CN117770367A - 一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于水产养殖行业及营养学技术领域，具体公开了一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品及其制备方法。所述卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法包括以下步骤：S1.配置β‑胡萝卜素强化液：将β‑胡萝卜素用乳化剂溶解，乳化均匀，然后加至用盐卤配备的养殖水体中，得到强化液；S2.营养强化：将卤虫无节幼体或者成虫接种到强化液中，在20‑30℃、照度1100‑1300Lux、有氧条件下培养6‑24h，然后‑80℃储存。本发明成功将卤虫无节幼体、成虫与类胡萝卜素联合进行营养强化，制得对类胡萝卜素具有高富集量和高利用率的生物饵料，能够有效提升水产养殖动物对于类胡萝卜素的吸收利用，减少营养浪费。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖行业及营养学技术领域，具体涉及一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品及其制备方法。
背景技术
类胡萝卜素是近年来营养学领域的研究热门，其在生活各个领域如食品、美妆、饲料、保健、医药等行业表现了其突出的抗氧化、免疫增强、促进生长发育繁殖、增强动植物体色等能力。作为一种明确有以上多种作用的营养因子，类胡萝卜素开始应用于水产养殖饲料中。然而，由于水产养殖动物对于不同饵料的利用率不尽相同，这或多或少会导致一些营养元素的浪费。
生物饵料在生产、研究中已被大量使用。利用枝角类、桡足类、轮虫、卤虫进行微藻、有益菌等的富集的手段已逐渐出现在水产养殖行业研究中。近年来，有学者将生物饵料如褶皱臂尾轮虫与类胡萝卜素联系起来进行营养强化，能够提高类胡萝卜利用率。然而，相对于轮虫来说，卤虫(俗称软黄金)往往具有更高的营养价值，历往研究得出的结果显示，轮虫蛋白质质量分数为28～63％，卤虫为57～60％；卤虫属所有品类均含有α-亚麻酸，且不同产地的卤虫还可迎合淡水鱼类及海水鱼类不同的脂肪酸需求。
卤虫，俗称软黄金，为低等甲壳动物在鱼虾蟹等水产动物的养殖中起到重要作用，是水产动物幼体的最佳开口饵料，本身就极具营养价值，且已被发现其体内有类胡萝卜素代谢转化通路，让其与类胡萝卜素联合进行营养强化成为可能，但目前对于卤虫类胡萝卜素营养强化的方法以及效果可行性还未见公示。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的之一是提供一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，成功将卤虫无节幼体、成虫与类胡萝卜素联合进行营养强化，能够制得对类胡萝卜素具有高富集量和高利用率的生物饵料。
为达到上述目的，本发明采用的具体技术方案如下：
一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，包括以下步骤：
S1.配置β-胡萝卜素强化液：称取β-胡萝卜素，将其溶解于乳化剂中，乳化均匀，然后加至用盐卤配备的养殖水体中，得到强化液；所述强化液中，β-胡萝卜素的浓度为5-25mg/L；
S2.营养强化：将卤虫接种到强化液中，所述卤虫为无节幼体或者成虫，所述无节幼体的接种密度为15-25mid/mL，所述成虫的接种密度为0.5-1.5mid/10mL；将接种后的强化液在20-30℃、照度1100-1300Lux、有氧条件下培养6-24h；培养结束，-80℃储存。
优选的，步骤S1中，所述乳化剂为吐温-80，在养殖水体中的浓度为0.5-1.5‰。该条件下对于β-胡萝卜素溶解效果好，且对于后续卤虫培养影响小。
优选的，步骤S1中，所述养殖水体的盐度为20-50‰，pH为7.5-8。盐度低于20‰，卤虫成活率低。pH控制在7.5-8，对于β-胡萝卜素的乳化效果好，对产品后续制备过程影响小。
优选的，步骤S2中，将接种后的强化液在25℃，照度1200Lux条件下进行培养，在此温度、照度条件下卤虫的成活率高。
优选的，步骤S2中，卤虫无节幼体的培养时间为12-18h，卤虫成虫的培养时间为6h。卤虫无节幼体和成虫分别在强化时间12-18h和6h对类胡萝卜素富集最多。
