CN117737071A - 一种阿维菌素B1a适配体及其筛选方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于抗生素检测技术领域，具体涉及一种阿维菌素B1a适配体及其筛选方法和应用。该阿维菌素B1a适配体的核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示序列。该阿维菌素B1a适配体的解离常数为63.13±8.91nM，对阿维菌素B1a具有较强的亲和力，可以特异性识别阿维菌素B1a。
Description
技术领域
本发明属于抗生素检测技术领域，具体涉及一种阿维菌素B1a适配体及其筛选方法和应用。
背景技术
阿维菌素(Avermectin)属于大环内酯类抗生素，因其高效、广谱、独特的作用机制等特点，不仅广泛应用于田间作物，还应用在猪牛羊等禽畜和草鱼、对虾等水产品中。但是，阿维菌素类药物对人体有毒害作用，中毒轻者出现头疼、呕吐等症状，严重时可危及生命、致人死亡。我国农业农村部明确规定了各类食品中阿维菌素的最高残留限量值。
阿维菌素分为A、B两类，每类包含四个组分，其中B1a抗虫活性最强且在药物中占比最高(≥90％)。目前，对阿维菌素B1a常用的检测方法有色谱法及酶联免疫法；其中色谱法灵敏度高、重现性好，但是仪器昂贵、操作繁琐；免疫法的缺点则表现为抗体存在批次差异，易出现交叉反应。因此，需要开发成本低、特异性高、灵敏度高的检测方法。
基于适配体的检测是一种新的检测技术，因操作简单、高灵敏度化、小型化、容易自动化等优点，已广泛应用于药物筛选及靶向、食品安全检测、疾病诊断及环境监测等领域。适配体是从随机寡核苷酸文库中通过一种称为配体指数富集系统进化(SELEX)的体外进化过程筛选出的功能性单链DNA或RNA片段，被视为“化学抗体”，通过标准方法化学合成，能够识别具有高亲和力和特异性的目标。与需要生物系统合成的抗体不同，核酸适配体具有一定的热折叠能力，可以根据目标分子的检测标准进行化学修饰。
因此，开发一种可以特异性识别阿维菌素B1a的适配体是有必要的。
发明内容
针对上述问题，本发明目的通过联用氧化石墨烯指数富集配体系统进化技术(GO-SELEX)和毛细管电泳的指数富集配体系统进化技术(CE-SELEX)体外筛选获得了适配体Seq1，Seq1能特异性识别阿维菌素B1a，将Seq 1截短后，得到的Seq 1-1具有较高的亲和力，可以更好的识别阿维菌素B1a。
为了达到上述目的，本发明可以采用以下技术方案：
本发明一方面提供一种阿维菌素B1a适配体，其核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示序列。
本发明另一方面提供一种上述阿维菌素B1a适配体的筛选方法，包括：GO-SELEX与CE-SELEX联用筛选阿维菌素B1a适配体。
本发明再一方面提供一种阿维菌素B1a的检测试剂，包括上述的阿维菌素B1a适配体。
本发明再一方面提供一种阿维菌素B1a的检测试剂盒，其包括上述的检测试剂。
本发明再一方面提供一种阿维菌素B1a的检测传感器，其包括上述的阿维菌素B1a适配体。
本发明再一方面提供一种上述的阿维菌素B1a适配体或上述的检测试剂或上述的检测试剂盒或上述的检测传感器在检测阿维菌素B1a中的应用。
本发明有益效果至少包括：本发明提供的阿维菌素B1a适配体的解离常数为63.13±8.91nM，对阿维菌素B1a具有较强的亲和力，可以特异性识别阿维菌素B1a。
附图说明
图1为氧化石墨烯GO与ssDNA不同孵育比例情况；
图2为氧化石墨烯GO与ssDNA不同孵育时间情况；
图3为各筛选轮次ssDNA库与阿维菌素B1a的亲和力比较；
图4为核酸适配体的同源性分析；
图5为毛细管电泳法评估适配体Seq1的亲和力情况；
图6为毛细管电泳法评估适配体Seq2的亲和力情况；
图7为毛细管电泳法评估适配体Seq5的亲和力情况；
图8为毛细管电泳法评估适配体Seq1-1的亲和力情况；
图9为适配体Seq1-1特异性评估情况，图中***代表p＜0.001；
图10为传感溶液的视觉颜色和吸光度变化(ΔA)与阿维菌素B1a添加量之间的关系，其中插图为低浓度阿维菌素B1a条件下传感溶液的吸光度变化情况。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
