TW202313046A

TW202313046A - 用於癌症治療之組合療法

Info

Publication number: TW202313046A
Application number: TW111121107A
Authority: TW
Inventors: 珍埃克曼; 湯瑪士弗瑞斯; 法蘭克賀廷; 井出裕介; 皮爾喬喬弗朗西斯托馬斯佩塔佐尼; 田中浩; 吉爾金威奇曼
Original assignee: 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司; 日商中外製藥股份有限公司
Priority date: 2021-06-09
Filing date: 2022-06-07
Publication date: 2023-04-01
Also published as: AU2022288118A1; EP4351577A1; KR20240005899A; US20240139192A1; CA3222549A1; CN117642166A; BR112023025916A2; IL307964A; KR20240008410A; WO2022258612A1

Abstract

本發明係針對採用 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之癌症的組合療法，以及其用途和醫藥組成物。

Description

用於癌症治療之組合療法

本發明涉及 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，以及其用途和醫藥組成物。

無

本發明特別提供了用於治療癌症的 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其中 BRAF 抑制劑為式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。

突變型 BRAF 為可標靶致癌驅動因子，最新三種進入市場的 BRAF 抑制劑 (BRAFi）（維羅非尼 (Vemurafenib)、達拉非尼 (Dabrafenib) 和康奈非尼 (Encorafenib)）顯示出對 BRAFV600E 陽性黑色素瘤的療效。然而，快速產生耐藥性是幾乎普遍被觀察到的，且標靶療法的治療效益持續時間仍然有限。

此外，已開發的第一代 BRAF 抑制劑在經 BRAF ^V600E驅動的腫瘤中展現出抑制 MAPK 信號傳遞的不可預期且「逆理性」能力，而相同的抑制劑在 BRAF 野生型 (WT) 模型中表現出 MAPK 刺激活性 (N Engl J Med 2012; 366:271-273；和 British Journal of Cancer volume 111，第 640–645 頁 (2014))。

然後，針對 RAF 逆理性進行機理研究證實了致癌性 BRAF ^V600E以其單體細胞質形式磷酸化 MEK 1/2，而 WT BRAF 及 RAF1 活化需要複雜的事件步驟，包括細胞膜移位及經活化的 RAS (KRAS、NRAS、HRAS) 所促進的同源及/或異源二聚化作用 (Nature Reviews Cancer volume 14，第 455–467 頁 (2014)）。

如維羅非尼、達拉非尼和康奈非尼的第一代 BRAF 抑制劑與 WT BRAF 或 RAF1 單元體 (protomer) 的結合迅速誘導 RAF 同源及/或異源二聚化作用以及新形成的 RAF 二聚體的膜締合。在二聚體構形中，一個 RAF 單元體異位誘導的第二個 RAF 單元體的構形變化而導致激酶活化狀態，且重要的是，在不利於抑制劑結合的構形中。結果，經藥物治療所誘導的二聚體藉由被未結合之單元體所操縱的催化作用與路徑的過度活化而促進 MEK 磷酸化。

腫瘤幾乎不可避免地避開了 BRAFi 治療，並且絕大多數病例的機制涉及觸發 RAF 二聚化作用的獲得性能力。可藉由 MEK 抑制劑 (MEKi) 組合治療來抵消這種效應。然而，這些藥劑之治療指數非常差，這限制了 MEKi 在人體中可達到的劑量。因此，對第一代 BRAFi 與 MEKi 組合療法的抗性仍由 RAF 逆理性活化介導。因此，這些組合療法的臨床效益仍然有限。

本發明涉及式 (I) 的 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑的新組合，其用於治療癌症，特別是黑色素瘤。式 (I) 化合物為一種 BRAF 抑制劑，與以下市場上的第一代 BRAF 抑制劑相比，其顯示出 MAPK 訊號傳遞路徑（逆理破壞劑）的可忽略的逆理性活化：康奈非尼、達拉非尼和維羅非尼（逆理誘導劑）。除了這種特性，式 (I) 化合物還具有非常有效的腦穿透特性，因此為治療在腦中轉移的癌症提供了必要替代療法。本發明揭示了一種用於癌症療法的新組合，其對 BRAF 相關腫瘤具有強組合活性，具有克服在採用第一代 BRAF 抑制劑治療的患者中經常觀察到的快速獲得性治療抗性的潛力。如本發明中所揭示之用於治療癌症的組合呈現出遠遠超出 MEKi 和 BRAFi 單一療法的累加效應的意想不到的組合活性。

術語「抑制劑」表示與特定配體競爭、降低或阻止特定配體與特定受體的結合或降低或阻止特定蛋白質的功能的化合物。特別地，如本文所用的抑制劑係指靶向、降低或抑制選自 BRAF 和 MEK 的相應靶標之活性的化合物，特定抑制劑具有低於 1 μM、低於 500 nM、低於 200 nM、低於 100 nM 、低於 50 nM、低於 25 nM、低於 10 nM、低於 5 nM、2 nM 或低於 1 nM 的 IC50 值。在本發明的一些實施例中，術語「BRAF 抑制劑」意指降低 BRAF 激酶活性至少約 10%、至少約 20%、至少約 30%、至少約 40%、至少約 50%、至少約 60%、至少約 70%、至少約 75%、至少約 80%、至少約 85%、至少約 90%、至少約 95% 或至少約 99% 的化合物。。在本發明的一些實施例中，術語「MEK 抑制劑」意指降低 MEK 激酶活性至少約 10%、至少約 20%、至少約 30%、至少約 40%、至少約 50%、至少約 60%、至少約 70%、至少約 75%、至少約 80%、至少約 85%、至少約 90%、至少約 95% 或至少約 99% 的化合物。

術語「IC50」意指抑制 50% 之特定測量活性所需的特定化合物的濃度。

術語「醫藥上可接受之鹽」意指式 (I) 化合物或 MEK 抑制劑保有游離鹼或游離酸的生物有效性及特性，且並非在生物上或在其他方面有不利之處的鹽。該等鹽例如可以是與諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及類似者、特別是鹽酸的無機酸形成，和諸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、檸檬酸、苄酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、N-乙醯半胱胺酸及類似者之有機酸形成。此外，這些鹽類可藉由將無機鹼或有機鹼添加至游離酸中來製備。衍生自無機鹼的鹽類包括但不限於鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽及類似者。衍生自有機鹼的鹽包括但不限於一級胺、二級胺、和三級胺的鹽、取代胺，包括天然存在的取代胺、環胺和鹼性離子交換樹脂，諸如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、離胺酸、精胺酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚亞胺樹脂及類似者。式 (I) 化合物的特定醫藥上可接受之鹽為鹽酸鹽、甲磺酸鹽及檸檬酸鹽。[3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羥基-3-[(2S)-哌啶-2-基]四氫吖唉-1-基]甲酮的特定醫藥上可接受之鹽為富馬酸鹽和琥珀酸鹽，特別是半富馬酸鹽和半琥珀酸鹽。式 (II) 化合物的具體醫藥上可接受之鹽為鹼金屬鹽，例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銫鹽和銣鹽，并且較佳為鈉鹽和鉀鹽。

術語「溶劑合物」意指溶劑和溶質之非共價化學計量或非化學計量組合。術語「水化物」意指水和溶質之非共價化學計量或非化學計量組合。例如，式 (I) 化合物及其醫藥上可接受之鹽可以與醫藥上可接受之溶劑（諸如苯甲醚、二氯甲烷、甲苯、1,4-二㗁烷、水及類似者）以非溶劑化形式及溶劑化形式存在。

式 (I) 化合物含有一個非對稱中心，且其形式可為光學上純的鏡像異構物或鏡像異構物混合物（舉例而言，諸如外消旋物）。

根據 Cahn-Ingold-Prelog 序列法則，非對稱碳原子可為「R」或「S」組態。

一方面，本發明提供用於治療癌症的 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其中 BRAF 抑制劑為式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。

在本發明的一些實施例中，式 (I) 化合物為根據式 (Ia) 的化合物

(Ia)。

在本發明的一些實施例中，式 (I) 化合物為根據式 (Ib) 的化合物

(Ib)。

如本發明之 MEK 抑制劑之非限制性實例包括2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、比米替尼、曲美替尼 (trametinib)、司美替尼 (selumetinib)、匹瑪捨替 (pimasertib)、瑞美替尼 (refametinib)、N-[2(R),3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯甲醯胺 (PD-325901)、2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環丙基甲氧基)-3,4-二氟苯甲醯胺 (Cl-1040) 和 3-[2(R),3-二羥丙基]-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯胺基)-8-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮 (TAK-733)。

在本發明的一些實施例中，MEK 抑制劑為式 (II) 化合物

(II) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。

式 (II) 化合物為具有強 MEK 抑制活性和高 RAF/MEK 復合穩定活性的口服 MEK 抑制劑。式 (II) 之化學名稱為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺。

在本發明的一些實施例中，式 (II) 化合物為根據式 (IIa) 的鈉鹽

(IIa)。

在本發明的一些實施例中，MEK 抑制劑為考比替尼。考比替尼為一種口服、有效且高度選擇性之 MEK1 及 MEK2（其為 RAS/RAF 路徑之核心成分）抑制劑。考比替尼的化學名稱為 [3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羥基-3-[(2S)-哌啶-2-基]四氫吖唉-1-基]甲酮，並具有以下結構：

。

可以按照 WO 2007/044515 中描述的方法製備考比替尼。考比替尼可商購並具有以下 CAS 登記號：934660-93-2。

在本發明的一些實施例中，MEK 抑制劑為比米替尼。比米替尼為一種口服、有效且高度選擇性之 MEK1 及 MEK2（其為 RAS/RAF 路徑之核心成分）抑制劑。比米替尼的化學名稱為 5-[(4-溴-2-氟苯基)胺基]-4-氟-N-(2-羥基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲醯胺並具有以下結構：

。

可以按照 WO 2003/077914 中描述的方法製備比米替尼。比米替尼可商購並具有以下 CAS 登記號：606143-89-9。

一方面，本發明提供用於治療癌症的 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其中 MEK 抑制劑為式 (II) 化合物

(II) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。

在本發明的一些實施例中，BRAF 抑制劑為康奈非尼。康奈非尼的化學名稱為 N-[(2S)-1-[[4-[3-[5-氯-2-氟-3-(甲烷磺醯胺)苯基]-1-丙-2-基吡唑-4-基]嘧啶-2-基]胺基]丙-2-基]胺甲酸甲酯並具有以下結構：

可以按照 WO 2011/025927 中描述的方法製備康奈非尼。康奈非尼可商購並具有以下 CAS 登記號：1269440-17-6。測定程序

材料

補充有 L-麩醯胺的 DMEM 無酚紅培養基購自 (Thermo Fisher Scientific)。胎牛血清 (FBS) 購自 VWR。先進 ERK 磷酸-T202/Y204 套組-10,000 測試購自 Cisbio cat# 64AERPEH。A375 最初是從 ATCC 獲得，並由 Roche 寄存庫存儲。384-孔微量多孔盤購自 Greiner Bio-One 384-孔 (帶有 Lid，HiBase，低容量 cat 784-080)。

