CN117645929A - 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用 - Google Patents

一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117645929A
CN117645929A CN202311457504.1A CN202311457504A CN117645929A CN 117645929 A CN117645929 A CN 117645929A CN 202311457504 A CN202311457504 A CN 202311457504A CN 117645929 A CN117645929 A CN 117645929A
Authority
CN
China
Prior art keywords
selenium
content
chlorella pyrenoidosa
metazoan
enriched
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202311457504.1A
Other languages
English (en)
Inventor
王昭凯
产竹华
颜雅筠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Third Institute of Oceanography MNR
Original Assignee
Third Institute of Oceanography MNR
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Third Institute of Oceanography MNR filed Critical Third Institute of Oceanography MNR
Priority to CN202311457504.1A priority Critical patent/CN117645929A/zh
Publication of CN117645929A publication Critical patent/CN117645929A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/16—Inorganic salts, minerals or trace elements
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/04—Sulfur, selenium or tellurium; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/02—Algae
    • A61K36/05—Chlorophycota or chlorophyta (green algae), e.g. Chlorella
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12—Antidiarrhoeals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
    • A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/89—Algae ; Processes using algae

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)

Abstract

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用。所述制备方法包括：将蛋白核小球藻依次在异养发酵培养基、硒盐、破壁酶和益生菌中进行四阶段发酵培养，之后进行灭活处理、助剂复配、喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。本发明的关键在于四阶段发酵培养有利于硒盐转化为有机硒，提高抗氧化活性，而且先加入破壁酶后加入益生菌的发酵顺序，有利于益生菌高效利用蛋白核小球藻的营养物质进行生长，由此获得的富硒蛋白核小球藻后生元组合物富含多种活性物质，具有良好的抗氧化活性以及能够改善免疫力、改善睡眠和改善肠道健康的功效。

