CN117715914A - 喜树碱类似物、缀合物和使用方法 - Google Patents

喜树碱类似物、缀合物和使用方法 Download PDF

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CN117715914A
CN117715914A CN202280052312.XA CN202280052312A CN117715914A CN 117715914 A CN117715914 A CN 117715914A CN 202280052312 A CN202280052312 A CN 202280052312A CN 117715914 A CN117715914 A CN 117715914A
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heteroaryl
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M·E·彼得森
M·G·布兰特
R·科伦坡
J·R·里彻
M·M·A·拉萨尔
S·D·巴恩斯彻
S·达斯
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Enzymatic British Columbia Ltd
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Enzymatic British Columbia Ltd
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Abstract

描述了式(I)的喜树碱类似物和包含所述喜树碱类似物的缀合物。所述喜树碱类似物和缀合物特别是在癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的治疗中可用作治疗剂。

Description

喜树碱类似物、缀合物和使用方法
技术领域
本公开涉及治疗剂领域，特别是喜树碱类似物、包含喜树碱类似物的缀合物以及它们在疗法中的用途。
背景技术
喜树碱是抑制拓扑异构酶I的天然产物并具有广谱抗肿瘤活性。然而，喜树碱溶解性差，使其不适于临床开发。因此，相当多的努力致力于鉴定具有更适合治疗用途的特性的喜树碱的类似物或衍生物。伊立替康和拓扑替康这两种衍生物已被批准用于治疗癌症。伊立替康是一种前药，其在体内转化为一种更有效的类似物SN-38。第三种衍生物贝洛替康已在韩国获得批准。
喜树碱类似物也已被开发为抗体-药物缀合物(ADC)的有效载荷。两种此类ADC已被批准用于治疗癌症：曲妥珠单抗-德鲁替康(Trastuzumab deruxtecan)(EnhertuTM)，其中喜树碱类似物德鲁替康(Dxd)经由可裂解的基于四肽的接头与抗HER2抗体曲妥珠单抗缀合；和沙妥珠单抗格维替康(sacituzumab govitecan)(TrodelvyTM)，其中喜树碱类似物SN-38经由可水解的pH敏感性接头与抗Trop-2抗体沙妥珠单抗缀合。
其他喜树碱类似物和衍生物，以及包含它们的ADC已经有所描述。参见例如国际(PCT)公开号WO2019/195665、WO 2019/236954、WO 2020/200880和WO2020/219287。
提供该背景信息的目的是使申请人相信的已知信息与本公开可能相关。不一定旨在承认，也不应该解释为，任何前述信息构成了针对所要求保护的发明的现有技术。
发明内容
本文描述了喜树碱类似物化合物，包含所述化合物的缀合物以及使用所述化合物和缀合物的治疗方法。在一个方面，本公开涉及具有式(I)的化合物：
其中：
R1选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2，并且
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，
并且其中：
当R1为-NH2时，则R为R3或R4，并且当R1不是-NH2时，则R为R4；
R3选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R4选自：
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、-芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R10’选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2，
条件是所述化合物不是(S)-9-氨基-11-丁基-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮。
在某些实施方案中，在式(I)的化合物中，R1是NH2，并且R2不是-H。
本公开的另一方面涉及药物组合物，其包含具有式(I)的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
本公开的另一方面涉及抑制癌细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的具有式(I)的化合物接触。另一方面涉及杀死癌细胞的方法，其包括使细胞与有效量的具有式(I)的化合物接触。
本公开的另一方面涉及治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的具有式(I)的化合物。另一方面涉及治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的具有式(I)的化合物。另一方面涉及治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，其包括向受试者施用有效量的具有式(I)的化合物。
本公开的另一方面涉及用于疗法中的具有式(I)的化合物。另一方面涉及用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的式(I)的化合物。
本公开的另一方面涉及具有式(I)的化合物在制造用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的药物中的用途。
本公开的另一方面涉及具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
D是如本文所述的喜树碱类似物；
m为1至4之间的整数，并且
n为1至10之间的整数。
本公开的另一方面涉及具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(IV)的化合物：
其中：
R1a选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2；
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X是-O-、-S-或-NH-，并且R4a选自： 其中*是与X的连接点，并且其中p是1、2、3或4；或者
X是O，并且R4a-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
本公开的另一方面涉及具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(V)的化合物：
其中：
R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
R10a’选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
本公开的另一方面涉及具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(VI)的化合物：
其中：
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X为-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-CO2R8a、-C(O)-、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、 其中*是与X的连接点，并且其中p为1、2、3或4；或
X是O，并且R25-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R7a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17a；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
本公开的另一方面涉及药物组合物，其包含式(X)的缀合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
本公开的另一方面涉及抑制癌细胞增殖的方法，其包括使细胞与有效量的具有式(X)的缀合物接触。另一方面涉及杀死癌细胞的方法，其包括使细胞与有效量的具有式(X)的缀合物接触。
本公开的另一方面涉及治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向受试者施用有效量的式(X)的缀合物。另一方面涉及治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的式(X)的缀合物。另一方面涉及治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，其包括向受试者施用有效量的式(X)的缀合物。
本公开的另一方面涉及用于疗法中的具有式(X)的缀合物。另一方面涉及用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的具有式(X)的缀合物。
本公开的另一方面涉及具有式(X)的缀合物在制造用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的药物中的用途。
附图说明
图1示出了可用于制备中间体的一般程序的示意图，这些中间体用于合成本文所述的喜树碱类似物和缀合物，(A)合成方案I：一般程序1；(B)合成方案II：一般程序2；(C)合成方案III：一般程序3；(D)合成方案IV：一般程序4；(E)合成方案V：一般程序5；(F)合成方案VI：一般程序7，(G)合成方案VII：一般程序8。
图2示出了包含以DAR 8与曲妥珠单抗缀合的本文所述喜树碱类似物的缀合物对HER2阴性MDA-MB-468癌细胞的旁观者杀伤效应，(A)1nM浓度，和(B)0.1nM浓度。
图3示出了在表达HER2的乳腺癌的JIMT-1异种移植模型(mid)中，包含以DAR 8与曲妥珠单抗缀合的本文所述喜树碱类似物的缀合物的抗肿瘤活性。
图4示出了具有C7键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性药物-接头(DL)结构(表4)。
图5示出了具有C10键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性药物-接头(DL)结构(表5)。
图6示出了具有C7或C10键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性药物-接头(DL)结构(表6)。
图7示出了具有C7键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性缀合物(DC)结构(表7)。
图8示出了具有C10键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性缀合物(DC)结构(表8)。
图9示出了具有C7或C10键的包含式(I)的喜树碱类似物的示例性缀合物(DC)结构(表9)。
图10A-C示出了(A)在OV90异种移植模型中以DAR 8缀合至喜树碱类似物化合物139和化合物141，(B)在OV90异种移植模型中以DAR 8缀合至喜树碱类似物化合物140和化合物141，和(C)在H2110异种移植模型中以DAR 8缀合至喜树碱类似物化合物139、化合物140、化合物141和化合物148的抗FRα抗体v30384的体内抗肿瘤活性。
具体实施方式
本公开涉及喜树碱类似物和包含喜树碱类似物的缀合物。喜树碱类似物和缀合物显示具有例如针对癌细胞的细胞毒性活性。因此，本公开的某些实施方案涉及喜树碱类似物和缀合物作为治疗剂，特别是在癌症治疗中的用途。
定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。
如本文所用，术语“约”是指与给定值相差大约+/-10％的变化。应当理解，无论是否特别提及，此类变化总是包括在本文提供的任何给定值中。
当在本文中结合术语“包含”一起使用时，词语“一个/种”的使用可意指“一个/种”，但它也符合“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义。
如本文所用，术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”及其语法变型是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素和/或方法步骤。当在本文中结合组合物、用途或方法一起使用时，术语“基本上由……组成”表示可以存在附加的要素和/或方法步骤，但是这些附加不会实质性影响所列举的组合物、方法或用途起作用的方式。术语“由......组成”当在本文中与组合物、用途或方法相连使用时，排除了额外要素和/或方法步骤的存在。本文描述为包含某些要素和/或步骤的组合物、用途或方法也可以在某些实施方案中基本上由那些要素和/或步骤组成，而在其他实施方案中由那些要素和/或步骤组成，无论是否特别提及了这些实施方案。
如本文所用，术语“酰基”是指基团-C(O)R，其中R为氢、烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基。
术语“酰氧基”是指基团-OC(O)R，其中R为烷基。
如本文所用，术语“烷氧基”是指基团-OR，其中R为烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基。
如本文所用，术语“烷基”是指含有指定数目的碳原子的直链或支链饱和烃基团。烷基的示例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、新戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、正己基等。
如本文所用，术语“烷基氨基芳基”是指被一个如本文所定义的氨基芳基基团取代的如本文所定义的烷基基团。
如本文所用，术语“烷基杂环烷基”是指被一个如本文所定义的杂环烷基基团取代的如本文所定义的烷基基团。
如本文所用，术语“烷硫基”是指基团-SR，其中R是烷基基团。
如本文所用，术语“酰氨基”是指基团-C(O)NRR'，其中R和R'独立地为氢、烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基。
如本文所用，术语“氨基”是指基团-NRR'，其中R和R'独立地为氢、烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基。
如本文所用，术语“氨基烷基”是指被一个或多个氨基基团(例如，一个、两个或三个氨基基团)取代的如本文所定义的烷基基团。
如本文所用，术语“氨基芳基”是指被一个氨基基团取代的如本文所定义的芳基基团。
如本文所用，术语“芳基”是指其中至少一个环为芳族的6元至12元单环或双环烃环系。芳基的示例包括但不限于苯基、萘基、1,2,3,4-四氢-萘基、5,6,7,8-四氢-萘基、茚满基等。
如本文所用，术语“羧基”是指基团-C(O)OR，其中R为H、烷基、芳基、杂芳基、环烷基或环杂烷基。
如本文所用，术语“氰基”是指基团-CN。
如本文所用，术语“环烷基”是指含有指定数目的碳原子的单环或双环饱和烃。环烷基的示例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[3.1.1]庚烷等。
如本文所用，术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的如本文所定义的烷基基团。
如本文所用，术语“卤素”和“卤代”是指氟(F)、溴(Br)、氯(Cl)和碘(I)。
如本文所用，术语“杂芳基”是指6元至12元单环或双环环系，其中至少一个环原子是杂原子并且至少一个环是芳族的。杂原子的示例包括但不限于O、S和N。杂芳基的示例包括但不限于：吡啶基、苯并呋喃基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、吡咯基、吲哚基等。
如本文所用，术语“杂环烷基”是指含有指定数目的原子并且其中至少一个环原子是杂原子(例如O、S或N)的单环或双环非芳族环系。杂环基取代基可经由其任何可用环原子(例如环碳或环氮)连接。杂环烷基的示例包括但不限于吖丙啶基、氮杂环丁烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基等。
如本文所用，术语“羟”和“羟基”是指基团-OH。
如本文所用，术语“羟烷基”是指被一个或多个羟基团取代的如本文所定义的烷基基团。
如本文所用，术语“硝基”是指基团-NO2。
如本文所用，术语“磺酰基”是指基团-S(O)2R，其中R为H、烷基或芳基。
如本文所用，术语“磺酰氨基”是指基团-NH-S(O)2R，其中R为H、烷基或芳基。
如本文所用，术语“硫基”和“硫醇”是指基团-SH。
除非明确指出为“未取代的”，否则本文所提及的任何烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团应被理解为“任选取代的”，即每个此类提及包括这些基团的未取代和取代形式。例如，提及“-C1-C6烷基”包括未取代的-C1-C6烷基和被一个或多个取代基取代的-C1-C6烷基。取代基的示例包括但不限于卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基、磺酰氨基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基。在某些实施方案中，本文所提及的每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基基团任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基和磺酰氨基。
本文所述的“取代的”化学基团可包括一个取代基或多个取代基，直至该基团的取代的全价。例如，甲基基团可包括1、2或3个取代基，并且苯基基团可包括1、2、3、4或5个取代基。当基团被多于一个取代基取代时，取代基可以相同或者它们可以不同。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指需要治疗的动物。需要治疗的动物可以是人或非人动物，诸如哺乳动物、鸟或鱼。在某些实施方案中，受试者或患者是哺乳动物。在一些实施方案中，受试者或患者是人。
关于待实现的特定结果，本文所述的化合物或缀合物的“有效量”是足以实现所需结果的量。例如，当涉及杀死癌细胞时，化合物的“有效量”是指足以产生杀死效果的化合物的量。
应理解的是，在一个实施方案中对特征的肯定陈述是在另一个实施方案中排除所述特征的基础。例如，在为给定实施方案或权利要求提出选项列表的情况下，应当理解，可从所述列表中删除一个或多个选项，并且缩短的列表可形成替代实施方案，而不管是否特别提及这种替代实施方案。
可以设想，本文讨论的任何实施方案都可以针对本文所公开的任何方法、用途或组合物来实施，反之亦然。
喜树碱类似物
在一个方面，本公开的喜树碱类似物化合物是具有式(I)的化合物：
其中：
R1选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2，并且
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，
并且其中：
当R1为-NH2时，则R为R3或R4，并且当R1不是-NH2时，则R为R4；
R3选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R4选自：/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、-芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2，
条件是所述化合物不是(S)-9-氨基-11-丁基-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮：
在一些实施方案中，喜树碱类似物为式(I)的化合物，条件是当R1为NH2时，R2不是H。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R1选自：-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3和NH2。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R1是NH2。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R1选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R1选自：-CH3、-CF3、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R2选自：-H、-F、-Br和-Cl。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R2选自：-F、-Br和-Cl。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R3选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R4选自：
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R6和R7各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R17选自：未取代的C1-C6烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、-(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、未取代的芳基、-羟基芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(I)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(I)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有式(Ia)：
其中：R1、R2、R4、R5、R8、R9、R10、R10’、R11、R12、R13、R14、R14’、R16、R18、R19、Xa、Xb和Xc如针对化学式(I)所定义。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R1选自：-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3和-NH2。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R2选自：-H、-F和-Cl。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R4选自：
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基以及-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R17选自：未取代的C1-C6烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、-(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、未取代的芳基、-羟基芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(Ia)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(Ia)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有式(II)：
其中：
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R20选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2，
条件是所述化合物不是(S)-9-氨基-11-丁基-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自F和Cl。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、–(C1-C6烷基)-芳基、/>/>
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R20选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、未取代的芳基、-氨基芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-氨基芳基、/>
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，并且R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、–(C1-C6烷基)-芳基、/>/>
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，并且R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，并且R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R6和R7独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R6和R7各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R17为-C1-C6烷基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R17选自：未取代的C1-C6烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、-(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、未取代的芳基、-羟基芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(II)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(II)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIa)：
其中：R20、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R10’、R11、R12、R13、R14、R14’、R16、R17、R18、R19、Xa、Xb和Xc如针对化学式(II)所定义。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R20选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、未取代的芳基、-氨基芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-氨基芳基、/>
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R6和R7各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R17为-C1-C6烷基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R17选自：未取代的C1-C6烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、-(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、未取代的-芳基、-羟芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(IIa)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(IIa)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有式(III)：
其中：
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R15选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R4选自：
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R2选自：-H、-F和-Cl。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R15选自：-CH3、-CF3、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R15选自：-CH3和-OCH3。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R2选自：-H、-F和-Cl，并且R15选自：-CH3、-CF3、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R2选自：-H、-F和-Cl，并且R15选自：-CH3和-OCH3。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R4选自：
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(III)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(III)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIIa)或(IIIb)：
其中：R4、R5、R8、R9、R10、R10’、R11、R12、R13、R14、R14’、R16、R18、R19、Xa、Xb和Xc如式(III)中所定义。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R4选自：
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R5选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R10独立地选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，每个R10’独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(IIIa)或式(IIIb)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(IIIa)和式(IIIb)的化合物中的每一个的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
如上所述，式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)或(IIIb)的某些化合物可包括一个或多个游离氨基、羟基、羰基(例如酮或醛)或羧酸基团。本公开还设想式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)或(IIIb)的化合物的受保护形式，其中原本游离的氨基、羟基、羰基(例如酮或醛)或羧酸基团用适当的保护基团保护。术语“保护基团”是指当连接至潜在反应性官能团时掩蔽、降低或防止官能团的反应性的化学基团。通常，在合成过程中可以根据需要选择性除去保护基团。
保护基团是本领域公知的，并且各种示例在例如“Protective Groups inOrganic Chemistry”(Greene,W.&Wuts,P.G.M.,2006,John Wiley&Sons)中有所描述。氨基保护基团的示例包括但不限于甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、苄氧基羰基(CBZ)、叔丁氧基羰基(Boc)、三甲基甲硅烷基(TMS)、2-三甲基甲硅烷基-乙磺酰基(TES)、三苯甲基、取代的三苯甲基、甲苯磺酰基、邻苯二甲酰亚胺、烯丙氧基羰基(Alloc)和9-芴基甲氧基羰基(FMOC)。羟基保护基团的示例包括但不限于乙酰基、苄基(Bn)、叔丁基、苯甲酰基(Bz)、β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、二甲氧基三苯甲基(DMT)、甲氧基甲基醚(MOM)、甲氧基三苯甲基[(4-甲氧基苯基)二苯基甲基](MMT)、对甲氧基苄基醚(PMB)、对甲氧基苯基醚(PMP)、甲硫基甲基醚、新戊酰基(Piv)、四氢吡喃基(THP)、四氢呋喃(THF)、三苯甲基、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS或TBS)、三异丙基硅氧甲基(TOM)和三异丙基甲硅烷基(TIPS)。羰基保护基团的示例包括但不限于缩醛、半缩醛和缩酮。羧酸保护基团的示例包括但不限于甲酯、苄酯、叔丁基酯、甲硅烷基酯、原酸酯和噁唑啉。
本公开的某些实施方案涉及式(II)或(IIa)的受保护化合物，其中C10处的游离氨基基团被保护。一些实施方案涉及式(II)或(IIa)的受保护化合物，其中C10处的游离氨基基团用甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苄基(Bn)、苯甲酰基(Bz)、苄氧基羰基(CBZ)、叔丁氧基羰基(Boc)、三苯甲基、取代的三苯甲基、甲苯磺酰基、邻苯二甲酰亚胺、烯丙氧基羰基(Alloc)或9-芴基甲氧基羰基(FMOC)基团保护。一些实施方案涉及式(II)或(IIa)的化合物的受保护形式，其中C10处的游离氨基基团用乙酰基基团保护。
在某些实施方案中，如在式(I)、(Ia)、(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)或(IIIb)中的任一者中定义的每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基、磺酰氨基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。在一些实施方案中，如在式(I)，(Ia)、(II)、(IIa)、(III)、(IIIa)或(IIIb)中的任一者中定义的每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基和磺酰氨基。
在本公开的某些实施方案中，喜树碱类似物是具有式(I)的化合物或其受保护形式并且选自表1中所示的化合物。
表1：式(I)的示例性喜树碱类似物
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在某些实施方案中，喜树碱类似物是具有式(II)的化合物或其受保护形式并且选自表2中所示的化合物。
表2：式(II)的示例性喜树碱类似物
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在某些实施方案中，喜树碱类似物是具有式(III)的化合物或其受保护形式并且选自表3中所示的化合物。
表3：式(III)的示例性喜树碱类似物
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应理解，在本公开的剩余部分中提及式(I)的化合物在各种实施方案中包括式(Ia)、式(II)、式(IIa)、式(III)、式(IIIa)和式(IIIb)的化合物，其程度如同具体列举了单独列举这些式中的每一者的实施方案。
在某些实施方案中，式(I)的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种官能团，并且因此与多种有机碱和无机碱或有机酸和无机酸反应，以形成药学上可接受的盐。如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指式(I)的化合物的盐，其对活生物体基本上无毒。典型的药学上可接受的盐包括通过式(I)的化合物与药学上可接受的矿物酸或有机酸或有机碱或无机碱反应制备的那些盐。此类盐称为酸加成盐和碱加成盐。
通常用于形成酸加成盐的酸是无机酸，包括但不限于盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸；和有机酸，包括但不限于对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸。药学上可接受的盐的示例包括但不限于硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸酯、甲酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐和扁桃酸盐。特别感兴趣的药学上可接受的酸加成盐是与矿物酸诸如盐酸和氢溴酸形成的那些，以及与有机酸诸如马来酸和甲磺酸形成的那些。
胺基团的盐还可以包括季铵盐，其中氨基氮带有合适的有机基团，诸如烷基、低级烯基、低级炔基或芳烷基部分。
碱加成盐包括衍生自无机碱的那些，所述无机碱诸如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等。可用于制备药学上可接受的盐的碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钙和碳酸钙。
本领域技术人员将理解，形成药学上可接受的盐的一部分的特定抗衡离子通常不具有关键性质，只要盐作为整体是药学上可接受的并且只要抗衡离子对盐作为整体不贡献不期望的特性。
某些实施方案涉及式(I)的化合物的药学上可接受的溶剂合物。本领域技术人员将理解，某些式(I)的化合物可与溶剂诸如水、甲醇、乙醇或乙腈组合，以形成药学上可接受的溶剂合物，诸如相应的水合物、甲醇合物、乙醇合物或乙腈合物。可用于制备溶剂合物的溶剂的其他示例包括异丙醇、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙酸、乙醇胺和丙酮，以及本领域技术人员已知的溶剂合物混合物的可混溶制剂。
喜树碱类似物的制备
式(I)的喜树碱类似物可通过标准合成有机化学方法由可商购的原料和试剂制备。也参见Li等人，2019,ACS Med.Chem.Lett.,10(10):1386-1392和美国专利公开号US2004/0266803。合适的合成路线的代表性示例在本文提供的实施例中详细描述(也参见图1)。本领域技术人员将认识到，可使用替代方法来合成式(I)的喜树碱类似物，并且本文所述的方法因此不旨在是详尽的。
缀合物
本公开的某些实施方案涉及式(I)的化合物的缀合物，其包含经由一个或多个接头缀合至靶向部分的一个或多个式(I)的化合物。
本公开的缀合物可包含缀合至靶向部分的一个或多个式(I)的化合物。例如，多个式(I)的化合物可通过在靶向部分上的多个不同位点处连接化合物而缀合至靶向部分。替代性地，或另外，可通过使用一个或多个多价接头将多个式(I)的化合物缀合至靶向部分，所述多价接头各自允许将多个化合物连接至靶向部分上的单个位点。
因此，本公开的某些实施方案涉及式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
D是如本文所述的喜树碱类似物；
m为1至4之间的整数，并且
n为1至10之间的整数。
在某些实施方案中，在式(X)的缀合物中，m在1与2之间。在一些实施方案中，m为1。
在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，n在1与8之间，例如在2与8之间，或在2与6之间。在一些实施方案中，n在2与4之间。
如上所述并由式(X)中的参数m和n反映，靶向部分“T”可缀合至多于一个式(I)的化合物“D”。本领域技术人员将理解，虽然任何特定的靶向部分T缀合至整数数目的化合物D，但分析缀合物的制备物以确定化合物D与靶向部分T的比率可得到非整数结果，这反映统计平均值。化合物D与靶向部分T的该比率通常可称为药物与抗体比率或“DAR”。因此，具有非整数DAR的缀合物制备物旨在被式(X)所涵盖。本领域技术人员将理解，术语“DAR”可用于定义包含不同于抗体的靶向部分的缀合物。
喜树碱类似物，D
根据本公开，式(X)的缀合物包含喜树碱类似物作为药物部分D，其中喜树碱类似物为式(I)的化合物。
