CN117801964B - 一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及真菌培养技术领域，特别是涉及一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用。本发明提供的培养基命名为TLE培养基，通过复配不同碳源、氮源、无机离子和中和剂，以及合适的pH值，可有效中和产品中的抑菌物质，实现了生长缓慢的真菌微生物快速生长富集。进一步，本发明提供的培养方法，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。

Description

一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用
技术领域
本发明涉及真菌培养技术领域，特别是涉及一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用。
背景技术
丝状真菌和酵母菌分类上属于真菌界。丝状真菌俗称霉菌，主要特征是其体内组织由细长的丝状结构（菌丝）组成。酵母菌是单细胞真菌，其主要特征是以单细胞形式存在，通常呈卵圆形或球形。真菌微生物具有细胞壁结构，复杂的菌丝体顶端生长机制和产孢子繁殖方式，导致生长速度较原核微生物相比极其缓慢。
部分霉菌和酵母具有产毒和致病的特性，如果发生产品污染，可能会对使用者的健康造成严重危害。目前，食品、保健品、中药材、化妆品等多个领域制定了相关的标准，用于控制霉菌和酵母菌总数，保障产品安全质量。但是，由于真菌和酵母菌生长缓慢的特点，相关标准检测方法存在检测周期较长和检出效率不高的特点，无法满足企业快速发展的需求。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用。本发明提供的培养基可以快速富集培养真菌，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明提供了一种真菌培养基，包括以下组分：葡萄糖10~20g/L、蔗糖25~35g/L、正二十烷4~6g/L、蛋白胨20~35g/L、硝酸钠2~4g/L、氯化钠0.6~1g/L、磷酸氢二钾0.5~1.5g/L、硫酸镁0.4~0.6g/L、硫酸亚铁0.005~0.015g/L、氯化钾0.4~0.6g/L、硫代硫酸钠0.4~0.6g/L、组氨酸0.05~0.15g/L、卵磷脂5~7g/L和吐温80 35~45g/L；所述真菌培养基的pH值为5.4~5.8。
优选的，所述真菌培养基包括以下组分：葡萄糖12~17g/L、蔗糖28~32g/L、正二十烷4.5~5.5g/L、蛋白胨22~29g/L、硝酸钠2.5~3.5g/L、氯化钠0.7~0.9g/L、磷酸氢二钾0.75~1.25g/L、硫酸镁0.45~0.55g/L、硫酸亚铁0.0075~0.0125g/L、氯化钾0.45~0.55g/L、硫代硫酸钠0.45~0.55g/L、组氨酸0.075~0.125g/L、卵磷脂5.5~6g/L和吐温80 37~42g/L。
优选的，所述真菌培养基包括以下组分：葡萄糖15g/L、蔗糖30g/L、正二十烷5g/L、蛋白胨25.5g/L、硝酸钠3g/L、氯化钠0.85g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钾0.5g/L、硫代硫酸钠0.5g/L、组氨酸0.1g/L、卵磷脂5.83g/L和吐温80 39g/L。
优选的，所述真菌培养基的pH值为5.6。
本发明提供了一种真菌的培养方法，包括以下步骤：将待培养物接种到上述技术方案所述的真菌培养基中，于24~26℃的条件下培养22~26h，得到培养液。
优选的，所述培养的方式包括振荡培养；所述振荡培养的振荡速度为200r/min~250r/min。
优选的，所述待培养物包括1）~4）中的一种或多种：1）丝状真菌，2）酵母菌，3）含有丝状真菌的组分，4）含有酵母菌的组分。
本发明提供了上述技术方案所述真菌培养基或上述技术方案所述培养方法在检测真菌中的应用。
优选的，所述真菌包括丝状真菌和/或酵母菌。
有益效果：
