CN117736942A

CN117736942A - 改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌jylf-315及其后生元制剂和应用

Info

Publication number: CN117736942A
Application number: CN202410186954.XA
Authority: CN
Inventors: 潘玉林; 王丽媛; 曹维超; 曹艳萍; 姜能凯; 张永娟; 张世凯; 刘鑫
Original assignee: Shandong Zhongke Jiayi Bio Engineering Co ltd
Current assignee: Shandong Zhongke Jiayi Bio Engineering Co ltd
Priority date: 2024-02-20
Filing date: 2024-02-20
Publication date: 2024-03-22
Anticipated expiration: 2044-02-20

Abstract

本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF‑315及其后生元制剂和应用。发酵粘液乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）JYLF‑315的保藏编号为CGMCC No.28648。发酵粘液乳杆菌JYLF‑315后生元制剂包括发酵粘液乳杆菌JYLF‑315的后生元粉，后生元粉由发酵粘液乳杆菌JYLF‑315菌液经热灭活、浓缩、冷冻干燥制得，能够抑制皮肤致病菌、抑制皮肤炎症。通过对小鼠皮肤表观的评定，小鼠肌肉组织和血清中的硒浓度、皮肤衰老相关酶含量以及雌激素含量的测定，证实了发酵粘液乳杆菌JYLF‑315后生元制剂可有效改善皮肤衰老。

Description

改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315及其后生元制剂和应用

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315及其后生元制剂和应用。

背景技术

目前防治皮肤衰老的药物主要有：角质剥脱剂、脱色剂、抗氧化剂、维A酸类药物、雌激素类、一些从天然动植物中提取或人工合成的活性成分及细胞因子、防晒剂、保湿剂等。整形美容手术对皮肤衰老外观的改善往往能起到立竿见影的作用，但副作用、风险性相对较大，可持续性差。护肤品中添加胶原蛋白肽、多酚、多糖、青花素等成分，发挥抗皮肤衰老作用的机制可能为通过调控细胞因子与信号通路发挥抑制胶原蛋白降解、增加胶原蛋白合成，发挥其抗炎与抗氧化作用，减少皮肤氧化损伤与炎症反应。但是这些化学成分较难被皮肤吸收，效果不显著、稳定性差。

微生态学研究表明，肠道和皮肤衰老有密切的关系，当肠道内菌群平衡遭到破坏，有害菌群增加，其产生的有毒有害物质经血液散布到全身，就会引起皮肤问题，如皮肤无光泽、粗糙，出现痤疮等；而节食、便秘、肠道易激症等等都会引起肠道失衡，导致皮肤问题。益生菌在调节肠道平衡、抗皮肤衰老方面具有良好作用，但是长期使用益生菌会破坏肠道平衡和皮肤微生态，引起依赖性，当停用益生菌时，会引起肠道功能紊乱，加剧皮肤衰老。对于一些免疫力低下或者本身有疾病的人群，益生菌不仅不会预防皮肤衰老，还会造成感染，诱发炎症，造成免疫系统失衡，引起过敏反应。

发明内容

针对目前抗皮肤衰老的益生菌产品容易产生依赖或过敏反应问题，本发明提供一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315及其后生元制剂和应用。

第一方面，本发明提供一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315，发酵粘液乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）JYLF-315于2023年10月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.28648。

第二方面，本发明还提供一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，包括发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元粉，发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元粉由发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液经热灭活、浓缩、冷冻干燥制得。

进一步的，发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液的制备方法包括以下步骤：

取发酵粘液乳杆菌JYLF-315在MRS平板培养基上活化，将活化后的菌接种于一级培养基中，经一级培养获得种子液；将种子液接种于二级培养基中，经二级培养获得发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液。

进一步的，一级培养基和二级培养基均为MRS液体培养基，MRS液体培养基的制备方法为：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g和蒸馏水1000mL混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min。

