CN116529360A

CN116529360A - 用于刺激γδT细胞的方法和组合物

Info

Publication number: CN116529360A
Application number: CN202180055630.7A
Authority: CN
Inventors: A·科皮克; J·奥耶; T·迪芬塔勒尔; G·帕克斯
Original assignee: University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF
Current assignee: University of Central Florida Research Foundation Inc UCFRF
Priority date: 2020-08-12
Filing date: 2021-08-12
Publication date: 2023-08-01
Also published as: BR112023002464A2; WO2022036024A2; IL300530A; CA3189137A1; AU2021324767A1; EP4196133A2; WO2022036024A3; MX2023001792A; WO2022036024A9; KR20230048046A; JP2023544240A; US20240010976A1

Abstract

本发明描述了用于刺激γδT田胞扩增和细胞毒性的组合物和方法。描述了使用扩增和刺激的γδT田胞的治疗组合物和方法。

Description

用于刺激γδT细胞的方法和组合物

背景技术

利用先天效应细胞群(诸如γδT细胞)的细胞疗法为各种疾病提供了有前途的治疗平台。由于这些免疫细胞以有限的数量存在于血液中，因此细胞疗法的应用需要有效的细胞扩增方法，以便能够产生足以产生治疗剂量的细胞数量。充分实现γδT细胞疗法的临床潜力的挑战包括获得大量表现出高细胞毒性的健壮、健康的γδT细胞；将γδT细胞靶向疾病靶标的能力；并且，一旦引入到患者体内，使γδT细胞在体内充分存留以达到治疗效果。需要的是扩增γδT细胞的组合物和方法及其用于治疗疾病的用途。

发明内容

此处设想的本发明包括用于扩增γδT细胞的组合物及其用途，该γδT细胞包含抗体的Fc结构域，该Fc结构域能够激动Fc受体(例如，CD16)，结合到饲养细胞、工程化颗粒、外来体或一些其他固体支持物上。具有结合的Fc结构域的饲养细胞、工程化颗粒、外来体和其他固体支持物还可包含一种或多种附加γδT细胞效应剂，诸如膜结合的IL-21、4-1BBL、其他细胞因子、粘附分子和/或同时参与其他刺激性(或可能抑制性)受体和对应的信号传导通路结合的γδT细胞活化剂。上述试剂与Fc受体(例如，CD16)的结合导致初始γδT细胞群的扩增，其中通过扩增产生的细胞比初始细胞群具有更高的细胞毒性。此外，如果NK细胞在扩增前未被移除，则此方法可能导致γδT细胞和NK细胞的共同扩增。这两个细胞群的结合可产生更广泛的抗肿瘤功能，从而产生更好的疗效。这样的γδT细胞或γδT细胞/NK细胞混合物可用作治疗疾病的治疗剂。

在一些方面，本文公开了一种用于诱导、活化和/或扩增γδT细胞的方法，该方法包括使至少一种γδT细胞与工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物接触，该工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物包含通过跨膜结构域结合到其外表面的Fc结构域。跨膜结构域可以是神经氨酸酶的跨膜结构域、来自副流感病毒血凝素-神经氨酸酶的信号锚序列、来自转铁蛋白受体的信号锚序列、来自MHC II类不变链的信号锚序列、来自P糖蛋白的信号锚序列、来自去唾液酸糖蛋白受体的信号锚序列和来自中性内肽酶的信号锚序列。在一些实施方案中，该跨膜结构域包含副流感病毒血凝素-神经氨酸酶(NA)肽序列，该肽序列包含与SEQ ID NO：1具有至少81％同一性的序列。跨膜结构域和Fc结构域可通过肽接头连接。

在一些实施方案中，Fc结构域包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgE的免疫球蛋白Fc结构域。在一些实施方案中，Fc结构域结合到CD16。

饲养细胞可以是外周血单核细胞(PBMC)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、抗原呈递细胞或微生物细胞或细胞系，其中该细胞系可以是RPMI8866、HFWT、721.221、K562或EBV-LCL。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法还包括使该至少一种γδT细胞与至少一种γδT细胞效应剂接触，其中该至少一种γδT细胞效应剂在工程化饲养细胞(即，膜结合(mb))、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物的外表面上表达或结合到该外表面。该至少一种γδT细胞效应剂可以是细胞因子、粘附分子或γδT细胞活化剂。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21，或它们的任何组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-15；4-1BBL和IL-18；4-1BBL、IL-15和IL-21；4-1BBL、IL-18和IL-21；4-1BBL、IL-15和IL-18；或4-1BBL、IL-15、IL-18和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-15；mb4-1BBL和mbIL-18；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-18和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-18；或mb4-1BBL、mbIL-15、mbIL-18和mbIL-21)以及膜结合的和非结合的效应剂的组合。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法包括使该至少一种γδT细胞与饲养细胞、工程化颗粒、外来体或固体支持物在体外、体内或离体接触。在一些实施方案中，扩增的γδT细胞包含Vδ2亚型和/或Vδ1亚型。γδT细胞可以是自体的、单倍体相合的或同种异体的γδT细胞。在一些实施方案中，γδT细胞扩增至少14天，其中扩增细胞中至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％或60％的细胞是Vδ2亚型的γδT细胞。

在一些实施方案中，γδT细胞在14天内以比对照γδT细胞群更快的速率扩增。

根据任一前述方面的方法扩增的γδT细胞可以是分离的细胞群或在混合细胞群中。可在γδT细胞扩增之前、期间或之后耗尽混合细胞群中的NK细胞。

在一些方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，包括向受试者施用治疗有效量的根据任一前述方面的方法扩增、活化或诱导的γδT细胞。

在一些方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，该方法包括

a.获得至少一种γδT细胞；

b.使该至少一种γδT细胞与工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物接触，该工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域；

c.向受试者施用治疗有效量的接触后的γδT细胞。

在一些实施方案中，步骤b还包括在与工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物接触后诱导、活化和/或扩增该至少一种γδT细胞，该工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域，其中该γδT细胞被诱导、活化和/或扩增至少14天。

在一些实施方案中，工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物还可包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21，或它们的任何组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-15；4-1BBL和IL-18；4-1BBL、IL-15和IL-21；4-1BBL、IL-18和IL-21；4-1BBL、IL-15和IL-18；或4-1BBL、IL-15、IL-18和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-15；mb4-1BBL和mbIL-18；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-18和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-18；或mb4-1BBL、mbIL-15、mbIL-18和mbIL-21)以及膜结合的和非结合的效应剂的组合。

在一些方面，本文公开了一种通过在受试者体内扩增、诱导和/或活化内源性γδT细胞来治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物，该工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域，其中该工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物还可包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21，或它们的任何组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-15；4-1BBL和IL-18；4-1BBL、IL-15和IL-21；4-1BBL、IL-18和IL-21；4-1BBL、IL-15和IL-18；或4-1BBL、IL-15、IL-18和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-15；mb4-1BBL和mbIL-18；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-18和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-18；或mb4-1BBL、mbIL-15、mbIL-18和mbIL-21)以及膜结合的和非结合的效应剂的组合。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法还包括向受试者施用离体组合物，该组合物包含融合蛋白，该融合蛋白包含连接到Fc结构域的氨基末端并结合到工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物的跨膜结构域，使该组合物与分离的混合细胞群接触，该混合细胞群包含至少一种包含CD16或其功能片段的γδT细胞。在一些实施方案中，该离体组合物还包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21，或它们的任何组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-15；4-1BBL和IL-18；4-1BBL、IL-15和IL-21；4-1BBL、IL-18和IL-21；4-1BBL、IL-15和IL-18；或4-1BBL、IL-15、IL-18和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-15；mb4-1BBL和mbIL-18；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-18和mbIL-21；mb4-1BBL、mbIL-15和mbIL-18；或mb4-1BBL、mbIL-15、mbIL-18和mbIL-21)以及膜结合的和非结合的效应剂的组合。工程化质膜颗粒可包括质膜和多个微粒或支持物表面，其中该质膜包覆多个微粒或支持物表面。在一些实施方案中，该多个微粒或表面包括磁性微粒、二氧化硅珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠、微结构、造影剂和癌症治疗剂中的至少一种。

本文公开的方法用于治疗癌症，其中该癌症选自血液癌、淋巴瘤、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肾癌、皮肤癌、宫颈癌、胰腺癌和乳腺癌。在一个方面，癌症包括实体瘤。在另一方面，癌症选自急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、骨髓纤维化、多发性骨髓瘤。在另一方面，癌症选自白血病、淋巴瘤、肉瘤、癌，并且可来源于骨髓、脑、肺、乳腺、胰腺、肝、头颈、皮肤、生殖道、前列腺、结肠、肝、肾、腹膜、骨、关节、眼。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法还包括向受试者联合施用至少一种癌症治疗剂和组合物，其中该至少一种癌症治疗剂选自：阿贝西利、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(本妥昔单抗)、ADE、恩美曲妥珠单抗、阿霉素(盐酸多柔比星)、双马来酸盐阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地白介素、Alecensa(阿来替尼)、阿来替尼、阿仑单抗、Alimta(培美曲塞二钠)、Aliqopa(盐酸库潘尼西)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片剂(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、布吉他滨(布加替尼)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、菊欧文氏菌天冬酰胺酶、阿特珠单抗、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、阿维鲁单抗、阿西替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维鲁单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、倍利妥(博纳吐单抗)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(苹果酸卡博替尼)、苹果酸卡博替尼、CAF、坎帕斯(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶--局部用药)、卡铂、卡铂-泰素、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、希瑞适(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、氯福雷司(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(苹果酸卡博替尼)、盐酸库潘尼西、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(更生霉素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉非尼、达卡巴嗪、Dacogen(地西他滨)、更生霉素、达雷木单抗、Darzalex(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸柔红霉素、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷钠、Defitelio(去纤苷钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸右雷佐生、地努图希单抗、多西他赛、Doxil(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、德瓦鲁单抗、Efudex(氟尿嘧啶--局部用药)、Elitek(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、埃罗妥珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、艾曲波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(埃罗妥珠单抗)、恩西地平甲磺酸盐、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、爱必妥(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(菊欧文氏菌天冬酰胺酶)、阿米福汀(氨磷汀)、Etophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、迈维宁(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶注射液)、5-FU(氟尿嘧啶--局部用药)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、芙仕得(氟维司群)、FEC、弗隆(来曲唑)、非格司亭、福达华(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(氟尿嘧啶--局部用药)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶--局部用药、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、FolexPFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV九价疫苗)、Gazyva(奥妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、吉泰瑞(双马来酸盐阿法替尼)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel晶片(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、美新(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸普纳替尼)、伊达霉素(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、艾德拉尼、Idhifa(恩西地平甲磺酸盐)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(Talimogene Laherparepvec)、Inlyta(阿西替尼)、奥英妥珠单抗、重组干扰素α-2b、干扰素-2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、枸橼酸伊沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(恩美曲妥珠单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、可瑞达(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(替沙仑赛)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(奥拉单抗)、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、瘤可宁(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、洛莫司汀、朗斯弗(曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶)、利普安(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝-派德(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、甲基苄肼(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、突变霉素(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥珠单抗奥佐米星)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(培非格司亭)、优保津(非格司亭)、多吉美(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(枸橼酸伊沙佐米)、甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物、纳武单抗、诺瓦得士(枸橼酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥妥珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸昂丹司琼、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(地尼白介素)、欧狄沃(纳武单抗)、OPPA、奥希替尼、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、伯尔定(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、佩乐能(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸普纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、普罗力(地诺单抗)、Promacta(艾曲波帕)、盐酸普萘洛尔、普列威(Sipuleucel-T)、Purinethol(巯嘌呤)、Purixan(巯嘌呤)、镭223二氯、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)九价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、盐酸罗拉吡坦、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸柔红霉素)、鲁卡帕尼(樟脑磺酸卢卡帕尼)、樟脑磺酸卢卡帕尼、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、无菌滑石粉气雾剂(滑石粉)、司妥昔单抗、Sipuleucel-T、Somatuline Depot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORDV、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、Tagrisso(奥希替尼)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、枸橼酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、泰素(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、Tecentriq(阿特珠单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、硫鸟嘌呤、噻替派、替沙仑赛、Tolak(氟尿嘧啶一局部用药)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、坦罗莫司(替西罗莫司)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、Trametinib、曲美替尼、曲妥珠单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶、Trisenox(三氧化二砷)、泰立沙(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(地努图希单抗)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Varubi(盐酸罗拉匹坦)、维克替比(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、万珂(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、维奈妥拉(维奈托克)、维奈托克、玻玛西林(阿贝西利)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、维莫德吉、Vistogard(尿苷三乙酸酯)、Voraxaze(谷卡匹酶)、伏立诺他、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、多菲戈(镭223二氯)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Yondelis(曲贝替定)、Zaltrap(阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物)、Zelboraf(维罗非尼)、泽娃灵(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、阿柏西普、Zofran(盐酸昂丹司琼)、诺雷德(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、择泰(唑来膦酸)、Zydelig(艾德拉尼)、赞可达(色瑞替尼)和/或泽珂(醋酸阿比特龙)。在一些实施方案中，该至少一种癌症治疗剂选自化疗剂(例如CHOP、FLAG、7+3)、基于药物的制备方案或它们的组合。(Cy-Flu、Bu-Flu、Flu-Mel)。

在一些方面，工程化颗粒还包含一种或多种γδT效应剂。在一些方面，工程化颗粒还包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该γδT细胞效应剂是IL-21。在另一方面，该工程化颗粒还包含至少两种γδT细胞效应剂，其中该至少两种γδT细胞效应剂之一是IL-2。

在一些方面，本文公开的方法用于治疗由病毒感染引起的感染性疾病，其中该病毒感染包括单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒-2、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒-6、天花病毒、水疱性口炎病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹病毒、多瘤病毒、人乳头瘤病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、劳斯肉瘤病毒、呼肠孤病毒、黄热病病毒、寨卡病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、东部马脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累河谷热病毒、西尼罗河病毒、裂谷热病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、辛德毕斯病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人T细胞白血病病毒1型、汉坦病毒、风疹病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型或人免疫缺陷病毒2型的感染。

在一些方面，本文公开的方法用于治疗由细菌感染引起的感染性疾病，其中该细菌感染包括结核分枝杆菌(Mycobaterium tuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobateriumbovis)、牛分枝杆菌菌株BCG、BCG亚株、鸟分枝杆菌(Mycobaterium avium)、胞内分枝杆菌(Mycobaterium intracellular)、非洲分枝杆菌(Mycobaterium africanum)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobaterium kansasii)、海洋分枝杆菌(Mycobaterium marinum)、溃疡分枝杆菌(Mycobaterium ulcerans)、鸟分枝杆菌副结核亚种、星状诺卡氏菌(Nocardiaasteroides)、其他诺卡氏菌属(Nocardia)物种、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、其他军团菌属(Legionella)物种、鲍曼不动杆菌(Acetinobacter baumanii)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)、其他沙门氏菌属(Salmonella)物种、鲍氏志贺菌(Shigella boydii)、痢疾志贺菌(Shigelladysenteriae)、宋内志贺菌(Shigella sonnei)、福氏志贺菌(Shigellaflexneri)、其他志贺菌属(Shigella)物种、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、溶血性巴氏杆菌(Pasteurella haemolytica)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、其他巴氏杆菌属(Pasteurella)物种、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、其他布鲁氏菌属(Brucella)物种、反刍类考德里氏体(Cowdria ruminantium)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、禽波氏杆菌(Bordetella avium)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、支气管败血博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、创口博德特氏菌(Bordetella trematum)、欣茨博德特氏菌(Bordetellahinzii)、Bordetella pteri、副百日咳博德特氏菌(Bordetellaparapertussis)、Bordetella ansorpii、其他博德特氏菌属(Bordetella)物种、鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderiapsuedomallei)、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacian)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci)、贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)、立克次体属(Rickettsial)物种、埃立克体属(Ehrlichia)物种、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、化脓性链球菌(Streptococcuspyogenes)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、弯曲杆菌属(Campylobacter)物种、脑膜炎奈瑟菌(Neiserria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neiserria gonorrhea)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、其他假单胞菌属(Pseudomonas)物种、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、其他嗜血杆菌属(Hemophilus)物种、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、其他梭菌属(Clostridium)物种、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterolitica)和其他耶尔森氏菌属(Yersinia)物种以及支原体属(Mycoplasma)物种的感染。

在一些方面，本文公开的方法用于治疗由真菌感染引起的感染性疾病，其中该真菌感染包括白色念珠菌(Candida albicans)、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplama capsulatum)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、粗球孢子菌(Coccidiodes immitis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidiodes brasiliensis)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermitidis)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、马尔尼菲青霉菌(Penicillium marneffi)或互隔交链孢霉(Alternaria alternate)的感染。