在 A375 細胞中用於 P-ERK 確定的 HTRF 測定法

A375 為一種表現 V600E 突變 BRAF 的細胞癌模型。以下報導 ERK 1,2 磷酸化（MAPK 路徑之磷酸化級聯的末端成員）作為 MAPK 路徑活化狀態的主要讀數。在測定前，A375 細胞株維持在補充有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 無酚紅培養基中。化合物處理後，藉由測量 FRET 螢光信號來測定 P-ERK 水平，該信號是由上述套組 (Cisbio cat# 64AERPEH) 中提供的 2 種抗體在 Thr202/Tyr204 處磷酸化時選擇性結合在 ERK 蛋白上所引起的。簡而言之，將含 8000 個細胞/孔之 12 µl 培養基/孔接種於 384 孔板中，並置於培養箱中 (37℃，5% 的 CO2 濕潤的空氣) 至隔夜，次日，將平盤以一式兩份的測試化合物、達拉非尼及 PLX8394 (後兩者作為對照) 於下列最終藥物濃度處理：10μM-3μM-1μM-0.3μM-0.1μM-0.03μM-0,01μM-0.003μM-0.001μM，所有孔均進行 DMSO 歸一化，藥物孵育 1 小時。然後，將套組所附的 4μl 4X 裂解緩衝液添加至孔中，然後將平盤離心 30 秒 (300 rcf)，並在室溫下於平板振盪器上孵育 1 小時。

孵育結束時，添加 4μL/孔的先進 P-ERK 抗體溶液 (根據製造商的說明書製備)，然後將 4μL/孔的穴狀化合物 (criptate) P-ERK 抗體溶液 (根據製造商的說明書製備) (Cisbio cat# 64AERPEH) 添加至測試孔中。

為了獲得適當的資料歸一化對照，所報導的未經藥物處理的孔總是包括在每個平盤中（根據製造商的說明書）：

對照和實驗 (μl) 的 p-ERK HTRF 孔含量：

負對照	正對照	嗜中性球對照	cpd	空白試樣
-	-	12	12	12	細胞
12	-	-	-	-	培養基
-	-	-	＜ 0.05	-	Cpd
-	16	-	-	-	對照裂解液 (即用)
4	-	4	4	4	4x 裂解緩衝液
4	4	4	4	-	先進 p-ERK 抗體溶液
-	-	-	-	4	先進 p-ERK1/2 穴狀化合物 (Cryptate) 抗體溶液
20	20	20	20	20	孔中總體積

然後將平盤在 300 rcf 下離心 30 秒，密封以防止蒸發，並在黑暗中於室溫下孵育隔夜。

然後分析平盤，並通過 Pherastast FSX (BMG Labtech) 儀器在 665 及 620 nM 處收集螢光釋出值。

根據公式比率 = 信號 (620 nm) / 信號 (625 nm)* 10000 處理所獲得的螢光值，然後將空白試樣的平均值從所有數值中減去。

將僅藉由 DMSO 處理的細胞所得出的比率（減去空白試樣）平均值視為 100%，並藉由將 10µM 達拉非尼處理的細胞所得出的比率（減去空白試樣）的平均值視為 0%，將資料歸一化。將經歸一化的點的平均值與 S 形曲線擬合並確定 IC50。結果總結於表 1 中。生化測定法證實了式 (Ia) 及 (Ib) 化合物對 BRAF 及 BRAF ^V600E的高親和力。Kd 為生化實驗中的解離常數。

化合物	Kd (µM)	pERK IC50 (µM)
	BRAF	BRAF V600E	CRAF	CSK	LCK	A375
(Ia)	0.0006	0.0012	0.0017	23.3	40	0.0069
(Ib)	0.0013	0.0009	0.0012	9.16	20.12	0.0106

表 1 ： 化合物 (Ia) 及 (Ib) 對 BRAF 及 BRAF ^V600E 具有高親和力，並且對 C 端 Src 激酶 (CSK) 和淋巴細胞特異性酪氨酸蛋白激酶 (LCK) 具有高選擇性。 Kd 為生化實驗中的解離常數。如上所述在 A375 細胞株中測量 IC50 。

本發明的式 (I) 化合物的製備可依序或會聚合成途徑進行。本發明之合成顯示於以下一般流程中。用於進行所產生之產物的反應及純化所需的技術為本發明所屬技術領域中熟習此項技術者已知。

更詳細地，式 (I) 化合物可藉由以下給定之方法、藉由實例中所給定之方法或藉由類似方法來製造。個別反應步驟之適當的反應條件為本發明所屬技術領域中熟習此項技術者已知。反應順序不限於流程 1 中所呈現之順序，然而，視起始物質及其相應反應性而定，反應步驟之順序可自由改變。起始原料是可商購的，或可藉由類似於下列給定之方法的方法、藉由說明書或試驗程序中所引用的參考文獻中描述的方法或藉由本技術領域中已知的方法製備。方案 1

應當理解，本發明中的式 (I) 化合物可在官能基上衍生化以提供能夠在 活體內轉化回母體化合物的衍生物。 實驗程序

(3 R)- N-[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧 - 苯基 ]-3- 氟 - 吡咯啶 -1- 磺醯胺（式 (Ia) 化合物）和 (3 S)- N-[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧 - 苯基 ]-3- 氟 -吡咯啶 -1- 磺醯胺（式 (Ib) 化合物）

6- 羥基 -3- 甲基 - 喹唑啉 -4- 酮

將 2-胺基-5-羥基苯甲酸 (10 g，65.3 mmol，Eq：1.0) 及 N-甲基甲醯胺 (30 g，29.9 mL，503 mmol，Eq：7.7) 於 145℃ 加熱 21 小時 45 分鐘，然後冷卻至室溫。將反應混合物以 50 mL H ₂O 稀釋，並在室溫下攪拌 20 分鐘，過濾收集所產生之沉澱物。將淺棕色固體以 20 mL 水洗滌 3 次。將固體吸收於甲苯中並蒸發至乾燥 (3 ×)。將固體在高真空下於 40℃ 真空乾燥隔夜，得到呈淺棕色固體的標題化合物 (10.3 g，89% 產率)。MS (ESI) m/ z: 177.1 [M+H] ⁺。

3,6- 二氟 -2-(3- 甲基 -4- 側氧 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧 - 苯甲腈

將碳酸銫（3.22 g，9.79 mmol，Eq：1.15）於室溫添加至含 6-羥基-3-甲基喹唑啉-4-酮（1500 mg，8.51 mmol，Eq：1.0) 之 N, N-二甲基甲醯胺 (35 mL) 之溶液中。將混合物在室溫下攪拌 30 分鐘，然後添加 2,3,6-三氟苯甲腈 (1.47 g，1.08 ml，9.37 mmol，Eq：1.1)。1 小時後，將反應在冰上冷卻，並以水 (120 mL) 稀釋。過濾收集所產生之固體，以冰水 (100 mL) 及庚烷 (100 mL) 洗滌並吸氣乾燥。將固體吸收於甲苯中，並蒸發至乾燥 (3 ×)，然後真空乾燥隔夜，得到呈淺棕色固體的標題化合物（2.58 g，97% 產率）。MS (ESI) m/ z: 314.1 [M+H]+。

(3 R)-3- 氟吡咯啶 -1- 磺醯胺

將 ( R)-3-氟吡咯啶鹽酸鹽 (1.8 g，14.3 mmol，Eq：1.2) 添加至含硫醯胺 (1.148 g，11.9 mmol，Eq：1.0) 及三乙胺 (2.42 g，3.33 mL，23.9 mmol，Eq：2) 之二㗁烷 (10 mL) 溶液中。將反應在密封管中於 115℃ 攪拌 15.5 小時，然後冷卻至室溫並在真空中濃縮。將殘餘物以 DCM 稀釋，用二氧化矽凝膠蒸發至乾燥，並轉移至管柱中。藉由快速層析法純化 (40 g 二氧化矽，80% EtOAc)，得到呈白色結晶固體的標題化合物 (1.82 g，91% 產率)。MS (ESI) m/ z: 169.1 [M+H] ⁺。

(3 S)-3- 氟吡咯啶 -1- 磺醯胺

將三乙胺（304 mg，419 µl，3.01 mmol，Eq：2.0）添加至含硫醯胺（146 mg，1.5 mmol，Eq：1.0）及 (S)-3-氟吡咯啶鹽酸鹽（234 mg，1.8 mmol，Eq：1.2）的二㗁烷 (1.3 ml) 懸浮液中。將反應在密封管中於 115℃ 攪拌 16 小時 35 分鐘，然後在真空中濃縮。將殘餘物以 MeOH 稀釋，並以矽凝膠蒸發至乾燥，並轉移至管柱中。藉由快速層析法純化（40 g 二氧化矽，0-8% MeOH/DCM），得到呈淺黃色固體的標題化合物（193 mg，75% 產率）。MS (ESI) m/ z: 169.1 [M+H] ⁺。

(3 R)- N-[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧 - 苯基 ]-3- 氟 - 吡咯啶 -1- 磺醯胺（式 (Ia) 化合物）

將 ( R)-3-氟吡咯啶-1-磺醯胺（1.26 g，7.51 mmol，Eq：2.1）及碳酸銫（2.56 g，7.87 mmol，Eq：2.2）在氬氣氛下懸浮在乾燥的 DMF (10.2 ml) 中。將反應於 50℃ 攪拌 30 分鐘。將反應混合物冷卻至室溫並加入含 3,6-二氟-2-((3-甲基-4-側氧-3,4-二氫喹唑啉-6-基)氧)苄腈（1.12 g，3.58 mmol，Eq：1.0）之 DMF (25.5 ml) 溶液。將反應混合物於 100℃ 攪拌 15 小時，然後在真空中濃縮。將殘餘物吸收於含 NH ₄Cl (100 mL) 和 EtOAc (100 mL) 之飽和水溶液中。分離各相，並將水層進一步以 2 × 100 mL EtOAc 萃取。合併之有機層用水 (200 mL) 及鹽水 (200 mL) 洗滌，經 Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在真空中濃縮。用 EtOAc (3 × 100 mL) 回萃水層。將合併之有機萃取物用鹽水 (200 mL) 洗滌，經 Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在真空中濃縮。用 DCM 和 MeOH 稀釋殘餘物，並濃縮到二氧化矽上。藉由快速層析法進行純化（120 g，0.5-2% MeOH/DCM），得到灰白色固體，將其用 1:1 庚烷/DCM (20 mL) 在超音波震盪下粉碎，然後真空乾燥，得到呈無色固體的標題化合物（1.087 g，66% 產率）。MS (ESI) m/ z: 426.2 [M+H] ⁺。手性 SFC：RT = 4.594 min [Chiralpak IC 管柱，4.6 x 250 mm，5 µm 粒徑（Daicel）；20-40% MeOH，含 0.2% NHEt ₂，歷時 8 分鐘；流量：2.5 mL/min；140 巴背壓]。