Description

一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用。
背景技术
蛋白核小球藻为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞淡水藻类，直径为3-8微米，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，也可以利用有机碳源进行异样生长，分布极广。蛋白核小球藻含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、膳食纤维以及各种必需氨基酸，在医药、化妆品与食品饲料行业应用前景广阔。目前蛋白核小球藻的利用方式主要是将小球藻进行自养培养、藻体收集破碎后获得藻粉，然后与不同营养物质进行复配得到产品。然而，这种方法制备得到的产品发展受到蛋白核小球藻自养培养的缺点限制：(1)小球藻繁殖速度相对较慢，需要较长时间才能达到足够的生物量；(2)生长受限，小球藻在自养培养中受到光照强度、光照时间和光质的限制；(3)营养需求高，小球藻在自养培养中需要提供足够的光能和养分，包括二氧化碳、氮、磷、量量元素等；(4)微生物污染，细菌、真菌和其他微生物的污染可能会导致小球藻的生长受到抑制，甚至导致培养失败。此外，由于小球藻属于真核生物，其活性物质在胞内，现有技术使用前需要进行藻种破碎提取活性物质，但目前的活性物质提取成本高，直接影响了蛋白核小球藻的活性和竞价价值。因此，急需开发一种低成本、高活性的蛋白核小球藻制备工艺。
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效，从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。后生元是益生菌经加工灭活后的益生菌代谢物成分的统称，包括菌体与代谢产物。其具有相近于益生菌的功效，并且相较于益生菌具有更高的生物活性、抗氧化活性、免疫力功效和胃酸耐受性且更易于保存。为了提高蛋白核小球藻产品的免疫力功效、抗氧化活性以及改善睡眠和改善肠道健康的功效，目前主要是通过将益生菌的粉末和破壁小球藻粉末复配得到产品，但这种方法中益生菌对蛋白核小球藻产品的活性和功效的提升作用有限。
综上所述，如何制备出一种具有良好的抗氧化活性以及能够改善免疫力、改善睡眠和改善肠道健康的蛋白核小球藻产品至关重要。
发明内容
本发明的第一目的在于提供了一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，由方法获得的富硒蛋白核小球藻后生元组合物具有良好的抗氧化活性以及能够改善免疫力、改善睡眠和改善肠道健康的功效。
本发明的第二目的在于提供了由上述方法制备得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
本发明的第三目的在于还提供了富硒蛋白核小球藻后生元组合物在用于改善抗氧化性、改善免疫力功效、改善睡眠以及改善细菌性腹泻中的应用。
具体地，所述富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，包括如下步骤：
S1、异养发酵：将小球藻在异养发酵培养基中进行第一次培养，得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入硒盐和富硒助剂进行第二次培养，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入破壁酶进行第三次培养，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌进行第四次培养，得到第四发酵液；
S2、灭活：将所述第四发酵液进行灭活处理，得到灭活发酵液；
S3、复配：将灭活发酵液与助剂混合均匀后喷雾干燥，之后喷雾干燥，得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述小球藻为蛋白核小球藻CACC365和/或CACC0366。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述异养发酵培养基中含有葡萄糖、蛋白胨、NaNO3、K2HPO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·7H2O、Na2CO3、柠檬酸、柠檬酸铁、氯化钠和蒸馏水。
在一种优选实施方式中，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述蛋白胨的含量为2-10g，所述NaNO3的含量为1-3g，所述K2HPO4含量为0.01-0.1g，所述MgSO4·7H2O的含量为0.05-0.1g，所述CaCl2·7H2O的含量为0.01-0.03g，所述Na2CO3的含量为0.01-0.05g，所述柠檬酸的含量为0.001-0.005g，所述柠檬酸铁的含量为0.001-0.005g，所述微量元素溶液含量为1-2mL、所述氯化钠的含量为10-20g，所述蒸馏水的含量为800-1200mL。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述微量元素溶液中含有H3BO4、MnCl2·4H2O、ZnSO4、Na2MoO4、CuSO4·5H2O、Co(NO3)2·6H2O和蒸馏水。
在一种优选实施方式中，所述H3BO4的含量为2.5-3.0g，所述MnCl2·4H2O的含量为1.5-2.0g，所述ZnSO4的含量为0.1-0.3g，所述Na2MoO4的含量为0.3-0.4g，所述CuSO4·5H2O的含量为0.07-0.08g，所述Co(NO3)2·6H2O的含量为48-50g，所述蒸馏水的含量为800-1200mL。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述第一次培养的条件包括温度为25-30℃，pH为5-6，时间为1-3d。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述硒盐选自硒酸、亚硒酸盐和硒酸盐中的至少一种。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述硒盐的浓度为2-5mg/L。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述富硒助剂为十二烷基磺酸钠和/或环己氨基磺酸钠。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述富硒助剂的含量为0.1-1.0g/L。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述第二次培养的条件包括温度为25-30℃，pH为6-7，时间为2-3d。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述破壁酶为纤维素酶和/或半纤维素酶。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述破壁酶的含量为10-30g/L。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述第三次培养的条件包括温度为40-50℃，时间为2-4h。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述益生菌选自鼠李糖乳酪杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵粘液乳杆菌、植物乳植杆菌、干酪乳酪杆菌和副干酪乳酪杆菌中的至少一种。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述益生菌的接种浓度为106-107CFU/mL。