在某些实施方案中，在式(X)的缀合物中，D是式(Ia)、式(II)、式(IIa)、式(III)、式(IIIa)或式(IIIb)的化合物。在某些实施方案中，在式(X)的缀合物中，D是选自表1至表3中所示化合物的化合物。
本公开的某些实施方案涉及具有式(X)的缀合物，其中D为式(IV)的化合物：
其中：
R1a选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2；
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X是-O-、-S-或-NH-，并且R4a选自： 其中*是与X的连接点，并且其中p是1、2、3或4；或者
X是O，并且R4a-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和/>
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R1a选自：-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3和-NH2。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R1a选自：-CH3、-CF3、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R1a选自：-CH3、-OCH3和NH2。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R1a选自：-CH3和-OCH3。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R2a选自：-H、-F和-Cl。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R2a是-F。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，X是-O-、-S-或-NH-，并且R4a选自：
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，X是-O-或-NH-。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-芳基，-(C1-C6烷基)-芳基和
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R12a选自：-C1-C6烷基、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R13a选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R14a’选自：H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R16a选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，R22和R23各自独立地选自：-H，-卤素，未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6氨基烷基、-C1-C6羟烷基和-C3-C8环烷基。
在一些实施方案中，在式(IV)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(IV)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
本公开的某些实施方案涉及具有式(X)的缀合物，其中D为式(V)的化合物：
其中：
R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R2a选自：-CF3、-F、-Cl和-OCH3。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R2a是F。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-芳基、
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R20a选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-氨基芳基、/>
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R6和R7独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R6为H，并且R7选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R6和R7各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R8选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，每个R9独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，每个R9独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-NR14R14’、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R11选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R12选自：-H、-C1-C6烷基、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R12选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-CO2R8、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基、-(C1-C6烷基)-氨基芳基、-S(O)2R16和
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R13选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R14和R14’各自独立地选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R16选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R16选自：未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基、未取代的-芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R17选自：未取代的-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、-(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、未取代的-芳基、-羟基芳基、-氨基芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-氨基芳基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6氨基烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，R17是-C1-C6烷基。
在一些实施方案中，在式(V)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(V)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
本公开的某些实施方案涉及具有式(X)的缀合物，其中D为式(VI)的化合物：
其中：
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X为-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-CO2R8a、-C(O)-、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、 其中*是与X的连接点，并且其中p为1、2、3或4；或
X是O，并且R25-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R7a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17a；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R2a选自：F和Cl。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R2a是F。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，X是-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-(C1-C6烷基)-芳基、 或者X是O，并且R25-X-选自：/>
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，X是-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-(C1-C6烷基)-芳基、 />
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，X是-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，X是-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，X是-O-或-NH-。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R6a是H。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R6a选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R7a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C(O)R17a。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-芳基，-(C1-C6烷基)-芳基和
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R12a选自：-C1-C6烷基、-芳基、-(C1-C6烷基)-芳基和-S(O)2R16a。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R13a选自：-H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基和-C1-C6氨基烷基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R14a’选自：H、未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R16a选自：-芳基、-杂芳基和-(C1-C6烷基)-芳基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R17a为-C1-C6烷基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，R22和R23各自独立地选自：-H，-卤素，未取代的-C1-C6烷基、-C1-C6卤代烷基、-C1-C6羟烷基、-C1-C6氨基烷基和-C3-C8环烷基。
在一些实施方案中，在式(VI)的化合物中，Xa和Xb各自独立地选自：NH和O。
还设想了式(VI)的化合物的任何前述实施方案的组合，并且每种组合形成用于本公开目的的单独实施方案。
在某些实施方案中，如在式(IV)、(V)或(VI)中的任一者中定义的每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基、磺酰氨基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。在一些实施方案中，如在式(IV)、(V)或(VI)中的任一者中定义的每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基和磺酰氨基。
靶向部分，T
式(X)的缀合物所包含的靶向部分T是与受体、抗原或与给定靶细胞群相关联的其他接受部分结合、反应性缔合或复合的分子。通常，靶向部分T的功能是将喜树碱类似物D递送至与靶向部分T反应的特定靶细胞群。靶向部分的示例包括但不限于蛋白质(诸如抗体、抗体片段和生长因子)、糖蛋白、肽(诸如铃蟾肽和胃泌素释放肽)、凝集素、维生素(诸如叶酸)和营养转运分子(诸如运铁蛋白)。
通常，靶向部分T将通过靶向部分T的杂原子诸如硫(例如，来自巯基基团)、氧(例如，来自羰基、羧基或羟基基团)或氮(例如，来自伯氨基或仲氨基基团)与接头L键合。这些杂原子可以天然存在于靶向部分T上，或者可通过工程化和/或表达引入，或者可使用本领域已知的技术通过化学或酶修饰引入。
在一些实施方案中，靶向部分T是抗体。因此，本公开的某些实施方案涉及具有通式(X)的抗体-药物缀合物(ADC)，其中靶向部分T是抗体。
当缀合物是ADC时，作为靶向部分T而包括的抗体可以是全尺寸多克隆或单克隆抗体、抗原结合抗体片段(诸如Fab、scFab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv)、结构域抗体(dAb)或抗体模拟物(诸如affibody、DARPin、anticalin、versabody、duocalin、lipocalin或avimer)。抗体通常针对特定抗原，例如疾病相关抗原，诸如肿瘤相关抗原，与自身免疫疾病相关的抗原或病毒抗原。
在缀合物是ADC的某些实施方案中，靶向部分T是单克隆抗体、抗原结合抗体片段(诸如Fab、scFab、Fab'、F(ab')2、Fv或scFv)或结构域抗体(dAb)。
产生多克隆和单克隆抗体的方法是本领域已知的。例如，单克隆抗体可通过包括但不限于以下的方法来产生：最初由Kohler和Milstein描述的杂交瘤技术(1975,Nature256:495-497)、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人,1983,Immunology Today 4:72)、EBV-杂交瘤技术(Cole等人,1985,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,第77至96页)和选择性淋巴细胞抗体法(SLAM)(Babcook等人,1996,Proc Natl AcadSci USA,93(15):7843-8；McLean等人,2005,J Immunol.,174(8):4768-4778)。各种免疫球蛋白类别的抗体，包括IgG、IgM、IgE、IgA和IgD以及它们的亚类，可在各种实施方案中用作靶向部分。在一些实施方案中，靶向部分是IgG类抗体。
在某些实施方案中，靶向部分T可以是单克隆抗体。单克隆抗体可以是例如非人单克隆抗体(诸如小鼠抗体)、人单克隆抗体、人源化单克隆抗体或嵌合抗体(例如人-小鼠抗体)。人单克隆抗体可通过本领域已知的多种技术中的任一种制备(参见，例如，Teng等人,1983,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80:7308-7312；Kozbor等人,1983,Immunology Today 4:72-79；Olsson等人,1983,Meth.Enzymol.92:3-16；Huse等人,1989,Science 246:1275-1281,和美国专利号8,012,714)。嵌合和人源化单克隆抗体可通过本领域已知的重组DNA技术产生，例如使用以下文献中所述的方法：国际专利公开号WO 87/02671和WO 86/01533；欧洲专利公开号0 184 187；0 171 496和0 173 494；美国专利号4,816,567和5,225,539；Berter等人,1988,Science 240:1041-1043；Liu等人,1987,J.Immunol.,139:3521-3526；Sun等人,1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84:214-218；Wood等人,1985,Nature,314:446-449；Shaw等人,1988,J.Natl.Cancer Inst.,80:1553-1559；Oi等人,1986,BioTechniques,4:214；Jones等人,1986,Nature,321:552-525,和Beidler等人,1988,J.Immunol.,141:4053-4060)。对给定靶抗原具有免疫特异性的抗体也可以商购获得。
在某些实施方案中，包含在缀合物中的抗体可以是双特异性或多特异性抗体。制备双特异性和多特异性抗体的方法是本领域已知的(参见例如Milstein等人,1983,Nature,305:537-539；Traunecker等人,1991,EMBO J.,10:3655-3659；Suresh等人,1986,Meth.Enzymol.,121:210；Rodrigues等人,1993,J.Immunol.,151:6954-6961；Carter等人,1992,Bio/Technology,10:163-167；Carter等人,1995,J.Hematotherapy,4:463-470；Merchant等人,1998,Nature Biotechnology,16:677-681和国际(PCT)公开号WO 94/04690、WO 2012/032080、WO 2012/058768和WO 2013/063702)。
在某些实施方案中，缀合物所包含的靶向部分T是与肿瘤相关抗原(TAA)结合的抗体或抗原结合抗体片段。肿瘤相关抗原的示例包括但不限于5T4、ADAM-9、ALK、AMHRII、ASCT2、Axl、B7-H3、BCMA、C4.4a、CA6、CA9、CanAg、CD123、CD138、CD142、CD166、CD184、CD19、CD20、CD205、CD22、CD248、CD25、CD3、CD30、CD33、CD352、CD37、CD38、CD40L、CD44v6、CD45、CD46、CD48、CD51、CD56、CD7、CD70、CD71、CD74、CD79b、CDH6、CEACAM5、CEACAM6、cKIT、CLDN18.2、CLDN6、CLL-1、c-MET、Cripto、CSP-1、CXCR5、DLK-1、DLL3、DPEP3、抗粘附素(Dysadherin)、EFNA4、EGFR、EGFRviii、ENPP3、EpCAM、EphA2、EphA3、ETBR、FGFR2、FGFR3、FLT3、FRα、FSH、GCC、GD2、GD3、Globo H、GPC-1、GPC3、gpNMB、HER-2、HER-3、HLA-DR、HSP90、IGF-1R、IL-13R、IL1RAP、IL7R、IL4R、KAAG-1、LAMP-1、Lewis Y抗原、LGALS3BP、LGR5、LH/hCG、LHRH、LIV-1、LRP-1、LRRC15、Ly6E、MAGE、MSLN、MET、MICA、MICB、MT1-MMP、MTX3、MTX5、MUC1、MUC16、NaPi2b、粘连蛋白(Nectin)-4、NOTCH3、OAcGD2、OX001L、p-钙粘蛋白、PD-1、PD-L1、磷脂酰丝氨酸(PS)、多态性上皮粘蛋白(PEM)、催乳素受体(PRLR)、PSMA、PTK7、RNF43、ROR1、ROR2、SAIL、SLAMF7、SLC44A4、SLITRK6、SSTR2、STEAP-1、STING、唾液酸-Tn、TIM-1、TM4SF1、TNFα、TRA、TROP-2、TAG-72、TA-MUC1、TIM-3、UPK2和UPK1b。
接头，L
式(X)的缀合物包括接头L，其是能够将一个或多个喜树碱类似物D连接至靶向部分T的双官能或多官能部分。双官能(或单价)接头L将单个化合物D连接至靶向部分T上的单个位点，而多官能(或多价)接头L将多于一个化合物D连接至靶向部分T上的单个位点。在某些实施方案中，将一个化合物D连接至靶向部分T上多于一个位点的接头也可被认为是多官能的。
接头L包括能够与靶向部分T上的一个或多个靶基团反应的官能团，和至少一个能够与喜树碱类似物D上的靶基团反应的官能团。合适的官能团是本领域已知的，并且包括例如在Bioconjugate Techniques(G.T.Hermanson,2013,Academic Press)中所述的那些。靶向部分T和喜树碱类似物D上可用作接头连接的靶向基团的基团包括但不限于硫醇、羟基、羧基、胺、醛和酮基团。
能够与硫醇反应的官能团的非限制性示例包括马来酰亚胺、卤代乙酰胺、卤代乙酰基、活化酯(诸如琥珀酰亚胺酯、4-硝基苯基酯、五氟苯酯和四氟苯酯)、酸酐、酰氯、磺酰氯、异氰酸酯和异硫氰酸酯。在这种情况下，也可使用如Lyon等人,2014,Nat.Biotechnol.,32:1059-1062中所述的“自稳定”马来酰亚胺。
能够与胺反应的官能团的非限制性示例包括活化酯(诸如N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯、磺基-NHS酯、亚氨酸酯诸如Traut试剂、四氟苯基(TFP)酯和磺基二氯苯基酯)、异硫氰酸酯、醛和酸酐(诸如二亚乙基三胺五乙酸酐(DTPA))。其他示例包括琥珀酰亚胺基-1,1,3,3-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TSTU)和苯并三唑-1-基-氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)。
能够与亲电子基团诸如醛或酮羰基基团反应的官能团的非限制性示例包括酰肼、肟、氨基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。
在靶向部分T是抗体的某些实施方案中，接头L可包含允许抗体上的两个链间半胱氨酸桥接的官能团，诸如ThioBridgeTM接头(Badescu等人,2014,Bioconjug.Chem.25:1124–1136)、二硫代马来酰亚胺(DTM)接头(Behrens等人,2015,Mol.Pharm.12:3986–3998)、基于二硫代芳基(TCEP)哒嗪二酮的接头(Lee等人,2016,Chem.Sci.,7:799-802)或基于二溴哒嗪二酮的接头(Maruani等人,2015,Nat.Commun.,6:6645)。
替代性地，靶向部分T可被修饰以包括非天然反应性基团，诸如叠氮化物，其允许通过接头上的互补反应性基团与接头缀合。例如，接头与靶向部分的缀合可利用点击化学反应(参见，例如，Chio&Bane,2020,Methods Mol.Biol.,2078:83-97)，诸如叠氮化物-炔烃环加成(AAC)反应，其已成功用于开发抗体-药物缀合物。AAC反应可以是铜催化的AAC(CuAAC)反应，其涉及叠氮化物与直链炔烃的偶联，或应变促进的AAC(SPAAC)反应，其涉及叠氮化物与环辛炔的偶联。
接头L可以是可裂解或非可裂解接头。可裂解接头是在特定条件下易于裂解的接头，例如在细胞内条件下(诸如在核内体或溶酶体中)或在靶细胞附近(诸如在肿瘤微环境中)。示例包括蛋白酶敏感的、酸敏感的或还原敏感的接头。相反，非可裂解接头依赖于细胞中抗体的降解，这通常导致氨基酸-接头-药物部分的释放。
可裂解接头的示例包括例如包含作为蛋白酶的裂解识别序列的氨基酸序列的接头。许多此类裂解识别序列是本领域已知的。对于不打算被细胞内化的缀合物，例如，可以使用被存在于靶细胞诸如癌细胞附近的细胞外基质中的蛋白酶识别和裂解的氨基酸序列。细胞外肿瘤相关蛋白酶的示例包括例如纤溶酶、基质金属蛋白酶(MMP)、弹性蛋白酶和激肽释放酶相关肽酶。
对于打算被细胞内化的缀合物，接头L可包含被内体或溶酶体蛋白酶识别和裂解的氨基酸序列。此类蛋白酶的示例包括例如组织蛋白酶B、C、D、H、L和S，以及豆荚蛋白。
裂解识别序列可以是例如二肽、三肽或四肽。可包括在可裂解接头中的二肽识别序列的非限制性示例包括但不限于Ala-(D)Asp、Ala-Lys、Ala-Phe、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、NorVal-(D)Asp、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、苯基Gly-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、Val-Cit、Val-Gly、Val-Gln和Val-Lys。三肽和四肽裂解序列的示例包括但不限于Ala-Ala-Asn、Ala-Val-Cit、(D)Ala-Phe-Lys、Asp-Val-Ala、Asp-Val-Cit、Gly-Cit-Val、Lys-Val-Ala、Lys-Val-Cit、Met-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、Asn-Pro-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Gly-Gly-Phe-Gly和Gly-Phe-Gly-Gly。
可裂解接头的其他示例包括含二硫键的接头，诸如N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯(SPDB)和N-琥珀酰亚胺基-4-(2-吡啶基二硫代)-2-磺基丁酸酯(磺基-SPDB)。含二硫键的接头可任选地包括另外的基团，以在二硫键附近提供空间位阻，以便改善接头的细胞外稳定性，例如，包含偕二甲基。其他可裂解接头包括在特定pH或pH范围内可水解的接头，诸如腙接头。包含具有这些官能性的组合的接头也可能有用，例如，包含腙和二硫键两者的接头是本领域已知的。
可裂解接头的另一个示例是包含β-葡糖苷酸的接头，其可被β-葡糖苷酸酶裂解，β-葡糖苷酸酶是存在于溶酶体和肿瘤间质中的酶(参见例如De Graaf等人,2002,Curr.Pharm.Des.8:1391–1403，和国际专利公开号WO 2007/011968)。β-葡糖苷酸还可以用于改善接头L的亲水性。
在细胞内被内部裂解并改善亲水性的接头的另一个示例是包含焦磷酸二酯部分的接头(参见例如Kern等人,2016,J Am Chem Soc.,138:2430-1445)。
在某些实施方案中，式(X)的缀合物所包含的接头L是可裂解接头。在一些实施方案中，接头L包含裂解识别序列。在一些实施方案中，接头L可包含被溶酶体蛋白酶识别和裂解的氨基酸序列。
可裂解接头可任选地还包含一个或多个附加官能团，诸如自分解和自消除基团、延伸基团或亲水部分。
可用于接头的自分解和自消除基团包括例如对-氨基苄基(PAB)和对-氨基苄氧基羰基(PABC)基团，以及甲基化乙二胺(MED)。自分解基团的其他示例包括但不限于与PAB或PABC基团电子相似的芳族化合物，诸如杂环衍生物，例如美国专利号7,375,078中所述的2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物。其他示例包括在酰胺键水解时进行环化的基团，诸如取代和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等人,1995,Chemistry Biology 2:223-227)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等人,1990,J.Org.Chem.55:5867-5877)。自分解/自消除基团通常连接至化合物D上的氨基或羟基基团。自分解/自消除基团通常单独或组合地包括在基于肽的接头中，但也可以包括在其他类型的接头中。
可用于药物缀合物的接头中的延伸剂包括例如亚烷基基团和基于脂族酸、二酸、胺或二胺的延伸剂，诸如二甘醇酸酯、丙二酸酯、己酸酯和己酰胺。其他延伸剂包括例如基于甘氨酸的延伸剂和聚乙二醇(PEG)或单甲氧基聚乙二醇(mPEG)延伸剂。
PEG和mPEG延伸剂也可以用作接头内的亲水部分。例如，PEG或mPEG可以“直接插入”或作为侧基包括在接头中，以增加接头的亲水性(参见，例如，美国专利申请公开号US2016/0310612)。各种含PEG的接头可从诸如Quanta BioDesign,Ltd(Plain City,OH)的公司商购获得。可任选地并入到接头L中的其他亲水性基团包括例如β-葡糖苷酸、磺酸基团、羧酸基团和焦磷酸二酯。
在某些实施方案中，式(X)的缀合物可包含可裂解接头。在一些实施方案中，式(X)的缀合物可包含含肽接头。在一些实施方案中，式(X)的缀合物可包含蛋白酶可裂解接头。
在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，接头L是具有式(XI)的可裂解接头：
其中：
Z是连接基团，其将接头连接至靶向部分T上的靶基团；
Str为延伸段；
AA1和AA2各自独立地是氨基酸，其中AA1-[AA2]r形成蛋白酶裂解位点；
X为自分解基团；
q是0或1；
r是1、2或3；
s是0、1或2；
#是与靶向部分T的连接点，并且
％是与喜树碱类似物D的连接点。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，q是1。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，s是1。在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，s是0。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中：
Z是其中#是与T的连接点，并且*是与接头的其余部分的连接点。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，Str选自：
/>
其中：
R为H或C1-C6烷基；
t为2与10之间的整数，并且
u为1与10之间的整数。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，Str选自：
其中：
R为H或C1-C6烷基；
t为2与10之间的整数，并且
u为1与10之间的整数。
在一些实施方案中，在式(XI)的接头中，AA1-[AA2]r具有选自下列的序列：Ala-(D)Asp、Ala-Lys、Ala-Phe、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、NorVal-(D)Asp、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、苯基Gly-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、Val-Cit、Val-Gly、Val-Gln和Val-Lys。三肽和四肽裂解序列的示例包括但不限于Ala-Ala-Asn、Ala-Val-Cit、(D)Ala-Phe-Lys、Asp-Val-Ala、Asp-Val-Cit、Gly-Cit-Val、Lys-Val-Ala、Lys-Val-Cit、Met-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、Asn-Pro-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Gly-Gly-Phe-Gly和Gly-Phe-Gly-Gly。
在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，m为1，并且接头L具有式(XI)。
在某些实施方案中，在式(X)的缀合物中，接头L是具有式(XII)的可裂解接头：
其中：
Z是连接基团，其将接头连接至靶向部分T上的靶基团；
Str为延伸段；
AA1和AA2各自独立地是氨基酸，其中AA1-[AA2]r形成蛋白酶裂解位点；
Y是-NH-CH2-或-NH-CH2-C(O)-；
q是0或1；
r是1、2或3；
v是0或1；
#是与靶向部分T的连接点，并且
％是与喜树碱类似物D的连接点。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，q是1。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，s是0。在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，s是1。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中：
Z是其中#是与T的连接点，并且*是与接头的其余部分的连接点。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，Str选自：
其中：
R为H或C1-C6烷基；
t为2与10之间的整数，并且
u为1与10之间的整数。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，Str选自：
其中：
R为H或C1-C6烷基；
t为2与10之间的整数，并且
u为1与10之间的整数。
在一些实施方案中，在式(XII)的接头中，AA1-[AA2]r具有选自下列的序列：Ala-(D)Asp、Ala-Lys、Ala-Phe、Asn-Lys、Asn-(D)Lys、Asp-Val、His-Val、Ile-Cit、Ile-Pro、Ile-Val、Leu-Cit、Me3Lys-Pro、Met-Lys、Met-(D)Lys、NorVal-(D)Asp、Phe-Arg、Phe-Cit、Phe-Lys、苯基Gly-(D)Lys、Pro-(D)Lys、Trp-Cit、Val-Ala、Val-(D)Asp、Val-Cit、Val-Gly、Val-Gln和Val-Lys。三肽和四肽裂解序列的示例包括但不限于Ala-Ala-Asn、Ala-Val-Cit、(D)Ala-Phe-Lys、Asp-Val-Ala、Asp-Val-Cit、Gly-Cit-Val、Lys-Val-Ala、Lys-Val-Cit、Met-Cit-Val、(D)Phe-Phe-Lys、Asn-Pro-Val、Ala-Leu-Ala-Leu、Gly-Phe-Leu-Gly、Gly-Gly-Phe-Gly和Gly-Phe-Gly-Gly。
在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，m为1，并且接头L具有式(XII)。
在一些实施方案中，式(X)的缀合物可包含含二硫键的接头。在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，接头L是具有式(XIII)的可裂解接头：
其中：
Z是连接基团，其将接头连接至靶向部分T上的靶基团；
Q为-(CH2)p-或-(CH2CH2O)q-，其中p和q各自独立地为1与10之间的整数；
每个R独立地为H或C1-C6烷基；
n为1、2或3；
#是与靶向部分T的连接点，并且
％是与喜树碱类似物D的连接点。
在一些实施方案中，在式(X)的缀合物中，m为1，并且接头L具有式(XIII)。
在一些实施方案中，式(X)的缀合物可包含含β-葡糖苷酸的接头。
各种非可裂解接头在本领域中已知用于将药物连接至靶向部分，并且在某些实施方案中可用于本公开的缀合物组合物中。非可裂解接头的示例包括具有用于与细胞结合剂反应的N-琥珀酰亚胺基酯或N-磺基琥珀酰亚胺基酯部分，以及用于与药物反应的基于马来酰亚胺基或卤代乙酰基的部分的接头，或反之亦然。此类非可裂解接头的示例是基于磺基琥珀酰亚胺基-4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-羧酸酯(磺基SMCC)。磺基-SMCC缀合通常通过与化合物D上的巯基(硫醇，-SH)反应的马来酰亚胺基团发生，而磺基-NHS酯对靶向部分T上的伯胺(如在赖氨酸中和在蛋白质或肽的N-末端发现的)具有反应性。此类接头的其他非限制性示例包括基于N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷甲酸酯(SMCC)、N-琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-羧基-(6-氨基己酸酯)(“长链”SMCC或LC-SMCC)、κ-马来酰亚胺基十一烷酸N-琥珀酰亚胺基酯(KMUA)、γ-马来酰亚胺基丁酸N-琥珀酰亚胺基酯(GMBS)、ε-马来酰亚胺基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(EMCS)、m-马来酰亚胺基苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、N-(α-马来酰亚胺基乙酰氧基)-琥珀酰亚胺酯(AMAS)、琥珀酰亚胺基-6-(β-马来酰亚胺基丙酰氨基)己酸酯(SMPH)、N-琥珀酰亚胺基4-(对马来酰亚胺基苯基)-丁酸酯(SMPB)和N-(对马来酰亚胺基苯基)异氰酸酯(PMPI)。其他示例包括那些包含基于卤代乙酰基的官能团，诸如N-琥珀酰亚胺基-4-(碘乙酰基)-氨基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀酰亚胺碘乙酸酯(SIA)、N-琥珀酰亚胺溴乙酸酯(SBA)和N-琥珀酰亚胺基3-(溴乙酰氨基)丙酸酯(SBAP)的接头。
包含式(I)的喜树碱类似物的药物-接头的非限制性示例示于表4(图4)、表5(图5)和表6(图6)中。包含这些药物-接头的缀合物的非限制性示例示于表7(图7)、表8(图8)和表9(图9)中。在某些实施方案中，式(X)的缀合物包含选自表4、5和6中所示的药物-接头的药物-接头。在某些实施方案中，式(X)的缀合物选自表7、8和9中所示的缀合物，其中T为靶向部分并且n为1与10之间的整数。在一些实施方案中，式(X)的缀合物选自表7、8和9中所示的缀合物，其中T为靶向部分并且n为2与8之间的整数。在一些实施方案中，式(X)的缀合物选自表7、8和9中所示的缀合物，其中T是抗体或抗原结合抗体片段。
制备
式(X)的缀合物可通过本领域已知的标准方法制备(参见，例如，BioconjugateTechniques(G.T.Hermanson,2013,Academic Press))。各种接头和接头组分是可商购的或者可使用标准合成有机化学技术制备(参见，例如，March’s Advanced Organic Chemistry(Smith&March,2006,Sixth Ed.,Wiley)；Toki等人,(2002)J.Org.Chem.67:1866-1872；Frisch等人,(1997)Bioconj.Chem.7:180-186；Bioconjugate Techniques(G.T.Hermanson,2013,Academic Press))。此外，各种抗体药物缀合服务可从诸如LonzaInc.(Allendale,NJ)、Abzena PLC(Cambridge,UK)、ADC Biotechnology(St.Asaph、UK)、Baxter BioPharma Solutions(Baxter Healthcare Corporation,Deerfield,IL)和Piramel Pharma Solutions(Grangemouth,UK)的公司商购获得。
通常，缀合物的制备包括首先制备包含一个或多个式(I)的喜树碱类似物和接头L的药物-接头D-L，然后将药物-接头D-L缀合至靶向部分T上的适当基团。然而，接头L与靶向部分T的连接以及随后的靶向部分-接头T-L与一个或多个式(I)的喜树碱类似物D的连接是可用于一些实施方案的替代方法。
在上述任一种方法中，用于连接接头L的式(I)的化合物D上的合适基团包括但不限于硫醇基团、胺基团、羧酸基团和羟基基团。在本公开的一些实施方案中，接头L经由化合物上的羟基或胺基团连接至式(I)的化合物D。
在上述任一方法中，用于连接接头L的靶向部分T上的合适基团包括巯基基团(例如，在半胱氨酸残基的侧链上)、氨基基团(例如，在赖氨酸残基的侧链上)、羧酸基团(例如，在天冬氨酸或谷氨酸残基的侧链上)和碳水化合物基团。
例如，靶向部分T可包含一个或多个天然存在的巯基基团，其允许靶向部分T通过巯基基团的硫原子与接头L键合。替代性地，靶向部分T可包含一个或多个赖氨酸残基，其可被化学修饰以引入一个或多个巯基基团。可用于修饰赖氨酸残基的试剂包括但不限于N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(“SPDP”)和2-亚氨基硫杂环戊烷盐酸盐(Traut试剂)。替代性地，靶向部分T可包含一个或多个碳水化合物基团，其可被化学修饰以包括一个或多个巯基基团。
靶向部分T上的碳水化合物基团也可被氧化以提供醛(-CHO)基团(参见例如Laguzza等人,1989,J.Med.Chem.32(3):548-55)，其可随后例如经由接头L上的肼或羟胺基团与接头L反应。
靶向部分T也可被修饰以包括附加的半胱氨酸残基(参见，例如，美国专利号7,521,541；8,455,622和9,000,130)或提供反应性柄的非天然氨基酸，诸如硒代甲硫氨酸、对乙酰苯丙氨酸、甲酰甘氨酸或对叠氮甲基-L-苯丙氨酸(参见例如Hofer等人,2009,Biochemistry,48:12047-12057；Axup等人,2012,PNAS,109:16101-16106；Wu等人,2009,PNAS,106:3000-3005；Zimmerman等人,2014,Bioconj.Chem.,25:351-361)，以允许位点特异性缀合。替代性地，靶向部分T可被修饰以包括非天然反应性基团，诸如叠氮化物，其允许通过接头上的互补反应性基团与接头缀合，例如通过点击化学实现(参见，例如，Chio&Bane,2020,Methods Mol.Biol.,2078:83-97)。