(3 S)- N-[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧 - 苯基 ]-3- 氟 - 吡咯啶 -1- 磺醯胺（式 (Ib) 化合物）

將 ( S)-3-氟吡咯啶-1-磺醯胺（181 mg，1.08 mmol，Eq：2.1）溶於 DMF (1.6 ml) 中。於室溫加入碳酸銫（368 mg，1.13 mmol，Eq：2.2）並將反應混合物於 50℃ 攪拌 30 分鐘。將反應混合物冷卻至室溫並加入含 3,6-二氟-2-((3-甲基-4-側氧-3,4-二氫喹唑啉-6-基)氧)苄腈（160.8 mg，513 µmol，Eq：1.0）之 DMF (4 ml) 溶液。將反應混合物於 105℃ 攪拌 2 小時 50 分鐘，然後在真空中濃縮。將殘餘物吸收於 DCM 中，並以飽和 NH ₄Cl 水溶液洗滌。水層用 DCM 回萃兩次。合併之有機層用 Na ₂SO ₄乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物（棕色油狀物）用 DCM 稀釋並轉移至管柱中。藉由快速層析法進行純化（80 g，含 0-100% EtOAc 的DCM），得到固體，將其藉由 SFC 進一步純化，得到呈淺黃色固體的標題化合物（119 mg，50% 產率）。MS (ESI) m/ z: 426.2 [M+H] ⁺。手性 SFC：RT = 4.411 min [Chiralpak IC 管柱，4.6 x 250 mm，5 µm 粒徑（Daicel）；20-40% MeOH，含 0.2% NHEt ₂，歷時 8 分鐘；流量：2.5 mL/min；140 巴背壓]。

2-(4- 環丙基 -2- 氟苯胺基 )-3,4- 二氟 -5-[[3- 氟 -2-( 甲基胺磺醯基胺基 ) 吡啶 -4- 基 ] 甲基 ] 苯甲醯胺（式 (II) 化合物）

式 (II) 化合物可藉由以下給定之方法、藉由實例中所給定之方法或藉由類似方法來製造。

使用 Bruker 公司的 AVANCE III HD400 (400 MHz) 進行 NMR 分析。NMR 資料以 ppm（百萬分率） (δ) 示出，並且將來自樣品溶劑的氘鎖定信號用為參考。

使用 Shimadzu 公司的配備超高效液相層析儀 (Nexera UC) 的單四極質譜儀 (LCMS-2020) 或 Waters 公司的配備 Acquity 超高效液相層析儀（UPLC 或 UPLC I-Class）的單四極質譜儀（SQD 或 SQD2）獲得質譜資料。

使用下表 2 中列出的分析條件 A 至 C 中之一個分析條件進行高效液相層析。在表 2 中，「TFA」代表三氟乙酸，「FA」代表甲酸。

表 2 ：
分析條件	設備	色譜柱	色譜柱溫度	偵測波長 (PDA)
A	Nexera UC LCMS-2020	Ascentis Express C18 2.1 mm，內徑 x 50 mm L，2.7 µm	35°C	210-400 nm
B	Acquity SQD/SQD2	Ascentis Express C18 2.1 mm，內徑 x 50 mm L，2.7 µm	35°C	210-400 nm
C	Acquity SQD/SQD2	Ascentis Express C18 2.1 mm，內徑 x 50 mm L，2.7 µm	35°C	210-400 nm
表 2 （續）
分析條件	移動相	梯度	流速 (mL/min)
注射後的時間（分鐘）	A/B
A	A) 0.05% TFA/CH ₃CN B) 0.05% TFA/H ₂O	0-1.5 1.5-2.0	5/95 → 100/0 100/0	1
B	A) 0.1% FA/CH ₃CN B) 0.1% FA/H ₂O	0-1.0 1.0-1.4	40/60 → 100/0 100/0	1
C	A) 0.1% FA/CH ₃CN B) 0.1% FA/H ₂O	0-1.0 1.0-1.4	5/95 → 100/0 100/0	1

直接使用市售藥劑，無需進一步純化。

所有非水反應均在無水溶劑中進行。

使用旋轉蒸發儀進行減壓濃縮和溶劑蒸餾。

如本文所用，「室溫」意指約 20℃ 至約 25℃ 的溫度。

3,4- 二氟 -2-(2- 氟 -4- 碘苯胺 )-5- 甲醯基苯甲酸甲酯（化合物 a1 ）

將含 3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)-5-甲醯基苯甲酸（5.50 g，13.1 mmol）之甲苯 (44 mL) 及 MeOH (11 mL) 混合懸浮液冷卻至 0℃，加入 10％重氮甲基三甲基矽烷己烷溶液（21.8 mL，13.1 mmol），並於室溫攪拌混合物 64 小時。向反應混合物加入乙酸 (0.748 mL)，然後減壓濃縮。將所得殘餘物藉由研磨（己烷/乙酸乙酯）純化，得到呈無色固體的標題化合物（5.01 g，88%）。LCMS m/z: 436 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：1.00 分鐘（分析條件 B）

3,4- 二氟 -2-(2- 氟 -4- 碘苯胺 )-5-[(E)-[(4- 甲基苯基 ) 磺醯基肼亞基 ] 甲基 ] 苯甲酸甲酯（化合物 a2 ）

將 4-甲基苯磺醯肼（2.14 g，11.5 mmol）添加到含 3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-甲醯基苯甲酸甲酯（化合物 a1，5.00 g，11.5 mmol）之 EtOH (100 mL) 懸浮液中，並於室溫攪拌混合物 3 小時。減壓濃縮反應混合物，並且然後加入己烷 (150 mL)。將混合物冷卻至 0℃ 並過濾，然後用己烷 (30 mL) 洗滌，得到呈固體的標題化合物（7.05 g，定量）。LCMS m/z: 604 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：1.06 分鐘（分析條件 B）

N-(2,4- 二甲氧基苄基 )-3- 氟 -4- 碘吡啶 -2- 胺（化合物 a3 ）

將三乙胺（3.63 mL，26.0 mmol）和 1-(2,4-二甲氧基苯基)甲胺（3.26 mL，21.7 mmol）加入到含 2,3-二氟-4-碘吡啶（2.09 g，8.67 mmol）之 NMP (32 mL) 溶液中，並於 100℃ 攪拌混合物 1.5 小時。向反應混合物中加入水，並用乙酸乙酯進行萃取。有機層用 13％鹽水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，並且在過濾掉乾燥劑後，減壓濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠管柱層析法（己烷/乙酸乙酯）純化，得到呈油狀物的標題化合物（3.20 g，95％）。LCMS m/z: 389 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.94 分鐘（分析條件 C）

[2-[(2,4- 二甲氧基苯基 ) 甲基胺基 ]-3- 氟吡啶 -4- 基 ] 硼酸（化合物 a4 ）

將含 N-(2,4-二甲氧基苄基)-3-氟-4-碘吡啶-2-胺（化合物 a3，2.70 g，6.96 mmol）、[1,1-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)二氯甲烷加成產物（568 mg，0.696 mmol）、乙酸鉀（2.05 g，20.9 mmol）和雙(頻哪醇)二硼（2.65 g，10.4 mmol）之 1,4-二㗁烷溶液 (27 mL) 在氮氣氛下於 90℃ 攪拌 5 小時，然後於 110℃ 攪拌 19 小時。將反應混合物減壓濃縮，並將所得殘餘物藉由反相管柱層析法（0.1% 甲酸水溶液/0.1% 甲酸乙腈溶液）純化，得到呈油狀物的標題化合物（2.07 g，97%）。LCMS m/z: 307 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.44 分鐘（分析條件 C）

5-[[2-[(2,4- 二甲氧基苯基 ) 甲基胺基 ]-3- 氟吡啶 -4- 基 ] 甲基 ]-3,4- 二氟 -2-(2- 氟 -4- 碘苯胺 ) 苯甲酸甲酯（化合物 a5 ）

將含 3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)-5-[(E)-[(4-甲基苯基)磺醯基亞肼基]甲基]苯甲酸甲酯（化合物 a2，1.30 g，2.16 mmol）、[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基胺基]-3-氟吡啶-4-基]硼酸（化合物 a4，1.98 g，6.46 mmol）和碳酸鉀（357 mg，2.59 mmol）之 1,4-二㗁烷懸浮液 (59 mL) 在氮氣氣氛下於 100℃ 攪拌 2.5 小時，然後於 110℃ 攪拌 3 小時。向反應混合物中加入乙酸乙酯，然後用水和 13％鹽水洗滌該反應混合物。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並且在濾去乾燥劑後，減壓濃縮。將所得殘餘物藉由矽膠管柱層析法（己烷/乙酸乙酯）純化，得到呈泡沫狀物的標題化合物（524 mg，36%）。LCMS m/z: 682 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：1.03 分鐘（分析條件 B）

5-[(2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 ) 甲基 ]-3,4- 二氟 -2-(2- 氟 -4- 碘苯胺 ) 苯甲酸甲酯（化合物 a6 ）

將含 5-[[2-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基胺基]-3-氟吡啶-4-基]甲基]-3,4-二氟-2-(2-氟-將4-碘苯胺基)苯甲酸甲酯（化合物 a5，523 mg，0.768 mmol）之 DCM 溶液 (16 mL) 冷卻至 0℃，加入三氟乙酸 (15.7 mL)，並於室溫攪拌混合物 1 小時。將反應混合物減壓濃縮，並且所得殘餘物藉由反相管柱層析法（0.05% 三氟乙酸水溶液/0.05% 三氟乙酸乙腈溶液）純化，得到呈油狀物的標題化合物（321 mg, 79%）。LCMS m/z: 532 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.55 分鐘（分析條件 B）

5-((2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 ) 甲基 )-3,4- 二氟 -2-((2- 氟 -4- 碘苯基 ) 胺基 ) 苯甲酸鹽酸鹽（化合物 a7 ）

將含 5-[(2-胺基-3-氟吡啶-4-基)甲基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺)苯甲酸甲酯（化合物 a6，4.00 g，7.53 mmol）之 THF (64 mL) 及水 (32 mL) 混合溶液冷卻至 0℃，加入氫氧化鋰一水合物（948 mg，22.6 mmol），並將混合物於室溫攪拌 3.5 小時。冷卻至 0℃ 後，向反應混合物加入 5M 鹽酸 (15.1 mL)，然後減壓濃縮。所得殘餘物用水和 TBME 洗滌，得到呈紫色化合物的標題化合物（4.20 g，定量）。LCMS m/z: 518 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.68 分鐘（分析條件 C）

