CN113384711A - 稳定的抗cd79b免疫缀合物制剂 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了一种稳定的药物组合物，所述药物组合物包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂。本公开还提供了使用此类组合物治疗癌症的方法。

Description

稳定的抗CD79B免疫缀合物制剂
本申请为申请号为201980025490.1的中国专利申请(申请日：2019年4月12日，发明名称：稳定的抗CD79B免疫缀合物制剂)的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年4月13日提交的美国临时专利申请系列第62/657,185号的优先权权益，该美国专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。
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技术领域
本公开涉及包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂的稳定的药物组合物。本公开还提供了使用此类组合物治疗癌症的方法。
背景技术
在商业环境中，使用输液袋静脉(IV)给药是生物制剂最常见的递送途径。为支持生物制品诸如免疫缀合物通过静脉内(IV)给药的递送和相容性，需要设计合适的治疗性制剂，该制剂应在输液袋中稀释后、运输过程中以及整个给药过程中保持稳定(Bardin,C.等人《法国制药年鉴》(Annales pharmaceutiques francaises)69(2011)221-231)。
在生物制剂给药时(尤其是使用IV输液袋进行给药时)面临的一个挑战是结构和输液溶液的材料可能导致治疗性蛋白质的环境不稳定。此外，蛋白质还在IV输液袋中受到界面应力的影响。固-液和空气-水界面处的蛋白质吸附可能引起表面蛋白质变性，从而导致蛋白质聚集(Shieh,I.等人《分子药剂学》(Mol Pharm.)12(2015):3184-93；Sreedhara,A.等人《药物科学》(Pharm.Sci.)101(2012):21-30)。输液袋的搅动使气-液界面不断再生，进一步使IV给药复杂化，导致蛋白质随时间的推移受到反复破坏。由IV输液袋的不稳定溶液条件或界面应力引起的聚集可对生物制剂的产品质量、效力和免疫原性产生严重的不利影响。
IV给药对生物制剂的有害作用可部分地通过在制剂开发中使用表面活性剂得以缓解。非离子型表面活性剂诸如聚山梨醇酯-20(PS20)或聚山梨醇酯-80(PS80)通常用于蛋白质制剂中，以保护和稳定分子，使其免受空气-水界面应力的影响(Kerwin,BA.《药学杂志》(J.Pharm.Sci.)97(2008)2924-2935)。表面活性剂可通过在空气-水和固体-水界面上与蛋白质竞争以保护药品(DP)免受表面诱导的(Kerwin,BA.《药学杂志》(J.Pharm.Sci.)97(2008)2924-2935)。此外，表面活性剂还降低了系统的表面张力(Cleland,JL.等人《医药载体系统评论综述(Critical reviews in therapeutic drug carrier systems)10(1993)307-377)。但是，以适合于IV输液袋输送的浓度使用非离子表面活性剂时的一个关键缺点在于，生物制剂长时间暴露于表面活性剂可导致特定氨基酸残基发生氧化，从而降低疗效。Lam X等人，《药学研究》(Pharm Res.)(2011)28:2543-2555。
重要的是，在IV给药之前，生物制剂还必须在储存条件下具有长而稳定的有效期，在此期间治疗性蛋白质的结构和活性不受影响。例如，采用接头的抗体药物偶联物(ADC)的液体制剂在储存过程中可能发生接头的酸催化水解。此类不稳定性可导致药物化合物在IV给药后过早释放，从而对生物制剂的药代动力学和安全性产生不利影响。
因此，需要开发一种稳定的药物组合物，其在IV给药时保持稳定，并且在储存条件下有效期长。本公开满足了这一需求并且提供了其他相关的优点。
发明内容
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂，其中表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000031
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约5mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约50mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约10mg/mL至约30mg/mL或约10mg/mL至约20mg/mL。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。在一个实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL。在另一个实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约20mg/mL。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为5mg/mL至60mg/mL、10mg/mL至50mg/mL、10mg/mL至40mg/mL、10mg/mL至30mg/mL或10mg/mL至20mg/mL。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL至20mg/mL。在一个实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL。在另一个实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL。
在一些实施例中，表面活性剂的浓度介于约0.06％w/v(即0.6mg/mL)和约0.12％w/v(即1.2mg/mL)之间。在一些实施例中，表面活性剂的浓度为至少约0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在另一个实施例中，表面活性剂的浓度为至少约0.12％w/v(即1.2mg/mL)。在一些实施例中，表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v。在另一个实施例中，表面活性剂的浓度为至少0.12％w/v。在一些实施例中，表面活性剂的浓度为0.06％w/v。在另一个实施例中，表面活性剂的浓度为0.12％w/v。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL，并且表面活性剂的浓度为约0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约20mg/mL，并且表面活性剂的浓度为至少约0.12％w/v。在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为约20mg/mL，并且表面活性剂的浓度为约0.12％w/v(即1.2mg/mL)。
在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL，并且表面活性剂的浓度为0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且表面活性剂的浓度为至少0.12％w/v。在一些实施例中，抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且表面活性剂的浓度为0.12％w/v。
在根据(或应用于)上述实施例中任一项的一些实施例中，药物组合物为液体药物组合物。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在本公开的某些实施例中，本文所述的表面活性剂为非离子型表面活性剂。在一个示例性实施例中，表面活性剂选自由以下项组成的组：聚山梨醇酯20(PS20)、聚山梨醇酯80(PS80)、泊洛沙姆188(P188)、N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)以及它们的组合。在一个具体实施例中，表面活性剂为PS20。在另一个具体实施例中，表面活性剂为PS80。
在本公开的一些实施例中，组合物进一步包含缓冲剂。在某些实施例中，缓冲剂为组氨酸缓冲液。在一些实施例中，缓冲剂为琥珀酸盐缓冲液。在一个具体实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥琥珀酸钠缓冲液。在一些实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。在一些实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM至200mM。在一个实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为约10mM。在另一个实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
在一些实施例中，本公开的组合物具有约5.0至约6.0的pH。在具体实施例中，缓冲液具有约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9或约6.0的pH。在一个实施例中，本公开的组合物具有约5.3的pH。在一些实施例中，本公开的组合物具有5.0至6.0的pH。在具体实施例中，缓冲液具有5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0的pH。在一个实施例中，本公开的组合物具有5.3的pH。
在本公开的某些实施例中，组合物进一步包含糖。在一些实施例中，糖的浓度为约100mM至约260mM。在一些实施例中，糖的浓度为100mM至260mM。在一些实施例中，糖选自由以下项组成的组：蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、甘油、葡聚糖40和海藻糖。
在一个具体实施例中，糖为蔗糖。在本公开的一个实施例中，蔗糖的浓度为约120mM。在另一个实施例中，蔗糖的浓度为120mM。
在一些实施例中，本公开的组合物为冻干物(诸如冻干块状物)。在一些实施例中，冻干组合物容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
在一方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物通过冻干液体制剂制成，该液体制剂包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体制剂具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物具有式：
Figure BDA0003065189990000051
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。
在本公开的一些实施例中，抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，该重链可变结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，并且该轻链可变结构域(VL)包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施例中，重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
还提供了一种药物组合物，该药物组合物通过冻干液体制剂制成，该液体制剂包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体制剂具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000061
其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中重链包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5(诸如约3.5)。在一些实施例中，药物组合物为冻干块状物。
在某些实施例中，本公开的药物组合物避光保存时在5℃±3℃下可保持稳定性达约60个月。在某个实施例中，本公开的药物组合物避光保存时在5℃±3℃下可保持稳定性达约48个月。
在一些实施例中，本公开的药物组合物的稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。在一个实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
在一些实施例中，本公开的药物组合物的稳定性通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)测得。在一个实施例中，组合物具有如通过icIEF测得的至少58.0的主峰(峰面积％)、至多32.0的酸性区(峰面积％)和至多12.0的碱性区(峰面积％)。
在某些实施例中，本公开的药物组合物用无菌注射用水(SWFI)复溶。在一些实施例中，将药物组合物复溶于约7.2mL SWFI中。在一些实施例中，复溶组合物在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。I在一些实施例中，复溶组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。在一些实施例中，复溶组合物进一步稀释到静脉内(IV)输液袋中的等渗缓冲液中。在一些实施例中，IV输液袋中稀释后的组合物的最终体积介于约50mL和约100mL之间。在一些实施例中，IV输液袋中免疫缀合物的浓度介于约0.72mg和约2.7mg之间。
本文还提供了一种药物组合物，该药物组合物通过冻干液体制剂制成，该液体制剂包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体制剂具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000071
其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中重链包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5(诸如约3.5)。
提供了一种液体组合物(诸如用于静脉给药)，该液体组合物包含：a)介于约0.72mg/mL和约2.7mg/mL之间的polatuzumab vedotin；b)介于约0.36mM和约1.35mM之间的琥珀酸钠；c)介于约0.51mM和约16.24mM之间的蔗糖；d)介于约0.0432mg/mL和约0.162mg/mL的聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于约5和约5.7之间。还提供了一种液体组合物(诸如用于静脉给药)，该液体组合物包含：a)约0.72mg/mL polatuzumab vedotin；b)约0.36mM琥珀酸钠；c)约0.51mM蔗糖；d)约0.0432mg/mL聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于5.1和约5.4之间。还提供了一种液体组合物(诸如用于静脉给药)，该液体组合物包含：a)约2.7mg/mL polatuzumab vedotin；b)约1.35mM琥珀酸钠；c)约16.24mM蔗糖；d)约0.162mg/mL聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于约5.1和约5.4之间。在一些实施例中，液体组合物的体积介于约50mL和约100mL之间。在一些实施例中，液体组合物的体积为50mL。在一些实施例中，液体组合物的体积为100mL。在一些实施例中，液体组合物容纳于静脉内(IV)输液袋中。在一些实施例中，与液体组合物接触的IV输液袋的表面由聚氯乙烯(PVC)、聚烯烃(PO)、聚乙烯(PE)或聚丙烯(PE)组成。
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中药物组合物复溶于水中时形成液体制剂，该液体制剂包含浓度为约10mg/mL至约20mg/mL的抗CD79b免疫缀合物、浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)的表面活性剂、浓度为约10mM至约200mM的琥珀酸盐缓冲液和浓度为约100mM至约260mM的糖，其中液体制剂具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000081
其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)anKASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。在一些实施例中，抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，该重链可变结构域包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列，并且该轻链可变结构域(VL)包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施例中，抗CD79b的重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且抗CD79b抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，药物组合物复溶于SWFI中，随后稀释到IV输液袋中的缓冲液中。在某些实施例中，药物组合物复溶于SWFI中，随后稀释到IV输液袋中的等渗缓冲液中。在一个实施例中，IV输液袋中稀释后的表面活性剂浓度为至少0.003％w/v。在一个实施例中，IV输液袋中稀释后的表面活性剂浓度为至少0.004％w/v。在一些实施例中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，糖为蔗糖。在一个具体实施例中，蔗糖的浓度为120mM。在一些实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。在一个具体实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。在一些实施例中，药物组合物复溶后在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。在一些实施例中，药物组合物复溶后在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
在一些实施例中，药物组合物复溶于水中后在30℃下可保持稳定性最长达约1天、最长约2天或最长约3天。在一些实施例中，药物组合物复溶于水中后在5℃±3℃下可保持稳定性最长达约1天、最长约2天、最长约3天、最长约4天、最长约5天、最长6天或最长约7天。在某些实施例中，组合物的稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。在一个具体实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
在某些实施例中，组合物的稳定性通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)测得。在一个具体实施例中，组合物具有如通过icIEF测得的至少58.0的主峰(峰面积％)、至多32.0的酸性区(峰面积％)和至多12.0的碱性区(峰面积％)。
在一些实施例中，本文所公开的药物组合物容纳于玻璃瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。在一些实施例中，药物组合物为冻干药物组合物。在一些实施例中，药物组合物为液体药物组合物。
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物通过包括以下步骤的方法制成：(a)冻干液体组合物以产生冻干组合物，该液体组合物包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体组合物具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000091
其中：Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中重链包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列，轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5；(b)用约7.2mL无菌注射用水(SWFI)复溶冻干组合物，以产生复溶组合物；以及(c)将复溶组合物稀释到静脉内(IV)输液袋中的等渗缓冲液中，以产生药物组合物，其中IV输液袋中药物组合物的最终体积为约100mL，并且其中药物组合物中免疫缀合物的最终浓度为约0.72mg/mL或约2.7mg/mL。
在一个方面，本公开提供了一种液体组合物，该液体组合物包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL，表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)，琥珀酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM，并且糖的浓度为约100mM至约260mM，其中液体组合物具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000101
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。在一些实施例中，抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，该重链可变结构域包含SEQID NO:7所示的氨基酸序列，并且该轻链可变结构域(VL)包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施例中，抗CD79b的重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且抗CD79b抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，糖为蔗糖。在一个具体实施例中，蔗糖的浓度为120mM。在一些实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。在一个具体实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
在一些实施例中，将本公开的液体组合物稀释到等渗缓冲液中。在一个示例性实施例中，将本公开的液体组合物溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中。在一些实施例中，稀释液体组合物的等渗缓冲液为0.9％氯化钠溶液、0.45％氯化钠溶液或5％葡萄糖溶液。
在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到0.9％氯化钠溶液中后在稀释后在2℃-8℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少约24小时。在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到0.9％氯化钠溶液中后在稀释后在9℃至25℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少4小时。在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到0.45％氯化钠溶液中后在稀释后在2℃-8℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少约24小时。在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到0.45％氯化钠溶液中后在稀释后在9℃至25℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少约4小时。在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到5％葡萄糖溶液中后在稀释后在2℃-8℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少约48小时。在一些实施例中，本文所提供的液体组合物稀释到5％葡萄糖溶液中后在稀释后在9℃至25℃下可保持稳定(根据本文其他地方所述的任何一项或多项标准)最长至少约8小时。
在一些实施例中，稀释在等渗缓冲液中的液体组合物在IV输液袋中。在一些实施例中，与稀释在等渗缓冲液中的组合物接触的IV输液袋的表面由聚氯乙烯(PVC)、聚烯烃(PO)、聚乙烯(PE)或聚丙烯(PE)组成。
在一些实施例中，本公开的稀释在IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物在30℃下可保持稳定性最长达约6小时至约8小时。在一些实施例中，本公开的溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物在25℃下可保持稳定性最长达约24小时。在一些实施例中，本公开的溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物液体组合物在5℃±3℃下可保持稳定性最长达约72小时。在某些实施例中，等渗缓冲液为生理盐水。在一些实施例中，液体组合物在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。在一些实施例中，液体组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
还提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物约150mg抗CD79b免疫缀合物、约9.0mg聚山梨醇酯20、约8.88mg琥珀酸、约4.08mg氢氧化钠和约309mg蔗糖，其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000121
其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中抗CD79b的重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中抗CD79b抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5(诸如约3.5)。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
进一步提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物包含约150mgpolatuzumab vedotin、约9.0mg聚山梨醇酯20、约8.88mg琥珀酸、约4.08mg氢氧化钠和约309mg蔗糖。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
还提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物约140mg抗CD79b免疫缀合物、约8.4mg聚山梨醇酯20、约8.27mg琥珀酸、约3.80mg氢氧化钠和约288mg蔗糖，其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000122
其中b为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中抗CD79b的重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中抗CD79b抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5(诸如约3.5)。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
进一步提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物包含约140mgpolatuzumab vedotin、约8.4mg聚山梨醇酯20、约8.27mg琥珀酸、约3.80mg氢氧化钠和约288mg蔗糖。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
还提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物包含约30mg抗CD79b免疫缀合物、约1.8mg聚山梨醇酯20、约1.77mg琥珀酸、约0.816mg氢氧化钠和约61.8mg蔗糖，其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000131
其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中抗CD79b的重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中抗CD79b抗体的轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5(诸如约3.5)。在一些实施例中，冻干组合物为冻干块状物。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
进一步提供了一种冻干药物组合物，该冻干药物组合物包含约30mg polatuzumabvedotin、约1.8mg聚山梨醇酯20、约1.77mg琥珀酸、约0.816mg氢氧化钠和约61.8mg蔗糖。在一些实施例中，冻干组合物(诸如块状物)容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
在一些实施例中，本文所提供的冻干药物组合物为冻干块状物。在一些实施例中，根据本文所述的实施例中任一项所述的冻干药物组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少6、12、18、24、30、36、42、48、54或60个月。
