CN117717524A - 一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 - Google Patents
一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117717524A CN117717524A CN202311542987.5A CN202311542987A CN117717524A CN 117717524 A CN117717524 A CN 117717524A CN 202311542987 A CN202311542987 A CN 202311542987A CN 117717524 A CN117717524 A CN 117717524A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- arginine
- albumin
- water phase
- dissolving
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 title claims abstract description 98
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 98
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 title claims abstract description 94
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 title claims abstract description 54
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 32
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 claims abstract description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 40
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims description 17
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 17
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 17
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 11
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 10
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 10
- -1 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 claims description 9
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 8
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 3
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 claims description 2
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 2
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 2
- 239000002745 poly(ortho ester) Substances 0.000 claims description 2
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 claims description 2
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 claims description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000056 polyoxyethylene ether Polymers 0.000 claims description 2
- 229940051841 polyoxyethylene ether Drugs 0.000 claims description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 claims description 2
- 229920000166 polytrimethylene carbonate Polymers 0.000 claims description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 23
- 238000011068 loading method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002875 effect on osteoarthritis Effects 0.000 abstract 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 85
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 85
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 22
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 7
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 7
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 6
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 3
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 3
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 102100027995 Collagenase 3 Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000577887 Homo sapiens Collagenase 3 Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 2
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000281 joint capsule Anatomy 0.000 description 2
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 2
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L Fast green FCF Chemical compound [Na+].[Na+].C=1C=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C(=CC(O)=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=CC=1N(CC)CC1=CC=CC(S([O-])(=O)=O)=C1 RZSYLLSAWYUBPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000549128 Hippocratea volubilis Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000879 anti-atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008414 cartilage metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003011 chondroprotective effect Effects 0.000 description 1
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 description 1
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012738 dissolution medium Substances 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000007925 in vitro drug release testing Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 229940124280 l-arginine Drugs 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000005499 meniscus Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用。所述负载精氨酸的白蛋白基缓释微球采用如下方式制得:先将药物活性成分和白蛋白溶于水中,获得内水相W1;将高分子聚合物溶于有机溶剂中,获得油相O1;将乳化剂与氯化钠溶于水中,获得外水相W2;其中,所述药物活性成分为精氨酸;然后将所述内水相W1缓慢滴入所述油相O1中,充分乳化后,获得W1/O1型乳液;再将所述W1/O1型乳液缓慢滴入所述外水相W2中,充分乳化后,获得W1‑O1‑W2型复乳,即得负载精氨酸的白蛋白基缓释微球。该缓释微球具有粒径小、载药量高等特点;且在添加白蛋白后,能在体内外长时间持续缓释精氨酸,对骨关节炎有良好的治疗效果,有望在骨关节炎得到进一步的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种药用型缓释微球,具体涉及一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与在治疗骨关节炎药物上的应用。
背景技术
L-精氨酸(L-arginine,L-arg)是一种半必需氨基酸,参与许多生化过程。研究表明,L-精氨酸代谢在体内有3条途径,一是精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)催化下代谢产生NO,并生成瓜氨酸;二是在精氨酸分解酶作用下,精氨酸生成鸟氨酸和尿素,也可通过甘氨酸转脒基酶催化分解为鸟氨酸和肌酐酸;三是由鸟氨酸生成多胺,多胺是腐胺、亚精胺和精胺的统称,对于调控细胞生长和发育具有重要作用。精氨酸降解主要在小肠完成。因此,通过精氨酸下游的进一步反应,其可以合成许多生命活动的必需物质。
