CN117677400A - 抗her3抗体药物偶联物及其组合物和用途 - Google Patents

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Abstract

提供了一种抗HER3抗体药物偶联物，具体包含相连接的抗体部分、中间接头部分和细胞毒药物部分。提供的抗体药物偶联物实现了优异的抗肿瘤活性或/和较好的安全性。提供的抗体药物偶联物可以用于癌症的治疗。

Description

抗HER3抗体药物偶联物及其组合物和用途 技术领域
本发明涉及抗体药物偶联物，其包含相连接的抗体部分、中间接头部分和细胞毒药物部分。本发明还涉及所述抗体药物偶联物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
背景技术
HER3(human epidermal growth factor receptor 3，人类表皮生长因子受体3)，也称为ErbB-3(Receptor tyrosine-protein kinase erbB-3)，是人类表皮生长因子受体(HER/EGFR/ERBB)家族的成员，该家族包括EGFR(ErbB-1)、HER2/c-neu(ErbB-2)、HER3(ErbB-3)和HER4(ErbB-4)。HER3具有细胞外配体结合结构域(ECD)、ECD内的二聚结构域、跨膜结构域、蛋白酪氨酸激酶结构域(TKD)和C端磷酸化结构域，但缺乏胞内酪氨酸激酶活性。
HER3的配体——神经调节蛋白(neuregulin，NRG；又称为heregulin，HRG)与HER3的胞外结构域相结合，并通过促进与其他HER家族成员二聚化，以及其胞内结构域的转磷酸作用，激活受体介导的信号传导通路。HER3与其它HER家族成员的二聚体形成扩展HER3的信号传导潜力，而且不仅充当信号多样化的手段，还用作信号放大的手段。例如，HER2/HER3杂二聚体诱导HER家族成员中最重要的促有丝分裂信号之一。HER3在各种癌症中普遍表达，包括乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胃癌、肺癌、皮肤癌和胰腺癌。
抗体药物偶联物(Antibody-Drug Conjugate，ADC)是结合了治疗性抗体的高特异性和细胞毒药物的高杀伤活性的一类药物，其中治疗性抗体部分与细胞毒药物部分通过中间的接头部分连接。目前全球范围内已有至少十款ADC药物上市，其中brentuximab vedotin、polatuzumab vedotin与enfortumab vedotin的抗体部分分别针对靶点CD30、CD79b与Nectin-4，Trastuzumab emtansine与Trastuzumab deruxtecan的抗体部分针对HER2靶点，gemtuzumab ozogamicin与inotuzumab ozogamicin的抗体部分分别针对CD33和CD22靶点，sacituzumab govitecan的抗体部分针对TROP2靶点，最新获批的belantamab mafodotin和loncastuximab tesirine分别针对BCMA和CD19靶点。细胞毒药物部分：brentuximab vedotin、polatuzumab vedotin、enfortumab vedotin和belantamab mafodotin均采用作用于微管的奥利斯他汀类(auristatins)，Trastuzumab emtansine采用作用于微管的美登素类(maytansinoid)毒素分子，gemtuzumab ozogamicin与inotuzumab ozogamicin采用作用于DNA的卡奇霉素类(calicheamicins)毒素分子，Trastuzumab deruxtecan和sacituzumab govitecan均采用喜树碱类毒素分子，loncastuximab tesirine则采用作用于DNA的PBD二聚体。中间接头部分：Trastuzumab emtansine、belantamab mafodotin采用不可断裂接头，其余八个分子都采用可断裂的接头。
艾日布林(Eribulin，下式I)为天然海洋产物halichondrin B的一种合成类似物，其可抑制微管生长期，其通过基于微管蛋白的抗有丝分裂机制发挥作用，导致G2/M细胞周期的停滞、有丝分裂纺锤体的破坏，并最终在长期的有丝分裂阻滞后导致细胞凋亡。艾日布林目前已获批用于转移性乳腺癌和软组织肉瘤的治疗。
ADC类药物结合了细胞毒小分子的高效能和抗体对特定肿瘤细胞的高选择性的双重优点，当前仍然存在开发可以针对更多适应症的高效低毒的ADC药物的需求。
发明内容
抗体药物偶联物(ADC)
本发明提供了一种抗体药物偶联物，其中，抗体或其抗原结合片段与细胞毒药物艾日布林或其衍生物相偶联；优选地，所述抗体或其抗原结合片段特异性结合HER3。
在一个方面，本发明提供了一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab表示抗体部分，L表示接头部分，U表示细胞毒药物部分，n为选自1至10的整数或小数。在某些实施方案中，抗体部分Ab与接头部分通过特定官能团连接，该抗体部分可以与抗原特异性结合。
在一个方面，本发明提供了通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中细胞毒药物部分U与抗体部分Ab通过接头部分L偶联。在一些具体实施方案中，本发明提供的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中每一个细胞毒药物部分U与抗体部分Ab通过一个接头部分L偶联。本发明的接头部分L可以通过本领域已知的任何方法与抗体部分连接，优选接头部分与抗体部分通过巯基和/或氨基连接。在一些更优选的实施方案中，本发明的接头部分通过巯基与抗体部分相连。
在一个方面，本发明提供通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中细胞毒药物部分U与抗体部分Ab通过接头部分L偶联，所述接头部分可以是可切割的接头或者不可切割的接头。在一些实施方案中，本发明的接头部分为可切割的接头，例如可以是依赖低pH值降解型(包括腙键、碳酸酯键等)、蛋白酶解型(包括肽基键)或者依赖高谷胱甘肽浓度降解型(包括二硫键)等。可切割接头可以在靶细胞内断裂，从而释放细胞毒药物。在另一些实施方案中，本发明的接头部分为不可切割的接头，例如可以是马来酰亚氨基己酰基等。
在一个方面，本发明提供了一种通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中抗体部分Ab与一个或更多个细胞毒药物部分U偶联，细胞毒药物例如可以选自生物碱类、抗代谢类、抗肿瘤抗生素类、烷化剂类及铂类等，优选的细胞毒性药物为微管抑制剂类细胞毒药物(包括美登素类、奥利斯他汀类、艾日布林类等)或者作用于DNA的细胞毒药物(包括卡奇霉素类、duocarmycin类、PBD(pyrrolobenzodiazepine)类、拓扑异构酶I抑制剂类等)。
在一些具体实施方案中，本发明提供的通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的细胞毒药物部分U为微管抑制剂。
在一些具体实施方案中，本发明提供的通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的细胞毒药物部分U为艾日布林或其衍生物。
在某些实施方案中，所述细胞毒药物部分与接头部分通过官能团连接，在肿瘤细胞内，会游离出细胞毒药物分子，从而发挥抗肿瘤效果。
在一个方面，本发明提供了一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab表示抗体部分，L表示接头部分，U表示细胞毒药物部分，n为选自1至10的整数或小数，其中所述抗体药物偶联物包含以下式IIa所示的结构：
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者，
R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。在一些实施方案中，所述R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，所述R a和R b为氢原子。
在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIa-1所述的结构：
在一些实施方案中，本发明提供了一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab表示抗体部分，L表示接头部分，U表示细胞毒药物部分，n为选自1至10的整数或小数，其中所述-U为式IIa所示的结构，
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者，
R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。在一些实施方案中，所述R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，所述R a和R b为氢原子。在一些实施方案中，所述-U为式IIa-1所示的结构。
在一些实施方案中，本发明提供的通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物包含以下式IIIa所示的结构：
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者，
R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。在一些实施方案中，所述R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，所述R a和R b为氢原子。
在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIIa-1所述的结构：
在一些实施方案中，本发明提供的通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物为以下式IV所示的结构：
其中，Ab表示抗体部分；
n为选自1-10的整数或小数；
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者，
R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。在一些实施方案中，所述R a与R b各自独立地选自氢原子或C 1-5烷基(优选C 1-4烷基，例如C 1-3烷基)。在一些实施方案中，所述R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一个实施方案中，所述R a和R b为氢原子。
在一个具体实施方案中，本发明提供下式IV-1所示的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，