在一些方面，本文公开的方法用于治疗由寄生虫感染引起的感染性疾病，其中该寄生虫感染包括刚地弓形虫(Toxoplasma Rondii)、恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)、其他疟原虫属物种、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、福氏耐格里阿米巴(Naegleriafowleri)、鼻孢子虫(Rhinosporidium seeberi)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、蠕形住肠线虫(Enterobius vermicularis)、格氏蛲虫(Enterobius gregorii)、蛔虫(AscariS lumbricoides)、十二指肠钩口线虫(Ancylostoma duodenale)、美洲钩虫(Necator americanus)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、硕大利什曼原虫(Leishmania major)、其他利什曼原虫属物种、阔节裂头绦虫(Diphyllobothriumlatum)、短膜壳绦虫(Hymenolepis nana)、长膜壳绦虫(Hymenolepis diminuta)、细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、多房棘球绦虫(Echinoccus multilocularis)、伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli)、少节棘球绦虫(Echinococcus oligarthrus)、阔节裂头绦虫、华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)；Clonorchis viverrini、肝片吸虫(Fasciola hepatica)、大片吸虫(Fasciolagigantica)、枝双腔吸虫(Dicrocoelium dendriticum)、布氏姜片虫(Fasciolopsisbuski)、横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawai)、泰国肝吸虫(Opisthorchisviverrini)、猫后睾吸虫(Opisthorchis felineus)、华支睾吸虫、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)物种、间插血吸虫(Schistosomaintercalatum)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)、日本血吸虫(Schistosomajaponicum)、曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、其他血吸虫属物种、毛毕属血吸虫(Trichobilharzia regenti)、旋毛虫(Trichinella spiralis)、布氏旋毛虫(Trichinellabritovi)、纳氏旋毛虫(Trichinella nelsoni)、本地旋毛虫(Trichinella nativa)或溶组织内阿米巴的感染。

在一些方面，在任一前述方面的方法中施用的γδT细胞配制在药学上可接受的载体和药学上可接受的赋形剂中。

在一些方面，任一前述方面的方法包括在肠胃外、静脉内、腹膜内或皮下或通过动脉输注、静脉输注或人工导管介导的输注施用γδT细胞。

还应当理解，本文所述的任何治疗方法也被认为是如本文公开的任何组合物用于治疗本文公开的任何癌症或感染性疾病的医学用途。

附图说明

图1示出了Fc对CSTX-002饲养细胞的T细胞扩增的影响。在CSTX-002(K562-mb21-41BBL)细胞系中包含Fc导致经过14天T细胞扩增增加。使用不同长度的神经氨酸酶(NA)茎将Fc锚定到细胞膜上，NA2最短，而NA4最长。在用含Fc的CSTX-002细胞刺激的所有培养物中观察到T细胞含量增加，并且最长的NA片段导致最终T细胞含量最高。

图2示出了用CSTX-002-Fc刺激导致γδT细胞扩增。在使用来自不同供体的PBMC进行的后续实验中，证实在XSTX-002细胞上包含NA-Fc导致T细胞扩增。T细胞的表型分析表明，这些细胞的大部分由γδT细胞组成，Vδ2细胞在用表达NA-Fc的CSTX-002饲养细胞刺激后优先扩增。具有最长NA茎的构建体产生了最高的Vδ2细胞最终含量。

图3示出了NA茎的长度和起始材料对γδT细胞扩增的影响。NA-Fc构建体的较长NA茎导致Vδ2亚型的γδT细胞的更大扩增。NA4比NA2长。

图4示出了Fc选择性地诱导Vδ2亚型的γδT细胞的扩增。该扩增不依赖于NK细胞的存在。从四个不同的供体获得的PBMC为耗尽CD56的(以去除NK细胞)或未耗尽CD56的，并用在细胞表面表达或不表达Fc结构域的XSTX-002细胞刺激。在14天的培养时间内定期监测Vδ2T细胞含量。图4描绘了所有四个供体的Vδ2细胞的累积理论扩增。在XSTX-002细胞上包含Fc导致所有测试的供体中的T细胞扩增。T细胞的表型分析表明，这些细胞的大部分由γδT细胞组成，Vδ2细胞在用表达NA-Fc的CSTX-002饲养细胞刺激后优先扩增。NK细胞的耗尽不会对Vδ2细胞的扩增产生负面影响。

图5示出了Fc选择性地诱导Vδ2亚型的γδT细胞的扩增。该扩增不依赖于NK细胞的存在。从两个不同的供体获得的PBMC为耗尽CD56的(以去除NK细胞)或未耗尽CD56的，并用在细胞表面表达或不表达Fc结构域的CSTX-002细胞刺激。在14天的培养时间内定期监测Vδ2T细胞含量。上图描绘了第14天Vδ2细胞的累积理论扩增。在CSTX-002细胞上包含Fc导致所有测试的供体中的Vδ2T细胞的显著扩增(p＝001)。NK细胞的耗尽不会对Vδ的扩增产生负面影响。

图6示出了Fc选择性地诱导Vδ2亚型的γδT细胞的扩增。该扩增不依赖于NK细胞的存在。从四个不同的供体获得的PBMC为耗尽CD56的(以去除NK细胞)或未耗尽CD56的，并用在细胞表面表达或不表达Fc结构域的CSTX-002细胞刺激。这些图描绘了供体之一的培养物在第14天的最终细胞含量的示例。在CSTX-002细胞上包含Fc导致Vδ2T细胞含量的显著增加。NK细胞的耗尽不会对Vδ2细胞的扩增产生负面影响。

图7A和图7B示出了包含未切割信号锚的膜结合免疫细胞靶向配体的构建。图7A示出了I型和II型整合膜蛋白的结构，它们在其N末端和C末端的取向不同。图7B示出了用作膜结合免疫细胞靶向配体的NA-Fc嵌合蛋白的结构，其由用作膜锚的神经氨酸酶跨膜结构域、茎区和人IgG′Fc区组成。

图8示出了包含Fc结构域的膜结合免疫细胞靶向配体的替代构造，该Fc结构域包含神经氨酸酶(NA)信号锚和增加的NA茎长度。

图9示出了膜结合免疫细胞靶向配体序列的示例，其中NA信号锚通过RS接头与IgGFc结构域融合。

图10A至图10B示出了NA1-Fc的氨基酸序列(图10A)和核酸序列(图10B)。

图11A至图11B示出了NA2-Fc的氨基酸序列(图11A)和核酸序列(图11B)。

图12A至图12B示出了NA3-Fc的氨基酸序列(图12A)和核酸序列(图12B)。

图13A至图13B示出了NA4-Fc的氨基酸序列(图13A)和核酸序列(图13B)。

具体实施方式

在公开和描述本发明的化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应当理解，除非另外指明，否则它们不限于特定的合成方法或特定的重组生物技术方法，或除非另外指明，否则不限于特定的试剂，因此当然可能会改变。还应当理解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案的目的，并非旨在进行限制。

定义

在整个本申请中，引用了各种出版物。这些出版物的全部公开内容据此通过引用方式并入本申请，以便更全面地描述其所属的现有技术。所公开的参考文献也因其中所包含的材料单独且具体地通过引用方式并入本文，在依赖该参考文献的句子中对该材料进行了讨论。

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常所理解的含义。以下参考文献为技术人员提供了本发明中使用的术语中的许多术语的一般定义：Singleton等人，《Dictionary of Microbiology and MolecularBiology》(第2版，1994年)；《The Cambridge Dictionary of Science and Technology》(Walker编辑，1988年)；《The Glossary of Genetics》，第5版，R.Rieger等人(编辑)，Springer Verlag(1991年)；和Hale&Marham，《The Harper Collins Dictionary ofBiology》(1991年)。如本文所用，除非另外指明，否则以下术语具有赋予它们的含义。

在介绍本公开或其优选实施方案的要素时，冠词“一种”、“一个”、“该”和“所述”旨在表示要素中的一个或多个要素。术语“包括”、“包含”和“具有”旨在具有包容性，并表示可能存在除所列元素之外的附加元素。

范围可在本文中表示为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表示此类范围时，另一个实施方案包括从该一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，特定值形成另一个实施方案。还应当理解，这些范围中的每个范围的端点无论是相对于另一端点还是独立于另一端点都是重要的。还应当理解，本文公开了多个值，并且每个值在本文中除了公开为值本身之外，也公开为“约”该特定值。例如，如果公开了值“10”，则也公开了“约10”。还应当理解，当公开值时，也公开了“小于或等于”该值、“大于或等于该值”和值之间的可能范围，如本领域技术人员适当地理解的那样。例如，如果公开了值“10”，则还公开了“小于或等于10”以及“大于或等于10”。还应当理解，在整个申请中，数据以多种不同的格式提供，并且该数据表示端点和起点以及数据点的任何组合的范围。例如，如果公开了特定数据点“10”和特定数据点15，则应当理解，认为公开了大于、大于或等于、小于、小于或等于、和等于10和15，以及在10和15之间。还应当理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则也公开了11、12、13和14。

如本文所用，术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可能发生或可能不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的实例以及没有发生的实例。

术语“接头”至少是指具有一个多肽的连接位点和另一个多肽的连接位点的二价部分。例如，多肽可在其N末端、其C末端或通过侧链之一上的官能团连接至接头。该接头足以将两个多肽分开至少一个原子，并且在一些实施方案中分开多于一个原子。

如本文所用，“N末端侧”或“氨基末端”是指肽、多肽或蛋白质的方向性并且可能不表示N末端。在一些方面，在讨论嵌合或融合肽、多肽或蛋白质的情况下，N末端侧可仅指嵌合或融合肽、多肽或蛋白质的组分，而不是整个结构。例如，在讨论Fc结构域并且Fc结构域被描述为与其面向细胞内的氨基末端或N末端侧融合的情况下，本文设想的是嵌合或融合肽、多肽或蛋白质，其中信号锚位于嵌合或融合构建体的N末端，并实际上横跨细胞膜。因此，在这样的嵌合体中，跨膜锚附接至Fc结构域的氨基末端侧，并且Fc结构域的方向性使得N末端侧面向细胞，这相对于典型B细胞上的Fc结构域是倒置的，典型B细胞上的Fc结构域的羧基端部通常横跨细胞膜并且氨基末端延伸至细胞外基质。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物。

如本文所用，术语“序列同一性”指示两条基本上相等长度的序列之间同一性程度的定量量度。两条序列(无论是核酸序列还是氨基酸序列)的同一性百分比是两条比对序列之间的精确匹配数除以较短序列的长度并乘以100。核酸序列的近似比对由Smith和Waterman，《Advances in Applied Mathematics》，第2卷：第482-489页(1981年)的局部同源性算法提供。该算法可通过使用由Dayhoff开发(《Atlas of Protein Sequences andStructure》，M.O.Dayhoff编辑，增刊5，第3卷：第353-358页，National BiomedicalResearch Foundation，Washington，D.C.，USA)并由Gribskov(Nucl.Acids Res.，第14卷第6期：第6745-6763页(1986年))归一化的评分矩阵应用于氨基酸序列。该算法的确定序列的同一性百分比的示例性具体实施由Genetics Computer Group(Madison，Wis.)在“BestFit”工具应用程序中提供。用于计算序列之间的同一性或相似性百分比的其他合适的程序在本领域中通常是已知的，例如，另一种比对程序是以默认参数使用的BLAST。例如，可使用采用以下默认参数的BLASTN和BLASTP：遗传密码＝标准；过滤器＝无；链＝两条；截止值＝60；期望值＝10；矩阵＝BLOSUM62；描述＝50条序列；排序方式＝高分；数据库＝非冗余，GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+GenBank CDS平移+Swiss蛋白+Spupdate+PIR。这些程序的详细信息可见于GenBank网站。通常，取代是保守氨基酸取代，仅限于以下组成员内的交换：组1：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；组2：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸；组3：脯氨酸；组4：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；组5：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。

用于确定核酸和氨基酸序列同一性的技术是本领域已知的。通常，此类技术包括确定基因的mRNA的核苷酸序列和/或确定由其编码的氨基酸序列，并将这些序列与第二核苷酸或氨基酸序列进行比较。也可按这种方式确定和比较基因组序列。通常，“同一性”是指两个多核苷酸或多肽序列的精确核苷酸对核苷酸或氨基酸对氨基酸分别对应。可通过确定两条或多条序列(多核苷酸或氨基酸)的同一性百分比来比较它们。

由于在不脱离本发明范围的情况下可以对上述细胞和方法进行各种改变，因此旨在以上描述和以下给出的示例中包含的所有内容都应解释为说明性的，而不具有限制意义。

“增加”可以指导致更大量的症状、疾病、组合物、病症或活性的任何变化。增加可以是病症、症状、活性、组合物以统计上显著量的任何单独、中值或平均增加。因此，增加可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％增加，只要增加是统计上显著的。

“减少”可以指导致更小量的症状、疾病、组合物、病症或活性的任何变化。当含有某物质的基因产物的遗传输出相对于不含该物质的基因产物的输出更少时，该物质也被理解为减少基因的遗传输出。又例如，减少可以是障碍的症状改变，使得症状比先前观察到的要少。减少可以是病症、症状、活性、组合物以统计上显著量的任何单独、中值或平均减少。因此，减少可以是1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％减少，只要减少是统计上显著的。

“抑制(Inhibit/inhibiting/inhibition)”意指活性、应答、病症、疾病或其他生物学参数下降。这可包括但不限于活性、应答、病症或疾病的完全消融。这还可包括例如与天然或对照水平相比，活性、应答、病症或疾病降低10％。因此，降低可以是与天然或对照水平相比，10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或介于其间的任何量的降低。

所谓的“降低(动词)”或该词的其他形式诸如动名词或名词形式意指事件或特征(例如，肿瘤生长)变少。应当理解，这通常与某一标准或预期值有关，换句话讲，它是相对的，但并不总是需要参考标准或相对值。例如，“降低肿瘤生长”意指降低肿瘤相对于标准或对照的生长速率。

所谓的“预防(动词)”或该词的其他形式诸如动名词或名词形式意指停止特定事件或特征，稳定或延迟特定事件或特征的发展或进展，或最大程度减少特定事件或特征发生的机会。“预防”不需要与对照进行比较，因为它通常比例如“降低”更绝对。如本文所用，一些情况可降低但不能预防，但是一些情况既可降低也能预防。同样，一些情况可预防但不能降低，但是一些情况既可预防也能降低。应当理解，在使用“降低”或“预防”的情况下，除非另外指明，否则也明确公开了另一个词的使用。

术语“受试者”是指作为施用或治疗目标的任何个体。受试者可以是脊椎动物，例如哺乳动物。在一个方面，受试者可以是人、非人灵长类动物、牛、马、猪、犬科动物或猫科动物。受试者也可以是豚鼠、大鼠、仓鼠、兔、小鼠或鼹鼠。因此，受试者可以是人或兽医患者。术语“患者”是指正接受临床医生例如医师治疗的受试者。

术语“治疗有效”是指所用组合物的量是足以改善疾病或障碍的一种或多种原因或症状的量。这种改善只需要减少或改变，不一定需要消除。

术语“治疗”是指旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理病症或障碍的患者的医疗管理。该术语包括积极治疗，即，专门针对疾病、病理病症或障碍的改善的治疗，并且还包括因果治疗，即针对相关疾病、病理病症或障碍原因的消除的治疗。此外，该术语包括姑息治疗，即，旨在缓解症状而不是治愈疾病、病理病症或障碍的治疗；预防性治疗，即旨在最大程度减少或部分或完全抑制相关疾病、病理病症或障碍的发展的治疗；和支持性治疗，即用于对针对相关疾病、病理病症或障碍的改善的另一种特定疗法进行补充的治疗。

向受试者“施用”包括向受试者引入或递送药剂的任何途径。施用可通过任何合适的途径进行，包括口服、局部、静脉内、皮下、经皮、透皮、肌内、关节内、肠胃外、小动脉内、皮内、心室内、颅内、腹膜内、病灶内、鼻内、直肠、阴道、通过吸入、经由植入型药盒、肠胃外(例如，皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、腹膜内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术)等。如本文所用，“并行施用”、“联合施用”、“同时施用”或“同时地施用”意指化合物在同一时间点施用或基本上彼此紧接着施用。在化合物基本上彼此紧接着施用的情况下，这两种化合物的施用时间足够接近，使得所观察到的结果与当化合物在同一时间点施用时所获得的结果没有区别。“全身施用”是指经由将药剂引入或递送至受试者身体的广泛区域(例如，大于身体的50％)的途径，例如通过进入循环系统或淋巴系统的入口向受试者引入或递送药剂。相比之下，“局部施用”是指经由将药剂引入或递送至施用点的区域或紧邻施用点的区域的途径将药剂引入或递送至受试者，并且不以治疗上显著量全身性地引入药剂。例如，局部施用的药剂在施用点的局部附近很容易被检测到，但在受试者身体的远侧部分检测不到或检测到的量可忽略不计。施用包括自我施用和经他人施用。在一些实施方案中，本文公开的组合物通过肠胃外、静脉内、腹膜内或皮下施用，或通过动脉输注、静脉输注或人工导管介导的输注施用。