在一种优选实施方式中，步骤S1中，所述第四次培养的条件包括温度为30-37℃，pH为5-6，时间为2-3d。
在一种优选实施方式中，步骤S2中，所述灭活处理的条件包括温度为80 90℃，时间为1-2h。
在一种优选实施方式中，步骤S3中，所述助剂选自壳聚糖、卡拉胶、琼胶和脱脂奶粉中的至少一种。
在一种优选实施方式中，步骤S3中，所述助剂的含量为10-50g/L。
在一种优选实施方式中，步骤S3中，所述喷雾干燥的条件包括进风温度为140-180℃，出风温度为70-90℃。
本发明的发明人经过广泛而深入的研究之后发现，将蛋白核小球藻依次在异养发酵培养基、硒盐、破壁酶和益生菌中进行四阶段发酵培养，之后进行灭活和助剂复配处理得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物，不仅能有效地提高蛋白核小球藻产品的高活性和免疫力功效，还可以改善睡眠和细菌性腹泻。推测其原因，可能是由于：蛋白核小球藻在开始阶段生长较缓慢，而在异养发酵培养基中进行培养，使得蛋白核小球藻密度增加，得到第一发酵液；此时将硒盐加入蛋白核小球藻培养液中，有利于硒盐转化为有机硒，提高抗氧化活性，得到第二发酵液(即富硒蛋白核小球藻发酵液)；由于蛋白核小球藻属于真核生物，直接加入益生菌破壁效率慢，不利于益生菌转化蛋白核小球藻的营养物质，而先加入破壁酶提高蛋白核小球藻营养物质的释放，得到第三发酵液；然后加入益生菌，此时可以高效利用破壁蛋白核小球藻的营养物质进行生长，得到第四发酵液；最后，将第四发酵液灭活后与助剂复配得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。综上所述，将蛋白核小球藻依次在异养发酵培养基、硒盐、破壁酶和益生菌中进行四阶段发酵培养，由此所获得的富硒蛋白核小球藻后生元组合物富含有蛋白质、氨基酸、脂肪酸、膳食纤维、灭活的益生菌及胞溶物、有机硒等多种活性物质，同时具有良好的抗氧化活性以及能够改善免疫力、改善睡眠和改善肠道健康的功效。
具体实施方式
本发明提供的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法包括如下步骤：
S1、异养发酵：将小球藻在异养发酵培养基中进行第一次培养，得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入硒盐和富硒助剂进行第二次培养，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入破壁酶进行第三次培养，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌进行第四次培养，得到第四发酵液；
S2、灭活：将所述第四发酵液进行灭活处理，得到灭活发酵液；
S3、复配：将灭活发酵液与助剂混合均匀后喷雾干燥，之后喷雾干燥，得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
在本发明中，所述小球藻优选为蛋白核小球藻CACC365和/或CACC0366。在本发明中，步骤S1中，所述异养发酵培养基中优选含有葡萄糖、蛋白胨、NaNO3、K2HPO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·7H2O、Na2CO3、柠檬酸、柠檬酸铁、氯化钠和蒸馏水。其中，所述葡萄糖的含量优选为10-30g，如10g、12g、18g、15g、20g、22g、25g、28g、30g或它们之间的任意值；所述蛋白胨的含量优选为2-10g，如2g、5g、8g、10g或它们之间的任意值；所述NaNO3的含量优选为1-3g，如1g、1.5g、2g、2.5g、3g或它们之间的任意值；所述K2HPO4的含量优选为0.01-0.1g，如0.01g、0.02g、0.05g、0.08g、0.1g或它们之间的任意值；所述MgSO4·7H2O的含量优选为0.05-0.1g，如0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09g、0.1g或它们之间的任意值；所述CaCl2·7H2O的含量优选为0.01-0.03g，如0.01g、0.02g、0.03g或它们之间的任意值；所述Na2CO3的含量优选为0.01-0.05g，如0.01g、0.02g、0.03g、0.04g、0.05g或它们之间的任意值；所述柠檬酸的含量优选为0.001-0.005g，如0.001g、0.002g、0.003g、0.004g、0.005g或它们之间的任意值；所述柠檬酸铁的含量优选为0.001-0.005g，如0.001g、0.002g、0.003g、0.004g、0.005g或它们之间的任意值；所述微量元素溶液的含量优选为1-2mL，如1mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2mL、2.5mL、3mL或它们之间的任意值；所述氯化钠的含量优选为10-20g，如10g、12g、15g、18g、20g或它们之间的任意值；所述蒸馏水的含量优选为800-1200mL，如800mL、900mL、1000mL、1100mL、1200mL或它们之间的任意值。
在本发明中，所述微量元素溶液中优选含有H3BO4、MnCl2·4H2O、ZnSO4、Na2MoO4、CuSO4·5H2O、Co(NO3)2·6H2O和蒸馏水。其中，所述H3BO4的含量为2.5-3.0g，如2.5g、2.6g、2.7g、2.8g、2.9g、3.0g或它们之间的任意值；所述MnCl2·4H2O的含量为1.5-2.0g，如1.5g、1.6g、1.7g、1.8g、1.9g或它们之间的任意值；所述ZnSO4的含量为0.1-0.3g，如0.1g、0.15g、0.2g、0.25g、0.3g或它们之间的任意值；所述Na2MoO4的含量为0.3-0.5g，如0.3g、0.35g、0.4g、0.45g、0.5g或它们之间的任意值；所述CuSO4·5H2O的含量为0.07-0.09g，如0.07g、0.075g、0.08g、0.085g、0.9g或它们之间的任意值；所述Co(NO3)2·6H2O的含量为48-50g，如48g、48.5g、49g、49.5g、50g或它们之间的任意值；所述蒸馏水的含量为800-1200mL如800mL、900mL、1000mL、1100mL、1200mL或它们之间的任意值。