其中，
Ab为抗体部分，
n为选自1至10的整数或小数。
在一些实施方案中，在上述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物中，所述n为2-4.8、2.6-4.8、3.5-4.8、4-4.8、2-4.5、2.6-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3.5-4.2、3.5-4、4-4.2、7-8、7-7.9、7-7.6、7-7.5、7.1-8、7.1-7.9、7.1-7.6、7.5-8、7.6-8、或7.6-7.9。在一些实施方案中，所述n为约2.6、约4、约4.2、约4.8、约7、约7.1、约7.5、约7.6、约7.9或约8。
与本发明的抗体药物偶联物(ADC)中抗体部分偶联的细胞毒药物的数量可以变化，使得在本发明提供的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以是异质的，即本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物包括偶联有不同数量细胞毒药物的抗体或其抗原结合片段，例如1分子抗体或其抗原结合片段偶联有0个(即不含细胞毒药物)、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或其他更多个分子细胞毒药物。
通过控制上述偶联有不同数量细胞毒药物的抗体或其抗原结合片段的比例，可以产生具有不同药物抗体比率(DAR)的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在本文中，“DAR”与“n”可互换使用。应理解，所述DAR或n是ADC中细胞毒药物与抗体或其抗原结合片段的平均摩尔比值，即每一分子抗体或其抗原结合片段的细胞毒药物平均偶联数。例如，“DAR为约4”或“n为约4”是指如下的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：包含每一分子抗体或其抗原结合片段偶联有不同数量细胞毒药物(例如，每个抗体或其抗原结合片段偶联有0、1、2、3、4、5、6、7或8个细胞毒药物)的异质混合物，但细胞毒药物与抗体或其抗原结合片段的平均摩尔比为约4。类似地，“DAR为约8”或“n为约8”是指该ADC中细胞毒药物与抗体或其抗原结合片段的平均摩尔比为约8。
在一个方面，本发明提供的一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab(抗体部分)可以特异性结合肿瘤抗原，所述肿瘤抗原可以选自本领域已知的任何肿瘤治疗的靶点，所述靶点的非限制性实例包括HER2、HER3、EGFR、CD20、CD30、CD33、CD47、CD79b、VEGF、VEGFR、MET、RET、PD-1或PD-L1。在一些实施方案中，本发明提供了一种式IV-1所示的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab(抗体部分)可以特异性结合肿瘤抗原，所述肿瘤抗原可以选自本领域已知的任何肿瘤治疗的靶点，所述靶点的非限制性实例包括HER2、HER3、EGFR、CD20、CD30、CD33、CD47、CD79b、VEGF、VEGFR、MET、RET、PD-1或PD-L1。
在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物中，Ab为抗HER3抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述Ab为抗HER3抗体或其抗原结合片段，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的重链CDR(HCDR)1，包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的HCDR2，包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的HCDR3，包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的轻链CDR(LCDR)1，包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的LCDR2，和包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的LCDR3。
所述抗HER3抗体或其抗原结合片段的CDR氨基酸序列提供于下表S1中。
在一些实施方案中，本发明提供的通式为Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的抗体部分为帕曲妥单抗(Patritumab)，其具有下表S1所示的序列。
表S1帕曲妥单抗的CDR和可变区氨基酸序列
在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7所示氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段还可包含免疫球蛋白的恒定区，或所述恒定区的片段、类似物、变体或衍生物。在一些实施方案中，所述恒定区来自人免疫球蛋白重链，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4或其他类别免疫球蛋白的重链，优选为IgG1的重链。在一些实施方案中，所述恒定区可包含任何文本所述的修饰，例如氨基酸的插入、缺失、取代或化学修饰。在一些实施方案中，所述恒定区包含改变效应功能的突变。在一些实施方案中，所述恒定区的任意氨基酸残基可用任意同种异型(allotype)的氨基酸残基取代。
在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:10所示氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
在一些实施方案中，所述抗HER3抗体选自以下抗体组成的组：帕曲妥单抗(Patritumab)、瑟瑞妥单抗(Seribantumab)、Elgemtumab、Duligotuzumab、CDX-3379、Lumretuzumab或GSK2849330。在一些具体的实施方案中，所述抗HER3抗体为帕曲妥单抗。
在一些实施方案中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段选自单克隆抗体、多特异性抗体、Fab片段、Fab’片段、F(ab)’2片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分离的CDR区、scFv、纳米抗体或融合蛋白。
在一些实施方案中，本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其通式为Ab-(L-U) n，其中Ab是可以修饰的，例如包括一个或多个氨基酸序列的改变、增加或减少。在本文中，修饰后的Ab仍然保留了特异性地结合至其相应抗原的活性。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物为如下所示的结构：
在一些这种实施方案中，所述n为2-4.8、2.6-4.8、3.5-4.8、4-4.8、2-4.5、2.6-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3.5-4.2、3.5-4、4-4.2、7-8、7-7.9、7-7.6、7-7.5、7.1-8、7.1-7.9、7.1-7.6、7.5-8、7.6-8、或7.6-7.9。在一些具体的实施方案中，所述n为约2.6、约4、约4.2、约4.8、约7、约7.1、约7.5、约7.6、约7.9或约8。
在一个方面，本发明提供的具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，展现出下述性质中的一种或多种的组合：
(a)结合HER3；
(b)阻断HER3与配体的结合；
(c)在表达HER3的细胞中显示内吞作用；
(d)对表达HER3的肿瘤细胞具有杀伤活性；
(e)具有旁观者效应。
在一些实施方案中，所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物结合人HER3。
在一些实施方案中，本发明提供的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在不同HER3表达量细胞中显示了较强的内吞作用，同时能随着内吞时间的增加不断累积内吞的ADC量。
药物组合物
在一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一些实施方案中，本发明提供了一种药物组合物，其包含根据本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及可药用载体。可药用载体包括例如赋形剂、稀释剂、包封材料、填充剂、缓冲剂或其它试剂。
用途
在一个方面，本发明提供了本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在一个方面，本发明提供了包含本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物及可药用载体的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。在一个方面，本发明提供了本发明的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
在一个方面，本发明提供了用于治疗癌症的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或上述的药物组合物。
在一个方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者包含本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与可药用载体的药物组合物。在一个方面，本发明提供了一种治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的本发明的药物组合物。在一些实施方案中，所述方法包括使肿瘤细胞与所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或者所述药物组合物接触，从而杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长。
在一些实施方案中，向患者施用治疗有效量的本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或者本发明的药物组合物，可以杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长。