如本文所用，“治疗(Treat/treating/treatment)”及其语法变型包括旨在或意在部分或完全预防、延迟、治愈、愈合、减轻、缓解、改变、补救、改善、改进、稳定、减缓疾病或病症的症状、或疾病或病症的根本原因和/或降低一种或多种疾病或病症的强度或频率的组合物的施用。根据本发明的治疗可预防性地(preventively/prophylactically)、姑息性地或治疗性地应用。在发病之前(例如，在明显的癌症迹象之前)、在早期发病期间(例如，在癌症的初始迹象和症状时)或在确诊癌症的发展之后，向受试者施用预防性治疗。预防性施用可在疾病或感染的症状出现前的数天至数年内进行。

组合物和方法

此处设想的本发明是用于扩增γδT细胞的组合物及其用途，该γδT细胞包含抗体的Fc结构域，该Fc结构域能够激动Fc受体(例如，CD16)，结合到饲养细胞、工程化颗粒、外来体或一些其他固体支持物上。具有结合的Fc结构域的这些饲养细胞、工程化颗粒、外来体和其他固体支持物还可包含其他刺激因子，诸如膜结合的IL-21、4-1BBL、其他细胞因子或同时参与其他刺激性(或可能抑制性)受体和对应的信号传导通路的其他化学部分。如上所述，在临床应用中利用γδT细胞仍然存在挑战。本文公开的组合物和方法在体内和/或体外诱导、激活和/或扩增γδT细胞方面显示出令人惊讶的效果。扩增的γδT细胞能有效治疗疾病诸如癌症或感染性疾病。

I.肽

因此，本文公开了γδT细胞扩增组合物，其中该组合物是包含膜结合Fc融合肽的工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体、工程化淋巴细胞(例如，淋巴细胞(诸如T细胞)，其被工程化表达Fc结构域以刺激γδT细胞)和固体支持物(在本文中分别称为Fc结合的饲养细胞、Fc结合的工程化质膜颗粒和Fc结合的外来体、Fc结合的淋巴细胞)，其中该Fc融合肽包含与Fc结构域的氨基末端或羧基末端连接的跨膜肽结构域。在一个方面，Fc融合肽的跨膜结构域可包含切割或未切割的信号锚序列，诸如神经氨酸酶的跨膜结构域、来自副流感病毒血凝素-神经氨酸酶的信号锚、来自转铁蛋白受体的信号锚、来自MHC II类不变链的信号锚、来自P糖蛋白的信号锚、来自去唾液酸糖蛋白受体的信号锚或来自中性内肽酶的信号锚。在一个示例中，该跨膜结构域包含副流感病毒血凝素-神经氨酸酶(NA)肽序列。跨膜神经氨酸酶(NA)肽结构域可将Fc结构域偶联或结合到饲养细胞的外表面。在其他方面，跨膜神经氨酸酶(NA)肽结构域用于将Fc结构域偶联或结合至工程化饲养细胞、工程化质膜纳米颗粒、外来体或固体支持物的外表面。在一些实施方案中，NA肽结构域由N末端细胞质尾、用作跨膜结构域的未切割信号锚和从质膜延伸的茎区组成。应当理解，茎区的长度可变化，其中茎区的长度影响表面结合的Fc结构域-NA肽在刺激γδT细胞扩增中的功效。

在一些实施方案中，跨膜结构域包含副流感病毒血凝素-神经氨酸酶(NA)肽序列。在一些实施方案中，NA肽结构域包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的序列。跨膜结构域和Fc结构域可通过肽接头连接。

Fc结构域是γδT细胞表面受体CD16(FcγRIII)所结合的配体。CD16是γδT细胞上的主要受体之一，该受体结合到抗体的Fc部分(例如，IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4 Fc结构域)。在另一方面，Fc结构域(IgG1、IgG2、IgG3和/或IgG4)也可结合其他免疫细胞诸如肥大细胞、巨噬细胞或抗原呈递细胞上的CD16受体。在另一方面，其他类型的细胞可被工程化为Fc结合的。本公开公开了Fc结合的工程化饲养细胞、Fc结合的工程化质膜颗粒、Fc结合的外来体或Fc结合的固体支持物。

在另一方面，除IgG之外的其他Fc免疫球蛋白同种型(IgA、IgE、IgM)可用于刺激分别对应的不同Fc受体以刺激其他免疫细胞类型。例如，结构域FcαRI(CD89)特异性结合到巨噬细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞上的IgA；FcγRI(CD64)特异性结合到单核细胞和巨噬细胞上的IgG；并且FcεRII(CD23)特异性结合到B细胞上的IgE。Fc结合到单核细胞或巨噬细胞上的CD64，从而刺激它们。因此，融合肽、Fc结合的饲养细胞(FC)、Fc结合的淋巴细胞、Fc结合的工程质膜(PM)颗粒、Fc结合的工程化外来体和含有它们的组合物也可用于基本上根据本文所述的用于扩增γδT细胞的方法扩增肥大细胞和/或巨噬细胞。

在一个方面，本文公开了包含免疫球蛋白Fc结构域(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和/或IgE Fc结构域)的融合肽，该免疫球蛋白Fc结构域融合到如上所述的跨膜结构域(例如，NA肽结构域)。Fc结构域可呈现为单体、二聚体或多聚体构建体。在一个方面，可进一步修饰Fc结构域以优化或增强γδT细胞的扩增和/或活化。例如，可修饰Fc结构域以增加对CD16的亲和力。因此，例如，Fc结构域可包含一个或多个突变，例如，T256A、K290A、S298A、E333A、K334A、L235V、F243L、R292P、Y300L和/或P396L。类似地，可进一步修饰Fc结构域以增加结合到活化(IIIa)受体相比于抑制性Fc(IIb)受体的选择性。因此，例如，Fc结构域可包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或更多个突变或替代形式，例如，S239D、1332E、A330L、F243L、R292P、V305I和/或P396L。例如，在一个方面，Fc结构域可被修饰以包含R292L、Y300L、V305I和P396L。在另一个示例中，Fc结构域可被修饰以包含S239D、I332E和A330L。

跨膜结构域(例如，NA肽结构域)可通过化学键直接连接到Fc结构域，或通过接头间接连接。直接化学键是例如共价键(例如，肽键、酯键等)，或者另选地，非共价键(例如，离子键、静电键、氢键、疏水键、范德华相互作用或π-效应)。间接连接可使用接头(即，通过至少一个共价键连接一个或多个其他化学基团的化学基团)来实现。合适的接头包括氨基酸、肽、核苷酸、核酸、二聚铰链Fc、有机接头分子(例如，马来酰亚胺衍生物、N-乙氧基苄基咪唑、联苯-3，4′，5-三羧酸、对氨基苄氧基羰基等)、二硫化物接头和聚合物接头(例如，PEG)。接头可包括一个或多个间隔基团，包括但不限于亚烷基、亚烯基、亚炔基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、芳基、杂芳基、芳烷基、芳烯基、芳炔基等。接头可以是中性的，或者带有正电荷或负电荷。此外，接头可以是可切割的，使得在将该接头连接到另一个化学基团的该接头的共价键可在某些条件下断裂或切割，这些条件包括pH、温度、盐浓度、光、催化剂或酶。在一个方面，NA肽结构域可以是NA4-fc Siadel(S239D/I332E/A330L)。

在一个方面，接头可以是肽接头。合适的肽接头的示例是本领域众所周知的，并且设计接头的程序很容易获得(参见，例如，Crasto等人，Protein Eng.，2000年，第13卷第5期：第309-312页)。肽接头例如可以是限制性位点接头诸如短序列RS，或柔性氨基酸接头(例如，包含小的、非极性的或极性的氨基酸)。柔性接头的非限制性示例包括LEGGGS(SEQID NO：5)、TGSG(SEQ ID NO：6)、GGSGGGSG(SEQ ID NO：7)、(GGGGS)_1-4(SEQ ID NO：8)、(GGGS)_1-4(SEQ ID NO：9)、(GSGGGG)_1-4(SEQ ID NO：1O)和(Gly)_6-8(SEQ ID NO：11)。另选地，肽接头可以是刚性氨基酸接头。此类接头包括(EAAAK)_1-4(SEQ ID NO：12)、A(EAAAK)_2-5A(SEQ ID NO：13)、PAPAP(SEQ ID NO：14)和(AP)_6-8(SEQ ID NO：15)。Fc结构域可连接到NA肽的N末端、C末端和/或内部位置。在一个方面，肽接头可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的短氨基酸序列。在另一方面，肽接头可以是长度为2-10、2-8或2-6个氨基酸中的任一者的氨基酸序列。

在一些实施方案中，Fc融合肽具有与MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：16)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，Fc融合肽具有与MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIRRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：17)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，Fc融合肽具有与MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：18)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，Fc融合肽具有与MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTRSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：19)具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。

为了将Fc结构域靶向放置在质膜上，可使用来自已充分表征的流感病毒神经氨酸酶蛋白(NA)的膜靶向结构域，它由N末端细胞质尾部、用作跨膜结构域的未切割的信号锚以及从质膜延伸的茎区组成。图7A和图7B是示出了包含未切割信号锚的膜结合免疫细胞靶向配体的构建的示意图。图7A示出了I型和II型整合膜蛋白的结构以及各自的信号锚。图7B示出了来自用于膜结合免疫细胞靶向配体的II型整合膜蛋白的未切割信号锚的结构。如图7B所示，根据本公开的示例性但非限制性的构建体由NA-Fc嵌合体组成，其中Fc结构域(IgG1)通过短接头连接至未切割的NA茎区。值得注意的是，可将NA-Fc嵌合体插入重组P/V/F病毒中，以生成一种新型溶瘤病毒，该病毒对肿瘤相比于正常细胞(由于P/V突变)具有特异性，并且可增强NK细胞的ADCC。图8示出了具有增加的NA茎长度的NA-Fc嵌合体的替代构造。

NA-Fc构建体可包含NA肽结构域(SEQ ID NO：1)、接头(例如RS接头)、铰链区DKTHTCPPCPAPELL(SEQ ID NO：20)TCPPCPAPELL(SEQ ID NO：21)和Fc区GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：22)，该Fc区包含CH2结构域GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK(SEQ ID NO：23)和CH3结构域GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：24)。应当理解并且在本文中考虑了，NA-Fc嵌合体可包括来自已充分表征的流感病毒神经氨酸酶蛋白(NA)的任何长度的膜靶向结构域，该膜靶向结构域包括MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIR(SEQ ID NO：2)、MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVF(SEQ IDNO：3)、MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNSSLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLT(SEQ ID NO：4)。

如上所述，Fc区可包含一个或多个突变，例如L234Y、L235V、L235Q、G236W、S239D、S239M、F243L、T256A、K290A、R292P、N297Q、S298A、Y300L、V305I、A330L、I332E、E333A、K334A和/或P396L。因此，本文具体公开了包含残基234处的亮氨酸(L)或酪氨酸(Y)，残基235处的亮氨酸(L)、谷氨酰胺或缬氨酸(V)，残基236处的谷氨酰胺(G)或色氨酸(W)，残基239处的丝氨酸(S)、甲硫氨酸(M)或天冬氨酸(D)，以及残基243处的苯丙氨酸(F)或亮氨酸(L)，残基256处的苏氨酸(T)或丙氨酸(A)，残基268处的组氨酸(H)或天冬氨酸(D)，残基270处的天冬氨酸(D)或谷氨酸(E)，残基290处的赖氨酸(K)或丙氨酸(A)，残基292处的精氨酸(R)或脯氨酸(P)，残基298处的丝氨酸(S)或丙氨酸(A)，残基297处的天冬酰胺或谷氨酰胺，残基300处的酪氨酸(Y)或亮氨酸(L)，残基305处的缬氨酸(V)或异亮氨酸(I)，残基326处的赖氨酸(K)或天冬氨酸(D)，残基330处的丙氨酸(A)、甲硫氨酸(M)或亮氨酸(L)，以及残基332处的异亮氨酸(I)或谷氨酸(E)，残基333处的谷氨酸(E)或丙氨酸(A)，残基334处的赖氨酸(K)、谷氨酸(E)或丙氨酸(A)，和/或残基396处的脯氨酸(P)或亮氨酸(L)的Fc区。应当特别理解的是，没有取代或本文提及的取代中的任一者或二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者、十一者、十二者、十三者、十四者、十五者、十六者或十七者的组合可存在于Fc区中。因此，在一个方面，本文公开了包含Fc区的取代F243L、R292P、Y300L、V305I和P396L的融合蛋白，其中NA4-Fc的序列包含MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNS SLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ IDNO：25)。在一个方面，NA4-Fc融合体包含具有Fc结构域的S293D、I332E和A330L取代，该Fc结构域具有GGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(sEQ ID NO：26)的序列，该NA4-Fc融合体包含具有序列GGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAK(SEQ ID NO：27)的CH2结构域以及MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNS SLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPLPEEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：28)的完整序列。

在另一个示例中，NA-Fc融合体的Fc区包含：具有F243、R292、Y300和V305的CH2结构域，如SEQ ID NO：29GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK所示；和CH3结构域中的P396，如SEQ ID NO：30GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK所示，从而具有这样的Fc区，该Fc区具有序列GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：31)。在一个方面，NA-Fc融合体可包含序列MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNS SLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：32)。在另一个示例中，NA-Fc融合体的Fc区包含：具有F243L、R292P、Y300L和V305I取代的CH2结构域，如SEQ ID NO：33GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK所示；和CH3结构域中的P396L取代，如SEQ ID NO：34GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK所示；以及全长Fc区，具有序列GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：35)；和NA-Fc融合体，具有序列MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNS SLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：36)。

在一个方面，NA4-Fc融合蛋白可包含通过铰链区连接的2个Fc结构域。例如，NA-Fc融合体可包含序列MNPNQKITTIGSICLVVGLISLILQIGNIISIWISHSIQTGSQNHTGICNQNIITYKNSTWVKDTTSVILTGNS SLCPIRGWAIYSKDNSIRIGSKGDVFVIREPFISCSHLECRTFFLTDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPP SREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO：37)。

在另一方面，Fc结构域可以是不对称变体，例如，一个重链Fc结构域可包含L234Y/L235Q/G236W/S239M/H268D/D270E/S298A，而另一个Fc结构域包含D270E/K326D/A330M/K334E。

通常，任何氨基酸取代都是保守的，即，仅限于以下组成员内的交换：组1：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；组2：丝氨酸、半胱氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸；组3：脯氨酸；组4：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；和组5：天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和谷氨酰胺。

在一些实施方案中，NA-Fc融合体由以下序列编码：GAATTCCAGGGGGTTTAAAATGAATCCAAATCAGAAAATAACAACCATTGGATCAATCTGTCTGGTAGTCGGACTAATTAGCCTAATATTGCAAATAGGGAATATAATCTCAATATGGATTAGCCATTCAATTCAAACTGGAAGTCAAAACCATACTGGAATATGCAACAGATCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGTGCTAGCTGG(SEQ ID NO：38)、GAATTCCAGGGGGTTTAAAATGAATCCAAATCAGAAAATAACAACCATTGGATCAATCTGTCTGGTAGTCGGACTAATTAGCCTAATATTGCAAATAGGGAATATAATCTCAATATGGATTAGCCATTCAATTCAAACTGGAAGTCAAAACCATACTGGAATATGCAACCAAAACATCATTACCTATAAAAATAGCACCTGGGTAAAGGACACAACTTCAGTGATATTAACCGGCAATTCATCTCTTTGTCCCATCCGTAGATCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGTGCTAGCTGG(SEQID NO：39)、GAATTCCAGGGGGTTTAAAATGAATCCAAATCAGAAAATAACAACCATTGGATCAATCTGTCTGGTAGTCGGACTAATTAGCCTAATATTGCAAATAGGGAATATAATCTCAATATGGATTAGCCATTCAATTCAAACTGGAAGTCAAAACCATACTGGAATATGCAACCAAAACATCATTACCTATAAAAATAGCACCTGGGTAAAGGACACAACTTCAGTGATATTAACCGGCAATTCATCTCTTTGTCCCATCCGTGGGTGGGCTATATACAGCAAAGACAATAGCATAAGAATTGGTTCCAAAGGAGACGTTTTTAGATCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGTGCTAGCTGG(SEQ ID NO：40)或GAATTCCAGGGGGTTTAAAATGAATCCAAATCAGAAAATAACAACCATTGGATCAATCTGTCTGGTAGTCGGACTAATTAGCCTAATATTGCAAATAGGGAATATAATCTCAATATGGATTAGCCATTCAATTCAAACTGGAAGTCAAAACCATACTGGAATATGCAACCAAAACATCATTACCTATAAAAATAGCACCTGGGTAAAGGACACAACTTCAGTGATATTAACCGGCAATTCATCTCTTTGTCCCATCCGTGGGTGGGCTATATACAGCAAAGACAATAGCATAAGAATTGGTTCCAAAGGAGACGTTTTTGTCATAAGAGAGCCCTTTATTTCATGTTCTCACTTGGAATGCAGGACCTTTTTTCTGACCAGATCTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCACGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAGTGCTAGCTGG(SEQ ID NO：41)。