本文中使用的术语仅用于描述特定实施例，并且无意于限制本公开。除非在上下文中具有明显不同的含义，否则单数形式的表达包括复数形式的表达。如本文所使用的，应当理解，诸如“包括”、“具有”、“包含”之类的术语旨在指示特征、数字、操作、组件、零件、元件、材料或组合的存在。在说明书中公开了本发明的术语，并且不旨在排除可能存在或可以添加一个或多个其他特征、数字、操作、组件、部件、元件、材料或其组合的可能性。如在此使用的，根据情况，“/”可以被解释为“和”或“或”。
本发明实施例提供一种阿维菌素B1a适配体，其核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示序列。
需要说明的是，如SEQ ID NO.1所示序列是阿维菌素B1a特异性结合序列，由筛选出的原适配体Seq 1截短之后得到，适配体Seq 1对阿维菌素B1a也具有较强的亲和力，解离常数为69.84±10.22nM，对阿维菌素B1a也具有较强的识别能力，所以本发明中只要包括了如SEQ ID NO.1所示序列的序列均对阿维菌素B1a有较强的识别能力。还需要说明的是，上述未截短的适配体Seq 1的序列为
“P1-GGTAGTGGGAATGTCCCAAAGCTGTACATCACGGTGCCTT-P2”，其中，P1可以为“5'GGACAGGACCACACCCAGCG3'，P2可以为“5'GGCTCCTGTGTGTCGCTTTGT3'”。
本发明另一实施例提供一种上述阿维菌素B1a适配体的筛选方法，包括：GO-SELEX与CE-SELEX联用筛选阿维菌素B1a适配体。
在一些具体实施例中，上述筛选方法包括：(1)设计文库和引物，(2)使用氧化石墨烯初步筛选出具有特异性的文库，再通过反筛和正筛筛选出特异性较强的文库，再通过CE-SELEX筛选出特异性更强的文库，并筛选出同源性较低且富集程度≥2.74％的文库序列；(3)筛选出解离常数最小的序列，并进行截短得到权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体。
在一些具体实施例中，上述筛选方法的步骤(1)中，文库序列为“5'GGACAGGACCACACCCAGCG-N40-GGCTCCTGTGTGTCGCTTTGT3'”，N40指40个碱基的随机A，T，C，G核苷酸，表示25％ A，25％ T，25％ C，25％ G；引物包括前向引物和反向引物，前向引物为“5'GGACAGGACCACACCCAGCG3'，反向引物为“5'TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT/iSp9/ACAAAGCGACACACAGGAGCC3'”。
需要说明的是，iSp9是一种中间修饰，指用Spacer 9进行中间修饰，Spacer 9是由三乙二醇组成的链接链，可以在寡核苷酸之间建立一段距离，以避免空间位阻、减少基团之间不利的相互作用、增加柔性。将21个T和Spacer 9设计在反向引物中，便于通过变性聚丙烯酰胶凝电泳(PAGE)将聚合酶链式反应(PCR)的产物进行分离。
需要说明的是，GO-SELEX特别适用于小分子靶标适配体的筛选，氧化石墨烯可以通过π-π堆积作用吸附未与靶标结合的游离的ssDNA，且氧化石墨烯与靶标之间不存在共价结合，从而更好地保留了靶分子的原始结构，但筛选所需周期较长。CE-SELEX是一种高效的适配体筛选方法，与传统的SELEX相比，具有周期短、高灵敏度和低成本的优点，还可以直接用来测定亲和常数，有助于监测每一轮选择中ssDNA的富集程度。但CE-SELEX进样量少，库容量低，初始文库的多样性受到限制。因此，联用GO-SELEX与CE-SELEX，可克服一些筛选过程中的难点，提高适配体筛选的成功率。
本发明再一实施例提供一种阿维菌素B1a的检测试剂，包括上述的阿维菌素B1a适配体。需要说明的是，可以将上述的阿维菌素B1a适配体添加辅助检测试剂对阿维菌素B1a进行检测，辅助检测试剂包括缓冲溶液，显色液或稀释液等，具体可以根据实际情况进行选择。
本发明再一实施例提供一种阿维菌素B1a的检测试剂盒，其包括上述的检测试剂。需要说明的是，可以将上述的检测试剂制备成方便携带的检测试剂盒，检测试剂盒的形式本领域所已知的，比如包括盛装试剂的试剂瓶，说明使用方法的说明书等。
本发明再一实施例提供一种阿维菌素B1a的检测传感器，其包括上述的阿维菌素B1a适配体。
在一些具体实施例中，上述阿维菌素B1a的检测传感器还包括纳米钌。