在一个方面，本发明提供了本申请的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物治疗癌症的用途。在一个方面，本发明提供了本申请的包含本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、可药用载体的药物组合物治疗癌症的用途。在一个方面，本发明还提供了本发明的药物组合物治疗癌症的用途。
在一些实施方案中，上述的方法或用途中，所述患者不适合用靶向HER2的药物进行治疗。在一些实施方案中，上述的方法或用途中，所述患者对靶向HER2的药物耐药。
在一些实施方案中，上述的方法或用途中，所述癌症为HER3阳性癌症。在一些实施方案中，本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以用于治疗表达HER3蛋白的癌症。在一些实施方案中，向患者施用治疗有效量的本发明的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或者本发明的药物组合物，可以杀伤HER3表达肿瘤细胞或抑制HER3表达肿瘤细胞生长。癌症的实例包括但不限于：胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、多形胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、肛门癌或阴茎癌。
接头-药物中间体化合物
在一些方面，本发明提供以下式III所示结构的接头-药物中间体化合物：
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
在一些实施方案中，所述式III所示结构的接头-药物中间体化合物，其中，R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。
在一个具体实施方案中，本发明提供以下式III-1所示结构的接头-药物中间体化合物，
本发明采用的接头结构将接抗肿瘤化合物艾日布林或其衍生物与抗体或其抗原结合片段连接，所提供的抗体药物偶联物实现了优异的抗肿瘤效果及/或安全性。在一些实施方案中，抗体药物偶联物的抗肿瘤效果和/或安全性优于艾日布林。在一些实施方案中，抗体药物偶联物的抗肿瘤效果和/或安全性优于第一三共株式会社的抗HER3抗体药物偶联物U3-1402(Patritumab deruxtecan)。在一些实施方案中，提供的抗HER3抗体药物偶联物表现了对肿瘤细胞良好的杀伤活性，对多种肿瘤细胞和/或不同HER3表达水平(高和/或中和/或低)的细胞表现了良好的杀伤活性。在一些实施方案中，提供的抗HER3抗体药物偶联物对曲妥珠单抗耐药肿瘤细胞表现了良好的杀伤活性。在一些实施方案中，提供的抗HER3抗体药物偶联物具有优异的安全性。在一些实施方案中，提供的抗体药物偶联物如抗HER3抗体药物偶联物不易聚集。在一些实验中发现，采用本发明的接头结构将抗肿瘤化合物艾日布林或其衍生物与抗体或其抗原结合片段连接可以提高抗体药物偶联物的抗聚集性。
附图说明
图1A-1G为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、帕曲妥单抗-DDDXd-D8和帕曲妥单抗对不同HER3表达水平细胞的结合活性；
图2A-2D为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、帕曲妥单抗-DDDXd-D8和帕曲妥单抗在不同HER3表达水平细胞中的内吞作用；
图3A-3I为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、以及帕曲妥单抗-DDDXd-D8对不同HER3表达水平细胞的细胞杀伤率；
图4为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、帕曲妥单抗-DDDXd-D8以及溶媒对照对JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型中小鼠肿瘤体积变化的影响；
图5为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、帕曲妥单抗-DDDXd-D8以及溶媒对照对JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型中小鼠体内瘤重的影响；
图6为不同DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物、帕曲妥单抗-DDDXd-D8以及溶媒对照对JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型中小鼠体重变化的影响。
解释和定义
除非另有说明，本申请中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时，意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代，只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即＝O)时，意味着两个氢原子被取代，氧代不会发生在芳香基上。
术语“任选”或“任选地”是指随后描述的事件或情况可以发生或不发生，该描述包括发生所述事件或情况和不发生所述事件或情况。术语“任选被取代的”表示被取代或未被取代的，例如，乙基“任选”被卤素取代，指乙基可以是未被取代的(CH 2CH 3)、单取代的(如CH 2CH 2F)、多取代的(如CHFCH 2F、CH 2CHF 2等)或完全被取代的(CF 2CF 3)。本领域技术人员可理解，对于包含一个或多个取代基的任何基团，不会引入任何在空间上不可能存在和/或不能合成的取代或取代模式。
本文中的C m-n，是该部分具有给定范围中的整数或小数个碳原子。例如“C 1-6”是指该基团可具有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子、4个碳原子、5个碳原子或6个碳原子。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。因此，例如，如果一个基团被2个R所取代，则每个R都有独立的选项。
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH 2) 0-，表示该连接基团为共价键。
当其中一个变量选自共价键时，表示其连接的两个基团直接相连，比如A-L-Z中L代表共价键时表示该结构实际上是A-Z。
术语“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“氰基”指-CN基团。
术语“巯基”指-SH基团。
术语“氨基”指-NH 2基团。
术语“硝基”指-NO 2基团。
术语“烷基”是指通式为C nH 2n+1的烃基。该烷基可以是直链或支链的。例如，术语“C 1- 6烷基”指含有1至6个碳原子的烷基(例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、新戊基、己基、2-甲基戊基等)。类似地，烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基磺酰基和烷硫基的烷基部分(即烷基)具有上述相同定义。
术语“烷氧基”指-O-烷基。
术语“烷基氨基”指-NH-烷基。
术语“二烷基氨基”指-N(烷基) 2。
术语“烷基磺酰基”指-SO 2-烷基。
术语“烷硫基”指-S-烷基。
术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的不饱和脂肪族烃基。烯基的非限制性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、异丁烯基、1,3-丁二烯基等。
术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个三键的不饱和脂肪族烃基。炔基的非限制性实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、1-丙炔基(-C≡C-CH 3)、2-丙炔基(-CH 2-C≡CH)、1,3-丁二炔基(-C≡C-C≡CH)等。
术语“环烷基”指完全饱和的并且可以以单环、桥环或螺环存在的碳环。除非另有指示，该碳环通常为3至10元环。环烷基非限制性实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片基(双环[2.2.1]庚基)、双环[2.2.2]辛基、金刚烷基等。
术语“环烯基”是指不完全饱和的并且可以以单环、桥环或螺环存在的非芳族碳环。除非另有指示，该碳环通常为5至8元环。环烯基的非限制性实例包括但不限于环戊烯基、环戊二烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚烯基、环庚二烯基等。
术语“杂环基”是指完全饱和的或部分不饱和的(但不是完全不饱和的杂芳族)并且可以以单环、桥环或螺环存在的非芳族环。除非另有指示，该杂环通常为含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至7元环。杂环基的非限制性实例包括但不限于环氧乙烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吡唑烷基、4H-吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、四氢噻吩基等。
术语“杂环烷基”是指完全饱和的并且可以以单环、桥环或螺环存在的环状基团。除非另有指示，该杂环通常为含有1至3个独立地选自硫、氧和/或氮的杂原子(优选1或2个杂原子)的3至7元环。3元杂环烷基的实例包括但不限于环氧乙烷基、环硫乙烷基、环氮乙烷基，4元杂环烷基的非限制性实例包括 但不限于吖丁啶基、噁丁环基、噻丁环基，5元杂环烷基的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡咯烷基、异噁唑烷基、噁唑烷基、异噻唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基、四氢吡唑基，6元杂环烷基的实例包括但不限于哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、吗啉基、哌嗪基、1,4-噻噁烷基、1,4-二氧六环基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、1,4-二噻烷基，7元杂环烷基的实例包括但不限于氮杂环庚烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基。优选为具有5或6个环原子的单环杂环烷基。
