CN117797171A - 一种自体富血小板血浆的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及血液制品的制备技术领域，具体公开了一种自体富血小板血浆的制备方法及其应用，制备方法包括以下步骤：采集自体全血，与抗凝剂混匀后静置保存；对自体全血一次离心，得到血浆层、白膜层和红细胞层，此时血小板主要在白膜层内；分离白膜层上10～15ml血浆、白膜层和白膜层下25～35ml红细胞二次离心，使得红细胞和白细胞下沉，上层悬液即为自体富血小板血浆；将自体富血小板血浆分装，置于﹣80～﹣20℃冰冻保存。所制备的自体富血小板血浆用于预防和消除妊娠纹、伤口止血、促进伤口愈合。采用本发明所提供的技术方案，可以解决现有技术采用常规抗凝对孕妇的自体全血进行贮存，难以保证自体全血的正常回输，并且容易导致自体全血浪费的技术问题。

Description

一种自体富血小板血浆的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及血液制品的制备技术领域，具体涉及一种自体富血小板血浆的制备方法及其应用。

背景技术

贮存式自体输血，是在手术数周乃至数月前预先采集患者自体全血保存，待其需要输血治疗时再将保存的自体全血进行回输。近年来，血液来源逐渐减少而输血需求在逐渐增加，导致血液资源紧缺，因此，贮存式自体输血以其独特的优点和优势得到了广泛的应用。尤其是在产科，因为顺产或剖宫产手术时间有预期，产前经过充分的检查诊断，产科医生对孕妇是否出血以及出血量有比较准确的估计和把握，对一些稀有血型和不规则抗体阳性的孕妇，选择贮存式自体输血更能保证分娩安全。例如，Rh阴性血的孕妇通常在孕36周后由医院输血科医务人员到其病床旁备200ml自体全血，以供生产过程中发生大出血或产后发生贫血时进行自体全血回输。

但是，随着孕周的增加，孕妇的血液日趋高凝状态，若采用常规血液的抗凝贮存方式对产妇的自体全血进行贮存，会导致无法输注或输血不畅，具体说明如下：一是孕妇于妊娠末期抽取自体全血进行贮存，其自体全血的高凝状态会导致仅进行常规抗凝的自体全血发生部分凝固，并在贮存过程中出现轻度溶血，从而在需要进行自体全血回输时因贮存的自体全血达不到出库标准而无法输注，难以保证分娩安全；二是在生产过程中发生大出血需要进行自体全血回输时，因贮存的自体全血粘度高，输血速度缓慢，达不到抢救用血要求，不利于安全分娩。此外，部分孕妇在生产过程中未出现大出血，并且产后未出现贫血，则该部分产妇贮存的自体全血未进行回输使用，造成血液过期报废，浪费血液资源。

发明内容

本发明意在提供一种自体富血小板血浆的制备方法及其应用，以解决现有技术采用常规抗凝对孕妇的自体全血进行贮存，难以保证自体全血的正常回输，并且容易导致自体全血浪费的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种自体富血小板血浆的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、采血：采集200ml孕妇的自体全血，与抗凝剂混合均匀后室温静置保存；

步骤二、一次离心：对静置保存后的自体全血进行离心处理，使得自体全血分层，形成自上而下的血浆层、白膜层和红细胞层，此时血小板主要存在于白膜层内；

步骤三、分离自体全血：先将上层部分血浆单独分离，使得自体全血中剩余10～15ml血浆，再将剩余的10～15ml血浆连同白膜层、以及白膜层下25～35ml红细胞分离；

步骤四、保存自体成分血：将单独分离的血浆置于﹣20℃环境下保存，将分离后剩余的红细胞置于4℃环境下保存；

步骤五、二次离心：对分离的10～15ml血浆、白膜层和白膜层下25～35ml红细胞一起进行二次离心处理，使得红细胞和白细胞下沉，分离出上层悬液即为自体富血小板血浆；

步骤六、保存自体富血小板血浆：根据需要对自体富血小板血浆进行分装，置于﹣80～﹣20℃环境下冰冻保存。

本方案的原理及有益效果：

实际应用时，若孕妇在生产过程中出现大出血或者在产后出现贫血，可以根据实际情况取自体成分血中的血浆或/和红细胞，融化后进行回输，以保证分娩安全；取自体富血小板血浆融化后涂抹于孕妇的肚子上，以预防妊娠纹的生长；若孕妇已经生长妊娠纹，也可以取自体富血小板血浆融化后涂抹于孕妇的肚子上生长妊娠纹的部位，以消除妊娠纹；若孕妇在生产过程中进行了侧切或剖宫产，可以取自体富血小板血浆融化后制备止血凝胶，将止血凝胶敷贴在伤口处进行止血，生产完成后可以取自体富血小板血浆融化后涂抹与伤口处，以促进伤口的愈合。

1、提高血液使用率：本方案对自体全血进行一次离心，分离得到血浆和红细胞，再对分离出的白膜层上10～15ml血浆、白膜层以及白膜层下25～35ml红细胞进行二次离心，分离得到富血小板血浆，血浆和红细胞作为自体成分血，可以供生产过程中以及生产后的输血使用，而富血小板血浆则可以用于预防和消除妊娠纹、产中伤口止血以及产后促进伤口愈合，相比于直接贮存自体全血以供生产和产后输血使用，本方案显著增加了自体血液的用途，从而有效提高了血液使用率。

2、保证血液顺利回输：本方案通过一次离心后分离，将血浆和红细胞作为成分血进行单独贮存，相比于直接贮存自体全血的方式，可以避免血浆中高浓度状态的血液凝血因子使红细胞聚集，导致红细胞无氧代谢增加，造成血液中乳酸产生增加、血液的PH值下降，从而导致红细胞受损，激发部分凝血反应；因此，本方案将血浆和红细胞分开贮存可以避免血液发生部分凝固，并避免血液在贮存过程中出现轻度溶血，从而避免因贮存的血液达不到出库标准而无法进行自体血回输的问题，有利于保证分娩安全；并且本方案贮存的自体成分血相比于自体全血，粘度可以得到有效降低，从而保证输血速度能够达到抢救用血要求，有利于进一步保证安全分娩。

3、减少血液浪费：本方案经过二次离心得到富血小板血浆，则即便该孕妇在生产过程中未出现大出血，并且产后未出现贫血，即自体成分血未能进行回输使用，造成自体成分血过期报废，所制备的自体富血小板血浆也能用于预防和消除妊娠纹、产中伤口止血以及产后促进伤口愈合，不至于使得该孕妇的自体血液全部浪费，有利于减少血液资源的浪费；并且本方案将血浆和红细胞作为成分血分开贮存，若该孕妇未将自体成分血进行回输使用，可以将该成分血用于其他患者输血，异体成分血输血相比于异体全血输血，可以有效降低异体血液输血的不良反应，既保证异体输血安全，又可以进一步减少血液资源浪费。

4、保证使用安全：本方案采集孕妇的自体全血，将其经过二次分离制备得到富血小板血浆，并将制备所得的富血小板血浆用于该孕妇自身的妊娠纹预防和消除、产中伤口止血以及产后促进伤口愈合，可以有效避免孕妇在使用过程中产生机体排异等不良反应，从而保证富血小板血浆的使用安全性。

5、提高血小板浓度：本方案对自体全血进行一次离心，使得自体全血形成自上而下的血浆层、白膜层和红细胞层，此时大部分血小板集中在白膜层中，但是仍有部分血小板留存在血浆层下部和红细胞层上部，因此将白膜层连同白膜层上10～15ml血浆和白膜层下25～35ml红细胞一起分离出来进行二次离心处理，可以保证将一次离心后自体全血中的血小板取完，从而提高最终制成的富血小板血浆中血小板的浓度。

6、保证血液有效性：本方案经过一次离心分离得到血浆和红细胞，将血浆和制得的红细胞分别置于﹣20℃、4℃环境下保存，可以有效保证血浆成分血和红细胞成分血的活性，使得血浆成分血和红细胞成分血可以有效用于输血；而将经过二次分离得到的富血小板血浆置于﹣80～﹣20℃环境下冰冻保存，可以有效保证自体富血小板血浆的活性，从而保证将其用于预防和消除妊娠期、产中伤口止血和产后促进伤口愈合时，可以发挥预期的效果。

优选的，作为一种改进，所述步骤二中，一次离心的离心力为1500～2500g，离心时间为10～20min。

有益效果：本方案对自体全血进行的一次离心为重离心，目的是将自体全血分为层次清晰的血浆层、白膜层和红细胞层，以便将血浆和红细胞分开贮存，并将富集在白膜层及白膜层附近的血小板分离出来，以便制备出富血小板血浆。若离心力过小(小于1500g)和/或离心时间过短(小于5min)，则会导致离心不够，难以形成层次清晰的血浆层、白膜层和红细胞层，不能很好地将血浆、白膜层和红细胞进行分离，无法制备出纯度较高的成分血和浓度较高的富血小板血浆。若离心力过大(大于2500g)和/或离心时间过长(大于20min)，则会导致离心过度，很大一部分血小板会被离心至红细胞层中而难以分离，不仅无法制备出纯度较高的成分血和浓度较高的富血小板血浆，还可能导致血小板被破坏。

优选的，作为一种改进，所述步骤五中，二次离心的离心力为1000～1500g，离心时间为3～10min。

有益效果：本方案对白膜层以及白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞进行的二次离心为轻离心，目的是将红细胞、白细胞等血液成分分离去除，得到只含有血小板和血浆的富血小板血浆，同时保证血小板的活性。若离心力过小(小于1000g)和/或离心时间过短(小于3min)，则会导致离心不够，难以有效去除红细胞、白细胞等血液成分，导致制备的富血小板血浆纯度降低。若离心力过大(大于1500g)和/或离心时间过长(大于10min)，则会导致离心过度，此时血小板已经经历了一次离心的重离心，二次离心过度相比于一次离心过度更加容易导致血小板被破坏，造成富血小板血浆的使用效果下降。

优选的，作为一种改进，所述一次离心和二次离心的离心温度为20～24℃。

有益效果：本方案将一次离心和二次离心的离心温度均控制在20～24℃的范围内，可以在两次离心过程中保持血小板的活性，从而保证富血小板血浆在使用过程中发挥出预期的效果；如果一次离心和/或二次离心的离心温度过低(低于20℃)或过高(高于24℃)，会导致血小板活性丧失，且血小板活性的丧失是不可逆的，不仅无法制备出有效的富血小板血浆用以预防和消除妊娠纹、产中止血以及产后促进伤口愈合，还会导致血液资源的浪费。

优选的，作为一种改进，所述步骤一中，自体全血静置保存的时间不超过6h。

有益效果：本方案将自体全血静置保存的时间设置为不超过6小时，可以有效保证血浆中不稳定凝血酶因子的活性，避免自体全血在室温下保存时间过长而导致血浆中的不稳定凝血因子被破坏，从而保证最终制成的自体富血小板血浆的使用效果。

优选的，作为一种改进，一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备止血凝胶中的应用。

有益效果：本方案将制备的自体富血小板血浆用于制备止血凝胶，则孕妇在生产过程中进行了侧切或剖宫产，需要对伤口处进行止血操作时，可以将止血凝胶直接敷贴在伤口处，相比于在伤口处涂抹自体富血小板血浆，止血凝胶可以实现快速止血，以保证生产安全，且止血操作更加方便快捷。

优选的，作为一种改进，一种自体富血小板血浆在制备止血凝胶中的应用，包括以下步骤：

S1、融化自体富血小板血浆：从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化；

S2、配制钙-凝血酶合剂：在无菌条件下混合凝血酶粉和葡萄糖酸钙，配制成钙-凝血酶合剂；

S3、制备止血凝胶：将钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆按照1:10的体积比混合，经20～30s形成止血凝胶。

有益效果：本方案将凝血酶和葡萄糖酸钙与血小板混合，凝血酶和葡萄糖酸钙作为血小板激活剂，可以使得血小板活化、纤维蛋白凝聚，形成凝胶样物质，即得到止血凝胶，制成的凝胶中的成分主要包括血小板、白细胞、纤维蛋白、生长因子及细胞因子等。通过止血凝胶实现伤口快速止血的过程中，血小板的聚集是重要过程，而促进血小板聚集的物质包括强诱导物质和弱诱导物质，作用是促进血小板之间相互粘附，实现血小板的聚集。其中，凝血酶作为强诱导物质，可以激活纤维蛋白原的蛋白酶激活受体1和蛋白酶激活受体4而形成纤维蛋白，纤维蛋白具有粘附特征和纤维结合素的作用，能够迅速形成多纤维束网参与止血，从而发挥促进血小板聚集的作用；葡萄糖酸钙提供的钙离子作为弱诱导物质，则会参与上述血小板的聚集，从而促进和加强血小板的聚集。

本方案先将凝血酶粉和葡萄糖酸钙混合、稀释于无菌生理盐水中，配制成钙-凝血酶合剂，再将钙-凝血酶合剂与自体富血小板血浆按比例混合，制成止血凝胶，可以有效减少每次混合的混合物数量，相比于直接将凝血酶、葡萄糖酸钙和自体富血小板血浆三者混合，可以提高各物质之间的混合均匀程度，从而有利于促进止血凝胶的快速、均匀成形。

本方案将钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆按照1:10的体积比进行混合，可以保证自体富血小板血浆的有效凝集，形成止血凝胶，并同时避免自体富血小板血浆凝集过度，保证止血凝胶的延展性和可塑性。若钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆的体积比过小，即钙-凝血酶合剂的量过少，则自体富血小板血浆难以有效凝集，无法形成止血凝胶，从而无法达到预期的伤口止血效果；若钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆的体积比过大，即钙-凝血酶合剂的量过多，则自体富血小板血浆会凝集过度，导致止血凝胶的延展性和可塑性降低，用于伤口止血时难以有效覆盖伤口，且覆盖过程中容易发生破裂，仍然无法达到预期的伤口止血效果。

优选的，作为一种改进，一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备预防妊娠纹制剂中的应用。

有益效果：本方案将自体富血小板血浆以软膏剂、乳膏剂等形式制备成药，可以根据实际使用需要选择药剂形式，便于患者坚持遵医嘱用药，从而保证治疗效果，避免用药疗程不足或用药中断导致生长妊娠纹的问题。

优选的，作为一种改进，一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备消除妊娠纹制剂中的应用。

有益效果：本方案将自体富血小板血浆以软膏剂、乳膏剂等形式制备成药，可以根据实际使用需要选择药剂形式，便于患者坚持遵医嘱用药，从而保证治疗效果，避免用药疗程不足或用药中断导致妊娠纹消除不彻底的问题。

优选的，作为一种改进，一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备促进伤口愈合制剂中的应用。

有益效果：本方案将自体富血小板血浆以软膏剂、乳膏剂等形式制备成药，可以根据实际使用需要选择药剂形式，便于患者坚持遵医嘱用药，从而保证治疗效果，避免用药疗程不足或用药中断导致伤口愈合缓慢、愈合不良等问题。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1

一种自体富血小板血浆的制备方法，基于200ml三联采血袋、医用离心机、血液分浆夹、多联分装血袋等装置完成，上述装置均为现有技术，本实施例不作赘述。为了方便描述，将三联采血袋的三个相互连通的血袋依次称为第一袋、第二袋和第三袋。

一种自体富血小板血浆的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、采血：采集200ml孕妇的自体全血，与抗凝剂混合均匀后室温静置保存。

具体的，先在200ml三联采血袋上粘贴包含有孕妇信息的标签，再使用200ml三联采血袋采集200ml孕妇的自体全血，此时自体全血位于第一袋中，第一袋中事先储存有对应量的抗凝剂，将自体全血和抗凝剂摇晃混合均匀，随后在室温环境下静置保存，且静置保存时间不超过6h。

步骤二、一次离心：对静置保存后的自体全血进行离心处理，使得自体全血分层，形成自上而下的血浆层、白膜层和红细胞层，此时血小板主要存在于白膜层内。

具体的，将第一袋中静置保存后的自体全血放入医用离心机，对自体全血进行一次离心处理，一次离心的离心力为2000g，离心时间为15min，离心温度为20～24℃，最佳离心温度为22℃。经过一次离心之后，自体全血分层，形成自上而下的血浆层、白膜层和红细胞层，此时血小板主要存在于白膜层内，白膜层上的血浆层下部以及白膜层下的红细胞层上部也存在少量血小板。

步骤三、分离自体全血：先将上次部分血浆单独分离，使得自体全血中剩余10～15ml血浆，再将剩余的10～15ml血浆连同白膜层、以及白膜层下25～35ml红细胞分离。

具体的，使用血液分浆夹将第一袋中的血浆层上部分离至第二袋中，使得第一袋中的自体全血中剩余10～15ml血浆，再使用血液分浆夹将第一袋中剩余的10～15ml血浆连同白膜层、以及白膜层下25～35ml红细胞分离至第三袋中。

步骤四、保存自体成分血：将单独分离的血浆置于﹣20℃环境下保存，将分离后剩余的红细胞置于4℃环境下保存。

具体的，将单独分离至第二袋中的血浆置于﹣20℃的冰箱内保存，将第一袋中分离后剩余的红细胞也置于4℃的冰箱内保存。

步骤五、二次离心：对分离的10～15ml血浆、白膜层和白膜层下25～35ml红细胞一起进行二次离心处理，使得红细胞和白细胞下沉，分离出上层悬液即为自体富血小板血浆。

具体的，将第三袋放入医用离心机中，使得第三袋连接管道的一端朝下，对分离至第三袋中的白膜层以及白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞一起进行二次离心处理，二次离心的离心力为1200g，离心时间为6min，离心温度为20～24℃，最佳离心温度为22℃。经过二次离心后，红细胞和白膜层内的白细胞下沉，此时第三袋中的上层悬液即为自体富血小板血浆，且二次离心后下沉的红细胞和白细胞位于第三袋连接管道的一端，使用血液分浆夹将第三袋中下沉的红细胞和白细胞通过管道分离出去，即可实现上层悬液自体富血小板血浆与下沉的红细胞和白细胞的分离，得到位于第三袋中的自体富血小板血浆。

步骤六、保存自体富血小板血浆：根据需要对自体富血小板血浆进行分装，置于﹣80～﹣20℃环境下冰冻保存。

具体的，根据患者情况，使用多联分装血袋将第三袋中的自体富血小板血浆分装为1～20份，并将分装后的自体富血小板血浆置于﹣80～﹣20℃冰箱内冰冻保存。

本实施例还提供一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备止血凝胶中的应用，具体的，包括以下步骤：

S1、融化自体富血小板血浆：从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化。

具体的，根据患者情况，从﹣80～﹣20℃冰箱内取出对应数量的多联分装血袋，并将多联分装血袋置于37℃水浴中，使得多联分装血袋中的自体富血小板血浆融化。

S2、配制钙-凝血酶合剂：在无菌条件下混合凝血酶粉和葡萄糖酸钙，配制成钙-凝血酶合剂。

具体的，葡萄糖酸钙溶液的浓度为0.1g/ml，凝血酶粉的浓度为1000U/ml，且葡萄糖酸钙溶液和凝血酶粉的体积比为10:1，使用无菌生理盐水作为溶剂，将葡萄糖酸钙溶液和凝血酶粉溶解、稀释于无菌生理盐水中，配制成钙-凝血酶合剂。

S3、制备止血凝胶：将钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆按照1:10的体积比混合，经20～30s形成止血凝胶。

具体的，准备体积比为1:10的钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆，将钙-凝血酶合剂逐渐加入自体富血小板血浆中，边加边摇晃，经20～30s形成止血凝胶。

本实施例还提供一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备预防妊娠纹制剂中的应用，具体的，从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出适量自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化，将融化后的自体富血小板血浆直接涂抹于孕妇的肚子上，每天一次，预防孕妇的肚子生长妊娠纹。

本实施例还提供一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备消除妊娠纹制剂中的应用，具体的，从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出适量自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化，将融化后的自体富血小板血浆直接涂抹于妊娠纹上，每月一次，三次一疗程，消除已经生长的妊娠纹。

本实施例还提供一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备促进伤口愈合制剂中的应用，具体的，从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出适量自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化，将融化后的自体富血小板血浆直接涂抹于伤口上，每天一次，见效明显后停止使用，促进伤口的愈合。

在其他实施例中，还可以将自体富血小板血浆制成软膏、乳膏等膏剂，以节省涂抹前水浴融化的步骤，方便孕妇随时涂抹。

表1：不同离心条件对制备的富血小板血浆中血小板浓度的影响

实验数据表明，一次离心的离心条件为离心力2000g、离心时间15min，二次离心的离心条件为离心力1200g、离心时间6min，且一次离心后所取分离物为白膜层、白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞时，所制备的自体富血小板血浆中血小板的浓度最高，能够达到全血的6～10倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果最好。

结合实施例2和对比例1可知，当一次离心和二次离心的离心时间选择最优值，并且一次离心后所取分离物为白膜层、白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞时，减小一次离心和二次离心的离心力，会导致离心不够，在一次离心过程中，难以形成层次清晰的血浆层、白膜层和红细胞层，不能很好地将血浆、白膜层和红细胞进行分离，而在二次离心过程中，难以有效去除红细胞、白细胞等血液成分，因此，离心力过小会导致自体富血小板血浆中血小板的浓度降低，从全血的4～6倍降低至全血的3～5倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果也会相应降低。

结合实施例3和对比例2可知，当一次离心和二次离心的离心时间选择最优值，并且一次离心后所取分离物为白膜层、白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞时，增大一次离心和二次离心的离心力，会导致离心过度，在一次离心过程中，很大一部分血小板会被离心至红细胞层中而难以分离，不仅无法制备出纯度较高的成分血和浓度较高的富血小板血浆，还可能导致血小板被破坏，从而影响将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果；而在二次离心过程中，此时血小板已经经历了一次离心的重离心，二次离心过度相比于一次离心过度更加容易导致血小板被破坏，造成自体富血小板血浆的使用效果下降；因此，离心力过大也会导致自体富血小板血浆中血小板的浓度降低，从全血的3～5倍降低至全血的2～3倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果也会相应降低。

结合实施例4和对比例3可知，当一次离心和二次离心的离心力选择最优值，并且一次离心后所取分离物为白膜层、白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞时，缩短一次离心和二次离心的离心时间，会导致离心不够，在一次离心过程中，难以形成层次清晰的血浆层、白膜层和红细胞层，不能很好地将血浆、白膜层和红细胞进行分离，而在二次离心过程中，难以有效去除红细胞、白细胞等血液成分，因此，离心时间过短会导致自体富血小板血浆中血小板的浓度降低，从全血的3～5倍降低至全血的2～3倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果也会相应降低。

结合实施例5和对比例4可知，当一次离心和二次离心的离心力选择最优值，并且一次离心后所取分离物为白膜层、白膜层上10～15ml血浆、白膜层下25～35ml红细胞时，延长一次离心和二次离心的离心时间，会导致离心过度，在一次离心过程中，很大一部分血小板会被离心至红细胞层中而难以分离，不仅无法制备出纯度较高的成分血和浓度较高的富血小板血浆，还可能导致血小板被破坏，从而影响将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果；而在二次离心过程中，此时血小板已经经历了一次离心的重离心，二次离心过度相比于一次离心过度更加容易导致血小板被破坏，造成自体富血小板血浆的使用效果下降；因此，离心时间过长也会导致自体富血小板血浆中血小板的浓度降低，从全血的3～5倍降低至全血的2～3倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果也会相应降低。

结合实施例1和对比例5可知，当一次离心和二次离心的离心力和离心时间均选择最优值，而一次离心后只取白膜层，会导致一次离心后留存在血浆层下部和红细胞层上部的这部分血小板收集遗漏，从而导致最终制成的自体富血小板血浆中的血小板浓度降低，从全血的6～10倍降低至全血的3～5倍，则将该自体富血小板血浆用于伤口止血、妊娠纹的预防和消除以及促进伤口愈合的效果也会相应降低。

实验例一自体富血小板血浆在制备止血凝胶中的应用

对象：一位大出血剖腹产患者；

方法：术中使用自体富血小板血浆制备止血凝胶，将止血凝胶敷于患者出血伤口处；

结果：止血效果明显，患者伤口于短时间内止血。

实验例二自体富血小板血浆在制备预防和消除妊娠纹制剂中的应用

对象：一位妊娠晚期患者，发现少许妊娠纹；

方法：将自体富血小板血浆37℃水浴融化后涂抹于妊娠纹处，每天一次，持续一周；

结果：直到生产前未发现新增妊娠纹，已有妊娠纹也较之前变淡。

实验例三自体富血小板血浆在制备促进伤口愈合制剂中的应用

对象：一位剖腹产患者；

方法：将自体富血小板血浆37℃水浴融化后涂抹于伤口处，每天一次；

结果：较以往自然愈合的患者，该患者的伤口愈合时间明显缩短。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种自体富血小板血浆的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一、采血：采集200ml孕妇的自体全血，与抗凝剂混合均匀后室温静置保存；

步骤二、一次离心：对静置保存后的自体全血进行离心处理，使得自体全血分层，形成自上而下的血浆层、白膜层和红细胞层，此时血小板主要存在于白膜层内；

步骤三、分离自体全血：先将上层部分血浆单独分离，使得自体全血中剩余10～15ml血浆，再将剩余的10～15ml血浆连同白膜层、以及白膜层下25～35ml红细胞分离；

步骤四、保存自体成分血：将单独分离的血浆置于﹣20℃环境下保存，将分离后剩余的红细胞置于4℃环境下保存；

步骤五、二次离心：对分离的10～15ml血浆、白膜层和白膜层下25～35ml红细胞一起进行二次离心处理，使得红细胞和白细胞下沉，分离出上层悬液即为自体富血小板血浆；

步骤六、保存自体富血小板血浆：根据需要对自体富血小板血浆进行分装，置于﹣80～﹣20℃环境下冰冻保存。

2.根据权利要求1所述的一种自体富血小板血浆的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，一次离心的离心力为1500～2500g，离心时间为10～20min。

3.根据权利要求2所述的一种自体富血小板血浆的制备方法，其特征在于：所述步骤五中，二次离心的离心力为1000～1500g，离心时间为3～10min。

4.根据权利要求3所述的一种自体富血小板血浆的制备方法，其特征在于：所述一次离心和二次离心的离心温度为20～24℃。

5.根据权利要求1所述的一种自体富血小板血浆的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，自体全血静置保存的时间不超过6h。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备止血凝胶中的应用。

7.根据权利要求6所述的一种自体富血小板血浆的应用，其特征在于：包括以下步骤：

S1、融化自体富血小板血浆：从﹣80～﹣20℃冰冻环境中取出自体富血小板血浆，置于37℃水浴中融化；

S2、配制钙-凝血酶合剂：在无菌条件下混合凝血酶粉和葡萄糖酸钙，配制成钙-凝血酶合剂；

S3、制备止血凝胶：将钙-凝血酶合剂和自体富血小板血浆按照1:10的体积比混合，经20～30s形成止血凝胶。

8.根据权利要求1-5任一项所述的一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备预防妊娠纹制剂中的应用。

9.根据权利要求1-5任一项所述的一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备消除妊娠纹制剂中的应用。

10.根据权利要求1-5任一项所述的一种自体富血小板血浆的制备方法制备所得的一种自体富血小板血浆在制备促进伤口愈合制剂中的应用。