本发明再一实施例提供一种上述的阿维菌素B1a适配体或上述的检测试剂或上述的检测试剂盒或上述的检测传感器在检测阿维菌素B1a中的应用。
需要说明的是，纳米酶具有优异的热稳定性、易制备、低成本、多种酶的催化活性和活性可调等优点而备受关注。功能性寡聚核苷酸含有许多带负电的磷酸骨架和带正电的碱基，它们可以与一些特定形状的纳米酶相互作用，从而改变其催化活性。例如，ssDNA可以抑制MnO2纳米片的催化作用，基于此原理，人们开发了一种检测T4多核苷酸激酶的比色生物传感器。钌作为铂族过渡金属显示出非常优异的催化行为，具有较高的过氧化物模拟酶活性，本发明中使用ssDNA核酸适配体来调节纳米钌的过氧化物模拟酶活性，开发了基于适配体的比色传感器，用于高灵敏和选择性地检测阿维菌素B1a。
为了更好地理解本发明，下面结合具体示例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的示例。
一、特异性识别阿维菌素B1a的核酸适配体的制备
(一)文库和引物设计
体外化学合成初始随机ssDNA文库及引物，其序列如下：
(1)文库Library
5'GGACAGGACCACACCCAGCG-N40-GGCTCCTGTGTGTCGCTTTGT 3'，其中，N40指40个碱基的随机A、T、C和G核苷酸，表示25％ A、25％ T、25％ C和25％ G。
(2)引物Primer
前向引物：5'GGACAGGACCACACCCAGCG 3'，
反向引物：5'TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT/iSp9/ACAAAGCGACACACAGGAGCC 3'。
(二)ssDNA与氧化石墨烯孵育比例、时间的优化
用氧化石墨烯分离与阿维菌素B1a结合及未与阿维菌素B1a结合的ssDNA，在分离之前，首先对氧化石墨烯吸附ssDNA的比例和时间进行优化，以使氧化石墨烯分离条件达到最佳。具体包括：将氧化石墨烯与ssDNA的作用时间固定，设置氧化石墨烯与ssDNA的质量比分别为0:1、50:1、100:1、150:1、200:1、300:1(m:m)进行孵育，每组设置3个平行。25℃孵育后20000g离心得到上清液，使用BioTek Epoch超微量微孔板分光光度计对ssDNA浓度进行测定。
结果如图1所示，氧化石墨烯与ssDNA的质量比为200:1(m:m)时，ssDNA浓度已趋于0，表明ssDNA基本被完全吸附，故选用200:1作为最佳质量比。
再固定ssDNA与氧化石墨烯的孵育比例(200:1)，孵育时间分别设定为0min、20min、40min、60min、80min和100min，每组设置3个平行。孵育后离心得到的上清液使用BioTek Epoch超微量微孔板分光光度计测定ssDNA浓度。
结果如图2所示，随孵育时间增加，孵育后上清液ssDNA浓度不断降低，在60min时，ssDNA基本被完全吸附，故选择孵育时间为60min进行后续实验。
(三)筛选
(1)1-2轮正筛(GO-SELEX)
(a)未结合的ssDNA的分离
每一轮孵育开始前，先将ssDNA文库溶解于三(羟氨基)甲烷-甘氨酸-钾(1×TGK)(25mM Tris-HCl、192mM甘氨酸、5mM KH2PO4，pH 8.3)结合缓冲液中，95℃变性10min后，立即冰浴10min，随后室温平衡10min，以使文库中大量的ssDNA折叠形成复杂多样的三维结构，将随机文库与阿维菌素B1a混合，25℃摇床孵育，待阿维菌素B1a和ssDNA文库互相作用2h。加入氧化石墨烯25℃孵育60min，以吸附未与阿维菌素B1a结合的ssDNA。20000g离心30min去掉氧化石墨烯后，以上清液为PCR扩增模板。
首轮筛选ssDNA随机文库加入量为2nmol，2-4轮文库加入量为200pmol；每一轮阿维菌素B1a的加入量为2nmol；氧化石墨烯与ssDNA的质量比例为200:1进行吸附，条件为25℃，1h。
(b)PCR扩增
因收集的复合物中ssDNA含量较低，需经PCR扩增大量模板；PCR条件：总体积1000μL，100μL 10×PCR Buffer，40μL前向引物(10μM)，40μL反向引物(10μM)，160μL dNTPs(2.5mM)，5μL Takala Taq DNA聚合酶，加H2O至1000μL。PCR条件：98℃预变性1min，98℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸1min，循环22次后72℃终延伸7