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如，芳基可以具有6-20个碳原子、6-14个碳原子或6-12个碳原子。芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氢化萘等。
术语“杂芳基”是指单环或稠合多环体系，其中含有至少一个选自N、O或S的环原子，其余环原子为C，并且具有至少一个芳香环。优选的杂芳基具有单个4至8元环，尤其是5至8元环，或包含6至14个，尤其是6至10个环原子的多个稠合环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、三唑基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基等。
“衍生物”：母体化合物分子中的原子或原子团被其它原子或原子团取代形成的化合物称为母体化合物的衍生物。
本申请的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这样的形式包含于本申请的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变，如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分，其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。
本申请化合物可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本申请的含有不对称碳原子的化合物可以以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来。光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
本发明中所标记合成的化合物的任何原子若没有特别指定，可代表该原子的任何一种稳定的同位素。除非特别说明，当结构中某一位置被定义为H即氢(H-1)时，该位置仅含天然存在的同位素。同样，除非特别说明，当结构中某一位置被定义为D即氘(H-2)时，该位置含同位素量至少比天然存在的同位素量(0.015％)大3340倍(即至少含50.1％氘同位素)，当所标记合成的化合物的结构中某一个或多个位置被定义为D即氘(H-2)时，该结构所示的化合物的含量可至少为52.5％、至少为60％、至少为67.5％、至少为75％、至少为82.5％、至少为90％、至少为95％、至少为97％、至少为98.5％、至少为99％、至少为99.5％。本发明中所标记合成的化合物的氘代率是指标记合成的同位素含量与天然存在的同位素量的比值。本发明中所标记合成的化合物的每个指定氘原子的氘代率可至少为3500倍(52.5％)、至少为4000倍(60％)、至少为4500倍(67.5％)、至少为5000倍(75％)、至少为5500倍(82.5％)、至少为6000倍(90％)、至少为6333.3倍(95％)、至少为6466.7倍(97％)、至少为6566.7倍(98.5％)、至少为6600倍(99％)、至少为6633.3倍(99.5％)。本发明中的同位素体(isotopologues)是指在化学结构方面仅有同位素组成上不同的化合物。本发明中所标记合成的化合物具有相同的化学结构、仅在其分子的原子组成中同位素的变化。因此，本发明中所标记合成的在特定位置含氘化合物也同样会含非常少的该位置的氢同位素体，本发明中所标记合成的化合物中的某位置的氢同位素体的量取决许多因素，其中包括氘代试剂(D 2O、D 2、NaBD 4、LiAlD 4等)的氘同位素纯度以及引入氘同位素合成方法的有效性。然而，如前所述这种某位置的氢同位素体的量总数将少于49.9％。本发明中所标记合成的化合物中的某位置的氢同位素体的量总数将少于47.5％、40％、32.5％、25％、17.5％、10％、5％、3％、1％或0.5％。
本发明中，任何未指定为氘的各原子以其天然同位素丰度存在。
术语“旁观者效应”(Bystander effect)，如本文所用，指代这样的效应，其中通过可断裂或不可断裂接头偶联至抗体或其抗原结合片段的细胞毒药物在从抗体或其抗原结合片段释放后有能力扩散穿过细胞膜，并从而引起对相邻细胞的杀伤。扩散穿过细胞膜的能力与细胞毒药物或细胞毒药物和接头的组合的疏 水性有关。此类细胞毒药物可以例如是艾日布林或MMAE。尤其是在具有异质靶表达的肿瘤和其中抗体穿透可能受限的实体瘤中，旁观者效应可能是期望的。
术语“治疗”意为将本申请所述化合物或药物组合物进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括但不限于：
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退；
(iv)降低疾病或疾病状态的任何直接或间接病理学后果。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物或药物组合物的量可根据一些因素而变化，例如取决于该化合物或药物组合物及其在个体中引发所需应答的能力，疾病状态及其严重性，给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄、性别和体重。有效量也可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本发明内容而确定。
术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
作为药学上可接受的盐，例如，可以提及金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
术语“溶剂化物”是指化合物与溶剂分子缔合形成的物质。
术语“抗体”以其最广义使用，特别涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、至少由两种完整抗体所形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、多功能抗体以及抗体片段，只要它们具有所需的生物学活性。
术语“人源化抗体”是指一种抗体，包含来源于非人源抗体的CDR区，并且该抗体分子的其它部分来源于一种或多种人抗体。
术语“突变体”用于指包含如下从肽的氨基酸序列衍生出的氨基酸序列的肽：用不同于原始肽的氨基酸置换一个或两个或更多个氨基酸，缺失一个或两个或更多个野生型氨基酸，插入在野生型中不存在的一个或两个或更多个氨基酸，和/或将在野生型中不存在的氨基酸添加至野生型的氨基端(N端)和/或羧基端(C端)(被统称为“突变”)。在本发明中，“插入”也可以被包括在“添加”中。
术语“CDR”(互补决定区)，也称为“高变区”，是指在序列上高度可变和/或形成结构限定的环的抗体可变结构域的每个区域。天然四链抗体通常包含六个CDR，三个在重链可变区中，三个在轻链可变区中。
术语“可变区”是指抗体的轻链或重链的N端结构域限定的约100至110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的结构域。术语轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)分别指这些轻链和重链结构域。
术语“Fab”是指含有轻链的恒定结构域(CL)和重链的第一恒定结构域(CH1)连同分别在轻链和重链上的可变结构域VL(轻链可变区)和VH(重链可变区)。可变结构域包含参与抗原结合的互补决定区(CDR)。
术语“scFv”包括抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。在一些实施方案中，scFv还包含介于VH和VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能够形成抗原结合所需的结构。
术语“抗体部分”是指抗体药物偶联物中的抗体部分。在某些特定的方案中，其与中间接头部分通过特定官能团连接，该抗体部分可以与抗原特异性结合。
术语“接头部分”是指抗体药物偶联物中将抗体部分与细胞毒药物部分相连接的部分，可以是可切割的或者不可切割的，可切割接头可以在靶细胞内断裂，从而释放细胞毒药物。
术语“细胞毒药物部分”是指抗体药物偶联物中的细胞毒药物部分。在某些特定的方案中，其与中间接头部分通过官能团连接，在肿瘤细胞内，会游离出细胞毒药物分子，从而发挥抗肿瘤效果。
术语“曲妥珠单抗”通用名Trastuzumab，是一种重组的人源化单克隆抗体，选择性地作用于人表皮生长因子受体-2(HER2)的ECD4，可以用于治疗HER2阳性的癌症，其一个实例是以商品名 上市的治疗性单克隆抗体产品。
术语“Patritumab”或“帕曲妥单抗”是一种全人源抗HER3的单克隆抗体，可以用于治疗表达HER3蛋白的癌症。
术语“HER2”是EGFR家族的第二个成员，具有酪氨酸激酶活性，其中HER2表达水平可以按照免疫组织化学检测法进行检测，HER2阳性指IHC3+，HER2阴性指IHC1+/0，对于IHC2+的情况应该再进行ISH检测以进一步明确。
术语“HER3”(人表皮生长因子受体3，也称为ErbB3)是受体蛋白酪氨酸激酶，并且属于受体蛋白酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)亚家族，其还包括HER1(也称为EGFR)、HER2和HER4。HER3是跨膜受体，并且由细胞外配体结合结构域(ECD)、ECD内的二聚结构域、跨膜结构域和胞内蛋白酪氨酸激酶结构域(TKD)及C末端磷酸化结构域构成。已发现HER3在若干类型的癌(例如乳腺癌、肠胃癌和胰腺癌)中过表达。已示出HER2/HER3的表达与从非侵袭进展至侵袭阶段之间的关联。
术语“三阴性乳腺癌”是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2表达都为阴性的乳腺癌。
术语“EC 50”是指有效浓度，该浓度引起抗原结合构建体的50％最大应答。EC 50可以通过ELISA或FACS分析或本领域已知的任何其它方法进行测量。
术语“同一性”，也称一致性。氨基酸序列的“同一性百分数(％)”是指将待比对序列与本文中所示的具体氨基酸序列进行比对并且如有必要的话为达到最大序列同一性百分数而引入空位后，并且不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分时，待比对序列中与本文中所示的具体氨基酸序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基百分数。同一性的氨基酸序列比对可以采用本领域范围内的多种方式进行，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于比对序列的适宜参数，包括在比较序列的全长里获得最大比对需要的任何算法。
在本文中，术语“受试者”、“患者”或“主体”可互换使用。在一些实施方案中，术语“受试者”、“患者”或“主体”是哺乳动物。在部分实施方案中，所述受试者、患者或主体是小鼠。在部分实施方案中，所述受试者、患者或主体是人。