目前,临床上精氨酸在预防心血管疾病、糖尿病、自身免疫疾病、伤口愈合及肿瘤方面都有疗效。例如,L-精氨酸是一氧化氮(NO)合成的前体。在大脑中,NO充当神经递质;在免疫系统中,它充当宿主防御的中介;在心血管系统中,它介导完整内皮的保护作用,充当血管扩张剂和内源性抗动脉粥样硬化分子(Altern Ther Health Med.2014May-Jun;20(3):48-54)。并且细胞内L-精氨酸浓度直接影响对抗肿瘤反应至关重要的T细胞的代谢适应性和存活能力(Cell.2016Oct 20;167(3):829-842.e13)。同时,骨髓细胞对L-精氨酸的代谢增加会导致免疫反应和肿瘤生长过程中淋巴细胞对抗原的反应受损(Nat RevImmunol.2005Aug;5(8):641-54)。在伤口愈合方面,精氨酸通过诱导异构体(iNOS)参与许多与伤口愈合相关的调节机制(Curr Opin Clin Nutr Metab Care.2000 3:197-204)。近年来,部分学者也发现,体外研究表明精氨酸具有较强的清除DPPH自由基、ABTS自由基、超氧自由基能力以及一定的还原力(Acta Poloniae Pharmaceutica,2015,72(2):245-252)。并且,进一步研究表明,精氨酸的自由基清除活性主要与胍基基团有关(MolecularPharmacology,2002,61(5):1081-1088)。而骨关节炎的发病机制与软骨退变、创伤、代谢等因素有关,其中氧化应激是骨关节炎发生发展的关键因素之一(Free Radic Biol Med,2019,132:73-82)。因此,作为调控氧化应激与炎症的药物,精氨酸有望作为骨关节炎治疗新药,为临床上骨关节炎的治疗提供新思路。
综上所述,补充L-精氨酸在临床应用方面具有重大的价值,而其在骨关节炎的应用仍未有人报道。目前精氨酸补充剂主要依赖的是口服途径,而局部给药方面仍然存在着许多不足。口服给药的缺点有疗效慢、剂量大、对胃肠道产生不良反应等。而局部给药可以使疗效增快,发挥长效的作用以改善病人的预后。近年来以聚合物为材料通过乳化包囊等分散技术将药物制备成脂质体、微乳、微球、纳米囊、纳米粒等微粒分散体系,用作药物缓、控释,增强药物的安全性和有效性,提高患者的依从性。而对于L-精氨酸药物,其药物剂型的报道仍然较少,中国专利202210494016游剑等人提出了一种精氨酸多囊脂质体的制备方法。但由于脂质体半衰期较短,稳定性较差,并不适用于骨关节炎的治疗应用。微球(microspheres,MS)是近年来发展的新剂型,可以供注射、口服、滴鼻、皮下埋植或关节腔给药使用。微球担载药物后,因其对特定器官和组织的靶向性及微粒中药物释放的缓释性,只需数日甚至数月注射一次,可显著减少用药次数,该类制剂已经成为近年来缓、控释剂型研究的热点之—。微球也可以用于担载氨基酸药物,但是由于水溶性小分子氨基酸药物扩散性较强,在微球中缓释效果较差。
发明内容
有鉴于此,本发明通过大量的检索和创造性实验,首次开发一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球,该缓释微球具有粒径小、载药量高、缓释药物等特点;能在关节腔内实现药物缓释。本发明提供的缓释微球可广泛应用于制备骨关节药物,尤其是制备关节腔内注射剂;同时,通过试验,我们也首次报道了精氨酸在骨关节炎的治疗作用。
本发明所提供的缓释微球是由包括药物活性成分、白蛋白、乳化剂和缓释材料(载体材料)制备而成;其中,所述药物活性成分为精氨酸。
其中,本发明采用白蛋白作为精氨酸稳定剂,在生理条件下,白蛋白与精氨酸产生一定的静电相互作用,以提高微球的缓释效果。并且,外水相加入氯化钠会抑制内水相与外水相的物质交换,提高微球的药物包封率,减少微球的药物突释率,长效发挥精氨酸的作用。
具体而言,所述负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的制备方法,包括如下步骤:
1)将药物活性成分和白蛋白溶于水中,获得内水相W1;将高分子聚合物溶于有机溶剂中,获得油相O1;将乳化剂与氯化钠溶于水中,获得外水相W2;
其中,所述药物活性成分为精氨酸;
2)将所述内水相W1缓慢滴入所述油相O1中,充分乳化后,获得W1/O1型乳液;
3)将所述W1/O1型乳液缓慢滴入所述外水相W2中,充分乳化后,获得W1-O1-W2型复乳,然后再用超纯水清洗,即得负载精氨酸的白蛋白基缓释微球。
其中,所述白蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、人血清白蛋白、尿微量白蛋白中的一种或几种。
优选的,所述精氨酸与所述白蛋白的投料质量比为5:1~1:5:优选为3:1~1:3。
优选的,所述高分子聚合物为聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)、聚己内酯、聚乳酸、聚三亚甲基碳酸酯、聚羟基乙酸、聚羟基丁酸酯、聚羟基丁酸羟基戊酸共聚物、聚原酸酯、聚酸酐中的一种或多种;
优选的所述有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷、甲苯、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的一种或几种。
优选的所述乳化剂为聚乙烯醇(PVA)、聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物、多元醇脂肪酸酯中的一种或几种;
其中,所述聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)在有机溶剂中的浓度为3%~10%w/v;优选为4.5%~5.5%w/v,特别是5%w/v。
其中,所述聚乙烯醇与氯化钠的质量浓度比为3:1~1:3;优选为1:1。
进一步地,将内水相W1按体积比为1:4~6的比例缓慢逐滴加加入所述油相O1中;优选体积比为1:5。