在本发明中，所述第一次培养的条件包括温度优选为25-30℃，如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃或它们之间的任意值；pH优选为5-6，如5、5.2、5.4、5.6、5.8、6或它们之间的任意值；时间优选为1-3d，如1d、1.5d、2d、2.5d、3d或它们之间的任意值。
本发明对所述硒盐的种类没有特别的限制，可以为现有的各种能够提供硒元素的物质，其具体实施例包括但不限于：硒酸、亚硒酸盐和硒酸盐中的至少一种。研究得知，硒元素是人体所必需的微量元素之一，当人体血液中硒水平过低时，体内清除自由基的功能会减退，造成有害物质沉积增多，硒元素对人体具有抗氧化活性、改善免疫力功效、防癌抗癌、防毒解毒和抗污染等功效。优选地，所述硒盐的浓度为2-5mg/L，如2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L或它们之间的任意值。
在本发明中，添加富硒助剂的目的是与硒盐进行反应，使硒元素在体系中以有机硒的形式存在，提高硒元素的生物利用率。所述富硒助剂优选为十二烷基磺酸钠和/或环己氨基磺酸钠。所述富硒助剂的含量优选为0.1-1.0g/L，如0.1g/L、0.2g/L、0.5g/L、0.8g/L、1.0g/L或它们之间的任意值。
在本发明中，所述第二次培养的条件包括温度优选为25-30℃，如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃或它们之间的任意值；pH优选为6-7，如6、6.2、6.4、6.6、6.8、7或它们之间的任意值；时间优选为2-3d，如2d、2.2d、2.4d、2.6d、2.8d、3d或它们之间的任意值。
本发明对所述破壁酶的种类没有特别的限制，可以为现有的各种能够爆破细胞壁而释放出细胞内的各种有益成分以促进人体吸收的物质。所述破壁酶优选为纤维素酶和/或半纤维素酶。其中，纤维素酶是由多种水解酶组成的一个复杂酶系，可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质，而半纤维霉素具有亲水性能，可以使细胞壁润胀，是一种能使构成植物细胞膜的多糖类(除纤维素和果胶物质外)水解的酶类。破壁酶作为一种生物催化剂，主要通过水解细胞壁的糖链和蛋白质来实现，其还具有提高人体营养吸收的功效。优选地，所述破壁酶的含量为10-30g/L，如10g/L、15g/L、20g/L、25g/L、30g/L或它们之间的任意值。
在本发明中，所述第三次培养的条件包括温度优选为40-50℃，如40℃、42℃、44℃、46℃、48℃、50℃或它们之间的任意值；时间优选为2-4h，如2h、2.5h、3h、3.5h、4h或它们之间的任意值。
本发明对所述益生菌的种类没有特别的限制，可以为现有的各种能够通过定殖在人体内，改变宿主某一部位菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。所述益生菌的具体实施例包括但不限于：鼠李糖乳酪杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵粘液乳杆菌、植物乳植杆菌、干酪乳酪杆菌和副干酪乳酪杆菌中的至少一种。优选地，所述益生菌的接种浓度优选为106-107CFU/mL，如106CFU/mL、3*106CFU/mL、5*106CFU/mL、7*106CFU/mL、107CFU/mL或它们之间的任意值。
在本发明中，所述第四次培养的条件包括温度优选为30-37℃，如30℃、31℃、32℃、33℃、35℃、37℃或它们之间的任意值；pH优选为5-6，如5、5.2、5.4、5.6、5.8、6或它们之间的任意值；时间优选为2-3d，如2d、2.2d、2.4d、2.6d、2.8d、3d或它们之间的任意值。
在本发明中，步骤S2中，所述灭活处理的条件包括温度优选为80-90℃，如80℃、82℃、84℃、86℃、88℃、90℃或它们之间的任意值；时间优选为1-2h，如1h、1.2h、1.4h、1.6h、1.8h、2h或它们之间的任意值。
在本发明中，步骤S3中，所述助剂优选自壳聚糖、卡拉胶、琼胶和脱脂奶粉中的至少一种。所述助剂的含量优选为10-50g/L，如10g/L、20g/L、30g/L、40g/L、50g/L或它们之间的任意值。所述喷雾干燥的条件包括进风温度优选为140-180℃，如140℃、150℃、160℃、170℃、180℃或它们之间的任意值；出风温度优选为70-90℃，如70℃、75℃、80℃、85℃、90℃或它们之间的任意值。
此外，本发明中，术语“第一”、“第二”、“第三”和“第四”仅仅是为了便于区分和描述，无其它特殊含义。
以下将通过实施例进行详细说明。
实施例1富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
S1、蛋白核小球藻的异养发酵培养基为：20g葡萄糖、10g蛋白胨、1g NaNO3、0.01gK2HPO4、0.05g MgSO4·7H2O、0.01g CaCl2·7H2O、0.02g Na2CO3、0.001g柠檬酸、0.001g柠檬酸铁、1mL微量元素溶液、10g氯化钠以及蒸馏水1000mL；所述微量元素溶液配方为：2.86g H3BO4、1.81g MnCl2·4H2O、0.222g ZnSO4、0.39g Na2MoO4、0.079g CuSO4·5H2O、49.4g Co(NO3)2·6H2O以及1000mL蒸馏水。将蛋白核小球藻CACC0365在异养发酵培养基中进行培养，培养温度为30℃、pH＝5的条件下培养2d得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入4mg/L亚硒酸钠和0.5g/L十二烷基磺酸钠并于温度30℃、pH＝6的条件下继续培养3d，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入10g/L纤维素酶和10g/L半纤维素酶，在温度40℃下处理3h，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌，接种浓度为106CFU/mL，在37℃、pH＝5的条件下培养3d，得到第四发酵液；
S2、将第四发酵液进行灭活处理，得到灭活发酵液。其中，所述灭活处理的温度为90℃，时间为1h；