min。
(c)PCR产物的分离与提纯
采用变性PAGE凝胶电泳从PCR双链产物中制备下一轮SELEX的子库ssDNA。PCR扩增的DNA产物在12％的变性PAGE胶中电泳分离，切下所需凝胶转移至5mL离心管中。将所需凝胶装入透析袋中，在0.25×TBE电泳液中进行电透析，所得电透析液进行离心浓缩，浓缩至约500μL。向浓缩液加入1/10体积的3M醋酸钠溶液、1/100体积的1M氯化镁溶液、5μL 1mg/mL的线性丙烯酰胺、3倍体积的无水乙醇于-80℃放置30min，使DNA沉淀，20000g离心30min，弃上清，再用75％乙醇洗涤三次，干燥后得到次级核酸文库，用于后续筛选。
(2)第3-4轮反筛+正筛(GO-SELEX)
反筛：将次级核酸文库95℃变性10min后，立即冰浴10min。在ssDNA中加入2nmol的克仑特罗(Clenbuterol)、恩诺沙星(Enrofloxacin)、红霉素A(Erythromycin A)、维吉霉素M1(Virginiamycin M1)、四环素(Tetracycline)混合液，25℃摇床孵育2h。加入氧化石墨烯，25℃孵育60min；20000g离心30min；此时，没有与反筛物结合的ssDNA会与氧化石墨烯通过π-π键的堆积作用结合，吸附在氧化石墨烯上进入沉淀中，与反筛物结合的ssDNA不与氧化石墨烯结合，保留在溶液中。
正筛：向沉淀中加入2nmol的阿维菌素B1a，用1×TGK补足至300μL，25℃摇床孵育2h，与阿维菌素B1a有高亲和力的核酸适配体会与阿维菌素B1a结合，阿维菌素B1a改变了ssDNA的空间结构，使ssDNA能够从氧化石墨烯沉淀中解离出来，留存在溶液中。因此，以上清液为模板，进行PCR扩增，PCR产物经分离与提纯，制得的ssDNA次级文库可用于下一轮筛选。
(3)第5-7轮正筛(CE-SELEX)
将50μg/mL的阿维菌素B1a与5μM的次级文库溶液25℃孵育60min，混合物在50mbar压力下注射10s，分离电压设置为25kV；将与阿维菌素B1a结合的适配体收集在预先装有20μL去离子水(作为PCR模板)的进样瓶中；每轮基于CE的复合物分离进行5次以获得足够的PCR模板，其PCR产物经分离与提纯，制得的ssDNA次级文库可用于下一轮筛选。
(四)筛选轮数确定
采用毛细管电泳法评估每一轮子库ssDNA的亲和力，以加入阿维菌素B1a后的ssDNA峰面积变化表征每轮筛选后亲和力的变化；峰面积变化百分比RA(％)＝(I0-I1)/I0×100％，其中，I0为5μM ssDNA的峰面积，I1为加入不同浓度阿维菌素B1a后的ssDNA峰面积，RA越大，说明ssDNA与阿维菌素B1a的亲和力越强。
结果如图3所示，第1-2轮采用氧化石墨烯法进行正向筛选，在第2轮初步富集，亲和力上升，在第3轮，加入了反筛靶标，亲和力略有降低，但在第4轮时，即使进行了反筛，也不妨碍亲和力增加。第5-7轮进行高效的CE-SELEX，能与阿维菌素B1a结合的ssDNA快速富集，在第7轮时，亲和力不再增加，表明能与阿维菌素B1a结合的ssDNA趋于饱和，因此，筛选在第7轮终止。
(五)克隆测序
将第7轮筛选得到的ssDNA进行PCR扩增，切胶回收纯化后，进行高通量测序，前15条富集程度最高的序列如表1所示，用软件DNAMAN 8.0(Lynnon Biosoft，USA)计算各序列的碱基组成，发现鸟嘌呤(G)与胞嘧啶(C)含量普遍较高，说明这些序列的二级结构比较稳定。此外，前5条序列的富集程度不低于2.74％，其中Seq 1的富集程度最高，达到了15.37％。用DNAMAN软件进行同源性分析(图4)，将15条序列分为三个家族，三个家族的同源性分别为47％、60％和52％，在各家族中，选择富集程度最高的Seq 1、Seq 2和Seq5进行合成。
表1富集程度最高的前15条序列
(六)候选核酸适配体的亲和力表征
对适配体Seq 1、Seq 2和Seq 5进行平衡解离常数Kd的测定，5μM ssDNA中加入不同浓度的阿维菌素B1a，用ssDNA的峰面积变化百分数(RA)表示亲和力，利用软件GraphPadPrism 8对RA随阿维菌素B1a浓度变化的非线性饱和曲线进行拟合，求得解离常数。结果如图5、图6和图7所示，适配体Seq 1、Seq 2和Seq 5的Kd值分别为69.84±10.22nM、116.9±20.3nM和230.9±65.45nM，其中，适配体Seq 1的Kd值最小，表明其亲和力最高。
