CN117642166A

CN117642166A - 用于癌症治疗的组合疗法

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Publication number: CN117642166A
Application number: CN202280041520.XA
Authority: CN
Inventors: J·埃克曼; T·弗里斯; F·赫林; 井出裕介; 田中浩; P·F·T·佩塔佐尼; J·维希曼
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG; Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG; Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2021-06-09
Filing date: 2022-06-07
Publication date: 2024-03-01
Also published as: US20240139192A1; KR20240008410A; EP4351577A1; CA3222549A1; AU2022288118A1; KR20240005899A; TW202313046A; WO2022258612A1; BR112023025916A2; IL307964A

Abstract

本发明针对用BRAF抑制剂和MEK抑制剂的癌症的组合疗法，以及其用途和药物组合物。

Description

用于癌症治疗的组合疗法

本发明涉及BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，以及其用途和药物组合物。

本发明特别提供了用于治疗癌症的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其中BRAF抑制剂为式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

突变型BRAF为可靶向的致癌驱动因子，并且最新三种进入市场的BRAF抑制剂(BRAFi)(维莫非尼(Vemurafenib)、达拉非尼(Dabrafenib)和康奈非尼(Encorafenib))显示出对BRAFV600E阳性黑素瘤的疗效。然而，快速产生耐药性是几乎普遍被观察到的，并且靶向疗法的治疗效益持续时间仍然有限。

此外，已开发的第一代BRAF抑制剂在经BRAF^V600E驱动的肿瘤中展现出抑制MAPK信号传递的不可预期且“逆理性”能力，而相同的抑制剂在BRAF野生型(WT)模型中表现出MAPK刺激活性(N Engl J Med 2012；366:271-273；和British Journal of Cancer volume111，第640–645页(2014))。

然后，针对RAF逆理性进行机理研究证实了致癌性BRAF^V600E以其单体细胞质形式磷酸化MEK 1/2，而WT BRAF和RAF1活化需要复杂的事件步骤，包括细胞膜移位和经活化的RAS(KRAS、NRAS、HRAS)所促进的同源和/或异源二聚化作用(Nature Reviews Cancer volume14，第455–467页(2014))。

如维莫非尼、达拉非尼和康奈非尼的第一代BRAF抑制剂与WT BRAF或RAF1原聚体(protomer)的结合迅速诱导RAF同源和/或异源二聚化作用以及新形成的RAF二聚体的膜缔合。在二聚体构象中，一个RAF原聚体异位诱导第二个RAF原聚体的构象变化，导致激酶活化状态，且重要的是，在不利于抑制剂结合的构象中。结果，经药物治疗所诱导的二聚体通过被未结合的原聚体所操纵的催化作用与途径的过度活化而促进MEK磷酸化。

肿瘤几乎不可避免地避开了BRAFi治疗，并且绝大多数病例的机制涉及触发RAF二聚化作用的获得性能力。可通过MEK抑制剂(MEKi)组合治疗来抵消这种效应。然而，这些药剂的治疗指数非常差，这限制了MEKi在人体中可达到的剂量。因此，对第一代BRAFi与MEKi组合疗法的抗性仍由RAF逆理性活化介导。因此，这些组合疗法的临床效益仍然有限。

本发明涉及式(I)的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的新组合，其用于治疗癌症，特别是黑素瘤。式(I)化合物为BRAF抑制剂，与以下市场上的第一代BRAF抑制剂相比，其显示出MAPK信号途径(逆理破坏剂)的可忽略的逆理性活化：康奈非尼、达拉非尼和维莫非尼(逆理诱导剂)。除了这种特性，式(I)化合物还具有非常有效的脑穿透特性，因此为治疗在脑中转移的癌症提供了必要替代疗法。本发明公开了一种用于癌症疗法的新组合，其对BRAF相关肿瘤具有强组合活性，具有克服在采用第一代BRAF抑制剂治疗的患者中经常观察到的快速获得性治疗抗性的潜力。根据本发明中所公开的用于治疗癌症的组合呈现出远远超出MEKi和BRAFi单一疗法的累加效应的意想不到的组合活性。

附图说明

图1公开了与第一代BRAF抑制剂康奈非尼相比，在细胞系A375BRAF/NRAS中(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(本文称为化合物Ia)组合MEK抑制剂考比替尼(Cobimetinib)的P-ERK抑制作用。

图2公开了与第一代BRAF抑制剂康奈非尼相比，化合物Ia组合MEK抑制剂考比替尼在细胞系A375 BRAF/NRAS中的生长抑制作用。

图3公开了与单一疗法相比，化合物Ia与考比替尼的组合致使植入细胞系A375NRAS的小鼠的肿瘤体积急剧且协同地减小。

图4公开了与第一代BRAF抑制剂康奈非尼组合贝美替尼(Binimetinib)相比，化合物Ia组合贝美替尼对植入细胞系A375 NRAS的小鼠的肿瘤体积具有明显的协同效应。

图5公开了与单一疗法相比，化合物Ia组合2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐(本文称为化合物IIa)对植入细胞系A375 NRAS的小鼠的肿瘤体积具有明显的剂量依赖性协同效应。

图6公开了康奈非尼组合化合物IIa对细胞系A375的生长抑制作用具有明显的协同效应。

术语“抑制剂”表示与特定配体竞争、降低或阻止特定配体与特定受体的结合或降低或阻止特定蛋白质的功能的化合物。特别地，如本文所用的抑制剂是指靶向、降低或抑制选自BRAF和MEK的相应靶标的活性的化合物，特定抑制剂具有低于1μM、低于500nM、低于200nM、低于100nM、低于50nM、低于25nM、低于10nM、低于5nM、2nM或低于1nM的IC50值。在本发明的一些实施例中，术语“BRAF抑制剂”是指降低BRAF激酶活性至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的化合物。在本发明的一些实施例中，术语“MEK抑制剂”是指降低MEK激酶活性至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或至少约99％的化合物。

术语“IC50”是指抑制50％的特定测量活性所需的特定化合物的浓度。

术语“药用盐”是指式(I)化合物或MEK抑制剂保留游离碱或游离酸的生物有效性和特性，且并非在生物上或在其他方面有不利之处的盐。这些盐例如可以是与诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等、特别是盐酸的无机酸形成，和诸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苄酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、N-乙酰半胱氨酸等的有机酸形成。此外，这些盐类可通过将无机碱或有机碱添加至游离酸中来制备。衍生自无机碱的盐类包括但不限于钠、钾、锂、铵、钙、镁盐等。衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的盐、取代胺，包括天然存在的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、赖氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚亚胺树脂等。式(I)化合物的特定药用盐为盐酸盐、甲磺酸盐和柠檬酸盐。[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羟基-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]甲酮的特定药用盐为富马酸盐和琥珀酸盐，特别是半富马酸盐和半琥珀酸盐。式(II)化合物的具体药用盐为碱金属盐，例如锂盐、钠盐、钾盐、铯盐和铷盐，并且优选为钠盐和钾盐。

术语“溶剂化物”是指溶剂和溶质的非共价化学计量或非化学计量组合。术语“水化物”是指水和溶质的非共价化学计量或非化学计量组合。例如，式(I)化合物及其药用盐可以与药用溶剂(诸如苯甲醚、二氯甲烷、甲苯、1,4-二噁烷、水等)以非溶剂化形式和溶剂化形式存在。

式(I)化合物含有一个非对称中心，且其形式可为光学上纯的镜像异构体或镜像异构体混合物(诸如例如，外消旋体)。

根据Cahn-Ingold-Prelog序列法则，非对称碳原子可为“R”或“S”构型。

一方面，本发明提供用于治疗癌症的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其中BRAF抑制剂为式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

在本发明的一些实施例中，式(I)化合物为根据式(Ia)的化合物

在本发明的一些实施例中，式(I)化合物为根据式(Ib)的化合物

根据本发明使用的MEK抑制剂的非限制性实例包括2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、贝美替尼、曲美替尼(trametinib)、司美替尼(selumetinib)、匹玛舍替(pimasertib)、瑞美替尼(refametinib)、N-[2(R),3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺(PD-325901)、2-(2-氯-4-碘苯基氨基)-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟苯甲酰胺(Cl-1040)和3-[2(R),3-二羟基丙基]-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)。

在本发明的一些实施例中，MEK抑制剂为式(II)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

式(II)化合物为具有强MEK抑制活性和高RAF/MEK复合稳定活性的口服MEK抑制剂。式(II)的化学名称为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺。

在本发明的一些实施例中，式(II)化合物为根据式(IIa)的钠盐

在本发明的一些实施例中，MEK抑制剂为考比替尼。考比替尼为一种口服、有效且高度选择性的MEK1和MEK2(其为RAS/RAF途径的核心成分)抑制剂。考比替尼的化学名称为[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羟基-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]甲酮，并具有以下结构：