进一步的，一级培养的条件为37℃恒温静置培养12h，二级培养的条件为厌氧条件下37℃恒温静置培养24h。

进一步的，活化后的菌接种方法为：挑取1个单菌落转接到100mL MRS液体培养基中；种子液的接种量为体积比1%。

进一步的，热灭活的处理温度为115℃，处理时间为30min以上。

进一步的，其制备方法包括：将发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元粉与葡萄糖混合均匀，制成发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂。

第三方面，本发明还提供一种上述发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂在制备改善皮肤衰老的产品方面的应用。

进一步的，改善皮肤衰老的产品为抗氧化且抑制胶原蛋白降解的产品。

本发明的有益效果在于：

1、本发明提供的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂能够抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌等多种致病菌，对于皮肤炎症有一定治疗效果。在动物实验中，通过对小鼠皮肤表观的评定，对小鼠肌肉组织和血清中硒浓度，小鼠皮肤Hyp、Caspase-9、Caspase-3含量，小鼠血清中性激素雌二醇（E2）、促黄体生成激素（LH）、卵泡生成激素（FSH）含量的测定，充分证实了发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂可有效改善皮肤衰老。

2、本发明提供的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，由发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液经热灭活、浓缩、冷冻干燥制得，益生菌活性大大降低，长期使用不会影响人体肠道微生态平衡，也不会引起免疫失衡或过敏反应。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

实施例1 菌种的分离纯化

1、菌株来源：发酵酸菜，2019年1月29日采集于海南省儋州市那大镇，备用。

2、菌株筛选及纯化

（1）取样：取1g发酵酸菜作为样品，备用。

（2）制备样品：

①取10mL灭菌后的生理盐水（0.85%）至于无菌三角瓶中，然后将步骤（1）的样品加入其中，振荡，待用；

②将步骤①的溶液稀释制成不同浓度梯度的样品，分别为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7，标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#，待用。

（3）制备MRS平板培养基；

将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g和蒸馏水1000mL混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用。

（4）培养：取100μL步骤②的5#、6#、7#溶液分别使用涂布器涂布在MRS平板培养基中，置于厌氧培养箱中37℃恒温静置培养48h。

（5）按照以下菌落特征挑选菌落：

菌落直径0.5~1.5mm，菌落呈乳黄色，边缘整齐。

（6）分离纯化

挑取单菌落在MRS平板培养基上进行三区划线，划线后于37℃厌氧培养48h，重复上述操作，共经过3次划线，纯化得到10株纯菌株，将纯菌株加入到甘油管中于-80℃保藏。

实施例2 制备后生元制剂

（1）制备MRS液体培养基：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g和蒸馏水1000mL混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min。

（2）将保藏的10株菌在MRS平板培养基平板上活化，挑取活化后的1个单菌落转接到100mL的MRS液体培养基中，37℃恒温静置培养12h制得种子液；将种子液按照1%（v/v）接种量接种于MRS液体培养基中，然后在厌氧条件下37℃恒温静置培养24h，获得活菌数为1.0×10¹⁰cfu/mL的菌液。

（3）将菌液（含有菌体及其代谢产物）热灭活（115℃、30min）处理后，经过浓缩冷冻干燥得到后生元粉。将后生元粉与葡萄糖（购自山东西王糖业有限公司）混合，制成后生元制剂。

本实施例中，制得的后生元制剂的菌体数量为1.0×10¹⁰cfu/g。

实施例3 后生元制剂筛选

1、本实施例用到的各种培养基制备方法如下：

（1）LB平板培养基：取氯化钠10g、胰蛋白胨膏10g、酵母提取物5g、琼脂粉15g，用去离子水溶解，定容至1L，调整pH为7.0，115℃高压蒸汽灭菌20min。

（2）LB液体培养基：取氯化钠10g、胰蛋白胨膏10g、酵母提取物5g，用去离子水溶解，定容至1L，调整pH为7.0，115℃高压蒸汽灭菌20min。

（3）水琼脂：称取1.5g琼脂粉，加去离子水定容至100mL，转移至锥形瓶中，121℃高压蒸汽灭菌20min。

2、采用牛津杯法测定实施例2制备的不同菌株的后生元制剂对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌的抑制作用。