如本文所用，“约”表示在本领域普通技术人员判定的对特定值可以接受的误差范围内，其部分取决于如何测量或测定该值，即测量系统的限制。例如，“约”按照本领域实践可表示1倍或超过1倍标准偏差以内。或者，“约”可以表示多至±5％的范围，例如在所给定的具体数值范围±2％范围内、±1％范围内或±0.5％范围内波动。当本申请或发明申请专利范围中给出特定值时，除非另有说明，“约”的含义应认为是在该特定值的可接受的误差范围内。在本文中，除非另有说明，步骤参数或条件的值默认均由“约”修饰。
具体实施方式
本发明还提供了以下一些具体的实施方案，但本发明的保护范围不限于此：
实施方案1.一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab表示抗体部分，L表示接头部分，U表示细胞毒药物部分，n为选自1至10的整数或小数，其中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIa所示的结构：
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者，
R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
实施方案2.根据实施方案1所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIIa所示的结构：
实施方案3.根据实施方案1或2所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物为以下式IV所示结构：
其中，
Ab表示抗体部分，
n为选自1-10的整数或小数。
实施方案4.根据实施方案1-3中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。
实施方案5.根据实施方案1或2所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIIa-1所示的结构：
实施方案6.根据实施方案3所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物为以下式IV-1所示结构：
实施方案7.根据实施方案1-6中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述n为2-4.8、2.6-4.8、3.5-4.8、4-4.8、2-4.5、2.6-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3.5-4.2、3.5-4、4-4.2、7-8、7-7.9、7-7.6、7-7.5、7.1-8、7.1-7.9、7.1-7.6、7.5-8、7.6-8、或7.6-7.9。
实施方案8.根据实施方案7所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述n为约2.6、约4、约4.2、约4.8、约7、约7.1、约7.5、约7.6、约7.9或约8。
实施方案9.根据实施方案1-8中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述Ab为抗HER3抗体或其抗原结合片段。
实施方案10.根据实施方案9所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的HCDR2，包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的HCDR3，包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的LCDR3。
实施方案11.根据实施方案10所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；或所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列。
实施方案12.根据实施方案10或11所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:10所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
实施方案13.根据实施方案9所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体为帕曲妥单抗。
实施方案14.根据实施方案9-13中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物展现出下述性质中的一种或多种的组合：
(a)结合HER3；
(b)阻断HER3与配体的结合；
(c)在表达HER3的细胞中显示内吞作用；
(d)对表达HER3的肿瘤细胞具有杀伤活性；
(e)具有旁观者效应。
实施方案15.一种药物组合物，其包含实施方案1-14中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；任选地，所述药物组合物还包括可药用载体。
实施方案16.实施方案1-14任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者实施方案15所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为HER3阳性癌症；优选地，所述癌症为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、多形胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、肛门癌或阴茎癌。
实施方案17.一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的实施方案1-14任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者实施方案15所述的药物组合物；优选地，所述癌症为HER3阳性癌症。
实施方案18.根据实施方案17所述的方法，所述方法包括使肿瘤细胞与所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或者所述药物组合物接触，从而杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长。
实施方案19.根据实施方案17或18所述的方法，其中所述癌症为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、多形胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、肛门癌或阴茎癌。
实施方案20.一种具有式III所示结构的接头-药物中间体化合物：
其中，
R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
或者R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
实施方案21.根据实施方案20所述的接头-药物中间体化合物，其中，R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。
为清楚起见，进一步用实施例来阐述本发明，但是实施例并非限制本申请的范围。本申请所使用的试剂通常是市售的，无需进一步纯化即可使用。
本申请实施例中采用的帕曲妥单抗(Patritumab)按照抗体的常规方法进行制备，先进行表达载体(包括例如CN107001463A披露的pcDNA3.1载体、CN109422811A披露的pCHO1.0载体等)构建，转染Expi-CHO宿主细胞之后进行表达，并采用Protein A亲和层析进行纯化；帕曲妥单抗重链和轻链的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:9和10所示。氘代MC-GGFG-DXd(MC-GGFG-DDDXd)的合成参见专利公开WO2022033578A1中实施例14中的方法。
本申请实施例中涉及的细胞及其来源如下表所示：
细胞 来源
NCI-N87 中国科学院细胞库
BT474 中科院
SKBR3 中美冠科
SK-OV3 中国科学院细胞库
JIMT-1 ATCC
Capan1 北纳生物
MCF-7 中国科学院细胞库
KYSE410 雅吉生物
MDA-MB-468 北纳生物
HCC1569 南京科佰
SW620 南京科佰
A549 中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心
WiDr 南京科佰
。
实施例1化合物III-1的制备
称取100mg化合物A(0.12mmol)和75mg化合物B(0.145mmol)加入到20mL反应管中(化合物A的CAS号为2413428-36-9，化合物B的CAS号为441045-17-6)，加入2mL N,N-二甲基甲酰胺，降温到0℃，加入70mg 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(0.18mmol)与49mg N,N-二异丙基乙胺(0.36mmol)，0℃下反应1h，经制备液相纯化得到化合物III-1(MC-GGFG-Eribulin，或称为MC-GGFG-艾日布林)约70mg。经ESI-MS分析，化合物III-1的m/z＝1241.72[M+H] +。化合物III-1的氢谱如下：
1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.22(t,J＝5.3Hz,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),8.06(t,J＝5.4Hz,1H),7.99(t,J＝5.3Hz,1H),7.65(d,J＝5.2Hz,1H),7.30-7.21(m,4H),7.18(d,J＝6.4Hz,1H),6.99(s,2H),5.02(d,J＝26.0Hz,2H),4.79(d,J＝38.9Hz,2H),4.65-4.60(m,2H),4.56(d,J＝3.7Hz,1H),4.50-4.42(m,1H),4.26(d,J＝10.1Hz,1H),4.21-4.14(m,1H),4.10(s,3H),4.05-3.98(m,1H),3.86-3.64(m,8H),3.60-3.45(m,4H),3.37-3.30(m,2H),3.26(s,4H),3.17-3.09(m,1H),3.08-2.99(m,2H),2.84(d,J＝10.4Hz,1H),2.86-2.66(m,3H),2.56-2.50m,1H),2.37-2.18(m,5H),2.15-2.05(m,3H),2.05-1.96(m,2H),1.95-1.84(m,4H),1.75-1.57(m,6H),1.55-1.38(m,6H),1.35-1.25(m,3H),1.23-1.12(m,3H),1.03(d,J＝6.0Hz,3H),1.00-0.92(m,1H).