可以按照WO 2007/044515中描述的方法制备考比替尼。考比替尼可商购获得并具有以下CAS登记号：934660-93-2。

在本发明的一些实施例中，MEK抑制剂为贝美替尼。贝美替尼为一种口服、有效且高度选择性的MEK1和MEK2(其为RAS/RAF途径的核心成分)抑制剂。贝美替尼的化学名称为5-[(4-溴-2-氟苯基)氨基]-4-氟-N-(2-羟基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲酰胺并具有以下结构：

可以按照WO 2003/077914中描述的方法制备贝美替尼。贝美替尼可商购获得并具有以下CAS登记号：606143-89-9。

一方面，本发明提供用于治疗癌症的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其中MEK抑制剂为式(II)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

在本发明的一些实施例中，BRAF抑制剂为康奈非尼。康奈非尼的化学名称为N-[(2S)-1-[[4-[3-[5-氯-2-氟-3-(甲烷磺酰胺)苯基]-1-丙烷-2-基吡唑-4-基]嘧啶-2-基]氨基]丙烷-2-基]氨基甲酸甲酯并具有以下结构：

可以按照WO 2011/025927中描述的方法制备康奈非尼。康奈非尼可商购获得并具有以下CAS登记号：1269440-17-6。

测定程序

材料

补充有L-谷氨酰胺的DMEM无酚红培养基购自(Thermo Fisher Scientific)。胎牛血清(FBS)购自VWR。先进ERK磷酸-T202/Y204试剂盒-10,000测试购自Cisbio cat#64AERPEH。A375最初是从ATCC获得，并由Roche寄存库存储。384-孔微量多孔板购自GreinerBio-One 384-孔(带有Lid，HiBase，低容量cat 784-080)。

在A375细胞中用于P-ERK确定的HTRF测定

A375为一种表达V600E突变BRAF的细胞癌模型。以下报导ERK 1,2磷酸化(MAPK途径的磷酸化级联的末端成员)作为MAPK途径活化状态的主要读数。在测定前，A375细胞系维持在补充有10％胎牛血清(FBS)的DMEM无酚红培养基中。化合物处理后，通过测量FRET荧光信号来测定P-ERK水平，该信号是由上述试剂盒(Cisbio cat#64AERPEH)中提供的2种抗体在Thr202/Tyr204处磷酸化时选择性结合在ERK蛋白上所引起的。简而言之，将含8000个细胞/孔的12μl培养基/孔接种于384孔板中，并置于培养箱中(37℃，5％的CO2湿润的空气)至隔夜，次日，将平板以一式两份的测试化合物、达拉非尼和PLX8394(后两者作为对照)在下列最终药物浓度处理：10μM-3μM-1μM-0.3μM-0.1μM-0.03μM-0,01μM-0.003μM-0.001μM，所有孔均进行DMSO归一化，药物孵育1小时。然后，将试剂盒所附的4μl 4X裂解缓冲剂添加至孔中，然后将平板离心30秒(300rcf)，并在室温在平板振荡器上孵育1小时。

孵育结束时，添加4μL/孔的先进P-ERK抗体溶液(根据制造商的说明书制备)，然后将4μL/孔的穴状化合物(criptate)P-ERK抗体溶液(根据制造商的说明书制备)(Cisbiocat#64AERPEH)添加至测试孔中。

为了获得适当的数据归一化对照，所报导的未经药物处理的孔总是包括在每个平板中(根据制造商的说明书)：

对照和实验(μl)的p-ERK HTRF孔含量：

然后将平板在300rcf下离心30秒，密封以防止蒸发，并在黑暗中在室温孵育隔夜。

然后分析平板，并通过Pherastast FSX(BMG Labtech)仪器在665和620nM处收集荧光释出值。

根据公式比率＝信号(620nm)/信号(625nm)*10000处理所获得的荧光值，然后将空白试样的平均值从所有数值中减去。

将仅通过DMSO处理的细胞所得出的比率(减去空白试样)平均值视为100％，并通过将10μM达拉非尼处理的细胞所得出的比率(减去空白试样)的平均值视为0％，将数据归一化。将经归一化的点的平均值与S形曲线拟合并确定IC50。结果总结在表1中。生化测定证实了式(Ia)和(Ib)化合物对BRAF和BRAF^V600E的高亲和力。Kd为生化实验中的解离常数。

表1：化合物(Ia)和(Ib)对BRAF和BRAF^V600E具有高亲和力，并且对C端Src激酶(CSK)和淋巴细胞特异性酪氨酸蛋白激酶(LCK)具有高选择性。Kd为生化实验中的解离常数。如上所述在A375细胞系中测量IC50。

本发明的式(I)化合物的制备可依序或会聚合成路线进行。本发明的合成显示在以下一般流程中。用于进行所产生的产物的反应和纯化所需的技术为本领域技术人员已知。

更详细地，式(I)化合物可通过以下给定的方法、通过实例中所给定的方法或通过类似方法来制造。个别反应步骤的适当的反应条件为本领域技术人员已知。反应顺序不限于流程1中所呈现的顺序，然而，取决于起始物质及其相应反应性，反应步骤的顺序可自由改变。起始原料是可商购获得的，或可通过类似于下列给定的方法的方法、通过说明书或试验程序中所引用的参考文献中描述的方法或通过本领域已知的方法制备。

方案1

应当理解，本发明中的式(I)化合物可在官能团上衍生化以提供能够在体内转化回母体化合物的衍生物。

实验程序

(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(式(Ia)化合物)和(3S)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(式(Ib)化合物)

6-羟基-3-甲基-喹唑啉-4-酮

将2-氨基-5-羟基苯甲酸(10g，65.3mmol，Eq：1.0)和N-甲基甲酰胺(30g，29.9mL，503mmol，Eq：7.7)在145℃加热21小时45分钟，然后冷却至室温。将反应混合物以50mL H₂O稀释，并在室温搅拌20分钟，过滤收集所产生的沉淀物。将浅棕色固体以20mL水洗涤3次。将固体在甲苯中吸收并蒸发至干燥(3×)。将固体在高真空下在40℃真空干燥隔夜，得到呈浅棕色固体的标题化合物(10.3g，89％产率)。MS(ESI)m/z:177.1[M+H]⁺。

3,6-二氟-2-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯甲腈

将碳酸铯(3.22g，9.79mmol，Eq：1.15)在室温添加至含6-羟基-3-甲基喹唑啉-4-酮(1500mg，8.51mmol，Eq：1.0)的N,N-二甲基甲酰胺(35mL)的溶液中。将混合物在室温搅拌30分钟，然后添加2,3,6-三氟苯甲腈(1.47g，1.08ml，9.37mmol，Eq：1.1)。1小时后，将反应在冰上冷却，并用水(120mL)稀释。过滤收集所产生的固体，用冰水(100mL)和庚烷(100mL)洗涤并抽吸干燥。将固体在甲苯中吸收，并蒸发至干燥(3×)，然后真空干燥隔夜，得到呈浅棕色固体的标题化合物(2.58g，97％产率)。MS(ESI)m/z:314.1[M+H]+。

(3R)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺

将(R)-3-氟吡咯烷盐酸盐(1.8g，14.3mmol，Eq：1.2)添加至含硫酰胺(1.148g，11.9mmol，Eq：1.0)和三乙胺(2.42g，3.33mL，23.9mmol，Eq：2)的二噁烷(10mL)溶液中。将反应在密封管中在115℃搅拌15.5小时，然后冷却至室温并在真空中浓缩。将残余物用DCM稀释，用二氧化硅凝胶蒸发至干燥，并转移至柱中。通过快速色谱法纯化(40g二氧化硅，80％EtOAc)，得到呈白色结晶固体的标题化合物(1.82g，91％产率)。MS(ESI)m/z:169.1[M+H]⁺。

(3S)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺

将三乙胺(304mg，419μl，3.01mmol，Eq：2.0)添加至含硫酰胺(146mg，1.5mmol，Eq：1.0)和(S)-3-氟吡咯烷盐酸盐(234mg，1.8mmol，Eq：1.2)的二噁烷(1.3ml)悬浮液中。将反应在密封管中在115℃搅拌16小时35分钟，然后在真空中浓缩。将残余物用MeOH稀释，并用硅凝胶蒸发至干燥，并转移至柱中。通过快速色谱法纯化(40g二氧化硅，0-8％ MeOH/DCM)，得到呈浅黄色固体的标题化合物(193mg，75％产率)。MS(ESI)m/z:169.1[M+H]⁺。

(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(式(Ia)化合物)