本发明提供了一种真菌培养基，包括以下组分：葡萄糖10~20g/L、蔗糖25~35g/L、正二十烷4~6g/L、蛋白胨20~35g/L、硝酸钠2~4g/L、氯化钠0.6~1g/L、磷酸氢二钾0.5~1.5g/L、硫酸镁0.4~0.6g/L、硫酸亚铁0.005~0.015g/L、氯化钾0.4~0.6g/L、硫代硫酸钠0.4~0.6g/L、组氨酸0.05~0.15g/L、卵磷脂5~7g/L和吐温80 35~45g/L；所述真菌培养基的pH值为5.4~5.8。本发明提供的培养基通过复配不同碳源、氮源、无机离子和中和剂，以及合适的pH值，可有效中和产品中的抑菌物质，实现了生长缓慢的真菌微生物快速生长富集。进一步，本发明提供的培养方法，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。
具体实施方式
本发明提供了一种真菌培养基，包括以下组分：葡萄糖10~20g/L、蔗糖25~35g/L、正二十烷4~6g/L、蛋白胨20~35g/L、硝酸钠2~4g/L、氯化钠0.6~1g/L、磷酸氢二钾0.5~1.5g/L、硫酸镁0.4~0.6g/L、硫酸亚铁0.005~0.015g/L、氯化钾0.4~0.6g/L、硫代硫酸钠0.4~0.6g/L、组氨酸0.05~0.15g/L、卵磷脂5~7g/L和吐温80 35~45g/L；所述真菌培养基的pH值为5.4~5.8。
如无特殊要求，本发明对所述真菌培养基的各组分来源没有特殊要求，采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。
本发明所述真菌培养基包括葡萄糖10~20g/L，优选12~17g/L，更优选为15g/L。
本发明所述真菌培养基包括蔗糖25~35g/L，优选28~32g/L，更优选为30g/L。
本发明所述真菌培养基包括正二十烷4~6g/L，优选4.5~5.5g/L，更优选为5g/L。
本发明所述葡萄糖、蔗糖和正二十烷为真菌培养基的碳源。本发明选择多样化的碳源类型可以快速满足不同种类真菌对最适合碳源的需求，达到促生长效果。
本发明所述真菌培养基包括蛋白胨20~35g/L，优选22~29g/L，更优选为25.5g/L。
本发明所述真菌培养基包括硝酸钠2~4g/L，优选2.5~3.5g/L，更优选为3g/L。
本发明所述蛋白胨和硝酸钠为真菌培养基的氮源。本发明选择不同的氮源可以快速满足不同种类真菌对最适合氮源的需求，达到促生长效果。
本发明所述真菌培养基包括氯化钠0.6~1g/L，优选0.7~0.9g/L，更优选为0.85g/L。
本发明所述真菌培养基包括磷酸氢二钾0.5~1.5g/L，优选0.75~1.25g/L，更优选为1g/L。
本发明所述真菌培养基包括硫酸镁0.4~0.6g/L，优选0.45~0.55g/L，更优选为0.5g/L。
本发明所述真菌培养基包括硫酸亚铁0.005~0.015g/L，优选0.0075~0.0125g/L，更优选为0.01g/L。
本发明所述真菌培养基包括氯化钾0.4~0.6g/L，优选0.45~0.55g/L，更优选为0.5g/L。
本发明所述氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁和氯化钾为真菌培养基的无机盐。本发明选择不同的无机盐可以快速满足不同种类真菌对最适合无机盐离子的需求，达到促生长效果。
本发明所述真菌培养基包括硫代硫酸钠0.4~0.6g/L，优选0.45~0.55g/L，更优选为0.5g/L。
本发明所述真菌培养基包括组氨酸0.05~0.15g/L，优选0.075~0.125g/L，更优选为0.1g/L。
本发明所述真菌培养基包括卵磷脂5~7g/L，优选5.5~6g/L，更优选为5.83g/L。
本发明所述真菌培养基包括吐温80 35~45g/L，优选37~42g/L，更优选为39g/L。
本发明所述硫代硫酸钠、组氨酸、卵磷脂和吐温80为真菌培养基的中和剂。本发明选择不同的中和剂可有效中和真菌产生的抑菌物质，从而可以快速富集培养真菌。
本发明所述真菌培养基的溶剂优选包括水；所述真菌培养基的pH值为5.4~5.8，优选为5.5~5.7，更优选为5.6。本发明通过调整真菌培养基的pH值，可以使多种真菌实现快速富集培养，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。
本发明优选还提供了上述技术方案所述真菌培养基的制备方法，优选包括以下步骤：
将葡萄糖、蔗糖、正二十烷、蛋白胨、硝酸钠、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁、氯化钾、硫代硫酸钠、组氨酸、卵磷脂、吐温80和水按比例混合，加热溶解，调节pH至5.4~5.8，得到所述真菌培养基。