用于修饰蛋白质以连接或缔合接头L的其他方案是本领域已知的，包括Coligan等人,Current Protocols in Protein Science,第2卷,John Wiley&Sons(2002)中描述的那些。
在靶向部分T是抗体的那些实施方案中，抗体上的若干种不同的反应性基团可充当缀合位点，包括赖氨酸残基上的ε-氨基基团、侧链碳水化合物部分、天冬氨酸或谷氨酸残基上的侧链羧酸基团、半胱氨酸-半胱氨酸二硫键基团和半胱氨酸硫醇基团。用于缀合的氨基酸可以是抗体天然序列的一部分，或者它们可通过本领域已知的位点特异性工程化技术引入，如上所述。
替代性地，抗体-药物缀合物可使用例如来自茂原链霉菌(Streptomycesmobaraensis)的细菌转谷氨酰胺酶(BTG)来制备(参见例如Jeger等人,2010,Angew.Chem.Int.Ed.,49:9995-9997)。BTG在谷氨酰胺的侧链甲酰胺(胺受体，通常在抗体上)与亚烷基氨基(胺供体，通常在药物-接头上)之间形成酰胺键，所述亚烷基氨基可以是例如赖氨酸的ε-氨基基团或5-氨基-正戊基基团。抗体也可被修饰以包括含有谷氨酰胺的肽或“标签”，其允许使用BTG缀合将抗体缀合至药物-接头(参见，例如，美国专利申请公开号US2013/0230543和国际(PCT)公开号WO 2016/144608)。
类似的缀合方法利用酶转肽酶A。在这种方法中，抗体通常被修饰以包括转肽酶A识别基序(LPXTG，其中X是任何天然氨基酸)，并且药物-接头被设计成包括低聚甘氨酸基序(通常为GGG)以允许转肽酶A介导的转肽作用(参见，例如，Beerli等人,2015,PLos One,10:e0131177；Chen等人,2016,Nature:Scientific Reports,6:31899)。
一旦缀合完成，缀合至靶向部分T的式(I)的化合物的平均数目(即“药物-抗体比率”或DAR)可通过标准技术诸如UV/VIS光谱分析、基于ELISA的技术、色谱技术诸如疏水相互作用色谱(HIC)、UV-MALDI质谱(MS)和MALDI-TOF MS来确定。此外，还可以任选地分析药物连接形式(例如，含有0、1、2、3等个式(I)的化合物D的靶向部分T的分数)的分布。测量DAR分布的各种技术是本领域已知的，包括MS(有或没有伴随的色谱分离步骤)、疏水相互作用色谱、反相HPLC或等电聚焦凝胶电泳(IEF)(参见，例如，Wakankar等人,2011,mAbs,3:161-172)。
药物组合物
式(I)的化合物和包含式(I)的化合物的缀合物通常配制用于治疗用途。因此，本公开的某些实施方案涉及包含式(I)的化合物或其缀合物(诸如具有式(X)的缀合物)和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。此类药物组合物可通过已知的程序使用熟知的和容易获得的成分制备。
可将药物组合物配制成用于通过例如口服(包括例如经颊或舌下)、局部、肠胃外、直肠或阴道途径，或通过吸入或喷雾施用于受试者。如本文所用，术语肠胃外包括皮下注射和皮内、关节内、静脉内、肌内、血管内、胸骨内、鞘内注射或输注。药物组合物通常将配制成适于施用于受试者的形式，例如糖浆剂、酏剂、片剂、糖锭剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、丸剂、栓剂、油性或水性混悬液、可分散性粉剂或粒剂、乳液、注射剂或溶液。药物组合物可以作为单位剂量制剂提供。
用于口服的组合物可制备成固体或流体单位剂型。流体单位剂型可根据本领域已知的用于制造药物组合物的程序来制备，并且此类组合物可含有一种或多种剂，诸如甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，以便提供药学上美观和适口的制备物。酏剂可通过使用水醇(例如乙醇)载体与合适的甜味剂诸如糖和/或糖精以及芳香调味剂来制备。混悬液可以用水性载体和悬浮剂诸如阿拉伯胶、黄蓍胶、甲基纤维素等来制备。
固体制剂，诸如片剂，含有与适于制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和/或润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石，以及其他常规成分，诸如磷酸二钙、硅酸镁铝、硫酸钙、淀粉、乳糖、甲基纤维素和功能类似的材料。片剂可以是未包衣的，或者它们可通过已知技术包衣，例如，以便延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间内提供持续作用。例如，可以使用延时材料，诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
用于口服的制剂也可以作为硬明胶胶囊存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或作为软明胶胶囊存在，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。软明胶胶囊通常通过将活性成分与可接受的植物油、轻质液体矿脂或其他惰性油的浆液进行机械包封来制备。
水性混悬液含有与适于制造水性混悬液的赋形剂混合的活性成分。此类赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶，以及分散剂或润湿剂。分散剂和润湿剂包括例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七烷氧基十六醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)。水性混悬液还可以含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂和/或一种或多种甜味剂(例如蔗糖或糖精)。
油性混悬液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)或矿物油(诸如液体石蜡)中来配制。油性混悬液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可添加如上所述的甜味剂和调味剂以提供适口的口服制备物。混悬液可任选地通过添加抗氧化剂诸如抗坏血酸来保存。
适于通过添加水来制备水性混悬液的可分散粉末和颗粒通常提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。适合的分散剂或润湿剂和混悬剂通过已在以上提及的那些来例证。还可以存在一种或多种附加的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和/或着色剂。
药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡，或此类油的混合物。包含在水包油乳剂中的合适的乳化剂包括例如天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆、卵磷脂)或衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯(例如脱水山梨糖醇单油酸酯)或此类偏酯与环氧乙烷的缩合产物(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。乳剂还可任选地含有甜味剂和/或调味剂。
药物组合物可以是无菌可注射水性或油性溶液或混悬液的形式。此类混悬液可使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂诸如上述那些来配制。无菌可注射溶液或混悬液可包含无毒肠胃外可接受的载体或稀释剂中的活性成分。可以采用的可接受的载体和稀释剂包括例如1,3-丁二醇、水、林格氏溶液(Ringer’s solution)或等渗氯化钠溶液。此外，可以使用无菌固定油作为载体。为此目的，可使用各种温和的固定油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，诸如油酸的脂肪酸在可注射剂的制备中使用。佐剂，诸如局部麻醉剂、防腐剂和/或缓冲剂也可以包含在可注射溶液或混悬液中。
药物组合物还可以配制成用于直肠施用的栓剂。可通过将活性成分与合适的非刺激性赋形剂混合来制备这些组合物，所述赋形剂在常温下是固体，但在生理温度下是液体，因此将在直肠中熔化以释放药物。此类材料包括可可脂和聚乙二醇。
其他药物组合物和制备药物组合物的方法是本领域已知的，并且例如在“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(原名“RemingtonsPharmaceutical Sciences”)；Gennaro,A.,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA(2000)中进行了描述。
使用方法
本公开的某些实施方案涉及式(I)的喜树碱类似物和包含这些化合物的缀合物(诸如式(X)的缀合物)的治疗用途。一些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物作为治疗剂的用途。
式(I)的喜树碱类似物显示针对癌细胞的细胞毒性活性，并且式(I)的化合物和包含这些化合物的缀合物，诸如式(X)的缀合物，因此可用于抑制异常癌细胞或肿瘤细胞生长；抑制癌细胞或肿瘤细胞增殖，或治疗患者的癌症。在某些实施方案中，通式(I)的化合物和式(X)的缀合物可用于治疗癌症。因此，本公开的一些实施方案涉及通式(I)的化合物和通式(X)的缀合物作为抗癌剂的用途。
本公开的某些实施方案涉及抑制癌或肿瘤细胞增殖的方法，其包括使所述细胞与式(I)的化合物或式(X)的缀合物接触。一些实施方案涉及杀死癌或肿瘤细胞的方法，其包括使所述细胞与式(I)的化合物或式(X)的缀合物接触。
一些实施方案涉及通过向患有癌症的受试者施用式(I)的化合物或式(X)的缀合物来治疗所述受试者的方法。在这种情况下，用式(I)的化合物或式(X)的缀合物治疗可导致以下情况中的一者或多者：肿瘤尺寸减小、减缓或预防肿瘤尺寸的增加、延长肿瘤消失或去除与其再出现之间的无病存活时间、预防肿瘤的后续发生(例如转移)、延长进展的时间、减少与肿瘤相关联的一种或多种不良症状和/或延长患有癌症的受试者的总存活时间。
某些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物在抑制受试者的肿瘤生长的方法中的用途。一些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物在体外抑制癌细胞增殖和/或杀死癌细胞的方法中的用途。一些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物在患有癌症的受试者体内抑制癌细胞增殖和/或杀死癌细胞的方法中的用途。
在某些实施方案中可以治疗的癌症的示例包括血液肿瘤，包括白血病、骨髓瘤和淋巴瘤；癌，包括腺癌和鳞状细胞癌；黑素瘤和肉瘤。癌和肉瘤通常也称为“实体瘤”。可在某些实施方案中治疗的常见实体瘤的示例包括但不限于脑癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、胃癌、子宫癌、非小细胞肺癌(NSCLC)和结肠直肠癌。各种形式的淋巴瘤也可导致实体瘤的形成，因此在某些情况下也可被认为是实体瘤。
某些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物在自身免疫性疾病诸如特应性皮炎、类风湿性关节炎、银屑病或系统性红斑狼疮治疗中的用途。
某些实施方案涉及式(I)的化合物或式(X)的缀合物在病毒感染诸如HIV感染或SARS冠状病毒感染治疗中的用途。
药物试剂盒
在某些实施方案中，包含式(I)的化合物或式(X)的缀合物的药物组合物可作为药物试剂盒或包装的一部分提供。试剂盒的各个组分通常包装在单独的容器中。取决于药物组合物的制剂，合适的容器包括例如瓶、泡罩包装、静脉内溶液袋、小瓶等。在某些实施方案中，容器可以是允许向受试者施用的形式，例如，吸入器、注射器、移液管、滴眼管、预浸泡的纱布或垫或其他此类装置，可从其将内容物施用给受试者。
试剂盒还可以包括在容器上或与容器相关联的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于指通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书，其包含关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。标签或包装说明书还可包括管制药品或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，该公告反映了该制造机构对人或动物施用的使用或销售的批准。标签或包装说明书通常指示化合物或缀合物用于治疗所选病症，例如癌症。
在适当的情况下，试剂盒的一种或多种组分可以是冻干的或以干燥形式(诸如粉末或颗粒)提供，并且试剂盒可以另外含有用于复原冻干或干燥组分的合适溶剂。
提供以下实施例是为了说明的目的而非意图以任何方式限制本发明的范围。
实施例
以下实施例1至3说明了制备式(I)的喜树碱类似物的各种方法。应理解，本领域技术人员能够通过类似方法或通过组合本领域已知的其他方法来制备这些化合物。还应当理解，本领域技术人员将能够使用下文描述的方法或类似方法，通过使用适当的起始组分并根据需要修改合成参数来制备下文未具体说明的其他式(I)的化合物。通常，起始组分可从商业来源获得，诸如Sigma Aldrich(Merck KGaA)、Alfa Aesar和Maybridge(ThermoFisher Scientific Inc.)、Matrix Scientific、Tokyo Chemical Industry Ltd.(TCI)和Fluorochem Ltd.，或根据本领域技术人员已知的来源合成(参见，例如，March’s AdvancedOrganic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第7版,John Wiley&Sons,Inc.,2013)或如本文所述制备。
缩写
在整个实施例部分中使用了以下缩写：
BCA：二辛可宁酸；Boc：二碳酸二叔丁酯；CE-SDS：毛细管电泳十二烷基硫酸钠；DCM：二氯甲烷；DTPA：二乙三胺五乙酸；DIPEA：N,N-二异丙基乙胺；DMF：二甲基甲酰胺；DMMTM：(4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基-吗啉鎓氯化物；EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；Fmoc：芴基甲氧基羰基；HATU：六氟磷酸盐氮杂苯并三唑四甲基脲鎓；HIC：疏水相互作用色谱；HOAt：1-羟基-7-氮杂苯并三唑；HPLC：高效液相色谱；LCMS：液相色谱质谱法；MC：马来酰亚氨基己酰基；MT：马来酰亚胺基三甘醇酸酯；NMM：N-甲基吗啉；PNP：对硝基苯酚；RP-UPLC-MS：反相超高效色谱质谱法；SEC：尺寸排阻色谱法；TCEP：三(2-羧乙基)膦；Tfp：四氟苯基；TLC：薄层色谱法；TFA：三氟乙酸。
一般化学程序
一般程序1：将氯化物转化为胺(合成方案I；图1A)
向氯化物化合物在二甲基甲酰胺(0.05M至0.1M)中搅拌溶液中添加适当的仲胺(3当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1至3小时)，将反应混合物通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的产物。
一般程序2：将胺转化为酰胺(合成方案II；图1B)
向胺化合物在二甲基甲酰胺(0.05M至0.1M)中的搅拌溶液中添加三乙胺(1.2当量)、合适的羧酸(1.1当量)，然后添加DMMTM(2当量)在水中的溶液(1M)。完成后(通过LCMS确定，通常16小时)，将反应混合物通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的产物。
一般程序3：将胺转化为磺酰胺(合成方案III；图1C)
向胺化合物在二甲基甲酰胺(0.05M至0.1M)中的搅拌溶液中添加DIPEA(3当量)，接着添加适当的磺酰氯。完成后(通过LCMS确定，通常为16小时)，将反应混合物通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的产物。
一般程序4：胺向脲的两步转化(合成方案IV；图1D)
步骤1：向胺化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺(0.05M至0.1M)中的搅拌溶液的中添加对硝基苯基碳酸酯(1当量)，然后添加三乙胺(2当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1至4小时)，将反应混合物浓缩至干燥，然后通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的PNP-氨基甲酸酯中间体。该中间体可用于生成单一类似物或分成多批以便在第二步中生成多个类似物。
步骤2：向在二甲基甲酰胺中的PNP-氨基甲酸酯中间体(0.1M至0.2M)中添加适当的伯胺(3当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1小时)，将反应混合物通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的产物。
一般程序5：将胺转化为氨基甲酸酯(合成方案V；图1E)
向胺化合物在二氯甲烷或二甲基甲酰胺中的搅拌溶液(0.05M至0.1M)中添加对硝基苯基碳酸酯(1当量)，然后添加三乙胺(2当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1至4小时)，将适当的醇添加至所得PNP-氨基甲酸酯中间体。完成后(通过LCMS确定，通常为1至16小时)，将反应混合物通过反相HPLC纯化，以在冻干后提供所需的产物。
一般程序6：去除Boc保护基团
向Boc-保护的胺化合物在二氯甲烷中的搅拌溶液(0.1M)中添加TFA(20体积％)。完成后(通过LCMS确定，通常为1小时)，将反应混合物真空浓缩以提供粗固体或如一般程序9中所述进行纯化。
一般程序7：铜介导的酰胺偶联(合成方案VI；图1F)
向Boc-GGFG-OH(3当量)和HOAt(3当量)在二甲基甲酰胺于二氯甲烷中的10％v/v混合物中的快速搅拌溶液(0.02M)中添加EDC(HCl盐，3当量)。5分钟后，添加含胺有效负载(1当量)在二甲基甲酰胺于二氯甲烷中的10％v/v混合物中的溶液(0.02M)，然后立即添加CuCl2(4当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1至16小时)，将反应混合物真空浓缩以提供粗固体或通过制备型HPLC纯化，以在冻干后提供所需产物。
一般程序8：MT安装(合成方案VII；图1G)
向胺化合物(1当量)在二甲基甲酰胺(约0.02M)中的搅拌溶液中添加MT-OTfp(1.2当量至1.5当量)在乙腈(约0.02M)中的溶液，然后添加DIPEA(10uL，4当量)。完成后(通过LCMS确定，通常为1至16小时)，将反应混合物真空浓缩以提供粗固体，将其通过制备型HPLC纯化，以在冻干后提供所需产物。
一般程序9：化合物纯化
快速色谱法：将粗反应产物用Snap Ultra柱(10g、25g、50g或100g)(Biotage,Charlotte,NC)纯化，在/>IsoleraTM自动快速体系(Biotage,Charlotte,NC)上用乙酸乙酯/己烷或甲醇/二氯甲烷的线性梯度洗脱。替代性地，使用/>SnapUltra C18柱(12g、30g、60g或120g)进行反相快速纯化，其中用乙腈中的0.1％TFA/水中的0.1％TFA的线性梯度洗脱。通过旋转蒸发除去有机溶剂或冻干乙腈/水混合物，从而分离纯化的化合物。/>
制备型HPLC：粗化合物的反相HPLC使用5-μm C18/>(150×30mm)柱(Phenomenex,Torrance,CA)在Agilent 1260Infinity II制备型LC/MSD体系(AgilentTechnologies,Inc.,Santa Clara,CA)上进行，并且用乙腈中的0.1％TFA/水中的0.1％TFA的线性梯度洗脱。通过冻干乙腈/水混合物来分离纯化的化合物。
一般程序10：化合物分析
LC/MS：监测反应完成并使用2.6-μm C18/>(30×3mm)柱(Phenomenex,Torrance,CA)在Agilent 1290HPLC/6120单四极杆LC/MS体系(AgilentTechnologies,Inc.,Santa Clara,CA)上分析纯化的化合物，其中用线性10％至100％梯度的乙腈中的0.1％甲酸/水中的0.1％甲酸洗脱。
NMR： 1H NMR光谱用Bruker AVANCE III 300光谱仪(300MHz)(BrukerCorporation,Billerica,MA)收集。化学位移以百万分率(ppm)报告。
实施例1：制备在C10位具有甲基的喜树碱类似物
1.1：(S)-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物1.1)
根据Li等人,2019,ACS Med.Chem.Lett.,10(10):1386-1392中提供的程序制备标题化合物。
1.2：(S)-11-(氨基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物1.2)
根据Li等人,2019,ACS Med.Chem.Lett.,10(10):1386-1392中提供的程序制备标题化合物。
1.3：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-11-(吗啉代甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物100)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和吗啉开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，3.6mg，26％产率)。
LC/MS：C26H26FN3O5的计算值m/z＝479.2，实测值[M+H]+＝480.4。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝8.0Hz,1H),7.82(d,J＝10.4Hz,1H),7.67(s,1H),5.77(d,J＝16.4Hz,1H),5.42(s,2H),5.33(d,J＝16.4Hz,1H),4.26(s,2H),3.81(t,J＝4.7Hz,4H),2.82–2.76(m,4H),2.57(d,J＝1.7Hz,3H),1.99–1.82(m,2H),1.06(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.4：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-11-((4-(苯基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物102)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和1-(苯磺酰基)哌嗪开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，3.6mg，21％产率)。
LC/MS：C32H31FN4O6的计算值m/z＝618.2，实测值[M+H]+＝619.4。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.07(d,J＝7.9Hz,1H),7.88–7.44(m,7H),5.73(d,J＝16.4Hz,1H),5.33(s,2H),5.33–5.26(m,1H),4.19(s,2H),3.12(s,4H),2.80(s,4H),2.54(s,3H),1.90(dt,J＝11.6,7.0Hz,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.5：(S)-11-((4-((4-氨基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物104)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和4-(哌嗪-1-基磺酰基)苯胺开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，4.7mg，27％产率)。
LC/MS：C32H32FN5O6的计算值m/z＝633.2，实测值[M+H]+＝634.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.32(d,J＝8.0Hz,1H),7.85(d,J＝10.5Hz,1H),7.65(s,1H),7.46(d,J＝8.7Hz,2H),6.74(d,J＝8.7Hz,2H),5.61(d,J＝16.5Hz,1H),5.44(s,2H),5.41(d,J＝16.5Hz,1H),4.51(s,2H),3.22–3.07(m,8H),2.58(s,3H),2.03–1.93(m,2H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.6：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-11-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物106)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和N-甲基哌嗪开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，3.6mg，25％产率)。
LC/MS：C27H29FN4O4的计算值m/z＝492.2，实测值[M+H]+＝493.4。
1.7：(S)-11-((4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物108)
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根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和4-(哌嗪-1-基)苯胺开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，3.7mg，23％产率)。
LC/MS：C32H32FN5O4的计算值m/z＝569.2，实测值[M+H]+＝570.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.39(d,J＝8.1Hz,1H),7.79(d,J＝10.6Hz,1H),7.21(d,J＝9.0Hz,2H),7.14(d,J＝9.0Hz,2H),5.62(d,J＝16.4Hz,1H),5.49(s,2H),5.41(d,J＝16.4Hz,1H),4.45(s,2H),3.44–3.38(m,4H),3.06–3.00(m,4H),2.58(d,J＝1.8Hz,3H),2.00–1.89(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.8：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-11-(哌啶-1-基甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物110)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和哌啶开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，1.5mg，11％产率)。
LC/MS：C27H28FN3O4的计算值m/z＝477.2，实测值[M+H]+＝478.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.34(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(d,J＝10.3Hz,1H),7.70(s,1H),5.63(d,J＝16.4Hz,1H),5.52(s,2H),5.44(d,J＝16.5Hz,1H),4.99(s,2H),3.73–3.46(m,4H),2.64(s,3H),2.03–1.90(m,2H),1.90–1.84(m,6H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.9：(S)-4-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物111)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，6.6mg，40％产率)。
LC/MS：C31H35FN4O6的计算值m/z＝578.2，实测值[M+H]+＝579.4。
1.10：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-11-(哌嗪-1-基甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物112)
根据一般程序6从化合物111(5.0mg)开始制备标题化合物，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，4.4mg)。
LC/MS：C26H27FN4O4的计算值m/z＝478.2，实测值[M+H]+＝479.2。
1.11：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(((R)-2-(羟基甲基)吗啉代)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物113)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和(R)-吗啉-2-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，4.6mg，32％产率)。
LC/MS：C27H28FN3O6的计算值m/z＝509.2，实测值[M+H]+＝510.4。
1.12：(4S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((3-(羟基甲基)硫代吗啉代)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物114)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和硫代吗啉-3-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，1.5mg，12％产率)。
LC/MS：C27H28FN3O5S的计算值m/z＝525.6，实测值[M+H]+＝526.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)8.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.83(d,J＝10.7Hz,1H),7.50(s,1H),5.57(d,J＝16.4Hz,1H),5.52–5.29(m,3H),5.02(d,J＝14.6Hz,1H),4.71–4.54(m,1H),4.27(dd,J＝12.4,5.0Hz,1H),3.98(dd,J＝12.3,3.4Hz,1H),3.55(s,1H),3.30-3.03(m,4H)2.97–2.72(m,3H),2.62(s,1H),2.55(s,3H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.13：(4S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((4-(羟基甲基)-2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚-5-基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物115)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-4-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，3.5mg，29％产率)。
LC/MS：C28H28FN3O6的计算值m/z＝521.5，实测值[M+H]+＝522.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.36(d,J＝7.9Hz,1H),7.86(dd,J＝10.6,5.0Hz,1H),7.50(d,J＝1.8Hz,1H),5.63–5.49(m,2H),5.37(dd,J＝17.8,14.1Hz,2H),5.05(s,2H),4.63(d,J＝2.5Hz,1H),4.55(d,J＝10.7Hz,1H),4.33(s,2H),3.92(d,J＝10.7Hz,1H),3.36(s,2H),2.57(s,3H),2.41–2.13(m,2H),1.97-1.85(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.14：(4S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((3-(羟基甲基)-1,1-二氧硫代吗啉代)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物116)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和3-(羟基甲基)-1λ6-硫代吗啉-1,1-二酮开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，0.2mg，2％产率)。
LC/MS：C27H28FN3O7S的计算值m/z＝557.6，实测值[M+H]+＝558.4。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.44(d,J＝8.2Hz,1H),7.80(d,J＝11.0Hz,1H),7.50(s,1H),5.58(d,J＝16.5Hz,1H),5.45–5.26(m,3H),4.60(d,J＝14.9Hz,1H),4.33(d,J＝14.7Hz,1H),3.88(d,J＝4.8Hz,2H),3.41-2.85(m,4H),2.53(s,2H),2.19(p,J＝2.5Hz,2H),1.74(p,J＝2.5Hz,2H),1.27(s,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.15：(4S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((6-羟基-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物117)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，1.3mg，11％产率)。
LC/MS：C28H28FN3O5的计算值m/z＝505.5，实测值[M+H]+＝506.6。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.25(d,J＝7.9Hz,1H),7.87(d,J＝10.6Hz,1H),7.50(s,1H),5.65–5.27(m,4H),4.98(s,2H),4.24(s,1H),3.83–3.57(m,4H),2.54(s,5H),2.01-1.86(m,2H),1.70(s,2H),0.95(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.16：(S)-4-乙基-8-氟-11-((3-氟-3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物118)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和3-氟氮杂环丁烷-3-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，1.4mg，12％产率)。
LC/MS：C26H25F2N3O5的计算值m/z＝497.5，实测值[M+H]+＝498.4。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.24(d,J＝7.9Hz,1H),7.85(d,J＝10.7Hz,1H),7.50(s,1H),5.57(d,J＝16.5Hz,1H),5.48–5.28(m,3H),4.98(s,2H),4.44–4.14(m,4H),3.78(d,J＝14.9Hz,2H),2.01-1.86(m,2H),0.95(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.17：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物119)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和氮杂环丁烷-3-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，0.5mg，4.5％产率)。
LC/MS：C26H26FN3O5的计算值m/z＝479.5，实测值[M+H]+＝480.4。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.23(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(d,J＝10.6Hz,1H),7.53(s,1H),5.58(d,J＝16.5Hz,1H),5.50–5.28(m,3H),5.01(s,2H),4.31–4.17(m,2H),4.15–4.00(m,2H),3.62(d,J＝3.9Hz,2H),2.58(s,3H),2.01-1.86(m,2H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.18：(4S)-11-((4,4-二氟-3-(羟基甲基)哌啶-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物120)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和4,4-二氟哌啶-3-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，4mg，32％产率)。
LC/MS：C28H28F3N3O5的计算值m/z＝543.5，实测值[M+H]+＝544.4。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.25(d,J＝8.0Hz,1H),7.77(dd,J＝10.7,1.4Hz,1H),7.47(s,1H),5.55(d,J＝16.5Hz,1H),5.42–5.25(m,3H),4.66(d,J＝3.2Hz,2H),3.90–3.77(m,1H),3.71–3.45(m,4H),2.24(q,J＝11.8,9.2Hz,2H),2.01-1.86(m,2H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.19：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((1-(羟基甲基)-7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)甲基)-9-甲基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物121)
根据一般程序1从化合物1.1(10mg)和7-氮杂二环[2.2.1]庚-1-基甲醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，0.8mg，6.6％产率)。