5-((2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 ) 甲基 )-3,4- 二氟 -2-((2- 氟 -4- 碘苯基 ) 胺基 ) 苯甲醯胺（化合物 a8 ）

將含 5-((2-胺基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)苯甲酸鹽酸鹽（化合物 a7，200 mg，0.361 mmol）之無水 DMF 溶液 (3.6 mL) 冷卻至 0℃，加入 HOOBt（67.8 mg，0.415 mmol）和 EDC·HCl（80.0 mg，0.415 mmol），並於室溫攪拌混合物 1.5 小時。進一步加入 HOOBt （8.8 mg，0.054 mmol）和 EDC·HCl（10.4 mg，0.054 mmol）並於室溫攪拌 1 小時後，於 0℃ 加入 7 M 氨於 MeOH 溶液（0.103 mL，0.722 mmol）和 DIPEA （0.189 mL，1.08 mmol）並將混合物於室溫攪拌 30 分鐘。將水和飽和碳酸氫鈉水溶液以 1:1 加入到反應混合物中，並用乙酸乙酯進行萃取。有機層用無水硫酸鈉乾燥，並且在濾去乾燥劑後，減壓濃縮。將所得殘餘物溶解在乙酸乙酯 (1 mL) 中，並加入己烷 (10 mL)。將所得固體過濾並用己烷洗滌，得到呈無色固體的標題化合物（162 mg，87%）。LCMS m/z: 517 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.64 分鐘（分析條件 C）

5-((2- 胺基 -3- 氟吡啶 -4- 基 ) 甲基 )-2-((4- 環丙基 -2- 氟苯基 ) 胺基 )-3,4- 二氟苯甲醯胺（化合物 a9 ）

將四(三苯基膦)鈀(0)（11.2 mg，9.68 μmol）和 0.5 M 溴化環丙基鋅（1.94 mL，0.969 mmol）加入含 5-((2-胺基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-3,4-二氟-2-((2-氟-4-碘苯基)胺基)苯甲醯胺（化合物 a8，100 mg，0.194 mmol）之無水 THF 溶液 (1.9 mL) 中，並在氮氣氣氛下於室溫攪拌混合物 2.5 小時。向反應混合物加入乙酸乙酯 (5 mL)，然後用矽藻土過濾並用乙酸乙酯 (3 mL) 洗滌。濾出物用水和飽和鹽水洗滌，並且有機層用無水硫酸鈉乾燥，並在濾去乾燥劑後減壓濃縮。將二氯甲烷/己烷（1/10，11mL）加入到所得殘餘物中，濾出固體並用己烷 (3 mL) 洗滌，得到呈無色固體的標題化合物 a9（63.4 mg，76％）。LCMS m/z: 431 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：0.61 分鐘（分析條件 C）

4- 硝基苯基胺基磺酸甲酯（化合物 r1 ）

將含 4-硝基苯酚（5.00 g，35.9 mmol）和三乙胺（11.3 mL，81.0 mmol）之二氯甲烷溶液（60 mL）冷卻至 -78℃，加入含甲基胺磺醯氯（5.82 g，44.9 mmol）之二氯甲烷溶液 (15 mL)，並將混合物於 -78℃ 攪拌 1.5 小時。將反應混合物減壓濃縮，並將所得殘餘物經矽膠管柱層析法（己烷/乙酸乙酯）和反相管柱層析法（0.1% 甲酸水溶液/0.1% 甲酸乙腈溶液）純化，得到呈無色固體的標題化合物（5.51 g，66%）。HPLC 滯留時間：0.63 分鐘（分析條件 C）。 ¹H-NMR（400 MHz，CDCl ₃）δ：8.31 (2H,m)，7.46 (2H,m)，4.68 (1H,m)，3.00 (3H,d,J = 5.4 Hz)。

2-(4- 環丙基 -2- 氟苯胺基 )-3,4- 二氟 -5-[[3- 氟 -2-( 甲基胺磺醯基胺基 ) 吡啶 -4- 基 ] 甲基 ] 苯甲醯胺（式 (II) 化合物）

將 5-((2-胺基-3-氟吡啶-4-基)甲基)-2-((4-環丙基-2-氟苯基)胺基)-3,4-二氟苯甲醯胺（化合物 a9，2.47 g，5.74 mmol ）溶解在無水 DMF (28.7 mL) 中，加入吡啶（2.78 mL，34.4 mmol）和 4-硝基苯基胺基磺酸甲酯（化合物 r1，4.00 g，17.2 mmol）並將混合物於 40℃ 攪拌 2.5 小時。將反應混合物冷卻至室溫，並加入水 (24.7 mL)。進一步加入乙腈 (3 mL) 和水 (19.8 mL) 並攪拌 10 分鐘後，濾出固體。將所得固體用水/乙腈（1/1，49.4 mL）洗滌，得到呈無色固體的標題化合物（2.56 g，85％）。LCMS m/z: 524 [M+H] ⁺。HPLC 滯留時間：1.13 分鐘（分析條件 A）。

2-(4- 環丙基 -2- 氟苯胺基 )-3,4- 二氟 -5-[[3- 氟 -2-( 甲基胺磺醯基胺基 ) 吡啶 -4- 基 ] 甲基 ] 苯甲醯胺鈉鹽（化合物 IIa ）

(1) 化合物 IIa（I 型）之製備

將丙酮 (10.6 mL) 和 DMSO (1.51 mL) 加入到 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺（式 (II) 化合物，3.03 g）中，於室溫將其溶解。向溶液中加入 20％乙醇鈉乙醇溶液 (3.03 mL) 和化合物 II （下述樣品 IIb）的鈉鹽之晶種，將混合物於室溫攪拌 1 小時，然後加入乙醇 (15.1 mL)，並於室溫攪拌混合物 4 小時。然後加入乙醇 (15.1 mL)，並於室溫攪拌混合物 4 小時，得到呈粉末晶體的化合物 II 之鈉鹽 (2.74 g)（樣品 IIa（I 型））。

(2) 樣品 IIb 之製備

向式 (II) 化合物(53.6 mg) 加入 20％乙醇鈉乙醇溶液 (0.054 mL) 和甲基異丁基酮 (0.161 mL)，於室溫攪拌混合物 30 分鐘，然後加入甲基異丁基酮 (0.161 mL) 並於 60℃ 繼續攪拌 4 天。然後加入 DMSO (0.054 mL)，並於 60℃ 攪拌混合物 5 小時，得到呈粉末晶體的化合物 II 之鈉鹽 (25.6 mg)（樣品 IIb）。

化合物 II 之 MEK1 抑制活性

化合物 II 之 MEK1 抑制活性藉由下述熒光偏振法進行評價。

將測試化合物 CRAF（Thermo Fisher Scientific 公司）、MEK1（Thermo Fisher Scientific 公司）和 ERK2（Carna Biosciences 公司）在含有 ATP 的緩衝液中混合，並於 30℃ 反應 60 分鐘。然後加入 FAM 標記之 ERKtide（Molecular Devices 公司），並於 30℃ 繼續反應 45 分鐘。進一步加入 IMAP（登記商標）漸進式結合試劑 (Progressive Binding Reagent)（Molecular Devices 公司），並於室溫繼續反應 15 分鐘。反應後，用熒光讀板器測量熒光偏振，並基於相對於不含測試化合物之對照的抑制百分比計算 50% 抑制濃度 (IC50)。當測試化合物為化合物 II 時，測得針對 MEK1 活性之 IC50 為 17 nM。

本發明特別涉及：

一種 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 BRAF 抑制劑為式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該式 (I) 化合物為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑係選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、曲美替尼及比米替尼，或其醫藥上可接受之鹽；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為考比替尼或其醫藥上可接受之鹽；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為 [3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羥基-3-[(2S)-哌啶-2-基]四氫吖唉-1-基]半反丁烯二酸甲酮；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為 [3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯基]-[3-羥基-3-[(2S)-哌啶-2-基]四氫吖唉-1-基]半琥珀酸甲酮；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用為藥物；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用於癌症之治療性及/或預防性治療；

一種如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合用於製備藥物之用途，該藥物用於治療或預防癌症；

一種治療或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之方法，該方法包含將有效量之如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合投予有此需要之患者；

一種醫藥組成物，其包含如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合及一種或多種醫藥上可接受之賦形劑；

如本文所述之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑兩者係口服投予；

如本文所述之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑同時投予；

如本發明之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑係共同配製；

如本發明之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑依序投予；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症係與 BRAF ^V600突變有關；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為 BRAF ^V600突變陽性之不可切除或轉移性癌症；

如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中 BRAF ^V600突變係使用包含以下內容之方法確定：(a) 對萃取自該患者之腫瘤組織及/或體液的樣品之核酸（例如 DNA）進行 PCR 或定序；以及 (b) 確定該樣品中 BRAF ^V600的表現；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其包含選自以下之一種或多種額外抗癌劑：MEK 降解劑、EGFR 抑制劑、EGFR 降解劑、HER2 及/或 HER3 之抑制劑、HER2 及/或 HER3 之降解劑、SHP2 抑制劑、SHP2 降解劑、Axl 抑制劑、Axl 降解劑、ALK 抑制劑、ALK 降解劑、PI3K 抑制劑、PI3K 降解劑、SOS1 抑制劑、SOS1 降解劑、訊息傳遞路徑抑制劑、查核點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑、細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑及抗體藥物結合物；

如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合用於製備藥物之用途，該藥物用於治療或預防癌症，其中該 BRAF 抑制劑為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺或其醫藥上可接受之鹽；

如本發明之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合用於製備如本發明之藥物之用途，其中該 MEK 抑制劑選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、曲美替尼和比米替尼，或其醫藥上可接受之鹽上可接受之鹽；

一種治療或預防癌症之方法，該方法包含將有效量之如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑投予有此需要之患者，其中該 BRAF 抑制劑為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺或其醫藥上可接受之鹽；

如本發明之治療或預防癌症之方法，其中該癌症選自甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌和非小細胞肺癌；

如本發明之治療或預防癌症之方法，其中該 MEK 抑制劑係選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、曲美替尼及比米替尼，或其醫藥上可接受之鹽；

如本文所述之醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、比米替尼、曲美替尼、司美替尼(selumetinib)、匹瑪捨替(pimasertib)、瑞美替尼(refametinib)、N-[2(R),3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯胺基)苯甲醯胺 (PD-325901)、2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環丙基甲氧基)-3,4-二氟苯甲醯胺 (Cl-1040) 和 3-[2(R),3-二羥基丙基]-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯胺基)-8-甲基吡啶[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮 (TAK-733)；

如本文所述之醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼、曲美替尼和比米替尼，或其醫藥上可接受之鹽；