在本发明中，所述加热溶解的温度优选为250~300℃，更优选为300℃。调节pH后，本发明优选将调节pH值后的混合物进行高温高压灭菌，得到所述真菌培养基；所述高温高压灭菌的温度优选为115~121℃，更优选为121℃；所述高温高压灭菌的时间优选为15~20min，更优选为15min。
本发明还提供了一种真菌的培养方法，包括以下步骤：将待培养物接种到上述技术方案所述的真菌培养基中，于24~26℃的条件下培养22~26h，得到培养液。
在本发明中，所述待培养物优选包括1）~4）中的一种或多种：1）丝状真菌，2）酵母菌，3）含有丝状真菌的组分，4）含有酵母菌的组分；所述培养的时间为22~26h，优选为23~25h，更优选为24h；所述培养的方式优选为振荡培养；所述振荡培养的振荡速度优选为200r/min~250r/min，进一步优选为200~230r/min，更优选为200r/min。
本发明通过适宜的培养方法，可以使多种真菌实现快速富集培养，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。
本发明还提供了上述技术方案所述真菌培养基或上述技术方案所述培养方法在检测真菌中的应用。在本发明中，所述真菌优选包括丝状真菌和/或酵母菌。本发明提供的真菌培养基或培养方法，可实现工业环境中缓慢生长丝状真菌和酵母菌24h的快速富集，从而达到缩短检测时间，提高检测效率的目的，具体可用于化妆品、食品、制药领域的真菌快速检测。
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种快速富集培养真菌的培养基、培养方法及应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
对比例1
根据《T/CAFFCI 46-2021 化妆品微生物检验方法（定性）ATP生物荧光增幅法》提供了一种可用于丝状真菌和酵母菌快速检测的基础培养基，其制备方法如下：
使用磁力搅拌器，在烧杯中加入964mL超纯水，将磁力搅拌器温度设置为300℃，加热并持续搅拌，加入卵磷脂5.93g和吐温80 39g，充分溶解。然后依次加入蛋白胨25.5g，硫代硫酸钠0.5g，组氨酸0.1g，葡萄糖15.0g，氯化钠0.85g，加热、搅拌，使其充分溶解。培养基各成分完全溶解后，停止加热，持续搅拌，待其温度降至室温后，使用一定浓度的HCl或NaOH溶液将培养基pH值调至25℃时pH7.0±0.1。将配制好的培养基分装到250mL螺口试剂瓶中，每瓶90mL，置于灭菌锅中121℃高压灭菌15min，待灭菌锅温度降至60℃时，取出培养基迅速摇匀使吐温80充分溶解，放置于室温，待用。
选择8株常见生产环境中生长缓慢的酵母菌和丝状真菌，测定培养基的促生长能力，菌株列表如表1所示。
表1 菌株列表
序号 菌株名称 拉丁名 菌株编号
1 拜耳接合酵母 Zygosaccharomyces bailli CICC 1281
2 聚多曲霉 Aspergillus sydowii CICC 40930
3 宛氏拟青霉 Paecilomyces variotii CICC 4025
4 树脂枝孢霉 Amorphotheca resinae (Cladosporium resinae) CICC 41706
5 芽枝状枝孢霉 Cladosporium cladosporioides CICC 41760
6 反色枝孢霉 Cladosporium inversicolor CICC 10110R
7 黄色枝孢霉 Cladosporium xanthochromaticum CICC 41761
8 耐盐枝孢霉 Cladosporium halotolerans CICC 2443
试验菌株在培养基中生长能力试验包括如下步骤：
将表1中8株菌株根据国标产品限定菌种要求分别制备成10~100CFU/mL的菌悬液或孢子悬液。吸取1mL菌悬液或孢子悬液接分别种于上述培养基中，混匀，置于30℃摇床，200r/min振荡培养24h。在100mL富集液中加入15g玻璃珠和0.1mL消泡剂（道康宁B乳液，Antifoam B Emulsion），置于往复式摇床上280r/min振荡处理30min，得到破壁处理后的富集液。
