CN117717552B - Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包虫病药物技术领域，是一种Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，本发明首次公开了Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，其能促进多房棘球绦虫感染小鼠病灶周围组织纤维化进而抑制多房棘球绦虫的生长，减小多房棘球绦虫感染小鼠肝脏病灶体积，为包虫病的治疗提供了新途径。

Description

Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的 应用

技术领域

本发明涉及包虫病药物技术领域，是一种Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用。

背景技术

包虫病是世界范围内流行的严重公共卫生问题。其中，泡型包虫病(AlveolarEchinococcoisis，AE)是由多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis，E.m)的幼虫（泡球蚴）寄生于人体所致，几乎原发于肝脏。该病起病隐匿、发展迅速、类似恶性肿瘤，可从肝脏经血液、淋巴循环转移或扩张至其他重要器官，故有“虫癌”之称，未经治疗的泡型包虫病患者10年病死率高达94%。

多房棘球蚴寄生肝脏并形成占位性病变是一个渐进的过程，随着疾病的进展，由宿主的成纤维细胞形成纤维组织包膜，包裹在棘球蚴周围形成异物肉芽肿。持续慢性炎症诱导肝脏纤维化发生，一方面，过度的纤维化会损害肝实质，最终塌陷的实质被富含胶原蛋白的组织取代，导致肝功能丧失；另一方面，肝脏局部纤维化可以进一步限制虫体病灶的侵袭性扩散。

Toll样受体激动剂Resiquimod(R-848)是一种咪唑喹啉类的小分子化合物，可以激活Toll样受体7和8(TLR7/8)，从而诱导免疫细胞产生细胞因子，如 TNF-α，IL-6和IFN-α。目前，研究表明Toll样受体激动剂Resiquimod (R-848) 有抗病毒和抗肿瘤的作用，可以诱导抗肿瘤反应并减弱恶病质。在小鼠胰腺导管腺癌（PDAC）模型中，Toll样受体激动剂Resiquimod (R-848) 可以通过TLR7/8信号通路抑制肿瘤生长和转移，同时改善体重和血清白蛋白水平。另外，在曼氏血吸虫的研究中发现，R848可能作为一种新的治疗或疫苗曼氏血吸虫感染的免疫增强剂。

发明内容

本发明提供了一种Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，克服了上述现有技术之不足，其首次公开了Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，其能促进多房棘球绦虫感染小鼠病灶周围组织纤维化进而抑制多房棘球绦虫的生长，减小多房棘球绦虫感染小鼠肝脏病灶体积。

本发明的技术方案是通过以下措施来实现的：一种Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用。

下面是对上述发明技术方案的进一步优化或/和改进：

上述Toll样受体激动剂Resiquimod作为药物的活性成分，其结构式为：

。

上述包虫病为泡型包虫病，泡型包虫病为多房棘球绦虫感染所致的疾病。

上述药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

上述药物的剂型为药学上可接受的剂型，药学上可接受的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液。

上述Toll样受体激动剂Resiquimod是通过促进包虫病多房棘球绦虫感染病灶周围组织的纤维化，进而抑制多房棘球绦虫的扩张生长。

上述Toll样受体激动剂Resiquimod抑制感染包虫病小鼠的给药浓度为2mg/kg，给药方式为腹腔注射。

本发明首次公开了Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，其能促进多房棘球绦虫感染小鼠病灶周围组织纤维化进而抑制多房棘球绦虫的生长，减小多房棘球绦虫感染小鼠肝脏病灶体积，为包虫病的治疗提供了新途径。

附图说明

图1为本发明模型组小鼠肝脏组织HE染色图。

图2为本发明Resiquimod治疗组和对照组小鼠肝脏病灶大小对比图。

图3为本发明Resiquimod治疗组和对照组小鼠肝脏组织Masson染色图。

具体实施方式

本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品。

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1：该Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用。

本发明中，Toll样受体激动剂Resiquimod是由selleck公司提供的Resiquimod，S8133。

实施例2：作为上述实施例的优化，Toll样受体激动剂Resiquimod作为药物的活性成分，其结构式为：

。

实施例3：作为上述实施例的优化，包虫病为泡型包虫病，泡型包虫病为由多房棘球绦虫感染的疾病。其中，多房棘球绦虫为多房棘球绦虫幼虫、多房棘球绦虫胚性细胞和多房棘球绦虫生发层中的一种及以上，多房棘球绦虫幼虫为多房棘球蚴，亦称泡球蚴。

实施例4：作为上述实施例的优化，药物还包括药学上可接受的载体或辅料。

实施例5：作为上述实施例的优化，药物的剂型为药学上可接受的剂型，药学上可接受的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液。

实施例6：作为上述实施例的优化，Toll样受体激动剂Resiquimod是通过促进包虫病多房棘球绦虫感染病灶周围组织的纤维化，进而抑制多房棘球绦虫的扩张生长。

实施例7：作为上述实施例的优化，Toll样受体激动剂Resiquimod抑制感染包虫病小鼠的给药浓度为2mg/kg，给药方式为腹腔注射。

实施例8：探究Toll样受体激动剂Resiquimod（以下简称Resiquimod）对泡球蚴感染小鼠的影响。

泡球蚴原头节虫体收集：选择腹腔感染泡球蚴至少6个月的大沙鼠，颈椎脱臼法处死后浸泡在75%乙醇中3分钟至5分钟，分离小鼠腹腔病灶组织，放入装有PBS缓冲液的培养皿中，清洗2次至3次，剪取病灶组织放入10 mL十字柄玻璃匀浆器中充分研磨，将组织匀浆液倒入100目细胞筛网中过滤收集泡球蚴原头节虫体，伊红染色判断活性。