如本文所述之醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽；

如本文所述之醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑為考比替尼或其醫藥上可接受之鹽；

如本文所述之醫藥組成物，其中該式 (I) 化合物為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺；

如本文所述之醫藥組成物，其中該式 (I) 化合物為 (3S)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌，其中該 BRAF 抑制劑和該 MEK 抑制劑係口服投予；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌，其中第一組成物與第二組成物同時投予；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌，其中第一組成物和第二組成物係共同配製；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌，其中該第一組合物與該第二組合物依序投予；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，其中該癌症與 BRAF 突變有關；

如本文所述之醫藥組成物，其用於治療或預防癌症，其中該癌症為 BRAF ^V600突變陽性不可切除或轉移性癌症，特別是 BRAF ^V600E或 BRAF ^V600K突變陽性不可切除或轉移性癌症；

如本文所述之醫藥組成物，用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌，其中 BRAF ^V600突變係使用包含以下內容之方法確定：(a) 對從該患者之腫瘤組織及/或體液之樣品提取之核酸（例如，DNA）進行 PCR 或定序；及 (b) 確定該樣品中 BRAF ^V600的表現；

一種如本文所述之醫藥組成物用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌之用途；以及

如本文所述之醫藥組成物用於製備藥物之用途，該藥物用於治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌。

如本發明之另外的實施例為： [1] 一種用於與 MEK 抑制劑組合治療或預防癌症之化合物，其中該化合物為式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [2] 一種醫藥組成物，其包含如 [1] 之化合物和一種或多種醫藥上可接受之賦形劑，用於與 MEK 抑制劑組合治療或預防癌症。 [3] 一種如 [1] 之化合物在製造用於與 MEK 抑制劑組合治療或預防癌症的藥物中的用途。 [4] 一種治療或預防癌症之方法，該方法包含將有效量之 MEK 抑制劑及如 [1] 之化合物之組合投予有此需要之患者。 [5] 如 [1] 至 [4] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該式 (I) 化合物為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺。 [6] 如 [1] 至 [5] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該 MEK 抑制劑係選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼 (cobimetinib)、曲美替尼 (trametinib) 及比米替尼 (binimetinib)，或選自其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [7] 如 [1] 至 [6] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [7.1] 如 [1] 至 [7] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 [7.2] 如 [1] 至 [7.1] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽。 [8] 如 [1] 至 [6] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該 MEK 抑制劑為考比替尼或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [9] 如 [1] 至 [8] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該式 (I) 化合物和 MEK 抑制劑兩者均口服投予。 [10] 如 [1] 至 [9] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該式 (I) 化合物與 MEK 抑制劑同時投予。 [11] 如 [1] 至 [10] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該式 (I) 化合物與 MEK 抑制劑依序投予。 [12] 一種用於與 BRAF 抑制劑組合治療或預防癌症之化合物，其中該化合物為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [13] 一種醫藥組成物，其包含如 [12] 之化合物和一種或多種醫藥上可接受之賦形劑，用於與 BRAF 抑制劑組合治療或預防癌症。 [14] 一種如 [12] 之化合物在製造用於與 BRAF 抑制劑組合治療或預防癌症的藥物中的用途。 [15] 一種治療或預防癌症之方法，該方法包含將有效量之 BRAF 抑制劑及如 [12] 之化合物之組合投予有此需要之患者。 [16] 如 [12] 至 [15] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中 BRAF 抑制劑為式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [17] 如 [16] 之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該式 (I) 化合物為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺。 [18] 如 [12] 至 [17] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中如 [12] 之化合物和 BRAF 抑制劑兩者均口服投予。 [19] 如 [12] 至 [18] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中如 [12] 之化合物與 BRAF 抑制劑同時投予。 [20] 如 [12] 至 [19] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中如 [12] 之化合物與 BRAF 抑制劑依序投予。 [21] 如 [12] 至 [20] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中如 [12] 之化合物為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 [22] 如 [12] 至 [21] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中如 [12] 之化合物為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽。 [23] 如 [1] 至 [22] 中任一項所述之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該癌症為甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌。 [24] 如 [1] 至 [23] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該癌症與 BRAFV600 突變有關。 [25] 如 [1] 至 [24] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中該癌症為 BRAFV600 突變陽性不可切除或轉移性癌症。 [26] 如 [1] 至 [25] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其中 BRAFV600 突變係使用包含以下之方法確定：(a) 對萃取自該患者之腫瘤組織及/或體液的樣品之核酸（例如 DNA）進行 PCR 或定序；以及 (b) 確定該樣品中 BRAFV600 的表現。 [27] 如 [1] 至 [26] 中任一項之化合物、醫藥組成物、用途或方法，其包含選自以下之一種或多種額外抗癌劑：MEK 降解劑、EGFR 抑制劑、EGFR 降解劑、HER2 及/或 HER3 之抑制劑、HER2 及/或 HER3 之降解劑、SHP2 抑制劑、SHP2 降解劑、Axl 抑制劑、Axl 降解劑、ALK 抑制劑、ALK 降解劑、PI3K 抑制劑、PI3K 降解劑、SOS1 抑制劑、SOS1 降解劑、訊息傳遞路徑抑制劑、查核點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑、細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑及抗體藥物結合物。 [101] 一種 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為式 (II) 化合物

(II) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。 [102] 如 [101] 之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該式 (II) 化合物為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺。 [103] 如 [101] 或 [102] 之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 BRAF 抑制劑選自 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺、維羅非尼、達拉非尼和康奈非尼，或其醫藥上可接受之鹽。 [104] 如 [101] 至 [103] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 BRAF 抑制劑為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 [105] 如 [101] 至 [103] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 BRAF 抑制劑為康奈非尼或其醫藥上可接受之鹽。 [106] 如 [101] 至 [105] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用為藥物。 [107] 如 [101] 至 [105] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用於癌症之治療性及/或預防性治療。 [108] 一種如 [101] 至 [105] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合用於製備藥物之用途，該藥物用於治療或預防癌症。 [109] 一種治療或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之方法，該方法包含將有效量之如 [101] 至 [105] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合投予有此需要之患者。 [110] 一種醫藥組成物，其包含如 [101] 至 [105] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合及一種或多種醫藥上可接受之賦形劑。 [111] 如 [106] 至 [110] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑兩者係口服投予。 [112] 如 [106] 至 [111] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑同時投予。 [113] 如 [106] 至 [112] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑係共同配製。 [114] 如 [106] 至 [111] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑依序投予。 [115] 如 [106] 至 [108] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌。 [116] 如 [106] 至 [109] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症係與 BRAF ^V600突變有關。 [117] 如 [106] 至 [109] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為 BRAF ^V600突變陽性之不可切除或轉移性癌症。 [118] 如 [106] 至 [109] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中 BRAF ^V600突變係使用包含以下之方法確定：(a) 對萃取自該患者之腫瘤組織及/或體液的樣品之核酸（例如 DNA）進行 PCR 或定序；以及 (b) 確定該樣品中 BRAF ^V600的表現。 [119] 如 [106] 至 [109] 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其包含選自以下之一種或多種額外抗癌劑：MEK 降解劑、EGFR 抑制劑、EGFR 降解劑、HER2 及/或 HER3 之抑制劑、HER2 及/或 HER3 之降解劑、SHP2 抑制劑、SHP2 降解劑、Axl 抑制劑、Axl 降解劑、ALK 抑制劑、ALK 降解劑、PI3K 抑制劑、PI3K 降解劑、SOS1 抑制劑、SOS1 降解劑、訊息傳遞路徑抑制劑、查核點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑、細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑及抗體藥物結合物。 [120] 如 [101] 至 [119] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽。 [121] 如 [101] 至 [120] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺。 [122] 如 [101] 至 [120] 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽。

本發明的某個實施例涉及一種治療或預防癌症，特別是甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌之方法，該方法包含將有效量之如本文所述之醫藥組成物投予有此需要之患者；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為腦轉移瘤之治療性及/或預防性治療的藥物；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為腦轉移瘤之治療性及/或預防性治療的藥物，其中原發瘤為黑色素瘤或非小細胞肺癌；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中患者未經標靶療法治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中患者未經標靶療法治療，並且其中該患者接受過查核點抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中患者接受過標靶療法治療，並且其中該患者接受過查核點抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中該癌症先前藉由手術治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中患者未經 BRAF 抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為 BRAF 抑制劑抗性腫瘤之治療性及/或預防性治療的藥物；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用於治療及/或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌，其中患者未經 MEK 抑制劑治療；並且

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為 MEK 抑制劑抗性腫瘤之治療性及/或預防性治療的藥物。

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為個體中癌症之治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用選自康奈非尼、達拉非尼及康奈非尼之 BRAF 抑制劑及/或選自比米替尼、曲美替尼及考比替尼之 MEK 抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用康奈非尼和比米替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用達拉非尼和曲美替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用維羅非尼和考比替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之醫藥組成物，其用為個體中癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用查核點抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療，其中患者未經標靶療法治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療，其中患者未經標靶療法治療，並且其中該患者接受過查核點抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於癌症之治療性及/或預防性治療，其中患者接受過標靶療法治療，並且其中該患者接受過查核點抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療，其中患者未經 BRAF 抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用為 BRAF 抑制劑抗性腫瘤之治療性及/或預防性治療的藥物；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療，其中患者未經 MEK 抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於 MEK 抑制劑抗性腫瘤之治療性及/或預防性治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用為個體中癌症之治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用選自康奈非尼、達拉非尼及康奈非尼之 BRAF 抑制劑及/或選自比米替尼、曲美替尼及考比替尼之 MEK 抑制劑治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用康奈非尼和比米替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用達拉非尼和曲美替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用為個體中治療性及/或預防性治療的藥物，該個體先前用維羅非尼和考比替尼治療；

本發明的某個實施例涉及如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，其用於個體中癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之治療性及/或預防性治療，該個體先前用查核點抑制劑治療；

在一個實施例中，本發明提供了一種套組，其包含如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑，處方資訊也稱為「仿單」、泡罩包裝或瓶子（HDPE 或玻璃）及容器。該處方資訊較佳地包括給患者的關於投予如本文所述之該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑之組合的建議；

在一個實施例中，治療的個體變得對如本文所述之該先前治療難治性；並且

在一個實施例中，治療的個體在如本文所述之該先前治療期間出現腦轉移。

本發明的某個實施例涉及一種醫藥組成物，其包含如本文所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物，其中至少一個取代基包含至少一個放射性同位素。放射性同位素的具體實例為 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C 及 ¹⁸F。

此外，在適用的情況下，本發明包括式 (I) 化合物的所有光學異構物，即非鏡像異構物、非鏡像異構混合物、外消旋混合物、所有其對應的鏡像異構物及/或互變異構物及其等溶劑合物。

此外，在適用的情況下，本發明包括式 MEK 抑制劑的所有光學異構物，即非鏡像異構物、非鏡像異構混合物、外消旋混合物、所有其對應的鏡像異構物及/或互變異構物及其等溶劑合物。