将(R)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺(1.26g，7.51mmol，Eq：2.1)和碳酸铯(2.56g，7.87mmol，Eq：2.2)在氩气气氛下悬浮在干燥的DMF(10.2ml)中。将反应在50℃搅拌30分钟。将反应混合物冷却至室温并加入含3,6-二氟-2-((3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)氧基)苄腈(1.12g，3.58mmol，Eq：1.0)的DMF(25.5ml)溶液。将反应混合物在100℃搅拌15小时，然后在真空中浓缩。将残余物在含NH₄Cl(100mL)和EtOAc(100mL)的饱和水溶液中吸收。分离各相，并将水层进一步用2×100mL EtOAc萃取。合并的有机层用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。用EtOAc(3×100mL)反萃水层。将合并的有机萃取物用盐水(200mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩。用DCM和MeOH稀释残余物，并浓缩到二氧化硅上。通过快速色谱法进行纯化(120g，0.5-2％ MeOH/DCM)，得到灰白色固体，将其用1:1庚烷/DCM(20mL)在超声波震荡下粉碎，然后真空干燥，得到呈无色固体的标题化合物(1.087g，66％产率)。MS(ESI)m/z:426.2[M+H]⁺。手性SFC：RT＝4.594min[Chiralpak IC柱，4.6x250mm，5μm粒径(Daicel)；20-40％ MeOH，含0.2％ NHEt₂，历时8分钟；流量：2.5mL/min；140巴背压]。

(3S)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(式(Ib)化合物)

将(S)-3-氟吡咯烷-1-磺酰胺(181mg，1.08mmol，Eq：2.1)溶解在DMF(1.6ml)中。在室温加入碳酸铯(368mg，1.13mmol，Eq：2.2)并将反应混合物在50℃搅拌30分钟。将反应混合物冷却至室温并加入含3,6-二氟-2-((3-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-6-基)氧基)苄腈(160.8mg，513μmol，Eq：1.0)的DMF(4ml)溶液。将反应混合物在105℃搅拌2小时50分钟，然后在真空中浓缩。将残余物在DCM中吸收，并用饱和NH₄Cl水溶液洗涤。水层用DCM反萃两次。合并的有机层用Na₂SO₄干燥，过滤并蒸发。将残余物(棕色油状物)用DCM稀释并转移至柱中。通过快速色谱法进行纯化(80g，含0-100％ EtOAc的DCM)，得到固体，将其通过SFC进一步纯化，得到呈浅黄色固体的标题化合物(119mg，50％产率)。MS(ESI)m/z:426.2[M+H]⁺。手性SFC：RT＝4.411min[Chiralpak IC柱，4.6x 250mm，5μm粒径(Daicel)；20-40％ MeOH，含0.2％NHEt₂，历时8分钟；流量：2.5mL/min；140巴背压]。

2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺(式(II)化合物)

式(II)化合物可通过以下给定的方法、通过实例中所给定的方法或通过类似方法来制造。

使用Bruker公司的AVANCE III HD400(400MHz)进行NMR分析。NMR数据以ppm(百万分率)(δ)示出，并且将来自样品溶剂的氘锁定信号用作参考。

使用Shimadzu公司的配备超高效液相色谱仪(Nexera UC)的单四极质谱仪(LCMS-2020)或Waters公司的配备Acquity超高效液相色谱仪(UPLC或UPLC I-Class)的单四极质谱仪(SQD或SQD2)获得质谱数据。

使用下表2中列出的分析条件A至C中的一个分析条件进行高效液相色谱。在表2中，“TFA”代表三氟乙酸，“FA”代表甲酸。

表2：

表2(续)

直接使用可商购获得的试剂，无需进一步纯化。

所有非水反应均在无水溶剂中进行。

使用旋转蒸发仪进行减压浓缩和溶剂蒸馏。

如本文所用，“室温”意指约20℃至约25℃的温度。

3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-甲酰基苯甲酸甲酯(化合物a1)

将含3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-5-甲酰基苯甲酸(5.50g，13.1mmol)的甲苯(44mL)和MeOH(11mL)混合悬浮液冷却至0℃，加入10％重氮甲基三甲基硅烷己烷溶液(21.8mL，13.1mmol)，并在室温搅拌混合物64小时。向反应混合物加入乙酸(0.748mL)，然后减压浓缩。将所得残余物通过研磨(己烷/乙酸乙酯)纯化，得到呈无色固体的标题化合物(5.01g，88％)。LCMS m/z:436[M+H]⁺。HPLC滞留时间：1.00分钟(分析条件B)

3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-[(E)-[(4-甲基苯基)磺酰基亚肼基]甲基]苯甲酸甲酯(化合物a2)

将4-甲基苯磺酰肼(2.14g，11.5mmol)添加到含3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-甲酰基苯甲酸甲酯(化合物a1，5.00g，11.5mmol)的EtOH(100mL)悬浮液中，并在室温搅拌混合物3小时。减压浓缩反应混合物，并且然后加入己烷(150mL)。将混合物冷却至0℃并过滤，然后用己烷(30mL)洗涤，得到呈固体的标题化合物(7.05g，定量)。LCMS m/z:604[M+H]⁺。HPLC滞留时间：1.06分钟(分析条件B)

N-(2,4-二甲氧基苄基)-3-氟-4-碘吡啶-2-胺(化合物a3)

将三乙胺(3.63mL，26.0mmol)和1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺(3.26mL，21.7mmol)加入到含2,3-二氟-4-碘吡啶(2.09g，8.67mmol)的NMP(32mL)溶液中，并在100℃搅拌混合物1.5小时。向反应混合物中加入水，并用乙酸乙酯进行萃取。有机层用13％盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并且在过滤掉干燥剂后，减压浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)纯化，得到呈油状物的标题化合物(3.20g，95％)。LCMS m/z:389[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.94分钟(分析条件C)

[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基氨基]-3-氟吡啶-4-基]硼酸(化合物a4)

将含N-(2,4-二甲氧基苄基)-3-氟-4-碘吡啶-2-胺(化合物a3，2.70g，6.96mmol)、[1,1-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)二氯甲烷加成产物(568mg，0.696mmol)、乙酸钾(2.05g，20.9mmol)和双(频哪醇)二硼(2.65g，10.4mmol)的1,4-二噁烷溶液(27mL)在氮气气氛下在90℃搅拌5小时，然后在110℃搅拌19小时。将反应混合物减压浓缩，并将所得残余物通过反相柱色谱法(0.1％甲酸水溶液/0.1％甲酸乙腈溶液)纯化，得到呈油状物的标题化合物(2.07g，97％)。LCMS m/z:307[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.44分钟(分析条件C)

5-[[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基氨基]-3-氟吡啶-4-基]甲基]-3,4-二氟-2-(2- 氟-4-碘苯胺基)苯甲酸甲酯(化合物a5)

将含3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-[(E)-[(4-甲基苯基)磺酰基亚肼基]甲基]苯甲酸甲酯(化合物a2，1.30g，2.16mmol)、[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基氨基]-3-氟吡啶-4-基]硼酸(化合物a4，1.98g，6.46mmol)和碳酸钾(357mg，2.59mmol)的1,4-二噁烷悬浮液(59mL)在氮气气氛下在100℃搅拌2.5小时，然后在110℃搅拌3小时。向反应混合物中加入乙酸乙酯，然后用水和13％盐水洗涤该反应混合物。有机层用无水硫酸钠干燥，并且在滤出干燥剂后，减压浓缩。将所得残余物通过硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)纯化，得到呈泡沫状物的标题化合物(524mg，36％)。LCMS m/z:682[M+H]⁺。HPLC滞留时间：1.03分钟(分析条件B)

5-[(2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯甲酸甲酯 (化合物a6)

将含5-[[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基氨基]-3-氟吡啶-4-基]甲基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯甲酸甲酯(化合物a5，523mg，0.768mmol)的DCM溶液(16mL)冷却至0℃，加入三氟乙酸(15.7mL)，并在室温搅拌混合物1小时。将反应混合物减压浓缩，并且所得残余物通过反相柱色谱法(0.05％三氟乙酸水溶液/0.05％三氟乙酸乙腈溶液)纯化，得到呈油状物的标题化合物(321mg,79％)。LCMS m/z:532[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.55分钟(分析条件B)

5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸盐酸盐(化合物a7)

将含5-[(2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯甲酸甲酯(化合物a6，4.00g，7.53mmol)的THF(64mL)和水(32mL)混合溶液冷却至0℃，加入氢氧化锂一水合物(948mg，22.6mmol)，并将混合物在室温搅拌3.5小时。冷却至0℃后，向反应混合物加入5M盐酸(15.1mL)，然后减压浓缩。所得残余物用水和TBME洗涤，得到呈紫色化合物的标题化合物(4.20g，定量)。LCMS m/z:518[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.68分钟(分析条件C)

5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺(化合物a8)