LC/MS：C29H30FN3O5的计算值m/z＝519.6，实测值[M+H]+＝520.4。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.22(s,1H),7.92(d,J＝10.7Hz,1H),7.54(s,1H),5.59(dd,J＝17.6,7.6Hz,2H),5.33(t,J＝17.4Hz,2H),4.98–4.81(m,1H),4.67–4.44(m,2H),4.28–3.93(m,4H),2.73(s,2H),2.34–2.03(m,4H),1.91(d,J＝14.0Hz,5H),0.96(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.20：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)甲磺酰胺(化合物122)
根据一般程序3从化合物1.2(10mg)和甲磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(0.8mg，7％产率)。
LC/MS：C23H22FN3O6S的计算值m/z＝487.1，实测值[M+H]+＝488.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.33(d,J＝8.1Hz,1H),7.83(d,J＝10.8Hz,1H),7.68(s,1H),5.62(d,J＝16.3Hz,1H),5.52(s,2H),5.42(d,J＝16.4Hz,1H),4.87(s,2H),3.06(s,3H),2.59(s,3H),2.06-1.93(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.21：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-1-(4-硝基苯基)甲磺酰胺(化合物124)
根据一般程序3从化合物1.2(20mg)和(4-硝基苯基)甲磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(5.0 mg，17％产率)。
LC/MS：C29H25FN4O8S的计算值m/z＝608.1，实测值[M+H]+＝609.2。
1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ8.02–7.92(m,3H),7.74(d,J＝10.5 Hz,1H),7.65(s,1H),7.33(d,J＝8.6 Hz,2H),5.66(d,J＝16.8 Hz,1H),5.28(d,J＝16.5 Hz,1H),5.14(d,J＝5.4 Hz,2H),4.67(s,2H),4.28(d,J＝6.3 Hz,2H),3.39(s,3H),2.03–1.83(m,2H),1.04(t,J＝7.4 Hz,3H)。
1.22：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)苯磺酰胺(化合物125)
根据一般程序3从化合物1.2(10 mg)和苯磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(9.8 mg，73％产率)。
LC/MS：C28H24FN3O6S的计算值m/z＝549.6，实测值[M+H]+＝550.6。
1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ8.60(t,J＝6.2 Hz,1H),8.17(d,J＝8.1 Hz,1H),7.83(d,J＝10.8 Hz,1H),7.71(dd,J＝7.1,1.7 Hz,2H),7.66–7.48(m,2H),7.46(dd,J＝8.3,6.8 Hz,2H),7.40–7.27(m,2H),7.18(s,1H),7.01(s,1H),5.45(s,2H),5.33(s,2H),4.63(d,J＝6.2 Hz,2H),2.48(s,3H),1.98–1.76(m,2H),0.89(t,J＝7.3 Hz,3H)。
1.23：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-4-硝基苯磺酰胺(化合物1.23)
根据一般程序3从化合物1.2(75mg)和4-硝基苯磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述，使用12g C18柱并用5％至75％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱来完成标题化合物的纯化，得到灰白色固体状的标题化合物(37.8mg，47％产率)。
LC/MS：C28H23FN4O8S的计算值m/z＝594.6，实测值[M+H]+＝595.2。
1.24：(S)-4-氨基-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)苯磺酰胺(化合物127)
向化合物1.23(37.8mg，0.064mmol)在甲醇中的溶液(6.4mL)中添加铂1％钒2％/碳(75mg)。将烧瓶用H2吹扫，然后在室温下在H2气氛下搅拌45分钟。将混合物通过硅藻土垫过滤，用DMF洗涤，并将滤液蒸发，得到浅黄色固体状的标题化合物(30mg，84％产率)。
LC/MS：C28H24FN4O6S的计算值m/z＝564.6，实测值[M+H]+＝565.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.13(d,J＝8.2Hz,1H),8.02(t,J＝6.2Hz,1H),7.88(d,J＝10.8Hz,1H),7.48–7.35(m,2H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),6.63–6.45(m,2H),5.45(s,2H),5.36(s,2H),4.50(d,J＝6.3Hz,2H),1.98–1.75(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.25：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物129)
根据一般程序3从化合物1.2(20mg)和2-羟基乙烷磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(1.3mg，13％产率)。
LC/MS：C24H24FN3O7S的计算值m/z＝517.1，实测值[M+H]+＝518.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝10.9Hz,1H),7.84(t,J＝6.3Hz,1H),7.33(s,1H),5.50-5.33(m,4H),5.07(t,J＝5.4Hz,1H),4.78(d,J＝6.0Hz,2H),4.07(s,3H),3.80(dt,J＝6.3Hz,J＝5.8Hz,2H),1.86(m,2H),0.87(d,J＝7.3Hz,3H)。
1.26：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)甲磺酰胺(化合物131)
向氯磺酰异氰酸酯(3uL)在二氯甲烷中的溶液(1mL)中添加叔丁醇(3uL)。将该溶液搅拌1小时，然后添加溶于二氯甲烷(1mL)的化合物1.2(13mg)，随后添加三乙胺(13uL)。将反应物搅拌1小时，然后浓缩至干。如一般程序9中所述完成中间体Boc化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。向二氯甲烷(1mL)中的纯化固体中添加三氟乙酸(200uL)。将反应物搅拌16小时，然后浓缩至干，得到灰白色固体状的标题化合物(7.5mg，48％产率)。
LC/MS：C22H21FN4O6S的计算值m/z＝488.1，实测值[M+H]+＝489.0。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.73(d,J＝10.7Hz,1H),7.62(s,1H),5.59(d,J＝16.4Hz,1H),5.45(s,2H),5.39(d,J＝16.4Hz,1H),4.81(s,2H),2.55(d,J＝1.7Hz,3H),2.07–1.89(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.27：(S)-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸4-硝基苯酯(化合物1.27)
根据一般程序4的步骤1从化合物1.2(24mg)开始制备标题PNP-氨基甲酸酯中间体化合物。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用12g柱C18柱，用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(14mg，53％产率)。
LC/MS：C29H23FN4O8S的计算值m/z＝574.2，实测值[M+H]+＝575.2
1.28：(S)-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-甲脲(化合物132)
根据一般程序4，使用化合物1.2(25mg)和作为伯胺的甲胺水溶液(500uL，40重量％于水中)制备标题化合物。在这种情况下，使用粗制的中间体PNP-氨基甲酸酯。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(8.9mg，31％产率)。
LC/MS：C24H23FN4O5的计算值m/z＝466.2，实测值[M+H]+＝467.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.26(d,J＝8.2Hz,1H),7.79(d,J＝10.7Hz,1H),7.66(s,1H),5.61(d,J＝16.3Hz,1H),5.48(s,2H),5.41(d,J＝16.4Hz,1H),4.97(s,2H),2.73(s,3H),2.57(s,3H),2.08–1.93(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.29：(S)-1-(4-氨基苄基)-3-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)脲(化合物134)
根据一般程序4的步骤2，使用化合物1.27(4mg)作为PNP-氨基甲酸酯和4-(氨基甲基)苯胺作为伯胺制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用12％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(0.6mg，12％产率)。
LC/MS：C30H28FN5O5的计算值m/z＝557.2，实测值[M+H]+＝558.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.25(d,J＝8.1Hz,1H),7.80(d,J＝10.8Hz,1H),7.67(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.24(d,J＝8.3Hz,2H),5.63(d,J＝16.4Hz,1H),5.48(s,2H),5.43(d,J＝16.4Hz,1H),5.01(s,2H),4.37(s,2H),2.56(d,J＝1.7Hz,3H),2.05–1.94(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
1.30：(S)-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-(2-羟乙基)脲(化合物136)
根据一般程序4的步骤1，使用化合物1.27(4mg)作为PNP-氨基甲酸酯和羟基乙胺作为伯胺制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(2.4mg，66％产率)。
LC/MS：C25H25FN4O6的计算值m/z＝496.2，实测值[M+H]+＝497.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.08(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(d,J＝10.5Hz,1H),7.68(s,1H),5.64(d,J＝16.4Hz,1H),5.41(s,2H),5.31(d,J＝16.4Hz,1H),4.96(s,2H),3.63(t,J＝5.2Hz,2H),3.29(t,J＝5.3Hz,2H),2.54(s,3H),1.98–1.87(m,2H),1.01(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.31：(S)-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸甲酯(化合物138)
根据一般程序5，从化合物1.2(50mg)开始并使甲醇与中间体PNP-氨基甲酸酯反应来制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(3.5mg，6％产率)。
LC/MS：C24H22FN3O6的计算值m/z＝467.2，实测值[M+H]+＝468.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.17(d,J＝8.2Hz,1H),7.77(d,J＝10.5Hz,1H),7.69(s,1H),5.65(d,J＝16.5Hz,1H),5.48(s,2H),5.33(d,J＝16.4Hz,1H),4.86(d,J＝5.6Hz,2H),3.65(s,3H),2.56(s,3H),2.02–1.89(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H)。
1.32：(S)-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸2-羟基乙酯(化合物139)
根据一般程序5，从化合物1.2(18mg)开始并使1,22-乙二醇与中间体PNP-氨基甲酸酯反应来制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(4.2mg，19％产率)。
LC/MS：C25H24FN3O7的计算值m/z＝497.2，实测值[M+H]+＝498.2。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.23(d,J＝8.2Hz,1H),7.78(d,J＝10.7Hz,1H),7.40(s,1H),5.47(d,J＝16.5Hz,1H),5.42(s,2H),5.34(d,J＝16.4Hz,1H),4.77(s,2H),3.99(t,J＝4.9Hz,2H),3.64–3.38(m,2H),2.48(s,3H),2.02–1.67(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例2：制备在C10位具有甲氧基的喜树碱类似物
2.1：1-(2-氨基-4-氟-5-甲氧基苯基)-2-氯乙烷-1-酮(化合物2.1)
将3-氟-4-甲氧基苯胺(10g，71mmol)在DCM中的溶液(100mL)冷却至0℃。首先向该溶液中添加1M BCl3在DCM中的溶液(71mL，71mmol)，然后添加1M氯(二乙基)铝烷的DCM溶液(71mL，71mmol)，最后添加2-氯乙腈(6.4g，85mmol)。将溶液加热回流3小时，冷却至室温并通过添加2M HCl水溶液进行淬灭。将所得异质混合物加热回流1小时，冷却至室温，然后用Na2CO3将pH调节至约12。分离各层，并用DCM(3×100mL)萃取水层。将合并的有机层经Na2SO4干燥，浓缩并如一般程序9中所述用0％至20％EtOAc/己烷洗脱来进行快速纯化，得到标题化合物(6g，28mmol，39％产率)。
LC/MS：C9H9ClFNO2的计算值m/z＝217.1，实测值[M+H]+＝218.1。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.19(d,J＝9.2Hz,1H),6.44(d,J＝12.8Hz,1H),4.59(s,2H),3.86(s,3H)
2.2：(S)-11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物2.2)
向化合物2.1(1.65g，7.6mmol)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(2g，7.6mmol)在甲苯中的溶液(200mL)中添加甲苯-4-磺酸(157mg，0.9mmol)。将该溶液在140℃下加热3小时，然后冷却至室温。通过过滤收集为黄色沉淀的产物，得到标题化合物(1.27g，2.85mmol，37.5％产率)。
LC/MS：C22H18ClFN2O5的计算值m/z＝445.2，实测值[M+H]+＝445.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.99(d,J＝12.0Hz,1H)7.80(d,J＝9.2Hz,1H)7.27(s,1H),6.50(s,1H),5.45(s,2H),5.41(s,2H),5.33(s,2H)4.08(s,3H),1.87-1.83(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)
2.3：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-11-(吗啉代甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物101)
根据一般程序1从化合物2.2(10mg)和吗啉开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用41％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(5.6mg，41％产率)。
LC/MS：C26H26FN3O6的计算值m/z＝495.2，实测值[M+H]+＝496.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.84–7.70(m,2H),7.59(s,1H),5.62(d,J＝16.3Hz,1H),5.45–5.36(m,3H),4.29(s,2H),4.12(s,3H),3.58–3.48(m,2H),3.28–3.09(m,2H),2.75–2.61(m,2H),2.05–1.91(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H)。
2.4：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-11-((4-(苯基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物103)
根据一般程序1从化合物2.2(10mg)和1-(苯磺酰基)哌嗪开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(2.5mg，14％产率)。
LC/MS：C32H31FN4O7S的计算值m/z＝634.2，实测值[M+H]+＝635.4。
2.5：(S)-11-((4-((4-氨基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物105)
根据一般程序1从化合物2.2(10mg)和4-(哌嗪-1-基磺酰基)苯胺开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(4.0mg，23％产率)。
LC/MS：C32H32FN5O7S的计算值m/z＝649.2，实测值[M+H]+＝650.4。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.08(s,2H),7.90–7.67(m,2H),7.35(s,1H),7.32–7.26(m,2H),6.67–6.57(m,2H),5.46(d,J＝16.5Hz,1H),5.33–5.22(m,3H),3.92(s,3H),3.02–2.72(m,4H),2.75–2.58(m,4H),1.97–1.70(m,2H),0.90(t,J＝7.3Hz,3H)。
2.6：(S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-11-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物107)
根据一般程序1从化合物2.2(10mg)和N-甲基哌嗪开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(2.1mg，19％产率)。
LC/MS：C27H29FN4O5的计算值m/z＝508.2，实测值[M+H]+＝509.4。
2.7：(S)-11-((4-(4-氨基苯基)哌嗪-1-基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物109)
根据一般程序1从化合物2.2(10mg)和4-(哌嗪-1-基)苯胺开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(3.2mg，20％产率)。
LC/MS：C32H32FN5O5的计算值m/z＝585.2，实测值[M+H]+＝586.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.83–7.74(m,2H),7.62(s,1H),7.06(d,J＝8.9Hz,2H),6.98(d,J＝8.9Hz,2H),5.65(d,J＝16.4Hz,1H),5.36(s,2H),5.27(d,J＝16.4Hz,1H),4.13(s,2H),4.06(s,3H),3.26(br s,4H),2.79(br s,4H),1.97–1.83(m,2H),1.00(t,J＝7.4Hz,3H)。
2.8：(S)-11-(氨基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物2.8)
向化合物2.2(250mg，0.56mmol)在乙醇(7mL)中的溶液中添加六亚甲基四胺(236mg，1.7mmol)，然后添加iPr2Net(100uL，0.56mmol)。将该溶液加热回流5小时，冷却至室温并用12M HCl水溶液(60uL)淬灭。将该溶液浓缩至约1/2体积，并添加1M HCl水溶液(1.5mL)，搅拌5分钟，然后浓缩，得到棕色残余物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到浅黄色固体状的标题化合物(179mg，75％产率)。
LC/MS：C22H20FN3O5的计算值m/z＝425.4，实测值[M+H]+＝426.2
2.9：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)甲磺酰胺(化合物123)
根据一般程序3从化合物2.8(10mg)和甲磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用5％至65％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(8.5mg，91％产率)。
LC/MS：C23H22FN3O7S的计算值m/z＝503.1，实测值[M+H]+＝504.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.98(d,J＝12.1Hz,1H),7.89(t,J＝6.4Hz,1H),7.80(d,J＝9.1Hz,1H),7.28(s,1H),5.42(s,2H),5.39(s,2H),4.77(d,J＝6.4Hz,2H),4.06(s,3H),3.06(s,3H),1.95-1.73(m,2H),0.88(d,J＝7.3Hz,3H)。
2.10：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)苯磺酰胺(化合物126)
根据一般程序3从化合物2.8(7.5mg)和苯磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用5％至70％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(4.6mg，46％产率)。
LC/MS：C28H24FN3O7S的计算值m/z＝565.6，实测值[M+H]+＝566.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.59(t,J＝6.3Hz,1H),7.94(d,J＝12.2Hz,1H),7.82–7.68(m,2H),7.62–7.46(m,1H),7.51–7.40(m,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),6.52(s,1H),5.44(s,1H),5.36(s,1H),4.64(d,J＝6.3Hz,1H),4.09(s,2H),1.95–1.81(m,1H),0.89(t,J＝7.3Hz,2H)。
2.11：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-4-硝基苯磺酰胺(化合物2.11)
根据一般程序3从化合物2.8(12mg)和4-硝基苯磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至75％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到浅黄色固体状的标题化合物(9.7mg，71％产率)。
LC/MS：C28H23FN4O9S的计算值m/z＝610.6，实测值[M+H]+＝611.5。
2.12：(S)-4-氨基-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)苯磺酰胺(化合物128)
向化合物2.11(9.7mg，0.016mmol)在甲醇中的溶液(1.6mL)中添加铂1％钒2％/碳(15mg)。将烧瓶用H2吹扫，然后在室温下在H2气氛下搅拌45分钟。将混合物通过硅藻土垫过滤，用DMF洗涤，然后将滤液蒸发，得到浅黄色固体状的标题化合物(1.5mg，16％产率)。
LC/MS：C28H25FN4O7S的计算值m/z＝580.6，实测值[M+H]+＝581.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.77(d,J＝11.0Hz,1H),7.58(s,1H),7.48(d,J＝8.6Hz,1H),6.61(d,J＝8.6Hz,1H),5.59(d,J＝16.3Hz,1H),5.39(d,J＝16.4Hz,1H),5.30(s,1H),4.56(s,1H),4.10(d,J＝3.7Hz,3H),2.04–1.91(m,2H),1.31(s,1H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H),0.90(s,1H)。
2.13：(S)-N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物130)
根据一般程序3从化合物2.8(8mg)和2-羟基乙烷磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用15％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(2.2mg，22％产率)。
LC/MS：C24H24FN3O8S的计算值m/z＝533.1，实测值[M+H]+＝534.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.99(d,J＝12.2Hz,1H),7.89-7.79(m,2H),7.29(s,1H),5.43(s,2H),5.40(s,2H),4.76(d,J＝6.4Hz,2H),4.06(s,3H),3.81(t,J＝6.3Hz,2H),3.34(t,J＝6.3Hz,2H),1.94-1.75(m,2H),0.87(d,J＝7.4Hz,3H)。
2.14：(S)-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸4-硝基苯酯(化合物2.14)
根据一般程序4的步骤1，从化合物2.8(65mg)开始并使用二甲基甲酰胺和二氯甲烷的1:1混合物作为溶剂制备标题PNP-氨基甲酸酯中间体化合物。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用12g C12柱，用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(61mg，86％产率)。将该中间体分开并用于生成以下化合物。
LC/MS：C29H23FN4O9的计算值m/z＝590.1，实测值[M+H]+＝591.2。
2.15：(S)-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-甲脲(化合物133)
根据一般程序4的步骤2，使用化合物2.14(15mg)作为PNP-氨基甲酸酯和含水甲胺(500uL，40重量％于水中)作为伯胺来制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(5.8mg，47％产率)。
LC/MS：C24H23FN4O6的计算值m/z＝482.2，实测值[M+H]+＝483.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.00–7.87(m,2H),7.31(s,1H),5.48–5.39(m,3H),4.81(s,3H),2.56(s,3H),1.93–1.81(m,2H),0.89(t,J＝7.3Hz,3H)。
2.16：(S)-1-(4-氨基苄基)-3-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)脲(化合物135)
根据一般程序4的步骤2，使用化合物2.14(15mg)作为PNP-氨基甲酸酯和4-(氨基甲基)苯胺作为伯胺制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到呈灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，2.1mg，12％产率)。
LC/MS：C30H28FN5O6的计算值m/z＝573.2，实测值[M+H]+＝574.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.79(d,J＝11.9Hz,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,1H),7.59(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.25(d,J＝8.2Hz,2H),5.61(d,J＝16.3Hz,1H),5.52–5.35(m,3H),4.98(s,2H),4.39(s,2H),4.01(s,3H),2.03–1.93(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
2.17：(S)-1-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲氧基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-(2-羟乙基)脲(化合物137)
根据一般程序4的步骤2，使用化合物2.14(15mg)作为PNP-氨基甲酸酯和羟基乙胺作为伯胺制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用12％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(1.5mg，12％产率)。
LC/MS：C25H25FN4O7的计算值m/z＝512.2，实测值[M+H]+＝513.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.93(d,J＝12.1Hz,1H),7.88(d,J＝9.2Hz,1H),7.56(s,1H),5.62(d,J＝16.2Hz,1H),5.52(s,2H),5.45(d,J＝16.3Hz,1H),4.98(s,2H),4.17(s,3H),3.59(t,J＝5.6Hz,2H),3.28(t,J＝5.6Hz,2H),2.10–1.91(m,2H),1.05(t,J＝7.3Hz,3H)。
实施例3：制备在C10位具有氨基的喜树碱类似物
3.1：5-溴-4-氟-2-硝基苯甲醛(化合物3.1)
在0℃下向HNO3(121.2mL，67％纯度，2.0当量)在H2SO4中的搅拌溶液(500mL)中添加3-溴-4-氟苯甲醛(180g，1.0当量)。添加完成后，移除冰浴，并将反应物在25℃下搅拌5小时。将混合物倒入冰(5L)中，过滤，然后真空干燥。获得黄色固体状的标题化合物(219g)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.39(s,1H),8.23(d,J＝6.8Hz,1H),7.91(d,J＝7.6Hz,1H)。
3.2：(2-氟-5-甲酰基-4-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.2)
将化合物3.1(219g，1.0当量)、氨基甲酸叔丁酯(124g，1.20当量)、Cs2CO3(575g，2.0当量)、Pd2(dba)3(40g，0.05当量)和XPhos(84g，0.2当量)在甲苯(2000mL)中的混合物脱气并用N2吹扫三个循环。然后将混合物在90℃下和N2气氛下搅拌15小时。将反应混合物用H2O(800mL)稀释并用EtOAc(300mL×2)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL×2)洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝100:1至20:1)纯化，得到黄色固体状的标题化合物(140g，56％产率)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.24(s,1H),9.94(s,1H),8.42(d,J＝7.6Hz,1H),8.16(d,J＝10.8Hz,1H),1.50(s,9H)
3.3：(4-氨基-2-氟-5-甲酰基苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.3)
向化合物3.2(100g，1.0当量)在H2O(300mL)和EtOH(1200mL)中的溶液中添加NH4Cl(30.5g，1.62当量)。在80℃下分批添加铁(78.6g，4.0当量)。将混合物在80℃下搅拌6小时。过滤混合物，向滤液中添加水，并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并在真空下浓缩。将残余物通过柱色谱法(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝1:0至0:1)、TLC(石油醚)纯化，得到黄色固体状的标题化合物(19.0g，21％产率)。
LC/MS：C12H15FN2O3的计算值m/z＝254.1，实测值[M+H]+＝255.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.73(s,1H),8.57(s,1H),7.58(d,J＝4.8Hz,1H),7.21(s,2H),6.53(d,J＝12.8Hz,1H),1.43(s,9H)。
3.4：(S)-(4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.4)
在110℃下将化合物3.3(4.20g，1.2当量)、(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(3.5g，1当量)和TsOH(一水合物，253mg，0.1当量)在甲苯(350mL)中的混合物搅拌2小时。将反应溶液冷却至25℃并过滤。将固体用甲基叔丁基醚(30mL)洗涤，然后真空干燥。获得黄色固体状的标题化合物(4.5g，62％产率)。
LC/MS：C25H24FN3O6的计算值m/z＝481.2，实测值[M+H]+＝482.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.49(s,1H),8.65(s,1H),8.43(d,J＝8.4Hz,1H),7.95(d,J＝12.0Hz,1H),7.30(s,1H),6.51(s,1H),5.42(s,2H),5.25(s,2H),1.80-1.92(m,2H),1.52(s,9H),0.88(t,J＝7.2Hz,3H)
3.5：(S)-(4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.5)
向化合物3.4(4.00g)在MeOH(360mL)中的混合物中添加FeSO4(七水合物，1.2g)、H2SO4(280μL)在H2O(4mL)中的溶液。将反应混合物在65℃下加热，同时在30分钟内逐滴添加H2O2(24mL，30％纯度)，然后搅拌0.5小时。将反应溶液冷却至25℃，然后过滤，得到黄色固体状的标题化合物(1.53g，33.2％产率)。向滤液中添加H2O(400mL)，然后用饱和Na2S2O3水溶液淬灭。用饱和Na2CO3水溶液将pH调节至7至8，然后将溶液浓缩并过滤。在55℃下用MeOH(30mL)研磨固体1小时，然后过滤，得到第二批棕色固体状的标题化合物(1.09g，26％产率)。
LC/MS：C26H26FN3O7的计算值m/z＝511.2，实测值[M+H]+＝512.2。
1H NMR(300MHz,d6-DMSO)δ9.47(s,1H),8.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(d,J＝12.0Hz,1H),7.29(d,J＝1.6Hz,1H),6.49(s,1H),5.86-5.76(m,1H),5.42(s,2H),5.38(s,2H),5.16(d,J＝4.4Hz,2H),1.90-1.83(m,2H),1.52(s,9H),0.88(t,J＝6.4Hz,3H)。
3.6：(S)-(4-乙基-8-氟-11-甲酰基-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.6)
在容纳有化合物3.5(150mg，0.293mmol)的50mL圆底烧瓶中添加DCM(2.9mL)，随后添加戴斯-马丁高碘烷(0.56g，1.32mmol)和水(15.8μL，0.88mmol)。将该溶液在室温下搅拌18小时，然后用DCM稀释，用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤。分离各层，并将合并的有机层蒸发到硅藻土上。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用10g硅胶柱，用0％至10％DCM/MeOH洗脱，得到橙色粉末状的标题产物(42.5mg，28％)。
LC/MS：C26H24FN3O7的计算值m/z＝509.2，实测值[M+H]+＝510.4。
1H NMR(300MHz,丙酮-d6)δ11.10(s,1H),9.68(d,J＝8.6Hz,1H),8.81(s,1H),8.04(d,J＝11.9Hz,1H),7.63(s,1H),5.73(s,2H),5.69(d,J＝16.2Hz,1H),5.42(d,J＝16.2Hz,1H),2.02-1.95(m,2H),8.47(d,J＝7.6Hz,1H),7.94(d,J＝12.0Hz,1H),7.29(d,J＝1.6Hz,1H),6.49(s,1H),5.86-5.76(m,1H),5.42(s,2H),5.38(s,2H),5.16(d,J＝4.4Hz,2H),1.90-1.83(m,2H),1.52(s,9H),0.88(t,J＝6.4Hz,3H)。
3.7：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物140)
根据一般程序6从化合物3.4(40mg)开始制备标题化合物，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，36mg，87％产率)。
LC/MS：C20H16FN3O4的计算值m/z＝381.1，实测值[M+H]+＝382.2。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.28(s,1H),7.72(d,J＝12.5Hz,1H),7.21(d,J＝7.3Hz,1H),5.43(d,J＝16.2Hz,1H),5.34(d,J＝16.2Hz,1H),5.17(s,2H),1.92–1.74(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.8：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物141)