S3、向灭活发酵液中加入30g/L助剂(壳聚糖)，之后喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
实施例2富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
S1、蛋白核小球藻的异养发酵培养基为：10g葡萄糖、10g蛋白胨、3g NaNO3、0.05gK2HPO4、0.1g MgSO4·7H2O、0.03g CaCl2·7H2O、0.05g Na2CO3、0.005g柠檬酸、0.005g柠檬酸铁、2mL微量元素溶液、20g氯化钠以及蒸馏水1000mL；所述微量元素溶液配方为：2.86g H3BO4、1.81g MnCl2·4H2O、0.222g ZnSO4、0.39g Na2MoO4、0.079g CuSO4·5H2O、49.4gCo(NO3)2·6H2O以及1000mL蒸馏水。将蛋白核小球藻CACC0365在异养发酵培养基中进行培养，培养温度为28℃、pH＝5.5的条件下培养2d得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入2mg/L亚硒酸钠和0.1g/L十二烷基磺酸钠并于温度28℃、pH＝6.5的条件下继续培养3d，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入15g/L纤维素酶和5g/L半纤维素酶，在温度45℃下处理2.5h，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌，接种浓度为106CFU/mL，在30℃、pH＝5.5的条件下培养2d，得到第四发酵液；
S2、将第四发酵液进行灭活处理得到灭活发酵液。其中，所述灭活处理的温度为85℃，时间为1.5h；
S3、向灭活发酵液中加入50g/L助剂(卡拉胶)，之后喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
实施例3富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
S1、蛋白核小球藻的异养发酵培养基为：25g葡萄糖、5g蛋白胨、1.5g NaNO3、0.1gK2HPO4、0.05g MgSO4·7H2O、0.01g CaCl2·7H2O、0.05g Na2CO3、0.001g柠檬酸、0.001g柠檬酸铁、1mL微量元素溶液、10g氯化钠以及蒸馏水1000mL；所述微量元素溶液配方为：2.86g H3BO4、1.81g MnCl2·4H2O、0.222g ZnSO4、0.39g Na2MoO4、0.079g CuSO4·5H2O、49.4gCo(NO3)2·6H2O以及1000mL蒸馏水。将蛋白核小球藻CACC0365在异养发酵培养基中进行培养，培养温度为25℃、pH＝5.5的条件下培养3d得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入3mg/L亚硒酸钠和0.3g/L十二烷基磺酸钠并于温度25℃、pH＝7的条件下继续培养2d，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入5g/L纤维素酶和15g/L半纤维素酶，在温度50℃下处理2h，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌，接种浓度为107CFU/mL，在35℃、pH＝5.5的条件下培养3d，得到第四发酵液；
S2、将第四发酵液进行灭活处理得到灭活发酵液。其中，所述灭活处理的温度为80℃，时间为2h；
S3、向灭活发酵液中加入10g/L助剂(琼胶)，之后喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
实施例4富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
S1、蛋白核小球藻的异养发酵培养基为：25g葡萄糖、2.5g蛋白胨、1.5g NaNO3、0.04gK2HPO4、0.05g MgSO4·7H2O、0.02g CaCl2·7H2O、0.02g Na2CO3、0.005g柠檬酸、0.005g柠檬酸铁、1.5mL微量元素溶液、10g氯化钠以及蒸馏水1000mL；所述微量元素溶液配方为：2.86g H3BO4、1.81g MnCl2·4H2O、0.222g ZnSO4、0.39g Na2MoO4、0.079g CuSO4·5H2O、49.4g Co(NO3)2·6H2O以及100mL蒸馏水。将蛋白核小球藻CACC0365在异养发酵培养基中进行培养，培养温度为30℃、pH＝6的条件下培养2d得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入4mg/L亚硒酸钠和0.5g/L十二烷基磺酸钠并于温度30℃、pH＝7的条件下继续培养3d，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入10g/L纤维素酶和10g/L半纤维素酶，在温度45℃下处理3h，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌，接种浓度为107CFU/mL，在37℃、pH＝5的条件下培养3d，得到第四发酵液；
S2、将第四发酵液进行灭活处理得到灭活发酵液。其中，所述灭活处理的温度为85℃，时间为1h；
S3、向灭活发酵液中加入30g/L助剂(脱脂奶粉)，之后喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
实施例5富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
S1、蛋白核小球藻的异养发酵培养基为：15g葡萄糖、5g蛋白胨、1g NaNO3、0.04gK2HPO4、0.05g MgSO4·7H2O、0.02g CaCl2·7H2O、0.02g Na2CO3、0.005g柠檬酸、0.005g柠檬酸铁、1.5mL微量元素溶液、10g氯化钠以及蒸馏水1000mL；所述微量元素溶液配方为：2.86g H3BO4、1.81g MnCl2·4H2O、0.222g ZnSO4、0.39g Na2MoO4、0.079g CuSO4·5H2O、49.4g Co(NO3)2·6H2O以及1000mL蒸馏水。将蛋白核小球藻CACC0365在异养发酵培养基中进行培养，培养温度为28℃、pH＝5.5的条件下培养3d得到第一发酵液；之后在第一发酵液中加入2mg/L亚硒酸钠和0.3g/L十二烷基磺酸钠并于温度28℃、pH＝6的条件下继续培养2d，得到第二发酵液；之后在第二发酵液中加入10g/L纤维素酶和10g/L半纤维素酶，在温度40℃下处理3h，得到第三发酵液；之后在第三发酵液中加入益生菌，接种浓度为106CFU/mL，在33℃、pH＝5.5的条件下培养3d，得到第四发酵液；