实施例2抗体药物偶联物的制备
试剂：
溶液A：pH 7.4PBS缓冲液
溶液B：10mM TCEP(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐)水溶液
溶液C：DMSO
溶液D：组氨酸缓冲液(含L-组氨酸0.89mg/mL和盐酸L-组氨酸一水合物4.04mg/mL)
溶液E：700mg/mL蔗糖溶液(用溶液D配制)
溶液F：20mg/mL吐温80(用溶液D配制)
实验流程：
1、抗体置换
a、将30KD的超滤离心管用溶液A充分润湿
b、将抗体置换到溶液A中
c、加入适量溶液A调节抗体浓度
2、抗体还原
a、计算抗体摩尔量，记为N1
b、向抗体溶液中加入适量溶液B，使反应体系TCEP摩尔量为N2
c、铝箔包扎，置于旋转培养仪上低速(20rpm)震摇，37℃避光反应1h
3、偶联
a、取适量linker-payload，用DMSO溶解，终浓度为10mg/mL
b、向抗体溶液中加入DMSO，使浓度为5％，再加入适量linker-payload溶液，使摩尔量为N3
c、铝箔包扎，置于旋转培养仪上低速(20rpm)震摇，22℃避光反应1.5h
4、偶联终止
a、用溶液D将超滤离心管润湿
b、将抗体置换至溶液D中，加入适量溶液E、F，-80℃冻存
抗体药物偶联物的DAR值(每一分子抗体的药物平均连接数)测定
采用LC-MS方法测定DAR值。取50μg ADC样品，加入1μL糖苷酶PNGase F(瑞安生物，中国)，在37℃孵育20小时。实验中的质谱仪为高分辨的Xevo G2-XS(Waters，美国)。将样品浓度调至5μM，采用直接进样法，采集正离子模式下的质谱数据。采集的非变性质谱数据采用软件UNIFI 1.8.2.169(Waters，美国)进行分析处理。
抗体药物偶联物的蛋白浓度测定
采用lowry法检测蛋白浓度。用酶标仪测定样品在OD 650波长的吸光度值，拟合标准曲线，将样品吸光度值带入标准曲线，计算蛋白浓度。
通过以上方法制备式IV-1的抗体药物偶联物(包括IV-1(Patritumab))以及式IV系列的其他抗体药物偶联物：
分别制备得到样品1：DAR＝4.8、蛋白浓度＝1.71mg/mL和样品2：DAR＝7.1、蛋白浓度＝1.65mg/mL。
实施例3小分子细胞毒化合物以及抗体药物偶联物的细胞活性
将小分子细胞毒化合物使用培养基稀释至35000ng/mL-0.0896ng/mL，共9个浓度。取对数生长期肿瘤细胞，调整密度至1×10 5cells/mL进行铺板，每孔加入100μL，并设置无细胞空白孔作为对照。加入上述梯度稀释的样品，每孔50μL。于37℃、5％CO 2二氧化碳培养箱中培养5天。弃掉培养液，加入CCK-8(日本同仁化学，货号：CK04)工作液，每孔100μL，孵育显色4-5小时后置于酶标仪中(厂家Thermo，型号：VarioskanFlash)，以630nm为参比波长，读取并记录波长450nm下孔板的吸光度值。计算肿瘤细胞增殖抑制率。
将抗体药物偶联物使用培养基稀释至5000ng/mL-0.0128ng/mL，共9个浓度。取对数生长期肿瘤细胞，调整密度至2×10 4cells/mL进行铺板，每孔加入100μL，并设置无细胞空白孔作为对照。加入上述梯度稀释的样品，每孔50μL。于37℃、5％CO 2二氧化碳培养箱中培养。弃掉培养液，加入CTG检测液(Promega，货号：G7572)，每孔100μL，孵育显色10min后置于多功能读板(厂家Thermo，型号：VarioskanFlash)，读取化学发光值。计算肿瘤细胞增殖抑制率。
IV-1(Patritumab)细胞活性：
实施例4抗体药物偶联物的制备
试剂：
溶液G：组氨酸/盐酸组氨酸缓冲液(L-组氨酸1.43mg/mL、盐酸L-组氨酸一水合物2.27mg/mL)；
溶液H：10mM TCEP(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐)水溶液；
溶液I：DMSO(二甲基亚砜)；
溶液J：500mg/mL蔗糖溶液(用溶液G配制)；
溶液K：30mg/mL吐温80(用溶液G配制)；
溶液L：10％DMSO的溶液G；
溶液M：0.3M Na 2HPO 4；
抗体：帕曲妥单抗；
linker-payload(接头-药物中间体化合物)：实施例1中式III-1所示结构的化合物MC-GGFG-艾日布林(制备帕曲妥单抗-艾日布林偶联物时使用)；MC-GGFG-DDDXd(制备帕曲妥单抗-DDDXd偶联物时使用)。
(1)按照如下实验流程制备DAR为2.6或7.6的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物，分别命名为帕曲妥单抗-艾日布林-D2和帕曲妥单抗-艾日布林-D8；按照如下实验流程制备DAR为7.9的帕曲妥单抗-DDDXd偶联物，命名为帕曲妥单抗-DDDXd-D8：
实验流程：
1、抗体置换：
将30KD的超滤离心管用溶液G充分润湿，将抗体置换到溶液G中，加入适量溶液G调节抗体浓度为10mg/mL；之后加入适量溶液M调节抗体溶液的pH约为7.0。
2、抗体还原：
计算抗体摩尔量，记为N1；向抗体溶液中加入适量溶液H，使反应体系TCEP摩尔量为N2；将获得的混合物于37℃避光振荡1h，从而抗体二硫键被还原，获得反应溶液1。
3、抗体与接头-药物中间体化合物的偶联：
取适量linker-payload，用50％丙酮水溶液溶解，终浓度为10mg/mL；向反应溶液1中加入溶液I(溶液I:反应溶液1(v/v)＝1:10)，混匀，再加入适量的上述用丙酮水溶液溶解的linker-payload溶液，使linker-payload的摩尔量为N3；反应混合物于22℃避光振荡1h，获得反应溶液2。
4、偶联反应的终止：
用溶液L将超滤离心管润湿；先后用20倍体积的溶液L和20倍体积的溶液G来超滤反应溶液2，加入适量溶液J、K，-80℃冻存。
其中，实验条件及组别如下表1-1所示。
表1-1实验条件及组别
ADC 抗体 linker-payload N1:N2 N1:N3
帕曲妥单抗-艾日布林-D2 帕曲妥单抗 MC-GGFG-艾日布林 1:2 1:3
帕曲妥单抗-艾日布林-D8 帕曲妥单抗 MC-GGFG-艾日布林 1:8.5 1:10.5
帕曲妥单抗-DDDXd-D8 帕曲妥单抗 MC-GGFG-DDDXd 1:8.5 1:10.5
(2)按照如下实验流程制备DAR为4.0-4.2的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物，命名为帕曲妥单抗-艾日布林-D4：
实验流程：
1、抗体置换：
将30KD的超滤离心管用溶液G充分润湿，将抗体置换到溶液G中，加入适量溶液G调节抗体浓度为10mg/mL；之后加入适量溶液M调节抗体溶液的pH约为7.0。
2、抗体还原：
计算抗体摩尔量，记为N1；向抗体溶液中加入适量溶液H，使反应体系TCEP摩尔量为N2；将获得的混合物于5-10℃避光反应6h，从而抗体二硫键被还原，获得反应溶液3。
3、抗体与接头-药物中间体化合物的偶联：
取适量linker-payload，用50％丙酮水溶液溶解，终浓度为10mg/mL；向反应溶液3中加入适量的上述用丙酮水溶液溶解的linker-payload溶液，使linker-payload的摩尔量为N3；反应混合物于5-10℃避光反应40min，获得反应溶液4。
4、偶联反应的终止：
用溶液L将超滤离心管润湿；先后用20倍体积的溶液L和20倍体积的溶液G来超滤反应溶液4，加入适量溶液J、K，-80℃冻存。
其中，实验条件及组别如下表1-2所示。
表1-2实验条件及组别
ADC 抗体 linker-payload N1:N2 N1:N3
帕曲妥单抗-艾日布林-D4 帕曲妥单抗 MC-GGFG-艾日布林 1:2.58 1:5.1
实施例5抗体药物偶联物的DAR值测定
采用键合丁基的无孔聚苯乙烯/二乙烯苯(PS/DVB)填料对上述实施例4制备的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物各组分进行分离，利用中性高盐流动相提高蛋白分子的疏水性质，从而和色谱柱中疏水的键合相结合，而后通过逐步降低盐浓度，并逐步增大异丙醇的比例洗脱物质，疏水性小的组分先洗脱，疏水性大的组分后洗脱。
色谱柱规格为Sepax HIC-Butyl、4.6×100mm、5μm，柱温25℃。流动相A为10mM磷酸盐缓冲液-1.5M硫酸铵，pH 7.0(称取无水磷酸氢二钠1.42g、硫酸铵198.21g，加入约800mL超纯水，搅拌至充分溶解后，用磷酸调节至pH 7.0±0.1，定容至1L，混匀后经0.22μm滤膜过滤)。流动相B为10mM磷酸盐缓冲液，pH 7.0(称取无水磷酸氢二钠1.42g，加入约800mL超纯水，搅拌至充分溶解后，用磷酸调节至pH 7.0±0.1，定容至1L，混匀后经0.22μm滤膜过滤)。流动相C为100％异丙醇。流速为0.5mL/min，梯度洗脱30min，流动相参数为：0-15min由75％流动相A加25％流动相B升至75％流动相B加25％流动相C，15-20min为75％流动相B加25％流动相C，20-30min为75％流动相A加25％流动相B)。用第0min初始流动相将帕曲妥单抗-艾日布林偶联物稀释1倍作为供试品溶液，根据帕曲妥单抗-艾日布林偶联物浓度调整进样体积进样50μg蛋白，在280nm波长处检测吸光度值。