（1）致病菌菌悬液的制备：将大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌分别于LB平板培养基上进行活化，用接种环挑取单菌落接种于5mL LB液体培养基中，37℃、180rpm恒温振荡培养12h；将菌液在8000rpm下离心2min，收集菌体，再用无菌水重悬，上述离心、重悬操作共重复两次，最后稀释至菌体浓度为1.0×10⁸cfu/mL，制得致病菌菌悬液。

（2）菌株后生元待测液的制备：取1g后生元制剂与1mL无菌水混合，配制成后生元待测液。

（3）在培养皿中倒入10mL水琼脂，凝固后均匀放置4个牛津杯。随后将150μL的致病菌菌悬液和15mL融化后的LB平板培养基混匀后倒入平板内（加入菌液前培养基需冷却至50℃），培养基凝固后取出牛津杯。实验组每孔加入50μL后生元待测液，阳性对照孔加入50μL氨苄西林钠溶液（无菌水溶解为20mg/mL），阴性对照孔加入50μL葡萄糖溶液（无菌水溶解为500μg/mL），37℃恒温静置培养12h，采用十字交叉法测量抑菌圈直径，结果如表1所示。

表1 后生元制剂的抑菌效果

注：“-”表示无明显抑菌效果，牛津杯外径为8mm。

如表1所示，菌株10的后生元制剂对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌3种致病菌均有较明显的抑制效果，因此对菌株10进行鉴定。

实施例4 菌株鉴定

将保藏的菌株10送去鉴定，鉴定单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心，鉴定过程中，使用的引物如下：

引物序列：

27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'

1492R：5'-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3'

得到的基因序列如下：

CCTAGAGGTTACCCCACCGACTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCGTGCAGGCGAGTTGCAGCCTGCAGTCCGAACTGAGAACGGTTTTAAGAGATTTGCTTGCCCTCGCGAGTTCGCGACTCGTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATCTGACGTCGTCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACTAGAGTGCCCAACTTAATGCTGGCAACTAGTAACAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACGACCATGCACCACCTGTCATTGCGTTCCCGAAGGAAACGCCCTATCTCTAGGGTTGGCGCAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTCCGGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACCTAGCACTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGTCTCAGCGTCAGTTGCAGACCAGGTAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACTACCCTCTTCTGCACTCAAGTTATCCAGTTTCCGATGCACTTCTCCGGTTAAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAGAAAACCGCCTGCACTCTCTTTACGCCCAATAAATCCGGATAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGACTTTCTGGTTAAATACCGTCAACGTATGAACAGTTACTCTCATACGTGTTCTTCTTTAACAACAGAGCTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGTGTTGCTCCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTATGGGCCGTGTCTCAGTCCCATTGTGGCCGATCAGTCTCTCAACTCGGCTATGCATCATCGCCTTGGTAGGCCGTTACCCCACCAACAAGCTAATGCACCGCAGGTCCATCCAGAAGTGATAGCGAGAAGCCATCTTTTAAGCGTTGTTCATGCGAACAACGTTGTTATGCGGTATTAGCATCTGTTTCCAAATGTTGTCCCCCGCTTCTGGGCAGGTTACCTACGTGTTACTCACCCGTCCGCCACTCGTTGGCGACCAAAATCAATCAGGTGCAAGCACCATCAATCAATTGGGCCAACGCG。

鉴定结果为：该菌株为发酵粘液乳杆菌Limosilactobacillus fermentum。

将鉴定后的菌株10命名为发酵粘液乳杆菌JYLF-315，将该菌株送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏信息如下；

分类命名为：发酵粘液乳杆菌Limosilactobacillus fermentum，保藏日期：2023年10月18日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏编号：CGMCCNo.28648。

