CN104560777A - 一株高耐受苯胺降解菌及其应用 - Google Patents
一株高耐受苯胺降解菌及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104560777A CN104560777A CN201410524894.4A CN201410524894A CN104560777A CN 104560777 A CN104560777 A CN 104560777A CN 201410524894 A CN201410524894 A CN 201410524894A CN 104560777 A CN104560777 A CN 104560777A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aniline
- degradation
- phenylamine
- tolerance
- ochrobactrum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 174
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 27
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 title abstract description 17
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims abstract description 49
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 claims abstract description 21
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 241000588843 Ochrobactrum Species 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 8
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-BJUDXGSMSA-N oxygen-15 atom Chemical compound [15O] QVGXLLKOCUKJST-BJUDXGSMSA-N 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 2
- 241000143294 Ochrobactrum sp. Species 0.000 abstract 2
- 238000006065 biodegradation reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 abstract 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- -1 acetylmethyl alcohol Chemical compound 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 3
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 3
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000209094 Oryza Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 2
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 2
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009654 indole test Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010079 rubber tapping Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 231100001234 toxic pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2101/00—Nature of the contaminant
- C02F2101/30—Organic compounds
- C02F2101/38—Organic compounds containing nitrogen
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
本发明公开了一株高耐受苯胺降解菌MC-01（<i>Ochrobactrum</i>sp.<i>MC-01</i>），属于苍白杆菌属（<i>Ochrobactrum</i><i></i>sp<i>.</i>）模式菌，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC？1.12930，保藏日期为2014年6月10日。本发明高耐受苯胺降解菌MC-01具有高浓度条件下苯胺类废水的生物降解功能。菌种的苯胺降解率可达99%，不造成环境二次污染，而且无需添加其他化学制剂，大幅度降低了废水的处理成本，具有广阔的应用前景。本发明高耐受苯胺降解菌MC-01对于解决高浓度条件下苯胺类废水生物处理系统的问题很有帮助，具有很高的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株高耐受苯胺降解菌种及其应用。
背景技术
苯胺是染料工业中最重要的中间体之一，可用于制造酸性墨水蓝G、靛蓝等多种染料；在农药工业中用于生产许多杀虫剂、杀菌剂；苯胺也是橡胶助剂的重要原料，同时也是生产香料、塑料等的中间体。苯胺类有毒污染物毒性大、难降解，对生态环境造成严重污染。因此，研究苯胺及其衍生物的生物降解对于保护环境及提高人类健康具有重要意义。
高浓度苯胺废水在工业排放废水中属于难处理种类之一。国内对高耐受性的苯胺降解微生物的研究较少，针对于此，筛选高浓度条件下的苯胺高效降解菌并了解其降解特性，可为高浓度苯胺类废水的工业化处理提供微生物菌剂资源，从而对解决高浓度苯胺类废水生物处理系统的问题奠定基础。
发明内容