提供了液体药物组合物，该液体药物组合物包含：a)介于约5-60mg/mL的polatuzumab vedotin；b)介于约10-200mM的琥珀酸钠；c)介于约100-260mM的蔗糖；以及d)介于约0.06-0.12％w/v的聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于5和6之间。在一些实施例中，液体药物组合物包含：a)介于约10-55mg/mL的polatuzumab vedotin；b)介于约10-100mM的琥珀酸钠；c)介于约150-260mM的蔗糖；以及d)介于约0.08-0.12％w/v的聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于5.1和5.6之间。在一些实施例中，液体药物组合物包含：a)介于约15-40mg/mL的polatuzumab vedotin；b)介于约10-50mM的琥珀酸钠；c)介于约200-260mM的蔗糖；以及d)介于约0.1-0.12％w/v的聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH介于5.2和5.4之间。在一些实施例中，液体组合物通过复溶冻干组合物(诸如块状物)获得。在一些实施例中，液体组合物容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
还提供了一种液体药物组合物，该液体药物组合物包含：a)20mg/mL polatuzumabvedotin；b)10mM琥珀酸钠；c)120mM蔗糖；以及d)0.12％w/v聚山梨醇酯20，其中液体组合物的pH为约5.3。在一些实施例中，液体组合物通过复溶冻干组合物(诸如块状物)获得。在一些实施例中，液体组合物容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
在一些实施例中，根据本文所述的实施例中任一项所述的液体组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。在一些实施例中，根据本文所述的实施例中任一项所述的液体组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时。在一些实施例中，液体组合物通过复溶冻干组合物(诸如块状物)获得。在一些实施例中，液体组合物容纳于瓶(例如，20mL玻璃瓶)中。
在一些实施例中，本文所提供的复溶药物组合物在2℃-8℃下储存72小时后保持稳定。在一些实施例中，本文所提供的复溶药物组合物在暴露于环境光线的条件下在30℃下储存24小时后保持稳定。在一些实施例中，复溶药物组合物包含10mM琥珀酸盐中的20mg/mL polatuzumab vedotin、120mM蔗糖以及1.2mg/mL聚山梨醇酯20，其中pH为5.3。在一些实施例中，polatuzumab vedotin对其靶点(即CD79b)的亲和力或polatuzumab vedotin的生物活性
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的患者的增殖性疾患的方法，该方法包括向患者施用本文所述的药物组合物或液体组合物。还提供了本文所述的药物组合物或液体组合物在生产用于治疗有需要的患者的增殖性疾患的药物中的用途。在一些实施例中，提供了本文所述的药物组合物或液体组合物在治疗有需要的患者的增殖性疾患中的用途。还提供了本文所述的药物组合物或液体组合物在用于治疗有需要的患者的增殖性疾患的方法中的用途。
在一些实施例中，增殖性疾患为癌症。在一个示例性实施例中，癌症为B细胞增殖性疾患。在具体实施例中，B细胞增殖性疾患选自由以下项组成的组：淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、复发性/难治性DLBCL侵袭性NHL、惰性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、复发性侵袭性NHL、复发性惰性NHL、复发性NHL、难治性NHL、难治性惰性NHL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
在本公开的一个实施例中，B细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一个实施例中，B细胞增殖性疾患为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一个实施例中，B细胞增殖性疾患为复发性/难治性DLBCL。在一些实施例中，B细胞增殖性疾患为复发性/难治性DLBCL。在另一个实施例中，B细胞增殖性疾患为复发性NHL或难治性NHL。在又一个实施例中，B细胞增殖性疾患为滤泡性淋巴瘤(FL)。
附图说明
图1示出在包含固定浓度的PS20([PS20])的三种不同尺寸的静脉内(IV)输液袋中于30℃下静止储存22小时后高分子量物质(HMWS)的增加。
图2示出在包含固定浓度的PS20([PS20])的三种不同尺寸的IV输液袋中于30℃下搅拌(100rpm)2小时后HMWS的增加。
图3示出温度对包含不同浓度的PS20([PS20])的盐水IV输液袋中抗CD79b-vc-MMAE的物理稳定性的影响。
图4表面活性剂和输液类型对在30℃下静止储存22小时的影响。
图5A示出2-8℃的温度对搅拌下抗CD79b-vc-MMAE的稳定性的影响。图5B示出25℃的温度对搅拌下抗CD79b-vc-MMAE的稳定性的影响。图5C示出30℃的温度对搅拌下抗CD79b-vc-MMAE的稳定性的影响。
图6示出使用搅拌模型1得到的抗CD79b-vc-MMAE的物理稳定性。
图7示出使用搅拌模型2得到的抗CD79b-vc-MMAE的物理稳定性。
图8示出用于稳定免疫缀合物并防止其消除的硫代琥珀酰亚胺的水解反应。免疫缀合物上存在的硫代琥珀酰亚胺键的水解可避免马来酰亚胺消除。
图9示出在以下三个不同时间点，30℃下pH对酸性电荷变体形成的影响：2周、4周和8周。
图10示出在以下三个不同时间点，30℃下pH对碱性电荷变体形成的影响：2周、4周和8周。
图11示出在以下三个不同时间点，30℃下pH对HMWS形成的影响：2周、4周和8周。
图12示出30℃下为期4周pH和缓冲液种类对低分子量物质(LMWS)的影响。
图13示出通过尺寸排阻色谱法(SEC)得到的冻干制剂在30℃下的稳定性。
图14示出通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)得到的冻干制剂在30℃下的稳定性。
图15A至图15C示出蛋白质与蔗糖比率不同的冻干块状物的外观。图15A示出10mg/mL抗CD79b-vc-MMAE与260mM蔗糖的结果。图15B示出10mg/mL抗CD79b-vc-MMAE与180mM蔗糖的结果。图15C示出10mg/mL抗CD79b-vc-MMAE与120mM蔗糖的结果。
图16A至图16B示出蛋白质与蔗糖比率不同的冻干块状物的外观。图16A示出10mg/mL抗CD79b-vc-MMAE与260mM蔗糖的结果。图16B示出20mg/mL抗CD79b-vc-MMAE与120mM蔗糖的结果。
图17示出冻干抗CD79b-vc-MMAE药品在2-8℃、25℃和40℃下的稳定性，其中HMWS变体含量通过SEC测得。
图18示出冻干抗CD79b-vc-MMAE药品在2-8℃、25℃和40℃下的稳定性，其中HMWS变体含量通过icIEF测得。
具体实施方式
本公开提供了一种稳定的药物组合物，其包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂。本公开还提供了使用此类组合物治疗癌症的方法。
I.定义
应当理解，本公开不限于特定的组合物或生物系统，这些组合物或生物系统当然可以变化。另外应当了解，本文使用的术语只是为了描述特定实施例的目的，并非旨在进行限制。如在本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。因此，例如，对“分子”的提及包括两个或更多此类分子的组合等。
如本文所用的术语“约”是指为此技术领域中的技术人员容易知晓的相应值的常见误差范围。在本文中提及“约”值或参数包括(且描述)涉及该值或参数本身的实施例。
应理解，本文所述的公开的方面和实施例包括“包含”、“由以下组成”及“基本上由以下组成”所指的方面和实施例。
术语“抗CD79b免疫缀合物”是指抗CD79b抗体药物偶联物(ADC)。如本文所用，抗CD79b免疫缀合物包含能够结合CD79b的抗体或其片段、接头和药物分子。术语“接头”用于指6-马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧基羰基(MC-val-cit-PAB)。
术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且具体地包括例如单个抗CD79b单克隆抗体(包括但不限于激动剂、拮抗剂、中和抗体、全长或完整单克隆抗体)、具有多表位特异性的抗CD79b抗体组合物、多克隆抗体、多价抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体，只要它们表现出所需的生物活性即可)、单链抗CD79b抗体以及抗CD79b抗体的片段(参见下文，包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、双体抗体、单域抗体(sdAbs)，只要它们表现出所需的生物活性或免疫活性即可。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与抗体可互换使用。抗体可为嵌合抗体、人抗体、人源化抗体和/或亲和力成熟抗体。
术语“抗CD79b抗体”和“结合CD79b的抗体”是指这样的抗体，其能够以足够的亲和力结合CD79b，使得所述抗体可用作靶向CD79b的诊断和/或治疗剂。优选地，例如通过放射免疫测定(RIA)所测量的，抗CD79b抗体与不相关的非CD79b蛋白的结合程度小于该抗体与CD79b的结合程度的约10％。在某些实施例中，与CD79b结合的抗体具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施例中，抗CD79b抗体与CD79b的表位结合，该表位在来自不同物种的CD79b中是保守的。
基本的4链抗体单元为异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链组成(IgM抗体由5个基本异四聚体单元以及一条称为J链的多肽组成，因此包含10个抗原结合位点，而分泌IgA抗体可聚合以形成包含2-5个基本4链单元以及J链的多价组合体)。在IgG情况下，4链单元通常为约150,000道尔顿。每条L链通过一个共价二硫键连接至H链，而两条H链则根据H链的同种型通过一个或多个二硫键相互连接。每条H链和L链还具有规则间隔的链内二硫键。每条H链在N末端具有可变结构域(VH)，后接三个恒定结构域(CH)(对于每条α链和γ链)和四个CH结构域(对于μ和ε同种型)。每条L链在N末端具有可变结构域(VL)，并且另一端具有恒定结构域(CL)。VL与VH配对，CL与重链的第一恒定结构域(CH1)配对。据信特定的氨基酸残基在轻链和重链可变结构域之间形成界面。成对VH和VL一起形成单个抗原结合位点。有关不同类别抗体的结构和特性，参见例如：《基础和临床免疫学》(Basic and Clinical Immunology)，第8版，Daniel P.Stites,Abba I.Terr和TristramG.Parslow(主编)，Appleton&Lange，Norwalk，CT，1994年，第71页和第6章。
来源于任何脊椎动物的L链基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以配属为两种明显不同的类型中的一种，这两种类型分别称为卡帕(κ)和兰姆达(λ)。免疫球蛋白基于其重链恒定结构域(CH)的氨基酸序列，可以配属为不同的类别或同种型。存在以下五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM具有分别称为α、δ、ε、γ和μ的重链。γ和α类别基于CH序列和功能的相对较小的差异进一步分为子类，例如，人类表达以下子类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。
抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可称为“VH”。轻链的可变结构域可称为“VL”。这些结构域通常是抗体中变化最大的部分，并且包含抗原结合位点。
术语“可变”是指可变结构域的某些片段在抗体的序列之间差异很大。V结构域介导抗原结合并且定义特定抗体对其特定抗原的特异性。但是，可变性在可变结构域的110个氨基酸之间并非均匀分布。相反，V区域由相对不变的、由15-30个氨基酸组成的框架区(FR)的区段组成，这些框架区由变化极大的较短区域隔开，这些较短的区域称为“高变区”，其各自长9-12个氨基酸。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR，其主要采用β折叠结构，由三个高变区连接，这三个高变区形成连接β折叠结构的环并且在一些情况下形成β折叠结构的一部分。每条链中的高变区通过FR紧密结合在一起，并且与另一条链中的高变区一起，有助于抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，Bethesda，MD.(1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但具有各自效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性作用(ADCC)。
“完整”抗体是包含抗原结合位点以及CL和至少重链恒定结构域CH1、CH2和CH3的抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。优选地，完整抗体具有一种或多种效应子功能。
出于本文目的的“裸抗体”是未与药物部分或放射性标记缀合的抗体。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选地包含完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双体抗体；线性抗体(参见美国专利No.5,641,870，实例2；Zapata等人，《蛋白质工程》(Protein Eng.)8(10):1057-1062[1995])；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一个实施例中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，因此保留了结合抗原的能力。
木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同抗原结合片段(称为“Fab”片段)以及一个残留的“Fc”片段(其名称反映其容易结晶的能力)。Fab片段由完整L链以及H链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段在抗原结合方面为单价，即，它具有单个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生单个大的F(ab')2片段，其大致相当于两个通过二硫键连接的具有二价抗原结合活性并且仍能够交联抗原的Fab片段。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于Fab'片段在CH1结构域的羧基末端添加了一些残基，这些残基包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中关于其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab'的命名。F(ab')2抗体片段最初是作为在其间具有铰链半胱氨酸的成对Fab'片段而产生的。抗体片段的其他化学偶合也是已知的。
Fc片段包含通过二硫键连接在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区域中的序列决定，该区域也是由某些类型的细胞上存在的Fc受体(FcR)识别的部分。
“Fv”是包含完整的抗原识别和结合位点的最小抗体片段。该片段由一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域紧密、非共价结合的二聚体组成。在单链Fv(scFv)物种中，一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域可通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可缔合成类似于在双链Fv物种中的“二聚体”结构。由这两个结构域的折叠产生六个高变环(H链和L链各产生3个环)，这些环贡献氨基酸残基以实现抗原结合，并且时抗体具有抗原结合特异性。但是，即使单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的CDR的Fv的一半)也具有识别和结合抗原的能力，尽管其亲和力低于完整结合位点。
“单链Fv”也缩写为“sFv”或“scFv”，是包含连接至单个多肽链中的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽在VH和VL结构域之间进一步包含多肽接头，使sFv形成所需的抗原结合结构。有关sFv的综述，参见Pluckthun的《单克隆抗体的药理学》(ThePharmacology of Monoclonal Antibodies)，第113卷，Rosenburg和Moore主编，Springer-Verlag，New York，第269-315页(1994)；Borrebaeck 1995，下文。
术语“双体抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，其片段包含连接至与同一多肽链(VH-VL)中的轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)。小抗体片段通过构建sFv片段(参见前段)而制得，其中在VH和VL结构域之间具有短接头(约5-10个残基)，由此实现了V结构域的链间配对而非链内配对，得到二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双体抗体可为二价抗体或双特异性抗体。双特异性双体抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和VL结构域位于不同的多肽链上。双价抗体更全面地描述于例如：EP 404,097；WO 93/11161；Hudson等人，《自然医学》(Nat.Med.)9:129-134(2003)；以及Hollinger等人，《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)90:6444-6448(1993)。Hudson等人在《自然医学》(Nat.Med.)9:129-134(2003)中还描述了三体抗体和四体抗体。
本文所使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群中获得的抗体，例如，除了可能存在的少量天然存在的突变，该抗体群包含的单个抗体是相同的。单克隆抗体对单个抗原位点具有高特异性。此外，与包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除特异性以外，单克隆抗体的优势还在于它们可以在不受其他抗体污染的情况下合成。修饰语“单克隆”不应理解为要求通过任何特定方法产生抗体。例如，可通过Kohler等人，《自然》(Nature)，256:495(1975)率先介绍的杂交瘤方法来制备，或者可使用重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。“单克隆抗体”还可使用例如Clackson等人，《自然》(Nature)，352:624-628(1991)以及Marks等人，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)，222:581-597(1991)所述的技术从噬菌体抗体文库中分离得到。
本文中的单克隆抗体包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，一条或多条链的其余部分与来自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列以及这些抗体的片段相同或同源，只要它们表现出所需的生物活性即可(参见美国No.4,816,567；和Morrison等人，《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，81:6851-6855(1984))。本文中的目标嵌合抗体包括“灵长类”抗体，其包含来源于非人灵长类动物(例如，旧大陆猴、猿等)的可变结构域抗原结合序列以及人恒定区序列。
“人源化”形式的非人类(例如，啮齿类)抗体为包含来源于非人类抗体的最小序列的嵌合抗体。在大多数情况下，人源化抗体为人免疫球蛋白(受体抗体)，其中受体的高变区中的残基被来自非人类物种(供体抗体)的高变区的残基取代，所述非人类物种诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物，其具有所需的抗体特异性、亲和力和功能。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基被相应的非人类残基取代。此外，人源化抗体可包含受体抗体或供体抗体中不存在的残基。这些修饰旨在进一步完善抗体性能。总体上，人源化抗体将基本上包含所有中的至少一个可变结构域，通常是两个可变结构域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，并且所有或基本上所有的FR为人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体还任选地包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，该免疫球蛋白通常为人免疫球蛋白。更多详情参见Jones等人，《自然》(Nature)321:522-525(1986)；Riechmann等人，《自然》(Nature)332:323-329(1988)；以及Presta，《结构生物学新见》(Curr.Op.Struct.Biol.)2:593-596(1992)。另请参见以下综述文章以及其中引用的参考文献：Vaswani和Hamilton，《过敏、哮喘及免疫学年鉴》(Ann.Allergy,Asthma andImmunol.)，1:105-115(1998)；Harris，《生物化学学会学报》(Biochem.Soc.Transactions)，23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross，《生物技术新见》(Curr.Op.Biotech.)，5:428-433(1994)。
“人抗体”是具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的抗体和/或使用本文所公开的用于制备人抗体的任何技术制得的抗体。人抗体的该定义特别地排除了包含非人抗原结合残基的人源化抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体，包括噬菌体展示文库。Hoogenboom和Winter，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)，227:381(1991)；Marks等人，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)，222:581(1991)。还可用于制备人单克隆抗体的方法如以下文献所述：Cole等人，《单克隆抗体与癌症治疗》(Monoclonal Antibodies and CancerTherapy)，Alan R.Liss，第77页(1985)；Boerner等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)，147(1):86-95(1991)。另参见van Dijk和van de Winkel，《药理学新见》(Curr.Opin.Pharmacol.)，5:368-74(2001)。可以通过向转基因动物施用抗原来制备人抗体，该转基因动物已经修饰以对抗原攻击产生应答而产生此类抗体，但其内源基因座已失效，例如，免疫异种小鼠(参见例如，有关XENOMOUSETM技术的美国专利No.6,075,181和6,150,584)。另参见例如Li等人，《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，103:3557-3562(2006)关于通过人B细胞杂交瘤技术产生的人抗体。
如本文所用的术语“高变区”、“HVR”或“HV”是指在序列上高变和/或形成结构上限定的环的抗体可变结构域的区域。通常，抗体包含六个高变区：三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。许多高变区的描述得到应用，并且包含于本文中。Kabat互补决定区(CDR)基于序列变异性并且是最常用的(Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，Bethesda，MD.(1991))。相反，Chothia指的是结构环的位置(Chothia和Lesk《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)196:901-917(1987))。使用Kabat编号规范进行编号时，Chothia CDR-H1环末端在H32和H34之间变化，具体取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入位置放在H35A和H35B；如果35A和35B均不存在，则该环在32处结束；如果仅存在35A，则该环在33处结束；如果35A和35B均存在，则该环在34处结束)。AbM高变区表示Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件采用。“接触”高变区基于可用的复杂晶体结构的分析结果。这些高变区中的每个残基如下文所述。
Figure BDA0003065189990000231
高变区可包含如下“延伸高变区”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97(L3)以及VH中的26-35B(H1)、50-65、47-65或49-65(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变结构域残基均根据上述Kabat等人的方法进行编号。
“框架”或“FR”残基是除本文定义的高变区残基以外的那些可变结构域残基。
术语“Kabat所述的可变结构域残基编号”或“Kabat所述的氨基酸位置编号”及其变体是指Kabat等人在以下文献中提出的用于重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统：《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，Bethesda，MD.(1991)。使用该编号系统，实际线性氨基酸序列可能包含较少或附加的氨基酸，其对应于可变结构域的FR或CDR的缩短或插入。例如，重链可变结构域可在H2的残基52之后包括单个氨基酸插入片段(根据Kabat编号的残基52a)以及重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat编号的残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列的同源性区域进行比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。
当提及可变结构域中的残基(大约是轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用Kabat编号系统(例如，Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白质序列》(Sequences ofProteins of Immunological Interest)，第5版，美国卫生与公众服务部，国立卫生研究院，Bethesda，MD.(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号系统”或“EU索引”(例如，上述Kabat等人所报道的EU索引)。“Kabat所述的EU索引”是指人IgG1EU抗体的残基编号。除非本文中另有说明，否则提及的抗体可变结构域中的残基编号意指通过Kabat编号系统得到的残基编号。除非本文中另有说明，否则提及的抗体恒定结构域中的残基编号意指通过EU编号系统得到的残基编号(例如，参见美国临时申请号No.60/640,323，EU编号的数字)。
“亲和力成熟”抗体是其中一个或多个HVR发生一种或多种改变的抗体，其导致抗体对抗原的亲和力相比于不具有这些改变的亲本抗体的亲和力得到改善。优选的亲和力成熟抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔级亲和力。亲和力成熟抗体通过本领域中已知的方法产生。Marks等人《生物技术》(Bio/Technology)10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变如以下文献所述：Barbas等人，《美国国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)91:3809-3813(1994)；Schier等人，《基因》(Gene)169:147-155(1995)；Yelton等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)155:1994-2004(1995)；Jackson等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)154(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人，《分子生物学杂志》(J.Mol.Biol.)226:889-896(1992)。