S2、将第四发酵液进行灭活处理得到灭活发酵液。其中，所述灭活处理的温度为80℃，时间为2h；
S3、向灭活发酵液中加入20g/L壳聚糖和20g/L卡拉胶，之后喷雾干燥得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
实施例6富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备
按实施例1的方法制备富硒蛋白核小球藻后生元组合物，不同的是，用蛋白核小球藻CACC0366代替蛋白核小球藻CACC0365，其余条件均相同。
对比例1
按实施例1的方法制备参比蛋白核小球藻后生元组合物，不同的是，步骤S1中，未添加硒盐和富硒助剂进行第二次培养，直接将第一发酵液加入破壁酶进行第三次培养，其余条件均相同。
对比例2
按实施例1的方法制备参比富硒蛋白核小球藻后生元组合物，不同的是，步骤S1中，未添加破壁酶进行第三次培养，直接将第二发酵液加入益生菌进行第四次培养，其余条件均相同。
对比例3
按实施例1的方法制备参比富硒蛋白核小球藻组合物，不同的是，步骤S1中，未添加益生菌进行第四次培养，直接将第三发酵液进行步骤S2的灭活处理，其余条件均相同。
测试例
(1)活性物质含量测试：蛋白质含量的测试仪器为紫外分光光度计，将待测样品与牛血清白蛋白法(BSA)反应30min后，测量波长562nm处的吸光度；氨基酸含量的测试仪器为高效液相色谱仪，采用离子交换色谱柱和紫外检测器，在波长210nm进行检测；脂肪酸和不饱和脂肪酸的测试仪器为气相色谱仪，采用毛细管柱、火焰离子化检测器对甲酯化的样品进行检测；有机硒含量的测试仪器为电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)，参数条件为采用射频功率1500w、等离子体气流量15L/min、雾化温度2℃、样品提升速率0.3r/s；总糖含量的测试仪器为紫外分光光度计，将待测样品加入苯酚、浓硫酸反应30min后，测量波长490nm处的吸光度；膳食纤维含量采用酶-重量法(AOAC 991.43方法)测定，测试仪器包括坩埚、分析天平、真空干燥箱等，测试方法为将样品酶解30min后加入乙醇在60℃下恒温保持1h，将所得沉淀置于坩埚中，在105℃下烘干后称重。根据上述仪器和测试方法以及参数条件从而得到各活性物质含量(g/g)，所得结果详见表1。
(2)抗氧化活性测试：将上述各实施例及对比例得到的组合物经溶解后，取相同体积的溶解液与2mL的0.2mmol/L DPPH乙醇溶液混合，室温下避光反应30min，测定517nm处的吸光值A1，对照组以等体积乙醇代替DPPH溶液测定吸光值A2，对照组以等体积蒸馏水代替样品溶液测定吸光值A0，按式(1)计算得到DPPH自由基的清除率(％)，以此评价抗氧化活性，结果详见表2。
(3)免疫力功效/免疫细胞功能测试：以BALB/c雄性小鼠(25g)为研究对象，通过对小鼠进行灌胃各实施例及对比例的组合物，采用ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)的实验结果检测富硒蛋白核小球藻后生元组合物对细胞免疫功能的影响。将小鼠分为空白对照组和实验组，每组10只，共100只。每天灌胃上述实施例及对比例的组合物2.5mg/只(空白组灌胃生理盐水)，喂养时间5周后无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank's液的平皿中，制成细胞悬液，分为两份，一份加入ConA液，另一份作为对照组。每份加入酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，在570nm波长处测定其吸光度值(A值)。计算试验组A值与对照组A值之差，以此表示脾淋巴细胞的增殖能力，从而得到脾淋巴细胞转化率(％)，并以此评价免疫力功效或免疫细胞功能，结果详见表3。
(4)睡眠改善情况测试：选用5周龄雄性C57BL/6J小鼠(22g)进行试验，将100只小鼠随机分为10组，其中一组作为空白对照组，其他的9组分别用于服用各实施例及对比例的组合物，将组合物溶于水均配置成0.2g/L的制剂，每次给小鼠灌5mL，经口连续灌胃10d，对照组灌3mL的饮用水。直接睡眠测试：第10d灌胃后，观察是否出现睡眠现象，睡眠现象以翻正反射消失为指标。将小鼠置于背卧位时，超过60s不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间称为小鼠睡眠时间，记录对照组、各实施例及对比例组的入睡小鼠数(只)，结果如表4所示。直接睡眠测试完成后，进行延长戊巴比妥钠睡眠时间和催眠试验，给各组小鼠的腹腔注射3％的戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失60s以上为入睡时间的起点，记录30min内入睡小鼠数(只)，同时以翻正反射消失60s以上为入睡时间的起点记录睡眠潜伏期(min)，结果如表5所示。
(5)细菌性腹泻改善情况测试：选用5周龄雄性C57BL/6J小鼠(20g)进行试验，采用沙门氏菌的饲喂构建腹泻模型小鼠，沙门氏菌菌量为5×109CFU/mL，直接灌胃小鼠，连续3d。当小鼠出现腹泻、无力、无食欲症状，表明造模成功。随机选择造模成功的小鼠，每组10只，分为10组。对照组每天正常饮用超纯水，实验组每天灌胃0.2g/L的实施例及对比例的组合物，连续灌胃3d，观察小鼠3d后的腹泻改善率(％)和具体改善情况，结果如表6所示。
表1
表2
组别 DPPH清除率％
对照组 23.65
实施例1 55.31
实施例2 53.33
实施例3 52.95
实施例4 56.13
实施例5 51.67
实施例6 54.42
对比例1 45.72
对比例2 50.69
对比例3 48.61
表3
组别 脾淋巴细胞转化率％
对照组 15.63
实施例1 23.93
实施例2 22.48
实施例3 21.11
实施例4 22.36
实施例5 20.95
实施例6 22.78
对比例1 22.15
对比例2 19.23
对比例3 18.07
表4
组别 入睡小鼠数(只)
对照组 0
实施例1 0
实施例2 0
实施例3 0
实施例4 0
实施例5 0
实施例6 0
对比例1 0
对比例2 0
对比例3 0
表5
组别 入睡小鼠数(只) 睡眠潜伏期(min)
对照组 0 10.5
实施例1 10 4.3
实施例2 9 4.9
实施例3 9 5.2
实施例4 9 4.6
实施例5 9 5.6
实施例6 9 5.3
对比例1 8 4.5
对比例2 7 6.5
对比例3 6 7.2
表6