本发明的第一目的是提供了一种高耐受苯胺降解菌，该菌可应用于苯胺类废水的生物强化处理，为降解废水生物处理系统中的高浓度苯胺类物质提供帮助。
本发明的第二目的是提供该菌株在处理苯胺污水中的应用。
为了实现本发明的技术目的，本发明的技术方案如下：
一、本发明通过筛选获得一株高耐受苯胺降解菌种，其特征在于，其属于苍白杆菌属（Ochrobactrum sp.），命名为苯胺降解菌MC-01（Ochrobactrum sp. MC-01）， 已于2014年6月10日保藏，保藏单位全称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC，保藏编号为CGMCC 1.12930。
本发明菌种的形态学及生理生化特征如下：
它为革兰氏阴性好氧菌，杆状；在牛肉膏蛋白胨培养基上形成乳白色菌落，圆形、半透明，表面光滑，边缘圆滑状，易挑起。
本发明的高耐受苯胺降解菌MS-01接触酶反应阳性、产吲哚试验阳性、产氨试验阳性、甲基红试验反应阴性、淀粉水解阴性、乙酰甲基醇实验阴性、硝酸盐还原反应阴性、柠檬酸利用阳性、能利用葡萄糖、能氧化乙醇或醛糖；生长温度范围：30～40 ℃、生长pH 值范围：5.5～8.0。
本发明的高耐受苯胺降解菌MS-01的16SrDNA 序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明苯胺降解菌MC-01经16SrDNA 测序及同源性比较，得到与其最相近的种属是苍白杆菌属（Ochrobactrum），同源性达98%。结合细菌形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，确定高耐受苯胺降解菌MC-01为苍白杆菌属的一个新菌种。
二、本发明的苯胺降解菌MC-01苯胺废水处理中的应用。
本发明的应用具体包括如下步骤：
（1）斜面培养
将实施例1获取的苯胺降解菌MC-01接种到LB斜面培养基中，在35℃下培养24 h；
（2）种子培养
按步骤（1）所得的菌株接种量4%（v/v）接种于种子培养基中，35℃、160 rpm培养12h；
（3）发酵降解
将步骤（2）培养后的菌液以10%的投放量到废水中进行发酵降解，发酵降解条件如下：温度35℃、搅拌速度600 rpm、接种量是10%（v/v）、通气量3 vvm、溶氧15%。
优选的，所述的斜面培养的培养基配方为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸馏水1000 mL，苯胺300 mg。
优选的，所述的种子培养的培养基为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸馏水1000 mL，苯胺500 mg。
优选的，所述步骤3）中苯胺浓度为1500mg/L以下。
本发明的有益效果在于：
本发明苯胺降解菌MC-01具有高浓度条件下苯胺废水的生物降解处理功能，本菌株的可耐受废水中苯胺的浓度达5000mg/L。实验测试数据表明，当废水中的苯胺浓度在1500 mg/L（COD值6000 mg/L）以下时，经过36 h降解，在不添加任何化学试剂的情况下，该菌对苯胺降解率可达98.1%，经过60h，该菌对含苯胺废水的降解率基本达到99%，不造成环境二次污染，大幅度降低了废水的处理成本，具有广阔的应用前景。本发明苯胺降解菌MC-01对于解决高浓度条件下苯胺废水生物处理系统的问题很有帮助，具有很高的应用价值。
本发明涉及的生物材料，属于苍白杆菌属（Ochrobactrum sp.），分类命名为苯胺降解菌MC-01（Ochrobactrum sp. MC-01）， 已于2014年6月10日保藏，保藏单位全称为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称为CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC 1.12930。
具体实施方式
下面列举实施例对本发明进一步说明，但不因此限制本发明的内容。
本实施方式中，以待测废水COD值作为参考指标，选用国标法进行测量。
实施例1：本实施例说明获得高耐受苯胺降解菌MC-01菌种的方法。
本实施例中苯胺降解菌MC-01是从南京炼油厂污水处理车间曝气池活性污泥中经过初筛，然后再进行复筛得到的。初筛是根据菌株在高浓度苯胺培养基中的生长情况，筛选出适应期短，代谢旺盛的细菌，复筛即是在初筛的基础上进一步在苯胺浓度5000 mg/L下，以菌株是否具有较高苯胺降解率为依据，筛选出降解效能较好的高耐受性菌株。
其中每升苯胺选择培养基由KH2PO4 2 g，MgSO4 1 g，NaCl 2 g，纯化琼脂、18 g、蒸馏水1000 mL，加热溶解后121 ℃灭菌20 min，待培养基冷却至50 ℃左右时在洁净工作台中加入无菌苯胺1000 mg混匀。
其具体步骤如下：
一、初筛：
（1） 将取得的活性污泥与水样混合物约100 mL，搅拌均匀，加入10 mg的苯胺，于通风橱中静置48 h；
（2）将烧杯中的活性污泥再次搅拌均匀，静置，待上层液体基本清澈时，取上清液5mL加入含苯胺100 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在温度37 ℃，160 rpm条件培养48 h；
（3）取5 mL步骤 ② 中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为800 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 ℃，160 rpm条件下培养48 h；
（4）取5 mL步骤 ③ 中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为1500 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 ℃，160 rpm条件下培养48 h；
（5）取5 mL步骤 ④ 中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为3000 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 ℃，160 rpm条件下培养48 h；
（6）取5 mL步骤 ⑤ 中培养48 h后的菌液接于苯胺浓度为3000 mg/L的苯胺无机盐培养液中，在37 ℃，160 rpm条件下培养48 h；