实施例5 发酵粘液乳杆菌JYLF-315的抗皮肤衰老效果

1、实验动物：SPF级KM雌鼠40只，45日龄，体重18~22g，购于西安交通大学实验动物中心，编号：0001209。

2、动物分组及实验前处理：实验开始前，所有小鼠先不予以任何处理，室温20±5℃，使其适应当地环境，5天后随机分为4组（n=10，4组间体重均无差别，P>0.05），分别为正常对照组（CON）、衰老模型组（MOL）、低剂量组（LPC）和高剂量组（HPC）。剪去颈背部较长毛发。用双蒸水和75%的乙醇溶液（天津永大化学试剂公司）配制4%的硫化钠溶液（天津永大化学试剂公司），均匀涂抹在颈背部，范围约2cm×3cm，6~8min后待毛发变为淡黄色并略透明后，纱布轻轻拭去，温水冲洗，拭干。造模期间每次紫外线照射前，检查照射部位有无新生毛发影响照射效果，如有影响，照射前再次给予4%的硫化钠溶液脱毛处理。以3%苦味酸（广东西陈化工股份公司）、乙醇溶液标记小鼠。

3、模型建造及给药

实验开始时除CON组外，其余组每日颈背部皮下注射5%D-半乳糖（北京solarbio生物科技）10mL/kg，同时隔日进行UV照射：UVA、UVB灯管各一支，两支灯管平行排列，安插在自制的紫外线辐照箱内，之间相隔约5cm左右，正式实验前先测定最小红斑量（Minimumerythemadose，MED），以最小红斑量作为单次照射剂量，根据最小红斑量及辐照度计算单次照射时间。在放入鼠盒进行正式照射前先接通电源预热灯管15min，每次辐照时长为40min，照射期间每20min交替互换鼠盒1次，使小鼠照射程度相同，光源距鼠约40cm垂直高处，隔日照射1次，持续造模40天（UVA累计辐照剂量为98.4J，UVB累计辐照剂量为78.4J）。CON组小鼠正常光照饲养。

造模过程中，第11天开始，每天一次灌胃处理，给予LPC组1亿cfu/d的JYLF-315后生元制剂、HPC组10亿cfu/d的JYLF-315后生元制剂，CON组、MOL组给予同体积的生理盐水，每组灌胃溶液体积控制在0.5mL/只。

4、皮肤表观评定

（1）每天观察小鼠精神状态、毛发鲜亮程度、饮食情况及皮肤的色泽、光滑程度、皱纹、红斑及脱屑情况的变化，判断皮肤衰老情况。评分标准如下：

（2）于灌胃开始第40天进行小鼠皮肤表观的评定，结果如表2所示：

表2 皮肤表观评定结果

注：**表示与MOL组比较，P＜0.05。

结果如表2所示，得分越少说明皮肤表观状态越好，相对于MOL组，LPC组、HPC组均能显著改善小鼠皮肤表观状态，HPC组效果优于LPC组。

5、检测小鼠肌肉组织和血清中的硒浓度

于灌胃开始第40天，断髓处死小鼠，称取小鼠腿部肌肉组织0.5~1.0g，用1mL的10%硝酸溶解组织样本于10mL的玻璃瓶（室温下），再于110℃消解8h，取出，置冷，加去离子水定容至5mL，上清液用于分析。

取血清0.5mL加2mL硝酸，先于100℃消解2h，再于150℃消解10h，取澄清透明溶液，加去离子水定容至15mL。

小鼠腿部肌肉组织上清液和血清，均使用电感耦合等离子体质谱仪（Agilent，7700 Series，美国）ICP-MS法进行检测硒浓度。仪器条件如下，载气(Ar)：1.05L/min，蠕动泵：0.1rpm，功率（RF）：1550W，雾化室温度：2℃，采样深度：8mm，标准曲线：Se：0、1、5、10、50μg/L。检测结果如表3所示。

表3 小鼠肌肉组织和血清中的硒浓度

注：**表示与MOL组比较，P＜0.05。

硒是自由基的清除剂，有美容抗衰的功效。当人体内抗氧化作用差，又不能及时清除自由基时，细胞的衰老速度便明显加快。硒是谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）的重要组成成分，而谷胱甘肽过氧化物酶能催化氧化还原反应，抑制脂质氧化，清除自由基。