如果需要，可分離本發明的化合物的外消旋混合物，從而分離出個別的鏡像異構物。可藉由本領域已知的方法進行分離，例如將化合物的外消旋混合物與鏡像異構性純的化合物偶合以形成非鏡像異構混合物，然後藉由標準方法，例如分化結晶作用或層析法分離個別的非鏡像異構物。

在提供光學上純的鏡像異構物的實施例中，光學上純的鏡像異構物意指化合物含有＞ 90 %（重量）的所需異構物，特別是＞ 95 %（重量）的所需異構物，或更特別是＞ 99 %（重量）的所需異構物，該重量百分比基於化合物的異構物的總重量。手性純的或手性富集的化合物可藉由手性選擇性合成或藉由鏡像異構物分離來製備。鏡像異構物的分離可在最終產物上或替代地在適當之中間體上進行。

在一個實施例中，一種或多種額外抗癌劑與如本文所述之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑組合使用，其中該等額外抗癌劑選自：MEK 降解劑、EGFR 抑制劑、EGFR 降解劑、HER2 及/或 HER3 之抑制劑、HER2 及/或 HER3 之降解劑、SHP2 抑制劑、SHP2 降解劑、Axl 抑制劑、Axl 降解劑、ALK 抑制劑、ALK 降解劑、PI3K 抑制劑、PI3K 降解劑、SOS1 抑制劑、SOS1 降解劑、訊息傳遞路徑抑制劑、查核點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑、細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑及抗體藥物結合物。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為 EGFR 抑制劑。EGFR 抑制劑的非限制性實例包括西妥昔單抗 (cetuximab) (Erbitux®)、帕尼單抗 (panitumumab) (Vectibix®)、奧希替尼 (osimertinib)（merelectinib，Tagrisso®）、厄洛替尼 (erlotinib) (Tarceva®)、吉非替尼 (gefitinib) (lressa®)、耐昔妥珠單抗 (necitumumab) (PortrazzaTM)、來那替尼 (neratinib) (Nerlynx®)、拉帕替尼 (lapatinib) (Tykerb®)、凡德他尼 (vandetanib) (Caprelsa®) 及布加替尼 (brigatinib) (Alunbrig®)。EGFR 抑制劑的其他實例係本領域已知。在一些實施例中，EGFR 抑制劑為別位 EGFR 抑制劑。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為 HER2 及/或 HER3 抑制劑。HER2 及/或 HER3 抑制劑的非限制性實例包括拉帕替尼 (Iapatinib)、卡奈替尼 (canertinib)、(E)-2-甲氧基-N-(3-(4-(3-甲基-4-(6-甲基吡啶-3-基氧基)苯基胺基))喹唑啉-6-基)烯丙基)乙醯胺 (GP-724714)、沙普替尼 (sapitinib)、7-[[4-[(3-乙炔基苯基)胺基]-7-甲氧基-6-喹唑啉基]氧]-N-羥基-庚醯胺 (CUDC-101)、木利替尼 (mubritinib)、6-[4-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]苯基]-N-[(1R)-1-苯乙基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-胺 (AEE788)、妥卡替尼(irbinitinib)（圖卡替尼 (tucatinib)）、波奇替尼 (poziotinib)、N-[4-[1-[4-(4-乙醯基-1-吡嗪基)環己基]-4-胺基-3-吡唑并[3,4-d]嘧啶基]-2-甲氧基苯基]-1-甲基-2-吲哚甲醯胺 (KIN001-111)、7-環戊基-5-(4-苯氧基苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基胺 (KIN001-051)、6,7-二甲氧基-N-(4-苯氧基苯基)喹唑啉-4-胺 (KIN001-30)、達沙替尼 (dasatinib) 及博舒替尼 (bosutinib)。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為 SHP2 抑制劑。SHP2 抑制劑的非限制性實例包括 6-(4-胺基-4-甲基哌啶-1-基)-3-(2,3-二氯苯基)吡嗪-2-胺 (SHP099)、[3-[(3S,4S)-4-胺基-3-甲基-2-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-基]-6-(2,3-二氯苯基)-5-甲基吡嗪-2-基]甲醇 (RMC-4550) RMC-4630、TNO155及在 WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO 2015/107495、WO 2019/075265、PCT/U82019/056786 及 PCT/l82020/053019 中揭示之化合物。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為 PI3K 抑制劑。非限制性實例包括布帕尼西 (buparlisib) (BKM120)、阿培利西 (alpelisib) (BYL719)、沙托利塞 (samotolisib) (LY3023414)、8-[(1R)-1-[(3,5-二氟苯基)胺基]乙基]-N,N-二甲基-2-(嗎啉-4-基)-4-側氧-4H-色烯-6-甲醯胺 (AZD8186)、泰那西布 (tenalisib) (RP6530)、鹽酸伏他利塞 (voxtalisib hydrochloride) (SAR-245409)、吉達利塞 (gedatolisib) (PF-05212384)、帕奴利塞 (panulisib) (P-7170)、他塞利西布 (taselisib) (GDC-0032)、反式-2-胺基-8-[4-(2-羥乙氧基)環己基]-6-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮 (PF-04691502)、杜韋利西布 (duvelisib) (ABBV-954)、N2-[4-側氧-4-[4-(4-側氧-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-2-基)嗎啉-4-鎓-4-基甲氧基]丁醯基]-L-精氨醯-甘氨醯-L-天冬氨醯-L-絲氨酸乙酸鹽 (SF-1126)、匹替利司 (pictilisib) (GDC-0941)、2-甲基-1-[2-甲基-3-(三氟甲基)苄基]-6-(嗎啉-4-基)-1H-苯并咪唑-4-羧酸 (GSK2636771)、艾代拉里斯 (idelalisib) (GS-1101)、甲苯磺酸烏帕拉里斯 (umbralisib tosylate) (TGR-1202)、匹替利司 (GDC-0941)、鹽酸庫潘尼西 (copanlisib hydrochloride) (BAY 84-1236)、達克利司(dactolisib) (BEZ-235)、1-(4-[5-[5-胺基-6-(5-叔-丁基-1,3,4-㗁二唑)-2-基)吡嗪-2-基]-1-乙基-1-H-1,2,4-三唑-3-基]哌啶-1-基)-3-羥丙烷-1-酮 (AZD-8835)、5-[6,6-二甲基-4-(嗎啉-4-基)-8,9-二氫-6H-[1,4]㗁嗪并[4,3-e]嘌呤-2-基]嘧啶-2-胺 (GDC-0084) 依維莫司 (everolimus)、雷帕黴素 (rapamycin)、哌立福新 (perifosine)、西羅莫司 (sirolimus ) 及替西羅莫司 (temsirolimus)。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為 ALK 抑制劑。非限制性實例包括克唑替尼 (crizotinib) (PF-02341066)、色瑞替尼 (ceritinib) (LDK378)、艾樂替尼 (alectinib)（安聖莎 (alecensa)）、布加替尼 (AP26113)、勞拉替尼 (lorlatinib) (PF-6463922)、恩沙替尼 (ensartinib) (X-396)、恩曲替尼 (entrectinib) (RXDX-101)、瑞波替尼 (reprotectinib) (TPX-0005)、貝扎替尼 (belizatinib) (TSR-011)、阿克替尼 (alkotinib) (ZG-0418)、福瑞替尼 (foritinib) (SAF-189)、CEP-37440、TQ-B3139、PLB1003 及 TPX-0131。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為查核點抑制劑。在一些實施例中，該查核點抑制劑為 CTLA-4 抑制劑、PD-1 抑制劑或 PD-L1 抑制劑。在一些實施例中，CTLA-4 抑制劑為伊匹木單抗 (ipilimumab) (Yervoy®) 或曲美木單抗 (tremelimumab) (GP-675,206)。在一些實施例中，PD-1 抑制劑為帕博利珠單抗 (pembrolizumab) (Keytruda®)、納武利尤單抗 (nivolumab) (Opdivo®) 及 RN888。在一些實施例中，PD-L1 抑制劑為阿特柔珠單抗 (atezolizumab) (Tecentriq®)、阿維魯單抗 (avelumab) (Bavencio®)或度伐利尤單抗 (durvalumab) (Imfinzi ^TM)。

一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種抗體藥物結合物。抗體藥物結合物的非限制性實例包括吉妥珠單抗奧佐米星 (gemtuzumab ozogamicin) (MylotargTM)、伊諾珠單抗奧佐米星 (inotuzumab ozogamicin) (Besponsa®)、本妥昔單抗維多汀結合物 (brentuximab vedotin) (Adcetris®)、曲妥珠單抗-美坦新結合物 (ado-trastuzumab emtansine)（TDM-f；Kadcyla®）、米妥昔單抗索星結合物 (mirvetuximab soravtansine) (IMGN853) 及阿耐妥單抗雷星結合物 (anetumab ravtansine)。

在一些實施例中，該等額外抗癌劑中之一種為抗體，諸如貝伐單抗 (bevacizumab)（MvastiTM，Avastin®）、曲妥珠單抗 (Herceptin®)、阿維魯單抗 (Bavencio®)、利妥昔單抗 (rituximab) （MabTheraTM，Rituxan®）、依決洛單抗 (edrecolomab) (Panorex)、達雷木單抗(daratumuab) (Darzalex®)、奧拉木單抗 (olaratumab) (LartruvoTM)、奧法木單抗 (ofatumumab) (Arzerra®)、阿侖珠單抗 (alemtuzumab) (Campath®)、西妥昔單抗 (Erbitux®)、奧戈伏單抗 (oregovomab)、帕博利珠單抗(Keytruda®)、地努妥昔單抗 (dinutiximab) (Unituxin®)、奧比妥珠單抗 (obinutuzumab) (Gazyva®)、曲美木單抗 (GP—675,206)、雷莫昔單抗 (ramucirumab) (Cyramza®)、烏妥昔單抗 (ublituximab) (TG-1101)、帕尼單抗 (Vectibix®)、埃羅妥珠單抗 (elotuzumab) (EmplicitiT'V')、耐昔妥珠單抗 (PortrazzaT'V')、西妥珠單抗 (cirmtuzumab) (UC-961)、替伊莫單抗 (ibritumomab) (Zevalin®) )、艾薩妥昔單抗 (isatuximab) (SAR650984)、尼妥珠單抗 (nimotuzumab)、非蘇木單抗 (fresolimumab) (GC1008)、利瑞魯單抗 (Iirilumab) (INN)、莫格利珠單抗 (mogamulizumab) (Poteligeo®)、非克拉珠單抗(ficlatuzumab) (AV-299)、地諾單抗 (denosumab) (Xgeva®)、加尼妥單抗 (ganitumab)、烏瑞蘆單抗 (urelumab)、匹定利珠單抗 (pidilizumab)、阿麥妥單抗 (amatuximab)、博納吐單抗 (blinatumomab)（AMG103；Blincyto®）或米哚妥林 (midostaurin) (Rydapt)。