将含5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酸盐酸盐(化合物a7，200mg，0.361mmol)的无水DMF溶液(3.6mL)冷却至0℃，加入HOOBt(67.8mg，0.415mmol)和EDC·HCl(80.0mg，0.415mmol)，并在室温搅拌混合物1.5小时。进一步加入HOOBt(8.8mg，0.054mmol)和EDC·HCl(10.4mg，0.054mmol)并在室温搅拌1小时后，在0℃加入7M氨MeOH溶液(0.103mL，0.722mmol)和DIPEA(0.189mL，1.08mmol)并将混合物在室温搅拌30分钟。将水和饱和碳酸氢钠水溶液以1:1加入到反应混合物中，并用乙酸乙酯进行萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，并且在滤出干燥剂后，减压浓缩。将所得残余物溶解在乙酸乙酯(1mL)中，并加入己烷(10mL)。将所得固体过滤并用己烷洗涤，得到呈无色固体的标题化合物(162mg，87％)。LCMS m/z:517[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.64分钟(分析条件C)

5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-2-((4-环丙基-2-氟苯基)氨基)-3,4-二氟苯甲酰胺(化合物a9)

将四(三苯基膦)钯(0)(11.2mg，9.68μmol)和0.5M溴化环丙基锌(1.94mL，0.969mmol)加入含5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)氨基)苯甲酰胺(化合物a8，100mg，0.194mmol)的无水THF溶液(1.9mL)中，并在氮气气氛下在室温搅拌混合物2.5小时。向反应混合物加入乙酸乙酯(5mL)，然后用硅藻土过滤并用乙酸乙酯(3mL)洗涤。滤出物用水和饱和盐水洗涤，并且有机层用无水硫酸钠干燥，并在滤出干燥剂后减压浓缩。将二氯甲烷/己烷(1/10，11mL)加入到所得残余物中，滤出固体并用己烷(3mL)洗涤，得到呈无色固体的标题化合物a9(63.4mg，76％)。LCMS m/z:431[M+H]⁺。HPLC滞留时间：0.61分钟(分析条件C)

4-硝基苯基氨基磺酸甲酯(化合物r1)

将含4-硝基苯酚(5.00g，35.9mmol)和三乙胺(11.3mL，81.0mmol)的二氯甲烷溶液(60mL)冷却至-78℃，加入含甲基氨磺酰氯(5.82g，44.9mmol)的二氯甲烷溶液(15mL)，并将混合物在-78℃搅拌1.5小时。将反应混合物减压浓缩，并将所得残余物经硅胶柱色谱法(己烷/乙酸乙酯)和反相柱色谱法(0.1％甲酸水溶液/0.1％甲酸乙腈溶液)纯化，得到呈无色固体的标题化合物(5.51g，66％)。HPLC滞留时间：0.63分钟(分析条件C)。¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ：8.31(2H,m)，7.46(2H,m)，4.68(1H,m)，3.00(3H,d,J＝5.4Hz)。

2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4- 基]甲基]苯甲酰胺(式(II)化合物)

将5-((2-氨基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-2-((4-环丙基-2-氟苯基)氨基)-3,4-二氟苯甲酰胺(化合物a9，2.47g，5.74mmol)溶解在无水DMF(28.7mL)中，加入吡啶(2.78mL，34.4mmol)和4-硝基苯基氨基磺酸甲酯(化合物r1，4.00g，17.2mmol)并将混合物在40℃搅拌2.5小时。将反应混合物冷却至室温，并加入水(24.7mL)。进一步加入乙腈(3mL)和水(19.8mL)并搅拌10分钟后，滤出固体。将所得固体用水/乙腈(1/1，49.4mL)洗涤，得到呈无色固体的标题化合物(2.56g，85％)。LCMS m/z:524[M+H]⁺。HPLC滞留时间：1.13分钟(分析条件A)。

2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4- 基]甲基]苯甲酰胺钠盐(化合物IIa)

(1)化合物IIa(I型)的制备

将丙酮(10.6mL)和DMSO(1.51mL)加入到2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺(式(II)化合物，3.03g)中，在室温将其溶解。向溶液中加入20％乙醇钠乙醇溶液(3.03mL)和化合物II(下述样品IIb)的钠盐的晶种，将混合物在室温搅拌1小时，然后加入乙醇(15.1mL)，并在室温搅拌混合物4小时。然后加入乙醇(15.1mL)，并在室温搅拌混合物4小时，得到呈粉末晶体的化合物II的钠盐(2.74g)(样品IIa(I型))。

(2)样品IIb的制备

向式(II)化合物(53.6mg)加入20％乙醇钠乙醇溶液(0.054mL)和甲基异丁基酮(0.161mL)，在室温搅拌混合物30分钟，然后加入甲基异丁基酮(0.161mL)并在60℃继续搅拌4天。然后加入DMSO(0.054mL)，并在60℃搅拌混合物5小时，得到呈粉末晶体的化合物II的钠盐(25.6mg)(样品IIb)。

化合物II的MEK1抑制活性

化合物II的MEK1抑制活性通过下述荧光偏振法进行评价。

将测试化合物CRAF(Thermo Fisher Scientific公司)、MEK1(Thermo FisherScientific公司)和ERK2(Carna Biosciences公司)在含有ATP的缓冲剂中混合，并在30℃反应60分钟。然后加入FAM标记的ERKtide(Molecular Devices公司)，并在30℃继续反应45分钟。进一步加入IMAP(登记商标)渐进式结合试剂(Progressive Binding Reagent)(Molecular Devices公司)，并在室温继续反应15分钟。反应后，用荧光读板器测量荧光偏振，并基于相对于不含测试化合物的对照的抑制百分比计算50％抑制浓度(IC50)。当测试化合物为化合物II时，测得针对MEK1活性的IC50为17nM。

本发明特别涉及：

一种BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该BRAF抑制剂为式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该式(I)化合物为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、曲美替尼和贝美替尼，或其药用盐；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为考比替尼或其药用盐；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羟基-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]半富马酸甲酮；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羟基-3-[(2S)-哌啶-2-基]氮杂环丁烷-1-基]半琥珀酸甲酮；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用作药物；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗；

一种根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合用于制备用于治疗或预防癌症的药物的用途；

一种治疗或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合；

一种药物组合物，其包含根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合以及一种或多种药用赋形剂；

如本文所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂和MEK抑制剂两者口服施用；

如本文所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂与该MEK抑制剂同时施用；

根据本发明的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂和该MEK抑制剂共同配制；

根据本发明的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂与该MEK抑制剂依序施用；

根据本发明使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症为甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌；

根据本发明使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症与BRAF^V600突变有关；

根据本发明使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症为BRAF^V600突变阳性的不可切除或转移性癌症；

如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中BRAF^V600突变使用包含以下项的方法确定：(a)对从该患者的肿瘤组织和/或体液的样品提取的核酸(例如DNA)进行PCR或测序；以及(b)确定该样品中BRAF^V600的表达；

根据本发明使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其包含一种或多种选自以下项的另外的抗癌剂：MEK降解剂、EGFR抑制剂、EGFR降解剂、HER2和/或HER3的抑制剂、HER2和/或HER3的降解剂、SHP2抑制剂、SHP2降解剂、Axl抑制剂、Axl降解剂、ALK抑制剂、ALK降解剂、PI3K抑制剂、PI3K降解剂、SOS1抑制剂、SOS1降解剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径的调节剂、细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂和抗体药物缀合物；

如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合用于制备用于治疗或预防癌症的药物的用途，其中该BRAF抑制剂为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺或其药用盐；

根据本发明的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合用于制备根据本发明的药物的用途，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、曲美替尼和贝美替尼，或选自其药用盐；

一种治疗或预防癌症的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其中该BRAF抑制剂为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺或其药用盐；

根据本发明的治疗或预防癌症的方法，其中该癌症选自甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌和非小细胞肺癌；

根据本发明的治疗或预防癌症的方法，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、曲美替尼和贝美替尼，或其药用盐；

如本文所述的药物组合物，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、贝美替尼、曲美替尼、司美替尼(selumetinib)、匹玛舍替(pimasertib)、瑞美替尼(refametinib)、N-[2(R),3-二羟基丙氧基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺(PD-325901)、2-(2-氯-4-碘苯基氨基)-N-(环丙基甲氧基)-3,4-二氟苯甲酰胺(Cl-1040)和3-[2(R),3-二羟基丙基]-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基氨基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733)；

如本文所述的药物组合物，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯基氨基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、曲美替尼和贝美替尼，或其药用盐；

如本文所述的药物组合物，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐；

如本文所述的药物组合物，其中该MEK抑制剂为考比替尼或其药用盐；

如本文所述的药物组合物，其中该式(I)化合物为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺；

如本文所述的药物组合物，其中该式(I)化合物为(3S)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌，其中该BRAF抑制剂和该MEK抑制剂口服施用；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌，其中第一组合物与第二组合物同时施用；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌，其中第一组合物和第二组合物共同配制；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌，其中该第一组合物与该第二组合物依序施用；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，其中该癌症与BRAF突变有关；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，其中该癌症为BRAF^V600突变阳性不可切除或转移性癌症，特别是BRAF^V600E或BRAF^V600K突变阳性不可切除或转移性癌症；

