CN117778222B - 一种党参专用复合微生物菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种党参专用复合微生物菌剂，该复合微生物菌剂为含有菌株M‑rp‑200‑16(Bacillus amyloliquefaciens)、菌株BHst1‑13(Bacillus megaterium)、菌株DS‑R‑B‑03‑2(Bacillus subtilis)、菌株DS‑R‑B‑03‑1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3‑3(Bacillus pumilus)和菌株DS‑R‑B‑3‑5(Bacillus velezensis)的发酵液。同时，本发明还公开了该党参专用复合微生物菌剂的制备方法。本发明所述党参专用复合微生物菌剂可用于降解党参自毒化感物质，消减党参连作障碍；同时用于促进党参生长，提高党参品质、产量以及抗病抗逆性及改良土壤生态环境方面。
Description
技术领域
本发明涉及农业微生物技术领域，尤其涉及一种党参专用复合微生物菌剂及其制备方法。
背景技术
党参(Codonopsis pilosula (Franch) Nannf)，桔梗科党参属植物，是中国药典收录的传统补益药材。其干燥根有补气益血、增强免疫力、健脾胃、降血压等功效,在世界范围内具有药用价值。在种植生产上党参忌连作，一般应隔4-5年再种植，然而由于耕地资源受限，党参栽培种过程中存在着严重的连作障碍现象，导致党参出现品质恶劣、土传病害加重、生态环境恶化、病原菌累积、产量下降、品质严重下滑等现象。连作障碍已成为影响党参产量和质量的重要因素，严重制约了党参种植规模的扩大和其产业的发展。
目前，针对党参连作障碍问题，仍然处于对党参的形态观察、病虫害防治和栽培措施改进等方面，专利CN105175165A公开了一种纹党参抗重茬专用肥，披露了“该肥由以下原料加工制成：秸秆发酵物50～60份、粪便发酵物30～50份、骨粉15～25份、废弃奶渣3～5份、炮制黑土70～100份、青霉素0.1～0.5份、棉花根3～8份、腐殖酸9～12份、混合菌液2～3份、香菇菌多糖3～7份、木薯渣20～30份、沼渣50～70份、动物内脏发酵物3～8份”混合制成的纹党参抗重茬专用肥，该肥采用纯有机质及相应药物菌剂组配，有效提升肥料有机质含量，且增加特定抗病虫害功能以及延长肥效，减少重茬病对纹党参的危害，明显提高纹党参重茬种植产量和药材品质。然而，该肥料原料种类多，制备过程较为复杂，同时还添加了多种抗生素，易对环境造成二次污染等问题。
复合微生物菌剂是一种环境友好型肥料，其选用的微生物菌种均是来自于植物组织（根、茎、叶、鳞茎等）和根际土壤的有益菌，能够降解植物自毒化感物质，促进植物生长，消减植物连作障碍，提高植物品质和产量，预防和治疗病虫害，改善土壤营养结构和理化性质，保持生态平衡，减少环境污染等。而现有技术中还没有专门为消减党参连作障碍而设计的复合微生物菌剂。因此，亟需开发一种防治党参连作障碍并提升其产量和品质的复合微生物菌剂，以期为消减党参连作障和促进中药材产业可持续发展提供科学依据和技术支撑。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种促进党参生长、消减党参连作障碍的党参专用复合微生物菌剂。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该党参专用复合微生物菌剂的制备方法。
为解决上述问题，本发明所述的一种党参专用复合微生物菌剂，其特征在于：该复合微生物菌剂为含有菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、 菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus) 和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)的发酵液；所述菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)为保藏编号CGMCC No. 27073的解淀粉芽孢杆菌；所述菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)为保藏编号CGMCC No.27076的巨大芽孢杆菌；所述菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)为保藏编号 CGMCC No. 27081的枯草芽孢杆菌；所述菌株DS-R-B-03-1 (Bacillus thuringiensis)为保藏编号 CGMCC No. 27085的苏云金芽孢杆菌；所述菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)为保藏编号 CGMCC No.27079的短小芽孢杆菌；所述菌株DS-R-B-3-5 (Bacillus velezensis)为保藏编号CGMCC No. 27087的贝莱斯芽孢杆菌。
菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、菌株BHst1-13 (Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、 菌株DS-R-B-03-1 (Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus) 和菌株DS-R-B-3-5 (Bacillus velezensis)均保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：中国.北京. 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2023年04月12日。
所述复合微生物菌剂的组成为：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 7.5×108～8.9×1010cfu/mL。