(七)适配体Seq 1的截短及其亲和力评估
有相关研究表明，并非适配体上所有的核苷酸序列均参与适配体识别结合目标物的过程，在核酸适配体传感器设计与应用过程中，多余的核苷酸序列可能会干扰适配体与目标物的结合，以致于影响传感器的构建效果。一般而言，引物结合区的序列不会增强或制约适配体的结合特性，只是最低限度地参与适配体的整体结构形成。因此，将亲和力较高的候选适配体序列Seq 1进行截短，去掉Seq 1的引物结合序列P1和P2，仅保留中间的序列，并命名为Seq1-1(5'GGTAGTGGGAATGTCCCAAAGCTGTACATCACGGTGCCTT3'，如SEQ ID NO.1所示)，对其进行亲和力评估，结果如图8，与截短前相比，Seq 1-1的Kd(63.13±8.91nM)值更低，亲和力更高。
向5μM ssDNA中分别加入50μg/mL的克仑特罗、恩诺沙星、红霉素A、四环素、维吉霉素M1、阿维菌素B1a，室温孵育60min；采用毛细管电泳法检验适配体Seq1-1的特异性，RA越大，特异性越强。结果如图9所示，适配体Seq 1-1对阿维菌素B1a的特异性显著(p<0.001)。
二、基于寡聚核苷酸调控纳米钌(Ru NPs)过氧化物模拟酶活性的比色检测
(一)传感器灵敏度检验
将适配体Seq 1-1溶解在1×TGK缓冲液中，在95℃下剧烈变性10min，然后冰浴10min后用于接下来的研究。将10μL Ru NPs溶液(50μg/mL)和10μL Seq1-1(12μM)溶液一起放入1.5mL离心管中充分混合，然后在25℃下孵育反应30min；加入10μL不同浓度的阿维菌素B1a，并在25℃下孵育30min；将向上述混合液中加入4μL H2O2(800mM)、4μL 3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB，21mM)和100μL NaAc缓冲液(pH 4，20mM)，用H2O补足至200μL，以获得催化反应体系。测定各体系在652nm处的吸光值，并计算ΔA(652nm)，其中ΔA＝A 1(阿维菌素B1a标准溶液，652nm)-A 0(空白，652nm)；在空白对照中用10μL H2O替代不同浓度的阿维菌素B1a标准溶液。
Ru NPs具有较高的过氧化物模拟酶活性，催化TMB和H2O2显蓝色，TMB的氧化产物在652nm处有特征吸收峰，Ru NPs与适配体结合后，活性受到抑制，吸光度下降，蓝色变浅。加入阿维菌素B1a后，适配体解除了对Ru NPs催化活性的抑制作用，吸光度上升，溶液为蓝色。
结果如图10所示，传感器在6.25nM-100nM范围，具有良好的线性关系，线性回归方程为y＝0.003231x+0.02186(R2＝0.9911)，通过3σ/slope计算得到的阿维菌素B1a最低检测限为5.86nM，低于中国农业农村部规定的肉类、奶类和蔬果的最大残留限量，表明本发明所建立的方法能够用于阿维菌素B1a的定量检测。
(二)加标回收检测
向牛奶、西红柿中加入不同浓度的阿维菌素B1a，使用基于适配体的纳米钌比色方法进行加标回收实验。如表2所示，牛奶、西红柿中不同浓度阿维菌素B1a的加标回收率在92.86％-101.49％之间，RSD在2.27-6.45％。上述结果表明，所建立的传感器具有良好的实用性，可用于牛奶及西红柿中阿维菌素B1a的残留检测。
表2牛奶和西红柿中阿维菌素B1a的加标检测
综上所述，本发明中联用CE-SELEX与GO-SELEX技术制备了具有高亲和力以及特异性的阿维菌素B1a核酸适配体Seq 1，通过截短，获得了亲和力更高的Seq 1-1。通过纳米钌比色实验，证实适配体Seq 1-1能应用于阿维菌素B1a可视化检测，且耗时短、操作简单、检测限低。该技术为适配体的发展和应用以及阿维菌素B1a的检测途径提供了新的思路和方法。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围。
Claims (9)
1.一种阿维菌素B1a适配体，其特征在于，其核酸序列包括如SEQ ID NO.1所示序列。
2.权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体的筛选方法，其特征在于，包括：GO-SELEX与CE-SELEX联用筛选阿维菌素B1a适配体。