泡球蚴感染小鼠模型的建立：调整泡球蚴原头节虫体浓度，总体积为100μL。选取健康的6至8周龄雌性C57BL/6小鼠，麻醉后沿小鼠腹直中线剖开暴露小鼠肝脏，无菌注射器吸取泡球蚴原头节虫体注入小鼠肝脏被膜下，用干棉签按压穿刺点直至止血，无菌PBS轻轻冲洗小鼠腹腔内部后进行缝合。将术后小鼠放入保温台中观察状态，待小鼠清醒后放回鼠笼正常饲养，得到模型组小鼠。

给药方式：将模型组小鼠正常饲养，在第8周时，将小鼠随机分为Resiquimod治疗组与对照组。Resiquimod治疗组小鼠给药剂量为2mg/kg，Resiquimod使用DMSO溶解，生理盐水稀释，腹腔注射给药，间隔3天给药1次，持续12周，同时，对照组给予等量不含Resiquimod的DMSO生理盐水溶液，给药结束后，各组小鼠再正常饲养4周。

试验1：泡球蚴感染小鼠肝脏组织HE染色试验

取造模成功的模型组小鼠，收集小鼠肝脏，10%中性福尔马林固定小鼠肝脏，石蜡包埋切片，切片厚度为4 μm。选取病灶周围0.5 cm处肝脏组织，体积大小约1cm×1cm×1cm，作为病灶周围组织（Close liver tissue，CLT）；同时，采集距离病灶约2cm至3cm处对应肝脏组织，体积大小约1cm×1cm×1cm，作为远端病灶组织（Distance liver tissue，DLT）。

分别取病灶周围组织和远端病灶组织，切片常规脱蜡后，将切片浸入苏木素染液中3分钟至5分钟，流水冲洗；酸酒精分化5秒至10秒，流水冲洗，蒸水中反蓝10分钟，伊红染液浸染2分钟至3分钟，流水冲洗，染色后的切片经梯度酒精脱水，二甲苯透明后，树胶封片保存。HE染色结果如图1所示，由图1可以看出，泡球蚴感染小鼠模型病灶周围有大量炎性细胞细胞浸润，表明小鼠造模成功。

试验2：探究Resiquimod对泡球蚴感染小鼠的病灶大小影响。

收集Resiquimod治疗组和对照组小鼠肝脏并记录小鼠体重及肝脏重量，观察各组小鼠肝脏感染病灶大小。病灶大小结果如图2所示，由图2可以看出，Resiquimod治疗组小鼠病灶体积明显小于对照组。表明泡球蚴感染小鼠使用Resiquimod治疗后，大大降低了小鼠肝脏的寄生虫负担。

试验3：泡球蚴感染小鼠肝脏组织Masson染色试验。

取Resiquimod治疗组和对照组小鼠，收集小鼠肝脏组织固定，经石蜡包埋切片后常规脱蜡，媒染液浸染，室温过夜或57℃至60℃温箱孵育1小时，流水冲洗10分钟；天青石蓝滴染2分钟至3分钟，流水冲洗10秒至15秒；Mayer苏木素滴染2分钟至3分钟，流水冲洗10秒至15秒；酸性乙醇分化至组织变红，水洗终止分化；丽春品红滴染10分钟，流水冲洗10秒至15秒；磷钼酸溶液处理10分钟，倾去上液，直接滴加苯胺蓝染液5分钟；弱酸冲洗苯胺蓝染液，继续滴加弱酸处理2分钟；梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶封片保存。

经Masson染色后结果如图3所示，由图3可以看出，与对照组小鼠相比，Resiquimod治疗组小鼠病灶周围组织纤维化程度增强。表明Resiquimod是通过促进多房棘球绦虫感染小鼠病灶周围组织的纤维化，进而抑制多房棘球绦虫的扩张生长。

综上所述，本发明首次公开了Resiquimod在制备治疗包虫病药物中的应用，其能促进多房棘球绦虫感染小鼠病灶周围组织纤维化进而抑制多房棘球绦虫的生长，减小多房棘球绦虫感染小鼠肝脏病灶体积，为包虫病的治疗提供了新途径。

以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。

Claims (10)

1.一种Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于Toll样受体激动剂Resiquimod作为药物的活性成分，其结构式为：

。

3.根据权利要求1或2所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于泡型包虫病为多房棘球绦虫感染所致的疾病。

4.根据权利要求1或2所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于药物还包括药学上可接受的载体。

5.根据权利要求3所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于药物还包括药学上可接受的载体。

6.根据权利要求1或2或5所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于药物的剂型为药学上可接受的剂型，药学上可接受的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液。

7.根据权利要求3所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于药物的剂型为药学上可接受的剂型，药学上可接受的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液。

8.根据权利要求4所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于药物的剂型为药学上可接受的剂型，药学上可接受的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊剂和口服液。

9.根据权利要求1或2或5或7或8所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于Toll样受体激动剂Resiquimod是通过促进泡型包虫病多房棘球绦虫感染病灶周围组织的纤维化，进而抑制多房棘球绦虫的扩张生长。

10.根据权利要求9所述的Toll样受体激动剂Resiquimod在制备治疗泡型包虫病药物中的应用，其特征在于Toll样受体激动剂Resiquimod抑制感染泡型包虫病小鼠的给药浓度为2mg/kg，给药方式为腹腔注射。