“结合亲和力”通常是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指内在结合亲和力，其反映了结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用。分子X对其配偶体Y的亲和力一般可由解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常规方法测量，包括本文所述的那些方法。低亲和力抗体通常缓慢结合抗原并且倾向于容易解离，而高亲和力抗体通常快速结合抗原并且倾向于保持更长的结合时间。测量结合亲和力的各种方法是本领域中已知的，其中任何一种方法均可用于本公开的目的。具体的例示性实施例如下文所述。
本文中提及的“或更出色”的结合亲和力是指分子与其结合配偶体之间具有更强的结合力。如本文所述用的“或更出色”是指更强的结合力，以较小的Kd数值表示。例如，当提及抗体对抗原的亲和力为“.6nM或更出色”时，该抗体对抗原的亲和力为<.6nM，即.59nM、.58nM、.57nM等或小于.6nM的任意值。
在一个实施例中，通过放射性标记抗原结合测定(RIA)测量根据本公开所述的“Kd”或“Kd值”，该RIA如由以下测定所述用Fab形式的目标抗体及其抗原进行，所述测定通过下列方式来测量抗原对于Fab的溶液结合亲和力：在一系列滴定的未标记抗原存在下使Fab与最小浓度的(125I)-标记抗原平衡，接着用抗Fab抗体包被的板捕获结合的抗原(Chen等人，(1999)《分子生物学杂志》(J.Mol Biol)293:865-881)。为了确定用于测定的条件，在用含5μg/mL捕获抗Fab抗体(Cappel Labs)的50mM碳酸钠(pH 9.6)包被微量滴定板(Dynex)过夜，且随后在室温(大约23℃)下在含2％(w/v)牛血清白蛋白的PBS阻断二至五小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与感兴趣的Fab的系列稀释液(例如，遵循在Presta等人，(1997)《癌症研究》(Cancer Res.)57:4593-4599中抗VEGF抗体(Fab-12)的评定)混合。接着将感兴趣的Fab孵育过夜；然而，孵育可持续更长时间(例如，65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕获板以在室温下孵育(例如，一小时)。随后移除溶液并且用含0.1％Tween-20的PBS洗涤该板八次。当板已干燥时，添加150μl/孔的闪烁体(MicroScint-20；Packard)，并且在TOPCOUNTTMγ计数器(Packard)上对板计数十分钟。选择给出小于或等于20％最大结合的各Fab的浓度以用于竞争性结合测定中。
根据另一实施例，在25℃下，用经固定化的抗原CM5芯片，在10个响应单位(RU)下，使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000仪器(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，通过表面等离子体共振测定来测量“Kd”或“Kd值”。简而言之，根据供应商说明书，用N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC)及N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活羧甲基化的葡聚糖生物感测器芯片(CM5,BIAcore Inc.)。将抗原用10mM醋酸钠(pH 4.8)稀释至5μg/mL(约0.2μM)，之后以5μL/min的流速进行注射以获得大约10响应单位(RU)的偶联蛋白。注射抗原之后，注射1M乙醇胺以阻断未反应的基团。关于动力学测量，在25℃下，以大约25μL/min的流速，注射在含有0.05％Tween 20的PBS(PBST)中的Fab的两倍系列稀释液(0.78nM至500nM)。使用简单的一对一Langmuir结合模型(BIAcore Evaluation Software 3.2版)，通过同时拟合缔合与解离感测器图来计算缔合速率(kon)与解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)计算为比率koff/kon。参见例如Chen,Y.等人，(1999)《分子生物学杂志》(J.Mol Biol)293:865-881。若通过上述表面等离子体共振测定得出缔合速率超过106M-1S-1，则可通过使用荧光淬灭技术测定缔合速率，即如在分光计诸如配备止流装置的分光光度计(AvivInstruments)或8000系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯所测得的，在浓度渐增的抗原存在下，测量在25℃下含20nM抗-抗原抗体(Fab形式)的PBS(pH7.2)中的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的增加或减少。
根据本公开所述的“缔合速率”或“缔合的速率”或“kon”也可使用如上文所述的BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000仪器(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)通过如上文所述的相同的表面等离子体共振技术进行测定。
如本文所用，短语“基本上相似”或“基本上相同”表示两个数值之间具有足够高的相似度(通常一个数值与本公开所述的抗体相关联，而另一个数值与参比/对照抗体相关联)，由此使得本领域的技术人员将认为在由所述值(例如，Kd值)衡量的生物学特性的上下文中，两个值之间的差异几乎没有生物学和/或统计学意义。根据参比/对照抗体的值，所述两个值之间的差异优选地小于约50％，优选地小于约40％，优选地小于约30％，优选地小于约20％，优选地小于约10％。
如本文所用，短语“显著减少”或“明显不同”表示两个数值之间具有足够高的差异(通常一个数值与本公开所述的抗体相关联，而另一个数值与参比/对照抗体相关联)，由此使得本领域的技术人员将认为在由所述值(例如，Kd值、HAMA响应)衡量的生物学特性的上下文中，两个值之间的差异具有统计学意义。根据参比/对照抗体的值，所述两个值之间的差异优选地大于约10％，优选地大于约20％，优选地大于约30％，优选地大于约40％，优选地大于约50％。
出于本文目的的“受体人框架”是包含来源于人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“来源于”人免疫球蛋白框架或人共有框架的受体人框架可包含与所述人免疫球蛋白框架或人共有框架相同的氨基酸序列，或者可包含预先存在的氨基酸序列变化。在存在预先存在的氨基酸变化的情况下，优选地存在不超过5个预先存在的氨基酸变化，并且优选地存在4个或更少、或3个或更少的预先存在的氨基酸变化。在VH中存在预先存在的氨基酸变化的情况下，优选地那些变化仅在位置71H、73H和78H位置中的三个、两个或一个处；例如，在那些位置处的氨基酸残基可为71A、73T和/或78A。在一个实施例中，VL受体人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人共有框架”是这样的框架，其表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基。一般而言，人免疫球蛋白VL或VH序列的选择来自于可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组为Kabat等人所述的亚组。在一个实施例中，对于VL，亚组为Kabat等人所述的κI亚组。在一个实施例中，对于VH，亚组为Kabat等人所述的亚组III。
“VH亚组III共有框架”包含由Kabat等人所述的可变重亚组III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施例中，VH亚组III共有框架氨基酸序列包含以下序列中的至少包含一部分或全部：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:11)-H1-WVRQAPGKGLEWV(SEQID NO:12)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO:145)-H3-WGQGTLVTVSS(SEQID NO:13)。
“VL亚组I共有框架”包括由Kabat等人所述的可变轻κ亚组I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施例中，VL亚组I共有框架氨基酸序列包含以下序列中的至少包含一部分或全部：DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:14)-L1-WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ IDNO:15)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:141)-L3-FGQGTKVEIKR(SEQID NO:16)。
“未修饰的人框架”是具有与受体人框架相同的氨基酸序列的人框架，例如在受体人框架中缺少人氨基酸对非人氨基酸的置换。
抗CD79b免疫缀合物或“结合”CD79b的抗体是一种以足够高的亲和力结合CD79b抗原的抗体，由此使得该抗体可用作靶向表达该抗原的细胞或组织的治疗剂，并且与其他蛋白质不发生显著的交叉反应。在此类实施例中，通过荧光活化细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)测得，抗体与“非靶”蛋白的结合程度小于抗体与其特定靶标蛋白结合程度的约10％。关于抗体与靶分子的结合，术语“特异性结合”或“特异性结合到”或“特异于”特定多肽或特定多肽靶标上的表位意指明显不同于非特异性相互作用。特异性结合可通过例如测定分子的结合相比于对照分子的结合来测量，该对照分子通常为具有类似结构但不具有结合活性的分子。例如，可通过与类似于靶标的对照分子(过量的无标记靶标)竞争来测定特异性结合。在这种情况下，如果标记靶标与探针的结合受到过量无标记靶标的竞争性抑制，则表明存在特异性结合。如本文所用的术语“特异性结合”或“特异性结合到”或“特异于”特定多肽或特定多肽靶标上的表位可表现为例如对靶标具有至少约10-4M、或者至少约10-5M、或者至少约10-6M、或者至少约10-7M、或者至少约10-8M、或者至少约10-9M、或者至少约10-10M、或者至少约10-11M、或者至少约10-12M或更大的Kd的分子。在一个实施例中，术语“特异性结合”是指抗体结合到CD79b多肽上的表位而基本上不结合到任何其他多肽或多肽表位的结合。
抗体“效应子功能”是指归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的生物活性，并且随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的示例包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体)的下调；以及B细胞活化。
本文的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区域，该C末端区域包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链Fc区的边界可能变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸至该重链的羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可在例如抗体的生产或纯化过程中或通过重组设计编码抗体重链的核酸而去除。因此，完整抗体的组合物可包括去除所有K447残基的抗体群体、未去除K447残基的抗体群体以及具有含和不含K447残基的抗体混合物的抗体群体。
“功能性Fc区”具有天然序列Fc区的“效应子功能”。示例性的“效应子功能”包括C1q结合；CDC；Fc受体结合；ADCC；吞噬作用；细胞表面受体(例如，B细胞受体；BCR)的下调等。此类效应子功能通常需要Fc区与结合域(例如，抗体可变结构域)组合，并且可使用例如本文定义中所公开的各种测定方法进行评估。
“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；以及天然序列人IgG4 Fc区及其天然存在的变体。
“变体Fc区”包含不同于天然序列Fc区的氨基酸序列，其借助于至少一个氨基酸修饰、优选一个或多个氨基酸置换而实现。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区具有至少一个氨基酸置换，例如，在天然序列的Fc区或亲本多肽的Fc区中具有约一个至约十个氨基酸置换，并且优选地具有约一个至约五个氨基酸置换。本文所述的变体Fc区优选地与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区具有至少约80％的同源性，并且最优选与其具有至少约90％的同源性，更优选地与其具有至少约95％的同源性。
“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中分泌的Ig结合到某些细胞毒性细胞(例如，自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上的Fc受体(FcR)，使这些细胞毒性效应细胞与带有抗原的靶细胞特异性结合，随后用细胞毒素杀死靶细胞。抗体“武装”细胞毒性细胞，并且是此类杀伤作用所必需的。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIII。造血细胞上的FcR表达总结在Ravetch和Kinet，《免疫学年评》(Annu.Rev.Immunol.)9:457-92(1991)的第464页的表3中。为评估目标分子的ADCC活性，可实施体外ADCC分析，例如美国专利No.5,500,362或5,821,337中所述。用于此类测定的有用效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。可选地或另外地，目的分子的ADCC活性可以在体内评估，例如，在动物模型(诸如在Clynes等人，(USA)95:652-656(1998)中所公开的)中评估。
“Fc受体”或“FcR”是指与抗体的Fc区结合的受体。优选的FcR为天然序列人FcR。此外，优选的FcR是一种结合IgG抗体(一种γ受体)的FcR，并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，其包括这些受体的等位基因变体或剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，这两者具有相似的氨基酸序列，主要区别在于其胞质结构域。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(参见综述：M.in
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《免疫学年评》(Annu.Rev.Immunol.)15:203-234(1997)。)有关FcR的综述见：Ravetch和Kine，《免疫学年评》(Annu.Rev.Immunol.)9:457-492(1991)；Capel等人，《免疫方法》(Immunomethods)4:25-34(1994)；以及de Haas等人，《实验室与临床医学杂志》(J.Lab.Clin.Med.)126:330-41(1995)。本文中的术语“FcR”涵盖其他FcR，其中包括有待将来鉴定的那些。该术语还包括新生儿受体FcRn，该受体负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)117:587(1976)；以及Kim等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)24:249(1994))。
可在例如表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞系中或者在给予具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中，测定与人FcRn的体内结合以及人FcRn高亲和力结合多肽的血清半衰期。WO 2000/42072(Presta)描述了与FcR的结合得到改善或有所减少的抗体变体。参见例如：Shields等人，《生物化学杂志》(J.Biol.Chem.)9(2):6591-6604(2001)。
“人效应细胞”是表达一种或多种FcR并且执行效应子功能的白细胞。优选地，这些细胞至少表达FcγRIII并且执行ADCC效应子功能。介导ADCC的人白细胞包括外周血单核细胞(PBMC)、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞；其中优选PBMC和NK细胞。效应子细胞可从天然来源(例如血液)中分离得到。
“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指在补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的活化通过补体系统的第一种成分(C1q)与与其同源性抗原结合的抗体(适当的亚类)的结合而开始。为评估补体活化，可实施CDC测定，如以下文献所述：Gazzano-Santoro等人，《免疫法杂志》(J.Immunol.Methods)202:163(1996)。具有改变的Fc区氨基酸序列(具有变异Fc区的多肽)和增加或降低的C1q结合能力的多肽变体描述于例如美国专利No.6,194,551B1和WO 1999/51642中。另见例如：Idusogie等人，《免疫学杂志》(J.Immunol.)164:4178-4184(2000)。
术语“含Fc区抗体”是指包含Fc区的抗体。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可在例如抗体的纯化过程中或通过重组设计编码抗体的核酸而去除。因此，根据本公开所述的包含具有Fc区的抗体的组合物可包含具有K447的抗体、去除所有K447的抗体、或包含和不含K447残基的抗体的混合物。
本文所述的“B细胞表面标记物”或“B细胞表面抗原”是在B细胞表面表达的抗原，可以用与其结合的拮抗剂靶向，包括但不限于针对B细胞表面抗原的抗体或能够拮抗配体与天然存在的B细胞抗原的结合的可溶形式的B细胞表面抗原。示例性的B细胞表面标记物包括CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86白细胞表面标记物(有关描述，请参见《白细胞抗原事实手册》(The Leukocyte Antigen Facts Book)，第2版。1997年，Barclay等人主编，Academic Press，Harcourt Brace&Co.,New York)。其他B细胞表面标记物包括RP105、FcRH2、B细胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、BAFF、BLyS、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRH1、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA和239287。与哺乳动物的其他非B细胞组织相比，特别关注的B细胞表面标记物优选地在B细胞上表达，并且可在前体B细胞和成熟B细胞上表达。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物中通常以细胞生长不受控制为特征的生理状况。癌症的实例包括但不限于造血系统癌症或与血液有关的癌症，诸如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴样恶性肿瘤，还包括脾脏癌和淋巴结癌以及恶性肿瘤、母细胞瘤和肉瘤。癌症的更具体的实例包括与B细胞相关的癌症，包括例如高、中和低度淋巴瘤(包括B细胞淋巴瘤，诸如与粘膜相关的淋巴组织B细胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)和霍奇金淋巴瘤和T细胞淋巴瘤)以及白血病(包括继发性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)诸如B细胞白血病(CD5+B淋巴细胞)、髓样白血病诸如急性髓样白血病、慢性髓样白血病、淋巴细胞白血病诸如性淋巴细胞白血病(ALL)和脊髓发育不良)以及其他与血液和/或B细胞或T细胞相关的癌症。还包括其他造血细胞的癌症，这些细胞包括多形核白细胞诸如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞、树突状细胞、血小板、红细胞和自然杀伤细胞。还包括选自以下项的癌性B细胞增殖性疾患：淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性惰性NHL、难治性NHL、难治性惰性NHL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、DLBCL、复发性/难治性DLBCL、FL和套细胞淋巴瘤。B细胞癌的起源包括：边缘区B细胞淋巴瘤起源于记忆区边缘B细胞，滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤起源于生发中心的亮区的中心细胞，慢性淋巴细胞白血病和小淋巴细胞性白血病起源于B1细胞(CD5+)，套细胞淋巴瘤起源于外套层的原初B细胞，伯基特淋巴瘤起源于生发中心暗区的成中心细胞。包括造血细胞的组织在本文中称为“造血细胞组织”，其包括胸腺和骨髓以及外周淋巴组织诸如脾、淋巴结、与粘膜相关的淋巴组织诸如与肠道相关的淋巴组织、扁桃体、派尔集合淋巴结以及与其他粘膜相关的阑尾和淋巴组织诸如支气管内膜。此类癌症的更多具体实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝癌(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、白血病和其他淋巴组织增生性疾患以及各种类型的头颈癌。
本文所述的“B细胞恶性肿瘤”或“B细胞增殖性疾患”包括非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括低度/滤泡性NHL、小淋巴细胞性(SL)NHL、中度/滤泡性NHL、中度弥漫性NHL、高度免疫母细胞性NHL、高度淋巴母细胞性NHL、高度非核裂小细胞NHL、巨块病变NHL、套细胞淋巴瘤、与AIDS相关的淋巴瘤和Waldenstrom巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、DLBCL、复发性/难治性DLBCL、FL、以淋巴细胞为主的霍奇金病(LPHD)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、惰性NHL(包括复发性惰性NHL和利妥昔单抗难治性非NHL)；白血病，包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病、慢性粒细胞性白血病；套细胞淋巴瘤；以及其他血液系统恶性肿瘤。此类恶性肿瘤可用针对B细胞表面标记物的抗体诸如CD79b进行治疗。本文设想通过施用针对B细胞表面标记物的抗体诸如CD79b来治疗此类疾病，并且包括施用未缀合的(“裸”)抗体或缀合至本文所公开的细胞毒性剂的抗体。本文还设想通过联合疗法来治疗此类疾病，该联合疗法包括同时或连续给予本公开所述的抗CD79b抗体或抗CD79b抗体药物结合物与另一种抗体或抗体药物偶联物、另一种细胞毒剂、放疗或其他治疗。在本公开所述的示例性治疗方法中，一起或依次给予本公开所述的抗CD79b抗体与抗CD20抗体、免疫球蛋白或其CD20结合片段。抗CD20抗体可为裸抗体或抗体药物偶联物。在联合疗法的一个实施例中，抗CD79b抗体为本公开所述的抗体，并且抗CD20抗体为
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(利妥昔单抗)。
如本文所用，术语“非霍奇金淋巴瘤”或“NHL”是指除霍奇金淋巴瘤以外的淋巴系统癌。通常，霍奇金淋巴瘤与非霍奇金淋巴瘤的区别在于，霍奇金淋巴瘤中存在Reed-Sternberg细胞，而非霍奇金淋巴瘤中则不存在所述细胞。如本文所用的术语所涵盖的非霍奇金淋巴瘤的实例包括本领域的技术人员(例如，肿瘤学家或病理学家)根据本领域已知的分类方案确定的非霍奇金淋巴瘤，诸如根据修订的欧美淋巴瘤淋巴瘤(REAL)分类方案确定，如A.Victor Hoffbrand和John E.Pettit主编的《临床血液学图谱(第3版)》(ColorAtlas of Clinical Hematology(3rd edition))(Harcourt Publishers Ltd.,2000)所述。具体地参见图11.57、11.58和11.59中的列表。更具体的实例包括但不限于：复发性或难治性NHL、一线低度NHL、III/IV期NHL、化疗耐药性NHL、前体B淋巴母细胞白血病和/或淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病和/或前淋巴细胞性和/或小淋巴细胞性淋巴瘤、B细胞前淋巴细胞性淋巴瘤、免疫细胞瘤和/或淋巴浆细胞性淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤、脾脏边缘区淋巴瘤、结外边缘区-MALT淋巴瘤、淋巴结边缘区淋巴瘤、毛细胞白血病、浆细胞瘤和/或浆细胞骨髓瘤、低度/滤泡性淋巴瘤、中度/滤泡性NHL、套细胞淋巴瘤、滤泡中心淋巴瘤(滤泡性淋巴瘤)、中度弥漫性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤、复发性/难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤、侵袭性NHL(包括侵袭性前线NHL和侵袭性复发性NHL)、自体干细胞移植后复发或难治性NHL、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性淋巴瘤、高度免疫母细胞性NHL、高度淋巴细胞性NHL、高度非核裂小细胞NHL、巨块病变NHL、伯基特淋巴瘤、前体(外周)大颗粒淋巴细胞白血病、蕈状真菌病和/或Sezary综合征、皮肤(皮肤)淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤。
“病症”是指可通过使用本公开所述的物质/分子或方法进行治疗的任何疾病。其包括慢性和急性病症或疾病，包括使哺乳动物易患所述病症的那些病理状态。本文所述的待治疗的病症的非限制性实例包括：癌性疾病，诸如恶性和良性肿瘤；非白血病和淋巴样恶性肿瘤；神经、胶质、星形细胞、下丘脑及其他腺体、巨噬细胞、上皮、间质和囊胚性病症；以及炎性、免疫系统及其他与血管生成有关的病症。病症进一步包括癌性疾病，诸如B细胞增殖性疾患和/或B细胞肿瘤，例如：淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性惰性NHL、难治性NHL、难治性惰性NHL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
术语“细胞增殖性疾患”和“增殖性疾患”是指与某种程度的异常细胞增殖相关的病症。在一个实施例中，增殖性疾患为癌症。在一些实施例中，癌症为B细胞增殖性疾患。
如本文所用，术语“肿瘤”是指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性还是良性，以及所有前癌性和癌性细胞和组织。
“治疗”或“疗法”或“缓解”是指治疗处理和预防性或防护性措施，其目的是防止或减慢(减轻)目标病理性疾病或病症。需要治疗的那些包括已经患有病症的那些以及易于患病症的那些或待预防病症的那些。如果根据本公开所述的方法，在接受治疗量的抗CD79b抗体后，受试者或哺乳动物的表达CD79b多肽的癌症“治疗”成功，患者表现出以下项中的一者或多者的可观察和/或可测量的减少或不存在：癌细胞数量减少或不存在癌细胞；肿瘤大小减小；抑制(即，在某种程度上减慢并且优选停止)癌细胞浸润到周围器官(包括癌症扩散到软组织和骨骼中)；抑制(即，在某种程度上减慢并且优选停止)肿瘤转移；在某种程度上抑制肿瘤生长；和/或在某种程度上缓解与特定癌症相关的一种或多种症状；发病率和死亡率下降；以及生活质量问题得到改善。在某种程度上，抗CD79b抗体可阻止生长或杀死既存癌细胞，它可以抑制细胞生长或具有细胞毒性。患者也可能感觉到这些体征或症状的减轻。
用于评估治疗是否成功和疾病是否改善的上述参数可通过医师熟悉的常规程序轻松进行衡量。对于癌症治疗，例如，可以通过评估疾病进展时间(TTP)和/或确定缓解率(RR)来衡量疗效。可通过分期试验确定是否发生转移，并且可通过骨骼扫描以及钙水平及其他酶的检测来确定是否扩散到骨骼。还可进行CT扫描以检查是否扩散到骨盆及该区域中的淋巴结。分别利用胸部X线检查和已知的肝酶水平测量方法检查肺和肝转移。用于监测疾病的其他常规方法包括经直肠超声检查(TRUS)和经直肠穿刺活检(TRNB)。
对于作为局灶性癌症的膀胱癌，确定疾病进展的方法包括通过膀胱镜检查进行尿细胞学评估、监测尿液中血液的存在、通过超声检查或静脉肾盂造影检查尿路上皮、计算机断层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)。可通过腹部CT、胸部X线或放射性核素成像来评估是否存在远端转移。
“慢性”给药是指与急性模式相反，以连续模式给药，以便长时间保持初始治疗效果(活性)。“间歇性”给药并非连续实施而不中断的治疗，在本质上为周期性治疗。
“个体”、“受试者”或“患者”为脊椎动物。在某些实施例中，所述脊椎动物是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于家畜(诸如牛)、运动动物、宠物(诸如猫、犬和马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。在某些实施例中，哺乳动物是人。
与一种或多种其他治疗剂“联合”给药包括同时(并发)以及以任何顺序连续给药。
如本文所用，“载体”包括药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂，这些载体在所采用的剂量和浓度下对暴露于其中的细胞或哺乳动物无毒。生理学上可接受的载体通常是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠；和/或非离子型表面活性剂，诸如
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聚乙二醇(PEG)和
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术语“药物组合物”或“药物制剂”是指处于允许包含的活性成分的生物活性有效的形式并且不含对于将被施用制剂的受试者具有不可接受的毒性的另外组分的抗CD79b免疫缀合物制剂。此类制剂为无菌制剂。“药学上可接受的”赋形剂(载体、添加剂)是指可合理地施用于哺乳动物以提供有效剂量的所用活性成分的赋形剂。
“无菌”制剂是无菌的或者不含或基本上不含所有活微生物及其孢子。
如本文所公开的抗CD79b免疫缀合物的“有效量”是足以实现特定目的的量。相对于所述目的，可以凭经验并且以常规方式确定“有效量”。
术语“治疗有效量”是指有效“治疗”受试者或哺乳动物的疾病或病症的抗CD79b免疫缀合物的量。在癌症的情况下，免疫缀合物的治疗有效量可以减少癌细胞数；减小肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)癌细胞浸润周围器官；抑制(即，在一定程度上减缓和优选地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解癌症相关的一种或多种症状。参见本文中“治疗”的定义。在某种程度上，免疫缀合物可阻止生长和/或杀死既存癌细胞，它可以抑制细胞生长和/或具有细胞毒性。“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段下有效实现所需预防结果的量。预防有效量通常但并非必须小于治疗有效量，因为在疾病发生之前或疾病早期阶段对受试者使用预防剂量。
抗CD79b免疫缀合物的“生长抑制量”是能够在体外或体内抑制细胞特别是肿瘤例如癌细胞生长的量。为实现抑制肿瘤细胞生长目的的抗CD79b免疫缀合物的“生长抑制量”可以凭经验和通过常规方式确定。
抗CD79b免疫缀合物的“细胞毒性量”是能够在体外或体内破坏细胞特别是肿瘤例如癌细胞的量。为实现抑制肿瘤细胞生长目的的抗CD79b抗体的“细胞毒性量”可以凭经验和通过常规方式确定。
“表达CD79b的细胞”是在细胞表面或以分泌形式表达内源性或转染的CD79b多肽的细胞。“表达CD79b的癌症”是包含细胞表面存在CD79b多肽或产生和分泌CD79b多肽的细胞的癌症。“表达CD79b的癌症”任选地在其细胞表面上产生足够水平的CD79b多肽，使得抗CD79b抗体可与其结合并且对癌症具有治疗效果。在另一个实施例中，“表达CD79b的癌症”任选地产生并且分泌足够水平的CD79b多肽，使得抗CD79b抗体拮抗剂与之结合并且对癌症具有治疗效果。关于后者，拮抗剂可为减少、抑制或阻止肿瘤细胞分泌的CD79b多肽产生和分泌的反义寡核苷酸。与相同组织类型的非癌细胞相比，“过表达”CD79b多肽的癌症是在其细胞表面具有更高水平的CD79b多肽或者产生并且分泌该多肽的癌症。此类过表达可能由基因扩增或者转录或翻译的增加引起。通过评估存在于细胞表面或细胞分泌的CD79b蛋白水平的升高，可在检测或预后测定中确定CD79b多肽的过表达(例如，通过免疫组化测定，使用针对分离的CD79b多肽制得的抗CD79b抗体(可使用重组DNA技术由编码CD79b多肽的分离核酸中制得)；通过FACS分析等)。另选地或另外地，可通过例如使用与编码CD79b的核酸或其互补序列相对应的基于核酸的探针，通过荧光原位杂交来测量细胞中编码CD79b多肽的核酸或mRNA的水平(FISH，参见1998年10月公开的WO98/45479；Southern杂交法、Northern杂交法或聚合酶链反应(PCR)技术诸如实时定量PCR(RT-PCR))。还可使用基于抗体的测定，通过测量生物体液诸如血清中的脱落抗原来研究CD79b多肽的过表达(另请参见例如：1990年6月12日授权的美国专利No.4,933,294；1991年4月18日公开的WO91/05264；1995年3月28日授权的美国专利5,401,638；以及Sias等人，《免疫法杂志》(J.Immunol.Methods)132:73-80(1990))。除上述测定以外，熟练的从业人员还可实施各种体内测定。例如，可以使患者体内的细胞暴露于抗体，该抗体任选地用可检测的标记物(例如放射性同位素)标记，并且可评估抗体与患者细胞的结合，例如通过外部放射线扫描或通过分析从之前暴露于抗体的患者身上获得的活检样本。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞破坏的药物分子。该术语旨在包括毒素诸如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，包括能够对细胞生长或增殖产生不利影响的片段和/或变体。在一个实施例中，细胞毒性剂为单甲基奥瑞他汀E(MMAE)。
如本文所用，“冻干”组合物是指已通过冻干过程进行冷冻干燥而形成“块状物”的液体组合物。在某些实施例中，冻干块状物在储存条件下(5℃±3℃，避光)保持稳定，块状物结构、颜色、外观或水分含量无明显变化。在一个具体实施例中，冻干块状物是光滑的，其不含凹痕。在本公开的某些实施例中，冻干组合物可保持稳定约60个月。在本公开的某些实施例中，冻干组合物可保持稳定约48个月。
“稳定”制剂是其中免疫缀合物在储存时基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性的制剂。优选地，该制剂在储存时基本上保留其物理和化学稳定性以及其生物活性。储存期通常基于制剂的预期有效期进行选择。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术是本领域中现有的，并且综述于例如以下文献中：《肽和蛋白质药物递送》(Peptideand Protein Drug Delivery)，247-301，Vincent Lee主编，Marcel Dekker,Inc.，NewYork，N.Y.，Pubs.(1991)；以及Jones,A.，《先进药物输送评论》(Adv.Drug Delivery Rev.)10:29-90(1993)。可在选定的温度下测量选定时间段内的稳定性。可通过各种不同的方式定性和/或定量评估稳定性，包括评估聚集体形成(例如，使用尺寸排阻色谱法、通过测量浊度和/或通过目视检查)；通过使用阳离子交换色谱、成像毛细管等电聚焦(icIEF)或毛细管区带电泳评估电荷异质性；氨基末端或羧基末端序列分析；质谱分析；SDS-PAGE分析，用于比较还原态和完整抗体；肽图(例如胰蛋白酶或LYS-C)分析；评估抗体的生物活性或抗原结合功能等。不稳定可能涉及以下项中的一者或多者：聚集、脱酰胺(例如，Asn脱酰胺)、氧化(例如，Met氧化)、异构化(例如，Asp异构化)、剪切/水解/片段化(例如，铰链区片段化)、琥珀酰亚胺形成、未配对的半胱氨酸、N末端延伸、C末端处理、糖基化差异等。
如果通过目视检查颜色和/或透明度或者通过紫外线散射或者通过尺寸排阻色谱测量，免疫缀合物无“迹象”发生聚集、沉淀和/或变性或很少发生聚集、沉淀和/或变性，则认为该免疫缀合物在药物制剂中“保持其物理稳定性”。
如果给定时间的化学稳定性使得免疫缀合物被认为仍保留其生物活性(如下文所定义)，则认为该免疫缀合物在药物制剂中“保持其化学稳定性”。化学稳定性可通过检测和定量免疫缀合物(例如，抗体)的蛋白质部分的化学改变形式进行评估。化学改变可能涉及尺寸改变(例如，剪切)，其可以使用例如尺寸排阻色谱、SDS-PAGE和/或基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI/TOF MS)进行评估。其他类型的化学改变包括电荷变化(例如，由于脱酰胺作用而发生的变化)，其可以通过例如离子交换色谱或icIEF进行评估。附加地或另选地，可通过检测和定量免疫缀合物的药物部分的化学改变形式来评估免疫缀合物的化学稳定性。附加地或另选地，可通过测量药物:抗体比(DAR)，例如通过疏水相互作用液相色谱(HIC)测定包含免疫缀合物的组合物中的DAR分布，来评估免疫缀合物的化学稳定性。
如果免疫缀合物(例如，抗体诸如抗CD79b抗体)的蛋白质部分在给定时间的生物活性为制备包含免疫缀合物的药物制剂时表现出的的生物活性至少约60％(在测定误差范围内)，则认为免疫缀合物的抗体在药物制剂中“保持其生物活性”，所述生物活性在测定法(例如，抗原结合测定法)测得。
本文所述的“脱酰胺”单克隆抗体是其中一个或多个天冬酰胺残基衍生为例如天冬氨酸或异天冬氨酸的抗体。
本文所述的“氧化”单克隆抗体是其中一个或多个色氨酸残基和/或一个或多个蛋氨酸已发生氧化的抗体。
本文所述的“糖基化”单克隆抗体是其中一个或多个赖氨酸残基已发生糖化的抗体。
“易于脱酰胺化”的抗体是包含一个或多个已发现易于脱酰胺基的残基的抗体。
“易于氧化”的抗体是包含一个或多个已发现易于氧化的残基的抗体。
“易于聚集”的抗体是发现其与其他抗体分子聚集的抗体，尤其是在冷冻和/或搅拌条件下发生聚集。
“易于片段化”的抗体是例如在其铰链区被切割成两个或更多个片段的抗体。
相对于以不同制剂配制的单克隆抗体，“减少脱酰胺、氧化、聚集或片段化”旨在防止发生脱酰胺、氧化、聚集或片段化或减少脱酰胺、氧化、聚集或片段化的数量。
配制的抗体优选地为基本上纯的，并且希望是基本上均质的(例如，不含污染蛋白质等)。“基本上纯的”抗体意指基于组合物中蛋白质的总重量，包含至少约90重量％、优选至少约95重量％的抗体的组合物。“基本上均质的”抗体意指基于组合物中蛋白质的总重量，包含至少约99％重量的抗体的组合物。
所述“等渗”是指感兴趣的制剂具有与人血基本相同的渗透压。等渗制剂的渗透压通常为约250至350mOsm。等渗性可例如使用蒸气压或冰冻型渗透压计来测定。
如本文所用，“缓冲剂”是指通过其酸-碱共轭成分的作用而耐受pH变化的缓冲溶液。本文所述的缓冲剂的非限制性实例包括组氨酸、磷酸钠和琥珀酸钠。本公开所述的缓冲剂优选地具有在约4.5至约7.0、优选约5.0至约6.0范围内的pH。在一个实施例中，缓冲剂具有5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0的pH。在一个示例性实施例中，缓冲剂具有5.3的pH。例如，将pH控制在该范围内的缓冲剂的一个实例为琥珀酸钠。
如本文所用，“表面活性剂”是指表面活化剂，优选非离子型表面活性剂。本文所述的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰磺基甜菜碱；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰肌氨酸；亚油基、肉豆蔻基或十六烷基甜菜碱；月桂酰氨基丙基、椰油酰胺丙基、亚油酰胺丙基、肉豆蔻基丙基、棕榈酰氨基丙基或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻基胺丙基、棕榈酰丙基或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基钠或甲基油基-牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)；聚乙二醇、聚丙二醇以及乙烯与丙二醇的共聚物(例如，Pluronics、PF68等)等。在一个实施例中，本文所述的表面活性剂为聚山梨醇酯20。在另一个实施例中，本文所述的表面活性剂为聚山梨醇酯80。
如本文所用，“糖”是指可溶性碳水化合物。糖的非限制性实例包括葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、精氨酸、甘油、脯氨酸、葡聚糖和糖醇诸如甘油、甘露醇和山梨糖醇。
II.药物组合物
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂，其中表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
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其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。
在一些实施例中，本公开的组合物为冻干物。在一些实施例中，本文所公开的组合物为复溶组合物，即已经由冻干块状物复溶的组合物。在一些实施例中，提供了20mL玻璃瓶(诸如密封瓶)，其中装有本文所述的药物组合物(例如，冻干组合物或复溶组合物)。
A.免疫缀合物
本公开涉及包含与小分子毒素缀合的抗体的免疫缀合物(可互换地称为“抗体药物偶联物”或ADC)，诸如单甲基奥瑞他汀(MMAE)(尾海兔素的合成类似物)。本公开提供了具有式Ab–(L–D)p的抗CD79b免疫缀合物，其中Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；L为接头，该接头包含6-马来酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苄氧基羰基(MC-val-cit-PAB)；D为MMAE；并且p值为约1至约8(诸如介于约2和约5之间，例如为约3.5)；并且其中抗CD79b免疫缀合物具有结构：
Figure BDA0003065189990000421
本公开所述的抗CD79b免疫缀合物可以指抗CD79b-MC-val-cit-MMAE、抗CD79b-MC-vc-MMAE或抗CD79b-vc-MMAE。本公开所述的抗CD79b免疫缀合物的一个实例为polatuzumab vedotin。Polatuzumab vedotin的CAS登记号为1313206-42-6，IUPHAR/BPS编号为8404，并且KEGG编号为D10761。术语“polatuzumab vedotin”、“DCDS4501A”和“RG7596”涵盖满足在选自由美国、欧洲和日本组成的组中的国家的国家或地区中获得相同产品或生物类似产品的销售许可所需的所有相应的免疫缀合物。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约5mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约50mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约10mg/mL至约30mg/mL或约10mg/mL至约20mg/mL。在一个具体实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约5mg/mL、约6mg/mL、约7mg/mL、约8mg/mL、约9mg/mL、约10mg/mL、约11mg/mL、约12mg/mL、约13mg/mL、约14mg/mL、约15mg/mL、约16mg/mL、约17mg/mL、约18mg/mL、约19mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL、约55mg/mL或约60mg/mL。
在本文提供的任何实施例中的一些实施例中，“大约”值或参数涵盖所述值或参数±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％的任一者的误差范围(包括介于这些值之间的任意范围)。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。在一个示例性实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL。在另一个示例性实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约20mg/mL。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为5mg/mL至60mg/mL、10mg/mL至50mg/mL、10mg/mL至40mg/mL、10mg/mL至30mg/mL或10mg/mL至20mg/mL。在一个具体实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL、9mg/mL、mg/mL、11mg/mL、12mg/mL、13mg/mL、14mg/mL、15mg/mL、16mg/mL、17mg/mL、18mg/mL、19mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL或60mg/mL。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL至20mg/mL。在一个示例性实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL。在另一个示例性实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL。
如本文中所设想，抗CD79b免疫缀合物具有如下所示的式I，其中抗CD79b抗体或其片段(Ab)通过接头(L)缀合(即共价连接)至MMAE药物部分(D)。
Ab-(L-D)p I
在式I中，p为每个抗体的药物部分的平均数，其可在例如约每个抗体约1至约20个药物部分的范围内，并且在某些实施例中，在每个抗体1至约8个药物部分的范围内。本公开包括一种组合物，该组合物包含式I所示的抗体-药物化合物的混合物，其中每个抗体的平均载药量为约2至约5或约3至约4，例如为3.5。
1.抗CD79b抗体
本公开提供了包含抗CD79b抗体或其功能片段的免疫缀合物。
在一个方面，本公开提供了一种抗CD79b抗体，该抗体优选地特异性结合至CD79b。任选地，抗体为单克隆抗体、抗体片段(包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)、双体抗体、单域抗体、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体或竞争性抑制抗CD79b多肽抗体与其相应抗原表位的结合的抗体。本公开所述的抗体可任选地在CHO细胞或细菌细胞中产生，并且优选地诱导它们所结合的细胞死亡。
本公开提供了一种抗CD79b免疫缀合物，其包括人源化抗CD79b抗体，其中抗体对CD79b的单价亲和力(例如，作为Fab片段的抗体对CD79b的亲和力)与鼠抗体的单价亲和力(例如，作为Fab片段的鼠抗体对CD79b的亲和力或嵌合抗体的单价亲和力(例如，作为Fab片段的嵌合抗体对CD79b的亲和力)基本上相同。
在一个实施例中，本公开提供了一种抗CD79b免疫缀合物，其包括人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)为0.3nM或更出色。在另一个实施例中，本公开提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)为0.5nM。在又一个实施例中，本公开提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)为0.5+/-0.1nM。在另一个实施例中，本公开提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)介于0.3nM和0.7nM之间。在另一个实施例中，本公开提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)介于0.4nM和0.6nM之间。在另一个实施例中，本公开提供了一种人源化抗CD79b抗体，其中二价形式的抗体与CD79b的亲和力(例如，作为IgG的抗体与CD79b的亲和力)介于0.5nM和0.55nM之间。
如本领域中所确认的，配体与其受体的结合亲和力可使用各种测定法中的任一种进行测定，并且以各种定量值来表示。因此，在一个实施例中，结合亲和力以Kd值表示，并且反映了内在结合亲和力(例如，最小化的亲合力效应)。通常并且优选地，在体外测量结合亲和力，无论是在无细胞还是与细胞相关的环境下。如本文所详述，结合亲和力的倍数差异可通过人源化抗体(例如，呈Fab形式)的单价结合亲和力值与参比/对照抗体(例如，呈Fab形式)(例如，具有供体高变区序列的鼠抗体)的比率来定量，其中结合亲和力值在相似的测定条件下测得。因此，在一个实施例中，结合亲和力的倍数差异被确定为呈Fab形式的人源化抗体与所述参比/对照Fab抗体的Kd值之比。例如，在一个实施例中，如果本公开所述的抗体(A)的亲和力比参比抗体(M)的亲和力“低3倍”，则在A的Kd值为3x时，M的Kd值为1x，A的Kd与M的Kd之比为3:1。相反，在一个实施例中，如果本公开所述的抗体(C)的亲和力比参比抗体(R)的亲和力“高3倍”，则在C的Kd值为1x时，R的Kd值为3x，C的Kd与R的Kd之比为1:3。本领域中已知的多种测定法中的任意一种，包括本文所述的那些，可用于获得结合亲和力测定结果，这些方法包括例如Biacore、放射免疫测定(RIA)和ELISA。
所提供的抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列。
在本公开的一些实施例中，抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)，该重链可变结构域包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)
以及轻链可变结构域(VL)，该轻链可变结构域包含以下氨基酸序列：
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:8)。
在一些实施例中，重链包含以下氨基酸序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFSSYWIEWVRQAPGKGLEWIGEILPGGGDTNYNEIFKGRATFSADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRRVPIRLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(SEQ ID NO:9)
以及轻链，该轻链包含以下氨基酸序列：
DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYEGDSFLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:10)。
2.接头
本公开提供了一种接头，该接头包含多种成分，其中包括6-马来酰亚胺基己酰(“MC”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)和对氨基苄氧基羰基(“PAB”)。此类接头成分在本领域中是已知的并且如下文所简述。
如本文所用，接头具有式II：
-Aa-Ww-Yy- II
其中A为拉伸单元，a为0至1的整数；W为氨基酸单元，w为0至12的整数；Y为间隔单元，并且y为0、1或2。“拉伸单元”将抗体连接到另一个接头成分。本文所提供的拉伸单元MC如下文所示(其中的波浪线表示与抗体共价连接的位点)：
Figure BDA0003065189990000471
氨基酸单元使蛋白酶能够切割接头，从而促进药物在暴露于细胞内蛋白酶诸如溶酶体酶后从免疫缀合物中释放出来。参见例如Doronina等人(2003)《自然生物技术》(Nat.Biotechnol.)21:778-784。氨基酸单元可包含天然存在的氨基酸残基以及次要氨基酸和非天然存在的氨基酸类似物诸如瓜氨酸。氨基酸单元的选择性可经过设计和优化，以通过特定的酶(例如，肿瘤相关的蛋白酶、组织蛋白酶B、C和D或纤溶酶蛋白酶)进行酶促切割。本文所提供的氨基酸单元为缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)二肽。
如本文所用，“间隔”单元为自杀式单元，并且通过拉伸单元和氨基酸单元将抗体连接至药物部分。“自杀式”间隔单元可释放药物部分，而无需单独的水解步骤，这是由于酰胺键以及在苯甲醇和细胞毒性剂之间形成的氨基甲酸酯、甲基氨基甲酸酯或碳酸酯所致。参见例如：Hamann等人(2005)，《治疗术专利专家评论》(Expert Opin.Ther.Patents)(2005)15:1087-1103。本文所提供的间隔单元为对氨基苄氧基羰基(PAB)。
接头成分，包括拉伸单元、间隔单元和氨基酸单元，可通过本领域中已知的方法诸如US 2005-0238649A1中所述的那些方法合成。
本公开所述的接头为MC-val-cit-PAB，如下文所示。
Figure BDA0003065189990000481
3.单甲基奥瑞他汀(MMAE)
本公开所述的免疫缀合物包括缀合至奥瑞他汀(尾海兔素的合成类似物)的抗CD79b抗体或其片段(美国专利No.5635483；5780588)。已有研究表明，尾海兔素和奥瑞他汀干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂(Woyke等人，(2001)，《抗微生物剂与化疗》(Antimicrob.Agents and Chemother.)45(12):3580-3584)，并且具有抗癌作用(美国专利No.5663149)和抗真菌活性(Pettit等人，(1998)，《抗微生物剂与化疗》(Antimicrob.Agents and Chemother.)42:2961-2965)。奥瑞他汀药物部分可通过肽类药物部分的N(氨基)末端或C(羧基)末端与抗体连接(WO 02/088172)。本公开所述的奥瑞他汀为合成的、不带电荷的、N末端连接的单甲基奥瑞他汀(MMAE)五肽，如下所示。
Figure BDA0003065189990000482
式I所示的抗CD79b免疫缀合物包含抗CD79b抗体或其片段、具有各种接头成分的接头以及MMAE，如下文缩写所示，其中“Ab”是其抗CD79b抗体或其片段；p为1至约8(例如，介于约2和约5之间，例如为约3.5)，“Val-Cit”或“vc”为缬氨酸-瓜氨酸二肽；并且“S”为硫原子。
Figure BDA0003065189990000483
应当注意，在本文中硫连接的免疫缀合物的某些结构描述中，表示为“Ab-S”抗体仅用于表示硫连接特征，并非旨在表示特定的硫原子带有多个接头-药物部分。以下结构的左括号也可以放在Ab和S之间的硫原子的左侧，这将是本文所公开的免疫缀合物的等效描述。
4.载药量
载药量用p表示，即式I所示的分子中每个抗体的药物部分的平均数量。每个抗体的载药量范围为1至20个药物部分(D)。式I所示的ADC包括与1至20范围内的药物部分偶联的抗体集合。通过偶联反应得到的ADC制剂中每个抗体的药物部分的平均数量可通过常规方法诸如质谱、ELISA测定和HPLC进行表征。也可以测定以p表示的ADC的定量分布。在一些情况下，在其中p为由具有其他载药量的ADC得到的特定值的均相ADC的分离、纯化和表征可通过反相HPLC或电泳等方法实现。因此，式I所示的抗体药物偶联物的药物制剂可为此类缀合物与连接至1、2、3、4或更多个药物部分的抗体的非均相混合物。
对于某些抗体药物结合物，p可能受抗体上结合位点数量的限制。例如，在本文提供的实施例中，在连接物为半胱氨酸硫醇的情况下，抗体可仅具有一个或几个半胱氨酸硫醇基，或者可仅具有一个或几个具有足够高的反应性的硫醇基团，通过这些基团可连接接头。在某些实施例中，较高的载药量，例如p>5，可能导致某些抗体药物偶联物的聚集、不溶性、毒性或细胞通透性下降。在某些实施例中，本公开所述的ADC的载药量范围为1至约8、约2至约6、约3至约5或约3.5。实际上，已有研究表明，对于某些ADC，每个抗体的药物部分的最佳比例可小于8，并且可能为约2至约5。参见US 2005-0238649 A1。
在某些实施例中，在偶联反应过程中，与抗体结合的药物部分数量少于理论最大值。抗体可包含例如与药物-接头中间体或接头试剂不发生反应赖氨酸残基，如下文所述。通常，抗体不含可能与药物部分相连的许多游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；实际上，抗体中的大多数半胱氨酸硫醇残基均以二硫键形式存在。在某些实施例中，可在部分或全部还原的条件下，用还原剂诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)还原抗体，生成反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施例中，抗体经变性处理以显示出反应性亲核基团诸如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的载药量(药物/抗体比)可通过不同方式进行控制，例如：(i)限制药物-接头中间体或接头试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制偶联反应时间或温度，以及(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件。
应当理解，当多于一个亲核基团与药物-接头中间体反应或依次与接头试剂和药物部分试剂反应时，则所得产物为ADC化合物的混合物，该混合物具有连接至抗体的一个或多个药物部分的分布。每个抗体中药物的平均数量可通过双重ELISA抗体测定法由混合物计算得出，该方法对抗体具有特异性并且对药物具有特异性。混合物中的单个ADC分子可通过质谱进行鉴定，并且可通过HPLC例如疏水相互作用色谱法进行分离(参见例如：McDonagh等人(2006)，《蛋白质工程、设计与精选》(Prot.Engr.Design&Selection)19(7):299-307；Hamblett等人(2004)，《临床癌症研究》(Clin.Cancer Res.)10:7063-7070；Hamblett,K.J.等人，“载药量对抗CD30抗体药物偶联物的药理学、药代动力学和毒性的影响(Effect ofdrug loading on the pharmacology,pharmacokinetics,and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate)”，摘要编号624，美国癌症研究协会2004年年会，2004年3月27日至31日，AACR论文集，第45卷，2004年3月；Alley,S.C.等人呢，“控制抗体药物偶联物中药物连接物的位置”，摘要编号627，美国癌症研究协会2004年年会，2004年3月27日至31日，AACR论文集，第45卷，2004年3月)。在某些实施例中，具有单一载药量的均质ADC可通过电泳或色谱法从偶联混合物中分离出来。
5.制备免疫缀合物的示例性方法
式I所示的ADC可通过多种路径采用本领域的技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂进行制备，包括：(1)抗体的亲核基团与二价接头试剂反应，通过共价键形成Ab-L，然后与药物部分D反应；以及(2)药物部分的亲核基团与二价接头试剂反应，通过共价键形成D-L，然后与抗体的亲核基团反应。通过后一种路径制备式I所示的ADC的示例性方法描述于US 2005-0238649 A1中，该专利申请明确地以引用方式并入本文。
抗体上的亲核基团包括但不限于：(i)N-末端胺基，(ii)侧链胺基，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸，以及(iv)其中抗体发生糖基化的糖羟基或氨基。胺基、硫醇基和羟基为亲核基团，能够与接头部分和接头试剂上的亲电基团反应形成共价键，所述亲电基团包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卤甲酸酯和酰基卤；(ii)烷基和苄基卤化物，诸如卤乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰胺基团。某些抗体具有可还原的链间二硫键，即半胱氨酸桥。通过用还原剂诸如DTT(二硫苏糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)进行处理，可以使抗体与接头试剂发生反应，使得抗体完全或部分被还原。因此，每个半胱氨酸桥在理论上将形成两个反应性巯基亲核试剂。可通过修饰赖氨酸残基将附加的亲核基团引入抗体中，例如，通过使赖氨酸残基与2-亚氨基硫杂环戊烷(Traut试剂)反应，将胺转化为硫醇。可通过引入一个、两个、三个、四个或多个半胱氨酸残基将反应性巯基引入抗体中(例如，通过制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的变异抗体来实现)。
本公开所述的抗体药物偶联物也可通过抗体上的亲电基团诸如例如醛或酮羰基与接头试剂或药物上的亲核基团之间的反应制得。接头试剂上可用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、硫代氨基脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。在一个实施例中，抗体经过修饰，以引入能够与接头试剂或药物上的亲核取代基反应的亲电部分。在另一个实施例中，糖基化抗体的糖可以被氧化，例如用高碘酸盐氧化试剂氧化，以形成醛或酮基，其可以与接头试剂或药物部分的胺基反应。所得的亚胺席夫碱基团可形成稳定的连接，或者可以被还原，例如通过硼氢化物试剂还原以形成稳定的胺键。在一个实施例中，糖基化抗体的碳水化合物部分与半乳糖氧化酶或偏高碘酸钠的反应可在抗体中生成羰基(醛和酮)基团，这些基团可与药物的适当基团发生反应(Hermanson,Bioconjugate Techniques)。在另一个实施例中，包含N末端丝氨酸或苏氨酸残基的抗体可与偏高碘酸钠反应，从而产生醛以代替第一个氨基酸(Geoghegan和Stroh(1992)，《生物共轭化学》(Bioconjugate Chem.)3:138-146；US5362852)。此类醛可与药物部分或接头亲核试剂发生反应。
药物部分上的亲核基团包括但不限于：胺、巯基、羟基、酰肼、肟、肼、硫代氨基脲、肼羧酸酯和芳基酰肼基团，它们能够与接头部分和接头试剂上的亲电基团反应形成共价键，所述接头试剂包括：(i)活性酯类，诸如NHS酯、HOBt酯、卤甲酸酯和酰基卤；(ii)烷基和苄基卤化物，诸如卤乙酰胺；(iii)醛类、酮类、羧基和马来酰胺基团。
本公开所述的化合物明确设想但不限于用以下交联试剂制得的ADC：BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基SMPB以及可商购获得的SVSB(琥珀酰亚胺基(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)(例如，购自Pierce Biotechnology,Inc.(Rockford,IL.,U.S.A)；参见《2003-2004年应用手册和目录》(2003-2004Applications Handbook andCatalog)第467-498页)。
还可使用多种双功能蛋白偶联剂诸如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨基酯的双官能衍生物(诸如己二酸二甲酯盐酸盐)、活性酯(诸如辛二酸二琥珀酰亚胺基酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮基化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双-(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备包含抗体和细胞毒剂的免疫缀合物。例如，可以如Vitetta等人，《科学》(Science)238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)为一种示例性螯合剂，用于将放射性核苷酸缀合至抗体。参见WO94/11026。
B.表面活性剂
本公开提供了一种包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂的组合物。在某些实施例中，表面活性剂为聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(例如，泊洛沙姆188)；N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰磺基甜菜碱；月桂基、肉豆蔻基、亚油基或硬脂酰肌氨酸；亚油基、肉豆蔻基或十六烷基甜菜碱；月桂酰氨基丙基、椰油酰胺丙基、亚油酰胺丙基、肉豆蔻基丙基、棕榈酰氨基丙基或异硬脂酰胺丙基甜菜碱(例如，月桂酰胺丙基)；肉豆蔻基胺丙基、棕榈酰丙基或异硬脂酰胺丙基-二甲基胺；甲基椰油酰基钠或甲基油基-牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(Mona Industries,Inc.,Paterson,N.J.)；聚乙二醇、聚丙二醇以及乙烯与丙二醇的共聚物诸如Pluronics或PF68；或它们的任意组合。
在一些实施例中，本文所述的表面活性剂为非离子型表面活性剂。在某些示例性实施例中，表面活性剂选自由以下项组成的组：聚山梨醇酯20(PS20)、聚山梨醇酯80(PS80)、泊洛沙姆188(P188)、N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)以及它们的组合。在一个具体实施例中，表面活性剂为PS20。在另一个实施例中，本文所述的表面活性剂为PS80。
在某些实施例中，药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.01％w/v(即0.1mg/mL)和约0.20％w/v(即2.0mg/mL)。在某些实施例中，药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.01％w/v(即0.1mg/mL)、至少约0.02％w/v(即0.2mg/mL)、至少约0.03％w/v(即0.3mg/mL)、至少约0.04％w/v(即0.4mg/mL)、至少约0.05％w/v(即0.5mg/mL)、至少约0.06％w/v(即0.6mg/mL)、至少约0.07％w/v(即0.7mg/mL)、至少约0.08％w/v(即0.8mg/mL)、至少约0.09％w/v(即0.9mg/mL)、至少约0.10％w/v(即1mg/mL)、至少约0.11％w/v(即1.1mg/mL)、至少约0.12％w/v(即1.2mg/mL)、至少约0.13％w/v(即1.3mg/mL)、至少约0.14％w/v(即1.4mg/mL)、至少约0.15％w/v(即1.5mg/mL)、至少约0.16％w/v(即1.6mg/mL)、至少约0.17％w/v(即1.7mg/mL)、至少约0.18％w/v(即1.8mg/mL)、至少约0.19％w/v(即1.9mg/mL)或至少约0.20％w/v(即2.0mg/mL)，包括介于这些值之间的任意范围。在一个具体实施例中，药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在另一个具体实施例中，药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.12％w/v(即1.2mg/mL)。在一些实施例中，药物组合物为液体药物组合物。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在某些实施例中，药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.01％w/v(即0.1mg/mL)和约0.20％w/v(即2.0mg/mL)。在某些实施例中，冻干药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.01％w/v、至少0.02％w/v、至少0.03％w/v、至少0.04％w/v、至少0.05％w/v、至少0.06％w/v、至少0.07％w/v、至少0.08％w/v、至少0.09％w/v、至少0.10％w/v、至少0.11％w/v、至少0.12％w/v、至少0.13％w/v、至少0.14％w/v、至少0.15％w/v、至少0.16％w/v、至少0.17％w/v、至少0.18％w/v、至少0.19％w/v或至少0.20％w/v，包括介于这些值之间的任意范围。在一个具体实施例中，冻干药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.06％w/v。在另一个具体实施例中，冻干药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.12％w/v。在一些实施例中，冻干药物组合物为冻干块状物。在一些实施例中，冻干药物组合物容纳于玻璃瓶中。
在某些实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.1mg/mL至约2.0mg/mL。在某些实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0mg/mL(包括这些值之间的任意范围)中的任一者。在一个具体实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少约0.6％mg/mL。在另一个具体实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少1.2mg/mL。在一些实施例中，液体药物组合物冻干药物组合物(诸如冻干块状物)复溶(例如，使用SWFI复溶)。在一些实施例中，液体药物组合物容纳于玻璃瓶中。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在一个示例性实施例中，冻干药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.06％w/v。在另一个示例性实施例中，冻干药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.12％w/v。在一些实施例中，冻干药物组合物为冻干块状物。在一些实施例中，冻干药物组合物容纳于玻璃瓶中。
在一个示例性实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.6mg/mL。在另一个示例性实施例中，液体药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为1.2mg/mL。在一些实施例中，液体药物组合物冻干组合物(诸如冻干块状物)复溶(例如，使用SWFI复溶)。在一些实施例中，液体药物组合物容纳于玻璃瓶中。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.12％w/v(即1.2mg/mL)。在一些实施例中，药物组合物为复溶组合物(使用SWFI由冻干组合物复溶)。在一些实施例中，药物组合物容纳于玻璃瓶中。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为10mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.12％w/v(即1.2mg/ml)。在一些实施例中，药物组合物为复溶组合物(使用SWFI由冻干组合物复溶)。在一些实施例中，药物组合物容纳于玻璃瓶中。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/ml)。在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为至少0.12％w/v(即1.2mg/ml)。在一些实施例中，药物组合物为复溶组合物(使用SWFI由冻干组合物复溶)。在一些实施例中，药物组合物容纳于玻璃瓶中。
在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂(例如，PS20)的浓度为0.06％w/v(即0.6mg/mL)。在一些实施例中，药物组合物中抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL，并且药物组合物中表面活性剂的浓度为0.12％w/v(即1.2mg/mL)。在一些实施例中，液体药物组合物在30℃下可稳定储存至少约4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时中的任一者，或在2℃-8℃下可稳定储存至少约24、48或72小时中的任一者。
在一些实施例中，药物组合物为适合于静脉给药的液体组合物。在一些实施例中，适合于给药的液体组合物包含约0.0432至约0.162mg/mL的表面活性剂(例如，聚山梨醇酯20)。在一些实施例中，液体组合物包含介于约0.72mg/mL和约2.7mg/mL之间的polatuzumabvedotin。在一些实施例中，适合于静脉给药的液体组合物包含约0.72mg/mL polatuzumabvedotin和约0.0432mg/mL聚山梨醇酯20。在一些实施例中，适合于静脉给药的液体组合物包含约2.7mg/ml polatuzumab vedotin和约0.162mg/ml聚山梨醇酯20。
C.缓冲剂
根据本公开，提供了包含缓冲剂的药物组合物。不希望受理论束缚，缓冲液用于在组合物的生产、储存和使用期间维持药物组合物的pH。缓冲剂的非限制性实例包括组胺，琥珀酸盐、琥珀酸钠、碳酸氢钠、氯化钙、硫酸镁、磷酸一钠、磷酸二钠、磷酸一钾、磷酸二钾、[三(羟甲基)甲基氨基]丙烷磺酸(TAPS)、2-(双(2-羟乙基)氨基)乙酸(Bicine)、2-氨基-2-(羟甲基)丙烷-1,3-二醇(Tris)、N-(2-羟基-1,1-双(羟甲基)乙基)甘氨酸(Tricine)、3-[[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙烷-2-基]氨基]-2-羟基丙烷-1-磺酸(TAPSO)、2-[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸(HEPES)、2-[[1,3-二羟基-2-(羟甲基)丙烷-2-基]氨基]乙磺酸(TES)、1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)、二甲胂酸、2-吗啉-4-基乙磺酸(MES)或磷酸盐缓冲液(PBS)。其他合适的缓冲剂可为醋酸盐、柠檬酸盐、硼酸盐和磷酸盐。
在本公开的示例性实施例中，缓冲剂为组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液。在一个具体实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥琥珀酸钠缓冲液。
在一些实施例中，缓冲剂的浓度为约10mM至约200mM。在一个具体实施例中，缓冲剂的浓度为约10mM、约11mM、约12mM、约13mM、约14mM、约15mM、约16mM、约17mM、约18mM、约19mM、约20mM、约21mM、约22mM、约23mM、约24mM、约25mM、约26mM、约27mM、约28mM、约29mM、约30mM、约35mM、约40mM、约45mM、约50mM、约55mM、约60mM、约65mM、约70mM、约75mM、约80mM、约85mM、约90mM、约95mM、约100mM、约105mM、约110mM、约115mM、约120mM、约125mM、约130mM、约135mM、约140mM、约145mM、约150mM、约155mM、约160mM、约165mM、约170mM、约175mM、约180mM、约185mM。约190mM、约195mM或约200mM。
在另一个具体实施例中，缓冲剂的浓度为10mM、11mM、12mM、13mM、14mM、15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM、105mM、110mM、115mM、120mM、125mM、130mM、135mM、140mM、145mM、150mM、155mM、160mM、165mM、170mM、175mM、180mM、185mM、约190mM、195mM或200mM。
在本公开的一个示例性实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。在一个实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为约10mM。在另一个实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
在一些实施例中，本公开的组合物具有约5.0至约6.0的pH。在具体实施例中，缓冲液具有约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9或约6.0的pH。在其他具体实施例中，缓冲液具有5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9或6.0的pH。
在一个示例性实施例中，本公开的组合物具有约5.3的pH。在另一个示例性实施例中，本公开的组合物具有5.3的pH。
D.糖
根据本公开，提供了包含糖的药物组合物。不希望受理论束缚，糖用于促进对药物组合物的冷冻保护，从而防止药物组合物发生聚集，保持其化学和物理稳定性。在某些实施例中，糖为葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、精氨酸、甘油、脯氨酸、葡聚糖、葡聚糖40、甘油、甘露醇或山梨糖醇。
在一些实施例中，糖选自由以下项组成的组：蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、甘油、葡聚糖40和海藻糖。在一个示例性实施例中，糖为蔗糖。
在一些实施例中，糖的浓度为约50mM至约300mM。在一个具体实施例中，缓冲剂的浓度为约50mM、约60mM、约70mM、约80mM、约90mM、约100mM、约110mM、约120mM、约130mM、约140mM、约150mM、约160mM、约170mM、约180mM、约190mM、约200mM、约210mM、约220mM、约230mM、约240mM、约250mM、约260mM、约270mM、约280mM、约290mM或约300mM。在一些实施例中，糖的浓度为约100mM至约260mM。
在一些实施例中，糖的浓度为50mM至300mM。在一个具体实施例中，缓冲剂的浓度为50mM、60mM、70mM、80mM、90mM、mM、110mM、120mM、130mM、140mM、150mM、160mM、170mM、180mM、190mM、200mM、210mM、220mM、230mM、240mM、250mM、260mM、270mM、280mM、290mM或300mM。在一些实施例中，糖的浓度为100mM至260mM。
在本公开的一个示例性实施例中，蔗糖的浓度为约120mM。在另一个示例性实施例中，蔗糖的浓度为120mM。
在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物通过冻干液体组合物制成，该液体组合物包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体组合物具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物具有式：
Figure BDA0003065189990000581
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。
在本公开的一些实施例中，抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，该重链可变结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，并且该轻链可变结构域(VL)包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。在一些实施例中，重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
E.稳定性
在一些实施例中，评估或测量了液态或冻干形式的药物组合物的物理稳定性、化学稳定性或生物活性。本领域中已知以及本文实施例中所述的任何方法均可用于评估本公开所述的药物组合物的稳定性和生物活性。例如，药物组合物中抗体的稳定性可通过以下方法进行测量，所述方法包括但不限于：尺寸排阻色谱法(SEC或SE-HPLC)、成像等离子体等电聚焦(icIEF)、肽图分析、小体积光阻(HIAC)测定以及毛细管电泳(CE)技术诸如CE-十二烷基硫酸钠(CE-SDS)和CE-多聚糖分析。在一些实施例中，稳定的药物组合物(或制剂)是其中的免疫缀合物在指定条件下(诸如温度、相对湿度、残留水分、存在或不存在光照、经过一段时间搅拌)储存(例如储存指定时间段或持续时间诸如小时、天、月、年等)后基本上保持其物理稳定性和/或化学稳定性和/或生物活性。在一些实施例中，如果存在于药物组合物中的免疫缀合物(和/或免疫缀合物的抗体部分，诸如抗CD79b抗体)的生物活性在给定时间内处于国家或地区药品监管机构(例如，美国药品监督管理局(FDA)、澳大利亚药物管理局(TGA)、欧洲药品管理局(EMA)等)认可的范围内，则认为其具有生物稳定性(例如，保持其生物活性)。例如，免疫缀合物(诸如包含抗CD79b抗体的免疫缀合物)或包含此类免疫缀合物的药物组合物的生物活性可通过其结合抗原的能力(诸如抗CD79b抗体结合CD79b例如人CD79b的能力)来衡量。可使用本领域中已知的许多测定方法来测量抗体结合亲和力指标，这些方法包括但不限于例如表面等离子体共振(SPR)、放射免疫测定(RIA)和ELISA。附加地或另选地，免疫缀合物(诸如包含抗CD79b抗体的免疫缀合物)的生物活性通过其(例如，体外或体内)抑制细胞生长和/或细胞增殖的能力或(例如，体外或体内)诱导细胞死亡(包括程序性细胞死亡(凋亡))的能力来衡量。美国专利No.8,088,387中提供了有关测量抗CD79b抗体或包含抗CD79b抗体的免疫缀合物的生物活性的测定的更多细节，其内容通过引用方式整体并入本文。
在一些实施例中，本公开的药物组合物避光保存于-20℃下可保持稳定至少约6个月、至少约8个月、至少约10个月、至少约12个月、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约21个月、至少约22个月、至少约23个月、至少约24个月、至少约3年、至少约4年或至少约5年。
在一些实施例中，本公开的药物组合物避光保存于2℃至8℃(例如，5℃±3℃)下可保持稳定至少约6个月、至少约8个月、至少约10个月、至少约12个月、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约21个月、至少约22个月、至少约23个月、至少约24个月、至少约3年、至少约4年或至少约5年。
在一些实施例中，本公开的药物组合物在25℃至40℃下可保持稳定至少约30分钟、至少约60分钟、至少约2小时、至少约4小时、至少约6小时、至少约8小时、至少约10小时、至少约12小时、至少约14小时、至少约16小时、至少约18小时、至少约20小时、至少约22小时、至少约1天、至少约2天或至少约3天。
在一个示例性实施例中，组合物避光保存于5℃±3℃下可保持稳定性至少约48个月。在另一个示例性实施例中，组合物避光保存于5℃±3℃下可保持稳定性约48个月。
在某些实施例中，可检查本公开所述的冻干形式的药物组合物(例如冻干块状物)的稳定性。在一些实施例中，在储存条件下(5℃±3℃下，并且避光)，冻干块状物在结构、颜色、外观或水分含量方面均无明显变化。在一个具体实施例中，冻干块状物在储存条件下具有小于5％的水分含量。在另一个具体实施例中，冻干块状物在储存条件下为光滑的，其不含凹痕。在本公开的某些实施例中，冻干块状物在储存条件下可保持稳定至少约48个月。
在一些实施例中，本公开的药物组合物的稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。在一个示例性实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
在一些实施例中，本文所提供的冻干药物组合物(诸如块状物)在介于约2℃和约8℃的温度下可稳定储存至少44个月(诸如至少约30个月、35个月、40个月、45个月、50个月或55个月中的任一者)，其残留水分含量范围为约0.3％(w/w)至约3.2％(w/w)，包括介于这些值之间的任意范围。在一些实施例中，本文所提供的冻干药物组合物(诸如块状物)在约25℃下可稳定储存至少7个月(诸如至少约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、8个月或10个月中的任一者)，其残留水分含量范围为约0.3％(w/w)至约3.2％(w/w)，包括介于这些值之间的任意范围。
在一些实施例中，本文所提供的冻干药物组合物(诸如块状物)在以下条件下保持稳定：(a)蛋白质浓度介于约17和约23mg/mL之间，(b)琥珀酸盐浓度介于约7和约23mM之间，(c)蔗糖浓度介于约90和约150mM之间，(d)聚山梨醇酯20浓度介于约0.9和约1.5mg/mL之间，以及(e)pH介于约4.95和约5.65之间。在一些实施例中，包含(a)至(e)中任一项或多项的冻干药物组合物(诸如块状物)在介于约2℃和约8℃的温度下可保持稳定长达至少约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个月中的任一者。
G.用于静脉给药的组合物。
本公开提供了适合于静脉(IV)给药的药物组合物和液体组合物。待用于体内IV给药的组合物应为无菌的。这可以通过在制备药物组合物之前或之后通过无菌滤膜过滤轻松地实现。在某些实施例中，本公开的药物组合物用无菌注射用水(SWFI)复溶。在一些实施例中，复溶组合物进一步稀释到静脉内(IV)输液袋中的等渗缓冲液中。
在一个方面，本公开提供了一种药物组合物，该药物组合物包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中药物组合物复溶于水中时形成液体药物组合物，该液体药物组合物包含浓度为约10mg/mL至约20mg/mL的抗CD79b免疫缀合物、浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)的表面活性剂、浓度为约10mM至约200mM的琥珀酸盐缓冲液和浓度为约100mM至约260mM的糖，其中液体药物组合物具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000621
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(诸如介于约2和约5之间，例如为约3.5)。
在一些实施例中，药物组合物复溶于SWFI中(1:1质量:体积)。在一些实施例中，药物组合物复溶于水中形成液体药物组合物，其包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中液体药物组合物具有5.3的pH。
在一些实施例中，将药物组合物复溶于SWFI中，随后稀释到IV输液袋中的等渗缓冲液中，其中IV输液袋中稀释后的表面活性剂浓度为至少0.003％w/v。在一个实施例中，IV输液袋中稀释后的表面活性剂浓度为至少0.004％w/v。在一个示例性实施例中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，糖为蔗糖。在一个具体实施例中，蔗糖的浓度为120mM。在一些实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。在一个具体的示例性实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物复溶于水中后的稳定性通过聚集、pH、浊度、可见和/或不可见颗粒的数量或游离(例如未缀合)药物的含量来衡量。在某些实施例中，可使用紫外分光光度法、SE-HPLC、疏水相互作用色谱法(HIC)、icIEF或HIAC或它们的组合来评估稳定性。在一些实施例中，药物组合物复溶于水中后在30℃下可保持稳定性最长约1天、最长约2天或最长约3天。在一些实施例中，药物组合物复溶于水中后在5℃±3℃下可保持稳定最长约1天、最长约2天、最长约3天、最长约4天、最长约5天、最长6天或最长约7天。
在某些实施例中，复溶于水中的组合物的稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。在一个示例性实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
在某些具体实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的小于4.0的HMWS(％)。在某些具体实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的小于1.0的LMWS(％)。在一些实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)以及小于4.0的HMWS。在一些实施例中，组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)、小于4.0的HMWS(％)以及小于1.0的LMWS(％)。
在某些实施例中，复溶于水中的组合物的稳定性通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)测得。在一个实施例中，组合物具有如通过icIEF测得的至少73.0的主峰(峰面积％)、至多25.5的酸性区(峰面积％)和至多10.0的碱性区(峰面积％)。在一个示例性实施例中，组合物具有如通过icIEF测得的至少58.0的主峰(峰面积％)、至多32.0的酸性区(峰面积％)和至多12.0的碱性区(峰面积％)。
在一些实施例中，复溶药物组合物包含10mM琥珀酸盐中的20mg/mL polatuzumabvedotin、120mM蔗糖以及1.2mg/mL聚山梨醇酯20，在pH 5.3下，在介于约2℃和约8℃之间的温度下储存72小时后保持理化特性稳定。在一些实施例中，复溶药物组合物在介于约2℃和约8℃之间的温度下可稳定储存72小时，而不降低polatuzumab vedotin的生物活性。在一些实施例中，复溶药物组合物包含10mM琥珀酸盐中的20mg/mL polatuzumab vedotin、120mM蔗糖以及1.2mg/mL聚山梨醇酯20，在pH5.3下，在暴露于环境光线的条件下在30℃下储存24小时后保持理化特性稳定。在一些实施例中，复溶药物组合物在暴露于环境光线的条件下在30℃下储存24小时后不降低polatuzumab vedotin的生物活性。
在一个方面，本公开提供了一种液体组合物，该液体组合物包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL，表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v(即0.6mg/mL)，琥珀酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM，并且糖的浓度为约100mM至约260mM，其中液体组合物具有5.3的pH，并且其中抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000641
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约1至约8(例如，介于约2和约5之间，诸如为约3.5)。
在一些实施例中，表面活性剂为聚山梨醇酯20。在一些实施例中，糖为蔗糖。在一个示例性实施例中，蔗糖的浓度为120mM。在一些实施例中，琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。在一个具体的示例性实施例中，琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
在某些实施例中，将本公开的液体组合物溶于缓冲液中。缓冲剂可以是但不限于生理盐水(0.9％w/v氯化钠)、半盐水(0.45％w/v氯化钠)、5％w/v葡萄糖、乳酸林格氏液或它们的组合。
在一些实施例中，将本公开的液体组合物溶于等渗缓冲液中。在某些实施例中，等渗缓冲液可现用现配，也可以装在预填充的IV输液袋中。在某些实施例中，等渗缓冲液为生理盐水(0.9％氯化钠)。在一个示例性实施例中，将本公开的液体组合物溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中。
在一些实施例中，本公开所述的液体组合物溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中，具有约4.8至约5.8的pH。在一个具体实施例中，pH为约4.8、约4.9、约5.0、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7或约5.8。在一些实施例中，本公开所述的液体组合物溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中，具有约5.3的pH。
在一些实施例中，本公开所述的IV输液袋中的液体组合物的稳定性通过聚集、pH、浊度、可见和/或不可见颗粒的数量或游离(例如未缀合)药物的含量来衡量。在某些实施例中，可使用紫外分光光度法、SE-HPLC、疏水相互作用色谱法(HIC)、icIEF或HIAC或它们的组合来评估IV输液袋中液体组合物的稳定性。
在某些实施例中，本公开所述的IV输液袋中的液体组合物在静态条件下保持稳定。在某些实施例中，本公开所述的IV输液袋中的液体组合物在搅拌条件下保持稳定。在一些实施例中，本公开所述的溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物在30℃下可保持稳定性最长约1小时、最长约2小时、最长约3小时、最长约4小时、最长约5小时、最长约6小时、最长约7小时或最长约8小时。在一些实施例中，本公开所述的溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物在25℃下可保持稳定性最长约8小时、最长约9小时、最长约10小时、最长约12小时、最长约14小时、最长约16小时、最长约18小时、最长约20小时、最长约22小时或最长约24小时。在一些实施例中，本公开所述的溶于IV输液袋中的等渗缓冲液中的液体组合物在5℃±3℃下可保持稳定性最长约24小时、最长约30小时、最长约36小时、最长约42小时、最长约48小时、最长约54小时、最长约60小时、最长约66小时或最长约72小时。在某些实施例中，等渗缓冲液为生理盐水。
在一些实施例中，本文所述的用于输注的复溶溶液或稀溶液(例如，包含免疫缀合物(例如，polatuzumab vedotin)的用于输注的稀溶液)为无菌溶液。
III.治疗方法
设想本公开所述的药物组合物或液体组合物可用于治疗各种增殖性疾患，这些疾患的特征在于肿瘤抗原的过表达。一种示例性增殖性疾患为癌症。癌症的实例包括但不限于造血系统癌症或与血液有关的癌症，诸如淋巴瘤、白血病、骨髓瘤或淋巴样恶性肿瘤，还包括脾脏癌和淋巴结癌以及恶性肿瘤、母细胞瘤和肉瘤。癌症的更具体的实例包括与B细胞增殖性疾患，包括例如高、中和低度淋巴瘤(包括B细胞淋巴瘤，诸如与粘膜相关的淋巴组织B细胞淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤(NHL)、套细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤和T细胞淋巴瘤)以及白血病(包括继发性白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)诸如B细胞白血病(CD5+B淋巴细胞)、髓样白血病诸如急性髓样白血病、慢性髓样白血病、淋巴细胞白血病诸如性淋巴细胞白血病(ALL)和脊髓发育不良)以及其他与血液和/或B细胞或T细胞相关的癌症。还包括其他造血细胞的癌症，这些细胞包括多形核白细胞诸如嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞、树突状细胞、血小板、红细胞和自然杀伤细胞。在某些实施例中，本公开所述的增殖性疾患为复发性癌症或难治性癌症。
在某些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可用于治疗复发性白血病或复发性淋巴瘤。在其他具体实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可用于治疗难治性白血病或难治性淋巴瘤。
在一个方面，本公开提供了一种治疗有需要的患者的增殖性疾患的方法，该方法包括向患者施用本文所述的药物组合物或液体组合物。
在某些实施例中，待治疗的癌症为B细胞增殖性疾患。在具体实施例中，B细胞增殖性疾患选自由以下项组成的组：淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、侵袭性NHL、惰性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、复发性侵袭性NHL、复发性惰性NHL、复发性NHL、难治性NHL、难治性惰性NHL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
在本公开的一个示例性实施例中，B细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一个示例性实施例中，B细胞增殖性疾患为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一个具体实施例中，B细胞增殖性疾患为复发性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在另一个具体实施例中，B细胞增殖性疾患为难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在一个示例性实施例中，B细胞增殖性疾患为复发性NHL或难治性NHL。在又一个示例性实施例中，B细胞增殖性疾患为滤泡性淋巴瘤。
所述癌症可包含表达CD79b的细胞，使得本公开所述的抗CD79b免疫缀合物能够与癌细胞结合。为测定CD79b在癌症中的表达，可使用各种诊断/预后测定方法。在一个实施例中，CD79b过表达可通过IHC进行分析。可以对来自肿瘤活检组织的石蜡包埋的组织切片进行IHC分析，并且采用有关染色程度和所检查的肿瘤细胞的比例的CD79b蛋白染色强度标准。
为预防或治疗病症，合适的ADC剂量取决于待治疗的疾病类型(如上文所定义)、疾病的严重程度和病程、施用分子用于预防还是治疗目的、患者的病史和对抗体的反应以及主治医师的酌处权。分子适当地一次或在一系列治疗中施用于患者。根据疾病的类型和严重程度，约1μg/kg至15mg/kg(例如0.1-20mg/kg)的分子可以是用于施用于患者的初始候选剂量，无论是例如通过一次或多次单独的施用，还是通过连续输注。取决于上述因素，一种典型的日剂量的范围可以为约1μg/kg至100mg/kg或更多。施用于患者的ADC的一种示例性剂量在约0.1至约10mg/kg患者体重的范围内。对于数天或更长时间的重复施用，取决于病症，治疗持续直至发生所需的疾病症状抑制。
为治疗或预防增殖性疾患，通过静脉输注给予本公开所述的药物组合物或液体组合物。通过输注给予的剂量范围为每剂约1μg/m2至约10,000μg/m2，通常每周给药一次，总共给药一次、二次、三次或四次。另选地，剂量范围为约1μg/m2至约1000μg/m2、约1μg/m2至约800μg/m2、约1μg/m2至约600μg/m2、约1μg/m2至约400μg/m2、约10μg/m2至约500μg/m2、约10μg/m2至约300μg/m2、约10μg/m2至约200μg/m2、或约1μg/m2至约200μg/m2。给药频率为每天一次、每周一次、每周多次但少于每天一次、每月多次但少于每天一次、每月多次但少于每周一次、每月一次或间歇性地给药，以缓解或减轻疾病的症状。可采用本文所公开的任何间隔继续给药，直至肿瘤或治疗的淋巴瘤、白血病症状得到缓解。在实现症状缓解或减轻后，在通过继续给药可延长此类缓解或减轻的情况下，可继续给药。
为测定CD79b在癌症中的表达，可使用各种检测方法。在一个实施例中，CD79b多肽过表达可通过免疫组化(IHC)进行分析。可以对来自肿瘤活检组织的石蜡包埋的组织切片进行IHC分析，并且采用以下CD79b蛋白染色强度标准：
0分-在不到10％的肿瘤细胞中未观察到染色或膜染色。
1+分-在超过10％的肿瘤细胞中检测到微弱/几乎无法察觉的膜染色。这些细胞仅有部分膜得到染色。
2+分-在超过10％的肿瘤细胞中观察到弱到中等的完整膜染色。
3+分-在超过10％的肿瘤细胞中观察到中等至强的完整膜染色。
CD79b多肽表达得分为0或1+的那些肿瘤的特征可能在于并非过表达CD79b，而得分为2+或3+的那些肿瘤的特征可能在于过表达CD79b。
另选地或附加地，可以对福尔马林固定的、石蜡包埋的肿瘤组织进行FISH测定，例如
Figure BDA0003065189990000681
(由美国亚利桑那州文塔纳销售)或
Figure BDA0003065189990000682
(伊利诺斯州Vysis)，以确定CD79b在肿瘤中的过表达。
CD79b的过表达或扩增可通过体内测定方法进行评估，例如，通过施用与待检测的分子结合并且带有可检测的标记(例如，放射性同位素或荧光标记)的分子(例如抗体)并且从外部扫描患者以定位标记来实现。
联合疗法
当前，根据癌症的分期，癌症治疗涉及以下一种或多种疗法：切除癌组织的手术方法、放疗和化疗。抗CD79b免疫缀合物疗法可尤其适用于无法很好地耐受化疗的毒性和副作用的老年患者以及放疗效果有限的转移性疾病。本公开所述的靶向抗CD79b的免疫缀合物的肿瘤可用于在疾病的初次诊断或复发期间缓解表达CD79b的癌症。对于治疗应用，抗CD79b免疫缀合物可单独使用，或与例如激素、抗血管生成剂、或放射标记的化合物联合治疗，或与手术、冷疗和/或放疗联合使用。本公开所述的药物组合物或液体组合物的施用可与常规治疗的其他形式结合进行，或与常规治疗之前或之后连续进行。化疗药物诸如
Figure BDA0003065189990000683
(多西他赛)、
Figure BDA0003065189990000684
(紫杉醇)、雌莫司汀和米托蒽醌用于治疗癌症特别是高风险患者。在本公开所述的用于治疗或缓解癌症的方法中，可将抗CD79b抗体与前述化学治疗剂中的一种或多种联合给予癌症患者。具体地，可设想与紫杉醇和修饰的衍生物的联合治疗(参见例如EP0600517)。本公开所述的药物组合物或液体组合物可与治疗有效剂量的化学治疗剂一起施用。在另一个实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物与化学疗法联合施用，以增强化学治疗剂例如紫杉醇的活性和疗效。《医师桌上手册》(PDR)公开了已用于治疗各种癌症的这些药物的剂量。这些上述化学治疗药物在治疗上有效的给药方案和剂量将取决于所治疗的特定癌症、疾病的程度以及本领域的技术人员所熟悉的其他因素，并且可以由医师确定。
在另一个实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与一种或多种化学治疗剂或生长抑制剂联合施用，包括与不同化学治疗剂的混合物或同样抑制肿瘤生长的其他细胞毒性剂或其他治疗剂联合施用。化学治疗剂包括雌莫司汀磷酸酯、泼尼莫司汀、顺铂、5-氟尿嘧啶、马法兰、环磷酰胺、羟基脲和羟基脲紫杉醇(诸如紫杉醇和多西紫杉醇)和/或蒽环类抗生素。此类化学治疗剂的制备和给药计划可根据生产商的说明或由熟练的从业人员凭经验确定。此类化学疗法的制备和给药计划也描述于：Chemotherapy Service Ed.，M.C.Perry，Williams&Wilkins，Baltimore，MD(1992)。本公开所述的药物组合物或液体组合物可与以下药物以其已知的剂量联合施用：抗激素化合物(例如抗雌激素化合物诸如他莫昔芬)；抗孕酮诸如奥那普利司通(参见EP 616 812)；或抗雄激素诸如氟他胺。在待治疗的癌症为雄激素非依赖性癌症的情况下，患者可能先前已经接受过抗雄激素治疗，并且在癌症变为雄激素非依赖后，可将本公开所述的药物组合物或液体组合物施用于患者。
有时，向患者联合施用心脏保护剂(用于预防或减少与治疗相关的心肌功能障碍)或一种或多种细胞因子可能是有益的。除上述治疗方案以外，患者可在接受本公开所述的药物组合物或液体组合物之前、同时或之后接受手术切除癌细胞和/或接受放射治疗(例如外束照射或放射性标记试剂诸如抗体治疗)。上述联合给药药物中的任一种的合适剂量均为目前使用的剂量，并且其剂量可能由于药物与抗CD79b抗体的联合效应(协同效应)而降低。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与有效量的另一种治疗剂联合施用于患者。在一个实施例中，治疗剂选自由以下项组成的组：抗体、化学治疗剂、细胞毒性剂、抗血管生成剂、免疫抑制剂、前药、细胞因子、细胞因子拮抗剂、细胞毒性放疗、皮质类固醇、抗癌疫苗和生长抑制剂。在另一个实施例中，治疗剂为选自他莫昔芬、来曲唑、依西美坦、阿那曲唑、伊立替康、西妥昔单抗、氟维司群、长春瑞滨、厄洛替尼、贝伐单抗、长春新碱、甲磺酸伊马替尼、索拉非尼、拉帕替尼、拉帕替尼、曲妥珠单抗、顺铂、吉西他滨、甲氨蝶呤、长春碱、卡铂、紫杉醇、5-氟尿嘧啶、阿霉素、硼替佐米、马法兰、泼尼松、泼尼松龙和多西他赛。
在一些实施例中，治疗剂为抗CD20抗体。
在某些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与有效量的用于治疗B细胞增殖性疾患的抗CD20抗体联合施用。在一个实施例中，B细胞增殖性疾患为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在另一个实施例中，增殖性疾患为滤泡性淋巴瘤(FL)。在某些实施例中，抗CD20抗体为利妥昔单抗。
在一些实施例中，治疗剂为化学治疗剂。在一个实施例中，化学治疗剂包括环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春新碱和泼尼松中的一种或多种。在另一个实施例中，化学治疗剂包括环磷酰胺、阿霉素和泼尼松。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与有效量的抗CD20抗体和化学治疗剂联合施用。在一个实施例中，化学治疗剂包括环磷酰胺、阿霉素和泼尼松。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与有效量的抗CD20抗体和用于治疗B细胞增殖性疾患的化学治疗剂联合施用。在一个实施例中，B细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在另一个实施例中，B细胞增殖性疾患为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一个具体实施例中，DLBCL为复发性/难治性DLBCL。在另一个实施例中，NHL为复发性NHL或难治性NHL。在另一个具体实施例中，增殖性疾患为滤泡性淋巴瘤(FL)。在另一个实施例中，FL为复发性/难治性FL。在某些实施例中，抗CD20抗体为利妥昔单抗。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与抗CD20抗体(裸抗体或ADC)联合施用。在一个实施例中，抗CD20抗体为利妥昔单抗
Figure BDA0003065189990000701
或其生物仿制药。在一些实施例中，抗CD20抗体为ocrelizumab(2H7)(Genentech,Inc.,South SanFrancisco,CA)或其生物仿制药。在另一个实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与抗VEGF抗体(例如，
Figure BDA0003065189990000711
)联合施用。
在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与烷化剂联合施用。在一些实施例中，本公开所述的药物组合物或液体组合物可与烷化剂和抗CD20抗体(裸抗体或ADC)联合施用。在一些实施例中，抗CD20抗体为利妥昔单抗
Figure BDA0003065189990000712
或其生物仿制药。在一些实施例中，烷化剂为4-[5-[双(2-氯乙基)氨基]-1-甲基苯并咪唑-2-基]丁酸及其盐。在一些实施例中，烷化剂为苯达莫司汀。
联合疗法可以同时或按顺序进行施用。当顺序施用时，可以两次或更多次施用组合物。联合施用包括使用单独的制剂或单一药物制剂的共同施用，以及以任何顺序连续施用，其中优选在一定时间段内两种(或全部)活性剂同时发挥其生物学活性。
上述联合给药药物中的任一种的合适剂量均为目前使用的剂量，并且其剂量可能由于新鉴别的药物与其他化学治疗剂或治疗的联合效应(协同效应)而降低。
联合疗法可以提供“协同作用”并证明是“协同的”，即，当活性成分一起使用时所达到的效果大于单独使用化合物所产生的效果之和。当活性成分如下时，可获得协同效应：(1)共同配制并且以联合单位剂型同时给药或递送；(2)交替给药或作为单独的制剂并行给药；或(3)通过某些其他方案给药。当采用交替疗法递送时，当化合物依次给药或递送时，例如通过在单独的注射器中分别注射，可获得协同效应。总体上，在交替疗法中，依次即连续施用有效剂量的各种活性成分，而在联合疗法中，一起施用有效剂量的两种或多种活性成分。
IV.制品和试剂盒
本公开的另一个实施例是一种制品，其包含可用于治疗、预防和/或诊断增殖性疾患的材料。在一个实施例中，制品包括容器和在容器上或与容器相关的标签或包装插页。合适的容器包括，例如，瓶子、小瓶、注射器等。容器可以由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。该容器容纳组合物，该组合物以有效治疗、预防和/或诊断癌症病症，并且该容器可具有无菌进入口(例如，该容器可以是静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本公开所述的抗CD79b免疫缀合物。标签或包装插页指示该组合物用于治疗癌症。标签或包装插页将进一步包含将组合物施用于癌症患者的说明。另外地，制品可进一步包括第二容器，该第二容器包括药学上可接受的缓冲液，诸如无菌注射用水(SWFI)、抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。制品还可以包括从商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
在一些实施例中，制品为容器诸如瓶、小瓶、注射器，其装有本公开所述的药物组合物。在一些实施例中，制品为容器诸如瓶、小瓶、注射器，其装有本公开所述的冻干药物组合物(诸如块状物)。在一些实施例中，制品为容器诸如瓶、小瓶、注射器，其装有本公开所述的复溶的冻干药物组合物。在一个具体实施例中，制品为容器，其装有复溶于无菌注射用水(SWFI)中的冻干药物组合物。
在一些实施例中，制品为塑料容器，其装有本公开所述的药物组合物。在一些实施例中，制品为玻璃容器，其装有本公开所述的药物组合物。
在一些实施例中，制品为玻璃瓶，其装有本公开所述的药物组合物。在一个具体实施例中，制品为玻璃瓶，其装有本公开所述的冻干药物组合物(诸如块状物)。在一个具体实施例中，制品为玻璃瓶，其装有本公开所述的复溶的冻干药物组合物(诸如块状物)。在一个具体实施例中，制品为容器，其装有复溶于无菌注射用水(SWFI)中的冻干药物组合物(诸如块状物)。
在某些实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物的IV输液袋。IV输液袋可由以下材料组成，所述材料包括但不限于：聚烯烃(PO)、聚氯乙烯(PVC)、乙烯乙酸乙烯酯、聚丙烯(PP)、聚乙烯(PE)、共聚酯醚或它们的组合。在一些实施例中，IV输液袋为聚烯烃(PO)、聚丙烯(PP)袋、聚乙烯(PE)袋或聚氯乙烯(PVC)袋。
在一些实施例中，包含本公开的药物组合物或液体组合物的制品可容纳至少约5毫升(mL)、至少约10mL、至少约15mL、至少约20mL、至少约25mL、至少约30mL、至少约35mL、至少约40mL、至少约45mL、至少约50mL、至少约55mL、至少约60mL、至少约65mL、至少约70mL、至少约75mL、至少约80mL、至少约85mL、至少约90mL、至少约95mL、至少约100mL、至少约105mL、至少约110mL、至少约115mL、至少约120mL、至少约125mL、至少约130mL、至少约135mL、至少约140mL、至少约145mL、至少约150mL、至少约155mL、至少约160mL、至少约165mL、至少约170mL、至少约175mL、至少约180mL、至少约185mL、至少约190mL、至少约195mL或至少约200mL的体积。在一些实施例中，制品为PO袋，其可以容纳至少约25mL、至少约50mL或至少约100mL的体积。在一些实施例中，制品为PVC袋，其可以容纳至少约25mL、至少约50mL或至少约100mL的体积。
在某些实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和缓冲液的IV输液袋。在一个具体实施例中，缓冲液可为生理盐水、半盐水、5％w/v葡萄糖、乳酸林格氏液或它们的组合。在一个实施例中，制品为包含溶于半盐水中的本公开所述的药物组合物或液体组合物的IV输液袋。
在一些实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和等渗缓冲液的IV输液袋。在一个实施例中，制品为包含溶于生理盐水中的本公开所述的药物组合物或液体组合物的IV输液袋。
在一个示例性实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和生理盐水的PVC袋，其可以容纳至少约100mL的体积。在另一个示例性实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和生理盐水的PVC袋，其可以容纳约100mL的体积。
在另一个示例性实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和生理盐水的PO袋，其可以容纳至少约100mL的体积。在又一个示例性实施例中，制品为包含本公开所述的药物组合物或液体组合物和半盐水的PO袋，其可以容纳至少约100mL的体积。
在本文的任何实施例中，稳定的药物或液体药物组合物可储存于容器诸如瓶、小瓶、注射器或静脉内(IV)输液袋中。
还提供了可用于各种目的(诸如用于表达CD79b的细胞杀伤测定)的试剂盒。与制品一样，试剂盒包括容器和在容器上或与容器相关的标签或包装插页。该容器中装有组合物，该组合物包含至少一种本公开所述的抗CD79b免疫缀合物。可包括另外的容器，其包含例如稀释剂、表面活性剂、缓冲液、对照抗体。标签或包装插页可提供组合物描述以及预期用途的说明。
提供以下描述以使本领域的普通技术人员能够制备和使用各种实施例。具体设备、技术和应用的描述仅作为示例提供。对本文所述实例的各种修改对本领域的普通技术人员而言将是显而易见的，并且在不脱离所述各种实施例的精神和范围的情况下，本文所定义的一般原理可应用于其他实例和应用中。因此，所述各种实施例并非旨在限于本文描述和示出的实例，而是与权利要求的范围保持一致。
实例
实例1：抗CD79b免疫缀合物表面活性剂研究
最初用于抗CD79b-vc-MMAE患者早期临床试验的制剂是一种液体制剂，其包含组氨酸醋酸盐缓冲液与0.02％聚山梨醇酯20，并且通过静脉注射泵递送给患者。为确定药品的商业配方，测试了不同浓度的各种非离子型表面活性剂，以确定它们在IV输液袋中稀释后是否能保护和稳定抗CD79b-vc-MMAE以防止其发生聚集，因为静脉输注是在商业环境中递送给患者的途径。具体地，在(a)IV输液袋中的静态条件下，和(b)IV输液袋中由短期搅拌引起的气-水界面应力条件下，评估抗CD79b-vc-MMAE的稳定性。
抗CD79b-vc-MMAE
用20mM组氨酸醋酸盐(pH 5.5)稀释抗CD79b-vc-MMAE。通过将3.11g组氨酸和1.03mL冰醋酸加入800mL新鲜超纯水中，制得20mM的乙酸组氨酸pH 5.5缓冲液。实测pH为5.5±0.1。用新鲜超纯水将所得溶液定容至1L，通过0.22μM PES过滤器进行过滤，然后将其保存于2–8℃下。测试以下浓度的抗CD79b-vc-MMAE：(i)10mg/mL，以及(ii)20mg/mL(根据需要用过滤后的缓冲液将其稀释至10mg/mL或20mg/mL)。将稀释后的物质避光保存于2–8℃下。
表面活性剂
测试的表面活性剂为：(i)聚山梨醇酯20(PS20)，USP NF级，由Croda生产；(ii)聚山梨醇酯80(PS80)，USP NF级，由Croda生产；(iii)泊洛沙姆(P188)，USP NF级，包含98ppm丁羟甲苯，由Spectrum Chemicals生产；以及(iv)N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)C14H28O6，FW：292.4，由Affymetrix生产，分析级。10％、1.0％和0.5％PS20储备液的制备方法如下：根据袋中PS20的目标浓度，使用在超纯水中制得的10％、1％或0.5％PS20储备液。通过将10gPS20加入100mL容量瓶中，制得10％PS20储备液。向烧瓶中装入60mL超纯水，然后用磁力搅拌器搅拌以确保溶液充分混合。使气泡消散30分钟后，将用超纯水将烧瓶装至100mL。将该溶液转移至避光容器中，在2–8℃下储存最长1周。使用类似的步骤，用1.0g PS20在100mL超纯水中制备1.0％PS20溶液。用1.0％PS20储备液的1:1(v/v)稀释液配制0.5％PS20溶液。
0.5％PS80的制备方法如下：通过将10g PS80加入100mL容量瓶中，制得10％PS20溶液。向烧瓶中装入50mL超纯水，然后用磁力搅拌器进行搅拌，直至溶液充分混合。将溶液静置30分钟以使气泡消散，然后取出搅拌子。然后使用超纯水将溶液体积定容至100mL。为获得0.5％PS80储备液，使用超纯水将0.5mL 10％的PS80储备液定容至10mL。将溶液转移至避光容器中，在2–8℃下储存最长1周。
0.5％P188的制备方法如下：通过将10g P188加入100mL容量瓶中，制得10％P188溶液。向烧瓶中装入60mL超纯水，然后用磁力搅拌器进行搅拌，直至溶液充分混合。将溶液静置30分钟以使气泡消散，然后取出搅拌子。然后使用超纯水将溶液体积定容至100mL。为获得0.5％P188储备液，使用超纯水将0.5mL 10％的P188储备液定容至10mL。将溶液转移至避光容器中，在2–8℃下储存最长1周。
A.静态IV输液袋研究：
将抗CD79b-vc-MMAE稀释到IV输液袋中。为模仿药房中推荐的制备程序，从IV输液袋中取出与要添加的抗CD79b-vc-MMAE和表面活性剂总体积相等的盐水。在加入组氨酸缓冲液中的抗CD79b-vc-MMAE制剂之前，首先将表面活性剂引入IV输液袋中，以确保抗CD79b-vc-MMAE作为无表面活性剂的超滤渗滤(UFDF)池在IV输液袋中不会暴露于无任何表面活性剂的盐水中。然后轻轻转动IV输液袋，使其完全混合，同时避免装有抗CD79b-vc-MMAE的袋子剧烈摇动和搅动。
在玻璃瓶中容纳的盐水中制备抗CD79b-vc-MMAE：各种量的盐水(0.9％氯化钠)、表面活性剂和免疫缀合物加入15cc Forma Vitrum玻璃瓶中，并盖上20mm的Daikyo瓶塞。随后在特定的研究条件下对样品进行孵育。
样品采集：在整个研究过程中，使用1cc或5cc BD Falcon注射器结合18G针头移取样品。将采集的样品保存在10cc PETG(Nalgene)容器中。
利用紫外分光光度法扫描来测定蛋白质浓度：使用安捷伦分光光度计测定所选样品在稀释后的蛋白质浓度。对从IV输液袋中采集的样品进行体积稀释(如果需要)，以使紫外线信号介于0.1和1.0AU之间。记录279nm和320nm下的吸光度。使用消光系数1.40(mg/mL)-1cm-1计算紫外线浓度。通过A279nm减去A320nm以获得校正后的A279。该校正解决了溶液浊度的影响，从而能够准确测量蛋白质浓度。
浊度：通过使用配备1cm光程比色皿的安捷伦分光光度计记录340–360nm下的平均紫外吸光度，测量样品的浊度。分光光度计以纯化水作为空白。
可见颗粒：利用黑色和白色背景灯箱，通过目视评估10cc PETG容器中的样品中是否存在可见颗粒。使用配备二极管阵列检测器(设定为280nm)和Tosoh Bioscience LLC(Montgomeryville,Pennsylvania)TSK-Gel G3000SWXL尺寸排阻色谱柱(300×7.8mm,5μm)(柱温为环境温度)的Agilent 1200/1280高性能尺寸排阻色谱(HPSEC)(AgilentTechnologies,Santa Clara,California)，测定可溶性聚集体含量(作为蛋白质不稳定性的指标)。使用0.2M K3PO4、0.25M KCl(pH 6.2)，在0.5mL/min的等度流速下，在30min内洗脱样品。
高精度液体粒子计数器(HIAC)：利用HIAC对溶液中的颗粒进行定径和计数。使用HIAC(9703+型)仪器，通过光阻法来定量测定可见和/或不可见颗粒(SVP)。收集到以下粒径：1.6、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、15、20、25和50μm。
静态储存的IV输液袋中的稳定性研究：
在IV输液袋中的表面活性剂研究中，在静态和搅拌条件下均进行了初步研究。将用于这些研究的抗CD79b-vc-MMAE的剂量范围设计为1.8mg/kg至2.4mg/kg，并在该范围内进行。假定大多数患者的体重介于40kg和120kg之间。基于这些假设，每个IV输液袋的总剂量在72mg(低剂量/低体重)至288mg(高剂量/高体重)之间变化。
图1至图2汇总了IV输液袋性能的结果，袋中PS20的固定浓度为0.005％，抗CD79b-vc-MMAE的最终浓度为0.65mg/mL。假定患者最低体重为40kg，采用100mL IV输液袋中的低剂量1.8mg/kg，选择IV输液袋中抗CD79b-vc-MMAE的浓度。由于100mL IV输液袋的过量灌装量为10mL，因此IV输液袋中的最终浓度为：(1.8mg/kg×40kg)/110mL＝0.65mg/mL
在30℃下静态储存22小时，IV输液袋类型在抗CD79b-vc-MMAE的物理稳定性方面无显著差异。在通过SEC测得的高分子量物质(HMWS)方面，所有袋子均表现出0.3％+0.1％增加(Δ)。这表明抗CD79b-vc-MMAE经0.9％NaCl稀释后，在30℃下不稳定。
静态储存条件下的表面活性剂和筛选研究：
为充分控制并高效筛选表面活性剂类型和表面活性剂浓度，必须在袋子中利用固定的蛋白质浓度。袋中抗CD79b-vc-MMAE的浓度为2.6mg/mL，其基于以100mL袋给予最大体重为120kg患者的最大可能剂量2.4mg/kg来选择，该袋子是推荐用于临床的袋子尺寸并且具有10％的过量灌装体积，如以下计算式所示：(2.4mg/kg×120kg)/110mL＝2.6mg/mL。假定袋中的最高蛋白质浓度为最糟糕的情况，因为较高的本体蛋白质浓度将促使抗体更快地吸附到空气-水界面，导致更高水平的界面介导的聚集。
静态储存条件下温度对稳定性的影响：
为复合IV输液袋提供适当的储存条件对于抗体治疗剂的产品质量至关重要，并且对储存条件进行了评估。在编制药房手册和产品说明书时也需要这些信息，以确保正确使用任何抗体治疗剂。在30℃、25℃和2–8℃的温度下测试了袋中各种含量的PS20。在2–8℃下，袋中的PS20的测试含量(0.003％、0.005％和0.01％)在静态储存22小时后，HMWS未发生显著变化(图3)。所有变化(％HMWS)均<0.02％。在25℃和袋中PS20含量分别为0.005％、0.01％、0.015％、0.025％和0.030％的情况下，静态储存22小时后，观察到HMWS升高约0.1％(图3)。HMWS在30℃下的增幅远大于在25℃下观察到增幅。在袋中PS20含量分别为0.004％、0.015％、0.02％、0.025％、0.05％和0.1％的情况下，在静态储存22小时后，观察到HMWS增加0.3+0.1％(图3)。
在所有温度下，HMWS的增幅与袋中的PS20浓度无关，表明在静态条件下的聚集并非由界面应力介导。HMWS的增幅与储存温度密切相关。这些结果与Beckley,N.等人(温度诱导的抗体药物偶联物的研究(Investigation into Temperature-Induced Aggregationof an Antibody Drug Conjugate)。《生物共轭化学》(Bioconjugate Chemistry),24,pp:1674-1683(2013))实施的后续研究的结果吻合良好，该文献表明较高温度下抗体药物偶联物(ADC)中HMWS的形成归因于三级结构对热应力的敏感性增加，其原因可能在于在接近CH2结构域的链间半胱氨酸处存在偶联药物。测试表面活性剂混合物：
已知泊洛沙姆188(P188)可减少IV输液袋中HMWS的形成，但是在搅拌条件下，不可见颗粒(SVP)可能显著增加。相比之下，PS20不增加SVP。为进一步研究这两种表面活性剂之间的不同结果，以重量比为1:1的PS20–P188混合物来确定PS20能否阻止SVP的形成以及P188能否限制HMWS的增加。该研究采用25mL IV输液袋进行，袋中的抗CD79b-vc-MMAE浓度为2.6mg/mL。以质量为基准，加入等量的PS20和P188，使IV输液袋中表面活性剂的总浓度为0.05％或0.1％。在30℃下静态储存22小时内，观察到HMWS增加0.3–0.4％，如下表1所示。
表1：热应激30℃静态条件下PS20-P188混合表面活性剂研究
Figure BDA0003065189990000781
粒径大于5μm、10μm和25μm的颗粒数略有增加。在IV输液袋中使用总量为0.1％的表面活性剂时，2μm颗粒数量有所增加。基于这些结果，表面活性剂混合物与单独的PS20相比无明显差异。
本研究评估了四种不同的表面活性剂，其中包括PS20、PS80、P188和辛基葡萄糖苷(OG)。在装有取自PVC袋的盐水的小瓶中，将0.02％表面活性剂和2.6mg/mL药品在30℃下孵育22小时后，HMWS增加0.3–0.4％，表明聚集也与所用的表面活性剂类型无关(图4)。
静态储存于小瓶中的抗CD79b-vc-MMAE的稳定性：
考虑到生理盐水(0.9％NaCl)中的抗CD79b-vc-MMAE在IV输液袋中静态储存时的物理不稳定性，测试5％葡萄糖(D5W)和半盐水(0.45％w/vNaCl)中免疫缀合物在小瓶中的稳定性，以评估免疫缀合物不稳定性对离子强度的依赖性。制备包含0.02％PS20溶液的溶液，其中抗CD79b-vc-MMAE的固定浓度为2.6mg/mL。抗CD79b-vc-MMAE在半盐水和D5W中的物理稳定性均得到显著改善(图4)。在D5W溶液中，HMWS没有变化，而半盐水溶液在30℃下静态储存24小时后，HMWS增加不超过0.1％。尽管在D5W中制备限制了抗CD79b-vc-MMAE的聚集，但是D5W溶液中抗体的糖基化是已知的风险(参见Fischer,S.等人，单克隆抗体制剂在储存和给药过程中的糖基化(Glycation during Storage and Administration ofMonoclonal抗体Formulations)。《欧洲制药学与生物制药学杂志》(European J Pharmaand Biopharm)，第70卷；pp.42-50(2008))。因此，由于存在糖基化的可能，不再考虑用包含5％葡萄糖的袋静脉输注抗CD79b-vc-MMAE。尽管与生理盐水相比，半盐水表现出显著的物理稳定性改善，但是由于预制半盐水袋在全球临床和商业环境中的可用性低并且在药房中制备半盐水袋带来不便和潜在的微生物污染风险，因此使用半盐水进行抗CD79b-vc-MMAE的静脉输注也非首选。
IV输液袋和玻璃瓶中静态稳定性研究结论：
上述静态稳定性研究表明，抗CD79b-vc-MMAE的聚集由高离子强度环境驱动，表明制剂缓冲液中的聚集速率明显低于盐水中的聚集速率。
B.IV输液袋搅拌研究：
实施一系列IV输液袋搅动研究，以便支持包含抗CD79b-vc-MMAE的复合IV输液袋在医院或临床环境中的运输以进行给药。尽管由于存在聚集风险，一般不建议运输制备好的包含治疗性蛋白质的IV输液袋，但是在临床环境中，特别是在药房有限的偏远地区，经常需要运输IV输液袋。因此，应支持最少的运输，并且在开发过程中必须评估IV输液袋的搅动对药物的影响。运输过程中IV输液袋内的搅动应力可能导致抗体治疗剂发生物理降解。抗体的物理降解(即聚集和颗粒形成)可能由吸附到IV输液袋中的气-液界面介导，并且在搅拌过程中不断再生。在下面的研究过程中，均使用MaxQ 4000椭圆形实验室摇床(轨道长度为0.75英寸)进行IV输液袋搅拌研究。将IV输液袋平放在摇床的平面上。
温度对搅拌条件下IV输液袋的稳定性的影响：
在2-8℃、25℃和30℃下，对袋中不同含量的PS20进行搅拌研究(图5A至图5C)。HMWS在30℃下时的增加速率高于25℃，并且高于2-8℃时的增加速率。HMWS的增幅与IV输液袋中在搅拌期间的温度相关。对于包含浓度为0.01％、0.005％和0.003％的PS20的袋子，在2-8℃下搅拌2小时，HMWS未发生增加(图5A)。在30℃下，HMWS的增幅取决于袋中PS20的浓度(图5C)。应当注意，在2-8℃(图5A)和25℃(图5B)下，在所有PS20水平下搅拌时，HMWS的增幅均为非线性的。这种非线性行为可能是由于在不同时间点采样。
表面活性剂对搅拌条件下IV输液袋的稳定性的影响：
以重量比为1:1的PS20–P188混合物来确定搅拌条件下PS20能否阻止SVP的形成以及P188能否限制HMWS的增加。该研究采用25mL IV输液袋进行，袋中的抗CD79b-vc-MMAE浓度为2.6mg/mL。以质量为基准，加入等量的PS20和P188，使IV输液袋中表面活性剂的总浓度为0.05％或0.1％。
在IV输液袋中使用总量为0.05％的表面活性剂时，在30℃下搅拌2小时后，HMWS增加2.9％(表2)。粒径大于5μm、10μm和25μm的颗粒在最长1小时内存在增加的趋势，并且在2小时时颗粒计数超出(LOD)。在IV输液袋中使用总量为0.1％的表面活性剂时，各种粒径的颗粒都有增加的趋势，但结果显著低于包含0.05％表面活性剂的袋子(表2)。与IV输液袋中表面活性剂的总浓度为0.05％相比，搅拌2小时后，HMWS的增幅也降低了约2.8％。基于这些结果，表面活性剂混合物与单独的PS20相比无差异。
表2：热应激30℃搅拌条件下PS20-P188混合表面活性剂研究
Figure BDA0003065189990000811
30℃下的短期IV输液袋搅拌：
本研究的目的是研究在环境条件下短期运输包含稀释的抗CD79b-vc-MMAE的IV输液袋，并且确定抗CD79b-vc-MMAAE制剂中PS20的有效浓度。本研究将袋子在30℃下短期搅拌30分钟。在30℃下进行这一较短时间的搅拌可涵盖稀释的抗CD79b-vc-MMAE在医院或其他机构在环境条件下运输过程中可能遇到的搅拌条件。该研究采用IV输液袋中浓度为0.001％、0.002％、0.003％和0.005％PS20，并且在30℃下以100rpm的转速进行搅拌。结果如图6所示。基于这些结果，在袋中包含0.005％PS20时，增幅小于0.1％。在这些条件下，对于抗CD79b-vc-MMAE，HMWS的增幅与IV输液袋中PS20的浓度直接相关。基于本研究的结果，为保证IV输液袋中稀释的抗CD79b-vc-MMAE的物理稳定性，IV输液袋中PS20的最低含量应介于0.003％和0.005％之间，以使聚集体水平保持在定量下限以下。
在IV输液袋冷却时在2-8℃下搅拌(不对袋子进行预冷却)：
本研究的目的是在更真实的情形下支持复合IV输液袋的运输。通常，IV输液袋由药剂师进行复配，并且在可能在经过或不经预冷却的车辆中运输。在该实验开始之前，将袋子平衡至30℃以模拟世界各地可能存在的更高的环境温度。即使在未经预冷却的袋子或未经预冷却的容器中运输，这样也可以确保稀释的DP的稳定性。该研究在100mL IV输液袋中使用2.6mg/mL的抗CD79b-vc-MMAE和四种不同的PS20含量进行：0.001％、0.002％、0.003％和0.005％。在IV输液袋中含量≤0.002％时，HMWS增幅小于0.1％。基于这项搅拌模型研究的结果，IV输液袋中PS20的最低含量介于0.001％和0.002％之间，以使聚集体水平保持在定量下限以下。结果汇总于图7中。
结论：
抗体药物偶联物(ADC)对盐水和高离子强度缓冲液的敏感性高于常规的未缀合抗体(Adem,Y.等人，《生物共轭化学》(Bioconjugate Chemistry)，25(2014)656-664)。测试的抗CD79b-vc-MMAE的表明，当稀释到0.3％盐水中时，在30℃下静态储存22小时后，HMWS有所增加。
基于这两种搅拌模型，在由短期运输引起的搅拌条件下，包含至少0.002％的PS20的IV输液袋中的抗CD79b-vc-MMAE在2-8℃下可稳定储存1小时。为满足处理和运输以及短期储存期间搅拌应力下的稳定性要求，最终拟定的抗CD79b-vc-MMAE制剂中的表面活性剂浓度为0.12％，与100mL IV输液袋结合使用时，对于预期的最低患者体重(40kg)，袋中的含量为0.004％。该水平下的表面活性剂表现出对剂量范围为1.8mg/kg至2.4mg/kg的抗CD79b-vc-MMAE的保护作用。值得注意的是，考虑到以下科学文献，认为该含量的表面活性剂(特别是PS20)的含量出乎意料得高并且违反直觉，参见：Kerwin BA.蛋白质生物治疗制剂中使用的聚山梨醇酯20和80：结构和降解途径(Polysorbates 20and 80used in theFormulation of Protein Biotherapeutics:Structure and Degradation Pathways)。《药物科学杂志》(Journal of Pharmaceutical Sciences)。2008；97(8):2924-2935。与另一种免疫缀合物抗CD22-vc-MMAE相比，用于抗CD79b-vc-MMAE药品的PS20的量也出乎意料得高，针对抗CD22-vc-MMAE确定包含0.05％PS20的商业化制剂适合稀释到IV输液袋中(数据未显示)。
实例2：降低抗CD79b免疫缀合物氧化和接头水解的风险
如实例1所述，确定适于IV输液袋递送的表面活性剂浓度可能增加了抗CD79b-vc-MMAE氧化的问题。已知由于聚山梨醇酯的自氧化降解，较高含量的聚山梨醇酯通常与较高含量的过氧化物相关。参见：Lam XM，Yang JY，Cleland JL。防止重组单克隆抗体HER2中蛋氨酸氧化的抗氧化剂(Antioxidants for prevention of methionine oxidation inrecombinant monoclonal antibody HER2)。《药物科学杂志》(Journal ofPharmaceutical Sciences)。1997；86(11):1250-1255；Donbrow M，Azaz E，PillersdorfA。聚山梨醇酯的自氧化(Autoxidation of polysorbates)。《药物科学杂志》(Journal ofPharmaceutical Sciences)。1978；67(12):1676-1681；Kerwin BA。蛋白质生物治疗制剂中使用的聚山梨醇酯20和80：结构和降解途径(Polysorbates 20and 80used in theFormulation of Protein Biotherapeutics:Structure and Degradation Pathways)。《药物科学杂志》(Journal of Pharmaceutical Sciences)。2008；97(8):2924-2935。
此外，已知在存在PS20的情况下可能发生色氨酸氧化。参见Lam X等人，蛋白质制剂中聚山梨醇酯20的自催化反应引起的特定位点的色氨酸氧化(Site-SpecificTryptophan Oxidation Induced by Autocatalytic Reaction of Polysorbate 20inProtein Formulation)，《药学研究》(Pharm Res)(2011)28:2543-2555。值得注意的是，对于本公开中所用的抗CD79b抗体，可变重链HVR 1中存在色氨酸：GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)。用AAPH配制抗CD79b-vc-MMAE后，通过胰蛋白酶肽的质谱分析，确定AAPH应激条件下(例如，在40℃下保存长达2周或在25℃下保存长达6个月或在2-8℃下保存6个月)的氧化倾向。用胰蛋白酶消化应激的抗CD79b-vc-MMAE，并利用LC-MS/MS测定酶解的肽的氧化百分比(数据未显示)。通过肽图分析发现HVR色氨酸发生68％的氧化。导致抗CD79b-vc-MMAE发生大约58％的效价损失(数据未显示)。因此，有必要降低氧化风险。
需要考虑的其他因素包括如何控制免疫缀合物接头的琥珀酰亚胺水解。所述抗CD79b-vc-MMAE免疫缀合物采用含马来酰亚胺的药物接头，该药物接头与抗体的半胱氨酸残基偶联以形成硫代琥珀酰亚胺键。已知硫代琥珀酰亚胺键在患者血浆中可能发生两种竞争反应：(a)马来酰亚胺消除，导致免疫缀合物发生不期望的药物损失；(b)硫代琥珀酰亚胺环水解，导致琥珀酸衍生物无法消除。参见图8和Lyon,R.等人，自稳定ADC：使用催化自身硫代琥珀酰环水解的马来酰亚胺基药物接头制得的缀合物(Self-Stabilizing ADCs:Conjugates Prepared with Maleimido Drug-Linkers that Catalyze their ownThiosuccinimide Ring Hydrolysis)，摘要编号4333，美国癌症研究协会(2013年4月)。这是重要的关键质量属性(CQA)，因为它可能影响药代动力学(PK)和安全性。之前已经证明，用于患者早期临床试验的初始液体制剂，例如pH为5.5的组氨酸醋酸盐缓冲液中的液体制剂，在建议的储存条件下储存2年后酸性增加了约9％(数据未显示)。
由于存在以下三种风险：PS20浓度增加导致氧化风险升高；色氨酸氧化导致氧化风险升高，导致效价损失；以及接头水解风险导致免疫缀合物中的MMAE药物损失并且在患者血浆中产生游离药物，因此建议使用冻干制剂来降低这些风险，从而获得更长、更稳定的有效期。
A.替代缓冲液种类研究：
为启动冻干产品的配方开发，对替代缓冲液种类进行了研究。临床早期制剂中所用的缓冲液为组氨酸醋酸盐缓冲液。已知L-组氨酸可能通过多种机理发生氧化，其中最常见的氧化机理是光氧化。参见Mason,B.等人，叔丁基氢过氧化物对游离L-组氨酸的氧化(Oxidation of Free L-histidine by tert-Butylhydroperoxide)，《药学研究》(PharmRes.)(2010)27(3):447-456。此外，醋酸盐可能在冻干过程中蒸发，从而导致pH值发生变化，这可能使免疫缀合物产品不稳定。此外，由于醋酸盐易燃，因此认为醋酸盐可能给冻干过程带来潜在的危险。因此，对替代缓冲液种类进行了评估。测试的三种制剂如表3所示。
表3：缓冲液种类筛选和pH范围评估
蛋白质浓度 缓冲液种类 pH
22mg/mL 组氨酸/组氨酸-HCl 5.5
22mg/mL 琥珀酸钠 5.0
22mg/mL 琥珀酸钠 6.0
在冻融应激试验中，对经过冻融的抗CD79b-vc-MMAE药物组合物(见表3)在一次性PETG容器中的稳定性进行评估。对蛋白质制剂进行无菌过滤并灌装到PETG容器中。将容器在-20℃下放置T＝0和1周。将容器冷冻并解冻至室温，总共循环五次。仅分析T＝0和第三次冻融循环。结果汇总于表4中。
表4：抗CD79b-vc-MMAE的冻融稳定性
Figure BDA0003065189990000851
结果表明，在测试的三种配方中，均未观察到任何问题。因此，组氨酸或琥珀酸盐可作为组氨酸-醋酸盐的可接受的替代缓冲液种类。
接下来，在稳定性筛选试验中，测试了30℃下pH对电荷变体形成的影响。使用与表3中相同的三种液体制剂，在30℃下承受2周、4周和8周的三个不同时间点的应激，通过配备PrinCE微型注射器和氟碳涂层毛细管柱100μm×5cm(ProteinSimple)的iCE280分析仪(ProteinSimple)来评估电荷变体分布。为去除重链C末端赖氨酸残基，在稀释步骤后，以1:1000(w/w)的酶对底物的比例向每个样品中加入羧肽酶B(CpB)。此外，加入唾液酸酶A以去除唾液酸。加入CpB和唾液酸酶A后，将样品在37℃下孵育10分钟。将孵育的液体制剂样品与两性电解质溶液混合，该溶液由以下混合物组成：700μL 1％甲基纤维素、1218μL纯净水、8μL pharmalyte 8-10.5、55μL pharmalyte 5-8、15μL pI标记物5.12和4μL pI标记物7.05。采用80mM磷酸阳极电解液和100mM氢氧化钠阴极电解液(均溶于0.1％甲基纤维素中)，引入电势1500V并且保持1分钟，然后引入电势3000V并且保持5分钟，对样品进行聚焦。通过使280nm紫外线(UV)穿过毛细管并进入电荷耦合器件数码相机的透镜，获得聚焦电荷变体的图像。结果如图9和图10所示，表明在pH 5.0至5.5之间，酸性物质的形成较少，而碱性物质的形成则稍快。因此，缓冲液成分对电荷稳定性似乎没有可测量的影响。
B.pH对稳定性的影响研究：
在稳定性筛选中，使用与表3中相同的三种液体制剂，在30℃下测试pH对尺寸变体形成的影响，该液体制剂在30℃下承受2周、4周和8周的三个不同时间点的应激。在AgilentTechnologies 1200系列HPLC(Santa Clara,California)上，采用0.25mM氯化钾(pH 6.2)流动相，通过尺寸排阻色谱法(SEC)测定尺寸变体分布。然后将液体制剂样品上样至TosohBioscience TSKgel G3000SWXL色谱柱(South San Francisco,California)上。使用0.5mL/min的流速在30分钟内洗脱样品，并监测280nm处的吸光度。结果报告为曲线下总面积的相对峰面积，如图11所示。稳定性筛选结果表明，与pH 6.0相比，在pH 5.0至5.5之间观察到较少的高分子量物质(HMWS)。在30℃下储存4周后观察到相似数量的低分子量物质(LMWS)。在8周时，在30℃下观察到稍高的LMWS。由于将pH降至5.3似乎能够减少电荷和尺寸变体的形成，因此选择pH 5.3。
图12显示了测试两种缓冲液种类所得到的色谱图：pH 5.5的组氨酸/组氨酸-HCl与三种不同pH的琥珀酸钠：5.0、5.5和6.0。在测试的任何pH(pH 5.0、5.5或6.0)下，pH 5.5的组氨酸缓冲液在30℃下均表现出稍优于琥珀酸钠的物理稳定性。但是，由于琥珀酸钠缓冲液在液体中表现出可接受的稳定性，并且考虑到使用组氨酸的潜在氧化风险，因此选择了琥珀酸钠缓冲液。
C.测试冻干制剂：
测试冻干制剂以降低上述风险。冻干循环的总体方案如表5所示。
表5：抗CD79b-vc-MMAE的冻干循环
Figure BDA0003065189990000861
循环长度为约78小时或约3天。将水分含量设定为介于0.5％至0.7％之间。
实施冻干筛选研究，测试各种抗CD79b-vc-MMAE浓度、两种不同的缓冲液种类、不同pH值和两种不同的表面活性剂水平，如表6所示。
表6：冻干筛选研究–测试制剂
# 蛋白质浓度 缓冲液 稳定剂/张度剂 表面活性剂 pH
1 10mg/mL 10mM琥珀酸钠 260mM蔗糖 0.06％PS20 5.0
2 10mg/mL 10mM琥珀酸钠 260mM蔗糖 0.06％PS20 5.5
3 10mg/mL 10mM琥珀酸钠 260mM蔗糖 0.06％PS20 6.0
4 20mg/ml 10mM琥珀酸钠 260mM蔗糖 0.06％PS20 5.5
5 10mg/ml 10mM His/His-HCl 260mM蔗糖 0.08％PS20 5.5
在筛选研究中，这些筛选冻干制剂在30℃下可稳定储存长达2个月。
为定量分析针对各种受试制剂(1)至(5)开发的作为稳定性指示物的单体，将各种受试制剂复溶为10mg/mL或20mg/mL时，采用SEC分析，如上文所述。图13汇总了这项研究，结果表明，在30℃下热应激2个月中，任何受试制剂中单体的百分比均无变化。如上文所述，还通过icIEF对各种冻干制剂(1)至(5)进行测试，以确定在30℃下承受2个月的热应激的主峰百分比。图14汇总了这项研究，并且证明在30℃下承受2个月的热应激后，任何受试制剂的主峰百分比均无变化。这两项研究的结果表明，琥珀酸钠缓冲液在5.0至6.0的pH范围内，测试的冻干制剂具有可接受的稳定性。
D.冻干块状物外观：
冻干制剂的一个重要方面是冻干块状物的实际外观，因为它是产品质量属性之一。对于抗CD79b-vc-MMAE冻干制剂，同时测试了免疫缀合物的浓度和稳定剂/抗张剂的浓度，以检验如何改善冻干块状物的外观。图15A至图15C显示了三种冻干制剂，其中测试的蛋白质与蔗糖的比率不同。在测试的所有三种蔗糖含量下，在冻干块状物的底部均出现凹痕，并未形成理想的冻干块状物外观。但是，在类似的冻干条件下，蔗糖含量较低的制剂表现出较小的凹痕，并且蔗糖含量越低，导致水分含量越少。测试了另一种冻干制剂，其中免疫缀合物浓度增加至20mg/mL，而蔗糖浓度则降至120mM。图16A和图16B比较了两种冻干块状物的外观。浓度为20mg/mL免疫缀合物与120mM蔗糖相结合，表现出最稳定、均一的冻干块状物外观。在40℃、25℃和5℃下实施为期4周的热应激稳定性研究时，块状物的结构、颜色或外观均未见变化，并且水分含量保持在5％以下。
E.冻干制剂的稳定性：
冻干药品制剂：通过可溶性聚集体或电荷变体的形成，对20mg/mL抗CD79b-vc-MMAE、120mM蔗糖、10mM琥珀酸钠中的0.12％PS20(pH 5.3)的稳定性进行测试。如上所述，通过SEC测量可溶性聚集体。图17显示，对于冻干药品，在25℃和2-8℃下储存8周内，可溶性聚集体的增幅小于0.1％。在40℃下，每周观察到的二聚体增加约0.1％，并且该聚集速率可能取决于水分含量。如上所述，通过icIEF测量电荷变体。图18显示，对于冻干药品，在40℃下储存4周后，主峰损失约5％，酸度增加3.7％。在25℃和2-8℃下未观察到显著变化。因此，在25℃和2-8℃的应激条件下，未观察到冻干药品发生任何变化。
表7汇总了由于实例1和2中所述的许多研究而得出的最终抗CD79b-vc-MMAE制剂。
表7：最终抗CD79b-vc-MMAE制剂总结
Figure BDA0003065189990000881
如上表7所示，最终的商业药品配方中包含20mg/mL药品，当溶液冻干时，提高了蛋白质与药物的比率，从而改善了块状物外观。0.12％PS20(即1.2mg/mL)可使用IV输液袋和静脉输液器保护制剂中的蛋白质，避免其在给药过程中受到界面应力的影响。pH为5.3，可最大程度减少琥珀酰亚胺水解产生的酸性变体的形成。表7所示的配方设计为复溶于7.2mLSWFI中后每瓶可递送140mg药品，以支持1.8mg/kg的临床剂量。
实例3：评估抗CD79b-vc-MMAE原料药和药品制剂的稳定性
发现冻干制剂中的药品(见表7)在2％-8℃下在残留水分含量范围为0.3％(w/w)至3.2％(w/w)的情况下可保持稳定至少44个月，并且在25℃下在残留水分含量范围为0.3％(w/w)至3.2％(w/w)的情况下可保持稳定至少7个月。
接下来，更改冻干药品的配方参数，并且评估其对冻干药品稳定性的实际有意义的影响。测试的五种制剂参数(以及参数变化的范围)为：(a)蛋白质浓度(17-23mg/mL)，(b)琥珀酸盐浓度(7-23mM)，(c)蔗糖浓度(90-150mM)，(d)聚山梨醇酯20浓度(0.9-1.5mg/mL)，以及(e)pH(4.95-5.65)。在2℃-8℃下储存长达9个月后，对冻干药品的稳定性无实际意义的影响。基于模型预测的降解速率，预计在2℃-8℃下储存长达至少24个月后，对冻干药品的稳定性无实际意义的影响。
发现复溶的药品溶液(即10mM琥珀酸盐中的20mg/mL polatuzumab vedotin、120mM蔗糖、1.2mg/mL聚山梨醇酯20，在pH 5.3下)在2℃-8℃下储存72小时或在暴露于环境光线的情况下在30℃下储存24小时后保持理化特性稳定。Polatuzumab vedotin与其靶点(即CD79b)的亲和力或polatuzumab vedotin的生物活性均未发现显著变化(例如，具有统计学意义的变化)。
尽管为了清楚理解的目的先前已经通过说明和实例相当详细地描述了本公开，但是所述说明和实例不应解释为限制本公开的范围。本文引用的所有专利和科学文献的公开内容的全部内容以引用方式明确地并入。
综上所述，本发明包含但不限于如下项的技术方案：
1.一种药物组合物，其包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂，其中，所述表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000891
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ IDNO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中所述重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约1至约8。
2.根据项1所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为约5mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约50mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约10mg/mL至约30mg/mL或约10mg/mL至约20mg/mL。
3.根据项2所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。
4.根据项2或3所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL。
5.根据项1-3中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为10mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为0.06％w/v的所述表面活性剂。
6.根据项1-4中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为20mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为0.12％w/v的所述表面活性剂。
7.根据项1-4中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为20mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为至少0.12％w/v的所述表面活性剂。
8.根据项1-7中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述表面活性剂选自由以下项组成的组：聚山梨醇酯20(PS20)、聚山梨醇酯80(PS80)、泊洛沙姆188(P188)、N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)以及它们的组合。
9.根据项1-8中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含缓冲剂。
10.根据项9所述的药物组合物，其特征在于，所述缓冲剂为组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液。
11.根据项10所述的药物组合物，其特征在于，所述缓冲剂为组氨酸缓冲液。
12.根据项10所述的药物组合物，其特征在于，所述缓冲剂为琥珀酸盐缓冲液。