所述复合微生物菌剂的组成为：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 5.8×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 8.2×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 5.7×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 4.6×109cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 1.3×1010cfu/mL。
如上所述的一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、 菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)六种微生物菌株分别在28℃～32℃条件下用接种环蘸取，在TSA固体培养基划线培养2~3天，得到六种活化菌株；
⑵一级种子培养：
将六种所述活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于28℃～32℃、160~200rpm摇床培养3~5天，得到六种一级种子；
⑶混合发酵培养：
将六种所述一级种子混合后按0.5~2%的接种量接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养，即得党参专用复合微生物菌剂。
所述步骤⑴中TSA固体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠、18g琼脂，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
所述步骤⑵和所述步骤⑶中TSA液体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
所述步骤⑶中混合发酵培养的条件是指温度为28℃～32℃；转速为170~200rpm；培养时间为3~5天。
如上所述的一种党参专用复合微生物菌剂的应用，其特征在于：该党参专用复合微生物菌剂采用灌根方法施用在种植党参的根际土壤中。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明针对党参自毒化感物质的种类和降解特性，配制并施用不同营养源功能的微生物菌株，达到降解和消除自毒化感物质的目的，从而通过党参专用复合微生物菌剂消减党参的连作障碍，同时，协调营养，促进党参生长，提高产量和品质以及抗病抗逆性，达到改善土壤特性的目的。
2、本发明筛选有效降解自毒化感物质消减连作障碍的功能微生物活体菌株，施用后，在作物根系周围形成保护屏障，降解党参自毒化感物质，消减连作障碍，抑制有害菌的生长，繁殖，保护作物根系；同时抑制各种病虫害，从而提高党参抗病虫害等抗逆性；活菌在根际定殖后，能够改善种植土壤生态环境，改良土壤结构和理化性质，激活土壤酶活力，消减连作障碍。
3、本发明党参专用复合微生物菌剂复配了植物促生功能的微生物，施入后高效且长期作用于土壤，能够为党参生长提供营养，发酵过程中微生物产生多种有效代谢产物具有固氮、解磷、解钾的作用，增加药材有效成分含量，从而提高党参的产量和品质。
4、本发明党参专用复合微生物菌剂的菌株是来源于植物组织（根、茎、叶、鳞茎等）和根际土壤的有益菌，不会引入致病菌，不污染环境，无毒副作用，其中所用的枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2、苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1和贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5是从党参根内分离得到的，经过党参的选择作用，均能稳定地在党参根部定殖，对于党参连作障碍消减与促进党参生长指标具有协同增效的作用。现有技术中多种菌复合容易出现菌株之间相互抑制，影响生长的现象，本发明经过长期摸索，选择的菌株之间不会相互抑制，在定殖生长、功能效果上还能互补。
5、本发明各个组分配比，可根据具体的土壤条件和不同生育期的需求顾虑，进行适当的调整，以满足作物的生长。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明。
图1为2021年党参专用复合微生物菌剂大田实验效果图。
图2为党参幼苗期株高，主要展示2021年施用党参专用复合微生物菌剂对党参株高的影响。
图3为党参增产率，主要展示2021年施用党参专用复合微生物菌剂对党参产量的影响。
图4为党参芦头直径、长度和发病率，主要展示2021年施用党参专用复合微生物菌剂对芦头直径、长度和发病率的影响。
图5为党参活性成分党参炔苷和白术内脂化学结构式。
图6为党参活性成分党参炔苷和白术内脂含量图，主要展示2021年施用党参专用复合微生物菌剂对党参活性成分含量的影响。
具体实施方式
一种党参专用复合微生物菌剂，该复合微生物菌剂为含有菌株M-rp-200-16(Bacillus amyloliquefaciens)、菌株BHst1-13 (Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、 菌株DS-R-B-03-1 (Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3(Bacillus pumilus) 和菌株DS-R-B-3-5 (Bacillus velezensis)的发酵液。菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)为保藏编号CGMCC No. 27073的解淀粉芽孢杆菌；菌株BHst1-13 (Bacillus megaterium)为保藏编号CGMCC No.27076的巨大芽孢杆菌；菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)为保藏编号 CGMCC No. 27081的枯草芽孢杆菌；菌株DS-R-B-03-1 (Bacillus thuringiensis)为保藏编号 CGMCC No. 27085的苏云金芽孢杆菌；菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)为保藏编号 CGMCC No.27079的短小芽孢杆菌；菌株DS-R-B-3-5 (Bacillus velezensis)为保藏编号CGMCC No. 27087的贝莱斯芽孢杆菌。
菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、菌株BHst1-13 (Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、 菌株DS-R-B-03-1 (Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus) 和菌株DS-R-B-3-5 (Bacillus velezensis)均保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：中国.北京. 北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期：2023年04月12日。
复合微生物菌剂的组成为：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 7.5×108～8.9×1010cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 7.5×108～8.9×1010cfu/mL。
优选：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 5.8×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 8.2×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 5.7×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 4.6×109cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 1.3×1010cfu/mL。
一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、 菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)六种微生物菌株分别在28℃～32℃条件下用接种环蘸取少许菌量，在TSA固体培养基划线培养2~3天，得到六种活化菌株。
其中：TSA固体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠、18g琼脂，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
⑵一级种子培养：
将六种活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于28℃～32℃、160~200rpm摇床培养3~5天，得到六种一级种子。
其中：TSA液体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
⑶混合发酵培养：
将六种一级种子混合后按0.5~2%的接种量，优选1.5%，接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养。混合发酵培养的条件是指温度为28℃～32℃；转速为170~200rpm，优选200rpm；培养时间为3~5天，即得党参专用复合微生物菌剂。
一种党参专用复合微生物菌剂的应用：该党参专用复合微生物菌剂采用灌根方法施用在种植党参的根际土壤中，用于降解党参自毒化感物质，消减党参连作障碍；同时用于促进党参生长，提高党参品质、产量以及抗病抗逆性及改良土壤生态环境方面。
下述实施例中所用的实验方法，如无特殊说明均为常规方法。
实施例1.党参专用复合微生物菌剂的组成
通过开展具有促生功能的微生物菌株开展拮抗和溶血实验，选取菌株间相容性高及环境安全的微生物菌株作为复配复合功能微生物菌剂的备选菌株，按照如下比列，复配得到了党参专用复合微生物菌剂。
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 5.8×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 8.2×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 5.7×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 4.6×109cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 1.3×1010cfu/mL。
该党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、 菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)六种微生物菌株分别在30℃条件下用接种环蘸取少许菌量，在TSA固体培养基划线培养48h，得到六种活化菌株。
⑵一级种子培养：
将六种活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于30℃、200rpm摇床培养72h，得到六种一级种子。
⑶混合发酵培养：
将六种一级种子混合后按1.5%的接种量接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养，混合发酵培养的条件是指温度为30℃，转速为180rpm，培养时间为5天，即得党参专用复合微生物菌剂。
实施例2. 党参专用复合微生物菌剂的组成：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 4.3×108cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 3.7×108cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 2.5×108cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 1.8×108cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 5.7×107cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 4.6×108cfu/mL。
该党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、 菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)六种微生物菌株分别在26℃条件下用接种环蘸取少许菌量，在TSA固体培养基划线培养48h，得到六种活化菌株。
⑵一级种子培养：
将六种活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于28℃、200rpm摇床培养72h，得到六种一级种子。
⑶混合发酵培养：
将六种一级种子混合后按1%的接种量接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养，混合发酵培养的条件是指温度为28℃，转速为180rpm，培养时间为4天，即得党参专用复合微生物菌剂。
实施例3. 党参专用复合微生物菌剂的组成：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 2.1×1010cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 2.5×1010cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 1.6×1010cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 2.7×1010cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 2.4×1010cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 4.8×1010cfu/mL。
该党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16 (Bacillus amyloliquefaciens)、 菌株BHst1-13(Bacillus megaterium)、菌株DS-R-B-03-2 (Bacillus subtilis)、菌株DS-R-B-03-1(Bacillus thuringiensis)、菌株BHl3-3 (Bacillus pumilus)和菌株DS-R-B-3-5(Bacillus velezensis)六种微生物菌株分别在32℃条件下用接种环蘸取少许菌量，在TSA固体培养基划线培养48h，得到六种活化菌株。
⑵一级种子培养：
将六种活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于32℃、200rpm摇床培养72h，得到六种一级种子。
⑶混合发酵培养：
将六种一级种子混合后按4%的接种量接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养，混合发酵培养的条件是指温度为32℃，转速为150rpm，培养时间为5天，即得党参专用复合微生物菌剂。
实施例4. 党参专用复合微生物菌剂大田试验效果
试验设计：
施用时间为2021年4月15日，党参种植期；
施用方法为根部浇施；
试验地点：甘肃省定西市岷县麻子川和大草滩村种植基地，露地直播；
供试品种：岷县纹党参；
本试验设4个处理：（1）常规对照CK；（2）处理组T1：液体菌剂10kg/亩；（3）处理组T2：液体菌剂20kg/亩；（4）处理组T4：液体菌剂30kg/亩。液体菌剂按实施例1所述方法制得的党参专用复合微生物菌剂，加水100倍稀释。
试验设计采用完全随机区组设计，共4个区组。种植密度为16000~20000株/亩，株距10cm，行距20-30cm，各处理间设3行保护行。各种栽培管理措施按照当地高产优质党参栽培技术精心管理。各处理党参达到收获期进行样品采集（图1）。
试验结果：
（1）施用本发明所述党参专用复合微生物菌剂与对照组相比，显著提高了党参苗期的株高（P<0.05），与对照组相比，处理组最低增高率为30.30%，平均增高率为33.17%（图2）。
（2）施用本发明所述党参专用复合微生物菌剂与对照组相比，显著提高了党参产量（P<0.05），处理组T1增产率为12.63%，处理组T2增产率为17.52%，处理组T3增产率为29.36%，呈现浓度依赖性（图3）。
（3）施用本发明所述党参专用复合微生物菌剂与对照组相比，对党参芦头直径、根长等农艺指标也显著提高（P<0.05），均呈现浓度依赖性的增长趋势，处理组T3效果最高，芦头直径提高率为39.84% （图4a），党参长度提高率为21.22%（图4b）；处理组党参发病率显著低于对照组（P<0.01），并且发病比常规对照轻微，明显抑制党参病原菌，降低党参的发病率，提高党参产量，其中处理组T3发病率最低，为6.04%（图4c）。
（4）中药品质主要与外观形态和内在质量有密切关系，活性组分的定量分析是质量控制最直接、最重要的手段。采用高效液相色谱法 ( HPLC)对施用党参专用复合微生物菌剂和对照组中党参的药用活性成分党参炔苷(图5a)和白术内脂(图5b)进行定量检测。结果表明，施用党参专用复合微生物菌剂可显著提高党参药效成分，处理组对党参炔苷的提高率介于42.75%~90.97%，处理组T3提高效果极显著(P<0.01)；处理组对白术内脂的提高率介于53.39%~485.99%，处理组T3提高效果极显著(P<0.01)（图6）。因此，施用党参专用复合微生物菌剂可显著提升党参品质和市场竞争力。
田间大田试验表明，施用本发明所述党参专用复合微生物菌剂能明显党参降低连作障碍，提高党参的产量和品质，同时还能极显著降低党参的发病率，提高了党参的品相，提升了党参的市场竞争力；同时，充分发挥了功能微生物促进党参养分吸收、增强植物抗逆性、调节植物抗病免疫力、活化土壤养分以及改良土壤的潜力，有助于提高耕地质量、减少化学肥料过量投入等问题，社会效益和生态环境效益显著。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的发明范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的发明保护范围内。
Claims (7)
1.一种党参专用复合微生物菌剂，其特征在于：该复合微生物菌剂由有菌株M-rp-200-16、菌株BHst1-13、菌株DS-R-B-03-2、菌株DS-R-B-03-1、菌株BHl3-3和菌株DS-R-B-3-5的发酵液组成；所述菌株M-rp-200-16为保藏编号CGMCC No. 27073的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)；所述菌株BHst1-13为保藏编号CGMCC No.27076的巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)；所述菌株DS-R-B-03-2为保藏编号 CGMCC No. 27081的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；所述菌株DS-R-B-03-1为保藏编号 CGMCC No. 27085的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)；所述菌株BHl3-3为保藏编号 CGMCCNo.27079的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)；所述菌株DS-R-B-3-5为保藏编号CGMCCNo. 27087的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)；所述复合微生物菌剂的组成为：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 7.5×108～8.9×1010 cfu/mL。
2.如权利要求1所述的一种党参专用复合微生物菌剂，其特征在于：所述复合微生物菌剂的组成为：
解淀粉芽孢杆菌菌株M-rp-200-16 5.8×1010 cfu/mL；
巨大芽孢杆菌菌株BHst1-13 7.5×1010 cfu/mL；
枯草芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-2 8.2×1010 cfu/mL；
苏云金芽孢杆菌菌株DS-R-B-03-1 5.7×1010 cfu/mL；
短小芽孢杆菌菌株BHl3-3 4.6×109cfu/mL；
贝莱斯芽孢杆菌菌株DS-R-B-3-5 1.3×1010cfu/mL。
3.如权利要求1所述的一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：
⑴斜面培养：
将菌株M-rp-200-16、菌株BHst1-13、菌株DS-R-B-03-2、菌株DS-R-B-03-1、菌株BHl3-3和菌株DS-R-B-3-5六种微生物菌株分别在28℃～32℃条件下用接种环蘸取，在TSA固体培养基划线培养2~3天，得到六种活化菌株；
⑵一级种子培养：
将六种所述活化菌株在无菌条件下按1%的接种量分别接种于TSA液体培养基，于28℃～32℃、160~200rpm摇床培养3~5天，得到六种一级种子；
⑶混合发酵培养：
将六种所述一级种子混合后按0.5~2%的接种量接种于液体培养基中，进行复合菌剂摇床培养，即得党参专用复合微生物菌剂。
4.如权利要求3所述的一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤⑴中TSA固体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠、18g琼脂，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
5.如权利要求3所述的一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤⑵和所述步骤⑶中TSA液体培养基是指在1000 mL蒸馏水中加入15 g胰蛋白胨、5 g大豆蛋白胨、5 g氯化钠，混合均匀后调pH= 7.0~7.2，经121℃灭菌20 min即得。
6.如权利要求3所述的一种党参专用复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤⑶中混合发酵培养的条件是指温度为28℃～32℃；转速为170~200rpm；培养时间为3~5天。
7.如权利要求1所述的一种党参专用复合微生物菌剂的应用，其特征在于：该党参专用复合微生物菌剂采用灌根方法施用在种植党参的根际土壤中。
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| GR01 | Patent grant | ||
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