根据一般程序6从化合物3.5(5mg)开始制备标题化合物，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，4.1mg，78％产率)。
LC/MS：C21H18FN3O5的计算值m/z＝411.2，实测值[M+H]+＝412.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.71(d,J＝12.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.29(d,J＝9.5Hz,1H),5.61(d,J＝16.3Hz,1H),5.47(s,2H),5.40(d,J＝16.3Hz,1H),5.25(s,2H),2.03–1.94(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.9：(S)-(11-(氯甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.9)
向化合物3.5(100mg)在二氯甲烷(5mL)中的搅拌溶液中添加亚硫酰氯(14uL)在二氯甲烷(0.1mL)中的溶液。1小时后，再添加亚硫酰氯(14uL)的二氯甲烷(0.1mL)溶液。再过1小时后，将反应物用二氯甲烷(10mL)和甲苯(1mL)稀释，然后真空浓缩，得到红色固体状的标题化合物，其不经进一步纯化即用于后续反应。
LC/MS：C26H25ClFN3O6的计算值m/z＝529.1，实测值[M+H]+＝530.2。
3.10：(S)-(11-(氨基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.10)
向化合物3.9(100mg)的乙醇(500uL)溶液中添加六亚甲基四胺(79mg)，然后添加DIPEA(99uL)。将该溶液在60℃下加热16小时，然后真空浓缩至干。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用12g C18柱，用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，29mg，24％产率)。
LC/MS：C26H27FN4O6的计算值m/z＝510.2，实测值[M+H]+＝511.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.88(d,J＝8.2Hz,1H),7.96(d,J＝11.9Hz,1H),7.62(s,1H),5.60(d,J＝16.4Hz,1H),5.48(s,2H),5.41(d,J＝16.4Hz,1H),4.80(s,2H),2.07–1.89(m,2H),1.64(s,9H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.11：(S)-9-氨基-11-(氨基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物145)
根据一般程序6从化合物3.10(2.1mg)开始制备标题化合物，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，1.8mg，100％产率)。
LC/MS：C21H19FN4O4的计算值m/z＝410.1，实测值[M+H]+＝411.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.82(d,J＝12.1Hz,1H),7.60(s,1H),7.37(d,J＝9.1Hz,1H),5.61(d,J＝16.3Hz,1H),5.42(s,2H),5.41(d,J＝16.3Hz,1H),4.69(s,2H),2.08–1.94(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例3.12：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(吗啉代甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物3.12)
根据一般程序1从化合物3.9(150mg)和吗啉开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，103mg，52％产率)。
LC/MS：C30H33FN4O7的计算值m/z＝580.2，实测值[M+H]+＝581.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ9.06(d,J＝8.3Hz,1H),7.93(d,J＝12.0Hz,1H),7.66(s,1H),5.63(d,J＝16.3Hz,1H),5.51(s,2H),5.43(d,J＝16.4Hz,1H),4.92(s,2H),3.84(s,4H),3.10(s,4H),1.99(d,J＝5.5Hz,2H),1.63(s,9H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.13：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(吗啉代甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物142)
根据一般程序6从化合物3.12(45mg)开始制备标题化合物，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，37mg，99％产率)。
LC/MS：C25H25FN4O5的计算值m/z＝480.2，实测值[M+H]+＝481.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.73(d,J＝12.0Hz,1H),7.54(s,1H),7.48(d,J＝9.2Hz,1H),5.60(d,J＝16.3Hz,1H),5.47–5.34(m,3H),4.65(s,2H),3.91–3.85(m,4H),3.30–3.24(m,4H),2.08–1.91(m,2H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.14：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(哌啶-1-基甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物148)
向容纳有化合物3.6(37mg，0.067mmol)的5mL烧瓶中添加二氯甲烷(1.45mL)，随后添加乙酸(18.69μL，0.327mmol)、哌啶(21.52μL，0.218mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(23.0mg，0.109mmol)。然后将该溶液在室温下搅拌2小时，通过添加水+0.1％TFA和DMF(1:1，1.0mL)淬灭，并部分蒸发。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到Boc保护的中间体，其为黄色粉末。然后根据一般程序6将该中间体脱保护，得到黄色固体状的标题化合物(TFA盐，32.5mg，98％产率)。
LC/MS：C26H27FN4O4的计算值m/z＝478.2，实测值[M+H]+＝479.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.78(d,J＝12.1Hz,1H),7.56(s,1H),7.41(d,J＝9.1Hz,1H),5.60(d,J＝16.4Hz,1H),5.47–5.35(m,3H),4.86(s,2H),3.80–3.68(m,2H),3.28–3.19(m,2H),2.02–1.68(m,8H),1.01(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.15：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物149)
向容纳有化合物3.6(15mg，0.029mmol)的2mL小瓶中添加二氯甲烷(0.59mL)、乙酸(7.58μL，0.132mmol)和N-甲基哌嗪(4.90μL，0.044mmol)。将该溶液在室温下搅拌4小时，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(7.8mg，0.037mmol)并再搅拌45分钟。通过添加0.1％TFA水溶液(0.5mL)淬灭过量的氢化物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到Boc保护的中间体，其为黄色粉末。然后根据一般程序6将该中间体脱保护，得到黄色固体状的标题产物(TFA盐，1.5mg，7.1％产率)。
LC/MS：C26H28FN5O4的计算值m/z＝493.2，实测值[M+H]+＝494.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.68(d,J＝12.2Hz,1H),7.56(s,1H),7.53(d,J＝9.5Hz,1H),5.60(d,J＝16.3Hz,1H),5.45-5.30(m,3H),4.15(s,2H),3.55–3.44(m,2H),3.18–3.07(m,2H),2.93(s,3H),2.70–2.51(m,2H),2.03–1.89(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.16：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((4-(苯基磺酰基)哌嗪-1-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物153)
根据一般程序1，从化合物3.9(10mg)和1-(苯磺酰基)哌嗪开始制备标题化合物的Boc保护的前体。如一般程序9中所述完成制备型HPLC，用35％至44％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的Boc保护的中间体。然后根据一般程序6将该中间体脱保护，得到标题化合物(TFA盐，2.4mg，17％产率，经2个步骤)。
LC/MS：C31H30FN5O6S的计算值m/z＝619.2，实测值[M+H]+＝520.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.81-7.60(m,7H),7.34(s,1H),5.51(d,J＝16.4Hz,1H),5.35(d,J＝16.4Hz,1H),5.22(s,2H),4.10(s,2H),3.15-3.02(m,4H),2.79-2.71(m,4H),2.00-1.93(m,2H),1.00(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.17：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)乙酰胺(化合物147)
根据一般程序2，接着根据一般程序6，从化合物3.10(8mg)和乙酸开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得红色固体状的标题化合物(4.0mg，56％产率)。
LC/MS：C23H21FN4O5的计算值m/z＝452.2，实测值[M+H]+＝453.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.69(d,J＝12.1Hz,1H),7.56(s,1H),7.38(d,J＝9.3Hz,1H),5.59(d,J＝16.3Hz,1H),5.44–5.33(m,3H),4.85(s,3H),2.03(s,3H),2.00–1.84(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.18：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)甲磺酰胺(化合物146)
根据一般程序3，接着根据一般程序6，从化合物3.10(8mg)和甲磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得红色固体状的标题化合物(4.4mg，57％产率)。
LC/MS：C22H21FN4O6S的计算值m/z＝488.1，实测值[M+H]+＝489.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.74(d,J＝12.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.49(d,J＝9.3Hz,1H),5.61(d,J＝16.2Hz,1H),5.45(s,2H),5.40(d,J＝16.2Hz,1H),4.78(s,2H),3.05(s,3H),2.08–1.94(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.19：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基乙烷-1-磺酰胺(化合物150)
根据一般程序3，接着根据一般程序6，从化合物3.10(6mg)和2-羟基乙磺酰氯开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得红色固体状的标题化合物(1mg，16％产率)。
LC/MS：C23H23FN4O7S的计算值m/z＝518.5，实测值[M+H]+＝519.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ7.77–7.61(m,1H),7.48–7.30(m,2H),5.53(d,J＝16.3Hz,1H),5.31(d,J＝15.4Hz,3H),4.69(s,2H),3.97(dd,J＝6.6,4.9Hz,2H),3.39(t,J＝5.8Hz,2H),2.93(s,1H),1.99-1.83(m,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.20：(S)-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸4-硝基苯酯(化合物3.20)
向化合物3.10(10mg，0.02mmol)在DMF(400uL，0.05M)中的溶液中添加4-硝基苯基碳酸酯(12mg，0.04mmol)和二异丙基乙胺(6.8uL，0.04mmol)。将该溶液在室温下搅拌约30分钟，然后直接用于随后的反应。
3.21：(S)-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸甲酯(化合物143)
通过将MeOH(100uL)添加到200ul化合物3.20的溶液中来制备标题化合物。将该溶液在室温下搅拌30分钟。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。根据一般程序6获得红色固体状的标题化合物(2.1mg，47％产率)。
LC/MS：C23H21FN4O6的计算值m/z＝468.4，实测值[M+H]+＝468.3。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ7.72(d,J＝12.2Hz,1H),7.41(d,J＝18.1Hz,1H),6.96(s,1H),5.52(d,J＝3.6Hz,1H),5.39–5.23(m,3H),4.82(s,1H),4.73(s,1H),3.63(d,J＝1.2Hz,3H),1.56(s,3H),1.27(s,2H),0.94(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.22：(S)-1-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-甲脲(化合物144)
通过向200ul化合物3.20的溶液中添加甲胺盐酸盐(10mg)，随后添加iPr2Net(5uL)来制备标题化合物。将该溶液在室温下搅拌30分钟。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。根据一般程序6获得红色固体状的标题化合物(2.9mg，64.5％产率)。
LC/MS：C23H21FN5O5的计算值m/z＝467.5，实测值[M+H]+＝468.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.13(d,J＝9.2Hz,1H),7.92(s,1H),7.73(d,J＝12.3Hz,1H),7.52–7.35(m,2H),6.94(d,J＝9.2Hz,2H),5.55(d,J＝16.5Hz,2H),5.44–5.27(m,4H),4.85(s,2H),4.78(s,1H),1.56(d,J＝2.5Hz,3H),1.27(s,2H),0.93(q,J＝11.7,9.5Hz,3H)。
3.23：(S)-1-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-(2-羟乙基)脲(化合物151)
通过将乙醇胺(100uL)添加到200ul化合物3.20的溶液中来制备标题化合物。将该溶液在室温下搅拌30分钟。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。根据一般程序6获得红色固体状的标题化合物(0.5mg，8.5％产率)。
LC/MS：C24H24FN5O6的计算值m/z＝497.5，实测值[M+H]+＝498.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ7.77–7.61(m,1H),7.48–7.30(m,2H),5.53(d,J＝16.3Hz,1H),5.31(d,J＝15.4Hz,1H),5.19(s,2H),4.69(s,2H),3.97(dd,J＝6.6,4.9Hz,2H),3.39(t,J＝5.8Hz,2H),2.93(s,1H),2.01-1.83(m,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.24：(S)-9-氨基-11-(叠氮基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物152)
向化合物3.5(100mg)在2mL二氯甲烷中的搅拌溶液中添加亚硫酰氯(35μL，2.5当量)。将溶液在室温下搅拌20分钟，然后再添加亚硫酰氯(35μL，2.5当量)。20分钟后，添加甲苯(1mL)，然后真空浓缩反应混合物。将粗固体悬浮于DMSO(1mL)中并添加叠氮化钠(19mg，1.5当量)。将该溶液在室温下搅拌16小时。如一般程序9中所述完成纯化，其中用5％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(20mg，23％产率)。
LC/MS：C21H17FN6O4的计算值m/z＝436.1，实测值[M+H]+＝437.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.75(d,J＝12.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.38(d,J＝9.3Hz,1H),5.61(d,J＝16.3Hz,1H),5.46–5.35(m,3H),5.07(s,2H),2.03–1.97(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.25：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)乙酰胺(化合物164)
根据一般程序2从化合物145(10mg)和乙醇酸开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得黄色固体状的标题化合物(6.9mg，60％产率)。
LC/MS：C23H21FN4O6的计算值m/z＝468.1，实测值[M+H]+＝469.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)7.70(d,J＝12.2Hz,1H),7.60(s,1H),7.42(d,J＝9.4Hz,1H),5.62(d,J＝16.3Hz,1H),5.43(s,2H),5.36(d,J＝16.2Hz,1H),4.95(d,J＝5.9Hz,2H),4.08(s,2H),2.04–1.90(m,1H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.26：(S)-1-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-甲基硫脲(化合物161)
向化合物145(9mg，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加硫代羰基二咪唑(6mg，1.5当量)，然后添加DIPEA(8μL，2.0当量)。将所得溶液在25℃下搅拌2小时，之后观察到完全转化成异硫氰酸酯中间体。然后添加甲基氯化铵(3mg，2.0当量)并将反应混合物在60℃下加热30分钟。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得黄色固体状的标题化合物(2.3mg，22％产率)。
LC/MS：C23H22FN5O4S的计算值m/z＝483.1，实测值[M+H]+＝484.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.70(d,J＝12.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.38(d,J＝9.3Hz,1H),5.62(d,J＝16.2Hz,1H),5.36(s,2H),5.31(d,J＝16.2Hz,1H),5.30(s,2H),3.04(s,3H),1.99–1.90(m,2H),1.02(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.27：(S)-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)硫代氨基甲酸S-(2-羟基乙基)酯(化合物160)
根据一般程序5从化合物145(10mg)和2-巯基乙醇开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。获得黄色固体状的标题化合物(4.2mg，43％产率)。
LC/MS：C24H23FN4O6S的计算值m/z＝514.1，实测值[M+H]+＝515.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.71(d,J＝12.1Hz,1H),7.60(s,1H),7.36(d,J＝9.4Hz,1H),5.62(d,J＝16.3Hz,1H),5.42(s,2H),5.35(d,J＝16.2Hz,1H),4.88(d,J＝4.6Hz,2H),3.68(t,J＝6.4Hz,2H),3.03(t,J＝6.5Hz,2H),2.04–1.92(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.28：(S)-9-氨基-4,11-二乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物154)
向容纳有化合物140(50mg)的5mL烧瓶中添加水(0.72mL)、FeSO4(七水合物，11.0mg)和丙醛(74μL)。使用冰盐水浴将所得悬浮液冷却至-15℃，然后滴加硫酸(0.40mL)。然后滴加过氧化氢(95μL)。将该混合物在-15℃下搅拌10分钟，然后升温至室温并搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)稀释并将所得悬浮液用DCM(3×30mL)萃取。然后将有机相蒸发至干。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至70％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到深橙色固体状的标题化合物(2.4mg，4.4％产率)。
LC/MS：C22H20FN3O4的计算值m/z＝410.1，实测值[M+H]+＝410.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ7.63(d,J＝12.3Hz,1H),7.55(s,1H),7.36(d,J＝9.4Hz,1H),5.57(d,J＝16.4Hz,1H),5.37(d,J＝16.4Hz,1H),5.21(s,2H),3.13(q,J＝7.7Hz,2H),2.02–1.90(m,2H),1.38(t,J＝7.7Hz,3H),1.01(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.29：(S)-(11-((氨基甲酰氧基)甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.29)
在-20℃下，在容纳有氯磺酰异氰酸酯(7.7μL)在二甲基甲酰胺(0.29mL)中的溶液的5mL锥形烧瓶中添加化合物3.5(15mg)。将所得悬浮液在-20℃下搅拌5分钟。添加水(59μL)，并使反应混合物温热至室温并搅拌2小时，然后在70℃下加热1小时。使反应混合物冷却至室温并部分蒸发。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用40％至55％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到深橙色固体状的标题化合物(5.1mg，31％产率)。
LC/MS：C27H27FN4O8的计算值m/z＝555.2，实测值[M+H]+＝555.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),8.56(d,J＝8.5Hz,1H),8.00(d,J＝12.0Hz,1H),7.31(s,1H),7.11-6.62(m,2H),6.52(s,1H),5.58(s,2H),5.49-5.27(m,4H),1.94-1.77(m,2H),1.52(s,9H),1.38(t,J＝7.7Hz,3H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
3.30：(S)-(9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)氨基甲酸甲酯(化合物169)
根据一般程序6从化合物3.29(5.1mg)开始制备标题化合物，得到黄色粉末状的标题化合物(TFA盐，3.8mg，73％产率)。
LC/MS：C22H19FN4O6的计算值m/z＝455.1，实测值[M+H]+＝455.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝12.4Hz,1H),7.29(d,J＝9.7Hz,1H),7.21(s,1H),7.0-6.50(m,2H),5.45(s,2H),5.40(s,2H),5.33(s,2H),1.95-1.77(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.31：((S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(甲氧基甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物155)
在容纳有化合物3.5(30mg)的50mL烧瓶中添加MeOH/二噁烷(1:1)(9.8mL)和硫酸(0.73mL)。然后将反应混合物回流搅拌24小时。将反应混合物浓缩，倒入水(30mL)中，并用DCM(3×50mL)萃取。合并有机相，并经MgSO4干燥。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到深橙色固体状的标题化合物(5.1mg，16％产率)。
LC/MS：C22H20FN3O5的计算值m/z＝426.1，实测值[M+H]+＝426.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,J＝12.3Hz,1H),7.24(d,J＝9.9Hz,1H),7.20(s,1H),6.47(s,1H),6.30-5.92(brs,2H),5.40(s,2H),5.24(s,2H),4.93(s,2H),3.43(s,3H),1.95-1.75(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.32：(4S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(((1R,5S)-6-羟基-3-氮杂双环[3.1.1]庚-3-基)甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物158)
在容纳有化合物3.6(15mg)的5mL锥形瓶中添加二氯甲烷(0.6mL)，然后添加3-氮杂二环[3.1.1]庚-6-醇(10mg)和乙酸(7.6μL)。将反应物在室温下搅拌并添加三乙酰氧基硼氢化钠(9.4mg)。在室温下1小时后，通过添加水+0.1％TFA淬灭反应，并用DMF稀释。然后将反应混合物部分蒸发。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的Boc保护的标题化合物。根据一般程序6进行脱保护，并如一般程序9中所述通过制备型HPLC纯化来纯化所得残余物，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的标题化合物(TFA盐，7.1mg，39％产率)。
LC/MS：C27H27FN4O5的计算值m/z＝507.2，实测值[M+H]+＝507.4。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.85(d,J＝12.1Hz,1H),7.46(d,J＝9.4Hz,1H),7.23(s,1H),6.64-5.85(m,3H),5.60-5.25(m,4H),4.85(s,1H),4.10-3.95(m,1H),3.68(s,2H),2.45-2.33(m,2H),1.96-1.72(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.33：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-11-((3-氟-3-(羟基甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物159)
在容纳有化合物3.6(15mg)的5mL锥形瓶中添加二氯甲烷(0.6mL)，然后添加(3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲醇(9.3mg)和乙酸(7.6μL)。将反应物在室温下搅拌并添加三乙酰氧基硼氢化钠(9.4mg)。在室温下1小时后，通过添加水+0.1％TFA淬灭反应，用DMF稀释，然后部分蒸发。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的Boc保护的标题化合物。然后根据一般程序6进行脱保护。如一般程序9中所述通过制备型HPLC纯化来纯化所得残余物，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的标题化合物(TFA盐，1.8mg，10％产率)。
LC/MS：C25H24F2N4O5的计算值m/z＝499.2，实测值[M+H]+＝499.4。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.82(d,J＝12.4Hz,1H),7.45(d,J＝9.5Hz,1H),7.21(s,1H),5.45-5.33(m,4H),3.75-3.61(m,2H),1.93-1.78(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.34：叔丁基-(S)-(4-乙基-8-氟-4-羟基-11-((甲基氨基)甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基甲酸酯(化合物3.34)
向化合物3.9(210mg)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中添加碘化钠(5.9mg)，随后添加甲基氯化铵(107mg)。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜。如一般程序9中所述完成反相纯化，其中使用30g C18柱，用10％至65％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(15.0mg，7.2％产率)。
LC/MS：C27H29FN4O6的计算值m/z＝524.2，实测值[M+H]+＝525.4。
3.35：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-2-羟基-N-甲基乙酰胺(化合物165)
根据一般程序2，从化合物3.34(6.4mg)和乙醇酸开始制备标题化合物的Boc-保护形式。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。然后根据一般程序6进行脱保护，得到黄色粉末状的标题化合物(TFA盐，2.0mg，28％产率)。
LC/MS：C24H23FN4O6的计算值m/z＝482.2，实测值[M+H]+＝483.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.79(d,J＝12.3Hz,1H),7.27(d,J＝9.5Hz,1H),7.22(s,1H),6.48(s,1H),6.28-6.02(m,2H),5.40(s,2H),5.21(s,2H),5.06-4.93(m,2H),4.18(s,2H),2.80(s,3H),1.92-1.78(m,2H),0.87(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.36：(S)-N-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-N-甲基甲磺酰胺(化合物166)
根据一般程序3，从化合物3.34(8.0mg)和甲磺酰氯开始制备标题化合物的Boc-保护形式。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。然后根据一般程序6进行脱保护，得到黄色粉末状的标题化合物(TFA盐，2.6mg，34％产率)。
LC/MS：C23H23FN4O6S的计算值m/z＝502.1，实测值[M+H]+＝503.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.81(d,J＝12.3Hz,1H),7.41(d,J＝9.4Hz,1H),7.23(s,1H),6.63-5.84(m,2H),5.42(s,2H),5.29(s,2H),4.81-4.64(m,2H),3.14(s,3H),2.67(s,3H),1.96-1.76(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.37：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(2-甲氧基乙基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物170)
向容纳有化合物3.4(62.0mg)的10mL圆底烧瓶中添加水(0.89mL)、FeSO4(七水合物，18.0mg)和3-甲氧基丙醛(113.0mg)。在-15℃下在冰盐浴中搅拌的同时向所得悬浮液中滴加硫酸(0.495mL)。然后滴加过氧化氢(0.118mL)。将混合物在-15℃下搅拌10分钟，然后使其升温至室温并搅拌1小时。然后将反应混合物用水(30mL)稀释并将所得悬浮液用DCM(3×30mL)萃取。将有机相蒸发至干。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到深橙色固体状的标题化合物(TFA盐，3.1mg，4.4％产率)。
LC/MS：C23H22FN3O5的计算值m/z＝440.2，实测值[M+H]+＝440.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.75(d,J＝12.4Hz,1H),7.33(d,J＝9.4Hz,1H),7.20(s,1H),6.60-6.42(m,2H),5.40(s,2H),5.25(s,2H),3.69(t,J＝6.5Hz,2H),3.24(s,3H),3.23(t,J＝6.5Hz,2H),1.96-1.76(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.38：(S)-N-(4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)乙酰胺(化合物171)
向容纳有二甲基甲酰胺(0.69mL)中的乙酸(0.071mL)的25mL圆底烧瓶中添加N-甲基吗啉(0.343mL)、HOAt(0.142g)和HATU(0.435g)。在室温下搅拌5分钟后，将该溶液添加至容纳有化合物140(0.127g)的10mL锥形烧瓶中。将该溶液在室温下搅拌24小时，然后如一般程序9中所述通过制备型HPLC直接纯化，其中用25％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到亮黄色粉末状的标题化合物(43.0mg，38％产率)。
LC/MS：C22H18FN3O5的计算值m/z＝424.1，实测值[M+H]+＝424.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ10.13(s,1H),8.73(d,J＝8.5Hz,1H),8.61(s,1H),7.96(d,J＝912.1Hz,1H),7.29(s,1H),6.60-6.42(m,2H),5.41(s,2H),5.21(s,2H),2.20(s,3H),1.96-1.76(m,2H),0.88(t,J＝7.3Hz,3H)。
3.39：(5-甲酰基-2-甲氧基-4-硝基苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.39)
在0℃下向化合物3.2(1.3g，1.0当量)在MeOH(12mL)中的溶液中添加甲醇钠(0.74g，3.0当量)。添加完成后，除去冰浴并将所得溶液在室温下搅拌72小时。然后将反应用冰水(50mL)淬灭并用DCM(3×100mL)萃取。合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到橙色固体状的标题化合物(1.2g，89％产率)。
LC/MS：C13H16N2O6的计算值m/z＝296.10，实测值[M+H]+＝297.1。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ10.29(s,1H),8.61(s,1H),7.73(s,1H),4.08(s,3H),1.57(s,9H)
3.40：(4-氨基-5-甲酰基-2-甲氧基苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.40)
向化合物3.39(500mg，1当量)在MeOH(10mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加B2(OH)4(454mg，3当量)。将所得混合物冷却至0℃并在搅拌下在10分钟内添加5MNaOH水溶液(2.75mL)。将反应混合物再搅拌5分钟，然后通过将溶液倒入冰(40mL)中来淬灭。将所得混合物用DCM(3×50mL)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用25g硅胶柱并用10％至50％己烷/EtOAc洗脱，得到橙色固体状的标题化合物(386mg，86％)。
LC/MS：C13H18N2O4的计算值m/z＝266.1，实测值[M+H]+＝297.2。
3.41：(S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物168)
在110℃下，将化合物3.40(385mg，1.0当量)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(362mg，0.95当量)、TsOH(一水合物，25mg，0.1当量)和甲苯(30mL)在配备有迪安-斯达克装置的250mL圆底烧瓶中的混合物搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至25℃并真空浓缩。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用25g硅胶柱并用0％至50％DCM/MeOH梯度洗脱，得到红色固体状的Boc保护的中间体。然后根据一般程序6将该材料脱保护，随后如一般程序9中所述进行制备型HPLC纯化，其中用20％至65％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到红色固体状的标题化合物(TFA盐，300mg，53％产率)。