本發明的另一實施例提供了含有一種或多種組成物的醫藥組成物，其中每種組成物含有一種或多種如本發明之化合物及一種或多種治療惰性載劑、稀釋劑或賦形劑，以及製備此類醫藥組成物的方法。在一個實例中，可藉由在適當 pH 於環境溫度中，及在所需之純度將式 (I) 化合物與生理學上可接受之載劑 (亦即，在採用的劑量和濃度對接受者無毒的載劑) 混合來配製成生藥 (galenical) 投予形式。調配物之 pH 主要取決於化合物之特定用途及濃度，但任何情況下都較佳範圍皆為約 3 至約 8。在一個實例中，式 (I) 化合物在乙酸乙酯緩衝劑 (pH 5) 中調配。在另一實施例中，式 (I) 化合物是無菌的。化合物可例如以固體或無定形組成物、作為凍乾製劑或者作為水溶液形式儲存。在一實例中，可藉由在適當 pH 下於環境溫度中，及在所需之純度下將 MEK 抑制劑與生理學上可接受之載劑（亦即，在採用的劑量和濃度下對接受者無毒的載劑）混合來配製成生藥(galenical)投予形式。調配物之 pH 主要取決於化合物之特定用途及濃度，但任何情況下都較佳範圍皆為約 3 至約 8。在一個實例中，MEK 抑制劑在乙酸鹽緩衝液中配製，pH 值為 5。在另一實施例中，MEK 抑制劑為無菌的。MEK 抑制劑可例如以固體或無定形組成物、以凍乾調配物或以水溶液儲存。

組成物將按照與良好醫學實踐一致的方式進行調配、給藥和投予。在此情況中考量的因素包括待治療的特定疾病、待治療的特定哺乳動物、個別患者的臨床狀況、疾病原因、遞送藥劑的部位、投予方法、投予日程及醫療從業人員已知的其他因素。

如本文所用，術語「醫藥上可接受之載劑」或「醫藥上可接受之賦形劑」旨在包括任何及所有與藥物投予相容的材料，包括溶劑、分散介質、包衣、抗菌及抗真菌劑、等滲及吸收延遲劑以及其他與藥物投予相容的材料及化合物。除非任何習用介質或藥劑與活性化合物不相容，否則預期其可用於本發明之組成物中。補充活性化合物亦可加入組成物中。

醫藥組成物可以藉由將如本文所述之 BRAF 抑制劑及/或MEK抑制劑與醫藥上可接受之無機或有機載劑或賦形劑一起加工而獲得。可將乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等用作例如片劑、包衣錠、糖衣錠及硬質明膠膠囊的此類載劑。軟質明膠膠囊的適當載劑為例如植物油、蠟、脂肪、半固體及液體多元醇等。但是，依據活性物質的性質，在軟質明膠膠囊的情況下，通常不需要載劑。用於產生溶液及糖漿的適當載劑為例如水、多元醇、甘油、植物油等。用於栓劑的適當載劑為例如天然或硬化油、蠟、脂肪、半流質或液體多元醇等。

此外，醫藥組成物可含有防腐劑、增溶劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、用於改變滲透壓之鹽類、緩衝劑、遮蔽劑或抗氧化劑。其亦可還含有其他治療上有價值之物質。

單獨或組合的 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之醫藥組成物可以藉由將具有期望純度的活性成分與視情況的醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑（Remington's Pharmaceutical Sciences 第 16 版，Osol， A. (ed.) (1980)）混合，以凍乾製劑或水溶液的形式製成。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在採用的劑量和濃度下對受體無毒，並且包括：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫胺酸；防腐劑（諸如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化六甲雙銨；氯化苯銨；氯化本索寧；苯酚、丁醇或芐醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇及間甲酚）；低分子量（小於約 10 個殘基）多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑（例如 EDTA）；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物（例如，鋅蛋白錯合物）；及/或非離子界面活性劑，諸如 TWEENTM、PLURONICSTM 或聚乙二醇 (PEG)。

BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑的醫藥組成物包括適合口服投予、鼻腔投予、局部（包括口腔和舌下）投予、直腸投予、陰道投予及/或腸胃外投予的那些組成物。該等組成物可以方便地以單位劑型存在並且可以藉由醫藥領域中眾所周知的任何方法製備。可與載體材料組合以產生單一劑型的活性成分的量將根據所治療的宿主及特定投予模式而變化。可與載體材料組合以產生單一劑型的活性成分的量通常是產生治療效果的 BRAF 抑制劑或 MEK 抑制劑的量。通常，在百分之一百下，該量為活性成分的約 1％至約 90％，較佳約 5％至約 70％，最佳約 10％至約 30％。製備該等組成物的方法包括將 BRAF 抑制劑或 MEK 抑制劑與載劑及視情況的一種或多種輔助成分結合的步驟。一般而言，藉由使 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑與液體載劑或細分的固體載劑或兩者均勻且緊密地締合，然後（必要時）使產品成型來製備醫藥組成物。適合口服投予的醫藥組成物可以為膠囊劑、扁囊劑、香囊劑、丸劑、片劑、錠劑（使用調味主要成分，通常為蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠）、粉劑、顆粒劑或作為水性或非水性液體中之溶液或懸浮液，或作為水包油或油包水液體乳液，或作為酏劑或糖漿，或作為錠劑（使用惰性主要整份，諸如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠）及/或作為漱口水等，每一者都含有預定量之 BRAF 抑制劑及 MEK抑制劑作為活性成分。BRAF 抑制劑和 MEK 抑制劑也可以作為丸劑、沖劑或糊劑而投予。

在本發明的進一步實施例中，將 BRAF 抑制劑和 MEK 抑制劑配製成一種或兩種單獨的醫藥組成物。

活性成分也可包埋在例如透過凝聚技術或透過介面聚合製備的微囊（例如，分別為羥甲基纖維素微囊或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊）中、膠體藥物遞送系統（例如脂質體、白蛋白微球、微乳、奈米顆粒及奈米微囊 (nanocapsule)）中或粗滴乳狀液中。該等技術揭示於 Remington's Pharmaceutical Sciences, 第 16 版, Osol, A. (主編) (1980) 中。

用於體內給藥的製劑必須是無菌的。無菌性可易於例如藉由無菌濾膜過濾來達成。

劑量可在較寬界限內改變，且當然在各種特定情況下都必需根據個人需要調整。在口服投予的情況下，成人的劑量可在每天約 0.01 mg 至約 1000 mg 的通式 (I) 化合物或其對應量的醫藥上可接受之溶劑合物之間改變。每日劑量可以單一劑量或均分劑量投予，且此外，當發現有指示時，亦可超過上限。

以下實例舉例說明本發明而非限制本發明，而僅作為其代表。醫藥組成物方便地含有約 1~500 mg，特別是 1~100 mg 的式 (I) 化合物。醫藥組成物方便地含有約 1~500 mg，特別是 1~100 mg 的式 (II) 化合物。在某些實施例中，含有式 (I) 化合物的醫藥組成物另外含有約 1-500 mg，特別是 1-100mg 固定劑量組合之 MEK 抑制劑。

如本發明之組成物的非限制性實例為：實例 A

以下組成物的錠劑以通常方法製造：

成分	mg/錠劑
5	25	100	500
式 (I) 化合物	5	25	100	500
無水乳糖 DTG	125	105	30	150
Sta-Rx 1500	6	6	6	60
微晶纖維素	30	30	30	450
硬脂酸鎂	1	1	1	1
總	167	167	167	831

表 3：可能的錠劑組成物

製造程序1. 混合成分 1、成分 2、成分 3 及成分 4，並以純水製粒。 2. 在 50℃ 乾燥顆粒。 3. 使顆粒通過適合的研磨設備。 4. 加入成分 5 並混合三分鐘；在適合的加壓機上壓縮。實例 B-1

製造以下組成物的膠囊：

成分	mg/膠囊
5	25	100	500
式 (I) 化合物	5	25	100	500
含水乳糖	159	123	148	-
玉米澱粉	25	35	40	70
滑石	10	15	10	25
硬脂酸鎂	1	2	2	5
總	200	200	300	600

表 4：可能的膠囊成分組成物

製造程序1. 在適合的混合器中將成分 1、成分 2 及成分 3 混合 30 分鐘。 2. 添加成分 4 及成分 5，並混合 3 分鐘。 3. 充填入適合的膠囊中。

將式 (I) 化合物、乳糖及玉米澱粉首先在混合器中混合，然後在粉碎機中混合。將混合物送回混合器；添加滑石於其中並充分混合。將混合物藉由機器充填至適合的膠囊中，例如硬質明膠膠囊。實例 B-2

製造以下組成物的軟質明膠膠囊：

成分	mg/膠囊
式 (I) 化合物	5
黃蠟	8
氫化大豆油	8
部分氫化植物油	34
大豆油	110
總	165

表 5：可能的軟質明膠膠囊成分組成物

成分	mg/膠囊
明膠	75
甘油 85%	32
Karion 83	8 (乾物質)
二氧化鈦	0.4
氧化鐵黃	1.1
總	116.5

表 6：可能的軟質明膠膠囊組成物

製造程序

將式 (I) 化合物溶於其他成分的溫熱熔融物中，並將混合物充填至適當大小的軟質明膠膠囊中。根據通常程序處理經充填的軟質明膠膠囊。實例 C

製造以下組成物的栓劑：

成分	mg/ 栓劑
式 (I) 化合物	15
栓劑質量	1285
總	1300

表 7：可能的栓劑組成物

製造程序

將栓劑在玻璃或鋼製容器中融化，充分混合並冷卻至 45℃，隨後，添加經細粉化的式 (I) 化合物並攪拌直至其完全分散。將混合物倒入適當大小的栓劑模具中，待冷，然後將栓劑從模具中移出並個別包裝於蠟紙或金屬箔中。實例 D

製造以下組成物的注射溶液：

成分	mg/注射溶液。
式 (I) 化合物	3
聚乙二醇 400	150
乙酸	q.s. ad pH 5.0
注射用水	ad 1.0 ml

表8：可能的注射溶液組成物

製造程序

將式 (I) 化合物溶於聚乙二醇 400 及注射用水 (部分) 的混合物中。用乙酸將 pH 調整至 5.0。藉由添加剩餘量的水將體積調整至 1.0 ml。過濾溶液，使用適當的增量充填至小瓶中並滅菌。實例 E

製造以下組成物的小藥囊 (sachet)：

成分	mg/ 小藥囊
式 (I) 化合物	50
乳糖，細粉	1015
微晶纖維素 (AVICEL PH 102)	1400
羧甲基纖維素鈉	14
聚乙烯吡咯啶酮 K 30	10
硬脂酸鎂	10
調味添加劑	1
總	2500

表 9：可能的小藥囊組成物

製造程序

將式 (I) 化合物與乳糖、微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉混合，並與含聚乙烯吡咯啶酮之水的混合物製粒。將顆粒與硬脂酸鎂及調味添加劑混合，並充填入小藥囊中。

縮寫

CAS = 化學文摘社；DCM = 二氯甲烷；DIPEA = N,N-二異丙基乙胺；DMF = 二甲基甲醯胺；DMSO = 二甲亞砜；DNA = 脫氧核糖核酸；EDC·HCl = 1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；ESI = 電噴霧電離；EtOAc = 乙酸乙酯；HOOBt = 3,4-二氫-3-羥基-4-側氧-1,2,3-苯并三嗪；LC-MS/MS = 液相層析-MS/MS；MeOH = 甲醇；MS = 質譜；NMP = N-甲基-2-吡咯啶酮；PCR = 聚合酶鍊反應；rt = 室溫；SFC = 超臨界流體層析；THF = 四氫呋喃。

測試劑

(3 R)- N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺（以下簡稱化合物 Ia）以粉末形式由瑞士巴塞爾的 Roche 提供並在使用前重新懸浮。2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽（以下簡稱化合物 IIa）以粉末形式由日本東京的 Chugai 提供。考比替尼 (cat# HY-13064A)、康奈非尼 (cat# HY-15605) 和比米替尼 (cat# HY-15202) 購自 MedChemExpress。

細胞株和培養條件

細胞株從 ATCC 獲得，在標準條件下保持在 5% CO2 的濕化培養箱中，並且每周傳代兩次。培養條件報導於下表：

細細胞株	目錄 #/來源	培養條件
A375	CRL-1619	Dulbecco 改良 Eagle 培養基、高葡萄糖、GlutaMAX (DMEM GIBCO #10566016)、10% 胎牛血清 (FBS、GIBCO #10270-106)
A375-NRAS	CRL-1619IG-2	Dulbecco 改良 Eagle 培養基、高葡萄糖、GlutaMAX (DMEM GIBCO #10566016)、10% 胎牛血清 (FBS、GIBCO #10270-106)

動物 :

在活體內研究中，7-9 周大之雌性小鼠（實驗開始時）購自 Charles River Laboratories。實驗中使用的菌株為 CB.17 SCID。

對於異種移植物之形成，將細胞懸浮在由 50% Matrigel 和 50% Hank's 平衡鹽溶液組成之培養基中，並在右側腹皮下注射。當腫瘤體積達到約 100 mm ³時，小鼠在治療前被隨機分組。實例

提供以下實例和附圖以說明本發明但不具有限制特徵。實例 1

呈現 BRAF V600E 和 RAF 二聚體誘導突變 NRAS Q61K 之 A375 細胞株被用來模擬對 BRAFi 和 BRAFi/MEKi 組合的抗性機制。A375 NRAS Q61K 細胞用化合物 Ia 或康奈非尼單獨地或與 10nM MEKi 考比替尼組合處理 1 小時，然後用於磷酸化 ERK 的西方墨點分析，這也稱為 P-ERK（圖 1）。類似地，A375 NRAS Q61K 細胞以 500 個細胞/孔鋪板，單獨用化合物 Ia 或康奈非尼或與 MEKi 考比替尼組合處理並孵育 12 天。得到的菌落用結晶紫/甲醇溶液固定並染色（圖 2）。依據其逆理破壞劑特性，與康奈非尼相比，化合物 Ia 驅使更佳的 P-ERK 抑制作用，並且相應地，與康奈非尼/考比替尼之組合所觸發的相比，化合物 Ia 與考比替尼之組合產生更佳的 P-ERK 抑制。實例 2

免疫缺陷小鼠被植入呈現 BRAF V600E 和 RAF 二聚體誘導突變 NRAS Q61K 之細胞株 A375 NRAS，作為對第一代 BRAFi 及 BRAFi/MEKi 之抗性模型。腫瘤形成後 (100 mm3) 小鼠被隨機化並每天 (QD) 口服 (PO) 一次化合物 Ia (20 mg/kg)、其與 MEKi 考比替尼 (5 mg/kg, QD PO) 之組合、或單獨的考比替尼（圖 3）。還用化合物 Ia (20 mg/kg) 每天一次與不同的 MEK 抑制劑比米替尼（10 mg/kg，BID PO）組合處理同一小鼠模型（圖 4）。為了比較，其中一個實驗組之動物接受逆理誘導 BRAFi 康奈非尼（36 mg/kg，QD PO）與比米替尼之組合治療，該組合為 FDA 批准之用於治療轉移性黑色素瘤之組合。還用化合物 Ia (20 mg/kg) 每天一次與不同的 MEK 抑制劑化合物 IIa 組合處理同一小鼠模型（一組為 0.0625 mg/kg，PO；第二組為 1.0 mg/kg，PO）（圖 5）。實例 3

A375 細胞株獲自 ATCC，在標準條件下保持在 5% CO2 的濕潤培養箱中。在 384 孔板（U 底部）上，用指定濃度的康奈非尼及化合物 IIa 處理細胞 7 天。藉由 CellTiter-Glo 2.0（Promega，G9243）和 EnVision 讀板器 (Perkin Elmer) 測量細胞活力。化合物對細胞生長的抑制率由公式 (1 - (T - V0)/(V - V0)) x 100 (%) 計算，其中 T 表示具有化合物的孔的測量值，V 表示沒有化合物的孔的測量值，並且 V0 表示沒有細胞的孔的測量值。計算 80% 抑制濃度 (IC80) 的值，並繪製 IC80 的等效線圖。X 軸和 Y 軸分別表示化合物 IIa 及康奈非尼之濃度。等值線為雙曲線，並位於加性線（虛線）下方，指示康奈非尼與化合物 IIa 之間的協同效應（圖 6）。

細細胞株	目錄 #/來源	培養條件
A375	CRL-1619	DMEM、高葡萄糖 (Sigma-Aldrich, D5796)、10% FBS (Corning, 35-076-CV)、1 mM 丙酮酸鈉 (GIBCO, 11360-070)

圖 1揭示了與第一代 BRAF 抑制劑康奈非尼相比，在細胞株 A375 BRAF/NRAS 中 (3 R)- N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺（本文稱為化合物 Ia）組合 MEK 抑制劑考比替尼 (Cobimetinib) 的 P-ERK 抑制作用。圖 2揭示了與第一代 BRAF 抑制劑康奈非尼相比，化合物 Ia 組合 MEK 抑制劑考比替尼在細胞株 A375 BRAF/NRAS 中的生長抑制作用。圖 3揭示了與單一療法相比，化合物 Ia 與考比替尼之組合致使植入細胞株 A375 NRAS 的小鼠的腫瘤體積急劇且協同地減小。圖 4揭示了與第一代 BRAF 抑制劑康奈非尼與比米替尼 (Binimetinib) 之組合相比，化合物 Ia 組合比米替尼對植入細胞株 A375 NRAS 的小鼠的腫瘤體積具有明顯的協同效應。圖 5揭示了與單一療法相比，化合物 Ia 組合 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺鈉鹽（本文稱為化合物 IIa）對植入細胞株 A375 NRAS 的小鼠的腫瘤體積具有明顯的劑量依賴性協同效應。圖 6揭示了康奈非尼與化合物 IIa 組合對細胞株 A375 的生長抑制作用具有明顯的協同效應。

Claims

一種 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 BRAF 抑制劑為式 (I) 化合物
(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物。
如請求項 1 之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該式 (I) 化合物為 (3R)-N-[2-氰基-4-氟-3-(3-甲基-4-側氧-喹唑啉-6-基)氧-苯基]-3-氟-吡咯啶-1-磺醯胺。
如請求項 1 或 2 之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑係選自 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺、考比替尼 (cobimetinib)、曲美替尼 (trametinib) 及比米替尼 (binimetinib)，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項 1 至 3 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為 2-(4-環丙基-2-氟苯胺基)-3,4-二氟-5-[[3-氟-2-(甲基胺磺醯基胺基)吡啶-4-基]甲基]苯甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項 1 至 3 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該 MEK 抑制劑為考比替尼或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項 1 至 5 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用為藥物。
如請求項 1 至 5 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其用於癌症之治療性及/或預防性治療。
一種如請求項 1 至 5 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合用於製備藥物之用途，該藥物用於治療或預防癌症。
一種治療或預防癌症，特別是黑色素瘤或非小細胞肺癌之方法，該方法包含向有需要之患者投予有效量之如請求項 1 至 5 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合。
一種醫藥組成物，其包含如請求項 1 至 5 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合及一種或多種醫藥上可接受之賦形劑。
如請求項 6 至 10 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑兩者係口服投予。
如請求項 6 至 11 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑同時投予。
如請求項 6 至 12 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑及該 MEK 抑制劑係共同配製。
如請求項 6 至 11 中任一項之組合、用途、方法或醫藥組成物，其中該 BRAF 抑制劑係與該 MEK 抑制劑依序投予。
如請求項 6 至 8 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為甲狀腺癌、大腸直腸癌、黑色素瘤、腦癌或非小細胞肺癌。
如請求項 6 至 9 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症係與 BRAF ^V600突變有關。
如請求項 6 至 9 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中該癌症為 BRAF ^V600突變陽性之不可切除或轉移性癌症。
如請求項 6 至 9 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其中 BRAF ^V600突變係使用包含以下之方法確定：(a) 對萃取自該患者的腫瘤組織及/或體液的樣品之核酸 (例如 DNA) 進行 PCR 或定序；以及 (b) 確定該樣品中 BRAF ^V600的表現。
如請求項 6 至 9 中任一項之 BRAF 抑制劑及 MEK 抑制劑之組合，其包含選自以下之一種或多種額外抗癌劑：MEK 降解劑、EGFR 抑制劑、EGFR 降解劑、HER2 及/或 HER3 之抑制劑、HER2 及/或 HER3 之降解劑、SHP2 抑制劑、SHP2 降解劑、Axl 抑制劑、Axl 降解劑、ALK 抑制劑、ALK 降解劑、PI3K 抑制劑、PI3K 降解劑、SOS1 抑制劑、SOS1 降解劑、訊息傳遞路徑抑制劑、查核點抑制劑、細胞凋亡路徑之調節劑、細胞毒性化學治療劑、血管生成靶向療法、免疫靶向劑及抗體藥物結合物。
一種醫藥組成物，其包含式 (I) 化合物
(I) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物及一種或多種醫藥上可接受之賦形劑，該醫藥組成物與 MEK 抑制劑組合用於治療或預防癌症。
一種醫藥組成物，其包含式 (II) 化合物
(II) 或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物及一種或多種醫藥上可接受之賦形劑，該醫藥組成物與 BRAF 抑制劑組合用於治療或預防癌症。
如前文所述之本發明。