进一步地,将W1/O1型乳液按体积比为1:8~12的比例逐滴加加入外水相W2中;优选体积比为1:10。
进一步地,步骤2)与步骤3)中超声乳化的功率为180~540W,乳化的时间为2~5min;优选为乳化功率为320~380W乳化的时间为2~5min;尤其是功率为360W,乳化时间为3min时,基于上述原料的乳化效果最优。
本发明在制备过程中,尤其发现,聚乳酸羟基乙酸共聚物的浓度、牛血清白蛋白的用量、聚乙烯醇与氯化钠的质量比,以及超声功率,对后续的制备获得的缓释微球具有明显的影响。
在实际制备过程中,药物活性成分的添加量,对后续的负载量影响不大。即使添加量的有所不同,同样的制备条件,最终所获得的负载量基本相同。但白蛋白的投放量会对工艺形成较大的影响;因此药物活性成分如精氨酸,与白蛋白的投料比依然对终产品会非常明显的影响。
基于此,本发明提供一种优选方案,具体如下:
一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的制备方法,包括如下步骤:
1)将药物活性成分精氨酸与牛血清白蛋白溶于水中,作为内水相W1;精氨酸与所述白蛋白的投料质量比为3:1~1:3;
2)将聚乳酸乙醇酸共聚物按4.5%~5.5%w/v的浓度溶于三氯甲烷中,作为油相O1;
3)将聚乙烯醇和氯化钠按质量比为1:1的比例混合溶于水中,作为外水相W2;
4)将内水相W1缓慢逐滴加入油相O1中;充分乳化后,获得W1/O1型乳液;其中,所述乳化的超声功率为320~380W;乳化的时间为2~5min;
5)将所述W1/O1型乳液缓慢滴入所述外水相W2中,充分乳化后,获得W1-O1-W2型复乳,然后再用超纯水清洗,即得负载精氨酸的缓释微球;其中,所述乳化的超声功率为320~380W;优选乳化的时间为2~5min。
本发明的又一目的在于,提供上述任一制备方法制得的负责精氨酸的白蛋白基缓释微球。
所制得的负责精氨酸的白蛋白基缓释微球的粒径为0.2μm~2μm。
相对于传统的缓释颗粒,本发明的缓释微球采用白蛋白、高分子生物可降解聚合物与PVA乳化剂作为原料利用W/O/W复乳法制备,白蛋白与高分子量的聚合物可以起到很好的药物缓释、控释的作用。实验结果表明,纳米粒的粒径及分散性良好,同时对于骨关节炎主要累及的软骨细胞有很好的抗炎疗效与保护特性,对软骨细胞也没有明显的细胞毒性。并且,该缓释微球使用体积小,作用效果明显,能够有效的缓解和治疗骨关节炎,缓释效果良好,减少多次给药的成本,降低了患者的疼痛感和刺激性,减少了由于有机溶剂带来的不良反应和安全事故。
本发明的缓释微球的制备方法操作简单,粒径均一、稳定性良好,能够长效释放精氨酸,有望在骨关节炎得到进一步的临床应用。
附图说明
图1实施例1所获得的优化后的缓释微球在制备过程中的形态表征图;其中,A为缓释微球冻干后的白色粉末的形态图;B为重悬后为均匀的白色混悬液的形态图;C为微球的粒径分布图;D为微球的电位分布图;
图2为实施例1所获得的优化后的缓释微球的光学显微镜下的形态图;
图3为实施例1所获得的优化后的缓释微球的TEM形态表征图;
图4为未担载药物的白蛋白微球、不同浓度小分子精氨酸、负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的液相色谱图;
图5为实施例1所获得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球与负载精氨酸的微球(不含白蛋白)的体外释放曲线;
图6为体外软骨细胞的蛋白印迹实验;其中A为实验结果图,B为实验结果数据的统计图。
图7为苏木精-伊红(H&E)染色与番红固绿染色(F-O)对关节软骨和滑膜的组织学评估;其中A为实验结果图,B为实验结果数据的统计图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施提供一种负责精氨酸的白蛋白基缓释微球的制备方法,具体如下:
(1)取药物活性成分精氨酸与牛血清白蛋白同时溶于超纯水中作为内水相W1;其中,所述精氨酸与所述白蛋白的投料质量比为1:1。
(2)称取载体材料酯封端聚乳酸乙醇酸共聚物(PLGA)溶于二氯甲烷中,载体材料溶液作为油相O1;其中,聚乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)在有机溶剂中的浓度为50mg/mL。
(3)配制聚乙烯醇(PVA)和氯化钠的混合溶液作为外水相W2;其中,外水相W2中的聚乙烯醇(PVA)的的质量浓度为20mg/mL。PVA与氯化钠的质量比为1:1。
(4)将内水相W1按体积比为1:5的比例缓慢逐滴加入溶有载体材料的油相O1中;经超声乳化机以360W的功率,乳化3min,将形成的W1/O1型乳液;
(5)然后再将W1/O1型乳液按体积比为1:5的比例缓慢逐滴加入外水相W2中,再经超声乳化机以360W的功率,乳化3min,得到W1-O1-W2型复乳;
(6)将W1-O1-W2型复乳置于磁力搅拌器上,以500rpm/min的转速搅拌6h,挥发有机溶剂。收集液体,用超纯水洗涤离心3次洗去多余PVA溶液,弃去上清,下层沉淀即为微球。将离心后的微球用超纯水重悬后加入冻干保护剂甘露醇,然后冷冻干燥48h,得到干燥的微球。
实施例2~9
本实施提供一种负责精氨酸的白蛋白基缓释微球的制备方法,与实施例1的区别主要在于,PLGA的质量浓度、精氨酸(arg)和白蛋白(bsa)的质量投料比、PVA与氯化钠的质量比,以及超声功率的不同。
具体如下表所示(No.6为实施例1):
表1
No. | 实施例 | PLGA(mg/mL) | m(arg):m(bsa) | C(PVA):C(NaCl) | 超声功率(W) |
1 | 实施例2 | 30 | 3:1 | 1:1 | 180 |
2 | 实施例3 | 30 | 1:3 | 1:3 | 360 |
3 | 实施例4 | 30 | 1:1 | 3:1 | 540 |