如本文所述的药物组合物，其用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌，其中BRAF^V600突变使用包含以下项的方法确定：(a)对从该患者的肿瘤组织和/或体液的样品提取的核酸(例如，DNA)进行PCR或测序；和(b)确定该样品中BRAF^V600的表达；

一种如本文所述的药物组合物用于治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌的用途；以及

如本文所述的药物组合物用于制备用于治疗或预防癌症的药物的用途，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌。

根据本发明的另外的实施例为：

[1]一种用于与MEK抑制剂组合来治疗或预防癌症的化合物，其中该化合物为式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

[2]一种药物组合物，其包含根据[1]所述的化合物和一种或多种药用赋形剂，其用于与MEK抑制剂组合来治疗或预防癌症。

[3]一种根据[1]所述的化合物在制造用于与MEK抑制剂组合来治疗或预防癌症的药物中的用途。

[4]一种治疗或预防癌症的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的MEK抑制剂和根据[1]所述的化合物的组合。

[5]根据[1]至[4]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该式(I)化合物为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺。

[6]根据[1]至[5]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼(cobimetinib)、曲美替尼(trametinib)和贝美替尼(binimetinib)，或选自其药用盐或溶剂化物。

[7]根据[1]至[6]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐或溶剂化物。

[7.1]根据[1]至[7]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐。

[7.2]根据[1]至[7.1]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐。

[8]根据[1]至[6]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该MEK抑制剂为考比替尼或其药用盐或溶剂化物。

[9]根据[1]至[8]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该式(I)化合物和MEK抑制剂两者均口服施用。

[10]根据[1]至[9]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该式(I)化合物与MEK抑制剂同时施用。

[11]根据[1]至[10]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该式(I)化合物与MEK抑制剂依序施用。

[12]一种用于与BRAF抑制剂组合来治疗或预防癌症的化合物，其中该化合物为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐或溶剂化物。

[13]一种药物组合物，其包含根据[12]所述的化合物和一种或多种药用赋形剂，其用于与BRAF抑制剂组合来治疗或预防癌症。

[14]一种根据[12]所述的化合物在制造用于与BRAF抑制剂组合来治疗或预防癌症的药物中的用途。

[15]一种治疗或预防癌症的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的BRAF抑制剂和根据[12]所述的化合物的组合。

[16]根据[12]至[15]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中BRAF抑制剂为式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

[17]根据[16]所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该式(I)化合物为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺。

[18]根据[12]至[17]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中根据[12]所述的化合物和BRAF抑制剂两者均口服施用。

[19]根据[12]至[18]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中根据[12]所述的化合物与BRAF抑制剂同时施用。

[20]根据[12]至[19]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中根据[12]所述的化合物与BRAF抑制剂依序施用。

[21]根据[12]至[20]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中根据[12]所述的化合物为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐。

[22]根据[12]至[21]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中根据[12]所述的化合物为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐。

[23]根据[1]至[22]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该癌症为甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌。

[24]根据[1]至[23]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该癌症与BRAFV600突变有关。

[25]根据[1]至[24]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中该癌症为BRAFV600突变阳性不可切除或转移性癌症。

[26]根据[1]至[25]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其中BRAFV600突变使用包含以下项的方法确定：(a)对从该患者的肿瘤组织和/或体液的样品提取的核酸(例如DNA)进行PCR或测序；以及(b)确定该样品中BRAFV600的表达。

[27]根据[1]至[26]中任一项所述的化合物、药物组合物、用途或方法，其包含一种或多种选自以下项的另外的抗癌剂：MEK降解剂、EGFR抑制剂、EGFR降解剂、HER2和/或HER3的抑制剂、HER2和/或HER3的降解剂、SHP2抑制剂、SHP2降解剂、Axl抑制剂、Axl降解剂、ALK抑制剂、ALK降解剂、PI3K抑制剂、PI3K降解剂、SOS1抑制剂、SOS1降解剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径的调节剂、细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂和抗体药物缀合物。

[101]一种BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该MEK抑制剂为式(II)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

[102]根据[101]所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该式(II)化合物为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺。

[103]根据[101]或[102]所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该BRAF抑制剂选自(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺、维莫非尼、达拉非尼和康奈非尼，或其药用盐。

[104]根据[101]至[103]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该BRAF抑制剂为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺或其药用盐。

[105]根据[101]至[103]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该BRAF抑制剂为康奈非尼或其药用盐。

[106]根据[101]至[105]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用作药物。

[107]根据[101]至[105]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。

[108]一种根据[101]至[105]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合用于制备用于治疗或预防癌症的药物的用途。

[109]一种治疗或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的根据[101]至[105]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合。

[110]一种药物组合物，其包含根据[101]至[105]中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合和一种或多种药用赋形剂。

[111]根据[106]至[110]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂和该MEK抑制剂两者口服施用。

[112]根据[106]至[111]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂与该MEK抑制剂同时施用。

[113]根据[106]至[112]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂和该MEK抑制剂共同配制。

[114]根据[106]至[111]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该BRAF抑制剂与该MEK抑制剂依序施用。

[115]根据[106]至[108]中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症为甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌。

[116]根据[106]至[109]中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症与BRAF^V600突变有关。

[117]根据[106]至[109]中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中该癌症为BRAF^V600突变阳性的不可切除或转移性癌症。

[118]根据[106]至[109]中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中BRAF^V600突变使用包含以下项的方法确定：(a)对从该患者的肿瘤组织和/或体液的样品提取的核酸(例如DNA)进行PCR或测序；以及(b)确定该样品中BRAF^V600的表达。

[119]根据[106]至[109]中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其包含一种或多种选自以下项的另外的抗癌剂：MEK降解剂、EGFR抑制剂、EGFR降解剂、HER2和/或HER3的抑制剂、HER2和/或HER3的降解剂、SHP2抑制剂、SHP2降解剂、Axl抑制剂、Axl降解剂、ALK抑制剂、ALK降解剂、PI3K抑制剂、PI3K降解剂、SOS1抑制剂、SOS1降解剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径的调节剂、细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂和抗体药物缀合物。

[120]根据[101]至[119]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐。

[121]根据[101]至[120]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺。

[122]根据[101]至[120]中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中该MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐。

本发明的某个实施例涉及一种治疗或预防癌症，特别是甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌的方法，该方法包括向有此需要的患者施用有效量的如本文所述的药物组合物；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作脑转移瘤的治疗性和/或预防性治疗的药物；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作脑转移瘤的治疗性和/或预防性治疗的药物，其中原发瘤为黑素瘤或非小细胞肺癌；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中患者未经靶向疗法治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中患者未经靶向疗法治疗，并且其中该患者接受过检查点抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中患者接受过靶向疗法治疗，并且其中该患者接受过检查点抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中该癌症先前通过手术治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中患者未经BRAF抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作BRAF抑制剂抗性肿瘤的治疗性和/或预防性治疗的药物；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用于治疗和/或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌，其中患者未经MEK抑制剂治疗；并且

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作MEK抑制剂抗性肿瘤的治疗性和/或预防性治疗的药物。

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作个体中癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用选自康奈非尼、达拉非尼和康奈非尼的BRAF抑制剂和/或选自贝美替尼、曲美替尼和考比替尼的MEK抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用康奈非尼和贝美替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用达拉非尼和曲美替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用维莫非尼和考比替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的药物组合物，其用作个体中癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用检查点抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗，其中患者未经靶向疗法治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗，其中患者未经靶向疗法治疗，并且其中该患者接受过检查点抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗，其中患者接受过靶向疗法治疗，并且其中该患者接受过检查点抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗，其中患者未经BRAF抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用作BRAF抑制剂抗性肿瘤的治疗性和/或预防性治疗的药物；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗，其中患者未经MEK抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于MEK抑制剂抗性肿瘤的治疗性和/或预防性治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用作个体中癌症的治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用选自康奈非尼、达拉非尼和康奈非尼的BRAF抑制剂和/或选自贝美替尼、曲美替尼和考比替尼的MEK抑制剂治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用康奈非尼和贝美替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用达拉非尼和曲美替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用作个体中治疗性和/或预防性治疗的药物，该个体先前用维莫非尼和考比替尼治疗；

本发明的某个实施例涉及如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，其用于个体中癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的治疗性和/或预防性治疗，该个体先前用检查点抑制剂治疗；

在一个实施例中，本发明提供了一种试剂盒，其包含如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂，处方信息也称为“传单”、泡罩包装或瓶子(HDPE或玻璃)和容器。该处方信息优选地包括给患者的关于施用如本文所述的该BRAF抑制剂和该MEK抑制剂的组合的建议；