LC/MS：C21H19N3O5的计算值m/z＝393.2，实测值[M+H]+＝393.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.27(s,1H),7.62(s,1H),7.42(s,1H),7.11(s,1H),5.61(d,J＝16.2Hz,1H),5.38(d,J＝16.2Hz,1H),5.24(s,2H),4.11(s,3H),2.06–1.91(m,2H),1.04(t,J＝7.4Hz,3H)。
3.42：5-溴-2-硝基-4-(三氟甲基)苯甲醛(化合物3.42)
在0℃下向HNO3(2.0g，1.4mL，67％纯度，2当量)在H2SO4(8mL)中的搅拌溶液中添加3-溴-4-(三氟甲基)苯甲醛(4g，1当量)。添加完成后，移除冰浴，并将反应物在室温下搅拌5小时。将混合物倒入冰(100mL)中并用DCM(3×100mL)萃取沉淀物。然后将合并的有机级分用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩，得到黄色固体状的标题化合物(4.4g，93％产率)。
LC/MS：C8H3BrF3NO3的计算值m/z＝296.90，实测值[M+H]+＝298.0。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ10.35(s,1H),8.29(s,1H),8.23(s,1H)。
3.43：(5-甲酰基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.43)
将化合物3.42(800mg，1当量)、氨基甲酸叔丁酯(378mg，1.2当量)、Cs2CO3(1.7g，2当量)、Pd2(dba)3(122mg，0.05当量)和二环己基[2',4',6'-三(丙-2-基)[1,1'-联苯]-2-基]磷烷(XPhos)(256mg，0.2当量)在甲苯(5mL)中的混合物脱气并用N2吹扫三个循环。然后将混合物在90℃下和N2气氛下搅拌15小时。将反应混合物用H2O(25mL)稀释并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×25mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，并在减压下浓缩。根据一般程序9完成快速纯化，使用25g硅胶柱并用0％至25％DCM/MeOH洗脱，得到橙色固体状的标题化合物(750mg，84％产率)。
LC/MS：C13H13FN2O5的计算值m/z＝334.1，实测值[M-H]-＝333.1。
3.44：(4-氨基-5-甲酰基-2-(三氟甲基)苯基)氨基甲酸叔丁酯(化合物3.44)
向化合物3.43(750mg，1当量)在MeOH(16mL)和H2O(1.6mL)中的溶液中添加B2(OH)4(603mg，3当量)。将所得混合物冷却至0℃并在搅拌下在10分钟内添加5MNaOH水溶液(2.75mL)。将反应混合物再搅拌5分钟，然后通过将溶液倒入冰(50mL)中来淬灭。将所得混合物用DCM(3×75mL)萃取，经硫酸钠干燥，过滤，并在真空中浓缩。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中使用25g硅胶柱并用10％至50％己烷/EtOAc洗脱，得到橙色固体状的标题化合物(460mg，67％)。
LC/MS：C13H15F3N2O3的计算值m/z＝304.1，实测值[M+H]+＝305.2
3.45：(S)-9-氨基-4-乙基-4-羟基-8-(三氟甲基)-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮(化合物167)
在110℃下，将化合物3.44(460mg，1当量)和(S)-4-乙基-4-羟基-7,8-二氢-1H-吡喃并[3,4-f]吲嗪-3,6,10(4H)-三酮(378mg，0.95当量)、TsOH(一水合物，26mg，0.1当量)和甲苯(35mL)在配备有迪安-斯达克装置的250mL圆底烧瓶中的混合物搅拌2小时。然后将反应混合物冷却至25℃并真空浓缩。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用25g硅胶柱，用0％至50％DCM/MeOH梯度洗脱，得到红色固体状的Boc保护的中间体。然后根据一般程序6将该材料脱保护，随后如一般程序9中所述进行制备型HPLC纯化，其中用20％至65％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(6.2mg，48％)。
LC/MS：C21H16F3N3O4的计算值m/z＝431.1，实测值[M+H]+＝432.2。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.29(s,1H),8.27(s,1H),7.59(s,1H),7.24(s,1H),5.59(d,J＝16.3Hz,1H),5.39(d,J＝16.3Hz,1H),5.28(s,2H),2.00–1.89(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例4：制备药物-接头
4.1：(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰甘氨酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(化合物4.1)
根据中国专利公开号CN105218644中所述的程序制备标题化合物。
4.2：(((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)甘氨酰基甘氨酰基-L-苯丙氨酸(Fmoc-GGF-OH；化合物4.2)
向L-苯丙氨酸(965mg)的乙腈(10mL)和二甲基甲酰胺(0.5mL)溶液中添加DIPEA(1.51mL)，然后添加化合物4.1(1.3g)。1小时后，将反应物浓缩至干。如一般程序9中所述完成快速纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(430mg，30％产率)。
LC/MS：C28H71N3O6S的计算值m/z＝501.2，实测值[M+H]+＝502.4。
1H NMR(300MHz,DMSO)δ8.16(d,J＝8.1Hz,1H),8.04(t,J＝5.8Hz,1H),7.90(d,J＝7.5Hz,2H),7.72(d,J＝7.4Hz,2H),7.59(t,J＝6.0Hz,1H),7.54–7.39(m,2H),7.33(t,J＝7.6Hz,2H),7.28–7.13(m,5H),4.44(td,J＝8.5,5.1Hz,1H),4.33–4.13(m,3H),3.83–3.59(m,4H),3.06(dd,J＝13.7,5.1Hz,1H),2.88(dd,J＝13.8,9.0Hz,1H)。
4.3：3-(2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酸2,3,5,6-四氟苯基酯(MT-OTfp；化合物4.3)
根据国际(PCT)公开号WO 2017/054080中所述的程序制备标题化合物。
4.4：(3-(2-(2-(2-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)丙酰基)甘氨酰基甘氨酰基-L-苯丙氨酸(化合物4.4)
向化合物4.3(1.61g，3.58mmol)在DMF(35mL)中的溶液一次性添加Gly-Gly-Phe(1g，3.58mmol)，然后添加iPr2Net(1.25mL，7.2mmol)。将该溶液在室温下搅拌1小时，然后蒸发至干。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用30g C18快速柱，用10％至90％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(400mg，20％产率)。
LC/MS：C26H34N4O10的计算值m/z＝562.6，实测值[M-H]-＝561.5。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.60(t,J＝5.6Hz,2H),7.41(d,J＝7.7Hz,1H),7.32–7.07(m,5H),6.70(s,2H),6.33–6.07(m,3H),4.72(td,J＝7.6,5.3Hz,1H),4.12–3.78(m,4H),3.72(ddd,J＝15.2,6.9,4.8Hz,5H),3.60(dd,J＝11.6,6.1Hz,10H),3.12(ddd,J＝48.2,14.0,6.5Hz,2H),2.52(d,J＝11.7Hz,2H)。
4.5：(S)-11-苄基-1-(9H-芴-9-基)-3,6,9,12,15-五氧代-2-氧杂-4,7,10,13,16-五氮杂十七烷-17-基乙酸酯(化合物4.5)
根据美国专利公开号US2017/021031中所述的程序制备标题化合物。
4.6:(S)-11-苄基-1-(9H-芴-9-基)-3,6,9,12,15-五氧代-2-氧杂-4,7,10,13,16-五氮杂十七烷-17-基乙酸酯(化合物4.6)
根据美国专利公开号US2017/021031中所述的程序，使用Fmoc-GGFGG-OH作为起始肽制备标题化合物。
4.7：(2-((2-(((S)-1-((2-((4-((4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)哌嗪-1-基)磺酰基)苯基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.7)
根据一般程序7，从化合物104(20mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(14mg，42％产率)。
LC/MS：C52H58N9O12S的计算值m/z＝1051.4，实测值[M+H]+＝1052.6。
4.8：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-((4-((4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)哌嗪-1-基)磺酰基)苯基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物104)
根据程序6，接着根据程序8，从化合物4.7(14mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(9.1mg，56％产率)。
LC/MS：C60H67FN10O16S的计算值m/z＝1234.4，实测值[M+H]+＝1235.8。
4.9：(2-((2-(((S)-1-((2-((4-(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.9)
根据一般程序7，从化合物108(12mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(13mg，62％产率)。
LC/MS：C52H58N9O10的计算值m/z＝987.4，实测值[M+H]+＝988.6。
4.10：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-((4-(4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物108)
根据程序6，接着根据程序8，从化合物4.9(13mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(3.1mg，20％产率)。
LC/MS：C60H67FN10O14的计算值m/z＝1170.5，实测值[M+H]+＝1171.6。
4.11：(S)-(1-(4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)-3,10-二氧代-7-氧杂-2,4,9-三氮杂十一烷-11-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.11)
/>
向化合物1.2(31mg，0.076mmol)在DMF(750uL)中的溶液添加(2-(((2-(((4-硝基苯氧基)羰基)氨基)乙氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(41mg，0.076mmol)，然后添加iPr2Net(26uL，0.15mmol)。将该溶液在室温下搅拌2小时，然后直接施加到12g C18柱上。如一般程序9中所述完成纯化，其中用10％至100％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(21mg，35％产率)。
LC/MS：C43H41FN6O9的计算值m/z＝804.87，实测值[M+H]+＝805.6。
4.12：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(1-((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)-3,10-二氧代-7-氧杂-2,4,9-三氮杂十一烷-11-基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物136)
将化合物4.11(21mg，0.026mmol)溶解于10％的哌啶在DMF(1mL)中的溶液中并搅拌10分钟。蒸发哌啶溶液，将所得残余物再溶于DMF(5mL)中，然后再次蒸发至干。向该残余物中添加DMF(50uL)和DCM(450uL)，然后添加化合物4.4(15mg，0.026mmol)、NMM(10uL)和HATU(10mg，0.026mmol)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用30％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(7.6mg，26％产率)。
LC/MS：C54H63FN10O16的计算值m/z＝1127.1，实测值[M+H]+＝1128.2。
4.13：(2-(((2-(氯磺酰基)乙氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.13)
向化合物4.5(50mg，0.14mmol)在DCM(800uL)中的溶液添加2-羟基乙烷-1-磺酰氯(100mg，0.7mmol)，然后添加TFA(200uL)。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后蒸发至干。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用10g硅胶柱并用10％至100％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到透明膜状的标题化合物(31mg，50％产率)。
LC/MS：C20H21ClN2O6S的计算值m/z＝452.1，实测值[M+Na]+＝472.9
4.14：(S)-(2-(((2-(N-((4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨磺酰基)乙氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.14)
如一般程序3中所述，使用化合物1.2(28mg，0.07mmol)和化合物4.13(31mg，0.07mmol)制备标题化合物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18柱，用10％至100％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(22mg，39％产率)。
LC/MS：C42H40FN5O10S的计算值m/z＝825.9，实测值[M+H]+＝826.7。
4.15：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((2-(N-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨磺酰基)乙氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物129)
将化合物4.14(22mg，0.027mmol)溶解于10％的哌啶在DMF(1mL)中的溶液并搅拌10分钟。蒸发哌啶溶液，将所得残余物再溶于DMF(5mL)中，然后再次蒸发至干。向该残余物中添加DMF(50uL)和DCM(450uL)，然后添加化合物4.4(30mg，0.053mmol)、NMM(10uL)和HATU(18mg，0.048mmol)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用30％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(6.4mg，21％产率)。
LC/MS：C53H62FN9O17S的计算值m/z＝1148.2，实测值[M+H]+＝1148.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.60(t,J＝6.5Hz,1H),8.36(t,J＝8.6Hz,2H),8.13(d,J＝6.6Hz,1H),7.77(d,J＝10.6Hz,1H),7.65(d,J＝4.8Hz,1H),7.28–7.00(m,6H),6.80(s,2H),5.69–5.50(m,3H),5.45–5.33(m,2H),4.44(dd,J＝8.7,5.7Hz,1H),3.96(t,J＝5.3Hz,2H),3.90–3.76(m,5H),3.76–3.57(m,7H),3.09–2.81(m,3H),2.61–2.45(m,5H),2.04–1.90(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.16：(S)-(2-(((吗啉-2-基甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.16)
/>
向化合物4.5(100mg，0.27mmol)在DCM(800uL)中的溶液添加(S)-吗啉-2-基甲醇(160mg，1.36mmol)，然后添加TFA(200uL)。将该溶液在室温下搅拌1小时，然后蒸发至干。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用10％至90％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(TFA盐，105mg，72％产率)。
LC/MS：C23H27N3O5的计算值m/z＝425.2，实测值[M+Na]+＝448.0。
4.17：(2-(((((S)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)吗啉-2-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.17)
根据一般程序1，从化合物1.1(50mg，0.117mmol)和化合物4.16(63mg，0.117mmol)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至100％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，33mg，35％产率)。
LC/MS：C45H44FN5O9的计算值m/z＝817.9，实测值[M+H]+＝818.7。
4.18：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((((S)-4-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)吗啉-2-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物113)
将化合物4.17(33mg，0.04mmol)溶解于10％的哌啶在DMF(1mL)中的溶液并搅拌10分钟。蒸发哌啶溶液，将所得残余物再溶于DMF(5mL)中，然后再次蒸发至干。向该残余物中添加DMF(100uL)和DCM(900uL)，然后添加化合物4.4(45mg，0.08mmol)、NMM(20uL)和HATU(28mg，0.073mmol)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用30％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(22mg，48％产率)。
LC/MS：C56H66FN9O16的计算值m/z＝1140.2，实测值[M+H]+＝1141.1。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.35(d,J＝7.5Hz,2H),7.74–7.61(m,1H),7.53(s,1H),7.34–7.10(m,6H),6.81(s,2H),5.65–5.30(m,4H),4.64(t,J＝3.4Hz,2H),4.42(tt,J＝6.3,2.5Hz,1H),4.09(d,J＝12.3Hz,1H),3.98–3.76(m,8H),3.72(t,J＝6.0Hz,2H),3.69–3.44(m,17H),3.21–2.85(m,3H),2.64–2.42(m,5H),2.03–1.84(m,2H),0.98(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.19：(S)-(2-((((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.19)
将化合物3.5(55mg，0.11mmol)溶解于TFA(500uL)中并在室温下搅拌20分钟，然后添加六氟异丙醇(2mL)，接着添加化合物4.5(40mg，0.11mmol)。将该溶液在室温下搅拌约16小时，然后浓缩至干。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(11mg，14％产率)。
LC/MS：C39H34FN5O8的计算值m/z＝719.7，实测值[M+H]+＝720.6。
4.20：(S)-N-(2-(((((S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物141)
将化合物4.19(11mg，0.015mmol)溶解于10％的哌啶在DMF(1mL)中的溶液并搅拌10分钟。蒸发哌啶溶液，将所得残余物再溶于DMF(5mL)中，然后再次蒸发至干。向该残余物中添加DMF(50uL)和DCM(450uL)，然后添加化合物4.4(26mg，0.045mmol)、NMM(5uL)和HATU(18mg，0.045mmol)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用32％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(4.6mg，29％产率)。
LC/MS：C50H56FN9O15的计算值m/z＝1142.0，实测值[M+H]+＝1143.1。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.36(s,1H),8.28(d,J＝6.1Hz,1H),8.16(dd,J＝20.1,6.8Hz,3H),7.59–7.44(m,2H),7.31–7.08(m,6H),6.79(s,2H),5.58(d,J＝16.1Hz,1H),5.37(d,J＝16.1Hz,1H),5.30–5.16(m,3H),4.56–4.39(m,1H),4.07–3.90(m,2H),3.85(dt,J＝11.5,5.4Hz,4H),3.79–3.67(m,4H),3.67–3.55(m,7H),3.54(d,J＝6.5Hz,8H),3.10(dd,J＝14.0,6.1Hz,1H),2.92(dd,J＝13.9,9.1Hz,1H),2.53(t,J＝6.0Hz,2H),1.98(q,J＝7.2Hz,2H),1.31(s,1H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.21：N-((S)-1-((S)-9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)-9-苄基-5,8,11,14-四氧代-2-氧杂-4,7,10,13-四氮杂十五烷-15-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺(MC-GGFG-AM-化合物141)
将化合物4.19(25mg，0.035mmol)溶解于10％的哌啶在DMF(1mL)中的溶液并搅拌10分钟。蒸发哌啶溶液，将所得残余物再溶于DMF(5mL)中，然后再次蒸发至干。向该残余物中添加DMF(50uL)和DCM(450uL)，然后添加MC-GGF-OH(33mg，0.07mmol)、NMM(20uL)和HATU(25mg，0.066mmol)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用30％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(4.3mg，13％产率)。
LC/MS：C47H50FN9O12的计算值m/z＝952.0，实测值[M+H]+＝952.9。
1H NMR(300MHz,CD3CN)δ7.96–7.72(m,1H),7.39–7.07(m,8H),6.94(d,J＝9.1Hz,1H),6.73(s,2H),5.44(d,J＝16.2Hz,1H),5.25(d,J＝16.2Hz,1H),5.06(d,J＝4.4Hz,2H),4.81(d,J＝26.1Hz,4H),4.61(s,1H),3.96(s,1H),3.77(d,J＝8.1Hz,7H),3.02(d,J＝5.6Hz,5H),2.19(t,J＝7.7Hz,3H),1.50(dp,J＝14.8,7.4Hz,6H),1.32–1.12(m,3H),0.96(t,J＝7.2Hz,3H)。
4.22：(2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.22)
根据程序7，从化合物140(28mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(10mg，17％产率)。
LC/MS：C40H42N7O10的计算值m/z＝799.3，实测值[M+H]+＝800.6。
4.23：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物140)
根据一般程序6，接着根据一般程序8，从化合物4.22(10mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(6.8mg，55％产率)。
LC/MS：C48H51FN8O14的计算值m/z＝982.4，实测值[M+H]+＝983.6。
4.24：(2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(吗啉代甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.24)
根据一般程序7，从化合物142(TFA盐，45mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(13mg，22％产率)。
LC/MS：C45H51N8O11的计算值m/z＝898.4，实测值[M+H]+＝899.6。
4.25：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(吗啉代甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物142)
根据一般程序6，接着根据一般程序8，从化合物4.24(13mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(2.6mg，17％产率)。
LC/MS：C53H60FN9O15的计算值m/z＝1081.4，实测值[M+H]+＝1082.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ9.34(d,J＝8.5Hz,1H),7.87(d,J＝11.8Hz,1H),7.62(s,1H),7.33–7.19(m,5H),6.80(s,2H),5.62(d,J＝16.3Hz,1H),5.51(s,2H),5.47–5.35(m,3H),4.73(dd,J＝9.6,5.1Hz,1H),4.61(s,3H),4.30–4.15(m,2H),4.11(s,2H),4.00–3.82(m,4H),3.82–3.70(m,7H),3.70–3.50(m,13H),3.18–3.04(m,1H),2.88(s,1H),2.64(d,J＝5.8Hz,4H),2.54(t,J＝6.0Hz,2H),2.09–1.92(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.26：(S)-(12-苄基-1-(4-硝基苯氧基)-1,8,11,14,17-五氧代-2,5-二氧杂-7,10,13,16-四氮杂十八烷-18-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.26)
向搅拌的化合物4.6(60mg)在二氯甲烷(2mL)中的溶液添加乙二醇(100uL)，随后添加三氟乙酸(0.4mL)。30分钟后，真空浓缩反应物。如一般程序9中所述完成中间体化合物的纯化，其中使用10g快速柱并用0％至20％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱。向在四氢呋喃(0.5mL)中的纯化中间体中添加双-硝基苯酚碳酸酯(58mg)，随后添加DIPEA(50uL)。将溶液搅拌16小时，用乙酸(约100uL)淬灭，然后浓缩至干。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用10g快速柱并用0％至20％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(40mg，53％产率，来自化合物4.6)。
LC/MS：C40H40N6O12的计算值m/z＝796.3，实测值[M+Na]+＝819.4。
4.27：(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸(S)-16-氨基-10-苄基-6,9,12,15-四氧代-3-氧杂-5,8,11,14-四氮杂十六烷基酯(化合物4.27)
向化合物4.26(40mg)在二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液添加DIPEA(26uL)，然后添加化合物1.2(24mg)在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌4小时，然后用20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液(0.5mL)淬灭并再搅拌20分钟。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱并用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，19mg，39％产率)。
LC/MS：C41H45FN8O11的计算值m/z＝844.3，实测值[M+H]+＝845.6。
4.28：(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸(S)-10-苄基-29-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五氧代-3,21,24,27-四氧杂-5,8,11,14,17-五氮杂二十一烷基酯(MT-GGFG-AM-化合物139)
根据一般程序8，从化合物4.27(10mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(8.8mg，75％产率)。
LC/MS：C54H62FN9O17的计算值m/z＝1127.4，实测值[M+H]+＝1128.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.27(d,J＝8.1Hz,1H),7.81(d,J＝10.7Hz,1H),7.65(s,1H),7.32–7.16(m,5H),6.81(s,2H),5.62(d,J＝16.4Hz,1H),5.53(s,2H),5.42(d,J＝16.4Hz,1H),4.93(s,2H),4.67(s,1H),4.51(dd,J＝9.3,5.6Hz,1H),4.18(t,J＝4.7Hz,2H),4.01–3.44(m,19H),3.17(dd,J＝13.9,5.8Hz,1H),2.97(dd,J＝13.9,9.0Hz,1H),2.57(s,3H),2.52(t,J＝6.0Hz,2H),2.03–1.91(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
4.29：(S)-2-氨基-N-(4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)乙酰胺(化合物4.29)
向Fmoc-甘氨酸(217mg)在二甲基甲酰胺(2.5mL)中的搅拌溶液中添加HATU(254mg)、HOAt(83mg)，然后添加NMM(188uL)。将该溶液搅拌10分钟，然后添加化合物141(50mg)并将反应物在室温下搅拌16小时。添加氢氧化锂(2.5mL，1M在水中)，并将反应混合物搅拌2小时。将该溶液部分浓缩，然后添加20％哌啶在二甲基甲酰胺(0.5mL)中的溶液，再搅拌20分钟。然后将反应物蒸发到硅藻土上，并如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12gC18快速柱，并用0％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，44mg，62％产率)。
LC/MS：C23H21FN4O6的计算值m/z＝468.1，实测值[M+H]+＝469.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.99(d,J＝8.3Hz,1H),7.99(s,1H),7.87(d,J＝12.0Hz,1H),7.55(s,1H),5.60(d,J＝16.3Hz,1H),5.46–5.35(m,3H),5.30(s,2H),3.53–3.45(m,1H),3.43–3.38(m,1H),2.03–1.87(m,2H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.30：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物141)
向化合物4.4(23mg)在二甲基甲酰胺(0.1mL)和二氯甲烷(0.9mL)中的混合物中的搅拌溶液中添加HATU(14mg)、化合物4.29(20mg)在二甲基甲酰胺(0.1mL)和二氯甲烷(0.9mL)中的溶液和DIPEA(24uL)。将混合物搅拌15分钟，然后将反应物部分浓缩。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用0％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(7.1mg，20％产率)。
LC/MS：C49H53FN8O15的计算值m/z＝1012.4，实测值[M+H]+＝1013.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ9.89(s,1H),8.75(d,J＝8.3Hz,1H),8.44–8.32(m,1H),8.27–8.14(m,2H),7.78(d,J＝11.9Hz,1H),7.53(s,1H),7.39–7.20(m,5H),6.82(s,2H),5.57(d,J＝16.3Hz,1H),5.39(d,J＝16.3Hz,1H),5.34–5.25(m,2H),5.22(s,2H),4.32–4.09(m,2H),3.96–3.83(m,3H),3.76(t,J＝6.0Hz,2H),3.69–3.62(m,2H),3.62–3.47(m,9H),3.40–3.33(m,1H),3.08(dd,J＝14.0,9.6Hz,1H),2.56(t,J＝6.1Hz,2H),2.03–1.91(m,2H),1.04(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.31：(S)-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.31)
向化合物145(32mg)在二氯甲烷(2mL)和乙腈(0.5mL)中的搅拌溶液中添加二碳酸二叔丁酯(20uL)，随后添加DIPEA(42uL)。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后浓缩至干，得到红色固体状的标题化合物(34mg，87％)。
LC/MS：C26H27FN4O6的计算值m/z＝510.2，实测值[M+H]+＝511.2。
4.32：(S)-((9-(2-氨基乙酰氨基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.32)
向Fmoc-甘氨酸(98mg)在二甲基甲酰胺(1mL)中的搅拌溶液中添加HATU(115mg)、HOAt(37mg)，然后添加NMM(85μL)。将该溶液搅拌10分钟，然后添加化合物4.31(28mg)。将反应物在室温下搅拌16小时，然后用20％哌啶想二甲基甲酰胺(1mL)中的溶液淬灭并再搅拌20分钟。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，25mg，67％产率)。
LC/MS：C28H30FN6O7的计算值m/z＝567.2，实测值[M+H]+＝568.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ9.01(d,J＝8.3Hz,1H),7.83(d,J＝11.9Hz,1H),7.52(s,1H),5.57(d,J＝16.4Hz,1H),5.38(d,J＝16.3Hz,1H),5.27(d,J＝3.1Hz,2H),4.80(s,2H),4.10(s,2H),1.97(q,J＝7.4Hz,2H),1.50(s,9H),1.02(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.33：(((S)-9-(2-((S)-2-(2-(2-氨基乙酰氨基)乙酰氨基)-3-苯基丙酰氨基)乙酰氨基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.33)
/>
向Fmoc-GGF-OH(28mg)和HATU(20mg)在DMF(0.2mL)和二氯甲烷(1.8mL)的混合物中的搅拌溶液中添加化合物4.32(25mg)，然后添加DIPEA(32uL)。将该溶液在室温下搅拌15分钟，用20％哌啶在二甲基甲酰胺(0.250mL)中的溶液淬灭，再搅拌20分钟，然后在真空中部分浓缩。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用10％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，22mg，64％产率)。
LC/MS：C41H45FN8O10的计算值m/z＝828.3，实测值[M+H]+＝829.6。
4.34：(S)-N-(2-(((S)-11-(氨基甲基)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物145)
根据程序6，接着根据程序8，从化合物4.33(15mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成中间体Boc保护的化合物的制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。Boc-脱保护后获得白色固体状的标题化合物(TFA盐，8.5mg，52％产率)。