4 | 实施例5 | 50 | 3:1 | 1:3 | 540 |
5 | 实施例6 | 50 | 1:3 | 3:1 | 180 |
6 | 实施例1 | 50 | 1:1 | 1:1 | 360 |
7 | 实施例7 | 100 | 3:1 | 3:1 | 360 |
8 | 实施例8 | 100 | 1:3 | 1:1 | 540 |
9 | 实施例9 | 100 | 1:1 | 1:3 | 180 |
对比例1
本对比例采用一种负载精氨酸的微球的制备方法,与实施例1的区别,仅在于步骤(1)中不包含牛血清白蛋白。
具体的,(1)取药物活性成分精氨酸溶于超纯水中作为内水相W1;
即,根据实施例1相同的制备步骤,同样制备了未载药的空白PLGA微球与单载精氨酸的PLGA微球(内水相不含牛血清白蛋白,为仅含精氨酸的水溶液)。
试验例1
将实施例1制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球进行形态的检测
如图1所示的缓释微球在制备过程中的形态表征图;
1)如图1中的A所示,获得的微球冷冻干燥后外观为白色疏松粉末状;
2)取适量的实施例1制得的缓释微球冻干粉重悬于去离子水中。可观察到微球冻干粉的在水中溶解。如图1中B所示,重悬后的混悬液比较均匀,具有较好的流动性。
3)用马尔文激光粒度仪测量其粒径分布与电位分布,进行定量分析,如图1中C和D所示。微球的粒径为612±30.52nm,PDI=0.11;电位为-31.38±0.267mV。
试验例2
实施例1制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的形态考察
取适量的微球冻干粉重悬于去离子水中,滴入载玻片上,使用显微镜初步观察重悬液中微球的形态,如图2所示(A和B的放大倍数分别为10×40、10×100)。将冻干后成粉末状的微球滴在铜网上,通过透射电子显微镜TEM观察微球的形态,如图3所示(A和B的比例尺分别为1.0μm、500nm)。冻干后微球在显微镜与透射电子显微镜观察下,载药微球外观圆整,大小均匀,微球粒径为674±18.67nm。
试验例3
实施例1提供的药物活性成分精氨酸(游离小分子精氨酸)、实施例1制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的载药量及包封率进行测定
处理分为3组,分别为空白微球组(未包含药物活性成分,制备方法同实施例1所制得的微球)、标准品组(游离小分子精氨酸)、精氨酸微球组(实施例1制得的缓释微球)。
定量称取1mg精氨酸标准品溶于10ml去离子水,配置为100μg/ml的溶液,再通过体积稀释,最终得到不同浓度的精氨酸标准品溶液(6.25μg/mL、12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)。同时,取适量的微球冻干粉(包括空白微球与负载精氨酸的微球),用二氯甲烷超声并涡旋溶解后,加入适量去离子pH=7.4的磷酸缓冲盐溶液PBS中,萃取精氨酸,离心后弃下层有机溶液,上述操作反复进行3次,收集上层精氨酸溶液。所有样品都进行取样过0.22μm水系滤膜,经高效液相色谱(HPLC)测定包封的精氨酸含量,以实施例1中称取的精氨酸作总精氨酸量,通过公式计算精氨酸的载药量(EE%)和包封率(DL%)。液相色谱图如图4所示(箭头所指为精氨酸吸收峰),A为空白微球组、B为精氨酸标准品组、C为精氨酸微球组。
EE%=W包载药量/W总药量×100%
DL%=W包载药量/W药物与材料总量×100%
计算所制得实施例1制得的精氨酸缓释微球中精氨酸的载药量为1.76±0.29%,包封率为79.73±6.44%。
所用HPLC条件为:
流动相:乙腈:0.05M磷酸二氢钾溶液=(0.1:99.9),0.5ml/min;
检测波长:206nm;
色谱柱:Agilent ZORBAX C18 column(4.6×250mm,5um)。
试验例4
将对比例1和实施例1制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的体外释放考察
以含pH=7.4磷酸盐缓冲液为溶出介质,称取对比例1(不包含牛血清白蛋白的精氨酸微球)和实施例1(精氨酸-白蛋白微球)制备的微球100mg,置于装有10mL释放介质的离心管中,将溶出瓶放入37±0.5℃,转速80rpm的恒温震荡器中。上述实验重复三次。然后,分别于1h、2h、4h、8h、16h、24h;2d、4d、8d、16d、20d取样过0.22μm水系滤膜并及时补充相同体积等温释放介质,将滤液通过注射器进样,进行HPLC测定药物含量,色谱条件如下:
流动相:乙腈:0.05M磷酸二氢钾溶液=(0.1:99.9),0.5ml/min;
检测波长:206nm;
色谱柱:Agilent ZORBAX C18 column(4.6×250mm,5um)。
计算累计释放百分数,释放曲线如图5所示。对比例1未添加白蛋白的微球在最初的24h内精氨酸释放量为32.70%,在12d的时间已几乎完全释放;而添加了白蛋白的精氨酸微球在最初的24h内精氨酸释放量为20.50%,在之后的时间内缓慢释放,在20d的时间精氨酸几乎完全释放,以上数据表明,内水相添加白蛋白使精氨酸微球达到了更好的缓释效果。
试验例5
将实施例1~9制得的负载精氨酸的缓释微球的进行工艺考察
发明人在研究过程中,发现上述实验制备步骤中,下述几个因素对制备工艺有较大的的影响;具体包括:PLGA浓度、、精氨酸(arg)和白蛋白(bsa)的质量投料比、PVA与NaCl的浓度比(质量比)、超声功率。
表2微球制备工艺考察
根据前期制备处方筛选与工艺考察;以及后续制备过程的步骤优化,其实施例1提供的制备方法,所获得微球,径均一,载药量与包封率较高,24h突释率较低。
试验例6
将实施例1中相同的药物活性成分精氨酸,与实施例1制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球,对软骨保护作用的体外检测进行对比