在一个实施例中，治疗的个体变得对如本文所述的该先前治疗难治性；并且

在一个实施例中，治疗的个体在如本文所述的该先前治疗期间出现脑转移。

本发明的某个实施例涉及一种药物组合物，其包含如本文所述的式(I)化合物或其药用盐或溶剂化物，其中至少一个取代基包含至少一个放射性同位素。放射性同位素的具体实例为²H、³H、¹³C、¹⁴C和¹⁸F。

此外，在适用的情况下，本发明包括式(I)化合物的所有光学异构体，即非镜像异构体、非镜像异构混合物、外消旋混合物、所有其对应的镜像异构体和/或互变异构体及其溶剂化物。

此外，在适用的情况下，本发明包括式MEK抑制剂的所有光学异构体，即非镜像异构体、非镜像异构混合物、外消旋混合物、所有其对应的镜像异构体和/或互变异构体及其溶剂化物。

如果需要，可分离本发明的化合物的外消旋混合物，从而分离出个别的镜像异构体。可通过本领域已知的方法进行分离，例如将化合物的外消旋混合物与镜像异构性纯的化合物偶合以形成非镜像异构混合物，然后通过标准方法，例如分化结晶作用或色谱法分离个别的非镜像异构体。

在提供光学上纯的镜像异构体的实施例中，光学上纯的镜像异构体意指化合物含有＞90％(重量)的所需异构体，特别是＞95％(重量)的所需异构体，或更特别是＞99％(重量)的所需异构体，该重量百分比基于化合物的异构体的总重量。手性纯的或手性富集的化合物可通过手性选择性合成或通过镜像异构体分离来制备。镜像异构体的分离可在最终产物上或替代地在适当的中间体上进行。

在一个实施例中，一种或多种另外的抗癌剂与如本文所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂组合使用，其中另外的抗癌剂选自：MEK降解剂、EGFR抑制剂、EGFR降解剂、HER2和/或HER3的抑制剂、HER2和/或HER3的降解剂、SHP2抑制剂、SHP2降解剂、Axl抑制剂、Axl降解剂、ALK抑制剂、ALK降解剂、PI3K抑制剂、PI3K降解剂、SOS1抑制剂、SOS1降解剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径的调节剂、细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂和抗体药物缀合物。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为EGFR抑制剂。EGFR抑制剂的非限制性实例包括西妥昔单抗(cetuximab)帕尼单抗(panitumumab)/>奥希替尼(osimertinib)(merelectinib，/>)、厄洛替尼(erlotinib)吉非替尼(gefitinib)/>耐昔妥珠单抗(necitumumab)(PortrazzaTM)、来那替尼(neratinib)/>拉帕替尼(lapatinib)/>凡德他尼(vandetanib)/>和布加替尼(brigatinib)/>EGFR抑制剂的其他实例是本领域已知的。在一些实施例中，EGFR抑制剂为变构EGFR抑制剂。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为HER2和/或HER3抑制剂。HER2和/或HER3抑制剂的非限制性实例包括拉帕替尼(Iapatinib)、卡奈替尼(canertinib)、(E)-2-甲氧基-N-(3-(4-(3-甲基-4-(6-甲基吡啶-3-基氧基)苯基氨基))喹唑啉-6-基)烯丙基)乙酰胺(GP-724714)、沙普替尼(sapitinib)、7-[[4-[(3-乙炔基苯基)氨基]-7-甲氧基-6-喹唑啉基]氧基]-N-羟基-庚酰胺(CUDC-101)、木利替尼(mubritinib)、6-[4-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-N-[(1R)-1-苯乙基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺(AEE788)、妥卡替尼(irbinitinib)(图卡替尼(tucatinib))、波奇替尼(poziotinib)、N-[4-[1-[4-(4-乙酰基-1-吡嗪基)环己基]-4-氨基-3-吡唑并[3,4-d]嘧啶基]-2-甲氧基苯基]-1-甲基-2-吲哚甲酰胺(KIN001-111)、7-环戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺(KIN001-051)、6,7-二甲氧基-N-(4-苯氧基苯基)喹唑啉-4-胺(KIN001-30)、达沙替尼(dasatinib)和博舒替尼(bosutinib)。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为SHP2抑制剂。SHP2抑制剂的非限制性实例包括6-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺(SHP099)、[3-[(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基]甲醇(RMC-4550)RMC-4630、TNO155以及在WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO2015/107495、WO2019/075265、PCT/U82019/056786和PCT/l82020/053019中公开的化合物。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为PI3K抑制剂。非限制性实例包括布帕尼西(buparlisib)(BKM120)、阿培利西(alpelisib)(BYL719)、沙托利塞(samotolisib)(LY3023414)、8-[(1R)-1-[(3,5-二氟苯基)氨基]乙基]-N,N-二甲基-2-(吗啉-4-基)-4-氧代-4H-色烯-6-甲酰胺(AZD8186)、泰那西布(tenalisib)(RP6530)、盐酸伏他利塞(voxtalisib hydrochloride)(SAR-245409)、吉达利塞(gedatolisib)(PF-05212384)、帕奴利塞(panulisib)(P-7170)、他塞利西布(taselisib)(GDC-0032)、反式-2-氨基-8-[4-(2-羟基乙氧基)环己基]-6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮(PF-04691502)、杜韦利西布(duvelisib)(ABBV-954)、N2-[4-氧代-4-[4-(4-氧代-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-2-基)吗啉-4-鎓-4-基甲氧基]丁酰基]-L-精氨酰-甘氨酰-L-天冬氨酰-L-丝氨酸乙酸盐(SF-1126)、匹替利司(pictilisib)(GDC-0941)、2-甲基-1-[2-甲基-3-(三氟甲基)苄基]-6-(吗啉-4-基)-1H-苯并咪唑-4-羧酸(GSK2636771)、艾代拉里斯(idelalisib)(GS-1101)、甲苯磺酸乌帕拉里斯(umbralisib tosylate)(TGR-1202)、匹替利司(GDC-0941)、盐酸库潘尼西(copanlisib hydrochloride)(BAY 84-1236)、达克利司(dactolisib)(BEZ-235)、1-(4-[5-[5-氨基-6-(5-叔丁基-1,3,4-噁二唑)-2-基)吡嗪-2-基]-1-乙基-1-H-1,2,4-三唑-3-基]哌啶-1-基)-3-羟基丙烷-1-酮(AZD-8835)、5-[6,6-二甲基-4-(吗啉-4-基)-8,9-二氢-6H-[1,4]噁嗪并[4,3-e]嘌呤-2-基]嘧啶-2-胺(GDC-0084)依维莫司(everolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、哌立福新(perifosine)、西罗莫司(sirolimus)和替西罗莫司(temsirolimus)。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为ALK抑制剂。非限制性实例包括克唑替尼(crizotinib)(PF-02341066)、色瑞替尼(ceritinib)(LDK378)、艾乐替尼(alectinib)(安圣莎(alecensa))、布加替尼(AP26113)、劳拉替尼(lorlatinib)(PF-6463922)、恩沙替尼(ensartinib)(X-396)、恩曲替尼(entrectinib)(RXDX-101)、瑞波替尼(reprotectinib)(TPX-0005)、贝扎替尼(belizatinib)(TSR-011)、阿克替尼(alkotinib)(ZG-0418)、福瑞替尼(foritinib)(SAF-189)、CEP-37440、TQ-B3139、PLB1003和TPX-0131。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为检查点抑制剂。在一些实施例中，该检查点抑制剂为CTLA-4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂。在一些实施例中，CTLA-4抑制剂为伊匹木单抗(ipilimumab)或曲美木单抗(tremelimumab)(GP-675,206)。在一些实施例中，PD-1抑制剂为帕博利珠单抗(pembrolizumab)/>纳武利尤单抗(nivolumab)/>和RN888。在一些实施例中，PD-L1抑制剂为阿特珠单抗(atezolizumab)/>阿维鲁单抗(avelumab)/>或德瓦鲁单抗(durvalumab)(Imfinzi^TM)。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为抗体药物缀合物。抗体药物缀合物的非限制性实例包括吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(MylotargTM)、伊诺珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)本妥昔单抗维多汀缀合物(brentuximab vedotin)/>曲妥珠单抗-美坦新缀合物(ado-trastuzumabemtansine)(TDM-f；/>)、米妥昔单抗索星缀合物(mirvetuximab soravtansine)(IMGN853)和阿耐妥单抗雷星缀合物(anetumab ravtansine)。