从表1的结果可以看出，本发明制备得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物富含蛋白、氨基酸、脂肪酸、不饱和脂肪酸、有机硒、多糖、膳食纤维等多种活性物质。从表2的结果可以看出，与实施例1相比，对比例1的DPPH清除率明显降低，说明富硒能够有效地提高蛋白核小球藻后生元组合物的抗氧化活性。从表3的结果可以看出，与实施例1相比，对比例2-3的脾淋巴细胞转化率相较更低，说明先加入破壁酶可以提高蛋白核小球藻营养物质的释放，再接种益生菌高效转化蛋白核小球藻的营养物质进行生长，从而可以有效地改善免疫力功效。从表4的结果可以看出，实施例和对比例组对小鼠都没有直接睡眠作用。从表5的结果可以看出，实施例组的入睡小鼠数量多，而且睡眠潜伏期较短，而对比例组的入睡小鼠数和睡眠潜伏期均低于实施例组数据，说明本发明制备得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物具有改善睡眠功效。从表6的结果可以看出，实施例组的小鼠灌胃1d后腹泻停止，排便次数减少，便液浓稠，2d后无腹泻，3d后恢复正常。然而，对比例组小鼠腹泻改善率均较差，具体改善情况均较为缓慢，说明本发明制备得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物还具有改善细菌性腹泻功效，有助于促进肠道健康。
综上所述，通过异养发酵培养基、硒盐、破壁酶和益生菌的四阶段发酵培养以及灭活处理得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物，不仅含有蛋白质、氨基酸、脂肪酸、膳食纤维、灭活的益生菌及胞溶物、有机硒等多种活性物质，还具有良好的抗氧化活性和免疫力功效以及改善睡眠和细菌性腹泻的功效。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
S1、异养发酵：将小球藻在异养发酵培养基中进行第一次培养，得到第一发酵液；在第一发酵液中加入硒盐和富硒助剂进行第二次培养，得到第二发酵液；在第二发酵液中加入破壁酶进行第三次培养，得到第三发酵液；在第三发酵液中加入益生菌进行第四次培养，得到第四发酵液；
S2、灭活：将第四发酵液进行灭活处理，得到灭活发酵液；
S3、复配：将灭活发酵液与助剂混合均匀后喷雾干燥，得到富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
2.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述蛋白核小球藻编号为CACC0365和/或CACC0366。
3.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述异养发酵培养基中含有葡萄糖、蛋白胨、NaNO3、K2HPO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·7H2O、Na2CO3、柠檬酸、柠檬酸铁、氯化钠和蒸馏水；
优选地，所述葡萄糖的含量为10-30g，所述蛋白胨的含量为2-10g，所述NaNO3的含量为1-3g，所述K2HPO4含量为0.01-0.1g，所述MgSO4·7H2O的含量为0.05-0.1g，所述CaCl2·7H2O的含量为0.01-0.03g，所述Na2CO3的含量为0.01-0.05g，所述柠檬酸的含量为0.001-0.005g，所述柠檬酸铁的含量为0.001-0.005g，所述微量元素溶液含量为1-2mL，所述氯化钠的含量为10-20g，所述蒸馏水的含量为800-1200mL；
优选地，所述微量元素溶液中含有H3BO4、MnCl2·4H2O、ZnSO4、Na2MoO4、CuSO4·5H2O、Co(NO3)2·6H2O和蒸馏水；
优选地，所述H3BO4的含量为2.5-3.0g，所述MnCl2·4H2O的含量为1.5-2.0g，所述ZnSO4的含量为0.1-0.3g，所述Na2MoO4的含量为0.3-0.5g，所述CuSO4·5H2O的含量为0.07-0.09g，所述Co(NO3)2·6H2O的含量为48-50g，所述蒸馏水的含量为800-1200mL；
优选地，所述第一次培养的条件包括温度为25-30℃，pH为5-6，时间为1-3d。
4.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述硒盐选自硒酸、亚硒酸盐和硒酸盐中的至少一种；
优选地，所述硒盐的浓度为2-5mg/L；
优选地，所述富硒助剂为十二烷基磺酸钠和/或环己氨基磺酸钠；
优选地，所述富硒助剂的含量为0.1-1.0g/L；
优选地，所述第二次培养的条件包括温度为25-30℃，pH为6-7，时间为2-3d。
5.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述破壁酶为纤维素酶和/或半纤维素酶；
优选地，所述破壁酶的含量为10-30g/L；
优选地，所述第三次培养的条件包括温度为40-50℃，时间为2-4h。
6.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述益生菌选自鼠李糖乳酪杆菌、嗜酸乳杆菌、发酵粘液乳杆菌、植物乳植杆菌、干酪乳酪杆菌和副干酪乳酪杆菌中的至少一种；
优选地，所述益生菌的接种浓度为106-107CFU/mL；
优选地，所述第四次培养的条件包括温度为30-37℃，pH为5-6，时间为2-3d。
7.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述灭活处理的条件包括温度为80-90℃，时间为1-2h。
8.根据权利要求1所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述助剂选自壳聚糖、卡拉胶、琼胶和脱脂奶粉中的至少一种；
优选地，所述助剂的含量为10-50g/L；
优选地，所述喷雾干燥的条件包括进风温度为140-180℃，出风温度为70-90℃。
9.由权利要求1-8中任意一项所述方法制备得到的富硒蛋白核小球藻后生元组合物。
10.根据权利要求9所述的富硒蛋白核小球藻后生元组合物在改善抗氧化性、改善免疫力功效、改善睡眠以及改善细菌性腹泻中的应用。
CN202311457504.1A 2023-11-03 2023-11-03 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用 Pending CN117645929A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311457504.1A CN117645929A (zh) 2023-11-03 2023-11-03 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311457504.1A CN117645929A (zh) 2023-11-03 2023-11-03 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117645929A true CN117645929A (zh) 2024-03-05