1、精氨酸对骨关节炎疾病的作用影响
取原代软骨细胞进行体外实验验证,通过脂多糖LPS模拟体外骨关节炎模型,加入精氨酸进行干预,蛋白印迹实验结果如图6所示。LPS组相比于未处理control组,软骨细胞合成相关蛋白col II表达降低,分解代谢相关蛋白MMP13表达升高,说明LPS导致软骨细胞代谢受损;而加入精氨酸药物干预后,col II表达升高,而MMP13表达降低,说明精氨酸药物逆转了LPS刺激的软骨代谢受损,为后面精氨酸在骨关节炎的治疗提供了初步的数据支持。
试验步骤如下,取健康雄性大鼠,腹腔注射3%戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉。用碘伏在脱毛皮肤表面进行消毒,铺无菌巾。取膝内侧髌骨旁切口,钝性组织分离钳逐层打开关节囊后,髌骨外翻,屈膝位切除内侧半月板,髌骨复位及青霉素生理盐水冲洗(保持组织湿润)后关闭关节囊,缝合手术切口,术中少量出血用无菌纱布按压止血。其余处理同手术组。
造模1周后,处理分为4组,分别为:
空白对照:假手术组(sham)
已手术的空白对照:手术组(DMM+NaCl)
小分子精氨酸组:手术后精氨酸治疗组(DMM+Arginine)
实施例1缓释微球组:手术后负载精氨酸的白蛋白基缓释微球治疗组(DMM+Arg-MB)
给药频率为1次/周,每次50mg/kg,一次性注射至关节腔内。
为确定小分子精氨酸与负载精氨酸的白蛋白基缓释微球对于骨关节炎的不同治疗效果,在治疗的第10周,抽取治疗侧关节液和对照健康侧关节液后,处死所有老鼠。取出各个分组的大鼠右侧膝关节的胫骨平台及股骨髁部关节面。将组织放于含4%的多聚甲醛中固定,然后采用EDTA溶液梯度脱钙。取脱钙后组织分别做苏木精和伊红染色、番红-固绿染色。
组织病理学H&E与F-O染色分析如图7所示,A为实验结果图;共四组,每组中的左图为S-O染色,右图为HE染色。B为实验结果数据的统计图。
由图7可知,与假手术组(sham)相比,手术组(DMM+NaCl)大鼠骨关节炎软骨中软骨厚度显著减少,典型的骨关节炎特征,如表面不规则、侵蚀裂隙,骨关节炎OARSI评分明显增加。而手术后负载精氨酸的白蛋白基缓释微球(DMM+Arg-MB)不同程度地抑制骨关节炎的进展,表现为软骨厚度的增加和抑制软骨细胞凋亡,OARSI评分显著降低。总之,抗炎联合软骨修复治疗在患骨关节炎的大鼠膝关节中表现出较好的抗炎疗效与软骨保护活性。
虽然,上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验,对本发明作了详尽的描述,但在本发明基础上,可以对之作一些修改或改进,这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此,在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进,均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将药物活性成分和白蛋白溶于水中,获得内水相W1;将高分子聚合物溶于有机溶剂中,获得油相O1;将乳化剂与氯化钠溶于水中,获得外水相W2;其中,所述药物活性成分为精氨酸;
2)将所述内水相W1缓慢滴入所述油相O1中,充分乳化后,获得W1/O1型乳液;
3)将所述W1/O1型乳液缓慢滴入所述外水相W2中,充分乳化后,获得W1-O1-W2型复乳,然后再用超纯水清洗,即得负载精氨酸的白蛋白基缓释微球。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述白蛋白为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、人血清白蛋白、尿微量白蛋白中的一种或几种。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,所述精氨酸与所述白蛋白的投料质量比为5:1~1:5;优选为3:1~1:3。
4.根据权利要求1~3任一项所述的制备方法,其特征在于,所述高分子聚合物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物、聚己内酯、聚乳酸、聚三亚甲基碳酸酯、聚羟基乙酸、聚羟基丁酸酯、聚羟基丁酸羟基戊酸共聚物、聚原酸酯、聚酸酐中的一种或多种;
优选的,所述高分子聚合物的在有机溶剂中的浓度为3%~10%w/v;更优选为4.5%~5.5%w/v。
5.根据权利要求1~4任一项所述的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷、甲苯、异丙醇、丙酮、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述乳化剂为聚乙烯醇、聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、环氧乙烷和环氧丙烷嵌段共聚物、多元醇脂肪酸酯中的一种或几种;
优选的,所述氯化钠与乳化剂的质量浓度比为3:1~1:3;尤其为1:1;
更优选的,在水相中,所述乳化剂的浓度为0.5%~5%w/v。
7.根据权利要求1~6任一项所述的制备方法,其特征在于,所述超声功率为180~540W,优选为320~380W;
更优选的,所述乳化的时间为2~5min。
8.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将药物活性成分精氨酸与牛血清白蛋白溶于水中,作为内水相W1;精氨酸与所述白蛋白的投料质量比为3:1~1:3;
2)将聚乳酸乙醇酸共聚物按4.5%~5.5%w/v的浓度溶于二氯甲烷中,作为油相O1;
3)将聚乙烯醇和氯化钠按质量比为1:1的比例混合溶于水中,作为外水相W2;