在一些实施例中，另外的抗癌剂中的一种为抗体，诸如贝伐单抗(bevacizumab)(MvastiTM，)、曲妥珠单抗/>阿维鲁单抗/>利妥昔单抗(rituximab)(MabTheraTM，/>)、依决洛单抗(edrecolomab)(Panorex)、达雷木单抗(daratumuab)/>奥拉木单抗(olaratumab)(LartruvoTM)、奥法木单抗(ofatumumab)/>阿仑珠单抗(alemtuzumab)/>西妥昔单抗奥戈伏单抗(oregovomab)、帕博利珠单抗/>地努妥昔单抗(dinutiximab)/>奥比妥珠单抗(obinutuzumab)/>曲美木单抗(GP—675,206)、雷莫昔单抗(ramucirumab)/>乌妥昔单抗(ublituximab)(TG-1101)、帕尼单抗/>埃罗妥珠单抗(elotuzumab)(EmplicitiT'V')、耐昔妥珠单抗(PortrazzaT'V')、西妥珠单抗(cirmtuzumab)(UC-961)、替伊莫单抗(ibritumomab)艾萨妥昔单抗(isatuximab)(SAR650984)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、非苏木单抗(fresolimumab)(GC1008)、利瑞鲁单抗(Iirilumab)(INN)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)/>非克拉珠单抗(ficlatuzumab)(AV-299)、地诺单抗(denosumab)/>加尼妥单抗(ganitumab)、乌瑞芦单抗(urelumab)、匹定利珠单抗(pidilizumab)、阿麦妥单抗(amatuximab)、博纳吐单抗(blinatumomab)(AMG103；)或米哚妥林(midostaurin)(Rydapt)。

本发明的另一个实施例提供了含有一种或多种组合物的药物组合物，其中每种组合物含有一种或多种根据本发明使用的化合物和一种或多种治疗惰性载体、稀释剂或赋形剂，以及制备此类药物组合物的方法。在一个实例中，可通过在适当pH在环境温度中，以及在所需的纯度将式(I)化合物与生理学上可接受的载体(即，在采用的剂量和浓度对接受者无毒的载体)混合来配制成生药(galenical)施用形式。调配物的pH主要取决于化合物的特定用途和浓度，但任何情况下都优选范围皆为约3至约8。在一个实例中，式(I)化合物在乙酸乙酯缓冲剂(pH 5)中调配。在另一个实施例中，式(I)化合物是无菌的。化合物可例如以固体或无定形组合物、作为冻干制剂或者作为水溶液形式储存。在一个实例中，可通过在适当pH下在环境温度中，以及在所需的纯度下将MEK抑制剂与生理学上可接受的载体(即，在采用的剂量和浓度下对接受者无毒的载体)混合来配制成生药(galenical)施用形式。调配物的pH主要取决于化合物的特定用途和浓度，但任何情况下都优选范围皆为约3至约8。在一个实例中，MEK抑制剂在乙酸盐缓冲剂中配制，pH值为5。在另一个实施例中，MEK抑制剂是无菌的。MEK抑制剂可例如以固体或无定形组合物、以冻干调配物或以水溶液储存。

组合物将按照与良好医学实践一致的方式进行调配、给药和施用。在此情况中考虑的因素包括待治疗的特定疾病、待治疗的特定哺乳动物、个别患者的临床状况、疾病原因、递送药剂的部位、施用方法、施用日程和医疗从业人员已知的其他因素。

如本文所用，术语“药用载体”或“药用赋形剂”旨在包括任何和所有与药物施用兼容的材料，包括溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂以及其他与药物施用兼容的材料和化合物。除非任何常规介质或药剂与活性化合物不兼容，否则预期其可用于本发明的组合物中。补充活性化合物也可加入组合物中。

药物组合物可以通过将如本文所述的BRAF抑制剂和/或MEK抑制剂与药用无机或有机载体或赋形剂一起加工而获得。可将乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等用作例如片剂、包衣锭、糖衣锭和硬质明胶胶囊的此类载体。软质明胶胶囊的适当载体为例如植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。但是，依据活性物质的性质，在软质明胶胶囊的情况下，通常不需要载体。用于产生溶液和糖浆的适当载体为例如水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的适当载体为例如天然或硬化油、蜡、脂肪、半流质或液体多元醇等。

此外，药物组合物可含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、调味剂、用于改变渗透压的盐类、缓冲剂、遮蔽剂或抗氧化剂。它们也可还含有其他治疗上有价值的物质。

单独或组合的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的药物组合物可以通过将具有所需纯度的活性成分与任选的药用载体、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版，Osol，A.(ed.)(1980))混合，以冻干制剂或水溶液的形式制成。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在采用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐及其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基芐基氯化铵；氯化六甲双铵；氯化苯铵；氯化本索宁；苯酚、丁醇或芐醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂(例如EDTA)；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，诸如钠；金属配合物(例如，锌蛋白配合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。

BRAF抑制剂和MEK抑制剂的药物组合物包括适合口服施用、鼻腔施用、局部(包括口腔和舌下)施用、直肠施用、阴道施用和/或肠胃外施用的那些组合物。该组合物可以方便地以单位剂型存在并且可以通过医药领域中众所周知的任何方法制备。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主和特定施用模式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常是产生治疗效果的BRAF抑制剂或MEK抑制剂的量。通常，在百分之一百下，该量为活性成分的约1％至约90％，优选约5％至约70％，最优选约10％至约30％。制备这些组合物的方法包括将BRAF抑制剂或MEK抑制剂与载体和任选的一种或多种辅助成分结合的步骤。一般而言，通过使BRAF抑制剂和MEK抑制剂与液体载体或细分的固体载体或两者均匀且紧密地缔合，然后(必要时)使产品成型来制备药物组合物。适合口服施用的药物组合物可以为胶囊剂、扁囊剂、香囊剂、丸剂、片剂、片剂(使用调味主要成分，通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、粉剂、颗粒剂或作为水性或非水性液体中的溶液或悬浮液，或作为水包油或油包水液体乳液，或作为酏剂或糖浆，或作为片剂(使用惰性主要整份，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口水等，每一者都含有预定量的BRAF抑制剂和MEK抑制剂作为活性成分。BRAF抑制剂和MEK抑制剂也可以作为丸剂、冲剂或糊剂而施用。

在本发明的进一步实施例中，将BRAF抑制剂和MEK抑制剂配制成一种或两种单独的药物组合物。

活性成分也可包埋在例如透过凝聚技术或透过接口聚合制备的微囊(例如，分别为羟甲基纤维素微囊或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊)中、胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米颗粒和纳米微囊(nanocapsule))中或粗滴乳状液中。此类技术公开于Remington'sPharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.(主编)(1980)中。

用于体内施用的制剂必须是无菌的。无菌性可易于例如通过无菌滤膜过滤来达成。

剂量可在较宽界限内改变，且当然在各种特定情况下都必需根据个人需要调整。在口服施用的情况下，成人的剂量可在每天约0.01mg至约1000mg的通式(I)化合物或其对应量的药用溶剂化物之间改变。每日剂量可以单一剂量或均分剂量施用，且此外，当发现有指示时，也可超过上限。

以下实例举例说明本发明而非限制本发明，而仅作为其代表。药物组合物方便地含有约1-500mg，特别是1-100mg的式(I)化合物。药物组合物方便地含有约1-500mg，特别是1-100mg的式(II)化合物。在某些实施例中，含有式(I)化合物的药物组合物另外含有约1-500mg，特别是1-100mg固定剂量组合的MEK抑制剂。

根据本发明的组合物的非限制性实例为：

实例A

以下组合物的片剂以通常方法制造：

表3：可能的片剂组合物

制造程序

1.混合成分1、成分2、成分3和成分4，并用纯水制粒。

2.在50℃干燥颗粒。

3.使颗粒通过适合的研磨设备。

4.加入成分5并混合三分钟；在适合的加压机上压缩。

实例B-1

制造以下组合物的胶囊：

表4：可能的胶囊成分组合物

制造程序

1.在适合的混合器中将成分1、成分2和成分3混合30分钟。

2.添加成分4和成分5，并混合3分钟。

3.填充入适合的胶囊中。

将式(I)化合物、乳糖和玉米淀粉首先在混合器中混合，然后在粉碎机中混合。将混合物送回混合器；添加滑石在其中并充分混合。将混合物通过机器填充至适合的胶囊中，例如硬质明胶胶囊。

实例B-2

制造以下组合物的软质明胶胶囊：

成分	mg/胶囊
		式(I)化合物	5
黄蜡	8
		氢化大豆油	8
部分氢化植物油	34
		大豆油	110
总	165

表5：可能的软质明胶胶囊成分组合物

成分	mg/胶囊
		明胶	75
甘油85％	32
		Karion 83	8(干物质)
二氧化钛	0.4
		氧化铁黄	1.1
总	116.5

表6：可能的软质明胶胶囊组合物

制造程序

将式(I)化合物溶于其他成分的温热熔融物中，并将混合物填充至适当大小的软质明胶胶囊中。根据通常程序处理经填充的软质明胶胶囊。

实例C

制造以下组合物的栓剂：

成分	mg/栓剂
		式(I)化合物	15
栓剂质量	1285
		总	1300

表7：可能的栓剂组合物

制造程序

将栓剂在玻璃或钢制容器中融化，充分混合并冷却至45℃，随后，添加经细粉化的式(I)化合物并搅拌直至其完全分散。将混合物倒入适当大小的栓剂模具中，待冷，然后将栓剂从模具中移出并个别包装于蜡纸或金属箔中。