（7）取步骤 ⑥ 中的菌液按10-1，10-2，10-3，10-4，10-5倍梯度稀释后取1mL稀释菌液均匀涂布于500 mg/L苯胺LB培养基的平板中，37 ℃下培养24 h-48 h，观察菌落形态特征，并挑取单菌落接于菌种保存培养基（800 mg/L苯胺无机盐固体培养基）中，37 ℃培养48 h，划线分离纯化后，作为研究菌种保存于4 ℃冰箱中。
二 、复筛
在初筛的基础上进一步在苯胺浓度5000 mg/L下，其他条件同初筛，以菌株是否具有较高苯胺降解率为依据，筛选出降解效能好的高耐受性菌株。最终得到一株高耐苯胺降解菌，（耐受度可达5000mg/L）该菌在苯胺浓度1500mg/L时，经过36 h降解，在不添加任何化学试剂的情况下，苯胺降解率平均值可达98.1%，经过60h，该菌对含苯胺废水降解平均值达到99%。将其命名为苯胺降解菌MC-01（Ochrobactrumsp. MC-01）。
实施例2本实施例说明本发明苯胺降解菌MC-01菌种的生理生化特性
本发明菌种为革兰氏阴性好氧菌，杆状；在牛肉膏蛋白胨培养基上形成乳白色菌落，圆形、半透明，表面光滑，边缘圆滑状，易挑起。
本实施方式中高耐受苯胺降解菌MC-01是根据《伯杰氏细菌学鉴定手册》对高耐受苯胺降解菌MC-01进行常规生理生化鉴定，实验结果为：接触酶反应阳性、产吲哚试验阳性、产氨试验阳性、甲基红试验反应阴性、淀粉水解阴性、乙酰甲基醇实验阴性、硝酸盐还原反应阴性、柠檬酸利用阳性、能利用葡萄糖、能氧化乙醇或醛糖。
本实施方式中高耐受苯胺降解菌MC-01的最适生长PH值6.5，最适生长温度35℃。
实施例3本实施例说明本发明苯胺降解菌MC-01菌种的分子生物学系统鉴定
依据 《伯杰氏细菌学鉴定手册》对苯胺降解菌MC-01进行常规化生理生化鉴定，采用CTAB法进行细菌总DNA的提取。将所得细菌基因组DNA用细菌16SrDNA通过引物进行PCR扩增，电泳后割胶回收PCR产物，委托苏州金唯智生物科技有限公司进行16SrDNA测序，将测定结果用BLAST软件与Genbank中已登录的16SrDNA序列进行同源性比较，发现本实施方式得到的高耐受苯胺 降解菌MC-01最相近的种属是苍白杆菌属（Ochrobactrum），同源性可达98%，结合细胞形态特征、生长条件、生理生化鉴定结果，发现与本属其它菌种有区别，确定该株高耐受苯胺降解菌MC-01为苍白杆菌属的一个新种。根据16SrDNA测序结果，利用NCBI提供的Blast工具和Cluastx、PhyloDraw等相关软件在GeneBank数据库中找到了同源序列。
实施例4 本实施例说明本发明的高耐受苯胺降解菌MC-01在降解苯胺中的应用。
（1）斜面培养
将实施例1获取的苯胺降解菌MC-01接种到LB斜面培养基中，在35℃下培养24 h。
（2）种子培养
按步骤（1）所得的菌株接种量4%（v/v）接种于种子培养基中，35℃、160 rpm培养12h。
（3）发酵降解
将步骤（2）培养后的菌液以10%的投到含有苯胺的废水中进行发酵降解，发酵降解条件如下：温度35℃、搅拌速度600 rpm、接种量是10%（v/v）、通气量3 vvm、溶氧15%。将发酵液离心取上清液， 90℃水浴10min后再次离心取上清液，根据国标法测不同时间段经过MC-01菌降解后废水的COD值。
重复上述步骤3次。
以72 h作为测量周期，苯胺浓度为1500mg/L，经过24h，苯胺降解率平均值达到93.2 %；经过36h，苯胺降解率平均值可达98.1%；经过60h，苯胺降解率平均值达到99% 。
序列表
<110> 南京工业大学
<120> 一种高耐受苯胺降解菌及其应用
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 1353
<212> DNA
<213> 苍白杆菌属
<400> 1
acatgcaagt cgagcgcccc gcaaggggag cggcagacgg gtgagtaacg cgtgggaatc 60
taccatttgc tacggaacaa cagttggaaa cgactgctaa taccgtatgt gccctaacgg 120
ggaaagattt atcggcaaat gatgagcccg cgttggatta gctagttggt ggggtaaagg 180
cctaccaagg cgacgatcca tagctggtct gagaggatga tcagccacac tgggactgag 240
acacggccca gactcctacg ggaggcagca gtggggaata ttggacaatg ggcgcaagcc 300
tgatccagcc atgccgcgtg agtgatgaag gccctagggt tgtaaagctc tttcaccggt 360
gaagataatg acggtaaccg gagaagaagc cccggctaac ttcgtgccag cagccgcggt 420
aatacgaagg gggctagcgt tgttcggatt tactgggcgt aaagcgcacg taggcggact 480
aataagtcag gggtgaaatc ccggggctca accccggaac tgcctttgat actgttagtc 540
ttgagtatgg aagaggtgag tggaattccg agtgtagagg tgaaattcgt agatattcgg 600
aggaacacca gtggcgaagg cggctcactg gtccattact gacgctgagg tgcgaaagcg 660
tggggagcaa acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg aatgttagcc 720
gtcggggagt ttactcttcg gtggcgcagc taacgcatta aacattccgc ctggggagta 780
cggtcgcaag attaaaactc aaaggaattg acgggggccc gcacaagcgg tggagcatgt 840
ggtttaattc gaagcaacgc gcagaacctt accagccctt gacataccgg tcgcggacac 900
agagatgtgt ctttcagttc ggctggaccg gatacaggtg ctgcatggct gtcgtcagct 960
cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacgagcgca accctcgccc ttagttgcca 1020
gcattgagtt gggcactcta aggggactgc cggtgataag ccgagaggaa ggtggggatg 1080