LC/MS：C49H53FN8O15的计算值m/z＝1011.4，实测值[M+H]+＝1012.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ9.04(d,J＝8.0Hz,1H),8.40(d,J＝5.7Hz,1H),8.21(d,J＝7.7Hz,1H),8.05(d,J＝11.5Hz,1H),7.67(s,1H),7.42–7.03(m,5H),6.81(s,2H),5.63(d,J＝16.4Hz,1H),5.51(s,1H),5.43(d,J＝16.5Hz,1H),4.81(s,2H),4.75–4.58(m,1H),4.29–4.10(m,2H),3.98–3.81(m,4H),3.78–3.71(m,2H),3.71–3.63(m,2H),3.62–3.53(m,9H),3.14–2.98(m,1H),2.54(t,J＝6.0Hz,2H),2.08–1.93(m,2H),1.03(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.35：(S)-(2-((4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-11-(哌啶-1-基甲基)-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.35)
向Fmoc-Gly-OH(100.9mg，0.34mmol)在二甲基甲酰胺(550uL)中的溶液中添加NMM(0.112mL，1.02mmol)和HATU(0.103g，0.272mmol)。将该溶液在室温下搅拌20分钟，然后添加化合物148(32.5mg，0.068mmol)在DMF(250uL)中的溶液，并将反应混合物搅拌16小时。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用12g C18快速柱，用5％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱。根据一般程序9再纯化所得残余物，使用10g快速柱并用0％至10％MeOH/DCM梯度洗脱，得到黄色粉末状的标题化合物(15.3mg，30％产率)。
LC/MS：C43H40FN5O7的计算值m/z＝757.3，实测值[M+H]+＝758.6。
4.36:(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-11-(哌啶-1-基甲基)-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物148)
向容纳有化合物4.35(15.3mg，0.02mmol)的50mL烧瓶中添加20％哌啶在DMF(2.0mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌5分钟，然后蒸发至干。然后将所得残余物溶于10％DMF/DCM(1.0mL)中，然后添加NMM(5.50μL，0.05mmol)、化合物4.4(11.2mg，0.02mmol)和HATU(8.7mg，0.02mmol)。将该溶液搅拌45分钟，然后部分蒸发。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用15％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色粉末状的标题产物(7.8mg，33％产率)。
LC/MS：C54H62FN9O14的计算值m/z＝1079.4，实测值[M+H]+＝1080.8。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.99(d,J＝8.2Hz,1H),7.52(d,J＝12.3Hz,1H),7.39–7.25(m,5H),7.25–7.17(m,1H),6.79(s,2H),5.53(d,J＝16.4Hz,1H),5.33(d,J＝16.5Hz,1H),4.80–4.72(m,1H),4.32–4.11(m,2H),3.98–3.79(m,6H),3.76(t,J＝6.0Hz,2H),3.66–3.60(m,2H),3.62–3.49(m,10H),3.15–3.03(m,1H),2.65–2.47(m,6H),1.96(q,J＝7.4Hz,2H),1.72–1.57(m,4H),1.57–1.42(m,2H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
4.37：(2-((2-(((S)-1-((2-((4-(N-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.37)
根据一般程序7，从化合物127(46mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(7.2mg，21％产率)。
LC/MS：C48H51N8O12S的计算值m/z＝983.0，实测值[M+H]+＝983.9。
4.38：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-((4-(N-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨磺酰基)苯基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-化合物127)
根据程序6，接着根据程序8，从化合物4.37(7.2mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用10％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(1mg，12％产率)。
LC/MS：C56H60FN9O16的计算值m/z＝1166.2，实测值[M+H]+＝1167.1
4.39：((7S)-1-((3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氧基)-7-苄基-3,6,9,12-四氧代-2,5,8,11-四氮杂十三烷-13-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.39)
/>
向化合物4.6(44mg)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中添加3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-醇(5.3mg)，随后添加三氟乙酸(0.4mL)。30分钟后，真空浓缩反应物。如一般程序9中所述完成纯化，使用10g快速柱并用0％至20％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(14.7mg，46％产率)。
LC/MS：C37H42N6O7的计算值m/z＝682.8，实测值[M+H]+＝683.6。
4.40：(2S)-2-(2-(2-氨基乙酰氨基)乙酰氨基)-N-(2-((((3-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(化合物4.40)
根据一般程序1，从化合物1.1(3mg，0.007mmol)和化合物4.39(14.7mg，0.022mmol)开始并使用200uL DMF制备标题化合物。在化合物1.1完全消耗后，添加20％哌啶在DMF中的溶液(200uL)并将该溶液在室温下搅拌10分钟。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至37％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，1.8mg，29％产率)。
LC/MS：C44H49FN8O9的计算值m/z＝852.9，实测值[M+H]+＝853.7。
4.41：(2S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-((((3-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-氮杂双环[3.1.1]庚-6-基)氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物117)
根据程序8，从化合物4.40(1.8mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，0.5mg，22％产率)。
LC/MS：C57H66FN9O15的计算值m/z＝1135.5，实测值[M+H]+＝1136.3。
4.42：(S)-(9-苄基-1-(3-氟氮杂环丁烷-3-基)-5,8,11,14-四氧代-2-氧杂-4,7,10,13-四氮杂十五烷-15-基)氨基甲酸(9H-芴-9-基)甲酯(化合物4.42)
向化合物4.6(144mg)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌溶液中添加(3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲醇(16mg)，随后添加三氟乙酸(0.4mL)。30分钟后，真空浓缩反应物。如一般程序9中所述完成纯化，其中使用10g快速柱并用0％至20％二氯甲烷/甲醇梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(55mg，54％产率)。
LC/MS：C35H39N6FO7的计算值m/z＝674.7，实测值[M+H]+＝675.6。
4.43：(S)-2-(2-(2-氨基乙酰氨基)乙酰氨基)-N-(2-((((1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(化合物4.43)
根据一般程序1，从化合物1.1(11.6mg，0.027mmol)和化合物4.42(55mg，0.082mmol)开始并使用500uL DMF制备标题化合物。在化合物1.1完全消耗后，添加20％哌啶在DMF中的溶液(500uL)并将该溶液在室温下搅拌10分钟。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至32％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到灰白色固体状的标题化合物(TFA盐，8.1mg，28％产率)。
LC/MS：C42H46F2N8O9的计算值m/z＝844.3，实测值[M+H]+＝845.3
4.44：(S)-2-(1-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-12,15-二氧代-3,6,9-三氧杂-13,16-二氮杂十八烷-18-酰氨基)-N-(2-((((1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)-3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲氧基)甲基)氨基)-2-氧乙基)-3-苯基丙酰胺(MT-GGFG-AM-化合物118)
根据程序8，从化合物4.43(8.1mg)开始制备标题化合物。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(TFA盐，2.9mg，28％产率)。
LC/MS：C55H63F2N9O15的计算值m/z＝1127.4，实测值[M+H]+＝1128.8。
4.45：(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-9-甲基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸(S)-10-苄基-23-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14,17-五氮杂二十烷基酯(MC-GGFG-AM-化合物139)
向化合物4.27(450mg)中添加6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(130mg)和N-乙基二异丙胺(250uL)在DMF(10mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后浓缩至约1mL体积。如一般程序9中所述完成纯化，其中首先使用60g C18快速柱，用10％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，然后使用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱对不纯级分进行制备型HPLC，得到白色固体状的标题化合物(320mg，66％产率)。
LC/MS：C51H56FN9O14的计算值m/z＝1037.4，实测值[M+H]+＝1038.6。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.10(d,J＝8.1Hz,2H),8.01(s,1H),7.95(d,J＝7.0Hz,1H),7.74(d,J＝10.4Hz,1H),7.66(s,1H),7.56(s,1H),7.32–7.10(m,5H),6.69(s,2H),5.63(d,J＝16.4Hz,1H),5.46(s,2H),5.32(s,1H),5.28(d,J＝16.5Hz,1H),4.88(s,2H),4.67(d,J＝6.4Hz,2H),4.48(d,J＝7.1Hz,2H),4.15(t,J＝4.2Hz,2H),3.92(dd,J＝17.1,6.2Hz,2H),3.83–3.57(m,6H),3.46(t,J＝7.1Hz,2H),3.16(dd,J＝14.0,5.9Hz,1H),2.95(dd,J＝13.9,8.9Hz,1H),2.53(s,3H),2.21(t,J＝7.6Hz,2H),1.97–1.79(m,2H),1.58(dp,J＝15.0,7.6Hz,4H),1.29(dd,J＝16.6,9.3Hz,3H),1.01(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.46：(S)-(2-((4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.46)
将化合物140(860mg，1.7mmol，TFA盐)、Boc-Gly-OH(760mg，4.3mmol)，HATU(1.6g，4.1mmol)和N-乙基二异丙胺(0.6mL)在DMF(4mL)中的溶液在室温下搅拌24小时，然后倒入水(50mL)中。通过过滤收集所得固体，再溶解于10％MeOH/DCM中，并如一般程序9中所述完成纯化，其中使用30g硅胶柱并用0％至10％MeOH/DCM洗脱，得到呈黄色固体状的标题化合物(750mg，80％产率)。
LC/MS：C27H27FN4O7的计算值m/z＝538.5，实测值[M+H]+＝539.4。
1H NMR(300MHz,MeOD)δ8.84(d,J＝8.4Hz,1H),8.52(s,1H),8.00(s,1H),7.87(d,J＝12.1Hz,1H),7.62(s,1H),5.60(d,J＝16.3Hz,1H),5.40(d,J＝16.4Hz,1H),5.27(s,2H),4.02(s,2H),1.99(dt,J＝8.7,6.7Hz,2H),1.52(s,9H),1.03(t,J＝7.4Hz,3H)。
4.47：(S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-铵(化合物4.47)
由化合物4.46(750mg)分三步制备标题化合物。将Boc保护基在纯TFA(2mL)中裂解，随后在Et2O(50mL)中沉淀。通过过滤收集固体，并添加到(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(340mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(300uL)在DMF(1.7mL)中的溶液中。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(50mL)中。通过过滤收集沉淀，真空干燥，然后溶于纯TFA(2mL)。20分钟后，添加Et2O(50mL)，并通过过滤收集沉淀，得到黄色固体状的标题化合物(531mg，54％产率)。
LC/MS：C31H28FN5O6的计算值m/z＝585.2，实测值[M+H]+＝586.1。
4.48：2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧代乙烷-1-铵(化合物4.48)
向化合物4.47(490mg)中添加Boc-gly-gly-NHS(250mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(250uL)在DMF(3mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(50mL)中。通过过滤收集沉淀，然后溶于纯TFA(2mL)。20分钟后，添加Et2O(50mL)，并通过过滤收集沉淀，得到黄色固体状的标题化合物(500mg，88％产率)。
LC/MS：C35H34FN7O8的计算值m/z＝699.2，实测值[M+H]+＝700.4。
4.49：6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)己酰胺(MC-GGFG-化合物140)
向化合物4.48(500mg)中添加6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酸2,5-二氧代环戊酯(210mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(215uL)在DMF(4mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(50mL)中。通过过滤收集沉淀，然后溶于DMF(2mL)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用24％至38％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(190mg，40％产率)。
LC/MS：C45H45FN8O11的计算值m/z＝892.9，实测值[M+H]+＝893.6。
1H NMR(300MHz,CD3CN)δ8.67(d,J＝8.4Hz,1H),8.44(s,1H),7.78(d,J＝12.1Hz,1H),7.41(s,1H),7.30(d,J＝4.3Hz,4H),7.26–7.16(m,1H),6.72(s,2H),5.52(d,J＝16.4Hz,1H),5.31(d,J＝16.4Hz,1H),5.12(s,2H),4.64(dd,J＝9.7,5.0Hz,1H),4.11(d,J＝3.2Hz,2H),3.87–3.68(m,4H),3.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.00(dd,J＝14.0,9.7Hz,1H),2.20(t,J＝7.6Hz,2H),1.49(dq,J＝19.5,7.4Hz,4H),1.22(p,J＝7.6,7.1Hz,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.50：(S)-(2-((4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.50)
将化合物4.46(1.8g)、硫酸铁(II)七水合物(1.4g，1.5当量)和硫酸(450uL，2.5当量)于MeOH(33mL)中的溶液加热至60℃，并在10分钟内滴加过氧化氢(1.25mL，12当量)。将该溶液再加热20分钟，然后冷却至室温并倒入冰水(约200mL)中。通过过滤收集沉淀，并且将滤液用饱和Na2S2O3水溶液淬灭。蒸发MeOH，并将溶液静置2小时，同时形成第二棕色沉淀。通过过滤收集该沉淀物并如一般程序9中所述使用50g硅胶柱并用0％至15％MeOH/DCM梯度洗脱来纯化合并的沉淀物，得到黄色固体状的标题化合物(860mg，45％产率)。
LC/MS：C28H29FN4O8的计算值m/z＝568.5，实测值[M+H]+＝569.7。
4.51：(S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-铵(化合物4.51)
由化合物4.50(750mg)分三步制备标题化合物。将Boc保护基在纯TFA(2mL)中裂解，随后在Et2O(100mL)中沉淀。通过过滤收集固体，并添加到(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-苯基丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(600mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(300uL)在DMF(7mL)中的溶液中。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(100mL)中。通过过滤收集沉淀，真空干燥，然后溶于纯TFA(2mL)。20分钟后，添加Et2O(100mL)，并通过过滤收集沉淀，得到黄色固体状的标题化合物(756mg，78％产率)。
LC/MS：C32H30FN5O7的计算值m/z＝615.2，实测值[M+H]+＝616.3。
4.52：2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧代乙烷-1-铵(化合物4.52)
向化合物4.51(756mg)中添加Boc-gly-gly-NHS(375mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(400uL)在DMF(5mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(75mL)中。通过过滤收集沉淀，然后溶于纯TFA(4mL)。20分钟后，添加Et2O(100mL)，并通过过滤收集沉淀，得到黄色固体状的标题化合物(826mg，95％产率)。
LC/MS：C36H36FN7O9的计算值m/z＝729.2，实测值[M+H]+＝730.2。
4.53：6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-(2-((2-(((S)-1-((2-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-11-(羟基甲基)-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)氨基)-2-氧乙基)氨基)-2-氧乙基)己酰胺(MC-GGFG-化合物141)
向化合物4.52(826mg)中添加6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酸2,5-二氧代环戊酯(382mg，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(300uL)在DMF(5.5mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入Et2O(100mL)中。通过过滤收集沉淀，然后溶于DMF(2mL)。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至40％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(370mg，35％产率)。
LC/MS：C46H47FN8O12的计算值m/z＝922.9，实测值[M+H]+＝923.8。
1H NMR(300MHz,CD3CN)δ8.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(d,J＝11.9Hz,1H),7.38–7.27(m,5H),7.24(d,J＝4.3Hz,1H),6.72(s,2H),5.48(d,J＝16.4Hz,1H),5.28(d,J＝16.3Hz,1H),5.24–5.01(m,4H),4.65(dd,J＝9.7,4.9Hz,1H),4.13(s,2H),3.85–3.75(m,3H),3.37(t,J＝7.1Hz,2H),3.00(dd,J＝14.0,9.8Hz,1H),2.21(t,J＝7.6Hz,2H),1.51(dp,J＝22.0,7.4Hz,4H),1.22(p,J＝7.4,7.0Hz,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H)。
4.54：((S)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.54)
向化合物3.4(500mg，1.0mmol)中添加TFA(4mL)并将该溶液在室温下静置1小时，接着添加Et2O(100mL)，并通过过滤收集沉淀物。将该固体溶于DMF(3.4mL)，并添加Boc-Ala-OH(590mg，3.1mmol，3当量)和HATU(1.2g，3.1mmol，3当量)，然后添加N-乙基二异丙胺(0.9mL，5.2mmol，5当量)。将该溶液在室温下搅拌3天，然后倒入冰水(50mL)中，并通过过滤收集沉淀，得到棕色固体状的标题化合物(125mg，22％产率)。
LC/MS：C28H29FN4O7的计算值m/z＝552.6，实测值[M+H]+＝553.7。
4.55：(S)-2-氨基-N-((S)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-甲基丁酰胺(化合物4.55)
向在100mL圆底烧瓶中的化合物4.54(125mg，0.225mmol)中添加TFA(2mL)。将该溶液静置10分钟，然后添加Et2O(50mL)，并通过过滤收集沉淀。将所得橙色固体添加到Boc-Val-NHS(78mg，0.25mmol，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(80uL，0.45mmol，2当量)在DMF(2mL)中的溶液中。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后用移液管移入50mL falcon管中的Et2O(40mL)中，通过离心和倾析Et2O收集沉淀。将沉淀溶解在TFA(2mL)中并静置10分钟，然后添加Et2O(40mL)。通过离心和倾析Et2O收集沉淀。将沉淀在高真空下干燥，得到橙色固体状的标题化合物(135mg，90％产率，经3个步骤)。
LC/MS：C28H30FN5O6的计算值m/z＝551.2，实测值[M+H]+＝552.2。
4.56：6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)-N-((S)-1-(((S)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)己酰胺(MC-VA-化合物140)
向化合物4.55(20mg，0.03mmol)中添加6-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(11mg，0.036mmol)和N-乙基二异丙胺(10uL)在DMF(1mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后直接纯化。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至60％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(8.8mg，40％产率)。
LC/MS：C38H41FN6O9的计算值m/z＝744.8，实测值[M+H]+＝745.6。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.60(d,J＝8.5Hz,1H),8.31(s,1H),7.96(d,J＝6.5Hz,1H),7.65(d,J＝12.0Hz,1H),7.37–7.26(m,2H),6.75(s,2H),5.45(d,J＝16.6Hz,1H),5.25(d,J＝16.3Hz,1H),5.04(d,J＝4.0Hz,2H),4.78–4.58(m,1H),4.30–4.13(m,1H),2.32–2.16(m,2H),2.10(dt,J＝13.6,6.8Hz,1H),1.88(q,J＝7.4Hz,2H),1.57(dq,J＝15.5,7.6Hz,4H),1.45(d,J＝7.1Hz,3H),1.26(tt,J＝10.1,6.1Hz,2H),1.05–0.83(m,9H)。
4.57：6-(((S)-1-(((S)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-6-氧代己酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(NHC-C-VA-化合物140)
向化合物4.55(20mg，0.03mmol)中添加双(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)己二酸酯(30mg，0.09mmol，3当量)和N-乙基二异丙胺(10uL)于DMF(1mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌30分钟，然后直接纯化。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用25％至35％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(4.1mg，18％产率)。
LC/MS：C38H41FN6O11的计算值m/z＝776.8，实测值[M+H]+＝777.6。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.65(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),8.38(s,1H),7.95(d,J＝6.5Hz,1H),7.72(d,J＝12.0Hz,1H),7.37(d,J＝11.8Hz,2H),5.58–5.19(m,2H),5.10(s,2H),4.78–4.56(m,1H),4.23(dd,J＝8.4,7.0Hz,1H),2.80(s,4H),2.65(t,J＝6.9Hz,2H),2.39–2.22(m,2H),2.11(q,J＝6.8Hz,1H),1.94–1.81(m,2H),1.79–1.57(m,4H),1.45(d,J＝7.1Hz,3H),1.10–0.78(m,9H)。
4.58：(S)-2-(32-叠氮基-5-氧代-3,9,12,15,18,21,24,27,30-九氧杂-6-氮杂三十烷酰氨基)-N-((S)-1-(((S)-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)-3-甲基丁酰胺(2-((叠氮基-PEG8-氨基甲酰基)甲氧基)乙酰氨基-VA-化合物140)
/>
将化合物4.55(20mg，0.03mmol)、32-叠氮基-5-氧代-3,9,12,15,18,21,24,27,30-九氧杂-6-氮杂三十烷酸(17mg，0.03mmol)和HATU(13mg，0.03mmol)在DMF(300uL)中的溶液冷却至0℃并添加N-乙基二异丙胺(16uL，0.09mmol)。将该溶液搅拌30分钟，然后直接纯化。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至50％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(13.7mg，42％产率)。
LC/MS：C50H70FN9O17的计算值m/z＝1088.2，实测值[M+H]+＝1088.8。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ8.62(d,J＝8.5Hz,1H),8.33(s,1H),7.66(d,J＝12.2Hz,1H),7.35(s,1H),5.52–5.18(m,2H),5.04(s,2H),4.72(q,J＝7.1Hz,1H),4.32(d,J＝7.3Hz,1H),4.15–3.98(m,4H),3.68–3.48(m,35H),3.41–3.34(m,6H),2.18(h,J＝6.8Hz,1H),1.88(q,J＝7.4Hz,2H),1.47(d,J＝7.1Hz,3H),1.13–0.84(m,9H)。
4.58：(2-(吡啶-2-基二硫烷基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.58)
如Wang等人，Nano Lett.,2014,14(10):5577–5583中所述制备标题化合物。
4.59：(2-((2-羟基乙基)二硫烷基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物4.59)
向化合物4.58(200mg，0.7mmol)在DCM(1.4mL)中的溶液中添加β-巯基乙醇(50μL，0.7mmol)并将该溶液在室温下搅拌5小时。将溶液用DCM(10mL)稀释，用水(3×10mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩成油状物。如一般程序9中所述完成纯化，使用10g硅胶柱并用0％至10％MeOH/DCM洗脱，得到无色固体状的标题化合物(212mg，82％产率)。
LC/MS：C11H23NO3S2的计算值m/z＝253.1，实测值[M+H,-Boc]+＝154.0。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ4.94(s,1H),3.91(t,J＝5.7Hz,2H),3.49(q,J＝6.4Hz,2H),2.86(dt,J＝23.7,6.1Hz,4H),2.15(s,2H),1.47(s,9H)。
4.60：2-((2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰氨基)乙基)二硫烷基)乙基(4-硝基苯基)碳酸酯(化合物4.60)
向在25mL圆底烧瓶中的化合物4.59(212mg，0.837mmol)添加4M HCl/二噁烷溶液(5mL)并将溶液在室温下搅拌30分钟，然后蒸发至干。将残余物悬浮在EtOAc(10mL)中并蒸发至干，得到胺，为HCl盐且为白色粉末。向该固体中添加3-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙酸2,5-二氧代吡咯烷-1-基酯(245mg，0.92mmol，1.1当量)和N-乙基二异丙胺(0.438mL，2.51mmol)于DMF(1.7mL)中的溶液。将该溶液在室温下搅拌20分钟，然后添加4-硝基苯基碳酸酯(280mg，0.92mmol)，然后将反应物搅拌过夜。如一般方案9中所述完成粗反应混合物的纯化，其中使用12g C18快速柱，并用10％至100％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到白色固体状的标题化合物(141mg，36％产率)。
LC/MS：C18H19N3O8S2的计算值m/z＝469.5，实测值[M+H]+＝470.2。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.37–8.25(m,2H),7.46–7.35(m,2H),6.71(d,J＝2.1Hz,2H),6.32(s,1H),4.55(t,J＝6.6Hz,2H),3.83(t,J＝7.0Hz,2H),3.65–3.50(m,2H),3.09–2.99(m,2H),2.84(q,J＝6.1Hz,2H),2.52(td,J＝7.1,3.1Hz,2H)。
4.61：(S)-((9-氨基-4-乙基-8-氟-4-羟基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-11-基)甲基)氨基甲酸2-((2-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰氨基)乙基)二硫烷基)乙酯(DiS-化合物145)
将化合物4.60(18mg，0.038mmol)和N-乙基二异丙胺(15uL，0.087mmol)在DMF(300uL)中的溶液添加到化合物145(13mg，0.029mmol)中并在室温下搅拌该溶液20分钟。将溶液用1M HCl水溶液(100uL)酸化并直接纯化。如一般程序9中所述完成制备型HPLC纯化，其中用20％至45％CH3CN/H2O+0.1％TFA梯度洗脱，得到黄色固体状的标题化合物(6.8mg，32％产率)。
LC/MS：C33H33FN6O9S2的计算值m/z＝740.8，实测值[M+H]+＝741.5。
1H NMR(300MHz,10％D2O/CD3CN)δ7.63(d,J＝12.1Hz,1H),7.39–7.22(m,2H),6.74(d,J＝6.7Hz,2H),5.50(d,J＝16.2Hz,1H),5.26(d,J＝16.2Hz,1H),5.20(s,2H)4.69(s,2H),4.28(t,J＝6.3Hz,2H),3.62(t,J＝7.0Hz,2H),3.31(t,J＝6.6Hz,2H),2.74–2.64(m,2H),2.35(t,J＝7.0Hz,2H),1.90(dd,J＝15.5,8.1Hz,2H),1.23–1.04(m,6H),0.93(t,J＝7.4Hz,3H)。
实施例5：喜树碱类似物的体外细胞毒性
对以下癌细胞系体外评估喜树碱类似物的细胞毒性：SK-BR-3(乳腺癌)、SKOV-3(卵巢癌)、Calu-3(肺癌)、ZR-75-1(乳腺癌)和MDA-MB-468(乳腺癌)。
简言之，在RPMI 1640+10％FBS中制备表5.1中所示的喜树碱类似物的系列稀释液，并将20uL的每种稀释液添加到384孔板中。通过在0.05％胰蛋白酶中短暂孵育来分离对数期生长中培养的细胞，并将所述细胞以20,000个细胞/mL再悬浮于相应的培养基中(ZR-75细胞除外，其以10,000个细胞/mL再悬浮)。然后将50uL细胞悬浮液添加到容纳有供试品的板中。将细胞与供试品在37℃下孵育4天(ZR-75细胞除外，将其孵育5天)。通过(Promega Corporation,Madison,WI)评估增长抑制，并在SynergyTMH1酶标仪(BioTek Instruments,Winooski,VT)上测量发光。通过GraphPad Prism(GraphPadSoftware,San Diego,CA)确定IC50值。计算的pIC50值示于表5.1中。
表5.1：喜树碱类似物的体外细胞毒性(pIC50)
/>
/>
*ND＝未测定
实施例6：制备包含喜树碱类似物的抗HER2抗体-药物缀合物
将如实施例4中所述制备的包含药物-接头的示例性抗体-药物缀合物(ADC)如下缀合至曲妥珠单抗。
用5mM的DTPA在PBS中的溶液(pH 7.4)将1mg的曲妥珠单抗(HERCEPTIN，由Roche,South San Francisco,CA制造)的21mg/mL溶液稀释至4mg/mL，并向该溶液中添加TCEP(12当量)。在37℃水浴中孵育3小时后，使用用10mM乙酸钠缓冲液(pH 4.5)平衡的适当尺寸的40kD ZebaTM自旋脱盐柱(Thermo Fisher Scientific,Waltham,MA)去除过量的TCEP。替代性地，在一些情况下，将还原的抗体溶液缓冲液交换到PBS(pH 7.4)或A5Su(10mM乙酸盐pH5，5％蔗糖)中。将马来酰亚胺官能化的药物-接头(15当量)作为10mM DMSO储备液与多达10％DMSO(v/v)一起在两个时间间隔(各7.5当量)中添加到柱纯化的还原曲妥单抗溶液中。通过移液使缀合反应物充分混合，使小瓶避光并在室温下旋转至多2至2.5小时。
使用用10mM乙酸钠(pH 4.5)预平衡的适当尺寸的40kD ZebaTM自旋脱盐柱(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)完成ADC的纯化。替代性地，在一些情况下，将ADC缓冲液交换到PBS(pH 7.4)或A5Su(10mM乙酸钠，pH 5.0，9％蔗糖)。将纯化的缀合物储存在4℃下，并用BCA测定(Pierce BCA蛋白测定(目录号23225)或Pierce microBCA蛋白测定(目录号23235；ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)分析总蛋白含量。
实施例7：抗HER2 ADC的表征
如下所述通过HPLC-HIC、SEC、CE-SDS和RP-UPLC-MS表征来自实施例6的ADC。平均药物-抗体比(DAR)和DAR分布得自对HIC和LC-MS数据的解释。除非另有说明，否则缀合程序导致每个链间和铰链巯醇的修饰，从而产生具有DAR 8的ADC。
使用ToxinSensorTM单一测试试剂盒(Genscript Biotech,Piscataway,NJ；目录号L00450)或LAL试剂盒(灵敏度：0.005EU/mL，产品代码：PTS20005F)(CharlesRiver Laboratories,Wilmington,MA)评估内毒素水平，其中抗体药物缀合物的最终阈值设定为<0.5EU/mg。
通过RP-UPLC-MS评估残留游离药物(FD)和药物-接头水平，并基于以下等式计算，其中阈值设定为1％：
通过HIC确定DAR