实例D

制造以下组合物的注射溶液：

成分	mg/注射溶液
		式(I)化合物	3
聚乙二醇400	150
		乙酸	q.s.adpH 5.0
注射用水	ad 1.0ml

表8：可能的注射溶液组合物

制造程序

将式(I)化合物溶于聚乙二醇400和注射用水(部分)的混合物中。用乙酸将pH调整至5.0。通过添加剩余量的水将体积调整至1.0ml。过滤溶液，使用适当的增量填充至小瓶中并灭菌。

实例E

制造以下组合物的小药囊(sachet)：

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表9：可能的小药囊组合物

制造程序

将式(I)化合物与乳糖、微晶纤维素和羧甲基纤维素钠混合，并与含聚乙烯吡咯烷酮的水的混合物制粒。将颗粒与硬脂酸镁和调味添加剂混合，并填充入小药囊中。

缩写

CAS＝化学文摘社；DCM＝二氯甲烷；DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺；DMF＝二甲基甲酰胺；DMSO＝二甲亚砜；DNA＝脱氧核糖核酸；EDC·HCl＝1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；ESI＝电喷雾电离；EtOAc＝乙酸乙酯；HOOBt＝3，4-二氢-3-羟基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪；LC-MS/MS＝液相色谱-MS/MS；MeOH＝甲醇；MS＝质谱；NMP＝N-甲基-2-吡咯烷酮；PCR＝聚合酶链式反应；rt＝室温；SFC＝超临界流体色谱；THF＝四氢呋喃。

测试剂

(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺(以下简称化合物Ia)以粉末形式由瑞士巴塞尔的Roche提供并在使用前重新悬浮。2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3，4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺钠盐(以下简称化合物IIa)以粉末形式由日本东京的Chugai提供。考比替尼(cat#HY-13064A)、康奈非尼(cat#HY-15605)和贝美替尼(cat#HY-15202)购自MedChemExpress。

细胞系和培养条件

细胞系从ATCC获得，在标准条件下保持在5％CO2的湿化培养箱中，并且每周传代两次。培养条件报导于下表：

动物：

在体内研究中，7-9周大的雌性小鼠(实验开始时)购自Charles RiverLaboratories。实验中使用的菌株为CB.17SCID。

对于异种移植物的形成，将细胞悬浮在由50％ Matrigel和50％ Hank's平衡盐溶液组成的培养基中，并在右侧腹皮下注射。当肿瘤体积达到约100mm³时，小鼠在治疗前被随机分组。

实例

提供以下实例和附图以说明本发明但不具有限制特征。

实例1

呈现BRAF V600E和RAF二聚体诱导突变NRAS Q61K的A375细胞系被用来模仿对BRAFi和BRAFi/MEKi组合的抗性机制。A375 NRAS Q61K细胞用化合物Ia或康奈非尼单独地或与10nM MEKi考比替尼组合处理1小时，然后用于磷酸化ERK的西方印迹分析，这也称为P-ERK(图1)。类似地，A375 NRAS Q61K细胞以500个细胞/孔铺板，单独用化合物Ia或康奈非尼或与MEKi考比替尼组合处理并孵育12天。得到的菌落用结晶紫/甲醇溶液固定并染色(图2)。依据其逆理破坏剂特性，与康奈非尼相比，化合物Ia驱使更佳的P-ERK抑制作用，并且相应地，与康奈非尼/考比替尼的组合所触发的相比，化合物Ia与考比替尼的组合产生更佳的P-ERK抑制。

实例2

免疫缺陷小鼠被植入呈现BRAF V600E和RAF二聚体诱导突变NRAS Q61K的细胞系A375 NRAS，作为对第一代BRAFi和BRAFi/MEKi的抗性模型。肿瘤形成后(100mm3)小鼠被随机化并每天(QD)口服(PO)一次化合物Ia(20mg/kg)、其与MEKi考比替尼(5mg/kg,QD PO)的组合、或单独的考比替尼(图3)。还用化合物Ia(20mg/kg)每天一次与不同的MEK抑制剂贝美替尼(10mg/kg，BID PO)组合处理同一小鼠模型(图4)。为了比较，其中一个实验组的动物接受逆理诱导BRAFi康奈非尼(36mg/kg，QD PO)与贝美替尼的组合治疗，该组合为FDA批准的用于治疗转移性黑素瘤的组合。还用化合物Ia(20mg/kg)每天一次与不同的MEK抑制剂化合物IIa组合处理同一小鼠模型(一组为0.0625mg/kg，PO；第二组为1.0mg/kg，PO)(图5)。

实例3

A375细胞系获自ATCC，在标准条件下保持在5％ CO2的湿润培养箱中。在384孔板(U底部)上，用指定浓度的康奈非尼和化合物IIa处理细胞7天。通过CellTiter-Glo 2.0(Promega，G9243)和EnVision读板器(Perkin Elmer)测量细胞活力。化合物对细胞生长的抑制率由公式(1-(T-V0)/(V-V0))x 100(％)计算，其中T表示具有化合物的孔的测量值，V表示没有化合物的孔的测量值，并且V0表示没有细胞的孔的测量值。计算80％抑制浓度(IC80)的值，并绘制IC80的等效线图。X轴和Y轴分别表示化合物IIa和康奈非尼的浓度。等效线为双曲线，并位于加性线(虚线)下方，指示康奈非尼与化合物IIa之间的协同效应(图6)。

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Claims

1.一种BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述BRAF抑制剂是式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物。

2.根据权利要求1所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述式(I)化合物为(3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-氧代-喹唑啉-6-基)氧基-苯基]-3-氟-吡咯烷-1-磺酰胺。

3.根据权利要求1或2所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述MEK抑制剂选自2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺、考比替尼、曲美替尼和贝美替尼，或其药用盐。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述MEK抑制剂为2-(4-环丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基氨磺酰基氨基)吡啶-4-基]甲基]苯甲酰胺或其药用盐。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述MEK抑制剂为考比替尼或其药用盐。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用作药物。

7.根据权利要求1至5中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其用于癌症的治疗性和/或预防性治疗。

8.根据权利要求1至5中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防癌症。

9.一种用于治疗或预防癌症，特别是黑素瘤或非小细胞肺癌的方法，所述方法包括向有此需要的患者施用有效量的根据权利要求1至5中任一项中所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合。

10.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至5中任一项所述的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合以及一种或多种药用赋形剂。

11.根据权利要求6至10中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中所述BRAF抑制剂和所述MEK抑制剂两者均口服施用。

12.根据权利要求6至11中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中所述BRAF抑制剂与所述MEK抑制剂同时施用。

13.根据权利要求6至12中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中所述BRAF抑制剂和所述MEK抑制剂被共同配制。

14.根据权利要求6至11中任一项所述的组合、用途、方法或药物组合物，其中所述BRAF抑制剂与所述MEK抑制剂依序施用。

15.根据权利要求6至8中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述癌症为甲状腺癌、结直肠癌、黑素瘤、脑癌或非小细胞肺癌。

16.根据权利要求6至9中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述癌症与BRAF^V600突变相关联。

17.根据权利要求6至9中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中所述癌症为BRAF^V600突变阳性的不可切除的或转移性癌症。

18.根据权利要求6至9中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其中使用包括以下项的方法来确定BRAF^V600突变：(a)对从所述患者的肿瘤组织和/或体液的样品提取的核酸(例如，DNA)进行PCR或测序；以及(b)确定所述样品中BRAF^V600的表达。

19.根据权利要求6至9中任一项所述使用的BRAF抑制剂和MEK抑制剂的组合，其包含一种或多种选自以下项的另外的抗癌剂：MEK降解剂、EGFR抑制剂、EGFR降解剂、HER2和/或HER3的抑制剂、HER2和/或HER3的降解剂、SHP2抑制剂、SHP2降解剂、Axl抑制剂、Axl降解剂、ALK抑制剂、ALK降解剂、PI3K抑制剂、PI3K降解剂、SOS1抑制剂、SOS1降解剂、信号转导途径抑制剂、检查点抑制剂、细胞凋亡途径的调节剂、细胞毒性化学治疗剂、血管生成靶向疗法、免疫靶向剂和抗体药物缀合物。

20.一种药物组合物，其包含式(I)化合物

或其药用盐或溶剂化物以及一种或多种药用赋形剂，所述药物组合物用于与MEK抑制剂组合来治疗或预防癌症。

21.一种药物组合物，其包含式(II)化合物

或其药用盐或溶剂化物以及一种或多种药用赋形剂，所述药物组合物用于与BRAF抑制剂组合来治疗或预防癌症。

22.如前所述的本发明。