3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，包括：(1)设计文库和引物，(2)使用氧化石墨烯初步筛选出具有特异性的文库，再通过反筛和正筛筛选出特异性较强的文库，再通过CE-SELEX筛选出特异性更强的文库，并筛选出同源性较低且富集程度≥2.74％的文库序列；(3)筛选出解离常数最小的序列，并进行截短得到权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体。
4.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)中，文库序列为“5'GGACAGGACCACACCCAGCG-N40-GGCTCCTGTGTGTCGCTTTGT3'”，N40指40个碱基的随机A，T，C，G核苷酸，表示25％A，25％T，25％C，25％G；引物包括前向引物和反向引物，前向引物为“5'GGACAGGACCACACCCAGCG3'，反向引物为“5'TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT/iSp9/ACAAAGCGACACACAGGAGCC3'”。
5.阿维菌素B1a的检测试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体。
6.阿维菌素B1a的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求5所述的检测试剂。
7.阿维菌素B1a的检测传感器，其特征在于，包括权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体。
8.根据权利要求7所述的阿维菌素B1a检测传感器，其特征在于，还包括纳米钌。
9.权利要求1所述的阿维菌素B1a适配体或权利要求5所述的检测试剂或权利要求6所述的检测试剂盒或权利要求7或8所述的检测传感器在检测阿维菌素B1a中的应用。
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| CN202410158148.1A CN117737071A (zh) | 2024-02-04 | 2024-02-04 | 一种阿维菌素B1a适配体及其筛选方法和应用 |
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|---|---|
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410158148.1A Pending CN117737071A (zh) | 2024-02-04 | 2024-02-04 | 一种阿维菌素B1a适配体及其筛选方法和应用 |
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| US20170121715A1 (en) * | 2014-07-24 | 2017-05-04 | Jiangnan University | A specific oligonucleotide aptamer for the identification of T-2 toxin |
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2024
- 2024-02-04 CN CN202410158148.1A patent/CN117737071A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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| US20170121715A1 (en) * | 2014-07-24 | 2017-05-04 | Jiangnan University | A specific oligonucleotide aptamer for the identification of T-2 toxin |
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