吸取50μL破壁处理后的富集液，采用全自动荧光光度计检测系统读取相对荧光强度值（RLU）。培养基作为空白对照。当富集液样品的荧光信号值大于空白培养基荧光信号值的3倍时，表明该检测条件下，菌株可以被阳性检出。
试验菌株的测定结果如表2所示。
表2 试验菌株在该培养条件下（30℃）荧光测定结果
样品编号 试验菌株 接种浓度（CFU） 比值（样品荧光信号值RLU/培养基空白荧光信号值RLU） 结果
1 拜耳接合酵母CICC 1281 58 1.74 阴性
2 聚多曲霉CICC 40930 58 1.98 阴性
3 宛氏拟青霉CICC 4025 97 4.73 阳性
4 树脂枝孢霉CICC 41706 11 1.62 阴性
5 芽枝状枝孢霉CICC 41760 70 4.89 阳性
6 反色枝孢霉CICC 10110R 64 0.99 阴性
7 黄色枝孢霉CICC 41761 77 3.67 阳性
8 耐盐枝孢霉CICC 2443 62 4.86 阳性
从表2中可知，样品3、样品5、样品7和样品8的荧光信号比值分别为4.73、4.89、3.67和4.86，均阳性检出，而其余4株菌株富集液的荧光信号比值均小于3，检测结果为阴性。因此，对比例1的培养基和培养条件不能实现全部代表菌株阳性检出。
对比例2
按照对比例1中的方法制备培养基和菌悬液，并开展培养基促生长试验，其区别在于培养温度为25℃。促生长试验结果如表3所示。
表3 试验菌株在25℃条件下荧光测定结果
样品编号 试验菌株 接种浓度（CFU） 比值（样品荧光信号值RLU/培养基空白荧光信号值RLU） 结果
9 拜耳接合酵母CICC 1281 58 1.31 阴性
10 聚多曲霉CICC 40930 58 1.71 阴性
11 宛氏拟青霉CICC 4025 97 3.28 阳性
12 树脂枝孢霉CICC 41706 11 1.38 阴性
13 芽枝状枝孢霉CICC 41760 70 13.44 阳性
14 反色枝孢霉CICC 10110R 64 3.54 阳性
15 黄色枝孢霉CICC 41761 77 9.41 阳性
16 耐盐枝孢霉CICC 2443 62 8.22 阳性
如表3所示，5株菌株均阳性检出，样品11宛氏拟青霉CICC 4025富集液、样品13芽枝状枝孢霉CICC 41760富集液、样品14反色枝孢霉CICC 10110R富集液、样品15黄色枝孢霉CICC 41761富集液、样品16耐盐枝孢霉CICC 2443富集液的荧光信号比值分别为3.28、13.44、3.54、9.41和8.22。其中样品13芽枝状枝孢霉CICC 41760、样品15黄色枝孢霉CICC41761和样品16耐盐枝孢霉CICC 2443的荧光信号比值均高于对比例1中样品5、样品7和样品8的荧光信号比值。以上结果表明，当培养温度为25℃时，有利于试验菌株的生长。
对比例3
按照对比例1中的方法制备培养基，其区别在于在对比例1的基础培养基中添加营养成分及调节pH值如表4所示，培养温度为25℃。
表4 培养基促生长试验分组
编号 培养基 pH值 正二十烷（g/L） 其它组分（g/L）
1 基础培养基 5.6 0 /
2 基础培养基 5.6 5 /
3 基础培养基 5.6 5 蔗糖30，磷酸氢二钾1，硫酸镁0.5，硫酸亚铁0.01，氯化钾0.5，硝酸钠3
选择对比例2中检测结果为阴性的3株菌株，包括拜耳接合酵母CICC 1281、聚多曲霉CICC 40930、树脂枝孢霉CICC 41706为试验菌株制备菌悬液，并对以上3种培养基开展促生长试验，结果如表5所示。
表5 试验菌株在不同培养基中荧光测定结果
样品编号 培养基 试验菌株 接种浓度（CFU） 比值（样品荧光信号值RLU/培养基空白荧光信号值RLU） 结果
17 1 拜耳接合酵母CICC 1281 87 10.06 阳性
18 1 聚多曲霉CICC 40930 58 2.18 阴性
19 1 树脂枝孢霉CICC 41706 96 2.61 阴性
20 2 聚多曲霉CICC 40930 91 1.57 阴性
21 2 树脂枝孢霉CICC 41706 64 4.25 阳性
22 3 聚多曲霉CICC 40930 75 4.17 阳性