数据处理，采用面积归一化法对结果进行定量分析。分别计算含有0、1、2、3、4、5、6、7和8个细胞毒药物的ADC的峰面积百分比，并计算DAR值结果。计算公式为：DAR值＝(含有0个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×0+含有1个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×1+含有2个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×2+含有3个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×3+含有4个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×4+含有5个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×5+含有6个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×6+含有7个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×7+含有8个细胞毒药物的ADC峰面积百分比×8)/100％。
通过实施例4和实施例5的方法制备并测定帕曲妥单抗-艾日布林偶联物，其具有如下结构：
其中，帕曲妥单抗-艾日布林-D2，其测得的DAR值为2.6；帕曲妥单抗-艾日布林-D4，其测得的DAR值为4-4.2；帕曲妥单抗-艾日布林-D8，其测得的DAR值为7.6。
通过实施例4和实施例5的方法制备并测定帕曲妥单抗-DDDXd-D8，其具有如下结构：
其测得的DAR值为7.9。
实施例6抗体药物偶联物的聚集体验证
采用凝胶色谱柱对上述实施例4制备的帕曲妥单抗-药物偶联物各组分进行分离。利用添加10％异丙醇的中性pH缓冲液作为流动相进行洗脱，各组分按照分子量由大到小的顺序依次被洗出。色谱柱为 ACQUITY UPLC Protein BEH SEC Column 1.7μm、4.6×300mm规格的凝胶色谱柱，柱温25℃。流动相为50mM磷酸盐缓冲液-200mM氯化钠-10％异丙醇，pH 7.0(称取十二水合磷酸氢二钠12.53g、二水合磷酸二氢钠2.33g、氯化钠11.69g，加入约800mL超纯水，搅拌至充分溶解，加超纯水至1000mL备用，取异丙醇100mL加上述溶液至1000mL，混匀后经0.22μm滤膜过滤)。精密取20μg帕曲妥单抗-药物偶联物注入液相色谱仪，在280nm波长处检测。流速为0.3mL/min，等度洗脱15min。
数据处理，采用面积归一化法对结果进行定量分析。分别计算聚集体、免疫球蛋白单体和低分子量杂质的峰面积百分比，其中主峰前为聚集体，主峰为免疫球蛋白单体，主峰后为低分子量杂质。帕曲妥单抗-药物偶联物的单体、聚集体及低分子量杂质含量比例见表2。
表2帕曲妥单抗-药物偶联物的单体、聚集体及低分子量杂质含量
实施例7抗体药物偶联物的细胞结合活性
基于FACS的方法，以帕曲妥单抗-DDDXd-D8和帕曲妥单抗作为对照，分析上述实施例4制备的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物与不同HER3表达水平细胞的结合活性，包括HER3高表达水平的MCF-7、HCC1569、BT474细胞，HER3中表达水平的MDA-MB-468、JIMT-1细胞，HER3低表达水平的SW620细胞以及HER3阴性的A549细胞。
将1×10 5个细胞加入到96孔细胞培养板的各孔中，帕曲妥单抗-艾日布林偶联物以135.14nM起始浓度，4倍稀释、9个浓度梯度，稀释于FACS buffer(Miltenyi Biotec，货号：130-091-221)中，于4℃孵育60min后，1000rpm离心5min，弃上清，用预冷PBS(pH 7.4)洗涤3次，加入按照1:200(v/v)稀释的羊抗人IgG Fcγ-PE二抗(Jackson immunoresearch，货号：109-116-170)，100μL/孔，4℃孵育30min。用预冷PBS(pH 7.4)洗涤3次，用100μL PBS(pH 7.4)重悬，然后使用流式细胞仪(Sartorius，iQUE)分析检测荧光信号。通过染色的平均荧光强度(MFI)来测量帕曲妥单抗-艾日布林偶联物和对照与上述各细胞的结合活性。使用GraphPad Prism5分析数据，结果如图1A-1G所示，计算的EC 50在下表3中示出。结果表明，各DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物与HER3高、中、低表达水平细胞的结合活性均与帕曲妥单抗的相当，与HER3阴性的A549细胞无结合。
表3帕曲妥单抗-艾日布林偶联物与不同HER3表达水平细胞的结合活性
*：未检测。
实施例8抗体药物偶联物的内吞实验
基于FACS的方法，以帕曲妥单抗-DDDXd-D8和帕曲妥单抗作为对照，分析上述实施例4制备的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物在不同HER3表达水平细胞中的内吞情况，包括HER3高表达水平的MCF-7、BT474细胞，HER3中表达水平的NCI-N87细胞以及HER3低表达水平的SW620细胞。
调整细胞密度为1×10 6个/mL，50μL/孔加入96孔细胞培养板。样品准备：将帕曲妥单抗-艾日布林偶联物预稀释至浓度为20μg/mL，标记为S1，其后按3倍浓度梯度稀释，获得9个样品S1-S9；把梯度稀释的样品溶液加到细胞培养板中，每孔加50μL，4℃孵育30min。孵育结束后取出96孔细胞培养板，置于4℃，400g离心4min，弃上清。按照1:200(v/v)稀释pHrodo TM Green Maleimide(绿色马来酰亚胺； Invitrogen，货号：P35370)标记的AffiniPure Goat Anti-Human IgG,Fcγfragment specific(羊抗人IgG，Fc片段特异性抗体；Jackson Immuno；货号：109-005-190)，每孔加50μL后于4℃孵育。30min后洗涤，每孔加入50μL细胞培养基，混匀后置于37℃内化2h，置于流式细胞仪(Sartorius，iQUE)，测定BL1通道的荧光读值。使用GraphPad Prism5分析数据，结果如图2A-2D所示，计算的EC 50在下表4中示出。结果表明，各DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物在HER3高、中表达水平细胞中表现出明显的内吞作用，在低表达水平的SW620细胞中内吞作用较弱。
表4帕曲妥单抗-艾日布林偶联物在不同HER3表达水平细胞中的内吞作用
实施例9抗体药物偶联物的细胞杀伤活性
为检测上述实施例4制备的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物对肿瘤细胞的增殖抑制作用，以帕曲妥单抗-DDDXd-D8作为对照，分别用不同HER3表达水平的细胞进行杀伤活性检测，包括HER3高表达水平的BT474、MCF-7、HCC1569细胞，HER3中表达水平的SKBR3、NCI-N87、JIMT-1、MDA-MB-468细胞，以及HER3低表达水平的SW620、WiDr细胞。
取对数生长期的细胞加入96孔板，100μL/孔，细胞密度为1×10 4个/mL或2×10 4个/mL。37℃、5％CO 2贴壁过夜培养。样品准备：将帕曲妥单抗-艾日布林偶联物用含10％FBS的基础培养基配制成待测样品(5μg/mL起始，5倍梯度稀释、九个梯度)。取出过夜贴壁培养的细胞，实验组加入50μL/孔稀释好的待测样品，对照组加入50μL/孔含10％FBS的基础培养基，继续培养96h、120h或144h后采用CellTiter-Glo Luminescent Cell试剂盒(Promega，货号：G7572)检测，取出96孔板，在每孔中加入75μL CTG检测液(Promega，货号：G7572)，震荡混匀，室温避光孵育10min后每孔各吸取180μL转移至不透明白板，去除气泡，读取化学发光值，并计算杀伤率。
杀伤率(％)＝(1-实验组发光值/对照组发光值)×100％。
用Graphpad Prism5分析处理数据，结果如图3A-3I所示，计算的EC 50在下表5-1和5-2中示出。结果表明，对于HER3高、中、低表达水平细胞，DAR值越大，帕曲妥单抗-艾日布林偶联物的杀伤活性越强，且各DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物的杀伤活性均优于帕曲妥单抗-DDDXd-D8。
表5-1帕曲妥单抗-艾日布林偶联物对HER3高表达水平细胞的杀伤活性
表5-2帕曲妥单抗-艾日布林偶联物对HER3中表达水平细胞的杀伤活性
实施例10抗体药物偶联物在JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型中的药效学评价
通过曲妥珠单抗耐药细胞株JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠皮下移植瘤模型评价上述实施例4制备的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物的体内药效。
在SPF级雌性裸小鼠(来源：常州卡文斯实验动物有限公司)右侧腋窝皮下接种JIMT-1细胞，2×10 6个/只。待肿瘤平均体积达100-300mm 3时，将动物分成5组，每组6只，具体分组和给药方案在表6中示出。
表6分组和给药方案
组别 药物 剂量(mg/kg) 给药途径 给药频次
1 溶媒对照 N/A 尾静脉注射 Q1W
2 帕曲妥单抗-DDDXd-D8 3 尾静脉注射 Q1W
3 帕曲妥单抗-艾日布林-D2 3 尾静脉注射 Q1W
4 帕曲妥单抗-艾日布林-D4 3 尾静脉注射 Q1W
5 帕曲妥单抗-艾日布林-D8 3 尾静脉注射 Q1W
Q1W：每周给药一次。
分组当天为d0天，分组后d1天尾静脉给药。每周测2-3次瘤体积，同时给小鼠称重，记录数据；每日观察与记录小鼠一般表现。实验结束后剥取肿瘤并称重、拍照。
检测指标包括：
肿瘤体积TV(mm 3)＝1/2×(a×b 2)；其中，a为长径，b为短径。
相对肿瘤体积RTV＝TV t/TV 0；其中，TV 0为d0天肿瘤体积，TV t为每一次测量时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率T/C(％)＝T RTV/C RTV×100％；其中，T RTV为治疗组RTV，C RTV为对照组RTV。