优选的，步骤S1中，所述强化液的浓度为5mg/L；步骤S2中，卤虫无节幼体的培养时间为18h，卤虫成虫的培养时间为6h。在这样的条件下，卤虫无节幼体和卤虫成虫对类胡萝卜素的利用率最高。
本发明的目的之二是提供采用上述制备方法制得的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提出了一种全新的、可有效应运于水产养殖中的营养强化产品，能够有效提升水产养殖动物对于类胡萝卜素的吸收利用，减少营养浪费。
2、本发明制备方法简单，对于各种养殖水体适用范围广，并得出了卤虫富集类胡萝卜素最多的时间段、强化最佳时间点(用5mg/L强化液强化的卤虫无节幼体及成虫分别在强化18h时与6h时有最高的强化液利用率，分别为0.95％和4.22％)，为产品的有效生产利用提供科学指导。
3、本发明还进行了营养强化产品的吸收代谢情况研究，得出卤虫体内类胡萝卜素组成变化情况，可根据不同营养成分需求调整强化时间，拓展出更多应用可能性。
附图说明
图1：实施例1中不同浓度的β-胡萝卜素在卤虫无节幼体体内富集24小时的情况。
图2：实施例1中不同浓度的β-胡萝卜素对卤虫成虫体内富集24小时的情况。
图3：实施例1中卤虫无节幼体和成虫24小时内对富集的不同浓度的β-胡萝卜素的最高利用率。
图4：实施例1在富集过程中，不同浓度的β-胡萝卜素对卤虫无节幼体类胡萝卜素组成的影响。
图5：实施例1在富集过程中，不同浓度的β-胡萝卜素对卤虫成虫类胡萝卜素组成的影响。
图6：实施例2中不同浓度β-胡萝卜素富集12小时后饥饿过程对卤虫无节幼体类胡萝卜素组成的影响
图7：实施例2中不同浓度β-胡萝卜素富集12小时后饥饿过程对卤虫成虫类胡萝卜素组成的影响。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明进行进一步的说明。
实施例1
按照以下步骤制备卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品：
S1.配置β-胡萝卜素强化液：本发明采用购于Adamas公司的β-胡萝卜素(纯度为98％)作为强化卤虫的营养材料，用吐温-80作为乳化剂将β-胡萝卜素溶解，具体的，称取0mg、100mg、300mg、500mg的β-胡萝卜素使其完全溶解在20ml吐温-80中，乳化均匀，然后加至20L、盐度20‰、pH7.5-8的用盐卤配备的养殖水体中，配制成0mg/L、5mg/L、15mg/L、25mg/L的强化液；
S2.营养强化：对于卤虫无节幼体，将其接种到装有20L强化溶液的塑料容器中，密度为20mid/mL；对于卤虫成虫，接种到1L的塑料容器中，容器中装有500mL的强化溶液，密度为1mid/10mL；将以上两批接种样品均在25℃，照度1200Lux、有氧条件下培养24小时。分别在6、12、18和24小时取样，储存在-80℃超低温冰箱中。
对储存的样品进行以下测试：
一、类胡萝卜素的含量测定
提取：将卤虫样品冷冻干燥，加入3ml包含0.01％BHT的提取液，超声破碎30min在60℃水浴中提取20min，以8000r/min离心5min，收集并提取。将上清液放入另一10ml离心管中，重复3次，直到提取溶液无色，然后合并上清液。使用Termovap样品浓缩器将提取物吹干，用3ml甲醇：乙腈(3:7)重新配制，用过滤器过滤到瓶中，并在机器上测量。实验过程避光。
测定：配置类胡萝卜素标准品，设置好流动相(A：水相，B：叔丁基甲基醚，C：甲醇：乙腈(3:7))、洗脱条件(初始流动相比为A:10％，B:0％，C:90％，16min变为A:0％，B:20％，C:80％，进样体积为10μL，流速保持在0.3mL/min)、柱温35℃、检测波长475nm，使用Empower3软件(Waters，USA)获得标准曲线。待分析样用上述相同步骤测定分析。
结果：如图1-3和表1所示，可以看出：在强化过程中，空白对照组未检测到β-胡萝卜素。在同一强化时间内，无论是无节幼体还是成虫，体内富集的β-胡萝卜素含量都随着强化浓度的增加而增加。在不同浓度的β-胡萝卜素强化组中，无节幼体体内富集的β-胡萝卜素浓度均在12-18h最高，18h后开始下降；而卤虫成虫均在6h富集的β-胡萝卜素含量最高，6h后开始显著下降。在不同浓度的β-胡萝卜素强化组中，无论是无节幼体还是成虫，5mg/L组的β-胡萝卜素的利用率最高，分别达到0.95％和4.22％，明显高于5mg/L、25mg/L两组。