本公开还考虑了编码如本文公开的任何融合蛋白的核酸、包含权利要求的此类核酸的载体和包含此类载体的细胞。可使用本领域已知的方法制备载体和含有此类载体的细胞。

II.包含膜结合Fc的工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒和工程化外来体

根据本公开的组合物包括包含Fc结合的饲养细胞(FC)的组合物、包含Fc结合的工程化质膜(PM)颗粒的组合物和包含Fc结合的工程化外来体的组合物。Fc结合的工程化PM颗粒包括源自Fc结合的饲养细胞的PM纳米颗粒。Fc结合的工程化外来体包括外来体或源自Fc结合的饲养细胞的其他细胞外囊泡，也如下文进一步详细描述的。另选地，外来体可源自其他来源，诸如血小板和巨核细胞。

如本文所用，术语“Fc结合的”应理解为指Fc结构域以倒置取向(即，氨基末端面向细胞内)通过跨膜肽与饲养细胞或工程化颗粒的外表面偶联。这可使用本文所公开的Fc融合肽来实现。因此，本公开的一个方面提供了包含至少一种Fc结合的饲养细胞(即，包含结合到饲养细胞外表面的Fc结构域的饲养细胞)的饲养细胞组合物，如下文进一步详细描述的。例如，可对饲养细胞进行基因修饰以表达结合到饲养细胞外表面的Fc结构域，即表达如下文进一步描述的Fc融合肽。本公开的另一个方面提供不含饲养细胞的NK细胞扩增组合物，包含至少一种Fc结合的工程化颗粒，即包含以倒置取向与饲养细胞外表面结合的Fc结构域的工程化颗粒。在一些方面，饲养细胞可被工程化以表达激动剂(例如，激动型抗体)或可用人源化抗体(例如，CD20)标记的配体。在一些实施方案中，饲养细胞被工程化为表达CD20并用Rituxan调理。

在饲养细胞组合物中，该至少一种Fc结合的饲养细胞任选地包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包含细胞因子、粘附分子或γδT细胞活化剂。在一个示例中，Fc结合的饲养细胞包含至少一种选自以下的γδT细胞效应剂：4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一个示例中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。在一个示例中，Fc结合的饲养细胞包含一种γδT细胞效应剂，其为IL-15或IL-21。在一个示例中，Fc结合的饲养细胞可包含至少两种或更多种不同的γδT细胞效应剂。在一个示例中，Fc结合的饲养细胞包含至少一种选自以下的γδT细胞效应剂：IL-2、IL-21或4-1BBL或它们的组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-2；IL-21和IL-2；或4-1BBL、IL-2和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-2或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-2；mbIL-2和mbIL-21；或mb4-1BBL、mbIL-2和mbIL-21)，以及膜结合效应剂和非结合效应剂的组合。

在不含饲养细胞的γδT细胞扩增组合物中，Fc结合的工程化质膜颗粒任选地包含至少一种细胞γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包含细胞因子、粘附分子或γδT细胞活化剂。在一个示例中，Fc结合的工程化颗粒包含至少一种选自以下的γδT细胞效应剂：4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一个示例中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。在一个示例中，Fc结合的工程化颗粒包含一种细胞γδT细胞效应剂，其为IL-15或IL-21。Fc结合的工程化PM颗粒可包含至少两种或更多种不同的γδT细胞效应剂。在一个示例中，Fc结合的工程化颗粒包含至少一种选自以下的γδT细胞效应剂：IL-2、IL-21或4-1BBL或它们的组合(例如，4-1BBL和IL-21；4-1BBL和IL-2；IL-21和IL-2；或4-1BBL、IL-2和IL-21)，包括但不限于膜结合的4-1BBL、IL-2或IL-21或它们的组合(例如，mb4-1BBL和mbIL-21；mb4-1BBL和mbIL-2；mbIL-2和mbIL-21；或mb4-1BBL、mbIL-2和mbIL-21)，以及膜结合效应剂和非结合效应剂的组合。

(a)Fc结合的饲养细胞

本公开提供了包含如上文详述的Fc融合肽的饲养细胞。用于本文公开的方法和用于制备本文公开的PM颗粒和外来体的γδT细胞饲养细胞可以是经辐照的自体或同种异体外周血单核细胞(PBMC)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、抗原呈递细胞(例如，树突状细胞、B细胞、肥大细胞、巨噬细胞、单核细胞)、T细胞、NK细胞、微生物细胞或未辐照的自体或同种异体PBMC、RPMI8866、HFWT、721.221或K562细胞以及EBV-LCL、其他非HLA或低HLA表达细胞系或患者来源的原发性肿瘤，可用作肿瘤疫苗。微生物细胞可以是细菌细胞。微生物细胞可以是那些不会引起疾病的细胞(例如，卡介苗)。在一些实施方案中，微生物细胞是益生菌(例如，乳杆菌属(Lactobacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、芽孢杆菌属(Bacillus)、乳球菌属(Lactococcus)、肠球菌属(Enterococcus)、片球菌属(Pediococcus)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)或酵母菌属(Saccharomyces)的细胞。Fc结合的饲养细胞可通过使用本领域公知的标准转导或转染技术，用如本文所述的任何Fc融合肽转染或转导饲养细胞来制备。例如，本文公开的Fc融合肽的cDNA载体可连接到表达质粒中，其允许在细菌(大肠杆菌)、昆虫或哺乳动物细胞中表达。cDNA载体可带有FLAG或HIS标签。合适的转染方法包括核转染(或电穿孔)、磷酸钙介导的转染、阳离子聚合物转染(例如，DEAE-葡聚糖或聚乙烯亚胺)、病毒转导、病毒体转染、病毒粒子转染、脂质体转染、阳离子脂质体转染、免疫脂质体转染、非脂质体脂质转染、树枝状大分子转染、热休克转染、磁转染、脂转染、基因枪递送、穿刺转染、声孔法、光学转染和专有试剂增强核酸摄取。转染方法是本领域众所周知的(参见，例如，《Current Protocols in Molecular Biology》，Ausubel等人，John Wiley&Sons，NewYork，2003年；或《Molecular Cloning：A Laboratory Manual》，Sambrook&Russell，ColdSpring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY，第3版，2001年)。另选地，可通过显微注射将分子引入细胞。例如，可将分子注射到感兴趣细胞的细胞质或细胞核中。引入细胞的每个分子的量可变化，但本领域技术人员熟悉确定合适量的方法。

在一个示例中，用于本发明的饲养细胞可以是外周血单核细胞(PBMC)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、抗原呈递细胞、微生物细胞或细胞系，其中该细胞系可以是RPMI8866、HFWT、721.221、K562或EBV-LCL。

应当理解，可将各种分子同时或依次引入细胞中。例如，可将Fc融合肽和一种或多种膜结合的γδT细胞效应剂同时引入饲养细胞。另选地，可先引入一个分子，然后再将其他分子引入细胞。例如，饲养细胞一旦被Fc融合肽转染或转导，可进一步用膜结合的γδT细胞效应剂诸如IL-2、IL-15和/或IL-21和/或41BBL感染和/或作为EBV-LCL和/或其他γδT细胞效应剂感染。另选地，饲养细胞可用Fc融合肽和膜结合的γδT细胞效应剂(诸如IL-2、IL-15和/或IL-21和/或41BBL和/或EBV-LCL和/或其他γδT细胞效应剂)同时转染或转导。另选地，先前被转染或转导并表达膜结合的γδT细胞效应剂(诸如IL-2、IL-15和/或IL-21和/或41BBL和/或作为EBV-LCL和/或其他γδT细胞效应剂感染)的饲养细胞可用Fc融合肽转染或转导。还应当理解，可使用本领域已知的其他手段诸如化学缀合方法来获得膜结合的Fc。

通常，除了与本文公开的组合物接触之外，将细胞维持在适于细胞生长和/或维持的条件下。合适的细胞培养条件是本领域众所周知的并且描述于例如Santiago等人，《Proc.Natl.Acad.Sci.USA》，2008年，第105卷：第5809-5814页；Moehle等人，《Proc.Natl.Acad.Sci.USA》，2007年，第104卷：第3055-3060页；Urnov等人，《Nature》，2005年，第435卷：第646-651页；和Lombardo等人，《Nat.Biotechnol.》，2007年，第25卷：第1298-1306页中。本领域技术人员应认识到，用于培养细胞的方法是本领域已知的并且可以并将根据细胞类型而变化。在所有情况下，都可使用常规优化来确定用于特定细胞类型的最佳技术。

Fc结合的饲养细胞可用于细胞培养以直接刺激γδT细胞，或可用于制备源自饲养细胞的质膜颗粒或外来体。

(b)Fc结合的工程化血浆颗粒

Fc结合的工程化PM(质膜)颗粒包括Fc结合的PM颗粒，其可使用众所周知的方法从Fc结合的γδT细胞饲养细胞制备。PM颗粒是由细胞质膜制成或人工制成的囊泡(即脂质体)。PM颗粒可包含脂质双层或仅包含单层脂质。PM颗粒可以单层状、多层状或倒置形式制备。PM颗粒可使用已知的质膜制备方案或诸如美国专利号9,623,082中所述的用于制备脂质体的方案由如本文所述的Fc结合的饲养细胞制备，该专利的全部公开内容以引用方式并入本文。在某些方面，如本文公开的PM颗粒的平均直径范围为约170nm至约300nm。

(c)Fc结合的工程化血浆颗粒

如本文公开的Fc结合的外来体可由外来体分泌细胞制备，该外来体分泌细胞可使用众所周知的方法由Fc结合的饲养细胞制备，其中该外来体是外来体分泌细胞的胞外产物，如在美国专利申请公开号20170333479中所述的，该专利的全部公开内容以引用方式并入本文。外来体包含脂质和蛋白质，在特定外来体中发现的蛋白质的特性取决于产生它们的细胞。本文公开的外来体包含如本文公开的Fc融合肽(即，为Fc结合的)，以及任选地存在于外来体膜中的一种或多种刺激肽(γδT细胞效应剂)。外来体可从例如为改善外来体的形成或释放而工程化的细胞系中产生。此类细胞系包括但不限于如上文第II(a)部分所述的Fc结合细胞系。非限制性细胞系是Fc结合的K562-mb15-41BBL和Fc结合的K562-mb21-41BBL。在某些方面，如本文公开的外来体的平均直径范围为约30nm至约100nm，或至约160nm。在一个方面，外来体的平均直径约为60nm至80nm。外来体能够实现比PM颗粒更小的颗粒尺寸，这意味着外来体可以更容易地适用于优选更小尺寸的用途。例如，在需要通过生理屏障扩散、通过组织隔室增强生物分布或静脉注射的应用中，外来体可能是优选的。

III.组合物。

本公开提供了多种γδT细胞扩增组合物，该组合物包含如上文所公开的Fc结合的饲养细胞；以及在其他方面，提供了不含饲养细胞的γδT细胞扩增组合物，该组合物包含一种或多种工程化的Fc结合的颗粒，诸如如上文所公开的PM颗粒或外来体。组合物中使用的任何Fc结合的饲养细胞或Fc结合的工程化的PM颗粒任选地还包含至少一种、两种或更多种不同的γδT细胞效应剂。在一个方面，一种γδT细胞效应剂是IL-21，并且在一些方面，一种γδT细胞效应剂是IL-21，并且第二种是4-1BBL。Fc结合的饲养细胞或Fc结合的工程化PM颗粒任选地包含一种或多种如上文所公开的额外的γδT细胞效应剂。

包含含有质膜的PM颗粒的γδT细胞扩增组合物还可包含多个微粒/纳米颗粒，其中质膜包覆该多个微粒。微粒/纳米颗粒可包括磁性微粒、二氧化硅珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠、颗粒造影剂、颗粒癌症治疗剂或它们的任何组合。

本公开还考虑了γδT细胞扩增输注制剂，该制剂包含本文公开的任何γδT细胞扩增组合物，以及药学上可接受的载体。

治疗性药物组合物可通过将本文公开的Fc结合的饲养细胞或工程化PM颗粒与本领域已知的药学上可接受的载体组合来制备，例如在《Remington：The Science andPractice of Pharmacy》(第19版)，A.R.Gennaro编辑，MackPublishing Company，Easton，Pa.，1995年中所述。药学上可接受的载体的示例包括但不限于：无菌水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和生理pH值的缓冲溶液。例如，溶液的pH优选为约5至约8，更优选为约7至约7.5。

对本领域技术人员来说将显而易见的是，某些载体可能更优选，这取决于例如施用途径和所施用组合物的浓度。可适当地制备药物组合物以通过多种已知施用途径中的任一种施用至哺乳动物，尤其是人类，具体取决于需要局部治疗还是全身治疗，以及待治疗的区域。施用可以是局部的(包括眼部、阴道、直肠、鼻内)、口服、吸入或肠胃外，例如通过静脉滴注或注射，或皮下、腹膜内、肌内、腔内或经皮注射。

用于肠胃外施用的制剂包括无菌水溶液或非水溶液、混悬剂和乳剂。非水性溶剂的示例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(诸如橄榄油)和可注射的有机酯(诸如油酸乙酯)。水性载体包括水、醇/水性溶液、乳剂或混悬剂，包括盐水和缓冲介质。肠胃外溶媒包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内溶媒包括液体和营养补充剂、电解质补充剂，诸如基于林格氏葡萄糖的补充剂等。也可存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。

用于局部施用的制剂可包括膏剂、洗剂、霜剂、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体和散剂。常规药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需的或理想的。

组合物中的一些组合物可潜在地作为药学上可接受的酸加成盐或碱加成盐施用，该酸加成盐或碱加成盐通过与无机酸诸如盐酸、氢溴酸、高氯酸、硝酸、硫氰酸、硫酸和磷酸和有机酸诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸和富马酸反应形成，或通过与无机碱诸如氢氧化钠、氢氧化铵、氢氧化钾和有机碱诸如单烷基胺、二烷基胺、三烷基胺和芳基胺以及取代的乙醇胺反应形成。

γδT细胞扩增输注制剂因此可被配制用于肠胃外输注、动脉输注、静脉输注、人工导管介导的输注、静脉内、腹膜内、皮下注射、口服或局部递送。在一些实施方案中，任一前述方面的方法包括在肠胃外、静脉内、腹膜内或皮下或通过动脉输注、静脉输注或人工导管介导的输注施用γδT细胞。

在一个方面，本公开考虑了如本文公开的在体外或离体制备、被施用于或输注至需要γδT细胞扩增的受试者的任何γδT细胞扩增组合物。应当理解并且本文考虑了，输注可在体外使用商业来源的γδT细胞进行，或者从供体来源(例如，同种异体供体或自体供体来源(即，接受扩增的γδT细胞的受体受试者)离体进行。

在另一方面，本公开考虑了包含与如本文公开的Fc结合的饲养细胞组合物接触的体外γδT细胞群的γδT细胞组合物，或如本文公开的无饲养细胞的、Fc结合的NK细胞扩增组合物。

在另一方面，本公开考虑了在体外暴露于γδT细胞扩增组合物的扩增的γδT细胞群，该组合物不含饲养细胞并且包含至少一种如本文公开的Fc结合的工程化颗粒，该工程化颗粒包含至少两种γδT效应剂，其中该至少两种γδT细胞效应剂选自IL-2、IL-21、IL-15或4-1BBL或它们的任何组合。在另一方面，本公开考虑了在体外暴露于γδT细胞扩增组合物的扩增的γδT细胞群，该组合物不含饲养细胞并且包含至少一种如本文公开的Fc结合的工程化颗粒，该工程化颗粒包含至少两种γδT细胞效应剂，其中该至少两种γδT细胞效应剂之一是IL-21或4-1BBL。在一个示例中，该γδT效应剂是IL-2。在一个示例中，该γδT效应剂是IL-21。在一个示例中，该γδT效应剂是IL-15。在一个示例中，该γδT效应剂是4-1BBL。与未扩增的γδT细胞相比，扩增的γδT细胞群可表现出增强的细胞毒性。