肿瘤生长抑制率：1-T/C。
抑瘤率TGI(％)＝(1-TW/TW 0)×100％；其中，TW为治疗组瘤重，TW 0为对照组瘤重。
体重变化率，WCR(％)＝(Wt t-Wt 0)/Wt 0×100％；其中，Wt 0为d0天动物体重，Wt t为每一次测量时的动物体重。
各药物对肿瘤体积、瘤重、及小鼠体重的影响见图4-6，检测指标结果在下表7中示出。到d21天实验结束，无动物死亡，各治疗组的小鼠体重增长与模型组相当，药物无明显毒性作用，安全性好。各DAR值的帕曲妥单抗-艾日布林偶联物均表现出较好的体内肿瘤增殖抑制活性，且均优于帕曲妥单抗-DDDXd-D8；帕曲妥单抗-艾日布林偶联物的DAR值越大，体内肿瘤增殖抑制活性越强。
表7帕曲妥单抗-艾日布林偶联物在JIMT-1人乳腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型中的肿瘤抑制作用
组别 肿瘤生长抑制率1-T/C 抑瘤率TGI
2 24.4％ 26.6％
3 36.6％ 41.1％
4 65.9％ 68.9％
5 82.9％ 84.3％
根据本发明所公开的内容，虽然根据优选实施方案对本发明的方法进行了描述，但对本领域技术人员而言，在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下，可对在此所述的方法以及所述方法的步骤或步骤的顺序进行改变。
本文所引用的所有文献的公开内容通过引用结合于此，引用程度为，他们提供示例性的，程序上和其他的细节补充本文所述内容。

Claims (20)

  1. 一种具有通式Ab-(L-U) n的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中Ab表示抗体部分，L表示接头部分，U表示细胞毒药物部分，n为选自1至10的整数或小数，其特征在于，所述抗体药物偶联物包含以下式IIa所示的结构：
    其中，
    R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
    R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
    或者，
    R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
  2. 根据权利要求1所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIIa所示的结构：
  3. 根据权利要求1或2所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物为以下式IV所示结构：
    其中，
    Ab表示抗体部分，
    n为选自1-10的整数或小数。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。
  5. 根据权利要求1或2所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物包含以下式IIIa-1所示的结构：
  6. 根据权利要求3所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物为以下式IV-1所示结构：
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述n为2-4.8、2.6-4.8、3.5-4.8、4-4.8、2-4.5、2.6-4.5、3.5-4.5、4-4.5、3.5-4.2、3.5-4、4-4.2、7-8、7-7.9、7-7.6、7-7.5、7.1-8、7.1-7.9、7.1-7.6、7.5-8、7.6-8、或7.6-7.9。
  8. 根据权利要求7所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述n为约2.6、约4、约4.2、约4.8、约7、约7.1、约7.5、约7.6、约7.9或约8。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述Ab为抗HER3抗体或其抗原结合片段。
  10. 根据权利要求9所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的HCDR1，包含SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的HCDR2，包含SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的HCDR3，包含SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的LCDR1，包含SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的LCDR2和包含SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的LCDR3。
  11. 根据权利要求10所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:7所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:8所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；或所述重链可变区包含SEQ ID NO:7所示氨基酸序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:8所示氨基酸序列。
  12. 根据权利要求10或11所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链，所述重链包含与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，所述轻链包含与SEQ ID NO:10所示氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。
  13. 根据权利要求9所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗HER3抗体为帕曲妥单抗。
  14. 根据权利要求9-13中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中，所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物展现出下述性质中的一种或几种的组合：
    (a)结合HER3；
    (b)阻断HER3与配体的结合；
    (c)在表达HER3的细胞中显示内吞作用；
    (d)对表达HER3的肿瘤细胞具有杀伤活性；
    (e)具有旁观者效应。
  15. 一种药物组合物，其包含权利要求1-14中任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物；任选地，所述药物组合物还包括可药用载体。
  16. 权利要求1-14任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者权利要求15所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述癌症为HER3阳性癌症；优选地，所述癌症为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、多形胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、肛门癌或阴茎癌。
  17. 一种治疗癌症的方法，其包括向有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-14任一项所述的抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物或者权利要求15所述的药物组合物；优选地，所述癌症为HER3阳性癌症；优选地，所述癌症为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、多形胶质母细胞瘤、胶质母细胞瘤、尿路上皮癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、睾丸癌、肛门癌或阴茎癌。
  18. 根据权利要求17所述的方法，所述方法包括使肿瘤细胞与所述抗体药物偶联物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、或者所述药物组合物接触，从而杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞生长。
  19. 一种具有式III所示结构的接头-药物中间体化合物：
    其中，
    R a选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
    R b选自氢原子、氘原子、任选被取代的C 1-6烷基、任选被取代的C 3-7环烷基、任选被取代的C 3-7杂环基、任选被取代的C 6-10芳基、任选被取代的C 5-12杂芳基；
    或者R a与R b与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
  20. 根据权利要求19所述的接头-药物中间体化合物，其特征在于，R a与R b各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。
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