表1.强化过程中卤虫无节幼体及成虫的富集量、富集顶点及对强化剂的最高利用率情况
二、富集过程类胡萝卜素组成变化
如图4-5所示，为检测到的类胡萝卜素含量变化。卤虫体内的类胡萝卜素组成情况变化如下：在β-胡萝卜素富集过程中，卤虫无节幼体和成虫体内的海胆酮含量均随强化时间的增加先升高后降低，角黄素含量则先降低后升高。
实施例2
取实施例1中强化12h后的卤虫无节幼体及成虫作饥饿实验，再次测定观察卤虫体内类胡萝卜素的含量及组成，以了解类胡萝卜素在卤虫体内代谢情况。饥饿实验过程如下：将强化12h的卤虫转移到等体积的无色素水中，并加入适量的无色素酵母。在25℃和1200Lux的光照下继续培养24小时。在饥饿的6、12、18和24小时内对样品进行一次取样，并将其储存在-80℃超低温冰箱中。
在饥饿过程中，卤虫无节幼体和成虫的β-胡萝卜素含量显著下降(P<0.05)，24小时后达到最低。饥饿24h后类胡萝卜素的含量测定结果如下表2所示，强化液浓度越高，沉积量越高。
表2.饥饿24h后卤虫无节幼体及成虫体内β-胡萝卜素沉积量情况
富集过程类胡萝卜素组成变化测试结果如图6-7所示，可以看出，饥饿过程中，卤虫无节幼体和成虫体内的海胆酮含量显著下降，而角黄素含量则呈现先升高后降低的趋势。
本具体实施方式仅仅是对本发明的解释，并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读了本发明的说明书之后所做的任何改变，只要在本发明权利要求书的范围内，都将受到专利法的保护。
Claims (7)
1.一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.配置β-胡萝卜素强化液：称取β-胡萝卜素，将其溶解于乳化剂中，乳化均匀，然后加至用盐卤配备的养殖水体中，得到强化液；所述强化液中，β-胡萝卜素的浓度为5-25mg/L；
S2.营养强化：将卤虫接种到强化液中，所述卤虫为无节幼体或者成虫，所述无节幼体的接种密度为15-25mid/mL，所述成虫的接种密度为0.5-1.5mid/10mL；将接种后的强化液在20-30℃、照度1100-1300Lux、有氧条件下培养6-24h；培养结束，-80℃储存。
2.根据权利要求1所述的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述乳化剂为吐温-80，在养殖水体中的浓度为0.5-1.5‰。
3.根据权利要求1所述的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述养殖水体的盐度为20-50‰，pH为7.5-8。
4.根据权利要求1所述的，其特征在于：步骤S2中，将接种后的强化液在25℃，照度1200Lux条件下进行培养。
5.根据权利要求1所述的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，其特征在于：步骤S2中，卤虫无节幼体的培养时间为12-18h，卤虫成虫的培养时间为6h。
6.根据权利要求5所述的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法，其特征在于：步骤S1中，所述强化液的浓度为5mg/L；步骤S2中，卤虫无节幼体的培养时间为18h，卤虫成虫的培养时间为6h。
7.权利要求1-6任一所述的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品的制备方法制得的卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品。
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| CN202311558580.1A CN117770367A (zh) | 2023-11-21 | 2023-11-21 | 一种卤虫介导的类胡萝卜素营养强化产品及其制备方法 |
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2023
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