acgtcaagtc ctcatggccc ttacgggctg ggctacacac gtgctacaat ggtggtgaca 1140
gtgggcagcg agcacgcgag tgtgagctaa tctccaaaag ccatctcagt tcggattgca 1200
ctctgcaact cgagtgcatg aagttggaat cgctagtaat cgcggatcag aatgccgcgg 1260
tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtt ggttttaccc 1320
Gaaggcgctg tgctaaccgc aaggaggcag gcg 1353
Claims (7)
1.一株高耐受苯胺降解菌，其特征在于，其属于苍白杆菌属（Ochrobactrum sp.），命名为苯胺降解菌MC-01（Ochrobactrum sp. MC-01）， 已于2014年6月10日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC 1.12930。
2. 根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，SEQ ID NO：1所示的为该菌种的16sDNA基因序列。
3. 权利要求1-2所述的菌种在苯胺废水降解处理中的应用。
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
（1）斜面培养
将实施例1获取的苯胺降解菌MC-01接种到LB斜面培养基中，在35℃下培养24 h；
（2）种子培养
按步骤（1）所得的菌株接种量4%（v/v）接种于种子培养基中，35℃、160 rpm培养12h；
（3）发酵降解
将步骤（2）培养后的菌液以10%的投放量到含有苯胺的废水中进行发酵降解，发酵降解条件如下：温度35℃、搅拌速度600 rpm、接种量是10%（v/v）、通气量3 vvm、溶氧15%。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的斜面培养的培养基配方为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸馏水1000 mL，苯胺300 mg。
6. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的种子培养的培养基为牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，纯化琼脂18 g，蒸馏水1000 mL，苯胺500 mg。
7. 根据权利要求8所述的因应用，其特征在于，所述的步骤3）中苯胺浓度为1500mg/L以下。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410524894.4A CN104560777B (zh) | 2014-10-08 | 2014-10-08 | 一株高耐受苯胺降解菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410524894.4A CN104560777B (zh) | 2014-10-08 | 2014-10-08 | 一株高耐受苯胺降解菌及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104560777A true CN104560777A (zh) | 2015-04-29 |
| CN104560777B CN104560777B (zh) | 2017-09-22 |
Family
ID=53077858
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410524894.4A Active CN104560777B (zh) | 2014-10-08 | 2014-10-08 | 一株高耐受苯胺降解菌及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104560777B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105112331A (zh) * | 2015-08-27 | 2015-12-02 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高效植物促生菌及其在生物复混肥研发方面的应用 |
| CN110373352A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-10-25 | 武汉理工大学 | 高效苯胺降解菌及其在含苯胺废水处理中的应用 |
| CN110724650A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-01-24 | 天津大学 | 一种高效石油降解菌tdyn1t及其应用 |
| CN112694986A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-04-23 | 江苏南资环保科技有限公司 | 一种苯胺高效降解菌及其应用 |
| CN112920967A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-06-08 | 中南大学 | 降低含苯胺印染废水色度的微生物菌剂、制备方法、降低含苯胺印染废水色度的方法和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1754958A (zh) * | 2004-09-30 | 2006-04-05 | 中国科学院动物研究所 | 一株可高效降解有机磷农药的降解菌及其用途 |
| CN101235358A (zh) * | 2008-03-05 | 2008-08-06 | 广东省微生物研究所 | 一种具有降解苯胺能力的污泥中华根瘤菌及其应用 |
| EP2487139A1 (en) * | 2009-10-05 | 2012-08-15 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Additive used in a membrane-separation activated sludge process |
-
2014
- 2014-10-08 CN CN201410524894.4A patent/CN104560777B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1754958A (zh) * | 2004-09-30 | 2006-04-05 | 中国科学院动物研究所 | 一株可高效降解有机磷农药的降解菌及其用途 |
| CN101235358A (zh) * | 2008-03-05 | 2008-08-06 | 广东省微生物研究所 | 一种具有降解苯胺能力的污泥中华根瘤菌及其应用 |
| EP2487139A1 (en) * | 2009-10-05 | 2012-08-15 | Asahi Kasei Chemicals Corporation | Additive used in a membrane-separation activated sludge process |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 任源 等: "苯胺分解菌的驯化筛选研究", 《环境科学研究》 * |
| 刘宪军 等: "苯胺降解菌的分离和降解特性研究", 《环境工程学报》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105112331A (zh) * | 2015-08-27 | 2015-12-02 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高效植物促生菌及其在生物复混肥研发方面的应用 |
| CN105112331B (zh) * | 2015-08-27 | 2018-06-19 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一株高效植物促生菌及其在生物复混肥研发方面的应用 |
| CN110373352A (zh) * | 2019-07-19 | 2019-10-25 | 武汉理工大学 | 高效苯胺降解菌及其在含苯胺废水处理中的应用 |
| CN110724650A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-01-24 | 天津大学 | 一种高效石油降解菌tdyn1t及其应用 |
| WO2021077531A1 (zh) * | 2019-10-21 | 2021-04-29 | 天津大学 | 一种高效石油降解菌tdyn1t及其应用 |
| CN110724650B (zh) * | 2019-10-21 | 2021-11-02 | 天津大学 | 一种石油降解菌tdyn1t及其应用 |
| CN112694986A (zh) * | 2020-11-27 | 2021-04-23 | 江苏南资环保科技有限公司 | 一种苯胺高效降解菌及其应用 |
| CN112694986B (zh) * | 2020-11-27 | 2022-07-08 | 江苏南资环保科技有限公司 | 一种苯胺高效降解菌及其应用 |
| CN112920967A (zh) * | 2020-12-31 | 2021-06-08 | 中南大学 | 降低含苯胺印染废水色度的微生物菌剂、制备方法、降低含苯胺印染废水色度的方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104560777B (zh) | 2017-09-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107177532B (zh) | 一种有机氮类污染物降解菌剂及其应用 | |
| CN103045579B (zh) | 一种适用于海洋环境石油污染的微生物修复固化吸附菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN102676432B (zh) | 一种高效水体脱氮施氏假单胞菌db-33及其培养方法 | |
| CN104560777B (zh) | 一株高耐受苯胺降解菌及其应用 | |
| CN103215202B (zh) | 一株好氧反硝化菌及其应用 | |
| CN105985917B (zh) | 一种提高小球藻在养猪废水中生物量的方法 | |
| CN111733113B (zh) | 一种cod降解菌种及其应用 | |
| CN109370945A (zh) | 一株高效降解氯苯的苍白杆菌zjutcb-1及其应用 | |
| CN101245327B (zh) | 一种地衣芽孢杆菌及其利用污泥为原料生产碱性蛋白酶的方法 | |
| CN102533586B (zh) | 具有二氯甲烷降解能力的潘多拉菌及其应用 | |
| CN104099274A (zh) | 一株好氧降解吲哚的贪铜菌及其应用 | |
| CN102220240A (zh) | Pm-i污泥减量微生物制剂 | |
| CN109251880B (zh) | 一种蜡样芽胞杆菌及其在改善水体磷污染中的应用 | |
| CN101429486B (zh) | 净化重金属污染的芽孢杆菌mk3-1及用途 | |
| CN102093970A (zh) | 一种低温苯胺降解菌 | |
| CN102250776A (zh) | 一株应用于污泥和畜禽粪污生物沥浸处理的耐酸性异养菌z3 | |
| CN102703420A (zh) | 一种城市垃圾及污水微生物降解制剂及其制备方法 | |
| CN102925357B (zh) | 一种无害化处理用微生物复合菌剂及其应用 | |
| CN112694986B (zh) | 一种苯胺高效降解菌及其应用 | |
| CN104845899A (zh) | 红球菌(Rhodococcus sp.)2G在降解邻苯二甲酸酯中的应用 | |
| CN104805035A (zh) | 一株可同时降解多种邻苯二甲酸酯的红球菌(Rhodococcus sp.)2G | |
| CN110229766A (zh) | 氧化微杆菌及其在降解有机污染物中的应用 | |
| CN101993838A (zh) | 具有氯苯胺降解能力的代尔夫特菌h1及其应用 | |
| CN110157637A (zh) | 肠杆菌z1和克雷伯氏杆菌z2复合菌剂去除高氮污染废水及应用 | |
| CN106635855A (zh) | 一种北见微杆菌及其培养应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |