CN117805276A - 一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4‑滴残留量的方法，包括如下步骤：S1：制备标准储备液；S2：制备标准中间液；S3：样品提取；S4：衍生化；S5：制备标准曲线工作溶液；S6：气相色谱质谱联用仪联用分析；本发明在酸性条件下采用乙醚提取，硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4‑滴衍生成2,4‑滴丁酯，利用气相色谱‑质谱联用仪测定柑橘中2,4‑滴的残留量，灵敏度高，回收率稳定，能够满足柑橘类水果中2,4‑滴的定性和定量检测。
Description
技术领域
本发明涉及水果残留化学物质检测技术领域，具体涉及一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法。
背景技术
2,4-滴，化学名称为2,4-二氯苯氧乙酸，主要用作除草剂和植物生长调节剂，也可作为杀菌保鲜剂，常在柑橘、番茄、香蕉等果蔬种植中用于防落花落果和延长贮藏保鲜时间。2,4-滴为2B类致癌物，对人类有潜在致癌作用。有研究认为，长期暴露超过最大污染水平，2,4-滴可能会对肾脏和肝脏等造成损害，甚至能够导致畸致癌变。
GB 2763-2021中规定了2,4-滴和2,4-滴钠盐在柑、橘、橙的最大残留限量为0.1mg/kg，指定按照GB/T 5009.175-2003规定的方法测定，该方法采用气相色谱仪配置电子捕获检测器(ECD)检测，但ECD灵敏度高，农产品样品基质复杂，杂峰干扰多，定性能力较弱，检出阳性需要再用质谱辅助定性。目前相关文献报道2,4-滴的检测方法主要有气相色谱法、气相色谱质谱法、液相色谱法、液相色谱串联质谱法和离子色谱法，多数是研究饮用水中2,4-滴的检测方法，关于研究柑橘类样品中2,4-滴的检测方法的报道很少。GB/T5009.175-2003中规定对粮食和蔬菜中2,4-滴残留量的测定方法，该方法采用酯化，用14％三氟化硼丁醇溶液将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，该方法用的衍生剂比较难购得且价格较贵。
发明内容
本发明的目的是设计一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，实现适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定，且适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定，以解决背景技术中所提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，包括如下步骤：
S1：制备浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液；
S2：制备浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液；
S3：样品提取，称取样品5.00g于离心管A中，加入5-7mL稀硫酸，加入10-15mL提取剂，振荡提取5min，然后放入离心机分离3min，静置后移取有机相于离心管B中，在残渣中加入5-10mL提取剂，重复提取1-2次，然后合并有机相，加入无水硫酸钠，混匀以吸收水分，静置后移取有机相转移到离心管C，用氮气吹干；通过加入无水硫酸钠去除提取液中的水分，提高后续提取液氮吹至干的速度，然后进行下一步衍生化。
S4：衍生化，将100-200μL正丁醇和25-50μL浓硫酸放入离心管C中，摇晃混匀，进行衍生反应，再加入1-5mL有机溶剂，涡旋3min后，放入离心机分离3min，静置后移取上清液于离心管D中；加3-5mL饱和氯化钠水溶液，旋涡混合器涡旋1min，然后放入离心机分离3min，静置后移出有机相，得到待分析液；在酸性条件下采用乙醚提取，浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯；饱和氯化钠水溶液可以洗去衍生化中的浓硫酸残留，使待分析液呈中性，后续色谱和质谱检测分析时，不会有太多杂峰，干扰测试。
S5：制备标准曲线工作溶液，分别准确移取S2中不同体积2,4-滴标准中间液，用甲醇稀释定容，氮吹至干，然后按照S4进行同样处理，得到不同浓度的系列2,4-滴衍生物标准工作液；
S6：气相色谱质谱联用仪联用分析，对S4中的待分析液和S5中系列标准工作液进行色谱和质谱检测分析。
优选的，S3中稀硫酸的PH为2.0，为提取系统中提供酸性的环境。
优选的，所述提取剂为乙醚，乙醚具有较强的萃取能力，能萃取多种有机化合物，且乙醚沸点低，易除去。
优选的，准确称取10mg 2,4-滴标准物质，用甲醇溶解并定容至10mL，得到浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液；准确移取100μL 2,4-滴标准储备液，用甲醇稀释并定容至100mL，得到浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液。
优选的，衍生的温度为35℃-75℃，时间为30min-70min。
优选的，S4中所述有机溶剂为正己烷和丙酮，其体积比例为9:1，通过添加正己烷和丙酮的混合有机溶剂提取衍生后2,4-滴丁酯。
优选的，S3中有机相转移到离心管C后，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管C中的有机相和乙醚洗液，用氮气吹干。
优选的，S4中移出有机相后，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液。
优选的，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，色谱条件为：色谱柱：弱极性毛细管色谱柱；升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；进样口温度：260℃；载气：He，流速：1.2mL/min；进样模式：不分流进样；进样量：1μL。
优选的，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，质谱条件为：拉出透镜高灵敏度离子源(EI)；电子能量：70eV；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(SIM)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1.在稀硫酸提供的酸性条件下采用乙醚提取，浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，使用气相色谱-质谱联用仪测定柑橘2,4-滴的残留量，外标法定量，建立柑橘水果中2,4-滴测定的方法；
2.在本申请建立的方法上，2,4-滴在0～0.5μg/mL范围内呈良好线性关系，相关系数(R2)大于0.999，方法检出限为0.0025mg/kg，定量限为0.005mg/kg，可以满足柑橘中2,4-滴检测要求；
3.本发明对2,4-滴的测定重复性良好，其RSD值在2.08％～4.46％之间；
4.本申请建立的方法灵敏度高，回收率稳定，定性定量准确，适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定；
5.本申请通过浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，摒弃采用三氟化硼丁醇溶液作为衍生剂，浓硫酸、正丁醇易购买且价格便宜，降低检测的成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为2,4-滴衍生物在TG-5MS色谱柱的色谱图；
图2为2,4-滴衍生物在DB-1701P色谱柱的色谱图；
图3为2,4-滴衍生物全扫描质谱图；
图4为沃柑加标样品185色谱图；
图5为沃柑加标样品57色谱图；
图6为沃柑加标样品276色谱图；
图7为沃柑加标样品175色谱图；
图8为沃柑加标样品161色谱图；
图9为沃柑加标样品278色谱图；
图10为衍生反应中不同衍生温度对2,4-滴衍生物响应值的影响；
图11为衍生反应中不同衍生时间对2,4-滴衍生物响应值的影响；
图12为2,4-滴浓度与衍生反应后2,4-滴衍生物响应值的标准曲线图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。
本发明并不对原料的来源进行限定，如无如特殊说明，所采用的原料均为普通市售产品。
实施例1
本发明实施例提供一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，包括如下步骤：
S1：制备标准储备液，制备浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液，冷冻保存；
S2：制备标准中间液，制备浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液，冷藏保存；
S3：样品提取，称取样品5.00g于50mL离心管A中，加入5-7mL PH为2.0的稀硫酸水溶液，加入10-15mL乙醚，振荡提取5min，然后放入离心机分离3min，静置后移取有机相于50mL离心管B中，在残渣中加入5-10mL乙醚，重复提取1-2次，然后合并有机相，加入无水硫酸钠，混匀以吸收水分，静置后移取有机相转移到离心管C，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管C中的有机相和乙醚洗液，用氮气吹干；
S4：衍生化，将加入100-200μL正丁醇和25-50μL浓硫酸放入离心管C中，摇晃混匀，进行衍生反应，再加入1-5ml的比例为9:1的正己烷和丙酮的混合有机溶液，涡旋3min后，放入离心机分离3min，静置后移取上清液于离心管D中；加3-5mL 30g/L-50g/L饱和氯化钠水溶液，旋涡混合器涡旋1min，然后放入离心机分离3min，静置后移出有机相，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液；
S5：制备标准曲线工作溶液，分别准确移取S2中2,4-滴标准中间液0μL、5.00μL、10.0μL、50.0μL、100μL、200μL、500μL，用甲醇稀释定容至1mL，氮吹至干，然后按照S4进行同样处理，得到0μg/mL、0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL的系列2,4-滴衍生物标准工作液；
S6：气相色谱质谱联用仪联用分析，对S4中的待分析液和S5中系列标准工作液进行色谱和质谱检测分析。
其中，在气相色谱质谱联用仪联用分析中，色谱条件为：弱极性毛细管色谱柱；升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；进样口温度：260℃；载气：He，流速：1.2mL/min；进样模式：不分流进样；进样量：1μL。
在气相色谱质谱联用仪联用分析中，质谱条件为：拉出透镜高灵敏度离子源(EI)；电子能量：70eV；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(SIM)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。
实施例2
在本实施例中，结合实施例1中实验方法，具体实验过程如下：
2.1试剂和材料
沃柑为市售；实验用水为Milli-Q-Advantage A10制备的一级水，美国Milli-pore公司；2,4-滴标准物质纯度为99.4％，上海安谱璀世标准技术服务有限公司；甲醇，正己烷，丙酮，色谱纯，上海星可高纯试剂有限公司；无水乙醚，分析纯，广州化学试剂厂；浓硫酸，分析纯，广州化学试剂厂；正丁醇，分析纯，天津康科德技术有限公司；氯化钠，分析纯，福晨(天津)化学试剂有限公司；
标准储备液，准确称取10mg 2,4-滴标准物质，用甲醇溶解并定容至10mL，得到浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液，冷冻保存；
标准中间液，准确移取100μL 2,4-滴标准储备液，用甲醇稀释并定容至100mL，得到浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液，冷藏保存。
2.2仪器和设备
气相色谱-质谱联用仪，Agilent GC 7890B，MSD 5977B，配拉出透镜高灵敏度离子源(EI)，美国安捷伦公司；MS 3basic旋涡混合器，德国IKA公司；ROTINA 380R高速冷冻离心机，Hettich公司；TL-DCII氮吹仪，北京同泰联科技发展有限公司；HWS-26水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司。
2.3样品处理
2.3.1样品提取
称取样品5.00g于50mL离心管A中，加入5mL PH为2.0的稀硫酸水溶液，加入10mL乙醚，振荡提取5min，然后放入离心机分离3min，静置后移取有机相于50mL离心管B中，在残渣中加入10mL乙醚，重复提取1次，然后合并有机相，加入无水硫酸钠，混匀以吸收水分，静置后移取有机相转移到离心管C，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管C中的有机相和乙醚洗液，室温下用氮气吹干，待衍生化。
2.3.2衍生化
将加入160μL正丁醇和40μL浓硫酸放入离心管C中，摇晃混匀，进行衍生反应，再加入2.5ml的体积比例为9:1的正己烷和丙酮的混合溶液，涡旋3min后，放入离心机分离3min，静置后移取上清液于离心管D中；加3mL 50g/L饱和氯化钠水溶液，旋涡混合器涡旋1min，然后放入离心机分离3min，静置后移出有机相，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液。
2.4标准曲线工作溶液制备
分别准确移取S2中2,4-滴标准中间液0μL、5.00μL、10.0μL、50.0μL、100μL、200μL、500μL，用甲醇稀释定容至1mL，氮吹至干，然后按照按样品衍生化的步骤与样品进行同时处理，得到0μg/mL、0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL的系列2,4-滴衍生物标准工作液。
2.5仪器分析条件
2.5.1色谱条件
色谱柱：TG-5MS，30m×0.25mm×0.25μm；
升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；
进样口温度：260℃；
载气：He，流速：1.2mL/min；
进样模式：不分流进样；进样量：1μL。
2.5.2质谱条件
拉出透镜高灵敏度离子源(EI)；电子能量：70eV；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(SIM)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。
实施例3
结合实施例1和实施例2，对实施例2的实验结果讨论和分析如下：
3.1色谱条件的优化
考察了2,4-滴衍生物在农残分析常用的弱极性TG-5MS和中极性DB-1701P色谱柱上的色谱行为，根据2.5.1仪器分析条件，分析浓度为0.1μg/mL的2,4-滴衍生物标准工作液在TG-5MS和DB-1701P色谱柱的出峰情况。2,4-滴衍生物在TG-5MS色谱柱以及DB-1701P色谱柱的色谱图如图1和图2所示，可以看出，2,4-滴衍生物在TG-5MS色谱柱以及DB-1701P色谱柱上峰型尖锐对称，但TG-5MS色谱柱的灵敏度比DB-1701P色谱柱的灵敏度高，且DB-1701P色谱柱的杂峰也比较多，故选用弱极性TG-5MS色谱柱进行分析。
3.2质谱条件的优化
采用全扫描(SCAN)的采集模式对2,4-滴衍生物进行分析，得到2,4-滴衍生物全扫描质谱图，如图3所示，可以看出，质荷比丰度由高到低分别是185、57、276、175、161、278，选择这几个质荷比作为特征离子分析沃柑加标样品，沃柑加标样品定量离子和定性离子色谱图如图4-9所示，发现57、175和161目标峰附近有干扰峰，且不能完全分离，185基线有点漂移，276基线平整且目标峰附近没有杂峰干扰。根据选择质荷比大、丰度高及无干扰的原则，最后确定了276作为定量离子，185、278作为定性离子。
3.3样品预处理条件的优化
3.3.1提取次数的优化
在空白沃柑样品中，即无2,4-滴残留的沃柑样品中加入0.1μg/mL的2,4-滴衍生物标准工作液，除了用乙醚提取次数不一样，其它步骤按照1.3.2操作，对比提取1次、2次和3次对加标样品回收率的影响，每次用10mL乙醚提取，结果见表1。结果表明，提取1次回收率偏低，提取2次和3次的回收率相差不大，综合考虑提取效率、实验时间和成本节省，确定本方法提取次数为2次。
| 提取次数/次 | 平均回收率/％ | 相对标准偏差RSD/％ |
| 1 | 72.45 | 4.42 |
| 2 | 90.84 | 3.73 |
| 3 | 94.90 | 5.23 |
3.3.2衍生温度的优化
配制5个浓度为0.2μg/mL的2,4-滴衍生物标准工作液，氮吹干后，根据2.3.2步骤，分别在35℃、45℃、55℃、65℃、75℃温度下各衍生40min，之后操作同2.3.2，对比结果见图10。结果表明，45℃条件下衍生时目标物的响应值最大，故确定45℃为衍生温度。
3.3.3衍生时间的优化
配制5个浓度为0.2μg/mL的2,4-滴衍生物标准工作液，氮吹干后，根据2.3.2步骤，分别在45℃温度下分别衍生30min、40min、50min、60min、70min，之后操作同2.3.2，对比结果见图11。结果表明，衍生50min时目标物的响应值最大，故确定50min为衍生时间。
3.3.4标准曲线、检出限和定量限
按确定的方法进行测定，以定量离子的峰面积为纵坐标(Y)，以浓度为横从标(X，μg/mL)，绘制标准曲线，如图12所示。结果表明，在0～0.5μg/mL的线性范围内，2,4-滴衍生物呈良好线性关系，相关系数(R2)大于0.999。根据3倍和10倍定量离子信噪比确定方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ)，得出2,4-滴的检出限为0.0025mg/kg，定量限为0.005mg/kg，灵敏度高，定性准确，可以满足柑橘中2,4-滴检测要求。
3.4准确度和精密度
在不含2,4-滴的沃柑空白试样中分别添加0.005、0.01和0.1mg/kg 3个水平做加标回收试验，每个水平做6个平行，按照“1.3”实验方法进行试验，结果见表2。结果表明，2,4-滴的回收率在86.61％～99.32％之间，回收率稳定，RSD在2.08％～4.46％(n＝6)之间，测定重复性良好，符合GB/T 27404-2008附录F中回收率和精密度的要求。
| 添加量/mg/kg | 平均回收率/％ | 相对标准偏差RSD/％ |
| 0.005 | 99.32 | 4.46 |
| 0.010 | 88.15 | 2.63 |
| 0.100 | 86.61 | 2.08 |
实施例4
结合实施例1、实施例2和实施例3，按照本申请的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法对市售的30批柑橘样品进行检测，检测结果见表3。
如表3所示，结果表明，30批柑橘样品中共有17批样品检出2,4-滴，检出率高达56.7％，其中有6批样品的含量高于食品安全国家标准GB 2763-2021中柑橘的最大残留限量0.1mg/kg，不合格率为20％。
本申请在酸性条件下采用乙醚提取，硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，利用气相色谱-质谱联用仪测定柑橘中2,4-滴的残留量，且该方法回收率范围在86.61％～99.32％之间，相对标准偏差在2.08％～4.46％(n＝6)之间，检出限为0.0025mg/kg，定量限为0.005mg/kg，符合分析方法的要求，灵敏度高，回收率稳定，能够满足柑橘类水果中2,4-滴的定性和定量检测，为食品安全监督管理提供准确的数据。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭示如上，然而并非用以限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的技术内容做出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简介修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：制备浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液；
S2：制备浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液；
S3：样品提取，称取样品5.00g于离心管A中，加入5-7mL稀硫酸，加入10-15mL提取剂，振荡提取5min，然后放入离心机分离3min，静置后移取有机相于离心管B中，在残渣中加入5-10mL提取剂，重复提取1-2次，然后合并有机相，加入无水硫酸钠，混匀以吸收水分，静置后移取有机相转移到离心管C，用氮气吹干；
S4：衍生化，将100-200μL正丁醇和25-50μL浓硫酸放入离心管C中，摇晃混匀，进行衍生反应，再加入1-5mL有机溶剂，涡旋3min后，放入离心机分离3min，静置后移取上清液于离心管D中；加3-5mL饱和氯化钠水溶液，旋涡混合器涡旋1min，然后放入离心机分离3min，静置后移出有机相，得到待分析液；
S5：制备标准曲线工作溶液，分别准确移取S2中不同体积2,4-滴标准中间液，用甲醇稀释定容，氮吹至干，然后按照S4进行同样处理，得到不同浓度的系列2,4-滴衍生物标准工作液；
S6：气相色谱质谱联用仪联用分析，对S4中的待分析液和S5中系列标准工作液进行色谱和质谱检测分析。
2.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，S3中稀硫酸的PH为2.0。
3.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，所述提取剂为乙醚。
4.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，准确称取10mg 2,4-滴标准物质，用甲醇溶解并定容至10mL，得到浓度为1000ug/mL 2,4-滴标准储备液；准确移取100μL 2,4-滴标准储备液，用甲醇稀释并定容至100mL，得到浓度为1.00ug/mL 2,4-滴标准中间液。
5.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，衍生的温度为35℃-75℃，时间为30min-70min。
6.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，S4中所述有机溶剂为正己烷和丙酮，其体积比例为9:1。
7.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，S3中有机相转移到离心管C后，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管C中的有机相和乙醚洗液，用氮气吹干。
8.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，S4中移出有机相后，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液。
9.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，色谱条件为：色谱柱：弱极性毛细管色谱柱；升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；进样口温度：260℃；载气：He，流速：1.2mL/min；进样模式：不分流进样；进样量：1μL。
10.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，质谱条件为：拉出透镜高灵敏度离子源(EI)；电子能量：70eV；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(SIM)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140036734A (ko) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 한국과학기술연구원 | 동위원소 희석법 및 기체 크로마토그래피-이중 질량분석기를 이용한 산성제초제의 분석방법 |
| CN106404972A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-02-15 | 浙江省检验检疫科学技术研究院 | 气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法 |
| CN106442747A (zh) * | 2016-06-20 | 2017-02-22 | 浙江公正检验中心有限公司 | 一种采用气相色谱质谱法同时测定果蔬中氯吡脲、2，4‑d、多效唑残留量的方法 |
| CN117233295A (zh) * | 2023-08-08 | 2023-12-15 | 广东工业大学 | 一种测定2,4-d的单体氯稳定同位素的方法及其应用 |
-
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140036734A (ko) * | 2012-09-18 | 2014-03-26 | 한국과학기술연구원 | 동위원소 희석법 및 기체 크로마토그래피-이중 질량분석기를 이용한 산성제초제의 분석방법 |
| CN106404972A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-02-15 | 浙江省检验检疫科学技术研究院 | 气相色谱串联质谱/质谱法同时测定豆芽中6种植物生长调节剂残留的方法 |
| CN106442747A (zh) * | 2016-06-20 | 2017-02-22 | 浙江公正检验中心有限公司 | 一种采用气相色谱质谱法同时测定果蔬中氯吡脲、2，4‑d、多效唑残留量的方法 |
| CN117233295A (zh) * | 2023-08-08 | 2023-12-15 | 广东工业大学 | 一种测定2,4-d的单体氯稳定同位素的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张帆;付善良;施雅梅;李忠海;张莹;王美玲;颜鸿飞;黄志强;: "在线凝胶渗透色谱/气相色谱-质谱联用法测定水果中11种苯氧羧酸类农药", 分析测试学报, vol. 32, no. 01, 25 January 2013 (2013-01-25), pages 79 - 83 * |
| 陈丽香: "气相色谱-质谱联用仪测定柑橘类水果中2, 4-滴的 残留量", 海南师范大学学报（自然科学版）, vol. 36, no. 4, 31 December 2023 (2023-12-31), pages 429 - 434 * |
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