在不同方面，扩增的γδT细胞群可表现出未扩增的γδT细胞的至少约2倍、5倍或10倍的细胞毒性，这可通过增加的产生细胞毒性效应物(例如，IFNγ、TNFα、穿孔素、颗粒酶)的γδT细胞群的百分比、或增加的细胞毒性效应物(例如，IFNγ、TNFα、穿孔素、颗粒酶)的产生/表达水平、或增加的用于杀伤的分子(例如，FasL、TRAIL)的表达水平来确定。

在一些实施方案中，γδT细胞在14天内以比对照γδT细胞群更快的速率扩增。在本文中应当理解，术语“对照γδT细胞群”是指在接触本文公开的Fc结合的饲养细胞、外来体、工程化质膜颗粒或固体支持物之前的γδT细胞，或指使饲养细胞、外来体、工程化质膜颗粒或固体支持物与本文公开的Fc接触的γδT细胞。

根据任一前述方面的方法扩增的γδT细胞可以是分离的细胞群或在混合细胞群中。可在γδT细胞扩增之前、期间或之后耗尽混合细胞群中的NK细胞。因此，如果NK细胞在扩增前未被移除，则此方法可能导致γδT细胞和NK细胞的共同扩增。这两个细胞群的结合可产生更广泛的抗肿瘤功能，从而产生更好的疗效。这样的γδT细胞或γδT细胞/NK细胞混合物可用作治疗疾病的治疗剂。

在另一方面，本公开提供了包含治疗剂量的γδT细胞的组合物，该组合物包含如本文公开的扩增的γδT细胞群，任选地与药学上可接受的载体组合。扩增的γδT细胞群可表现出更高的CD16和其他有利特性，诸如更高的细胞毒性。提供治疗剂量的γδT细胞的量如本领域技术人员所理解的将根据许多因素而变化，并且例如在美国专利号9,907,820中进行了讨论，该专利的全部公开内容以引用方式并入本文。因素包括受试者的年龄、性别和诊断，以及施用途径，施用途径可以是但不限于口服、口腔、粘膜和静脉内途径。例如，用于治疗效果的合适剂量为每剂至少10⁴个细胞或约10⁴至约10¹⁰个细胞，每剂约10⁴至约10⁸个细胞，或每剂约10⁵至约10⁷个细胞，例如，优选在一系列给药周期中。示例性给药方案由四个每周递增剂量的给药周期组成，从第0天至少约10⁵个细胞开始，例如在开始患者体内剂量递增方案的几周内递增至约10¹⁰个细胞的目标剂量。合适的施用方式包括静脉内、皮下、腔内(例如通过药盒进入装置)、腹膜内和直接注射到肿瘤块中。应当理解，如上表达的治疗剂量的当量可替代地以单位总身体表面积的量来表示。

本文公开的γδT细胞效应剂或其受体包括，4-1BBL(HGNC：11939、Entrez Gene：8744、Ensembl：ENSG00000125657、OMIM：606182、UniProtKB：P41273)、CD80(HGNC：1700、EntrezGene：941、Ensembl：ENSG00000121594、OMIM：112203、UniProtKB：P33681)、CD86(HGNC：1705、EntrezGene：942、Ensembl：ENSG00000114013、OMIM：601020、UniProtKB：P42081)、MICA(HGNC：7090、EntrezGene：100507436、Ensembl：ENSG00000204520、OMIM：600169、UniProtKB：Q29983)、UBLP、2B4(HGNC：18171、EntrezGene：51744、Ensembl：ENSG00000122223、OMIM：605554、UniProtKB：Q9BZW8)、LFA-1(CD11a/CD18、CD11a(HGNC：6148、Entrez Gene：3683、Ensembl：ENSG00000005844、OMIM：153370、UniProtKB：P20701)和CD18(HGNC：6155、Entrez Gene：3689、Ensembl：ENSG00000160255、OMIM：600065、UniProtKB：P05107)、ICAM-1(HGNC：5344、Entrez Gene：3383、Ensembl：ENSG00000090339、OMIM：147840、UniProtKB：P05362)、NKG2D(HGNC：18788、Entrez Gene：22914、Ensembl：ENSG00000213809、OMIM：611817、UniProtKB：P26718)、NKp46(HGNC：6731、Entrez Gene：9437、Ensembl：ENSG00000189430、OMIM：604530、UniProtKB：O76036)、NKp44(HGNC：6732、Entrez Gene：9436、Ensembl：ENSG00000096264、OMIM：604531、UniProtKB：O95944)或NKp30(HGNC：19077、Entrez Gene：259197、Ensembl：ENSG00000204475、OMIM：611550、UniProtKB：O14931)的配体、DNAM-1(HGNC：16961、Entrez Gene：10666、Ensembl：ENSG00000150637、OMIM：605397、UniProtKB：Q15762)、IL-2(HGNC：6001、Entrez Gene：3558、Ensembl：ENSG00000109471、OMIM：147680、UniProtKB：P60568)、IL-12(HGNC：5969、Entrez Gene：3592、Ensembl：ENSG00000168811、OMIM：161560、UniProtKB：P29459)、IL-18(HGNC：5986、Entrez Gene：3606、Ensembl：ENSG00000150782、OMIM：600953、UniProtKB：Q14116)、IL-15(HGNC：5977、Entrez Gene：3600、Ensembl：ENSG00000164136、OMIM：600554、UniProtKB：P40933)、IL-21(HGNC：6005、EntrezGene：59067、Ensembl：ENSG00000138684、OMIM：605384、UniProtKB：Q9HBE4)、CD69(HGNC：1694、EntrezGene：969、Ensembl：ENSG00000110848、OMIM：107273、UniProtKB：Q07108)、CD25(HGNC：6008、EntrezGene：3559、Ensembl：ENSG00000134460、OMIM：147730、UniProtKB：P01589)、RANKL(HGNC：11926、EntrezGene：8600、Ensembl：ENSG00000120659、OMIM：602642、UniProtKB：O14788)的激动剂(例如，激动型抗体)或配体。

IV.方法和用途

(a)增加γδT细胞的细胞毒性的方法和用途

在一个方面，本公开提供了一种通过使用如本文公开的γδT细胞扩增组合物或制剂扩增初始γδT细胞群来增加γδT细胞细胞毒性的方法。另选地，本公开提供了如本文公开的γδT细胞扩增组合物或制剂用于通过扩增初始γδT细胞群来增加γδT细胞细胞毒性的用途。所公开的方法和用途提供了简单的扩增平台，它避免了复杂的替代性扩增过程，涉及例如用单克隆抗体包被固体支持物和在溶液中使用可溶性细胞因子。相反，在如本文公开的方法和用途中，初始γδT细胞群获自供体，并且暴露于如本文公开的γδT细胞扩增组合物。在治疗方法中，暴露可在体外或体内进行。在使用中，暴露可在体外或离体进行。在这些方法和用途的任一者中，使γδT细胞与一种或多种Fc结合的饲养细胞、Fc结合的PM颗粒或Fc结合的外来体或它们的任何组合接触。暴露的Fc结构域结合到γδT细胞表面上的CD16，导致刺激γδT细胞更快和/或更有效地扩增，并产生具有更高抗肿瘤毒性的γδT细胞和具有更有利的总体表型的γδT细胞。

在这些方法和用途的任一者中，与γδT细胞接触的组合物可包含本文公开的Fc结合的饲养细胞或Fc结合的工程化PM颗粒或Fc结合的工程化外来体中的任一者。工程化PM颗粒可以是Fc结合的PM颗粒。在一个方面，任选存在的γδT细胞效应剂是IL-21或IL-15。任选存在的第二γδT细胞效应剂可选自4-1BBL、IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、MICA、UBLP、2B4、LFA-1、Notch配体、NKp46或BCM1/SLAMF2的激动剂(例如激动型抗体)或配体、TLR和NKG2D的激动剂(例如激动型抗体)或配体。在一个方面，第二NK细胞效应剂是4-1BBL。该组合物还可包含至少一种额外的(即，第三、第四、第五等)γδT细胞效应剂，其选自IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、MICA、UBLP、2B4、LFA-1、Notch配体、NKp46或BCM1/SLAMF2的激动剂(例如激动型抗体)或配体、TLR和NKG2D的激动剂(例如激动型抗体)或配体。在一些实施方案中，该γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。以这种方式进行的γδT细胞扩增可在10天内实现远多于几倍(约3-4倍)。相反，根据本方法的γδT细胞扩增可在2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天或20天、3周、4周、5周、或6周、或更长的时间内实现至少约100倍、约200倍、约300倍、约400倍、约500倍、约600倍、约700倍、约800倍、约900倍、约1100倍、约1200倍、约1300倍、约1400倍、约1500倍、约1600倍、约1700倍、约1800倍、约1900倍至多约2000倍的γδT细胞数量增加。因此，所公开的方法和用途可用于γδT细胞的大规模生产。γδT细胞的来源可来自外周血、脾脏γδT细胞、淋巴细胞制剂(诸如血沉棕黄层)、iPSC来源的γδT细胞、ESC来源的γδT细胞和基因修饰/工程化的γδT细胞或任何基因修饰的γδT细胞，包括但不限于源自Fc受体多态性的γδT细胞，诸如第158位的Phe或Val，诸如本领域已知的和描述于例如Blood(1997年)，第90卷：第1109-1114页和J Clin Invest.(1997年)，第100卷：第1059-1070页中的那些。可使用本领域已知的方法工程化此类基因修饰的γδT细胞来源。另选地，γδT细胞可源自携带所需多态性的细胞供体，并且所供细胞用作通过本文所述的方法并使用本文所述的组合物扩增的初始γδT细胞群。因此，在这种上下文中，“基因修饰的”涵盖天然存在的携带多态性的γδT细胞。该方法可应用于人源或其他动物的γδT细胞。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法或用途包括使该至少一种γδT细胞与饲养细胞、工程化颗粒、外来体或固体支持物在体外、体内或离体接触。在一些实施方案中，扩增的γδT细胞包含Vδ2亚型和/或Vδ1亚型。γδT细胞可以是自体的、单倍体相合的或同种异体的γδT细胞。在一些实施方案中，γδT细胞扩增至少14天，其中扩增细胞中至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％或60％的细胞是Vδ2亚型的γδT细胞。

根据任一前述方面的方法或用途扩增的γδT细胞可以是分离的细胞群或在混合细胞群中。可在γδT细胞扩增之前、期间或之后耗尽混合细胞群中的NK细胞。因此，如果NK细胞在扩增前未被移除，则此方法可能导致γδT细胞和NK细胞的共同扩增。这两个细胞群的结合可产生更广泛的抗肿瘤功能，从而产生更好的疗效。这样的γδT细胞或γδT细胞/NK细胞混合物可用作治疗疾病的治疗剂。

此外，所公开的方法和用途具有为细胞提供更高细胞毒性的额外益处。根据所公开的方法扩增的初始γδT细胞群产生扩增的γδT细胞群，其表现出至少约2倍初始γδT细胞群的细胞毒性、至少约4倍初始γδT细胞群的细胞毒性、至少约5倍初始γδT细胞群的细胞毒性、至少约8倍初始γδT细胞群的细胞毒性或至少约10倍初始γδT细胞群的细胞毒性。ADCC相关蛋白(诸如在非限制性示例中为CD1 6)或其他γδT细胞配体(诸如在非限制性示例中为NKG2D、NKp46、CD62L、ICAM-1)的更高表达可用于评估与未扩增的γδT细胞或在其他条件下扩增的γδT细胞相比，扩增的γδT细胞的相对细胞毒性。CD69、CD25、RANKL等标志物是γδT细胞处于活化状态的指标。即使不能直接评估细胞毒性，这些标志物的组合也能提供细胞毒性增加的信号。例如，如本文公开的扩增的γδT细胞群可表现出增加的肿瘤靶标杀伤或分泌更高量的抗肿瘤或抗病原体细胞因子(例如，IFNγ、TNFα、穿孔素、颗粒酶)或表达与未扩增的γδT细胞相比增加水平的用于杀伤的分子(例如，FasL、TRAIL)。在另一方面，与未扩增的γδT细胞相比，如本文公开的扩增的γδT细胞群可表现出增加的CD69、CD25、NKG2D、NKp46和/或CD16表达。用于检测特定蛋白质的量以评估γδT细胞的活化状态的各种方法是本领域已知的并且可以使用，包括光谱法诸如流式细胞术或免疫检测方法诸如蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定(ELISA)、蛋白质免疫沉淀、免疫电泳或免疫染色。

此外，如本文公开的扩增的γδT细胞群可表现出改善的耐受冷冻保存、保持活力和细胞毒性以及随后冷冻和解冻的能力。

(b)治疗方法和用途

本文公开的组合物和方法可用于多种治疗、诊断、工业和研究应用。在一些方面，本公开可用于治疗癌症。因此，在一个方面，本文公开了治疗、抑制、降低和/或预防受试者的癌症、癌症复发或转移或感染性疾病诸如病毒感染或细菌感染的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的如本文所述的组合物或扩增的γδT细胞群。

因此，在一些方面，本文公开了治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，该方法包括

a.获得至少一种γδT细胞；

c.向受试者施用治疗有效量的接触后的γδT细胞。

在一些实施方案中，工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物还可包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。

在一些方面，本文公开了一种通过在受试者中扩增、诱导和/或活化内源性γδT细胞来治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，所述方法包括向受试者施用工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物，该工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域，其中该工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物还可包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。

在一些实施方案中，任一前述方面的方法还包括向受试者施用离体组合物，该组合物包含融合蛋白，该融合蛋白包含连接到Fc结构域的氨基末端并结合到工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物的跨膜结构域，使该组合物与分离的混合细胞群接触，该混合细胞群包含至少一种包含CD16或其功能片段的γδT细胞。在一些实施方案中，该离体组合物还包含至少一种γδT细胞效应剂，其中该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL；CD80；CD86；MICA；UBLP；2B4；LFA-1；NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30或DNAM-1的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；Notch、BCM/SLAMF2或TLR的激动剂(例如，激动型抗体)或配体；IL-2；IL-12；IL-18；IL-15；或IL-21；或它们的任何组合。在一些实施方案中，该至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。工程化质膜颗粒可包括质膜和多个微粒或支持物表面，其中该质膜包覆多个微粒或支持物表面。在一些实施方案中，该多个微粒或表面包括磁性微粒、二氧化硅珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠、微结构、造影剂和癌症治疗剂中的至少一种。

癌症可选自但不限于血液癌、淋巴瘤、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肾癌、皮肤癌、宫颈癌、胰腺癌和乳腺癌。在一个方面，癌症包括实体瘤。在另一方面，癌症选自急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、骨髓纤维化、多发性骨髓瘤。在另一方面，癌症选自白血病、淋巴瘤、肉瘤、癌，并且可来源于骨髓、脑、肺、乳腺、胰腺、肝、头颈、皮肤、生殖道、前列腺、结肠、肝、肾、腹膜、骨、关节、眼。

任何所公开的治疗方法还可包括向受试者施用(并发地、同时地或作为单一制剂)与有效量的如本文所述的组合物或扩增的γδT细胞群组合的额外治疗剂或方案。额外的治疗剂可以是基于药物的制备方案诸如Cy-Flu、Bu-Flu、Flu-Mel，或在剂量或给药方面进行调整的类似方案。另选地，额外的治疗剂或方案可选自化疗剂和方案，例如，在非限制性示例中，这些化疗剂和方案已知缩写为CHOP、FLAG(包括FLAG-Ida或FLAG-IDA或IDA-FLAG或Ida-FLAG)；和FLAG-Mito或FLAG-MITO或Mito-FLAG或MITO-FLAG或FLANG)、IA或IAC、或7+3。另选地，如本文所述的有效量的任何所公开的组合物和/或扩增的γδT细胞群可用于治疗如本文所述的任何疾病，任选并发地、同时地或作为单一制剂与额外的治疗剂或方案组合使用。在此类用途中，额外的治疗剂可以是基于药物的制备方案诸如Cy-Flu、Bu-Flu、Flu-Mel，或与在剂量或给药方面进行的调整类似。另选地，额外的治疗剂或方案可选自化疗剂和方案，例如，在非限制性示例中，这些化疗剂和方案已知缩写为CHOP、FLAG(包括FLAG-Ida或FLAG-IDA或IDA-FLAG或Ida-FLAG)；和FLAG-Mito或FLAG-MITO或Mito-FLAG或MITO-FLAG或FLANG)、IA或IAC、或7+3。