如表5所示，当pH值降低至5.6时，样品17拜耳接合酵母CICC 1281富集液的荧光信号值为10.06，检测结果为阳性，表明降低pH值有利于该菌株的生长。在pH5.6的培养基中添加5g/L的正二十烷，样品19树脂枝孢霉CICC 41706富集液的荧光信号值为4.25，结果为阳性。进一步在培养基中添加蔗糖30g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，氯化钾0.5g/L，硝酸钠3g/L时，样品22聚多曲霉CICC 40930富集液的荧光信号值为4.17，检测结果为阳性。
实施例1
一种酵母菌和丝状真菌的培养条件，其培养基TLE的制备方法如对比例1，其区别在于，依次补充添加如下组分：正二十烷5g/L，蔗糖30g/L，磷酸氢二钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.01g/L，氯化钾0.5g/L，硝酸钠3g/L，且pH值调至5.6。培养温度为25℃。
选择对比例1中8株与工业生产环境相关的生长缓慢的酵母菌和丝状真菌制备菌悬液，并测定TLE培养基的促生长能力，结果如表6所示。
表6 培养基TLE促生长试验结果
样品编号 试验菌株 接种浓度（CFU） 比值（样品荧光信号值RLU/培养基空白荧光信号值RLU） 结果
23 拜耳接合酵母CICC 1281 81 8.87 阳性
24 聚多曲霉CICC 40930 75 4.51 阳性
25 宛氏拟青霉CICC 4025 74 6.58 阳性
26 树脂枝孢霉CICC 41706 92 7.90 阳性
27 芽枝状枝孢霉CICC 41760 80 7.20 阳性
28 反色枝孢霉CICC 10110R 79 4.55 阳性
29 黄色枝孢霉CICC 41761 21 10.57 阳性
30 耐盐枝孢霉CICC 2443 64 7.89 阳性
如表6所示，采用TLE培养基为富集培养基，培养温度为25℃的培养体系下，8株检测结果均为阳性，表明该培养体系有利于生产环境相关的慢速酵母菌和霉菌生长，尤其是生长缓慢菌株。
实施例2
选取20株常见工业环境中丝状真菌和酵母菌（菌种信息详见表7），用于进一步验证本发明提供的丝状真菌和酵母菌促生长体系。如实施例2所述，配置本发明提供的TLE培养基，pH值调至5.6，将菌株制备成10-100 CFU/mL的菌悬液或孢子悬液。吸取1mL菌悬液或孢子悬液接种于上述TLE培养基中，混匀，置于25℃摇床，200r/min振荡培养24h。在100mL富集液中加入15g玻璃珠和0.1mL消泡剂，置往复式摇床上280r/min振荡处理30min。吸取50μL破壁处理后的富集液，采用全自动荧光光度计检测系统读取相对荧光强度值（RLU）。培养基作为空白对照。当富集液样品的荧光信号值大于空白培养基荧光信号值的3倍时，表明该检测条件下，菌株可以被阳性检出。
表7常见工业环境真菌培养基TLE促生长试验结果
试验菌株编号 菌种拉丁名 比值（样品荧光信号值RLU/培养基空白荧光信号值RLU） 结果
CICC 1965 Candida albicans 476.76 阳性
CICC 31700 Rhodotorula mucilaginosa 4.88 阳性
CICC 2487 Aspergillus niger 85.19 阳性
CICC 41086 Eupenicillium levitum 91.57 阳性
CICC 40654 Penicillium chrysogenum 43.39 阳性
CICC 40658 Penicillium expansum 154.82 阳性
CICC 41630 Aspergillus flavus 117.68 阳性
CICC 41727 Penicillium citrinum 162.19 阳性
CICC 3146 Rhizopus microsporus 7853.89 阳性
CICC 41022 Aspergillus fumigatus 26.53 阳性
CICC 40279 Penicillium funiculosum 5.37 阳性
CICC 4025 Paecilomyces variotii 3.84 阳性
CICC 10110R Cladosporium inversicolor 4.44 阳性
CICC 41761 Cladosporium xanthochromaticum 4.98 阳性
CICC 2443 Cladosporium halotolerans 4.49 阳性
CICC 1966 Wickerhamomyces anomalus 1825.31 阳性
CICC 1281 Zygosaccharomyces bailli 4.85 阳性
CICC 40930 Aspergillus sydowii 6.33 阳性
CICC 41760 Cladosporium cladosporioides 6.41 阳性
CICC 41706 Amorphotheca resinae 4.88 阳性
综上所述，本发明提供的培养基可以快速富集培养真菌，可实现缓慢生长丝状真菌和酵母菌通过ATP生物荧光增幅法24h快速检出。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (3)

1.一种真菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将待培养物接种到真菌培养基中，于25℃的条件下培养24h，得到培养液；
所述真菌培养基由以下组分组成：葡萄糖15g/L、蔗糖30g/L、正二十烷5g/L、蛋白胨25.5g/L、硝酸钠3g/L、氯化钠0.85g/L、磷酸氢二钾1g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钾0.5g/L、硫代硫酸钠0.5g/L、组氨酸0.1g/L、卵磷脂5.83g/L和吐温80 39g/L；所述真菌培养基的pH值为5.6
所述待培养物包括丝状真菌和/或酵母菌。
2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养的方式包括振荡培养；所述振荡培养的振荡速度为200r/min~250r/min。
3.权利要求1或2所述培养方法在非诊断目的检测真菌中的应用，所述真菌包括丝状真菌和/或酵母菌。
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Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1211246A (en) * 1967-06-07 1970-11-04 Takeda Chemical Industries Ltd Method for producing citric acid by fermentation
EP0017853A2 (en) * 1979-04-12 1980-10-29 Phillips Petroleum Company A process for producing single cell protein material and culture
DD298273A5 (de) * 1989-03-08 1992-02-13 Universitaet Leipzig,De Verfahren zur herstellung mikrokristalliner glycolipide
KR20030097456A (ko) * 2002-06-21 2003-12-31 주식회사 바이오알앤즈 오레오바시디움 속 신균주 ｂｒｄ-109(기탁번호:ｋｃｔｃ10182ｂｐ) 및 본 균주가 생산하는 베타-글루칸 생산방법
CN102086440A (zh) * 2010-11-30 2011-06-08 中国食品发酵工业研究院 一种产抗真菌蛋白菌株的筛选方法及应用
WO2012070891A2 (ko) * 2010-11-24 2012-05-31 주식회사 그린바이오텍 심플리실리움 라멜리콜라 ｂｃｐ 균주 배양용 배지 조성물 및 이의 배양방법
CN111607527A (zh) * 2020-06-08 2020-09-01 刘志强 一种沉香结香真菌菌株的培养技术
CN112342251A (zh) * 2019-08-08 2021-02-09 华南协同创新研究院 一种利用微生物发酵制备1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油三酯的方法
CN112481350A (zh) * 2020-11-18 2021-03-12 中科健康产业集团股份有限公司 用于快速检测霉菌和酵母菌总数的复合培养基及其制备方法
CN112940995A (zh) * 2021-04-28 2021-06-11 武汉大学 一株能降解正二十烷的节杆菌及其应用
CN113308510A (zh) * 2021-07-12 2021-08-27 阿谷巴(杭州)生物科技发展有限公司 一种用于快速检测细胞制品中真菌的培养基及其制备方法和应用