4)将内水相W1缓慢逐滴加入油相O1中;充分乳化后,获得W1/O1型乳液;其中,所述乳化的超声功率为320~380W;优选乳化的时间为2~5min;
5)将所述W1/O1型乳液缓慢滴入所述外水相W2中,充分乳化后,获得W1-O1-W2型复乳,然后再用超纯水清洗,即得负载精氨酸的缓释微球;其中,所述乳化的超声功率为320~380W;优选乳化的时间为2~5min。
9.权利要求1~8任一项所述制备方法制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球;
优选粒径为0.2μm~2μm。
10.权利要求1~8任一项所述制备方法制得的负载精氨酸的白蛋白基缓释微球在治疗骨关节炎药物上的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311542987.5A CN117717524A (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311542987.5A CN117717524A (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117717524A true CN117717524A (zh) | 2024-03-19 |
Family
ID=90206168
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311542987.5A Pending CN117717524A (zh) | 2023-11-17 | 2023-11-17 | 一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117717524A (zh) |
-
2023
- 2023-11-17 CN CN202311542987.5A patent/CN117717524A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100904931B1 (ko) | 나노 입자 및 그의 제조 방법 | |
US20070077286A1 (en) | Drug-containing nanoparticle, process for producing the same and parenterally administered preparation from the nanoparticle | |
JP2008539259A (ja) | 表面を修飾した微粒子およびその形成方法および使用 | |
JP2009161543A (ja) | 抗微小管剤およびポリペプチドまたはポリサッカリドを含む組成物、ならびに炎症状態を処置するための医薬品の調製のためのそれらの組成物の使用 | |
CN102327230B (zh) | 一种包裹紫杉烷类药物的蛋白纳米颗粒及其制备方法 | |
KR20080020580A (ko) | 약물 함유 고분자 미립구의 제조방법 및 그 방법에 의해제조된 약물 함유 고분자 미립구 | |
JP2004502720A (ja) | 有効成分の経口吸収を改善するための粒子状担体 | |
EP3996695A1 (en) | Cannabidiol orally disintegrating tablets | |
EP3706710B1 (en) | Extended release formulations for intra-articular applications | |
CN113876724B (zh) | 一种负载帕瑞昔布、白介素-4和牛血清白蛋白用于骨关节炎治疗的双层微球及其制备方法 | |
Pathak | Effective formulation strategies for poorly water soluble drugs | |
CN117715625A (zh) | 用于治疗晶体和非晶体相关急性炎症性关节炎的包含秋水仙碱的关节内注射用剂型 | |
Nguyen et al. | Preparation of an oil suspension containing ondansetron hydrochloride as a sustained release parenteral formulation | |
CN109718202B (zh) | 一种适用于载疏水性化学药物的靶向载药胶束 | |
CN117717524A (zh) | 一种负载精氨酸的白蛋白基缓释微球及其制备方法与应用 | |
CN116139089A (zh) | 一种壳聚糖与纳米中药配伍的纳米制剂及其制备方法与应用 | |
KR101180181B1 (ko) | 나노 입자 및 그의 제조 방법 | |
CN113786393A (zh) | 一种利伐沙班微球及其制备方法与应用 | |
CN112121028B (zh) | 一种辛伐他汀固体纳米粒制剂及其制备方法 | |
CN111317742A (zh) | 一种用于治疗胰腺炎的药物组合物 | |
CN116098872B (zh) | 一种注射用阿哌沙班长效微球及其制备方法 | |
RU2786830C2 (ru) | Препараты с пролонгированным высвобождением для внутрисуставного введения | |
EP4321183A1 (en) | Drug coating, drug coating saccule and method for preparing same | |
KR20130097088A (ko) | 서방성 제제 | |
CN118891032A (zh) | 用于延长释放非诺贝特的微球 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |