CN117257977A - 用于制备抗体药物偶联物的方法 - Google Patents
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Abstract
属于生物技术领域,涉及用于制备抗体药物偶联物的方法,其包括:(i)使抗体或其抗原结合片段与还原剂在缓冲体系中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键;(ii)使接头‑有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应;(iii)加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化。
Description
技术领域
本公开属于生物技术领域,涉及用于制备抗体药物偶联物的方法,以及采用该制备方法制备得到的抗体药物偶联物。
背景技术
抗体药物偶联物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)是结合了治疗性抗体的高特异性和细胞毒药物的高杀伤活性的一类药物,其中治疗性抗体部分与细胞毒药物部分通过中间的接头部分连接。与以往传统的化疗药物相比,抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低对正常细胞的影响。目前,自2000年第一个抗体药物偶联物Mylotarg在美国上市以来,全球范围内已有至少十款ADC推向市场,同时在抗肿瘤领域也有文献报道多种新型抗体药物偶联物的研究。
抗体通常具有四个链间二硫键,其可以作为抗体与接头-有效载荷的结合位点。已知存在产生DAR4的抗体药物偶联物的方法,然而一些偶联方法常会导致抗体药物偶联物的异质性较高,D4含量低,还有一些方法的反应条件苛刻,存在有毒试剂等,因此,仍需要开发新的抗体与细胞毒药物的偶联方法。
发明内容
制备方法
本公开提供了一种抗体药物偶联物的制备方法,其包括:
(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键;
(ii) 使接头-有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应;
(iii) 步骤(ii)反应结束后,加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化。
在步骤(i)中可加入镍盐,所述镍盐没有特别限制,只要它们在反应溶液中可溶并且能够释放Ni2+到反应溶液中。本公开使用的镍盐的实例包括但不限于NiCl2、Ni(NO3)2、NiSO4、Ni(CH3COO)2、NiI2、NiBr2、Ni(HCOO)2或Ni(BF4)2。在一些实施方案中,所述镍盐为NiSO4。
在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至4:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至2.5:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至2.2:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为0℃至10℃。在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为2℃至7℃。在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为2℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为5.5℃至7℃。在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为5℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述步骤(i)中的反应温度为2℃、2.5℃、3℃、3.5℃、4℃、4.5℃、5℃、5.5℃、6℃、6.5℃、7℃、7.5℃、8℃、8.5℃、9℃、9.5℃、10℃、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至3:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2.4:1至2.6:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述还原剂可以是三(2-羧基乙基)膦(TCEP)或其盐、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。在一些实施方案中所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦或其盐,优选为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐(TCEP·HCl)。
在一些实施方案中,所述缓冲液可以是HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)缓冲液、组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液为组氨酸缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液为组氨酸-盐酸缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液的浓度为1 mM至30 mM,例如5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM或30mM,优选为20 mM。
在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的时间为10至20小时。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的时间为10至14小时。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的时间为12至13小时。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的时间为10小时、10.5小时、11小时、11.5小时、12小时、12.5小时、13小时、13.5小时、14小时、14.5小时、15小时、15.5小时、16小时、16.5小时、17小时、17.5小时、18小时、18.5小时、19小时、19.5小时、20小时、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的pH为5至9。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的pH为6至8。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的pH为6.5至7.5。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的pH为6.9至7.2。在一些实施方案中,所述步骤(i)中反应的pH为6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述缓冲液中进一步添加蔗糖。在一些实施方案中,所述蔗糖在缓冲液中的浓度为1%至10%(w/v)。在一些实施方案中,所述蔗糖在缓冲液中的浓度为1%(w/v)、2%(w/v)、3%(w/v)、4%(w/v)、5%(w/v)、6%(w/v)、7%(w/v)、8%(w/v)、9%(w/v)或10%(w/v),优选为5%(w/v)。
在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至10:1。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为3:1至7:1。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4:1至6:1。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4.5:1至5.5:1。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4.9:1至5.1:1。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4.5:1、4.6:1、4.7:1、4.8:1、4.9:1、5:1、5.1:1、5.2:1、5.3:1、5.4:1、5.5:1、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,对于步骤(ii),更具体地,将含有接头-有效载荷的溶液添加至包含步骤(i)中获得的具有巯基的抗体或其抗原结合片段的缓冲液中,使得所述接头-有效载荷可以与抗体或其抗原结合片段反应。
在一些实施方案中,所述含有接头-有效载荷的溶液中,用于溶解接头-有效载荷的溶剂的实例包括有机溶剂,所述有机溶剂可以是丙酮水溶液(例如50%丙酮水溶液)、乙醇水溶液(例如80%乙醇水溶液)、甲醇水溶液(例如80%甲醇水溶液)、异丙醇水溶液(例如80%异丙醇水溶液)、二甲亚砜水溶液(例如80%二甲亚砜水溶液)、丙酮、二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)或N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)。在一些实施方案中,作为溶剂的所述有机溶剂是丙酮水溶液,优选为50%丙酮水溶液。在一些实施方案中,作为溶剂的所述有机溶剂是丙酮。在一些实施方案中,作为溶剂的所述有机溶剂是DMSO水溶液或DMSO,优选为DMSO。
在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为0℃至10℃。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为2℃至7℃。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为2℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为5.5℃至7℃。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为5℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中的反应温度为2℃、2.5℃、3℃、3.5℃、4℃、4.5℃、5℃、5.5℃、6℃、6.5℃、7℃、7.5℃、8℃、8.5℃、9℃、9.5℃、10℃、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述步骤(ii)中反应的时间为1至10小时。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中反应的时间为1至5小时。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中反应的时间为2至4小时。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中反应的时间为2.5至3小时。在一些实施方案中,所述步骤(ii)中反应的时间为2.1小时、2.2小时、2.3小时、2.4小时、2.5小时、2.6小时、2.7小时、2.8小时、2.9小时、3小时、3.1小时、3.2小时、3.3小时、3.4小时、3.5小时、3.6小时、3.7小时、3.8小时、3.9小时、4小时、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述步骤(ii)中,在添加含有接头-有效载荷的溶液之前,将有机溶剂添加至包含步骤(i)中获得的具有巯基的抗体或其抗原结合片段的缓冲液中并使有机溶剂的浓度为1%至10%(v/v),优选为2%至5%(v/v),更优选为5%(v/v)。在一些实施方案中,所述有机溶剂的浓度为1%(v/v)、2%(v/v)、3%(v/v)、4%(v/v)、5%(v/v)、6%(v/v)、7%(v/v)、8%(v/v)、9%(v/v)或10%(v/v)。在一些实施方案中,所述有机溶剂可以是丙酮、乙醇、甲醇、异丙醇、DMSO、DMF、DMA或NMP,优选为丙酮或DMSO。
在一些实施方案中,可以通过用含巯基试剂来使未反应的接头-有效载荷失活来终止步骤(ii)中的反应。在一些实施方案中,所述含巯基试剂可以是半胱氨酸或N-乙酰半胱氨酸,优选为N-乙酰半胱氨酸。在一些具体的实施方案中,所述步骤(ii)中的反应可以通过如下步骤来终止:将N-乙酰半胱氨酸添加至包含接头-有效载荷的反应体系中,并反应10至40分钟,优选25至40分钟。在一些实施方案中,所述N-乙酰半胱氨酸与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至8:1,优选为4:1。
在一些实施方案中,所述氧化剂可以是脱氢抗坏血酸(DHAA),优选为L-脱氢抗坏血酸。在一些实施方案中,所述DHAA与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至16:1,优选为8:1。
在一些实施方案中,所述步骤(iii)中,步骤(ii)反应结束后进一步加入螯合剂;优选地,在加入氧化剂之前加入螯合剂。本公开使用的螯合剂的实例包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)和二乙烯三胺五乙酸。在一些实施方案中,所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA·Na2)。通过使用螯合剂,可以螯合Ni2+,以便纯化中去除Ni2+。
所述步骤(ii)中的反应可以将所述接头-有效载荷与所述抗体或其抗原结合片段偶联。步骤(iii)之后,从体系中分离纯化抗体药物偶联物,例如可以使用市售的超滤膜等进行分离纯化。作为此超滤膜,可以使用适当的超滤膜,例如可以使用具有1 kDa至100 kDa分子量的超滤膜,优选可以使用具有30 kDa分子量的超滤膜。
在一些具体的实施方案中,所述制备方法包括:
(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐;
(ii) 使接头-有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应,其中所述接头-有效载荷为
;
(iii) 步骤(ii)反应结束后,加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化;
其中,
步骤(iii)中,步骤(ii)反应结束后,在加入氧化剂之前加入螯合剂;并且
制备的抗体药物偶联物的DAR值为3.5-4.5。
在一些具体的实施方案中,所述制备方法包括:
(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐,所述缓冲液为组氨酸缓冲液,优选地,所述缓冲液中进一步添加蔗糖;优选地,所述抗体或其抗原结合片段为抗TROP-2抗体或其抗原结合片段;
(ii) 使接头-有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应,其中所述接头-有效载荷为
;
(iii) 步骤(ii)反应结束后,加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化,所述氧化剂为DHAA;
其中,
步骤(i)中的反应温度为2℃至5.5℃,步骤(i)中反应的时间为12至13小时,步骤(i)中Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至4:1,步骤(i)中还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至3:1、优选2.5:1;
步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4.5:1至5.5:1、优选4.9:1至5.1:1,步骤(ii)中的反应温度为2℃至5.5℃,步骤(ii)中反应的时间为2至3小时,步骤(ii)中在添加含有接头-有效载荷的溶液之前,将丙酮或DMSO添加至包含步骤(i)中获得的具有巯基的抗体或其抗原结合片段的缓冲液中并使有机溶剂的浓度为2%至5%(v/v)、优选5%(v/v);
步骤(iii)中,步骤(ii)反应结束后,在加入氧化剂之前加入螯合剂,所述螯合剂为EDTA·Na2;并且
制备的抗体药物偶联物的DAR值为3.5-4.5,其中D4的含量为55%或更多、优选60%或更多。
本公开的制备方法反应条件温和,成本低,易于操作。
接头-有效载荷(Linker-payload)由细胞毒药物与接头连接形成。抗体或其抗原结合片段连接的细胞毒药物的数量可以变化,使得所述抗体药物偶联物可以是均一的,也可以是异质的,所述异质的即所述抗体药物偶联物包括连接了不同数量细胞毒药物的抗体或其抗原结合片段,例如1分子抗体或其抗原结合片段连接有0个(即不含细胞毒药物)、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个或其他更多个分子细胞毒药物。其中1分子抗体或其抗原结合片段连接有0个、1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个分子细胞毒药物的抗体药物偶联物分别称为D0、D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8。
通过控制上述连接了不同数量细胞毒药物的抗体或其抗原结合片段的比例,可以产生具有不同药物抗体比率(DAR)的抗体药物偶联物。在本文中,“DAR”与“n”可互换使用。应理解,所述DAR或n是抗体药物偶联物中每一分子抗体或其抗原结合片段的细胞毒药物平均连接数。例如,“DAR为4”是指这样的抗体药物偶联物,包含每个抗体或其抗原结合片段分子连接有相同或不同数量的细胞毒药物(例如,每个抗体或其抗原结合片段连接有0、1、2、3、4、5、6、7和/或8个细胞毒药物)的异质混合物,但每一分子抗体或其抗原结合片段的细胞毒药物平均连接数为4。类似地,“DAR为8”是指该抗体药物偶联物中,每一分子抗体或其抗原结合片段的细胞毒药物平均连接数为8。
D8在治疗(例如,抗肿瘤)效果方面是优异的,但在某些情况下在安全性例如毒性方面会引起问题。因此,为了提高安全性,在维持治疗效果的同时,存在使用DAR值小于8(例如DAR为4)的抗体药物偶联物的情况。抗体药物偶联物通常由D0、D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8中的一种或多种组成。因此,可能存在这样的情况,其中,即使不同抗体药物偶联物具有彼此相同的DAR值,如果它们连接的细胞毒药物数量的分布不同,则它们的疗效和/或毒性彼此不同。也就是说具有较高D0和D8含量的DAR为4的抗体药物偶联物,与具有较高D4含量的抗体药物偶联物相比,其治疗效果可能降低,并且可能表现出强烈的毒性。通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物,其DAR值为3-5、或3.5-4.5。在一些实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物,其DAR值为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。在一些实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物中的D4的含量为50%或更多、55%或更多、60%或更多、65%或更多、或70%或更多,或者50%至90%、50%至80%、50%至75%、50%至70%、50%至65%、55%至75%、55%至70%、55%至65%、或60%至75%的范围内。在一些实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物中的D4的含量为55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%或75%。在一些实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物中的D8的含量为5%或更低、2%或更低、或1%或更低,或为0%。因此,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物,其具有优异的安全性。
在一些实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物的结构如下式I所示:
I,
其中,Ab为抗体或其抗原结合片段,n选自3-5,R1选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基,R2选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基;或者,R1和R2与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基;并且,式I中的-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-的3位与Ab连接。在一些实施方案中,所述R1和R2各自独立地选自氢原子或C1-5烷基(优选C1-4烷基,例如C1-3烷基)。在一些实施方案中,所述R1和R2各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中,所述R1和R2为氢原子。在一些实施方案中,式I所示结构中的-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-的3位与Ab二硫键还原后的巯基连接。在一些实施方案中,所述n为3.5-4.5。在一些实施方案中,所述n为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。
在一些具体的实施方案中,通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物的结构如下式I-1所示。
I-1,
其中,Ab为抗体或其抗原结合片段,n选自3-5。在一些实施方案中,式I-1所示结构中的-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-的3位与Ab二硫键还原后的巯基连接。在一些实施方案中,所述n为3.5-4.5。在一些实施方案中,所述n为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。
抗体或其抗原结合片段
本公开所用的抗体或其抗原结合片段包括但不限于单克隆抗体、单特异性抗体、双特异性抗体、多特异性抗体、纳米抗体,或上述抗体的抗原结合片段,所述抗原结合片段包括但不限于Fab片段、F(ab’)2片段、Fd片段、Fv片段、dAb、单链Fv(scFv)分子、单链Fab(scFab)、VHH。所述抗体或其抗原结合片段可以是IgG、IgE、IgM、IgD或IgA中的任一类(class),优选是IgG。另外,所述抗体或其抗原结合片段可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2中的任一亚类(subclass),优选是IgG1或IgG4。所述抗体或其抗原结合片段可以来源于任一物种,包括但不限于人、大鼠、小鼠及兔;当来源于人以外的物种时,优选使用公知的技术,将其嵌合化或人源化。在一些实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。所述抗体或其抗原结合片段可以结合本领域已知的任何疾病相关的抗原。当疾病是肿瘤时,所述抗原可以选自任何肿瘤相关抗原,包括但不限于HER2、HER3、EGFR、ROR1、CLDN18.2、B7-H3、TROP-2、CD20、CD22、CD30、CD33、CD47、CD56、CD70、CD79b、VEGF、VEGFR、MUC1、c-MET、RET、LIV-1、PD-1或PD-L1。在一些实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段为抗HER2抗体或其抗原结合片段、抗HER3抗体或其抗原结合片段、抗EGFR抗体或其抗原结合片段、抗ROR1抗体或其抗原结合片段、抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、抗B7-H3抗体或其抗原结合片段、抗TROP-2抗体或其抗原结合片段、抗CD20抗体或其抗原结合片段、抗CD22抗体或其抗原结合片段、抗CD30抗体或其抗原结合片段、抗CD33抗体或其抗原结合片段、抗CD47抗体或其抗原结合片段、抗CD56抗体或其抗原结合片段、抗CD70抗体或其抗原结合片段、抗CD79b抗体或其抗原结合片段、抗VEGF抗体或其抗原结合片段、抗VEGFR抗体或其抗原结合片段、抗MUC1抗体或其抗原结合片段、抗c-MET抗体或其抗原结合片段、抗RET抗体或其抗原结合片段、抗LIV-1抗体或其抗原结合片段、抗PD-1抗体或其抗原结合片段或抗PD-L1抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含:
(1) SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的HCDR1,SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的HCDR2,SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的HCDR3,SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的LCDR1,SEQID NO: 5所示氨基酸序列的LCDR2,和SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的LCDR3;
(2) 氨基酸序列与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链可变区,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链可变区,且包含上述(1)中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3;
(3) 包含SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列的重链可变区,和包含SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列的轻链可变区;
(4) 氨基酸序列与SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链,且包含上述(1)中所述的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3;或
(5) 包含SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列的重链,和包含SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列的轻链。
在一些实施方案中,抗TROP-2抗体或其抗原结合片段的重链恒定区的C末端赖氨酸可以是存在或缺失的,重链恒定区的C末端赖氨酸的缺失通常在重组表达过程中发生。在一些实施方案中,SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列的C末端赖氨酸是缺失的,如SEQ ID NO:11所示。
在一些实施方案中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 9所示,轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示。在一些实施方案中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 11所示,轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO: 10所示。
本公开的示例性的抗TROP-2抗体或其抗原结合片段的序列信息如下表S1所示。
表S1. 抗TROP-2抗体或其抗原结合片段的序列信息
产生具有巯基的抗体或其抗原结合片段的方法
本公开还提供了一种产生具有巯基的抗体或其抗原结合片段的方法,其包括:使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键。
在一些实施方案中,所述产生具有巯基的抗体或其抗原结合片段的方法中,可加入镍盐,所述镍盐没有特别限制,只要它们在反应溶液中可溶并且能够释放Ni2+到反应溶液中。本公开使用的镍盐的实例包括但不限于NiCl2、Ni(NO3)2、NiSO4、Ni(CH3COO)2、NiI2、NiBr2、Ni(HCOO)2或Ni(BF4)2。在一些实施方案中,所述镍盐为NiSO4。
在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至4:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至2.5:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.8:1至2.2:1。在一些实施方案中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1.5:1、1.6:1、1.7:1、1.8:1、1.9:1、2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述反应温度为0℃至10℃。在一些实施方案中,所述反应温度为2℃至7℃。在一些实施方案中,所述反应温度为2℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述反应温度为5.5℃至7℃。在一些实施方案中,所述反应温度为5℃至5.5℃。在一些实施方案中,所述反应温度为2℃、2.5℃、3℃、3.5℃、4℃、4.5℃、5℃、5.5℃、6℃、6.5℃、7℃、7.5℃、8℃、8.5℃、9℃、9.5℃、10℃、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至3:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2.4:1至2.6:1。在一些实施方案中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1、2.1:1、2.2:1、2.3:1、2.4:1、2.5:1、2.6:1、2.7:1、2.8:1、2.9:1、3:1、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述还原剂可以是三(2-羧基乙基)膦或其盐、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇。在一些实施方案中所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦或其盐,优选为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐。
在一些实施方案中,所述缓冲液可以是HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)缓冲液、组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液为组氨酸缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液为组氨酸-盐酸缓冲液。在一些实施方案中,所述缓冲液的浓度为1 mM至30 mM,例如5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM或30mM,优选为20 mM。
在一些实施方案中,所述反应的时间为10至20小时。在一些实施方案中,所述反应的时间为10至14小时。在一些实施方案中,所述反应的时间为12至13小时。在一些实施方案中,所述反应的时间为10小时、10.5小时、11小时、11.5小时、12小时、12.5小时、13小时、13.5小时、14小时、14.5小时、15小时、15.5小时、16小时、16.5小时、17小时、17.5小时、18小时、18.5小时、19小时、19.5小时、20小时、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述反应的pH为5至9。在一些实施方案中,所述反应的pH为6至8。在一些实施方案中,所述反应的pH为6.5至7.5。在一些实施方案中,所述反应的pH为6.9至7.2。在一些实施方案中,所述反应的pH为6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、或上述任意值形成的范围。
在一些实施方案中,所述具有巯基的抗体或其抗原结合片段用于制备抗体药物偶联物,所述抗体药物偶联物的DAR值为3-5、或3.5-4.5。在一些实施方案中,所述DAR值为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。
在一些实施方案中,所述具有巯基的抗体或其抗原结合片段用于制备抗体药物偶联物,所述抗体药物偶联物中的D4的含量为50%或更多、55%或更多、60%或更多、65%或更多、或70%或更多,或者50%至90%、50%至80%、50%至75%、50%至70%、50%至65%、55%至75%、55%至70%、55%至65%、或60%至75%的范围内。在一些实施方案中,所述抗体药物偶联物中的D4的含量为55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%或75%。在一些实施方案中,所述抗体药物偶联物中的D8的含量为5%或更低、2%或更低、或1%或更低,或为0%。
细胞毒药物
本公开使用的细胞毒药物没有特别限制,只要其具有抗肿瘤作用并且具有能够与本公开的接头连接的取代基或结构。
本公开使用的细胞毒药物例如可以是生物碱类、抗代谢类、抗肿瘤抗生素类、烷化剂类及铂类等。在一些实施方案中,所述细胞毒药物为微管蛋白抑制剂类细胞毒药物或者作用于DNA的细胞毒药物。在一些实施方案中,所述微管蛋白抑制剂类细胞毒药物包括但不限于美登素(Maytansine)类、奥瑞他汀(Auristatin)类和、海兔毒素(Dolastatin)、微管溶素(Tubulysins)、隐粘菌素(Cryptomycins)、和艾日布林(Eribulin)或其衍生物。在一些实施方案中,所述作用于DNA的细胞毒药物包括但不限于卡奇霉素(Calicheamicin)类、倍癌霉素(Duocarmycin)类、安曲霉素类衍生物PBD(Pyrrolobenzodiazepine)、拓扑异构酶I抑制剂类和拓扑异构酶II抑制剂类。
在一些具体实施方案中,所述细胞毒药物为微管蛋白抑制剂。
在一些具体实施方案中,所述细胞毒药物为艾日布林或其衍生物。
接头-有效载荷
本公开使用的细胞毒药物可经由接头连接至抗体或其抗原结合片段。本公开使用的接头优选地具有N-取代的马来酰亚胺基。
本公开使用的接头-有效载荷没有特别限制,只要其为能够与通过还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键而产生的巯基反应的化合物。本公开使用的接头-有效载荷优选地为具有N-取代的马来酰亚胺基的接头-有效载荷,其可以与通过还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键而产生的巯基反应,从而连接于抗体或其抗原结合片段。本公开使用的接头-有效载荷更优选地为下式II所示结构的化合物:
II,
其中,R1选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基,R2选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基;或者,R1和R2与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。在一些实施方案中,所述R1和R2各自独立地选自氢原子或C1-5烷基(优选C1-4烷基,例如C1-3烷基)。在一些实施方案中,所述R1与R2各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中,所述R1和R2为氢原子。
在一些具体实施方案中,所述接头-有效载荷为下式II-1所示结构的化合物:
II-1。
应理解,本公开使用的接头-有效载荷不限于上述化合物,并且所有类型的接头-有效载荷均可以应用于本公开的制备方法,只要它们具有用于与抗体或其抗原结合片段的链间二硫键还原后产生的巯基反应的官能团。
药物组合物
在一个方面,本公开提供了一种药物组合物,其包含通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物,或所述抗体药物偶联物的异构体、药学上可接受的盐、或所述抗体药物偶联物、其异构体、其药学上可接受的盐的溶剂化物。在一些实施方案中,本公开的药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料。药学上可接受的辅料包括,例如,赋形剂、稀释剂、包封材料、填充剂、缓冲剂或其他试剂。
用途
本公开还提供了通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物的用途。
在一个方面,本公开提供了通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物在制备用于治疗表达所述抗体或其抗原结合片段结合的抗原的疾病的药物中的用途。在一些实施方案中,本公开提供了通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。在一些实施方案中,本公开提供了通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物在制备用于治疗自身免疫性疾病的药物中的用途。
在一个方面,本公开提供了一种治疗表达所述抗体或其抗原结合片段结合的抗原的疾病的方法,包括向有需要的受试者施用治疗有效量的通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物。在一些实施方案中,本公开提供了一种治疗肿瘤的方法,包括向有需要的受试者施用治疗有效量的通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物。本公开提供了一种治疗自身免疫性疾病的方法,包括向有需要的受试者施用治疗有效量的通过本公开的制备方法产生的抗体药物偶联物或所述药物组合物。
在一些实施方案中,所述肿瘤为表达TROP-2的肿瘤。
在一些实施方案中,所述肿瘤为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、尿道癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、子宫癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
解释和定义
除非另有说明,本公开中所用的下列术语具有下列含义。一个特定的术语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的,而应该按照本领域普通的含义去理解。当本文中出现商品名时,意在指代其对应的商品或其活性成分。
术语“被取代”是指特定原子上的任意一个或多个氢原子被取代基取代,只要特定原子的价态是正常的并且取代后的化合物是稳定的。当取代基为氧代(即=O)时,意味着两个氢原子被取代,氧代不会发生在芳香基上。“任选被取代的”是指可以被取代,也可以不被取代,除非另有规定,取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的。
当任何变量(例如R)在化合物的组成或结构中出现一次以上时,其在每一种情况下的定义都是独立的。因此,例如,如果一个基团被2个R所取代,则每个R都有独立的选项。
术语“巯基”指-SH基团。
如本文所用,“-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-”的结构如下式:
。
如本文所用,“N-取代的马来酰亚胺基”的结构如下式:
。
除非另有说明,用楔形实线键()和楔形虚线键(/>)表示一个立体中心的绝对构型。
除非另有规定,当某一基团具有可连接位点时,该位点与其他基团的连接可以用波浪线()表示。
如本文所用,母体化合物分子中的原子或原子团被其它原子或原子团取代形成的化合物称为母体化合物的“衍生物”。
本公开的化合物可以存在特定的几何异构体或立体异构体形式。本公开设想所有的这类化合物,包括顺式和反式异构体、左旋体和右旋体、(R)-和(S)-对映体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体,及其外消旋混合物和其他混合物,例如对映异构体或非对映体富集的混合物,所有这些混合物都属于本公开的范围之内。烷基等取代基中可存在另外的不对称碳原子。所有这些异构体以及它们的混合物,均包括在本公开的范围之内。
除非另有说明,术语“顺反异构体”或者“几何异构体”系由因双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而引起。
除非另有说明,术语“对映异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
除非另有说明,术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心,并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
本公开的化合物和中间体还可以以不同的互变异构体形式存在,并且所有这样的形式包含于本公开的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构体形式”是指可经由低能垒互变的不同能量的结构异构体。例如,质子互变异构体(也称为质子转移互变异构体)包括经由质子迁移的互变,如酮-烯醇及亚胺-烯胺异构化。质子互变异构体的具体实例是咪唑部分,其中质子可在两个环氮间迁移。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组的互变。
“组氨酸缓冲剂”是包含组氨酸根离子的缓冲液。组氨酸缓冲液的实例包括组氨酸-盐酸缓冲液、组氨酸-醋酸缓冲液、组氨酸-磷酸缓冲液等。组氨酸-盐酸缓冲液可以采用组氨酸(例如,L-组氨酸)来制备,并用盐酸对pH进一步调节;或者采用组氨酸(例如,L-组氨酸)和盐酸组氨酸或其水合物(例如,一水合盐酸组氨酸)来制备。组氨酸-醋酸缓冲液可以采用组氨酸(例如,L-组氨酸)来制备,并用醋酸对pH进一步调节。组氨酸-磷酸缓冲液可以采用组氨酸(例如,L-组氨酸)来制备,并用磷酸对pH进一步调节。
术语“治疗”意为将本公开所述化合物或药物组合物进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状,且包括但不限于:
(i) 预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现,特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态,但尚未被诊断为已患有该疾病状态时;
(ii) 抑制疾病或疾病状态,即遏制其发展;
(iii) 缓解疾病或疾病状态,即使该疾病或疾病状态消退;
(iv) 降低疾病或疾病状态的任何直接或间接病理学后果。
术语“治疗有效量”意指(i) 治疗或预防特定疾病、病况或障碍,(ii) 减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状,或(iii) 预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本公开化合物的用量。构成“治疗有效量”的本公开化合物或药物组合物的量可根据一些因素而变化,例如取决于该化合物或药物组合物及其在个体中引发所需应答的能力,疾病状态及其严重性,给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄、性别和体重。治疗有效量也可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
术语“药学上可接受的”,是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言,它们在可靠的医学判断的范围之内,适用于与人类和动物的组织接触使用,而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症,与合理的利益/风险比相称。
术语“药学上可接受的盐”是指化合物(例如本公开的抗体药物偶联物)的盐,这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性,且具有应有的生物活性,例如,可以是金属盐、铵盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或者酸性氨基酸形成的盐等。
术语“辅料(excipient)”指活性成分(例如,本公开的抗体药物偶联物)以外的任何成分。辅料的选择,在很大程度上将取决于诸如特定的施用方式、赋形剂对溶解度和稳定性的功效以及剂型的性质等因素。
术语“溶剂化物”是指化合物与溶剂分子缔合形成的物质。
术语“抗体”以最广泛的含义使用,包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体和多特异性抗体(例如双特异性抗体、三特异性抗体)的多种抗体结构,只要它们显示希望的抗原结合活性。
抗体的“抗原结合片段”是指抗体的一个或多个片段,其保留特异性结合抗原(例如,TROP-2蛋白)的功能。已证实,抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”中的实例包括:(i) Fab片段:由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段;(ii) F(ab’)2片段,包含在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段;(iii) 由VH和CH1结构域组成的Fd片段;(iv) 由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段;(v) 由VH结构域组成的dAb片段(参见Wardet al., Nature. 341:544-546(1989));以及(vi) 纳米抗体,一种包含单个可变结构域和两个恒定结构域的抗体。此外,尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同基因编码,但可以采用重组的方法通过接头将VH和VL连接成单蛋白链,其中VL和VH配对形成单价分子称单链Fv(scFv)(参见Birdet al.,Science.242:423-426(1988);Huston et al., Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883(1988)),这些单链抗体也涵盖在术语抗原结合片段中。这些抗体片段可以由本领域技术人员通过已知的常规技术获得,且片段可以通过与全长抗体相同的方法进行功能筛选。
本公开的抗体或其抗原结合片段可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体种类。在一些实施方案中,本公开的抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型。本公开的抗体或其抗原结合片段可以衍生自任何物种,包括但不限于小鼠、大鼠、兔、非人灵长类动物(如黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴、猕猴)、美洲驼和人。本公开的抗体或其抗原结合片段可以是鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
术语“小鼠抗体”或“鼠源抗体”是指可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外,如果抗体包含恒定区,则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本公开的鼠源抗体可包括不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如,通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变引入的突变),但“小鼠抗体”或“鼠源抗体”不包括在小鼠骨架序列中插入源自其他哺乳动物种系CDR序列的抗体。
“嵌合抗体”是将鼠源抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体,可以减轻鼠源抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体,首先要建立分泌鼠源特异性单抗的杂交瘤,然后从杂交瘤细胞中克隆可变区基因,再根据需要克隆人抗体的恒定区基因,将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中,最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体。
“人源化抗体”是下述抗体:所述抗体含有衍生自非人抗体的互补决定区(CDR)和衍生自人抗体的骨架区以及恒定区。
术语“CDR”(互补决定区),也称为“高变区”。天然四链抗体通常包含六个CDR,三个在重链可变区中,三个在轻链可变区中。
术语“可变区”是指抗体的轻链或重链的N端结构域限定的约100至110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的结构域。术语轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)分别指这些轻链结构域和重链结构域。
术语“同一性”,也称一致性。氨基酸序列的“同一性百分数(%)”是指将待比对序列与本文中所示的具体氨基酸序列进行比对并且如有必要的话为达到最大序列同一性百分数而引入空位后,并且不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分时,待比对序列中与本文中所示的具体氨基酸序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基百分数。同一性的氨基酸序列比对可以采用本领域范围内的多种方式进行,例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于比对序列的适宜参数,包括在比较序列的全长里获得最大比对需要的任何算法。
术语“受试者”包括任何人类或非人动物。术语“非人动物”包括所有的脊椎动物,例如哺乳动物和非哺乳动物,诸如非人灵长类、绵羊、犬、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。优选地,根据本公开的受试者是人。除非标明,术语“患者”或“受试者”可以互换使用。“有需要的受试者”包括那些已经患有疾病或病状的受试者,处于发展出疾病或病状的风险中的受试者,以及可能患疾病或病状并且其目的是预防、延迟或减弱疾病或病状的受试者。
如本文所用,“约”表示在本领域普通技术人员判定的对特定值可以接受的误差范围内,其部分取决于如何测量或测定该值,即测量系统的限制。例如,“约”按照本领域实践可表示1倍或超过1倍标准偏差以内。或者,“约”可以表示多至±5%的范围,例如在所给定的具体数值范围±2%范围内、±1%范围内或±0.5%范围内波动。当本公开范围中给出特定值时,除非另有说明,“约”的含义应认为是在该特定值的可接受的误差范围内。在本文中,除非另有说明,步骤参数或条件的值默认均由“约”修饰。
术语“包括”、“含有”和“包含”(comprise、comprises或comprising)及其等同物(例如,contain、contains、containing、include、includes和including)应理解为“包括但不限于”,意味着除所列出的要素、组分和步骤外,还可涵盖其它未指明的要素、组分和步骤。
在本文中,除非上下文另有明确规定,否则单数术语涵盖复数指代物,反之亦然。
具体实施方式
本公开还提供了以下一些具体的实施方案,但本公开的保护范围不限于此:
实施方案1.一种抗体药物偶联物的制备方法,其包括:(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键;(ii) 使接头-有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应;(iii) 步骤(ii)反应结束后,加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化。
实施方案2.根据实施方案1所述的制备方法,其中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。
实施方案3.根据实施方案1或2所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的DAR值为3-5。
实施方案4.根据实施方案3所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的DAR值为3.5-4.5。
实施方案5.根据权利要求4所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的DAR值为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。
实施方案6.根据实施方案1-5中任一项所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为50%或更多、55%或更多、60%或更多、65%或更多、或70%或更多。
实施方案7.根据实施方案1-5中任一项所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为50%至90%的范围内。
实施方案8.根据实施方案7所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为50%至80%的范围内。
实施方案9.根据实施方案8所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为55%至75%的范围内。
实施方案10.根据实施方案9所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为55%至65%、60%至75%、或60%至70%的范围内。
实施方案11.根据实施方案1-10中任一项所述的制备方法,其中,步骤(i)中的反应温度为0℃至10℃。
实施方案12.根据实施方案11所述的制备方法,其中,步骤(i)中的反应温度为2℃至7℃。
实施方案13.根据实施方案12所述的制备方法,其中,步骤(i)中的反应温度为2℃至5.5℃。
实施方案14.根据实施方案12所述的制备方法,其中,步骤(i)中的反应温度为5.5℃至7℃。
实施方案15.根据实施方案1-14中任一项所述的制备方法,其中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1、2:1至3:1、或2.4:1至2.5:1。
实施方案16.根据实施方案1-15中任一项所述的制备方法,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦或其盐、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇,优选为三(2-羧基乙基)膦或其盐。
实施方案17.根据实施方案16所述的制备方法,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐。
实施方案18.根据实施方案1-17中任一项所述的制备方法,其中,所述缓冲液为HEPES缓冲液、组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液,优选为组氨酸缓冲液。
实施方案19.根据实施方案1-18中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(i)中反应的时间为10至20小时、或10至14小时。
实施方案20.根据实施方案1-19中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(ii)中的反应温度为0℃至10℃、2℃至7℃、2℃至5.5℃、或5.5℃至7℃。
实施方案21.根据实施方案1-20中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至10:1、3:1至7:1、4:1至6:1、4.5:1至5.5:1、或4.9:1至5.1:1。
实施方案22.根据实施方案1-21中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(ii)中反应的时间为1至10小时、2至4小时、或2.5至3小时。
实施方案23.根据实施方案1-22中任一项所述的制备方法,其中,所述抗体或其抗原结合片段为抗TROP-2抗体或其抗原结合片段、抗HER2抗体或其抗原结合片段、抗HER3抗体或其抗原结合片段、抗ROR1抗体或其抗原结合片段、抗B7-H3抗体或其抗原结合片段、抗CD79b抗体或其抗原结合片段、抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、抗c-MET抗体或其抗原结合片段或抗LIV-1抗体或其抗原结合片段。
实施方案24.根据实施方案23所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的HCDR1,SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的HCDR2,SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的HCDR3,SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的LCDR1,SEQID NO: 5所示氨基酸序列的LCDR2,和SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的LCDR3。
实施方案25.根据实施方案24所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链可变区,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链可变区。
实施方案26.根据实施方案24或25所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 9或11所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链。
实施方案27.根据实施方案1-26中任一项所述的制备方法,其中,所述接头-有效载荷具有N-取代的马来酰亚胺基。
实施方案28.根据实施方案27所述的制备方法,其中,所述接头-有效载荷的结构如下式II所示:II,其中,R1选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基,R2选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基;或者,R1和R2与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基。
实施方案29.根据实施方案28所述的制备方法,其中,所述R1与R2各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基;优选地,R1和R2为氢原子。
实施方案30.通过实施方案1-29中任一项所述的制备方法产生的抗体药物偶联物,其中所述抗体药物偶联物的DAR值为3-5、或3.5-4.5,并且D4的含量为50%或更多、55%或更多、60%或更多、65%或更多、或70%或更多。
实施方案31.根据实施方案30所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为50%至90%的范围内。
实施方案32.根据实施方案31所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为50%至80%的范围内。
实施方案33.根据实施方案32所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为55%至75%的范围内。
实施方案34.根据实施方案33所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为55%至65%、60%至75%、或60%至70%的范围内。
实施方案35.根据实施方案30-34中任一项所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体或其抗原结合片段为抗TROP-2抗体或其抗原结合片段、抗HER2抗体或其抗原结合片段、抗HER3抗体或其抗原结合片段、抗ROR1抗体或其抗原结合片段、抗B7-H3抗体或其抗原结合片段、抗CD79b抗体或其抗原结合片段、抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、抗c-MET抗体或其抗原结合片段或抗LIV-1抗体或其抗原结合片段。
实施方案36.根据实施方案35所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的HCDR1,SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的HCDR2,SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的HCDR3,SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的LCDR1,SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的LCDR2,和SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的LCDR3。
实施方案37.根据实施方案36所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链可变区,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链可变区。
实施方案38.根据实施方案36或37所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 9或11所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链。
实施方案39.根据实施方案30-38中任一项所述的抗体药物偶联物,其中,所述抗体药物偶联物的结构如下式I所示:I,其中,Ab为抗体或其抗原结合片段,n选自3-5,优选为3.5-4.5,R1选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基,R2选自氢原子、任选被取代的C1-6烷基、任选被取代的C3-7环烷基、任选被取代的3至7元杂环基、任选被取代的C6-10芳基、任选被取代的5至12元杂芳基;或者,R1和R2与其相连接的原子一起形成任选被取代的5至8元的杂环基;并且,式I中的-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-的3位与Ab连接。
实施方案40.根据实施方案39所述的抗体药物偶联物,其中,所述R1与R2各自独立地选自氢原子、甲基、乙基、丙基或异丙基;优选地,R1和R2为氢原子。
实施方案41.一种药物组合物,其包含实施方案30-40中任一项所述的抗体药物偶联物,或所述抗体药物偶联物的异构体、药学上可接受的盐、或所述抗体药物偶联物、其异构体、其药学上可接受的盐的溶剂化物;任选地,所述药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料。
实施方案42.实施方案30-40中任一项所述的抗体药物偶联物或实施方案41所述的药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的用途。
实施方案43.根据实施方案42所述的用途,其中,所述肿瘤为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、尿道癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、子宫癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
实施方案44.一种治疗肿瘤的方法,包括向有需要的受试者施用治疗有效量的实施方案30-40中任一项所述的抗体药物偶联物或实施方案41所述的药物组合物。
实施方案45.根据实施方案44所述的方法,其中,所述肿瘤为胆道癌、癌肉瘤、食管癌、胃食管结合部癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、头颈癌、结直肠癌、肾癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫癌、黑色素瘤、咽癌、口腔癌、皮肤癌、肺癌、尿道癌、前列腺癌、膀胱癌、胃肠道间质瘤、鳞状细胞癌、腹膜癌、肝癌、子宫癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、阴茎癌、白血病、恶性淋巴瘤、浆细胞瘤或骨髓瘤。
实施方案46.一种产生具有巯基的抗体或其抗原结合片段的方法,其包括:使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键;产生的具有巯基的抗体或其抗原结合片段用于制备抗体药物偶联物,所述抗体药物偶联物的DAR值为3-5、或3.5-4.5,并且D4的含量为50%或更多、55%或更多、60%或更多、65%或更多、或70%或更多。
实施方案47.根据实施方案46所述的方法,其中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。
实施方案48.根据实施方案46或47所述的方法,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为50%至90%的范围内。
实施方案49.根据实施方案48所述的方法,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为50%至80%的范围内。
实施方案50.根据实施方案49所述的方法,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为55%至75%的范围内。
实施方案51.根据实施方案50所述的方法,其中,所述抗体药物偶联物的D4的含量为55%至65%、60%至75%、或60%至70%的范围内。
实施方案52.根据实施方案47-51中任一项所述的方法,其中,所述反应温度为0℃至10℃。
实施方案53.根据实施方案52所述的方法,其中,所述反应温度为2℃至7℃。
实施方案54.根据实施方案53所述的方法,其中,所述反应温度为2℃至5.5℃。
实施方案55.根据实施方案53所述的方法,其中,所述反应温度为5.5℃至7℃。
实施方案56.根据实施方案46-55中任一项所述的方法,其中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1、2:1至3:1、或2.4:1至2.5:1。
实施方案57.根据实施方案46-56中任一项所述的方法,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦或其盐、二硫苏糖醇或2-巯基乙醇,优选为三(2-羧基乙基)膦或其盐。
实施方案58.根据实施方案57所述的方法,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐。
实施方案59.根据实施方案46-58中任一项所述的方法,其中,所述缓冲液为HEPES缓冲液、组氨酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或乙酸盐缓冲液,优选为组氨酸缓冲液。
实施方案60.根据实施方案46-59中任一项所述的方法,其中,所述反应的时间为10至20小时、或10至14小时。
实施方案61.根据实施方案46-60中任一项所述的方法,其中,所述抗体或其抗原结合片段为抗TROP-2抗体或其抗原结合片段、抗HER2抗体或其抗原结合片段、抗HER3抗体或其抗原结合片段、抗ROR1抗体或其抗原结合片段、抗B7-H3抗体或其抗原结合片段、抗CD79b抗体或其抗原结合片段、抗CLDN18.2抗体或其抗原结合片段、抗c-MET抗体或其抗原结合片段或抗LIV-1抗体或其抗原结合片段。
实施方案62.根据实施方案61所述的方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的HCDR1,SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的HCDR2,SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的HCDR3,SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的LCDR1,SEQ IDNO: 5所示氨基酸序列的LCDR2,和SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的LCDR3。
实施方案63.根据实施方案62所述的方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链可变区,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链可变区。
实施方案64.根据实施方案62或63所述的方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 9或11所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的重链,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的轻链。
为清楚起见,进一步用实施例来阐述本公开,但是实施例并非限制本公开的范围。本领域的技术人员将容易地识别多种非关键性参数,所述参数可发生改变或修改以产生基本上类似的结果。
实施例所用的抗TROP-2抗体hz-Ab35-1.3及其制备方法来源于专利申请文件WO2023104080,其重链氨基酸序列如WO2023104080中SEQ ID NO: 70所示,轻链氨基酸序列如WO2023104080中SEQ ID NO: 71所示。
实施例所用的接头-有效载荷MC-GGFG-艾日布林及其制备方法来源于专利申请文件专利申请文件WO2023041006,其结构如本公开中的式II-1所示。
实施例1:抗体药物偶联物的制备
试剂:
抗体为hz-Ab35-1.3,接头-有效载荷(Linker-payload)为MC-GGFG-艾日布林。
实验流程:
(1)用20 mM组氨酸-盐酸缓冲液(含L-组氨酸1.43 mg/mL,盐酸L-组氨酸一水合物2.27 mg/mL,pH 6.0)调节抗体hz-Ab35-1.3的浓度至约8-10 g/L,0.3 M磷酸氢二钠水溶液调节pH至约7,向其中加入蔗糖,使蔗糖的浓度为5%(w/v)。调节上述溶液的温度至2~5.5℃,加入10 mM的NiSO4,使Ni离子与抗体的物质的量之比为1.8:1~4:1;加入10 mM的TCEP·HCl(三(2-羧基乙基)膦盐酸盐)水溶液,使TCEP·HCl与抗体的物质的量之比为2.5:1,在2~5.5℃、10~50转/分钟搅拌的条件下避光反应12~13小时。
(2)加入丙酮,使其终浓度为5%(v/v),再加入丙酮溶解的10 g/L的Linker-payload(MC-GGFG-Eribulin),使Linker-payload与抗体的物质的量之比为4.9:1~5.1:1,在2~5.5℃、30~50转/分钟搅拌的条件下避光反应2.5~3小时。
(3)加入10 mM的N-乙酰半胱氨酸,使其与抗体的物质的量之比为4:1,反应25~40分钟;之后加入0.1 M的EDTA·Na2,使其与抗体的物质的量之比为4:1,再加入10 mM的L-脱氢抗坏血酸,使其与抗体的比例为8:1,在2~5.5℃、30~50转/分钟的搅拌的条件下,避光反应25~40分钟。之后采用30 kDa超滤膜将该反应后的溶液置换至20 mM组氨酸-盐酸缓冲液(pH 6.0)中,得到抗体药物偶联物。
根据表1和表2的具体的条件,合成抗体药物偶联物ADC1-ADC7,结构如下:
,
通过实施例2的方法,测得ADC1-ADC7每一分子抗体的细胞毒药物数量分布及平均连接数(n),具体结果如表3所示。
表1. 步骤(1)的具体参数
表2. 步骤(2)的具体参数
表3. 含有D0-D8的峰面积百分比及ADC的DAR值(即n)
注:D1、D7和D8的峰面积百分比均为0%。
实施例2:抗体药物偶联物的DAR值测定
采用疏水作用层析(HIC)方法测定抗体药物偶联物的DAR值,利用中性高盐流动相提高蛋白分子的疏水性质,从而和色谱柱中疏水的键合相结合,而后通过逐步降低盐浓度,并逐步增大异丙醇的比例洗脱物质,疏水性小的先洗脱,疏水性大的后洗脱。
采用键合丁基的无孔PS/DVB填料对抗体药物偶联物各组分进行分离。色谱柱规格为Sepax,Proteomix HIC Butyl-NP5(5 µm,4.6 mm × 100 mm),柱温25°C。流动相A为1.5M硫酸铵-50 mM磷酸盐缓冲液(pH 7.0):异丙醇 = 95:5(v/v)(称取硫酸铵188.30 g、二水合磷酸二氢钠7.41 g,加入750 mL超纯水,搅拌至充分溶解,用50%氢氧化钠溶液调节pH为7.0,加超纯水至950 mL后,加异丙醇50 mL,混匀后经0.22 µm滤膜过滤即得)。流动相B为50mM磷酸盐缓冲液(pH7.0):异丙醇 = 80:20(v/v)(称取二水合磷酸二氢钠6.24 g,加入750mL超纯水,搅拌至充分溶解,用50%氢氧化钠溶液调节pH为7.0,加超纯水至800 mL后,加异丙醇200 mL,混匀后经0.22 µm滤膜过滤即得)。用超纯水将ADC样品稀释至每1 mL中约含蛋白2.0 mg作为供试品溶液,进样20 μg蛋白,在214 nm波长处检测。流速为1.0 mL/min,梯度洗脱参数如下表4。
表4. 梯度洗脱参数
数据处理,采用面积归一化法对结果进行定量分析。分别计算D0、D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7和D8的峰面积百分比,并计算DAR值结果。计算公式为:DAR值=(D0峰面积百分比×0+D1峰面积百分比×1+D2峰面积百分比×2+D3峰面积百分比×3+D4峰面积百分比×4+D5峰面积百分比×5+D6峰面积百分比×6+D7峰面积百分比×7+D8峰面积百分比×8)/100%。
为了描述和公开的目的、以引用的方式将所有的专利、专利申请和其它已确定的出版物在此明确地并入本文。这些出版物仅因为它们的公开早于本公开的申请日而提供。所有关于这些文件的日期的声明或这些文件的内容的表述是基于申请者可得的信息、并且不构成任何关于这些文件的日期或这些文件的内容的正确性的承认。而且、在任何国家、在本文中对这些出版物的任何引用并不构成关于该出版物成为本领域的公知常识的一部分的认可。
虽然、上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本公开作了详尽的描述、但在本公开基础上、可以对之作一些修改或改进、这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此、在不偏离本公开精神的基础上所做的这些修改或改进、均属于本公开要求保护的范围。
Claims (14)
1.一种抗体药物偶联物的制备方法,其包括:
(i) 使抗体或其抗原结合片段与还原剂在Ni2+的存在下在缓冲液中反应,以还原抗体或其抗原结合片段的链间二硫键,其中,所述还原剂为三(2-羧基乙基)膦盐酸盐;
(ii) 使接头-有效载荷与步骤(i)中得到的具有巯基的抗体或其抗原结合片段反应,其中所述接头-有效载荷为
;
(iii) 步骤(ii)反应结束后,加入氧化剂以将抗体或其抗原结合片段中未反应的巯基氧化;
其中,
步骤(iii)中,步骤(ii)反应结束后,在加入氧化剂之前加入螯合剂;并且
制备的抗体药物偶联物的DAR值为3.5-4.5。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述Ni2+与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为1:1至4:1。
3.根据权利要求1所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的DAR值为3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4、4.1、4.2、4.3、4.4或4.5。
4.根据权利要求1所述的制备方法,其中,产生的抗体药物偶联物的D4的含量为55%至75%的范围内。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述还原剂与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为2:1至3:1。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述缓冲液为组氨酸缓冲液。
7.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述氧化剂为DHAA。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(i)中的反应温度为2℃至5.5℃,步骤(i)中反应的时间为10至20小时。
9.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(ii)中接头-有效载荷与抗体或其抗原结合片段的物质的量之比为4:1至6:1。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述步骤(ii)中的反应温度为2℃至5.5℃,步骤(ii)中反应的时间为1至10小时。
11.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其中,所述抗体或其抗原结合片段为抗TROP-2抗体或其抗原结合片段。
12.根据权利要求11所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的HCDR1,SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的HCDR2,SEQ IDNO: 3所示氨基酸序列的HCDR3,SEQ ID NO: 4所示氨基酸序列的LCDR1,SEQ ID NO: 5所示氨基酸序列的LCDR2,和SEQ ID NO: 6所示氨基酸序列的LCDR3。
13.根据权利要求12所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列具有至少85%同一性的重链可变区,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列具有至少85%同一性的轻链可变区。
14.根据权利要求12或13所述的制备方法,其中,所述抗TROP-2抗体或其抗原结合片段包含氨基酸序列与SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列具有至少85%同一性的重链,和氨基酸序列与SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列具有至少85%同一性的轻链。
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Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106132991A (zh) * | 2014-01-31 | 2016-11-16 | 诺华股份有限公司 | 针对tim‑3的抗体分子及其用途 |
CN108712911A (zh) * | 2015-12-30 | 2018-10-26 | 科达制药股份有限公司 | 抗体及其缀合物 |
CN108779127A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-09 | 里珍纳龙药品有限公司 | 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法 |
CN111164208A (zh) * | 2017-09-29 | 2020-05-15 | 第一三共株式会社 | 抗体-吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物 |
CN113423730A (zh) * | 2019-02-15 | 2021-09-21 | 上海药明生物技术有限公司 | 用于制备具有改善的同质性的抗体-药物缀合物的方法 |
WO2022078524A2 (en) * | 2021-11-03 | 2022-04-21 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Specific conjugation of an antibody |
CN115702008A (zh) * | 2020-08-13 | 2023-02-14 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗体药物偶联物 |
CN115957339A (zh) * | 2021-09-16 | 2023-04-14 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗体药物偶联物及其组合物和用途 |
WO2023104080A1 (zh) * | 2021-12-07 | 2023-06-15 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗trop-2抗体或其抗原结合片段 |
-
2023
- 2023-11-07 CN CN202311474711.8A patent/CN117257977A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106132991A (zh) * | 2014-01-31 | 2016-11-16 | 诺华股份有限公司 | 针对tim‑3的抗体分子及其用途 |
CN108712911A (zh) * | 2015-12-30 | 2018-10-26 | 科达制药股份有限公司 | 抗体及其缀合物 |
CN108779127A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-09 | 里珍纳龙药品有限公司 | 美登素类化合物衍生物、其偶联物和使用方法 |
CN111164208A (zh) * | 2017-09-29 | 2020-05-15 | 第一三共株式会社 | 抗体-吡咯并苯并二氮杂卓衍生物偶联物 |
CN113423730A (zh) * | 2019-02-15 | 2021-09-21 | 上海药明生物技术有限公司 | 用于制备具有改善的同质性的抗体-药物缀合物的方法 |
CN115702008A (zh) * | 2020-08-13 | 2023-02-14 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗体药物偶联物 |
CN115957339A (zh) * | 2021-09-16 | 2023-04-14 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗体药物偶联物及其组合物和用途 |
WO2022078524A2 (en) * | 2021-11-03 | 2022-04-21 | Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. | Specific conjugation of an antibody |
WO2023104080A1 (zh) * | 2021-12-07 | 2023-06-15 | 正大天晴药业集团股份有限公司 | 抗trop-2抗体或其抗原结合片段 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
HYE-SHIN CHUNG,等: "Oxidation Protection in Metal-Binding Peptide Motif and Its Application to Antibody for Site-Selective Conjugation", PLOS ONE, vol. 11, no. 7, pages 1 - 15 * |
仝红娟,等: "抗体与药物的位点特异性偶联化学方法学研究进展", 中国现代应用药学, vol. 39, no. 22, pages 3030 - 3037 * |
黄容,等: "基于二硫键桥连构建均一性抗体药物偶联物", 自然杂志, vol. 43, no. 5, pages 323 - 334 * |
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