表3的数据表明，相对于MOL组，LPC组、HPC组均能显著改善小鼠肌肉组织上清液硒浓度和血清硒浓度，使其含量趋近于CON组，且HPC组效果优于LPC组。

6、检测小鼠皮肤羟脯氨酸（Hyp）含量和半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）含量

于灌胃开始第40天，断髓处死小鼠，于冰上快速取下背部照光及注射处皮肤组织，钝性分离后去除皮下脂肪、毛细血管及其他的结缔组织，在提前冰上预冷好的生理盐水中清洗干净，仔细用干净滤纸吸取表面水分后冻存于超低温冰箱（-80℃）中尽快进行实验结果检测。

使用Hyp试剂盒（南京建成生物工程研究所）、Caspase-9酶联免疫吸附测试盒（武汉伊莱瑞特生物公司）、Caspase-3酶联免疫吸附测试盒（武汉伊莱瑞特生物公司）进行检测，检测方法严格按照操作说明进行。结果如表4所示。

表4 小鼠皮肤Hyp含量、Caspase-9、Caspase-3含量

注：**表示与MOL组比较，P＜0.05。

表4中的结果表明，相对于MOL组，LPC组、HPC组均能显著改善小鼠皮肤组织Hyp、Caspase-9、Caspase-3含量，使其含量趋近于CON组，且HPC组效果优于LPC组。

7、检测小鼠血清中雌性激素雌二醇（E2）、促黄体生成激素（LH）、卵泡生成激素（FSH）的含量

于灌胃开始第40天，断髓处死小鼠，取血清0.5mL，采用ELISA法检测小鼠血清E2、LH、FSH的水平。酶标仪采用Bio-Tek公司Synegy HT型酶标仪。使用雌二醇（E2）、促黄体生成激素（LH）、卵泡生成激素（FSH）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒，货号：GH95002，根据试剂盒说明书步骤操作。检测结果如表5所示。

表5 小鼠血清E2、LH及FSH含量

注：**表示与MOL组比较，P＜0.05。

研究表明，雌激素可通过增加新生胶原蛋白的稳定性，抑制基质金属蛋白酶的活性来减少胶原蛋白的降解，从而使胶原蛋白含量增加。研究发现，雌激素具有减少皮肤皱纹、增加皮肤厚度和弹性等延缓皮肤衰老的作用。如上述结果可见，JYLF-315后生元制剂可显著增加小鼠血清E2水平，降低LH、FSH水平，有助于延缓皮肤衰老。

尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims

1. 一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315，其特征在于，发酵粘液乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）JYLF-315于2023年10月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.28648。

2.一种改善皮肤衰老的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，包括如权利要求1所述发酵粘液乳杆菌JYLF-315的后生元粉，后生元粉由发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液经热灭活、浓缩、冷冻干燥制得。

3.如权利要求2所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，发酵粘液乳杆菌JYLF-315菌液的制备方法包括以下步骤：

4. 如权利要求3所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，一级培养基和二级培养基均为MRS液体培养基，MRS液体培养基的制备方法为：将蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g和蒸馏水1000mL混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min。

5.如权利要求3所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，一级培养的条件为37℃恒温静置培养12h，二级培养的条件为厌氧条件下37℃恒温静置培养24h。

6. 如权利要求3所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，活化后的菌接种方法为：挑取1个单菌落转接到100mL MRS液体培养基中；种子液的接种量为体积比1%。

7.如权利要求2所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，热灭活的处理温度为115℃，处理时间为30min以上。

8.如权利要求2所述的发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂，其特征在于，其制备方法包括：将发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元粉与葡萄糖混合均匀，制成发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂。

9.一种如权利要求2-8任一项所述发酵粘液乳杆菌JYLF-315后生元制剂在制备改善皮肤衰老的产品方面的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，改善皮肤衰老的产品为抗氧化且抑制胶原蛋白降解的产品。