Family

ID=90044102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311457504.1A Pending CN117645929A (zh) 2023-11-03 2023-11-03 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117645929A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2021082502A1 (zh) 一种产短链脂肪酸的干酪乳杆菌、培养方法及其应用
CN104277999B (zh) 一种新型多效丁酸梭菌及其在提高动物抗氧化能力和改善肉品质方面的应用
CN106222158B (zh) 一种包埋乳酸杆菌的微胶囊制备方法
KR101695038B1 (ko) 셀레노히드록시산 화합물을 사용하여 셀레늄이 강화된 광합성 미생물, 영양물, 화장품 또는 약물에서의 그의 용도
CN102559560B (zh) 一种发酵后高产乳酸的地衣芽孢杆菌及其制剂和应用
CN110946907A (zh) 雏禽用的中药组合物、液态发酵的中药制剂及其制备方法
CN114146120B (zh) 一种预防及治疗萎缩性胃炎的组合物微胶囊及其制备方法
CN111803533A (zh) 降血糖、降血脂组合物、制备方法及其应用
CN110627919B (zh) 一种肠道益生元黑皮鸡枞菌多糖orp-1及其制备方法和用途
CN115322932A (zh) 一株具有解酒醒酒能力的植物乳植杆菌和应用
CN104522750A (zh) 一种藻类保健食品
CN112553267B (zh) 一种调控糖脂代谢活性合生元的制备方法
CN114984065B (zh) 一种提高免疫力的益生菌组合物及其制备方法
CN117645929A (zh) 一种富硒蛋白核小球藻后生元组合物的制备方法及应用
CN105624071A (zh) 一株唾液乳杆菌xjp2及其应用
CN110016443A (zh) 一种罗伊氏乳杆菌及其在富硒鸡蛋生产中的应用
CN113397170B (zh) 一种用于调节人体肠道菌群的海洋益生元组合物的应用
CN115252671A (zh) 仙人掌果花色苷在制备调控肠道菌群产品中的应用
CN105112328B (zh) 一种白术多糖-芽孢杆菌发酵液的制备方法与应用
CN113930367A (zh) 一株具有降胆固醇性能的乳酸菌及其应用
CN115005442B (zh) 一种天山雪莲多糖提取物制备方法与应用
Zommara et al. Whey Based Culture Media for The Production of Selenium Nanoparticles Rich Product by Three Lactic Acid Bacterial Strains
CN114403450B (zh) 黑木耳多糖添加物在抑制机体代谢臭气产生中的用途
CN117070425B (zh) 提高益生菌在机体内代谢稳定性的工艺方法及益生菌冻干粉
CN109160953A (zh) 一种圆红冬孢酵母菌y0多糖提取物及其在保健品中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information

Country or region after: China

Address after: 361000, No. 184 Daxue Road, Siming District, Xiamen City, Fujian Province (East District of Haiyang San Suo)

Applicant after: THIRD INSTITUTE OF OCEANOGRAPHY, MINISTRY OF NATURAL RESOURCES

Address before: 361000 room 1, room 1904, No. 15, Xinlian Yili, Xiang'an District, Xiamen City, Fujian Province

Applicant before: THIRD INSTITUTE OF OCEANOGRAPHY, MINISTRY OF NATURAL RESOURCES

Country or region before: China

CB02 Change of applicant information