例如，本文旨在抑制、降低和/或预防癌症转移和/或复发的所公开方法可包括施用本领域已知的任何抗癌剂，包括但不限于阿贝西利、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcertris(本妥昔单抗)、ADE、恩美曲妥珠单抗、阿霉素(盐酸多柔比星)、双马来酸盐阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地白介素、Alecensa(阿来替尼)、阿来替尼、阿仑单抗、Alimta(培美曲塞二钠)、Aliqopa(盐酸库潘尼西)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片剂(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、布吉他滨(布加替尼)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、菊欧文氏菌天冬酰胺酶、阿特珠单抗、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、阿维鲁单抗、阿西替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维鲁单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、倍利妥(博纳吐单抗)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(苹果酸卡博替尼)、苹果酸卡博替尼、CAF、坎帕斯(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶--局部用药)、卡铂、卡铂-泰素、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、希瑞适(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、氯福雷司(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(苹果酸卡博替尼)、盐酸库潘尼西、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(更生霉素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉非尼、达卡巴嗪、Dacogen(地西他滨)、更生霉素、达雷木单抗、Darzalex(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸柔红霉素、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷钠、Defitelio(去纤苷钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸右雷佐生、地努图希单抗、多西他赛、Doxil(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、德瓦鲁单抗、Efudex(氟尿嘧啶--局部用药)、Elitek(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、埃罗妥珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、艾曲波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(埃罗妥珠单抗)、恩西地平甲磺酸盐、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、爱必妥(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(菊欧文氏菌天冬酰胺酶)、阿米福汀(氨磷汀)、Etophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、迈维宁(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶注射液)、5-FU(氟尿嘧啶--局部用药)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、芙仕得(氟维司群)、FEC、弗隆(来曲唑)、非格司亭、福达华(磷酸氟达拉滨)，磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(氟尿嘧啶--局部用药)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶--局部用药、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、FolexPFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil9(重组HPV九价疫苗)、Gazyva(奥妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、吉泰瑞(双马来酸盐阿法替尼)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel晶片(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、美新(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸普纳替尼)、伊达霉素(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、艾德拉尼、Idhifa(恩西地平甲磺酸盐)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(TalimogeneLaherparepvec)、Inlyta(阿西替尼)、奥英妥珠单抗、重组干扰素α-2b、干扰素v2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、枸橼酸伊沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(恩美曲妥珠单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、可瑞达(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(替沙仑赛)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(奥拉单抗)、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、瘤可宁(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、洛莫司汀、朗斯弗(曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶)、利普安(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝-派德(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、甲基苄肼(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、突变霉素(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥珠单抗奥佐米星)，纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(培非格司亭)、优保津(非格司亭)、多吉美(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(枸橼酸伊沙佐米)、甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物、纳武单抗、诺瓦得士(枸橼酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥妥珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸昂丹司琼、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(地尼白介素)、欧狄沃(纳武单抗)、OPPA、奥希替尼、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、伯尔定(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、佩乐能(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸普纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、普罗力(地诺单抗)、Promacta(艾曲波帕)盐酸普萘洛尔普列威(Sipuleucel-T)、Purinethol(巯嘌呤)、Purixan(巯嘌呤)、镭223氯、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)九价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、Rituxan Hycela(利妥昔单抗和人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、盐酸罗拉匹坦、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸柔红霉素)、鲁卡帕尼(樟脑磺酸卢卡帕尼)、樟脑磺酸卢卡帕尼、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、无菌滑石粉气雾剂(滑石粉)、司妥昔单抗、Sipuleucel-T、SomatulineDepot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、Tagrisso(奥希替尼)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、枸橼酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、泰素(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、Tecentriq(阿特珠单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、硫鸟嘌呤、噻替派、替沙仑赛、Tolak(氟尿嘧啶--局部用药)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、坦罗莫司(替西罗莫司)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、Trabectedin、曲美替尼、曲妥珠单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶、Trisenox(三氧化二砷)、泰立沙(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(地努图希单抗)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Varubi(盐酸罗拉匹坦)、维克替比(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、万珂(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、维奈妥拉(维奈托克)、维奈托克、玻玛西林(阿贝西利)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、Vincasar PFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、维莫德吉、Vistogard(尿苷三乙酸酯)、Voraxaze(谷卡匹酶)、伏立诺他、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、多菲戈(镭223二氯)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Yondelis(曲贝替定)、Zaltrap(阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物)、Zelboraf(维罗非尼)、泽娃灵(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、阿柏西普、Zofran(盐酸昂丹司琼)、诺雷德(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、择泰(唑来膦酸)、Zydelig(艾德拉尼)、赞可达(色瑞替尼)和/或泽珂(醋酸阿比特龙)。本文还考虑了作为PD1/PDL1阻断抑制剂的化学治疗剂(例如，兰洛利珠单抗、纳武单抗、派姆单抗、匹地利珠单抗、BMS-936559、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗或阿维鲁单抗)。本文还旨在所公开的组合物和/或扩增的γδT细胞群用于抑制、降低和/或预防癌症转移和/或复发的所公开用途可包括与本领域已知的任何抗癌剂(包括但不限于上面列出的那些药剂)的联合使用的用途。

在一些方面，所有如本文所公开的组合物的治疗方法和用途用于治疗由病毒感染引起的感染性疾病，其中该病毒感染包括单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒-2、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒-6、天花病毒、水疱性口炎病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹病毒、多瘤病毒、人乳头瘤病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、劳斯肉瘤病毒、呼肠孤病毒、黄热病病毒、寨卡病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、东部马脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累河谷热病毒、西尼罗河病毒、裂谷热病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒X、辛德毕斯病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人T细胞白血病病毒1型、汉坦病毒、风疹病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型或人免疫缺陷病毒2型的感染。

另选地，在任何治疗方法或治疗用途中，额外的治疗剂可以是选自但不限于5-取代的2-脱氧尿苷类似物、核苷类似物、(非核苷)焦磷酸盐类似物、核苷逆转录酶(RT)抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂(PT)和整合酶抑制剂、进入抑制剂和无环鸟苷类似物、无环核苷膦酸酯(ANP)类似物、丙型肝炎病毒(HCV)NS5A和NS5B抑制剂、流感病毒抑制剂、免疫刺激剂、干扰素、寡核苷酸和抗有丝分裂抑制剂的抗病毒剂。抗病毒剂的非限制性示例是阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、喷昔洛韦、更昔洛韦、利托那韦、洛匹那韦、沙奎那韦等；西咪替丁；雷尼替丁；卡托普利；二甲双胍；安非他酮；非索非那定；奥卡西平；左乙拉西坦；曲马多；或它们的任何异构体、互变异构体、类似物、多晶型物、溶剂化物、衍生物或药学上可接受的盐。

在一些方面，所有如本文所公开的组合物的方法和用途用于治疗由细菌感染引起的感染性疾病，其中该细菌感染包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、牛分枝杆菌菌株BCG、BCG亚株、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、非洲分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海洋分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、鸟分枝杆菌副结核亚种、星状诺卡氏菌、其他诺卡氏菌属物种、嗜肺军团菌、其他军团菌属物种、鲍曼不动杆菌、伤寒沙门氏菌、肠道沙门氏菌、其他沙门氏菌属物种、鲍氏志贺菌、痢疾志贺菌、宋内志贺菌、福氏志贺菌、其他志贺菌属物种、鼠疫耶尔森氏菌、溶血性巴氏杆菌、多杀性巴氏杆菌、其他巴氏杆菌属物种、胸膜肺炎放线杆菌、单核细胞增多性李斯特菌、伊氏李斯特菌、流产布鲁氏菌、其他布鲁氏菌属物种、反刍类考德里氏体、伯氏疏螺旋体、禽波氏杆菌、百日咳博德特氏菌、支气管败血博德特氏菌、创口博德特氏菌、欣茨博德特氏菌、Bordetellapteri、副百日咳博德特氏菌、Bordetella ansorpii、其他博德特氏菌属物种、鼻疽伯克霍尔德氏菌、类鼻疽伯克霍尔德菌、洋葱伯克霍尔德菌、肺炎衣原体、沙眼衣原体、鹦鹉热衣原体、贝氏柯克斯体、立克次体属物种、埃立克体属物种、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、霍乱弧菌、弯曲杆菌属物种、脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、铜绿假单胞菌、其他假单胞菌属物种、流感嗜血杆菌、其他嗜血杆菌属物种、破伤风梭菌、艰难梭菌、其他梭菌属物种、小肠结肠炎耶尔森氏菌和其他耶尔森氏菌属物种以及支原体属物种的感染。

在一些方面，所有如本文所公开的组合物的方法和用途用于治疗由真菌感染引起的感染性疾病，其中该真菌感染包括白色念珠菌、新生隐球菌、荚膜组织胞浆菌、烟曲霉、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌、卡氏肺孢子虫、马尔尼菲青霉菌或互隔交链孢霉的感染。

在一些方面，所有如本文所公开的组合物的方法和用途均用于治疗由寄生虫感染引起的感染性疾病，其中该寄生虫感染包括刚地弓形虫、恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫、其他疟原虫属物种、溶组织内阿米巴、福氏耐格里阿米巴、鼻孢子虫、蓝氏贾第鞭毛虫、蠕形住肠线虫、格氏蛲虫、蛔虫、十二指肠钩口线虫、美洲钩虫、隐孢子虫、布氏锥虫、克氏锥虫、硕大利什曼原虫、其他利什曼原虫属物种、阔节裂头绦虫、短膜壳绦虫、长膜壳绦虫、细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、伏氏棘球绦虫、少节棘球绦虫、阔节裂头绦虫、华支睾吸虫；Clonorchis viverrini、肝片吸虫、大片吸虫、枝双腔吸虫、布氏姜片虫、横川后殖吸虫、泰国肝吸虫、猫后睾吸虫、华支睾吸虫、阴道毛滴虫、棘阿米巴属物种、间插血吸虫、埃及血吸虫、日本血吸虫、曼氏血吸虫、其他血吸虫属物种、毛毕属血吸虫、旋毛虫、布氏旋毛虫、纳氏旋毛虫、本地旋毛虫或溶组织内阿米巴的感染。

另选地，在任何方法或用途中，额外的治疗剂可以是选自但不限于青霉素、四环素、头孢菌素、林可霉素、大环内酯、磺胺类、糖肽、氨基糖苷类和碳青霉烯类的抗生素。抗病毒剂的非限制性示例是阿莫西林、多西环素、头孢氨苄、环丙沙星、克林霉素、甲硝唑、阿奇霉素、磺胺甲恶唑和甲氧苄氨嘧啶、克拉维酸盐和左氧氟沙星。

在一些实施方案中，在任一前述方面的方法或用途中施用或使用的γδT细胞配制在药学上可接受的载体和药学上可接受的赋形剂中。

由于癌症、转移病症或感染的时机通常不可预测，因此应当理解所公开的治疗、预防、降低和/或抑制癌症、转移病症或感染的方法，或者使用任何所公开的用于此类治疗、预防、降低和/或抑制癌症、转移病症或感染的组合物或组合可在癌症、转移病症或感染发作之前或之后实施，以治疗、预防、抑制和/或降低肌肉疾病。在一个方面，所公开的方法或用途可在癌症、转移病症或感染前30天、29天、28天、27天、26天、25天、24天、23天、22天、21天、20天、19天、18天、17天、16天、15天、14天、13天、12天、11天、10天、9天、8天、7天、6天、5天、4天、3天、60小时、48小时、36小时、30小时、24小时、18小时、15小时、12小时、10小时、9小时、8小时、7小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时、60分钟、45分钟、30分钟、15分钟、10分钟、9分钟、8分钟、7分钟、6分钟、5分钟、4分钟、3分钟、2分钟或1分钟发生；与癌症、转移病症或感染同时发生；或在癌症、转移病症或感染后1分钟、2分钟、3分钟、4分钟、5分钟、6分钟、7分钟、8分钟、9分钟、10分钟、15分钟、20分钟、25分钟、30分钟、35分钟、40分钟、45分钟、50分钟、55分钟、60分钟、75分钟、90分钟、105分钟、120分钟、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、15小时、18小时、24小时、30小时、36小时、48小时、60小时、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、45天、60天、90天、4个月、5个月、6个月、7个月、9个月、10个月、11个月、12个月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、11年、12年、13年、14年、15年、16年、17年、18年、19年、20年、30年、40年、50年或更长时间发生。

V.试剂盒。

本公开的另一个方面提供了试剂盒，该试剂盒包含至少一种如上详述的融合肽，和/或至少一种Fc结合的饲养细胞，和/或至少一种如上详述的Fc结合的工程化颗粒(PM颗粒和/外来体)。可在合适的容器中提供融合肽以及其他试剂盒组分，诸如细胞试剂、细胞生长培养基、选择培养基、蛋白质纯化试剂、缓冲液等。本文提供的试剂盒通常包括用于执行下文详述的方法的说明。试剂盒中包含的说明可贴在包装材料上，或者可作为包装说明书包含在内。虽然说明通常是书面或印刷材料，但不限于此。本公开考虑了能够存储这种说明并将它们传送给最终用户的任何介质。此类介质包括但不限于电子存储介质(例如，磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)、光学介质(例如，CD ROM)等。如本文所用，术语“说明”可包括提供说明的互联网网站的地址。

实施例

除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与所公开的发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。本文引用的出版物和它们被引用的材料明确地以引用方式并入。

本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验来确定本文描述的本发明的特定实施方案的许多等同物。虽然已经参考特定实施方案和具体实施描述了本发明，但是应当理解，在不脱离本发明的范围或其发明构思的情况下，可进行各种改变和附加变化并且可用等同物代替其元件。此外，在不脱离本发明的基本范围的情况下，可进行许多修改以使特定情况或装置适应本发明的教导。此类等同物旨在包含在以下权利要求中。意图是本发明不限于本文公开的特定具体实施，而是本发明将包括落入所附权利要求范围内的所有具体实施。

1)材料和方法。

使用CSTX-2-Fc饲养细胞扩增γδT细胞。外周血单核细胞(PBMC)的NK和T细胞含量被表征，并以200,000个NK细胞/mL接种在补充有10％胎牛血清、1％抗生素-抗真菌剂和100U/mL hIL-2(Peprotec)的RPMI1640培养基中。细胞与经辐照的或经丝裂霉素C处理(50μg/mL，持续30分钟)的CSTX-002或CSTX-002-Fc饲养细胞共培养，这些饲养细胞在第0天以1×10⁶个饲养细胞/mL并且在第7天以500,000个饲养细胞/mL加入培养物中。每隔一天对细胞进行计数，并维持在250,000个NK细胞/mL的浓度。在测试NK细胞对γδT细胞的影响的实验中，PBMC或耗尽CD56的PBMC在第0天以1×10⁶个总细胞/mL接种，并且在第7天使用饲养细胞重新刺激后每隔一天维持在250,000个总细胞/mL。对于使用耗尽TCRα/β的PBMC作为起始材料的实验，培养物在第0天以70,000个TCRγ/δ+T细胞/mL接种，并且在第7天用饲养细胞重新刺激后每两天维持在250,000个NK细胞/mL。

流式细胞术。对于细胞表面表型分析，在含有0.5％牛血清白蛋白(BSA)+2mM EDTA的杜氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)的50μL流式细胞术缓冲液中，将50,000-100,000个细胞在4℃用荧光标记抗体染色25分钟。在CytoFlex(Beckman Coulter)流式细胞仪上分析之前，用流动缓冲液洗涤样品。以下预结合抗体用于检测：购自Biolegend的CD3-PacBlue(克隆UCHT1)、CD8a-PE-Cy7(克隆RPA-T8)、CD56-PE(克隆5.1H11)、TCR Vδ2-APC-Fire750(克隆B6)和TCRαβ-APC(克隆IP26)和购自Miltenyi Biotech的TCR Vδ1-FITC(克隆REAL277)。

