CN1175729C - 大豆原位丛生芽组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
一种大豆原位丛生芽组织培养方法，属于生物技术领域。本发明采用大豆再生腋芽分生组织的方法，大豆种子经消毒处理，放在MSB+6-BA0.1～1mg/L，pH5.8的萌发培养基上萌发得到大豆无菌苗；去除顶尖生长点，保留二片子叶，把外植体放在MSB+6-BA0.5～4mg/L，pH5.8的长芽培养基上进行培养；不定芽长大切下再放在MSB+IBA0.1～0.5mg/L，pH5.8的生根培养基上，长出根系得到再生苗后移栽到大盆，经培养后得到再生苗。本发明能促使其产生丛生的不定芽，芽生长快，且封顶芽少，植株生长健壮，培养时间缩短，各种间组织培养再生差异小，用本发明方法建立大豆原位丛生芽高效再生系统适合于各种大豆品种的组织培养，并能快速得到大豆组培苗。
Description
技术领域
本发明涉及一种大豆组织培养的方法，特别是一种大豆原位丛生芽组织培养方法，属于生物技术和现代农业技术领域。
背景技术
利用生物技术改良大豆已成为现代农业的一项重要技术途径。而组织培养是生物技术的基础。大豆组织培养的成功取决于是否具有良好的再生系统。经文献检索发现，程林梅等在《中国油料作物学报》，1998年20(2)：6～8，撰文“大豆不同外植体植株再生的研究”，该文对不同大豆品种诱导率研究表明下胚轴＞上胚轴＞小真叶＞幼胚，再生频率为34％，最高达50％。报导提及大豆诱导再生植株频率低，重复性差。袁鹰等人在《大豆科学》，2001年20(1)：P9～13，撰文“大豆组织培养再生植株研究”，该文对大豆子叶节、叶片、叶柄等组织培养有过研究报导，初步建立了以子叶节为外植体的再生体系。由于缺乏一个高效大豆再生植株体系，大豆组织培养困难。其不定芽少，繁殖倍数低生长慢，在培养中品种基因型间差异大，已影响到利用生物技术改良大豆的研究，因而成为目前组培中的难点。
发明内容
本发明针对背景技术的不足和缺陷，克服大豆组织培养中再生能力低的培养方法，提供一种大豆原位丛生芽组织培养方法，通过高效的植株再生系统，使其解决在组织培养中大豆不定芽少，繁殖数量低，生长慢和基因型间差异大的难点，达到大豆组织培养的再生芽多，并通过培养基的培养使再生植株健壮的目的。本发明的技术方案是这样实现的：本发明采用大豆再生腋芽分生组织的方法，大豆种子经消毒处理，放在萌发培养基上萌发大豆无菌苗；去除顶尖生长点，保留二片子叶，并制造一定的伤口，把外植体放在长芽培养基上；不定芽长大切下再放在生根培养基上，长出根系得到再生苗后移栽到大盆，用这种培养基方法可以得到很多丛生的大豆不定芽，经培养后得到再生苗。
以下对本发明作进一步的描述，方法步骤如下：
(1)种子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次氯酸钠溶液中15～25分钟，用无菌水清洗2～4次，消毒种子放在MSB+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1～1mg/L，pH5.8，萌发培养基上23℃～25℃萌发3～6天。
(2)萌发大豆取出顶尖生长点，保留二片子叶，放在MSB+6-BA0.5～4mg/L，pH5.8，长芽培养基上保持23℃～28℃，培养20天～30天至芽长至2～4cm高。
(3)切下不定芽放在MSB+IBA(吲哚丁酸)0.1～0.5mg/L，pH5.8，生根培养基上23℃诱导生根15～25天，移栽到大盆，经培养后得到再生苗。
本发明具有实质性特点和显著进步，与选用子叶、子叶节等外植体培养再生植株相比，本发明能产生丛生的不定芽、芽生长快且封顶芽少、植株生长健壮、培养时间缩短、各品种间组织培养再生差异小，用本发明方法建立大豆原位从生芽高效再生系统适合于各种大豆品种的组织培养，并能快速得到大豆组织苗。
具体实施方式
以下本发明方法的内容提供以下三个实施例：
实施例1
试验品种为合丰35，50粒；
种子用水清洗放在70％酒精中25秒，取出在10％的次氯酸钠溶液15分钟，用无菌水清洗2次，消毒种子放在MSB+6-BA0.1mg/L，pH5.8，萌发培养基上23℃萌发5天；萌发大豆取出顶尖生长点，保留二片子叶，放在MSB+6-BA1mg/L，pH5.8，长芽培养基上保持23℃30天，培养至3cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.1mg/L，pH5.8，生根培养基23℃诱导生根15天，移栽到大盆，得到再生苗；获得合丰35号再生植株156株。再生率比常规子叶节为外植体的方法提高了60％。
实施例2
试验品种为合丰39号，50粒；
种子用水清洗放在70％酒精中30秒，取出在10％次氯酸钠溶液20分钟，用无菌水清洗3次，消毒种子放在MSB+6-BA0.5mg/L，pH5.8，萌发培养基上24℃萌发4天；萌发大豆取出顶尖生长点，保留二片子叶，放在MSB+6-BA2mg/L，pH5.8，长芽培养基上保持24℃萌发25天，培养至3.5cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.3mg/L，pH5.8，生根培养基上23℃诱导生根20天，移栽到大盆得到再生苗；获得合丰39号再生植株189株。再生率比常规子叶节为外植体的方法提高了65％。
实施例3
试验品种为东农43，50粒；
种子用水清洗放在70％酒精中35秒，取出放在10％次硫酸钠25分钟，用无菌水洗4次，消毒种子放在MSB+6-BA0.8mg/L，pH5.8，萌发培养基上25℃萌发3天；萌发大豆取出顶尖生长点，保留二片子叶，放在MSB+6-BA4mg/L，pH5.8，长芽培养基上保持26℃培养基上20天，培养至4cm高；切下不定芽放在MSB+IBA0.5mg/L，pH5.8，生根培养基上25℃诱导生根25天，移栽到大盆得到再生苗；获得东农43再生植株173株。再生率比常规子叶节为外植体的方法提高了50％。
Claims (2)
1、一种大豆原位丛生芽组织培养方法，其特征在于，采用大豆再生腋芽分生组织的方法，大豆种子经消毒处理，放在MSB+6-BA0.1～1mg/L，pH5.8的萌发培养基上萌发得到大豆无菌苗；去除顶尖生长点，保留二片子叶，把外植体放在MSB+6-BA0.5～4mg/L，pH5.8的长芽培养基上进行培养；不定芽长大切下再放在MSB+IBA0.1～0.5mg/L，pH5.8的生根培养基上，长出根系得到再生苗后移栽到大盆，经培养后得到再生苗。
2、根据权利要求1所述的这种大豆原位丛生芽组织培养方法，其特征是，方法步骤如下：
(1)种子用水清洗放在70％的酒精中25～35秒，取出放在10％的次氯酸钠15～25分钟用无菌水清洗2～5次，消毒种子放在MSB+6-BA0.1～1mg/L，pH5.8，萌发培养基上23℃～26℃萌发3～6天；
(2)将萌发的大豆在解剖镜下用解剖刀去除两片子叶间顶芽和侧芽的生长点，保留二片子叶，放在MSB+6-BA0.5～4mg/L，pH5.8，长芽培养基上保持23℃～28℃，培养20天～30天至2～4cm高；
(3)切下不定芽放在MSB+IBA0.1～0.5mg/L，pH5.8，生根培养基上23℃诱导生根15～25天，移栽到大盆，经培养后得到再生苗。
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