所述病毒-2A去除序列是肾素识别序列，任选地，其中所述病毒-2A去除序列包含基本上如SEQ ID No：60所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述病毒-2A去除序列编码基本上如SEQ ID No：59所示的氨基酸序列或其片段或变体。
33.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含编码土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)的核苷酸序列，任选地，其中所述WPRE包含基本上如SEQID No：61或62所示的核酸序列或其片段或变体。
34.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含编码polyA尾的核苷酸序列，任选地，其中所述polyA尾包含基本上如SEQ ID No：63、64或99所示的核酸序列或其片段或变体。
35.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含编码左和/或右反向末端重复序列(ITR)的核苷酸序列，任选地，其中所述左和/或右反向末端重复序列包含基本上如SEQ ID No：65或66所示的核酸序列或其片段或变体。
36.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含非编码内含子，任选地，其中所述非编码内含子位于所述启动子和所述第一编码序列之间。
37.根据权利要求36所述的基因构建体，其中所述非编码内含子包含基本上如SEQ IDNo：67、68或69所示的核酸序列或其片段或变体。
38.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体包含信号肽编码序列，任选地，其中所述信号肽编码序列包含基本上如SEQ IDNo：71、73、75、77或70中任一个所示的核苷酸序列或其片段或变体，和/或其中所述信号肽编码序列编码基本上如SEQID No：70、72、74、76或78所示的氨基酸序列或其片段或变体。
39.根据任意前述权利要求所述的基因构建体，其中所述基因构建体编码基本上如SEQID No：80、82、84、86、88、90、92、94、100、102、104或106中所示的氨基酸序列或其片段或变体，和/或其中所述构建体包含基本上如SEQ ID No：81、83、85、87、89、91、93、95、101、103、105或107中所示的核苷酸序列或其片段或变体。
40.重组载体，其包含权利要求1-39中任一项所述的基因构建体。
41.根据权利要求40所述的重组载体，其中所述载体是重组AAV(rAAV)载体。
42.根据权利要求40或权利要求41所述的重组载体，其中所述rAAV是AAV-1、AAV-2、AAV-3A、AAV-3B、AAV-4、AAV-5、AAV-6、AAV-7、AAV-8、AAV-9、AAV-10、AAV-11或AAV-2.7m8。
43.根据权利要求41或权利要求42中任一项所述的重组载体，其中所述rAAV是rAAV血清型-2。
44.根据权利要求40-43中任一项所述的重组载体，其中所述重组载体包含基本上如SEQ ID No：96所示的核苷酸序列或其片段或变体。
45.根据权利要求1-39中任一项所述的基因构建体或根据权利要求40-44中任一项所述的重组载体，其用作药物或用于治疗。
46.根据权利要求1-39中任一项所述的基因构建体或根据权利要求40-44中任一项所述的重组载体，其用于治疗、预防或改善视网膜病症，或用于减少血管渗漏和视网膜细胞损伤。
47.根据权利要求46所述的用途的基因构建体或载体，其中所治疗的视网膜病症是湿性年龄相关性黄斑变性；糖尿病性视网膜病变；任何与糖尿病相关的视网膜病症；糖尿病性黄斑水肿(DMO)；或涉及血管渗漏以及由此导致的视网膜结构损伤的病理生理学疾病。
48.根据权利要求47所述的用途的基因构建体或载体，其中所述视网膜病症是湿性年龄相关性黄斑变性。
49.根据权利要求46所述的用途的基因构建体或载体，其中所述构建体或载体用于减少与以下疾病中任一种相关的血管渗漏和视网膜细胞损伤：糖尿病性视网膜病变、癌症、系统性毛细血管渗漏综合征(SCLS)/克拉克森综合征、血管性水肿、严重创伤、休克、脓毒症、多器官功能障碍综合征(MODS)、慢性肾病、末期肾病、川崎病、严重埃博拉病毒病、登革热病毒感染和/或分枝杆菌感染。
50.药物组合物，其包含权利要求1-39中任一项所述的基因构建体或权利要求40-44中任一项所述的重组载体，以及药学上可接受的媒介物。
51.一种制备权利要求50所述的药物组合物的方法，所述方法包括使权利要求1-39中任一项所述的基因构建体或权利要求40-44中任一项所述的重组载体与药学上可接受的媒介物接触。
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