2)结果。

γ-δ(γδ)T细胞具有CD16(FcγRIIIa)的表面表达，并且可对IgG1的Fc刺激产生反应，其中CD16是IgG的低亲和力受体。为了模拟抗体调理的靶细胞，将含有其他T和NK刺激因子(膜结合的IL-21、41BBL)并且被称为CSTX-002细胞的K562细胞系转导，以表达通过神经氨酸酶(NA)结构域锚定到表面的IgG1的Fc结构域(图7)。这些CSTX-002-Fc细胞用于与健康供体PBMC共培养，以通过CD16参与刺激γδT细胞。由于抗体/配体相互作用会产生大分子复合物，从而导致空间效应在CD16/Fc相互作用中发挥作用，因此首先测试了NA茎长度对γδT细胞扩增的影响。用CSTX-002细胞或表达与不同长度的NA融合的Fc的CSTX-002细胞刺激PBMC，其中NA2最短，NA4最长(图8)。在CSTX-002饲养细胞表面上包含Fc导致在第14天共培养的PBMC细胞的T细胞含量增加(对于CSTX-002为1.5％，而对于CSTX2-002_NA2-4-Fc为16.3％；图1左图)，其中在用通过最长的NA茎(NA4)锚定到细胞表面的Fc刺激的培养物中具有最高的T细胞含量(图1右图)。T细胞含量的表征表明，与CSTX-002对照相比，在用表达Fc的CSTX-002细胞(特别是Vγ9 Vδ2亚型)刺激的培养物中，αβT细胞减少，γδT细胞增加(图2)。Vγ9Vδ2T细胞的含量在用与最长长度的NA茎融合的Fc(NA4-Fc)刺激的培养物中最高。为了测试消除竞争营养的其他T细胞亚群和其他因素是否可进一步提高γδT细胞的扩增，在与饲养细胞共培养之前耗尽αβT细胞，并再次比较神经氨酸酶茎长度(NA2对比NA4)对扩增的影响。αβT细胞的耗尽导致Vδ2T细胞的更高倍数扩增(对于NA4-Fc，PBMC 2990倍对比耗尽αβ的PBMC 6460倍；对于NA2-Fc，PBMC 810倍对比耗尽αβ的PBMC 1200倍)(图3)。无论是否存在αβT细胞，增加的NA长度导致Vδ2T细胞的更高倍数扩增。为了测试Vδ2T细胞扩增是否依赖于另一种表达CD16的细胞类型，即培养物中的NK细胞，在与饲养细胞共培养之前耗尽CD56+细胞，并且监测γδT细胞的扩增，并将其与使用未接触的PBMC的培养物进行比较。在整个PBMC和耗尽CD56的共培养物中，与CSTX-002对照相比，暴露于CSTX-002-Fc细胞导致更高水平的Vδ2T细胞扩增(图4)。在未接触的PBMC培养物和耗尽CD56的PBMC培养物中观察到相似水平的扩增，当与CSTX-002-Fc共培养时，Vδ2T细胞扩增＞2，500倍，而当与CSTX2共培养时，Vδ2T细胞扩增＜300倍，这表明扩增不依赖于起始材料中NK细胞的存在(图5)。此外，当用Fc-CSTX-2细胞刺激时，起始材料中表达CD56的细胞群的耗尽导致Vδ2T细胞的优先扩增增加和终产物的纯度更高。当使用耗尽CD56的PBMC代替未接触的PBMC作为起始材料时，第14天Fc刺激培养物中的Vδ2T细胞含量从40％增加到65％(图6)。用Fc刺激导致Vδ2T细胞的优先扩增，其中在暴露于CSTX-002-Fc 14天后，在耗尽CD56的PBMC培养物中，Vδ2T细胞占细胞的64％，相比之下，当与缺乏Fc的CSTX-002对照细胞共培养时，Vδ2 T细胞占细胞的17％(图6)。Vδ2T细胞的增加与αβT细胞群的减少一致，当耗尽CD56的PBMC用作起始材料时的第14天，αβT细胞群从CSTX-002对照培养物中的44％减少到CSTX-002-Fc中的17％。这些结果清楚地支持使用CSTX2-Fc饲养细胞进行γδT细胞的离体扩增，并表明更长的NA锚长度以及使用富含γδT细胞的起始材料可对扩增的总体水平产生积极影响。

Claims

1.一种用于诱导、活化和/或扩增γδT细胞的方法，所述方法包括使至少一种γδT细胞与工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物接触，所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域。

2.根据权利要求0所述的方法，其中所述Fc结构域通过跨膜结构域结合到所述外表面。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述跨膜结构域包含选自神经氨酸酶的跨膜结构域的信号锚序列、来自副流感病毒血凝素-神经氨酸酶的信号锚序列、来自转铁蛋白受体的信号锚序列、来自MHC II类不变链的信号锚序列、来自P糖蛋白的信号锚序列、来自去唾液酸糖蛋白受体的信号锚序列和来自中性内肽酶的信号锚序列。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述跨膜结构域包含副流感病毒血凝素-神经氨酸酶(NA)肽序列。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述NA肽序列包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4具有至少81％同一性的序列。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述NA肽序列包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4具有至少95％同一性的序列。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域和所述Fc结构域通过肽接头连接。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述Fc结构域包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgE的免疫球蛋白Fc结构域。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述Fc结构域结合到CD16。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、抗原呈递细胞或微生物细胞。

11.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞包含RPMI8866、HFWT、721.221、K562或EBV-LCL。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，还包括使所述至少一种γδT细胞与至少一种γδT细胞效应剂接触。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂在所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物的所述外表面上表达或结合到所述外表面。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括细胞因子、粘附分子或γδT细胞活化剂。

15.根据权利要求12至14中任一项所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL，CD80，CD86，MICA，UBLP，2B4，LFA-1，NKG2D的配体，DNAM-1、IL-2、IL-12、IL-18、IL-15或IL-21的配体，或它们的任何组合。

16.根据权利要求12至0中任一项所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。

17.根据权利要求1至0中任一项所述的方法，其中使所述至少一种γδT细胞与所述饲养细胞、所述工程化颗粒、所述外来体或所述固体支持物在体外、体内或离体接触。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述扩增的γδT细胞包括Vδ2亚型和/或Vδ1亚型。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述γδT细胞是自体的、单倍体相合的或同种异体的γδT细胞。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述γδT细胞被扩增至少14天。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述扩增细胞中至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％或60％的细胞是所述Vδ2亚型的γδT细胞。

22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述γδT细胞在14天内以比对照γδT细胞群更快的速率扩增。

23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中所述γδT细胞在混合细胞群中。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述混合细胞群包含NK细胞。

25.根据权利要求24所述的方法，其中在所述γδT细胞扩增之前、期间或之后耗尽所述混合细胞群中的NK细胞。

26.一种治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1至25中任一项所述的方法扩增、活化或诱导的γδT细胞。

27.一种治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，所述方法包括：

a.获得至少一种γδT细胞；

b.使所述至少一种γδT细胞与工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物接触，所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域；

c.向所述受试者施用治疗有效量的接触后的γδT细胞。

28.根据权利要求27所述的方法，其中使所述至少一种γδT细胞与所述饲养细胞、所述工程化颗粒、所述外来体或所述固体支持物在体外、体内或离体接触。

29.根据权利要求27所述的方法，其中步骤b还包括在与所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物接触后诱导、活化和/或扩增所述至少一种γδT细胞，所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述γδT细胞被诱导、激活和/或扩增至少7天。

31.一种通过在受试者中扩增、诱导和/或活化内源性γδT细胞来治疗、减少、抑制、降低、改善和/或预防所述受试者的癌症、转移或感染性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物，所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物包含结合到其外表面的Fc结构域。

32.根据权利要求10至31所述的方法，其中所述Fc结构域通过跨膜结构域结合到所述外表面。

33.根据权利要求32所述的方法，其中所述跨膜结构域包含选自神经氨酸酶的跨膜结构域的信号锚序列、来自副流感病毒血凝素-神经氨酸酶的信号锚序列、来自转铁蛋白受体的信号锚序列、来自MHC II类不变链的信号锚序列、来自P糖蛋白的信号锚序列、来自去唾液酸糖蛋白受体的信号锚序列和来自中性内肽酶的信号锚序列。

34.根据权利要求32所述的方法，其中所述跨膜结构域包含副流感病毒血凝素-神经氨酸酶(NA)肽序列。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述NA肽序列包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4具有至少81％同一性的序列。

36.根据权利要求34所述的方法，其中所述NA肽序列包含与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID No：4具有至少95％同一性的序列。

37.根据权利要求33至36中任一项所述的方法，还包括所述跨膜结构域和所述Fc结构域之间的肽接头。

38.根据权利要求31至37中任一项所述的方法，其中所述Fc结构域包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgE的免疫球蛋白Fc结构域。

39.根据权利要求31至38中任一项所述的方法，其中所述Fc结构域结合到CD16。

40.根据权利要求31至39中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、抗原呈递细胞或微生物细胞。

41.根据权利要求31至39中任一项所述的方法，其中所述饲养细胞包含RPMI8866、HFWT、721.221、K562或EBV-LCL。

42.根据权利要求31至41中任一项所述的方法，还包括使所述γδT细胞与至少一种γδT细胞效应剂接触。

43.根据权利要求42所述的方法，其中在将所述γδT细胞施用于所述受试者之后，使所述γδT细胞与所述至少一种γδT细胞效应剂在体内接触。

44.根据权利要求42所述的方法，其中所述γδT细胞效应剂在所述工程化饲养细胞、所述工程化质膜颗粒、所述外来体或所述固体支持物的所述膜表面上表达或结合到所述膜表面。

45.根据权利要求10至44中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用离体组合物，所述组合物包含融合蛋白，所述融合蛋白包含连接到Fc结构域的氨基末端并结合到工程化饲养细胞、工程化质膜颗粒、外来体或固体支持物的跨膜结构域，使所述组合物与分离的混合细胞群接触，所述混合细胞群包含至少一种包含CD16或其功能片段的γδT细胞。

46.根据权利要求45所述的方法，其中所述离体组合物不含饲养细胞并且包含工程化质膜颗粒或工程化外来体，所述工程化质膜颗粒或工程化外来体包含结合到所述工程化质膜颗粒或外来体的外表面的倒置Fc结构域。

47.根据权利要求45或46所述的方法，其中所述离体组合物还包含至少一种γδT细胞效应剂。

48.根据权利要求45至47中任一项所述的方法，其中所述工程化质膜颗粒包括质膜和多个微粒或支持物表面，其中所述质膜包覆所述多个微粒或支持物表面。

49.根据权利要求48所述的方法，其中所述多个微粒或表面包括磁性微粒、二氧化硅珠、聚苯乙烯珠、乳胶珠、微结构、造影剂和癌症治疗剂中的至少一种。

50.根据权利要求42至49中任一项所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括细胞因子、粘附分子、γδT细胞活化剂或γδT细胞抑制剂。

51.根据权利要求42至50中任一项所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL，CD80，CD86，MICA，UBLP，2B4，LFA-1，NKG2D的配体，DNAM-1、IL-2、IL-12、IL-18、IL-15或IL-21的配体。

52.根据权利要求42至51中任一项所述的方法，其中所述至少一种γδT细胞效应剂包括4-1BBL、IL-18、IL-15或IL-21或它们的任何组合。

53.根据权利要求31至51 中任一项所述的方法，其中所述γδT细田胞是自体的、单倍体相合的或同种异体的γδT细胞。

54.根据权利要求31至53中任一项所述的方法，其中所述癌症选自血液癌、淋巴瘤、结肠直肠癌、结肠癌、肺癌、头颈癌、卵巢癌、前列腺癌、睾丸癌、肾癌、皮肤癌、宫颈癌、胰腺癌和乳腺癌。在一个方面，所述癌症包括实体瘤。在另一方面，所述癌症选自急性髓性白血病、骨髓增生异常综合征、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、骨髓纤维化、多发性骨髓瘤。在另一方面，所述癌症选自白血病、淋巴瘤、肉瘤、癌，并且可来源于骨髓、脑、肺、乳腺、胰腺、肝、头颈、皮肤、生殖道、前列腺、结肠、肝、肾、腹膜、骨、关节、眼。