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1211246A (en) * 1967-06-07 1970-11-04 Takeda Chemical Industries Ltd Method for producing citric acid by fermentation
EP0017853A2 (en) * 1979-04-12 1980-10-29 Phillips Petroleum Company A process for producing single cell protein material and culture
DD298273A5 (de) * 1989-03-08 1992-02-13 Universitaet Leipzig,De Verfahren zur herstellung mikrokristalliner glycolipide
KR20030097456A (ko) * 2002-06-21 2003-12-31 주식회사 바이오알앤즈 오레오바시디움 속 신균주 ｂｒｄ-109(기탁번호:ｋｃｔｃ10182ｂｐ) 및 본 균주가 생산하는 베타-글루칸 생산방법
WO2012070891A2 (ko) * 2010-11-24 2012-05-31 주식회사 그린바이오텍 심플리실리움 라멜리콜라 ｂｃｐ 균주 배양용 배지 조성물 및 이의 배양방법
CN102086440A (zh) * 2010-11-30 2011-06-08 中国食品发酵工业研究院 一种产抗真菌蛋白菌株的筛选方法及应用
CN112342251A (zh) * 2019-08-08 2021-02-09 华南协同创新研究院 一种利用微生物发酵制备1-油酸-2-棕榈酸-3-亚油酸甘油三酯的方法
CN111607527A (zh) * 2020-06-08 2020-09-01 刘志强 一种沉香结香真菌菌株的培养技术
CN112481350A (zh) * 2020-11-18 2021-03-12 中科健康产业集团股份有限公司 用于快速检测霉菌和酵母菌总数的复合培养基及其制备方法
CN112940995A (zh) * 2021-04-28 2021-06-11 武汉大学 一株能降解正二十烷的节杆菌及其应用
CN113308510A (zh) * 2021-07-12 2021-08-27 阿谷巴(杭州)生物科技发展有限公司 一种用于快速检测细胞制品中真菌的培养基及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《化妆品微生物检验方法（定性）ATP 生物荧光增幅法》;中国香料香精化妆品工业协会;《团体标准》;20210430;第1-8页 *
Extraction and identification of bioactive compounds (eicosane and dibutyl phthalate) produced by Streptomyces strain KX852460 for the biological control of Rhizoctonia solani AG-3 strain KX852461 to control target spot disease in tobacco leaf;Ahsan T等;《AMB Express》;20170303;第07卷(第01期);第1-9页 *
In Vitro and In Vivo Antibiofilm Potential of Eicosane Against Candida albicans;Beema Shafreen RM等;《Appl Biochem Biotechnol》;20220603;第194卷(第10期);第4800-4816页 *
响应面法优化曲霉Asaw117脱色培养基的研究;梁红昌等;《环境工程》;20090930;第27卷(第S1期);第218-221页 *
高效耐盐柴油降解菌的筛选、鉴定及降解基因;胡春辉等;《中国环境科学》;20171120;第37卷(第11期);第4251-4258页 *

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