13.根据项12所述的药物组合物，其特征在于，所述琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。
14.根据项13所述的药物组合物，其特征在于，所述琥珀酸钠缓冲液的浓度为约10mM至约200mM。
15.根据项14所述的药物组合物，其特征在于，所述琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
16.根据项1-15中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有约5.0至约6.0的pH。
17.根据项16所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有5.3的pH。
18.根据项1-17中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含糖。
19.根据项18所述的药物组合物，其特征在于，所述糖的浓度为约100mM至约260mM。
20.根据项18-19所述的药物组合物，其特征在于，所述糖选自由以下项组成的组：蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、甘油、葡聚糖40和海藻糖。
21.根据项20所述的药物组合物，其特征在于，所述糖为蔗糖。
22.根据项22所述的药物组合物，其特征在于，所述蔗糖的浓度为120mM。
23.根据项1-22中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物已经由冻干块状物复溶。
24.一种药物组合物，其通过冻干液体组合物制成，所述液体组合物包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其特征在于，所述液体组合物具有5.3的pH，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000921
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中所述重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约1至约8。
25.根据技术项1-24中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
26.根据项1-25中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述重链包含SEQ IDNO:9所示的氨基酸序列并且所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
27.根据项1-26中任一项所述的药物组合物，其特征在于，p值介于约2和约5之间。
28.一种药物组合物，其通过冻干液体组合物制成，所述液体组合物包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中，所述液体组合物具有5.3的pH，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000931
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQID NO:9所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5。
29.根据项1-28中任一项所述的药物组合物，其特征在于，p为约3.5。
30.根据项24-29中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物避光保存时在5℃±3℃下可保持稳定性达约48个月。
31.根据项30所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物的所述稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。
32.根据项31所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
33.根据项28-32中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物的所述稳定性通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)测得。
34.根据项33所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有如通过icIEF测得的至少58.0的主峰(峰面积％)、至多32.0的酸性区(峰面积％)和至多12.0的碱性区(峰面积％)。
35.根据项24-34中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为冻干块状物。
36.根据项1-35中任一项所述的药物组合物，其特征在于，用无菌注射用水(SWFI)将所述药物组合物复溶以产生复溶组合物。
37.根据项1-35中任一项所述的药物组合物，其特征在于，将所述药物组合物复溶于约7.2mL SWFI中以产生复溶组合物。
38.根据项36或37所述的药物组合物，其特征在于，所述复溶组合物在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。
39.根据项36-38中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述复溶组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
40.根据项36-39中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述复溶组合物可进一步稀释到静脉内(IV)输液袋中的等渗缓冲液中以产生稀释后的组合物。
41.根据项40所述的药物组合物，其特征在于，所述IV输液袋中所述稀释后的组合物的最终体积为约100mL。
42.根据项40或41所述的药物组合物，其特征在于，所述稀释后的组合物中所述免疫缀合物的所述浓度介于约0.72mg/mL和约2.7mg/mL之间。
43.一种药物组合物，其通过包括以下步骤的方法制成：
(a)冻干液体组合物以产生冻干组合物，所述液体组合物包含10mM琥珀酸钠缓冲液中的20mg/mL抗CD79b免疫缀合物、0.12％w/v的聚山梨醇酯20以及120mM蔗糖，其中，所述液体组合物具有5.3的pH，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000941
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述重链包含SEQID NO:9所示的氨基酸序列，所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5；
(b)用约7.2mL无菌注射用水(SWFI)复溶所述冻干组合物，以产生复溶组合物；以及
(c)将所述复溶组合物稀释到静脉内(IV)输液袋中的等渗缓冲液中，
以产生所述药物组合物，
其中所述IV输液袋中所述药物组合物的最终体积为约100mL，并且
其中所述药物组合物中所述免疫缀合物的最终浓度为约0.72mg/mL或约2.7mg/mL。
44.根据项43所述的药物组合物，其特征在于，p为约3.5。
45.根据项38-44中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述等渗缓冲液为0.9％氯化钠溶液、0.45％氯化钠溶液或5％葡萄糖溶液。
46.一种液体组合物，其包含：a)介于约0.72-2.7mg/mL的polatuzumab vedotin；b)介于约0.36-0 1.35mM的琥珀酸钠；c)介于约0.51-16.24mM的蔗糖；d)介于约0.0432-0.162mg/mL的聚山梨醇酯20，其中，所述液体组合物的pH介于约5和约5.7之间。
47.一种液体组合物，其包含：a)约0.72mg/mL polatuzumab vedotin；b)约0.36mM琥珀酸钠；c)约0.51mM蔗糖；d)约0.0432mg/mL聚山梨醇酯20，其中，所述液体组合物的pH介于5.1和约5.4之间。
48.一种液体组合物，其包含：a)约2.7mg/mL polatuzumab vedotin；b)约01.35mM琥珀酸钠；c)约16.24mM蔗糖；d)约0.162mg/mL聚山梨醇酯20，其中，所述液体组合物的pH介于约5.1和约5.4之间。
49.根据项46-48中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物的体积介于约50mL和约100mL之间。
50.根据项49所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物的体积为50mL。
51.根据项49所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物的体积为100mL。
52.一种药物组合物，其包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中，所述药物组合物复溶于水中时形成液体药物组合物，所述液体药物组合物包含浓度为约10mg/mL至约20mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物、浓度为至少0.06％w/v的所述表面活性剂、浓度为约10mM至约200mM的所述琥珀酸盐缓冲液和浓度为约100mM至约260mM的所述糖，其中所述液体药物组合物具有5.3的pH，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000951
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中所述重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约1至约8。
53.根据项52所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
54.根据项52或53所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b的所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中所述抗CD79b抗体的所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
55.根据项24-34或52-54中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物通过冻干制成，并且其中所述冻干药物组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少6、12、18、24、30、36、42、48、54或60个月。
56.根据项55所述的药物组合物，其特征在于，所述冻干药物组合物为冻干块状物。
57.根据项52-56中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物复溶后在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。
58.根据项52-57中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物复溶后在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
59.根据项52-58中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物在复溶后稀释到IV输液袋中的等渗缓冲液中，其中所述IV输液袋中稀释后的所述表面活性剂浓度为至少0.003％w/v。
60.根据项59所述的药物组合物，其特征在于，所述IV输液袋中稀释后的所述表面活性剂浓度为至少0.004％w/v。
61.根据项52-60中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨醇酯20。
62.根据项52-61中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述糖为蔗糖。
63.根据项52-58和61-62中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述蔗糖的浓度为120mM。
64.根据项52-63中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。
65.根据项64所述的药物组合物，其特征在于，在复溶后但是在稀释前，所述琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
66.根据项52-58和61-65中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物在5℃±3℃下可保持稳定性达约7天。
67.根据项66所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物的所述稳定性通过尺寸排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测得。
68.根据项67所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有如通过SE-HPLC测得的至少95.0的主峰(峰面积％)。
69.根据项52-68中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物的所述稳定性通过成像毛细管等电聚焦(icIEF)测得。
70.根据项69所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物具有如通过icIEF测得的至少58.0的主峰(峰面积％)、至多32.0的酸性区(峰面积％)和至多12.0的碱性区(峰面积％)。
71.一种玻璃瓶，其包含根据项52-58和61-70中任一项所述的药物组合物。
72.一种液体组合物，其包含抗CD79b免疫缀合物、表面活性剂、琥珀酸盐缓冲液和糖，其中，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL，所述表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v，所述琥珀酸盐缓冲液的浓度为约10mM至约200mM，并且所述糖的浓度为约100mM至约260mM，其中所述液体组合物具有5.3的pH，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000981
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中所述重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约1至约8。
73.根据项72所述的液体组合物，其特征在于，所述抗CD79b抗体包含重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)，所述重链可变结构域包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。
74.根据项72或73所述的液体组合物，其特征在于，所述抗CD79b的所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中所述抗CD79b抗体的所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列。
75.根据项72-74中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨醇酯20。
76.根据项72-75中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述糖为蔗糖。
77.根据项76所述的液体组合物，其特征在于，所述蔗糖的浓度为约120mM。
78.根据项72-77中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述琥珀酸盐缓冲液为琥珀酸钠缓冲液。
79.根据项78所述的液体组合物，其特征在于，所述琥珀酸钠缓冲液的浓度为10mM。
80.根据项72-79中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述组合物稀释在等渗缓冲液中。
81.根据项80所述的液体组合物，其特征在于，所述等渗缓冲液为0.9％氯化钠溶液、0.45％氯化钠溶液或5％葡萄糖溶液。
82.根据项80或81所述的液体组合物，其特征在于，稀释在等渗缓冲液中的所述组合物在IV输液袋中。
83.根据项72-79中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述组合物在5℃±3℃下可保持稳定性达约72小时。
84.根据项72-79中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述组合物在25℃下可保持稳定性达约24小时。
85.根据项72-79中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。
86.根据项72-79中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
87.一种冻干药物组合物，其包含约150mg的抗CD79b免疫缀合物、约9.0mg聚山梨醇酯20、约8.88mg琥珀酸、约4.08mg氢氧化钠和约309mg蔗糖，其中，所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990000991
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述抗CD79b的所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中所述抗CD79b抗体的所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约2至约5。
88.一种冻干药物组合物，其包含约150mg的polatuzumab vedotin、约9.0mg聚山梨醇酯20、约8.88mg琥珀酸、约4.08mg氢氧化钠和约309mg蔗糖。
89.一种冻干药物组合物，其包含约140mg的抗CD79b免疫缀合物、约8.4mg聚山梨醇酯20、约8.27mg琥珀酸、约3.80mg氢氧化钠和约288mg蔗糖，其中，所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990001001
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述抗CD79b的所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中所述抗CD79b抗体的所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约2至约5。
90.一种冻干药物组合物，其包含约140mg的polatuzumab vedotin、约8.4mg聚山梨醇酯20、约8.27mg琥珀酸、约3.80mg氢氧化钠和约288mg蔗糖。
91.一种冻干药物组合物，其包含约30mg抗CD79b免疫缀合物、约1.8mg聚山梨醇酯20、约1.77mg琥珀酸、约0.816mg氢氧化钠和约61.8mg蔗糖，其中，所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure BDA0003065189990001002
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述抗CD79b的所述重链包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，并且其中所述抗CD79b抗体的所述轻链包含SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且p值为约2至约5。
92.一种冻干药物组合物，其包含约30mg的polatuzumab vedotin、约1.8mg聚山梨醇酯20、约1.77mg琥珀酸、约0.816mg氢氧化钠和约61.8mg蔗糖。
93.根据项87、89或91中任一项所述的冻干组合物，其特征在于，p为约3.5。
94.一种冻干药物组合物，其包含约140-150mg的polatuzumab vedotin、约8.4-9.0mg聚山梨醇酯20、约8.27-8.88mg琥珀酸、约3.80-4.08mg氢氧化钠和约288-309mg蔗糖。
95.根据项87-94中任一项所述的冻干药物组合物，其特征在于，所述冻干药物组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少6、12、18、24、30、36、42、48、54或60个月。
96.根据项87-95中任一项所述的冻干药物组合物，其特征在于，所述冻干药物组合物为冻干块状物。
97.一种液体药物组合物，其包含：a)5-60mg/mL polatuzumab vedotin；b)10-200mM琥珀酸钠；c)100-260mM蔗糖；d)0.06-0.12％w/v聚山梨醇酯20，其中，所述液体组合物的pH介于5和6之间。
98.根据项97所述的液体组合物，其包含：a)10-55mg/mL polatuzumabvedotin；b)10-100mM琥珀酸钠；c)150-260mM蔗糖；d)0.08-0.12％w/v聚山梨醇酯20，其特征在于，所述液体组合物的pH介于5.1和5.6之间。
99.根据项97所述的液体组合物，其包含：a)15-40mg/mL polatuzumab vedotin；b)10-50mM琥珀酸钠；c)200-260mM蔗糖；d)0.1-0.12％w/v聚山梨醇酯20，其特征在于，所述液体组合物的pH介于5.2和5.4之间。
100.一种液体药物组合物，其包含：a)20mg/mL polatuzumab vedotin；b)10mM琥珀酸钠；c)120mM蔗糖；d)0.12％w/v聚山梨醇酯20，其中，所述液体组合物的pH为约5.3。
101.根据项97-100中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物在约30℃下可稳定储存至少4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24小时。
101.根据项97-101中任一项所述的液体组合物，其特征在于，所述液体组合物在约2℃至约8℃下可稳定储存至少24、48或72小时。
102.一种治疗有需要的患者的增殖性疾患的方法，所述方法包括向所述患者施用前述项中任一项所述的药物组合物或液体组合物。
103.根据项102所述的方法，其特征在于，所述增殖性疾患为癌症。
104.根据项103所述的方法，其特征在于，所述癌症为B细胞增殖性疾患。
105.根据项104所述的方法，其特征在于，所述B细胞增殖性疾患选自由以下项组成的组：淋巴瘤、骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、侵袭性NHL、惰性淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(FL)、复发性侵袭性NHL、复发性惰性NHL、复发性NHL、难治性NHL、难治性惰性NHL、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、小淋巴细胞性淋巴瘤、白血病、毛细胞白血病(HCL)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)和套细胞淋巴瘤。
106.根据项105所述的方法，其特征在于，所述B细胞增殖性疾患为非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
107.根据项105所述的方法，其特征在于，所述B细胞增殖性疾患为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
108.根据项105所述的方法，其特征在于，所述B细胞增殖性疾患为复发性NHL或难治性NHL。
109.根据项105所述的方法，其特征在于，所述B细胞增殖性疾患为滤泡性淋巴瘤(FL)。
序列表
<110> 基因泰克公司
<120> 稳定的抗 CD79B 免疫缀合物制剂
<130> 14639-20443.64
<140> 尚未分配
<141> 同时附上
<150> US 62/657,185
<151> 2018-04-13
<160> 18
<170> 用于 Windows 的 FastSEQ，4.0 版
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 1
Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu Gly Asp Ser Phe Leu Asn
1 5 10 15
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Gln Gln Ser Asn Glu Asp Pro Leu Thr
1 5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Ile Glu
1 5 10
<210> 5
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 6
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 9
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Glu Ile Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Phe Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Val Pro Ile Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
<210> 10
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Glu
20 25 30
Gly Asp Ser Phe Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 11
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 12
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 14
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 17
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 18
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30

Claims (10)

1.一种药物组合物，其包含抗CD79b免疫缀合物和表面活性剂，其中，所述表面活性剂的浓度为至少0.06％w/v，并且其中所述抗CD79b免疫缀合物包含式：
Figure FDA0003065189980000011
其中：
Ab为抗CD79b抗体，其中所述抗CD79b抗体包含重链和轻链，其中所述轻链包含：(a)KASQSVDYEGDSFLN(SEQ ID NO:1)所示的HVR-L1序列；(b)AASNLES(SEQ ID NO:2)所示的HVR-L2序列；以及(c)QQSNEDPLT(SEQ ID NO:3)所示的HVR-L3序列；其中所述重链包含：(a)GYTFSSYWIE(SEQ ID NO:4)所示的HVR-H1序列；(b)GEILPGGGDTNYNEIFKG(SEQ ID NO:5)所示的HVR-H2序列；以及(c)TRRVPIRLDY(SEQ ID NO:6)所示的HVR-H3序列；Val为缬氨酸；Cit为瓜氨酸；并且
p值为约1至约8。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为约5mg/mL至约60mg/mL、约10mg/mL至约50mg/mL、约10mg/mL至约40mg/mL、约10mg/mL至约30mg/mL或约10mg/mL至约20mg/mL。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为约10mg/mL至约20mg/mL。
4.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其特征在于，所述抗CD79b免疫缀合物的浓度为20mg/mL。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为10mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为0.06％w/v的所述表面活性剂。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为20mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为0.12％w/v的所述表面活性剂。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含浓度为20mg/mL的所述抗CD79b免疫缀合物和浓度为至少0.12％w/v的所述表面活性剂。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述表面活性剂选自由以下项组成的组：聚山梨醇酯20(PS20)、聚山梨醇酯80(PS80)、泊洛沙姆188(P188)、N-辛基-β-D吡喃葡萄糖苷(OG)以及它们的组合。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述组合物进一步包含缓冲剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述缓冲剂为组氨酸缓冲液或琥珀酸盐缓冲液。
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