55.根据权利要求54所述的方法，还包括向所述受试者联合施用至少一种癌症治疗剂和所述组合物。

56.根据权利要求55所述的方法，其中所述至少一种癌症治疗剂选自阿贝西利、醋酸阿比特龙、Abitrexate(甲氨蝶呤)、Abraxane(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、ABVD、ABVE、ABVE-PC、AC、AC-T、Adcetris(本妥昔单抗)、ADE、恩美曲妥珠单抗、阿霉素(盐酸多柔比星)、双马来酸盐阿法替尼、Afinitor(依维莫司)、Akynzeo(奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼)、Aldara(咪喹莫特)、阿地白介素、Alecensa(阿来替尼)、阿来替尼、阿仑单抗、Alimta(培美曲塞二钠)、Aliqopa(盐酸库潘尼西)、注射用Alkeran(盐酸美法仑)、Alkeran片剂(美法仑)、Aloxi(盐酸帕洛诺司琼)、布吉他滨(布加替尼)、Ambochlorin(苯丁酸氮芥)、Amboclorin(苯丁酸氮芥)、氨磷汀、氨基乙酰丙酸、阿那曲唑、阿瑞匹坦、阿可达(帕米膦酸二钠)、瑞宁得(阿那曲唑)、阿诺新(依西美坦)、Arranon(奈拉滨)、三氧化二砷、Arzerra(奥法木单抗)、菊欧文氏菌天冬酰胺酶、阿特珠单抗、阿瓦斯汀(贝伐单抗)、阿维鲁单抗、阿西替尼、阿扎胞苷、Bavencio(阿维鲁单抗)、BEACOPP、Becenum(卡莫司汀)、Beleodaq(贝利司他)、贝利司他、盐酸苯达莫司汀、BEP、Besponsa(奥英妥珠单抗)、贝伐单抗、贝沙罗汀、百克沙(托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗)、比卡鲁胺、BiCNU(卡莫司汀)、博来霉素、博纳吐单抗、倍利妥(博纳吐单抗)、硼替佐米、Bosulif(博舒替尼)、博舒替尼、本妥昔单抗、布加替尼、BuMel、白消安、白舒非(白消安)、卡巴他赛、Cabometyx(苹果酸卡博替尼)、苹果酸卡博替尼、CAF、坎帕斯(阿仑单抗)、Camptosar(盐酸伊立替康)、卡培他滨、CAPOX、Carac(氟尿嘧啶--局部用药)、卡铂、卡铂-泰素、卡非佐米、Carmubris(卡莫司汀)、卡莫司汀、卡莫司汀植入物、康士得(比卡鲁胺)、CEM、色瑞替尼、Cerubidine(盐酸柔红霉素)、希瑞适(重组HPV二价疫苗)、西妥昔单抗、CEV、苯丁酸氮芥、苯丁酸氮芥-强的松、CHOP、顺铂、克拉屈滨、Clafen(环磷酰胺)、氯法拉滨、氯福雷司(氯法拉滨)、Clolar(氯法拉滨)、CMF、考比替尼、Cometriq(苹果酸卡博替尼)、盐酸库潘尼西、COPDAC、COPP、COPP-ABV、Cosmegen(更生霉素)、Cotellic(考比替尼)、克唑替尼、CVP、环磷酰胺、Cyfos(异环磷酰胺)、Cyramza(雷莫芦单抗)、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、Cytosar-U(阿糖胞苷)、Cytoxan(环磷酰胺)、达拉非尼、达卡巴嗪、Dacogen(地西他滨)、更生霉素、达雷木单抗、Darzalex(达雷木单抗)、达沙替尼、盐酸柔红霉素、盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体、地西他滨、去纤苷钠、Defitelio(去纤苷钠)、地加瑞克、地尼白介素、地诺单抗、DepoCyt(阿糖胞苷脂质体)、地塞米松、盐酸右雷佐生、地努图希单抗、多西他赛、Doxil(盐酸多柔比星脂质体)、盐酸多柔比星、盐酸多柔比星脂质体、Dox-SL(盐酸多柔比星脂质体)、DTIC-Dome(达卡巴嗪)、德瓦鲁单抗、Efudex(氟尿嘧啶--局部用药)、Elitek(拉布立酶)、Ellence(盐酸表柔比星)、埃罗妥珠单抗、乐沙定(奥沙利铂)、艾曲波帕、Emend(阿瑞匹坦)、Empliciti(埃罗妥珠单抗)、恩西地平甲磺酸盐、恩杂鲁胺、盐酸表柔比星、EPOCH、爱必妥(西妥昔单抗)、甲磺酸艾日布林、Erivedge(维莫德吉)、盐酸埃罗替尼、Erwinaze(菊欧文氏菌天冬酰胺酶)、阿米福汀(氨磷汀)、Etophos(磷酸依托泊苷)、依托泊苷、磷酸依托泊苷、Evacet(盐酸多柔比星脂质体)、依维莫司、Evista(盐酸雷洛昔芬)、迈维宁(盐酸美法仑)、依西美坦、5-FU(氟尿嘧啶注射液)、5-FU(氟尿嘧啶--局部用药)、法乐通(托瑞米芬)、Farydak(帕比司他)、芙仕得(氟维司群)、FEC、弗隆(来曲唑)、非格司亭、福达华(磷酸氟达拉滨)、磷酸氟达拉滨、Fluoroplex(氟尿嘧啶--局部用药)、氟尿嘧啶注射液、氟尿嘧啶--局部用药、氟他胺、Folex(甲氨蝶呤)、FolexPFS(甲氨蝶呤)、FOLFIRI、FOLFIRI-贝伐单抗、FOLFIRI-西妥昔单抗、FOLFIRINOX、FOLFOX、Folotyn(普拉曲沙)、FU-LV、氟维司群、Gardasil(重组HPV四价疫苗)、Gardasil 9(重组HPV九价疫苗)、Gazyva(奥妥珠单抗)、吉非替尼、盐酸吉西他滨、吉西他滨-顺铂、吉西他滨-奥沙利铂、吉妥珠单抗奥佐米星、健择(盐酸吉西他滨)、吉泰瑞(双马来酸盐阿法替尼)、格列卫(甲磺酸伊马替尼)、Gliadel(卡莫司汀植入物)、Gliadel晶片(卡莫司汀植入物)、谷卡匹酶、醋酸戈舍瑞林、Halaven(甲磺酸艾日布林)、Hemangeol(盐酸普萘洛尔)、赫塞汀(曲妥珠单抗)、重组HPV二价疫苗、重组HPV九价疫苗、重组HPV四价疫苗、美新(盐酸拓扑替康)、Hydrea(羟基脲)、羟基脲、Hyper-CVAD、Ibrance(帕博西尼)、替伊莫单抗、依鲁替尼、ICE、Iclusig(盐酸普纳替尼)、伊达霉素(盐酸伊达比星)、盐酸伊达比星、艾德拉尼、Idhifa(恩西地平甲磺酸盐)、Ifex(异环磷酰胺)、异环磷酰胺、Ifosfamidum(异环磷酰胺)、IL-2(阿地白介素)、甲磺酸伊马替尼、Imbruvica(依鲁替尼)、Imfinzi(德瓦鲁单抗)、咪喹莫特、Imlygic(Talimogene Laherparepvec)、Inlyta(阿西替尼)、奥英妥珠单抗、重组干扰素α-2b、干扰素-2(阿地白介素)、内含子A(重组干扰素α-2b)、碘I 131托西莫单抗和托西莫单抗、伊匹单抗、易瑞沙(吉非替尼)、盐酸伊立替康、盐酸伊立替康脂质体、Istodax(罗米地辛)、伊沙匹隆、枸橼酸伊沙佐米、Ixempra(伊沙匹隆)、Jakafi(磷酸鲁索替尼)、JEB、Jevtana(卡巴他赛)、Kadcyla(恩美曲妥珠单抗)、Keoxifene(盐酸雷洛昔芬)、Kepivance(帕利夫明)、可瑞达(派姆单抗)、Kisqali(瑞博西尼)、Kymriah(替沙仑赛)、Kyprolis(卡非佐米)、醋酸兰瑞肽、二甲苯磺酸拉帕替尼、Lartruvo(奥拉单抗)、来那度胺、甲磺酸乐伐替尼、Lenvima(甲磺酸乐伐替尼)、来曲唑、亚叶酸钙、瘤可宁(苯丁酸氮芥)、醋酸亮丙瑞林、Leustatin(克拉屈滨)、Levulan(氨基乙酰丙酸)、Linfolizin(苯丁酸氮芥)、LipoDox(盐酸多柔比星脂质体)、洛莫司汀、朗斯弗(曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶)、利普安(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝(醋酸亮丙瑞林)、利普安得宝-派德(醋酸亮丙瑞林)、Lynparza(奥拉帕尼)、Marqibo(硫酸长春新碱脂质体)、甲基苄肼(盐酸丙卡巴肼)、盐酸氮芥、醋酸甲地孕酮、Mekinist(曲美替尼)、美法仑、盐酸美法仑、巯嘌呤、美司钠、Mesnex(美司钠)、Methazolastone(替莫唑胺)、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤LPF(甲氨蝶呤)、溴化甲基纳曲酮、Mexate(甲氨蝶呤)、Mexate-AQ(甲氨蝶呤)、米哚妥林、丝裂霉素C、盐酸米托蒽醌、Mitozytrex(丝裂霉素C)、MOPP、Mozobil(普乐沙福)、Mustargen(盐酸氮芥)、突变霉素(丝裂霉素C)、Myleran(白消安)、Mylosar(阿扎胞苷)、Mylotarg(吉妥珠单抗奥佐米星)、纳米颗粒紫杉醇(紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂)、诺维本(酒石酸长春瑞滨)、耐昔妥珠单抗、奈拉滨、Neosar(环磷酰胺)、马来酸来那替尼、Nerlynx(马来酸来那替尼)、奈妥吡坦和盐酸帕洛诺司琼、Neulasta(培非格司亭)、优保津(非格司亭)、多吉美(甲苯磺酸索拉非尼)、Nilandron(尼鲁米特)、尼洛替尼、尼鲁米特、Ninlaro(枸橼酸伊沙佐米)、甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物、纳武单抗、诺瓦得士(枸橼酸他莫昔芬)、Nplate(罗米司亭)、奥妥珠单抗、Odomzo(索尼德吉)、OEPA、奥法木单抗、OFF、奥拉帕尼、奥拉单抗、高三尖杉酯碱、Oncaspar(培门冬酶)、盐酸昂丹司琼、Onivyde(盐酸伊立替康脂质体)、Ontak(地尼白介素)、欧狄沃(纳武单抗)、OPPA、奥希替尼、奥沙利铂、紫杉醇、紫杉醇白蛋白稳定的纳米颗粒制剂、PAD、帕博西尼、帕利夫明、盐酸帕洛诺司琼、盐酸帕洛诺司琼和奈妥吡坦、帕米膦酸二钠、帕尼单抗、帕比司他、Paraplat(卡铂)、伯尔定(卡铂)、盐酸帕唑帕尼、PCV、PEB、培门冬酶、培非格司亭、聚乙二醇干扰素α-2b、佩乐能(聚乙二醇干扰素α-2b)、派姆单抗、培美曲塞二钠、Perjeta(帕妥珠单抗)、帕妥珠单抗、Platinol(顺铂)、Platinol-AQ(顺铂)、普乐沙福、泊马度胺、Pomalyst(泊马度胺)、盐酸普纳替尼、Portrazza(耐昔妥珠单抗)、普拉曲沙、强的松、盐酸丙卡巴肼、Proleukin(阿地白介素)、普罗力(地诺单抗)、Promacta(艾曲波帕)、盐酸普萘洛尔、普列威(Sipuleucel-T)、Purinethol(巯嘌呤)、Purixan(巯嘌呤)、镭223二氯、盐酸雷洛昔芬、雷莫芦单抗、拉布立酶、R-CHOP、R-CVP、重组人乳头瘤病毒(HPV)二价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)九价疫苗、重组人乳头瘤病毒(HPV)四价疫苗、重组干扰素α-2b、瑞戈非尼、Relistor(溴化甲基纳曲酮)、R-EPOCH、Revlimid(来那度胺)、Rheumatrex(甲氨蝶呤)、瑞博西尼、R-ICE、Rituxan(利妥昔单抗)、RituxanHycela(利妥昔单抗和人透明质酸酶)、利妥昔单抗、利妥昔单抗和人透明质酸酶、盐酸罗拉吡坦、罗米地辛、罗米司亭、红比霉素(盐酸柔红霉素)、鲁卡帕尼(樟脑磺酸卢卡帕尼)、樟脑磺酸卢卡帕尼、磷酸鲁索替尼、Rydapt(米哚妥林)、无菌滑石粉气雾剂(滑石粉)、司妥昔单抗、Sipuleucel-T、Somatuline Depot(醋酸兰瑞肽)、索尼德吉、甲苯磺酸索拉非尼、Sprycel(达沙替尼)、STANFORD V、无菌滑石粉(滑石粉)、Steritalc(滑石粉)、Stivarga(瑞戈非尼)、苹果酸舒尼替尼、索坦(苹果酸舒尼替尼)、Sylatron(聚乙二醇干扰素α-2b)、Sylvant(司妥昔单抗)、Synribo(高三尖杉酯碱)、Tabloid(硫鸟嘌呤)、TAC、Tafinlar(达拉非尼)、Tagrisso(奥希替尼)、滑石粉、Talimogene Laherparepvec、枸橼酸他莫昔芬、Tarabine PFS(阿糖胞苷)、特罗凯(盐酸埃罗替尼)、Targretin(贝沙罗汀)、Tasigna(尼洛替尼)、泰素(紫杉醇)、泰索帝(多西他赛)、Tecentriq(阿特珠单抗)、Temodar(替莫唑胺)、替莫唑胺、替西罗莫司、沙利度胺、Thalomid(沙利度胺)、硫鸟嘌呤、噻替派、替沙仑赛、Tolak(氟尿嘧啶--局部用药)、盐酸拓扑替康、托瑞米芬、坦罗莫司(替西罗莫司)、托西莫单抗和碘I 131托西莫单抗、Totect(盐酸右雷佐生)、TPF、Trametinib、曲美替尼、曲妥珠单抗、Treanda(盐酸苯达莫司汀)、曲氟尿苷和盐酸替吡嘧啶、Trisenox(三氧化二砷)、泰立沙(二甲苯磺酸拉帕替尼)、Unituxin(地努图希单抗)、尿苷三乙酸酯、VAC、凡德他尼、VAMP、Vambi(盐酸罗拉匹坦)、维克替比(帕尼单抗)、VeIP、Velban(硫酸长春碱)、万珂(硼替佐米)、Velsar(硫酸长春碱)、维莫非尼、维奈妥拉(维奈托克)、维奈托克、玻玛西林(阿贝西利)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Vidaza(阿扎胞苷)、硫酸长春碱、VincasarPFS(硫酸长春新碱)、硫酸长春新碱、硫酸长春新碱脂质体、酒石酸长春瑞滨、VIP、维莫德吉、Vistogard(尿苷三乙酸酯)、Voraxaze(谷卡匹酶)、伏立诺他、Votrient(盐酸帕唑帕尼)、Vyxeos(盐酸柔红霉素和阿糖胞苷脂质体)、Wellcovorin(亚叶酸钙)、Xalkori(克唑替尼)、希罗达(卡培他滨)、XELIRI、XELOX、Xgeva(地诺单抗)、多菲戈(镭223二氯)、Xtandi(恩杂鲁胺)、Yervoy(伊匹单抗)、Yondelis(曲贝替定)、Zaltrap(阿柏西普)、Zarxio(非格司亭)、Zejula(甲苯磺酸尼拉帕尼一水合物)、Zelboraf(维罗非尼)、泽娃灵(替伊莫单抗)、Zinecard(盐酸右雷佐生)、阿柏西普、Zofran(盐酸昂丹司琼)、诺雷德(醋酸戈舍瑞林)、唑来膦酸、Zolinza(伏立诺他)、择泰(唑来膦酸)、Zydelig(艾德拉尼)、赞可达(色瑞替尼)和/或泽珂(醋酸阿比特龙)。

57.根据权利要求55所述的方法，其中所述至少一种癌症治疗剂选自化疗剂(例如CHOP、FLAG、7+3)、基于药物的制备方案或它们的组合。(Cy-Flu、Bu-Flu、Flu-Mel)。

58.根据权利要求31至57中任一项所述的方法，其中所述感染性疾病由病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染引起。

59.根据权利要求58所述的方法，其中所述病毒感染包括单纯疱疹病毒-1、单纯疱疹病毒-2、水痘-带状疱疹病毒、EB病毒、巨细胞病毒、人疱疹病毒-6、天花病毒、水疱性口炎病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、麻疹病毒、多瘤病毒、人乳头瘤病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、柯萨奇病毒、登革热病毒、腮腺炎病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、劳斯肉瘤病毒、呼肠孤病毒、黄热病病毒、寨卡病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙热病毒、东部马脑炎病毒、日本脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、墨累河谷热病毒、西尼罗河病毒、裂谷热病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、辛德毕斯病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人T细胞白血病病毒1型、汉坦病毒、风疹病毒、猿猴免疫缺陷病毒、人免疫缺陷病毒1型或人免疫缺陷病毒2型的感染。

60.根据权利要求58所述的方法，其中所述细菌感染包括结核分枝杆菌(Mycobateriumtuberculosis)、牛分枝杆菌(Mycobaterium bovis)、牛分枝杆菌菌株BCG、BCG亚株、鸟分枝杆菌(Mycobaterium avium)、胞内分枝杆菌(Mycobaterium intracellular)、非洲分枝杆菌(Mycobaterium africanum)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobaterium kansasii)、海洋分枝杆菌(Mycobaterium marinum)、溃疡分枝杆菌(Mycobaterium ulcerans)、鸟分枝杆菌副结核亚种、星状诺卡氏菌(Nocardia asteroides)、其他诺卡氏菌属(Nocardia)物种、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、其他军团菌属(Legionella)物种、鲍曼不动杆菌(Acetinobacter baumanii)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)、其他沙门氏菌属(Salmonella)物种、鲍氏志贺菌(Shigellaboydii)、痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)、宋内志贺菌(Shigellasonnei)、福氏志贺菌(Shigellaflexneri)、其他志贺菌属(Shigella)物种、鼠疫耶尔森氏菌(Yersiniapestis)、溶血性巴氏杆菌(Pasteurella haemolytica)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida)、其他巴氏杆菌属(Pasteurella)物种、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)、单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、伊氏李斯特菌(Listeria ivanovii)、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)、其他布鲁氏菌属(Brucella)物种、反刍类考德里氏体(Cowdria ruminantium)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、禽波氏杆菌(Bordetella avium)、百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)、支气管败血博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、创口博德特氏菌(Bordetella trematum)、欣茨博德特氏菌(Bordetella hinzii)、Bordetella pteri、副百日咳博德特氏菌(Bordetella parapertussis)、Bordetella ansorpii、其他博德特氏菌属(Bordetella)物种、鼻疽伯克霍尔德氏菌(Burkholderia mallei)、类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderiapsuedomallei)、洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacian)、肺炎衣原体(Chlamydiapneumoniae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci)、贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)、立克次体属(Rickettsial)物种、埃立克体属(Ehrlichia)物种、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、弯曲杆菌属(Campylobacter)物种、脑膜炎奈瑟菌(Neiserria meningitidis)、淋病奈瑟菌(Neiserria gonorrhea)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、其他假单胞菌属(Pseudomonas)物种、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)、其他嗜血杆菌属(Hemophilus)物种、破伤风梭菌(Clostridium tetani)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、其他梭菌属(Clostridium)物种、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterolitica)和其他耶尔森氏菌属(Yersinia)物种以及支原体属(Mycoplasma)物种的感染。

61.根据权利要求58所述的方法，其中所述真菌感染包括白色念珠菌(Candidaalbicans)、新生隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞浆菌(Histoplamacapsulatum)、烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、粗球孢子菌(Coccidiodes immitis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidiodes brasiliensis)、皮炎芽生菌(Blastomycesdermitidis)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、马尔尼菲青霉菌(Penicilliummarneffi)或互隔交链孢霉(Alternaria alternate)的感染。

62.根据权利要求58所述的方法，其中所述寄生虫感染包括刚地弓形虫(Toxoplasmagondii)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、三日疟原虫(Plasmodium malariae)、其他疟原虫属物种、溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)、福氏耐格里阿米巴(Naegleria fowleri)、鼻孢子虫(Rhinosporidiumseeberi)、蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)、蠕形住肠线虫(Enterobiusvermicularis)、格氏蛲虫(Enterobius gregorii)、蛔虫(Ascaris lumbricoides)、十二指肠钩口线虫(Ancylostoma duodenale)、美洲钩虫(Necator americanus)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、布氏锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、硕大利什曼原虫(Leishmania major)、其他利什曼原虫属物种、阔节裂头绦虫(Diphyllobothrium latum)、短膜壳绦虫(Hymenolepis nana)、长膜壳绦虫(Hymenolepisdiminuta)、细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、多房棘球绦虫(Echinoccusmultilocularis)、伏氏棘球绦虫(Echinococcus vogeli)、少节棘球绦虫(Echinococcusoligarthrus)、阔节裂头绦虫、华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)；Clonorchisviverrini、肝片吸虫(Fasciola hepatica)、大片吸虫(Fasciola gigantica)、枝双腔吸虫(Dicrocoelium dendriticum)、布氏姜片虫(Fasciolopsis buski)、横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawai)、泰国肝吸虫(Opisthorchis viverrini)、猫后睾吸虫(Opisthorchis felineus)、华支睾吸虫、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)物种、间插血吸虫(Schistosoma intercalatum)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)、日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、其他血吸虫属物种、毛毕属血吸虫(Trichobilharzia regenti)、旋毛虫(Trichinella spiralis)、布氏旋毛虫(Trichinella britovi)、纳氏旋毛虫(Trichinella nelsoni)、本地旋毛虫(Trichinella nativa)或溶组织内阿米巴的感染。

63.根据权利要求31至62中任一项所述的方法，其中所述γδT细胞配制在药学上可接受的载体和药学上可接受的赋形剂中。

64.根据权利要求31至63中任一项所述的方法，其中在肠胃外、静脉内、腹膜内或皮下或通过动脉输注、静脉输注或人工导管介导的输注施用所述γδT细胞。