如Antibody Drug Conjugates,Methods in Molecular Biology，2013，第1045卷，第275-284页，L.Ducry编辑中所述，通过HIC评估ADC的平均DAR。在室温下，使用用5倍柱体积的缓冲液A(1.5M(NH4)2SO4，25mM PO4 3-，pH＝6.95)预平衡的TSKgel丁基-NPR柱(2.5μm，4.6×35mm，TOSOH Bioscience GmbH,Griesheim,Germany)在Agilent Infinity II1290HPLC上进行实验。通常，将浓度为2mg/mL至3mg/mL的20μg至30μg样品加载到具有95％缓冲液A和5％缓冲液B(75％25mM PO4 3-加25％异丙醇，pH 6.95)的柱上，并使用表7.1中所示的梯度以0.5mL/min运行15分钟。使用适当的参数对HIC色谱图进行积分，这些参数提供各峰的完整基线-基线积分，随后对显示合理分离的各峰进行积分。作为参考，在相同梯度上运行非缀合曲妥珠单抗，以获得DAR 0物质的HIC保留时间。
表7.1：用于HIC的梯度
通过LC/MS确定DAR
在室温下用Endo S将ADC去糖基化1小时。在室温下用50mM TCEP将去糖基化的ADC还原1小时，并进样到与Agilent 6545四极杆飞行时间(Q-TOF)质谱仪(AgilentTechnologies,Inc.,Santa Clara,CA)联用的Agilent 1290Infinity II LC上。使用PLRP-S柱(8uM，50×2.1mm)以0.3ml/min的流速和20％至40％流动相A/流动相B的线性梯度分离重链和轻链。流动相A：0.1％FA，0.025％TFA和10％IPA的水溶液。流动相B：0.1％FA和10％IPA的乙腈溶液。使用MassHunter(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA)定性分析进行去卷积和数据分析。/>
SEC-HPLC分析
在室温下，使用具有Advance Bio SEC柱(2.7μm，7.8×150mm)的AgilentInfinity II 1260HPLC(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA)进行分析型SEC，所述柱用5倍柱体积的缓冲液(150mM Na2PO4，pH 6.95)平衡。通常，将浓度为2mg/mL至3mg/mL的20mg至30mg样品以1mL/min等静压洗脱7分钟，在A280进行吸光度监测。对色谱图进行积分，以提供各峰的完整基线-基线积分，部分分离峰之间的分离位置合理。基于未修饰的曲妥珠单抗的SEC图谱，将对应于IgG的主要组分的峰(大约保留时间3.3分钟)报告为单体。在3.3分钟之前出现的任何峰被指定为HMWS(高分子量物质)，并且在3.3分钟之后出现的任何峰被指定为LMWS(低分子量物质)，排除溶剂峰(超过5.2分钟)。
CE-SDS分析
首先将所有ADC样品稀释至1mg/mL，然后按照制造商的方案(Protein ExpressAssay LabChipTM；PerkinElmer,Inc.,Waltham,MA)在96孔PCR板中制备样品。简言之，在存在(还原)或不存在(非还原)400mM二硫苏糖醇(DTT)的情况下，将2μg ADC与7uL ProteinExpress缓冲液混合，随后在95℃下热变性5分钟。然后在数据采集之前将样品以1:2的比率稀释于dH2O中。每次CE-SDS运行后，使用LabChipTMReviewer(PerkinElmer,Inc.,Waltham,MA)分析凝胶和相应的电泳图谱。
通过HPLC-HIC、LC-MS和HPLC-SEC确定的ADC的生物物理特性示于表7.2中。表7.2中还包括两种对照ADCT-MC-GGFG-AM-DXd和T-MT-GGFG-AM-DXd的特性，所述对照ADC包含缀合至药物-接头MC-GGFG-AM-DXd或药物-接头MT-GGFG-AM-DXd的曲妥珠单抗(T)。这些药物-接头具有以下结构：
MC-GGFG-AM-DXd
MT-GGFG-AM-DXd
/>
表7.2：ADC的生物物理特性
1来自HPLC-HIC
2由于ADC聚集量高而未确定
实施例8：抗HER2 ADC的体外细胞毒性
使用实施例5中所述的程序在SKBR-3(乳腺癌)、Calu3(肺癌)和MDA-MB-468(乳腺癌)细胞中测试来自实施例6的所选ADC的体外细胞毒性。结果示于表8.1中。
表8.1：ADC的体外细胞毒性(pIC50)
实施例9：抗HER2 ADC的旁观者活性
如下所述评估来自实施例6的所选ADC对癌细胞发挥旁观者杀伤作用的能力。旁观者杀伤最通常发生在ADC特异性摄取到抗原阳性细胞中之后。ADC的运输和降解导致游离药物的释放，其然后穿过细胞膜以杀死附近(旁观者)细胞。
测试ADC为：T-MT-GGFG-AM-化合物136、T-MT-GGFG-AM-化合物129、T-MT-GGFG-AM-化合物139、T-MT-GGFG-化合物141、T-MT-GGFG-AM-化合物141、T-MT-GGFG-化合物145、T-MT-GGFG-化合物148、T-MT-GGFG-化合物140，以及对照T-MC-GGFG-AM-DXd和T-MT-GGFG-AM-DXd。
还包括ADC T-ME-PEG2-GGFG-DXd2。该ADC已显示缺乏旁观者活性(参见Ogitani等人,2016,Cancer Sci.,107:1039-1046)并被包括作为阴性对照。ADC包含缀合至以下所示的药物-接头的曲妥珠单抗(T)：
ME-PEG2-GGFG-DXd2
将SK-BR3(HER2+)和MDA-MB-468(HER2-)细胞作为单培养物或共培养物分别以30,000个细胞和10,000个细胞接种在24孔板中的250uL测定培养基(McCoy’s+10％FBS)中。将ADC在测定培养基中稀释至2nM和0.2nM，并将250uL添加到含有细胞的板中(1nM和0.1nM最终ADC浓度)。将细胞与测试ADC在37℃下孵育4天，并通过TrypLETMExpress Enzyme(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)分离。使用活力检测染料-1(ThermoFisher Scientific,Waltham,MA)和缀合至Alexa/>647(Biolegend,Inc.,SanDiego,CA；目录号324412)的抗HER2抗体对细胞进行染色。在室温下孵育20分钟后，将细胞在FACS缓冲液中洗涤并重悬于每孔100uL FACS缓冲液中。取50uL在BD FortessaTM流式细胞仪(BD Biosciences,San Jose,CA)上分析。通过/>-1染色对死亡细胞设门。然后分别通过HER2+和HER2-门中事件的数目确定SK-BR3和MDA-MB-468细胞的数目。活力％计算为处理的细胞数目除以未处理的细胞数目。
结果如图2所示。通过比较作为单一培养物处理的HER2-MDA-MB-468细胞(黑色条)与作为与HER2+SK-BR-3细胞共培养物处理的细胞(灰色条)的活力来评价旁观者效应。与单一培养物相比，共培养物中活力的更大降低表明更高的旁观者效应。
实施例10：抗HER2 ADC的血浆稳定性
如下在小鼠血浆中测试来自实施例6的所选ADC的稳定性。将ADC在小鼠血浆(BioIVT,Westbury,NY)中稀释至0.5mg/mL并在37℃水浴中孵育。在10分钟、1.5小时、8小时、24小时、72小时和7天取出等分试样并在-80℃下冷冻。一旦收集了所有等分试样，就将它们解冻并准备用于亲和捕获结合LC-MS分析。
使用前将生物素化的山羊抗人IgG F(ab’)2(Jackson ImmunoResearchLaboratories,Inc.,West Grove,PA)与链霉亲和素Mag珠粒(GE HealthcareBio Sciences,Uppsala,Sweden)在室温下偶联30分钟。将含有约2ug ADC的小鼠血浆样品稀释于PBS中并在室温下用EndoS去糖基化1小时。将捕获抗体-链霉亲和素珠粒混合物添加到去糖基化的样品中，并在室温下孵育1.5小时。进行三次PBS洗涤，然后在室温下将样品用25mM DTT还原1小时，随后进行另外三次PBS洗涤。为了洗脱捕获的ADC，首先用水洗涤样品一次，然后用水+10％乙腈洗涤一次，然后在室温下在洗脱缓冲液(水+20％乙腈+1％甲酸)中孵育1小时。收集含有洗脱的ADC的上清液并进样到与Agilent 6545四极杆飞行时间(Q-TOF)光谱仪(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA)联用的Agilent1290Infinity II LC上。使用PLRP-S(/>8uM，50×2.1mm)柱，并将流速设定为0.3mL/min。流动相A：0.1％FA，0.025％TFA和10％IPA的水溶液，和流动相B：0.1％FA和10％IPA的乙腈溶液。洗脱梯度在20分钟内从2％增加到40％B。使用MassHunter(AgilentTechnologies,Inc.,Santa Clara,CA)定性分析进行去卷积和数据分析。
孵育7天后的结果示于表10.1中。
表10.1：7天后小鼠血浆中ADC的稳定性
实施例10：抗HER2 ADC的体内评价
如下所述在表达HER2的乳腺癌的JIMT-1异种移植模型(中间)中研究来自实施例6的所选ADC的抗肿瘤活性。评价的ADC为：T-MT-GGFG-AM-化合物136、T-MT-GGFG-AM-化合物129、T-MT-GGFG-AM-化合物139、T-MT-GGFG-化合物140、T-MC-GGFG-AM-化合物141、T-MT-GGFG-AM-化合物141、T-MT-GGFG-化合物141、T-MT-GGFG-化合物145和T-MT-GGFG-化合物148，以及对照T-MC-GGFG-AM-DXd。
将肿瘤细胞悬浮液(0.1mL PBS中的5×106个细胞)皮下植入雌性CB17/scid小鼠中。当平均肿瘤体积达到约150mm3时，将动物随机分配到剂量组(每组n＝8)。ADC以约3mg/kg(iv)施用。由于制剂不同，实际剂量在约+30％的范围内变化。每周测量肿瘤体积和体重两次，研究持续时间为28天。
结果示于图3中。
实施例11：制备在C10位具有氨基的其他喜树碱类似物
在C10位具有氨基的喜树碱类似物的附加示例描述如下。这些化合物可使用如上述实施例1至3中所述的原料和方法或本领域技术人员已知的类似方法制备。
实施例12：制备抗FRα抗体-药物缀合物
将如实施例4中所述制备的包含所选药物-接头的ADC缀合至两种抗叶酸受体α(FRα)抗体(v36675和v30384；见表12.1)。下文提供了示例性缀合方案。
v36675-MC-GGFG-AM-DXd1：通过添加5mM DTPA(24mL PBS溶液，pH调节至7.4)和10mM TCEP水溶液(12.5mL，12当量)还原抗FRα抗体v36675(1.5g)在PBS中的溶液(83.5mL)(pH 7.4)。在37℃下3小时后，将还原的抗体用PBS稀释至125mL，并使用XL超滤模块(Ultracel 30kDa 0.005m2；MilliporeSigma,Burlington,MA；PXC030C50)用约5倍渗滤体积(diavolume)的10mM NaOAc(pH 5.5)进行纯化。使用10mM NaOAc(pH 5.5)将纯化的抗体(1133mg)稀释至211mL的最终体积。向抗体溶液中添加6.4mL DMSO和得自10mM DMSO储备溶液的过量的药物-接头(9.43mL；12当量)。缀合反应在室温下和混合下进行75分钟。添加过量的10mM N-乙酰基-L-半胱氨酸溶液(4.72mL，6当量)以淬灭缀合反应。
v36675-MC-GGFG-AM-化合物141、v36675-MC-GGFG-AM-化合物139和v36675-MC- GGFG-化合物141：通过添加5mM DTPA(0.96mL在PBS中，pH调节至7.4)和1mM TCEP水溶液(0.9mL，2.15当量)还原抗FRα抗体v36675(60mg)在PBS中的溶液(2.95mL)(pH 7.4)。在37℃下100分钟后，用0.92mL的PBS(pH 7.4)和1.08mL的100mM NaOAc(pH 5.5)稀释1.6mL还原的抗体。向抗体溶液中添加289uL的DMSO和得自10mM DMSO储备溶液的过量的药物-接头(111uL；8当量)。缀合反应在室温下和混合下进行60分钟。添加过量的10mM半胱胺-HCl溶液(444uL，32当量)以淬灭每个缀合反应。
表12.1：抗体-药物缀合物
1参见表4和5(图4和5)
2帕利珠单抗(抗RSV；阴性对照)
实施例13：抗FRαADC的纯化和表征
使用XL超滤模块(MilliporeSigma,Burlington,MA)纯化ADC的大规模制备物并灭菌过滤(0.22μm)。下面提供示例性方案。
将来自实施例12的淬灭的ADC溶液用10mM NaOAc(pH 5.5)稀释至约5mg/mL，并使用XL超滤模块(Ultracel 30kDa 0.005m2；MilliporeSigma,Burlington,MA；PXC030C50)用11倍渗滤体积的10mM NaOAc(pH 4.5)，随后4倍渗滤体积的10mM NaOAc(pH4.5)与9％(v/v)蔗糖进行纯化。然后将纯化的ADC无菌过滤(0.2μm)。
在AKTATM纯色谱系统(Cytiva Life Sciences,Marlborough,MA)上使用53mLHiPrep 26/10脱盐柱(Cytiva Life Sciences,Marlborough,MA)和由10mM NaOAc(pH 4.5)与150mM NaCl组成的流动相以及10mL/min的流速纯化ADC的小规模制备物。
纯化后，通过BCA测定，参照使用抗体v36675生成的标准曲线确定ADC的浓度，通过使用取自文献(欧洲专利号3 342 785，针对MC-GGFG-AM-DXd1)的消光系数测量280nm处的吸收来估计ADC的浓度，或通过实验确定ADC的浓度(对于剩余的药物-接头)。ADC还通过如下所述的疏水相互作用色谱(HIC)和尺寸排阻色谱(SEC)来表征。
疏水相互作用色谱
通过HIC分析抗体和ADC，以估计药物-抗体比(DAR)。在Agilent Infinity II1290HPLC(Agilent Technologies,Santa Clara,CA)上使用丁基-NPR柱(2.5μm，4.6×35mm；TOSOH Bioscience GmbH,Griesheim,Germany)并采用95/5％MPA/MPB至5/95％MPA/MPB的梯度在12分钟内以0.5mL/min的流速进行色谱分析(MPA＝1.5M(NH4)2SO4，25mMNaxPO4，pH 7，以及MPB＝75％25mM NaxPO4，pH 7，25％异丙醇)。通过280nm处的吸光度进行检测。
尺寸排阻色谱
在Agilent Infinity II 1260HPLC(Agilent Technologies,Santa Clara,CA)上，使用AdvanceBio SEC柱(300埃，2.7μm，7.8×150mm)(Agilent,Santa Clara,California)和由150mM磷酸盐(pH 6.95)组成的流动相以及1mL/min的流速，通过SEC评估抗体和ADC(约15μg至150μg，5μL进样体积)的聚集程度。通过280nm处的吸光度进行检测。
结果
通过HPLC-HIC色谱图的积分评估DAR0、DAR2、DAR4、DAR6和DAR8物质对纯化的ADC的平均DAR的单独贡献。每个ADC的平均DAR由每个DAR物质的加权平均值确定。当四舍五入至最接近的整数时，每个ADC的平均DAR与表12.1中所示的目标DAR相同。
通过HPLC-SEC色谱图的积分评估聚集程度和单体含量。每个ADC的单体峰被鉴定为与获得每个ADC的非缀合抗体具有相同保留时间的峰。相对于单体物质具有较早保留时间的所有峰被确定为聚集物质。对每个ADC确定的单体物质百分比示于表13.1中。所有ADC制备物均显示>95％的单体物质。
表13.1：ADC的目标DAR和单体物质％
实施例14：抗FRαADC的体外细胞毒性-2D单层
按照实施例5中所述的方案，在一组FRα表达细胞系中评估来自实施例12的所选ADC的细胞生长抑制(细胞毒性)能力。所用细胞系为：KB-HeLa(宫颈癌)、JEG-3(绒毛膜癌)、T-47D(乳腺癌)和MDA-MB-468(乳腺腺癌；FRα-阴性)。包含抗体帕利珠单抗(v21995)的ADC用作非靶向对照。
基于空白孔(未添加供试品)，使用GraphPad Prism 9软件(GraphPad Software,San Diego,CA)计算％细胞毒性值并针对供试品浓度绘制曲线。结果示于表14.1中。所有v30384 ADC在FRα表达细胞系KB-HeLa、JEG-3和T-47D中均显示出显著的细胞毒性，在4天处理后产生单位数nM或更低的EC50值。在FRα阴性细胞系MDA-MB-468中，ADC未显示靶标依赖性细胞毒性。v30384和对照(帕利珠单抗)ADC在该细胞系中显示出相当的效力。
表14.1：体外细胞毒性-2D单层
*不完整曲线
实施例15：抗FRαADC的体外细胞毒性-3D球状体
如下所述，在一组FRα表达细胞系球状体中评估来自实施例12的所选ADC的细胞毒性能力。所用细胞系为IGROV-1(卵巢腺癌)、T-47D(乳腺癌)、OVCAR-3(卵巢腺癌)、HEC-1-A(子宫腺癌)和EBC-1(肺癌；FRα-阴性)。包含抗体帕利珠单抗(v21995)的ADC用作非靶向对照。
简言之，将细胞接种在Ultra-Low Attachment 384孔板中，离心并在标准培养条件下孵育，以允许球状体形成和生长。然后用在细胞生长培养基中生成的供试品滴定来处理单培养细胞系球状体。将球状体在标准培养条件下孵育6天。孵育后，将3D试剂(Promega Corporation,Madison,WI)掺入所有孔中。在室温下将板在黑暗中孵育1小时，并使用BioTek Cytation 5细胞成像多模式读数器(Agilent Technologies,Inc.,Santa Clara,CA)进行发光定量。基于空白孔(未添加供试品)，使用GraphPad Prism 9软件(GraphPad Software,San Diego,CA)计算细胞毒性百分比值并针对供试品浓度绘制曲线。
结果示于表15.1中。所有v30384ADC在FRα表达单培养球状体(IGROV-1、T-47D、OVCAR-3和HEC-1-A)中均显示出显著的细胞毒性，在6天处理后在球状体中产生单位数nM的EC50值。在FRα阴性细胞系球状体中，EBC-1、v30384 ADC未显示靶标依赖性细胞毒性。v30384和对照(帕利珠单抗)ADC在该细胞系球状体中显示出相当的效力。
表15.1：体外细胞毒性-3D球状体
实施例16：抗FRαADC的体内评价
如下所述在许多异种移植模型中评估来自实施例12的所选ADC的体内抗肿瘤活性。包含抗体帕利珠单抗(v21995)的ADC在一些模型中用作非靶向对照。每个异种移植物研究中使用的ADC、异种移植模型、剂量和研究持续时间汇总于表16.1中。对于每个异种移植研究，每周两次测量动物的肿瘤体积和体重。
表16.1：研究参数
对于两个OV90模型研究，将肿瘤细胞悬浮液(0.1ml 50％中的1×107个细胞)皮下植入雌性CB.17SCID小鼠体内。当平均肿瘤体积达到100至150mm3时，将动物随机分组(对于OV90#1，每组n＝6；以及对于OV90#2，每组n＝8)，并在研究第1天用单一IV剂量的供试品治疗，如表16.1中所示。在多个时间点收集血清用于PK分析。
对于NCI-H2110 CDX模型研究，将肿瘤细胞悬浮液(0.1ml 50％中的1×107个细胞)皮下植入CB.17SCID小鼠体内。当平均肿瘤体积达到约140mm3时，将动物随机分组(每组n＝6)，并在研究第0天用单一IV剂量的供试品治疗，如表16.1所示。
结果
结果示于图10中。在OV90模型研究#1(参见图10A)中，当以3mg/kg给药时，与对照相比，所有ADC均导致肿瘤生长速率的统计学显著降低(p<0.02)。与v30384-MC-GGFG-AM-DXd相比，ADC v30384-MT-GGFG-AM-化合物139、v30384-MT-GGFG-AM-化合物141和v30384-MT-GGFG-化合物141均导致对肿瘤生长速率更强的抑制(p<0.01)。类似地，在OV90模型研究#2(参见图10B)中，当以3mg/kg给药时，v30384-MT-GGFG-化合物140、v30384-MT-GGFG-AM-化合物141和v30384-MC-GGFG-AM-化合物141均导致肿瘤消退，而与对照相比，v30384-MC-GGFG-AM-DXd对肿瘤生长具有边际效应。非靶向v21995 ADC基本上不影响肿瘤生长。
在NCI-H2110 CDX模型研究中(参见图10C)，当以6mg/kg给药时，v30384-MT-GGFG-化合物140、v30384-MC-GGFG-化合物140和v30384-MT-GGFG-化合物148在给药后均导致肿瘤生长停滞约2周，这代表与对照、v30384-MC-GGFG-AM-DXd和非靶向v21995 ADC中的每一者相比，肿瘤生长速率的统计学显著抑制(p<0.01)。v30384-GGFG-AM-DXd、v30384-MC-GGFG-AM-化合物141、v30384-MT-GGFG-AM-化合物141和v30384-MT-GGFG-AM-化合物139在该模型中没有导致显著的肿瘤生长速率抑制。
实施例17：抗FRαADC在体内功效模型中的药代动力学
从实施例16所述的异种移植研究中收集血清，并如下分析ADC的药代动力学(PK)。使用抗人IgG1 Fc捕获抗体(Jackson Immuno Research Labs,West Grove,PA；目录号709-005-098)和HRP缀合的抗IgG1 Fab检测抗体(Jackson Immuno Research Labs；目录号109-035-097)通过夹心ELISA测量小鼠血清中的供试品浓度，以检测总IgG水平。使用SynergyTMH1 Hybrid多模式酶标仪(BioTek Instruments,Winooski,VT)测量450nM处的吸光度。使用Phoenix WinNonlinTM软件(Certara,Princeton,NJ)通过非房室分析来计算药代动力学参数。
ADC的消除半衰期计算值示于表17.1中。总之，在免疫受损的荷瘤小鼠中的OV90研究证明，利用喜树碱类似物化合物141、化合物139和化合物140的v30384ADC具有有利的PK特性，表现为与v30384-MC-GGFG-AM-DXd1(对照)相比更长或相当的消除半衰期。与OV90模型相比，在NCI-H2110模型中观察到所有v30384 ADC(包括DXd1对照)的消除半衰期较短。在OV90和NCI-H2110模型中，非靶向对照v21995 ADC的消除半衰期相当。
表17.1：ADC的消除半衰期
实施例18：抗FRαADC的鼠耐受性
如下在小鼠中以60mg/kg和200mg/kg的单剂量评估来自实施例12的所选ADC的耐受性。将供试品以60mg/kg和200mg/kg通过20ml/kg腹腔注射施用给小鼠(Balb/c，雌性，6-8周龄，约20g)。从每个剂量组中，3只小鼠在给药后计划观察3周。另外3只小鼠在给药后计划观察1周，随后终止并检查福尔马林固定、石蜡包埋的器官。如果体重较给药前水平下降≥20％，则对小鼠实施安乐死。计划在给药后24小时和7天收集所有小鼠的血清用于药代动力学分析。剂量和计划外死亡汇总在表18.1中。
表18.1：鼠耐受性研究中的ADC、剂量和计划外死亡
结果
ADC v30384-MT-GGFG-AM-化合物139、v30384-MT-GGFG-AM-化合物141、v30384-MT-GGFG-化合物141和v30384-MC-GGFG-化合物141在60mg/kg和200mg/kg剂量下均耐受良好，在21天内没有观察到显著的体重减轻，类似于施用媒介物对照或ADC 30384-MC-GGFG-AM-DXd1的小鼠。ADC v30384-MT-GGFG-化合物140、v30384-MT-GGFG-化合物148和v30384-MC-GGFG-化合物140在给药后3至6天之间导致体重快速减轻、死亡或由于濒死状态而处死(参见表18.1)。
在用ADC v30384-MT-GGFG-AM-化合物139、v30384-MT-GGFG-AM-化合物141、v30384-MT-GGFG-化合物141或v30384-MC-GGFG-化合物141以60mg/kg或200mg/kg处理的小鼠中未观察到与治疗相关的宏观变化，对照ADC 30384-MC-GGFG-AM-DXd1也是如此。在用60mg/kg和/或200mg/kg的v30384-MT-GGFG-化合物140、v30384-MT-GGFG-化合物148和v30384-MC-GGFG-化合物140治疗的临终前动物中存在被认为与ADC相关的宏观变化。
在施用ADC v30384-MT-GGFG-AM-化合物139或v30384-MC-GGFG-化合物141或对照ADC v30384-MC-GGFG-AM-DXd1的小鼠中不存在与治疗相关的显微镜发现。被认为与以≥60mg/kg剂量施用ADC v30384-MT-GGFG-化合物140、v30384-MT-GGFG-化合物148和v30384-MC-GGFG-化合物140相关的显微镜变化存在于肠、骨髓、胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结中。
在本说明书中引用的所有专利、专利申请、出版物和数据库条目的公开内容特此通过引用明确地整体并入，其程度如同明确单独地指出每个此类单独的专利、专利申请、出版物和数据库条目通过引用并入一样。
对本领域技术人员来说显而易见的本文描述的特定实施方案的修改旨在包括在以下权利要求的范围内。

Claims (58)

1.一种具有式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其受保护形式，
其中：
R1选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2，并且
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，
并且其中：
当R1为-NH2时，则R为R3或R4，并且当R1不是-NH2时，则R为R4；
R3选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R4选自：
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、-芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2，
条件是所述化合物不是(S)-9-氨基-11-丁基-4-乙基-4-羟基-1,12-二氢-14H-吡喃并[3',4':6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-3,14(4H)-二酮。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R1为NH2，并且R为R3或R4。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R2不是-H。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3，并且R为R4。
5.根据权利要求1或4所述的化合物，其中R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中R4选自：
7.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(II)：
或其药学上可接受的盐或其受保护形式，
其中：
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R20选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2。
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3。
9.根据权利要求7所述的化合物，其中R2选自：-CH3、-CF3、-F、-Cl、-OCH3和-OCF3。
10.根据权利要求7至9中任一项所述的化合物，其中R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
11.根据权利要求7至9中任一项所述的化合物，其中R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
12.根据权利要求7至9中任一项所述的化合物，其中R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
13.根据权利要求7所述的化合物，其具有式(IIa)：
其中：R20、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R10’、R11、R12、R13、R14、R14’、R16、R17、R18、R19、Xa、Xb和Xc如权利要求7中所定义。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中R20选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、
15.根据权利要求1所述的化合物，其具有式(III)：
或其药学上可接受的盐或其受保护形式，
其中：
R2选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R15选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R4选自：
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-NR14R14’、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S，并且
Xc选自：O、S和S(O)2。
16.根据权利要求15所述的化合物，其中R2选自：-H、-F、-Br和-Cl。
17.根据权利要求15所述的化合物，其中R15选自：-CH3、-CF3、-OCH3和-OCF3。
18.根据权利要求15所述的化合物，其中R15为-CH3或-OCH3。
19.根据权利要求15至18中任一项所述的化合物，其中R4选自：
20.根据权利要求15所述的化合物，其具有式(IIIa)或(IIIb)：
其中：R4、R5、R8、R9、R10、R10’、R11、R12、R13、R14、R14’、R16、R18、R19、Xa、Xb和Xc如权利要求15中所定义。
21.根据权利要求20所述的化合物，其中R4选自：
22.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基、磺酰氨基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基和磺酰氨基。
24.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自表1中所列的化合物100至168。
25.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至24中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
26.一种具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
D是根据权利要求1至24中任一项所述的化合物；
m为1至4之间的整数，并且
n为1至10之间的整数。
27.一种具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(IV)的化合物：
其中：
R1a选自：-H、-CH3、-CHF2、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3、-OCF3和-NH2；
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X是-O-、-S-或-NH-，并且R4a选自： 其中*是与X的连接点，并且其中p是1、2、3或4；或
X是O，并且R4a-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
28.根据权利要求27所述的缀合物，其中R1a选自：-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3和-NH2。
29.根据权利要求27所述的缀合物，其中R1a选自：-CH3、-OCH3和NH2。
30.根据权利要求27所述的缀合物，其中R2a选自：-H、-F、-Br和-Cl。
31.根据权利要求27至30中任一项所述的缀合物，其中X是-O-、-S-或-NH-，并且R4a选自：
32.一种具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(V)的化合物：
其中：
R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>/>
R5选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6和R7各自独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17；
R8选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
R10a’选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11选自：-H和-C1-C6烷基；
R12选自：-H、-C1-C6烷基、-CO2R8、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16和
R13选自：-H和-C1-C6烷基；
R14和R14’各自独立地选自：-H、C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R18和R19与它们所键合的N原子一起形成具有0至3个选自下列的取代基的4元、5元、6元或7元环：卤素、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-(C1-C6烷基)-O-R5；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
33.根据权利要求32所述的缀合物，其中R2a为F。
34.根据权利要求32或33所述的缀合物，其中R20a选自：-H、-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5、-(C1-C6烷基)-芳基、/>
35.一种具有式(X)的缀合物：
T-[L-(D)m]n
(X)
其中：
T是靶向部分；
L是接头；
m为1至4之间的整数；
n为1至10之间的整数，并且
D为式(VI)的化合物：
其中：
R2a选自：-H、-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3；
X为-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-CO2R8a、-C(O)-、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、/>
其中*是与X的连接点，并且其中p为1、2、3或4；或
X是O，并且R25-X-选自：
R5a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R6a选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R7a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-C3-C8杂环烷基和-C(O)R17a；
R8a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
每个R9a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；或R9a不存在，并且Xb＝X；
每个R10a独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基和
每个R10a’独立地选自：-H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
每个R10b独立地选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R11a不存在或为-C1-C6烷基；
R12a选自：-C1-C6烷基、-CO2R8a、-芳基、-杂芳基、–(C1-C6烷基)-芳基、-S(O)2R16a和
R13a选自：-H和-C1-C6烷基；
R14a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R14a’选自：H、-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基和-C3-C8杂环烷基；
R16a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R17a选自：-C1-C6烷基、-C3-C8环烷基、-C3-C8杂环烷基、–(C1-C6烷基)-C3-C8杂环烷基、-芳基、-杂芳基和–(C1-C6烷基)-芳基；
R21选自：-C1-C6烷基、–C3-C8环烷基和–(C1-C6烷基)-O-R5a；
R22和R23各自独立地选自：-H、-卤素、-C1-C6烷基和-C3-C8环烷基；
R24、R25和R26各自为-C1-C6烷基；
Xa和Xb各自独立地选自：NH、O和S；
Xc选自：O、S和S(O)2，并且
表示与接头L的连接点。
36.根据权利要求35所述的缀合物，其中R2a选自：-CH3、-CF3、-F、-Br、-Cl、-OH、-OCH3和-OCF3。
37.根据权利要求35所述的缀合物，其中R2a为F。
38.根据权利要求35至37中任一项所述的缀合物，其中X为-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、–(C1-C6烷基)-芳基、 或X为O，并且R25-X-选自：
39.根据权利要求35至37中任一项所述的缀合物，其中X是-O-、-S-或-NH-，并且R25选自：-C1-C6烷基、-(C1-C6烷基)-O-R5a、-(C1-C6烷基)-芳基、
40.根据权利要求27至39中任一项所述的缀合物，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基、磺酰氨基、烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基。
41.根据权利要求27至39中任一项所述的缀合物，其中每个烷基、环烷基、杂环烷基、芳基和杂芳基任选地被一个或多个选自下列的取代基取代：卤素、酰基、酰氧基、烷氧基、羧基、羟基、氨基、酰氨基、硝基、氰基、叠氮基、烷硫基、硫基、磺酰基和磺酰氨基。
42.根据权利要求26至41中任一项所述的缀合物，其中m是1或2。
43.根据权利要求26至42中任一项所述的缀合物，其中n在2与8之间。
44.根据权利要求26至43中任一项所述的缀合物，其中L是可裂解的接头。
45.根据权利要求44所述的缀合物，其中L是蛋白酶可裂解的接头。
46.根据权利要求44或45所述的缀合物，其中L包括二肽、三肽或四肽。
47.根据权利要求26至46中任一项所述的缀合物，其中T与肿瘤相关抗原结合。
48.根据权利要求26至47中任一项所述的缀合物，其中T是抗体或抗原结合抗体片段。
49.根据权利要求48所述的缀合物，其中所述抗体是双特异性或多特异性抗体。
50.一种药物组合物，其包含根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
51.一种抑制癌细胞增殖的方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物接触。
52.一种杀死癌细胞的方法，其包括使所述细胞与有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物接触。
53.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物。
54.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性疾病的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物。
55.一种治疗有需要的受试者的病毒感染的方法，其包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物。
56.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物，其用于疗法中。
57.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物，其用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染。
58.根据权利要求1至24中任一项所述的化合物或根据权利要求26至49中任一项所述的缀合物在制造用于治疗癌症、自身免疫性疾病或病毒感染的药物中的用途。
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