CN117517637A - 一种包含多糖芯片试剂盒及其用途 - Google Patents

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张�林
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Abstract

本发明提供了一种包含多糖芯片试剂盒及其用途，涉及生物检测领域。本发明检测试剂盒包括检测多糖GlcNAc‑β‑1,2‑Man‑α‑OCH2CH2CH2NH2的配体的多糖芯片，可以有效筛查子宫脱垂，应用前景良好。

Description

一种包含多糖芯片试剂盒及其用途
技术领域
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种包含多糖芯片试剂盒及其用途。
背景技术
子宫脱垂是一种常见的妇科疾病，影响着广大女性的生活质量。此疾病的产生主要是由于盆底肌肉和韧带的松弛或损伤，导致子宫从正常的位置下移，甚至脱出阴道口。这种疾病不仅给患者带来身体上的痛苦，还可能引发一系列的心理压力和社会问题。因此，对子宫脱垂进行早期筛查显得尤为重要。
目前，医生通常通过询问患者症状、进行体格检查以及必要的影像学检查来进行筛查，这不仅需要一定的时间，而且对医生的经验和技能有较高的要求。此外，这些方法还可能给患者带来一定的不适和心理压力。因此，开发一种快速、无创、准确的子宫脱垂筛查方法显得尤为重要。
生物芯片技术的快速发展为医学筛查领域提供了新的可能。生物芯片是一种微型、高密度的生物实验系统，可以将大量的生物检测分析集成在一个芯片上，从而实现快速、高效、自动化的生物样品分析。多糖芯片是其中的一种类型，它可以用于检测生物样品中特定多糖分子及其配体的表达水平，为疾病诊断提供新的指标。
然而，关于血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体与子宫脱垂的关系，目前还未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种包含多糖芯片试剂盒及其用途。
本发明提供了一种检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂在制备子宫脱垂筛查试剂盒中的用途。
本发明多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的结构解释如下：GlcNAc表示N-乙酰氨基葡萄糖；Man表示甘露糖；α表示α前紧挨的糖类是α构型；β表示β前紧挨的糖类是β构型；“GlcNAc-β-1,2-Man-α”表示β构型的GlcNAc的第1位置连接着α构型的Man的第2位置，“Man-α-OCH2CH2CH2NH2”表示α构型的Man的第1位置与-OCH2CH2CH2NH2相连。
进一步地，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂包括多糖芯片检测试剂、色谱质谱联用试剂、亲水作用色谱串联质谱试剂。
进一步地，所述多糖芯片检测试剂包含固定了多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的多糖芯片。
进一步地，所述检测多糖芯片为GA-Glycan-100多糖芯片。
所述多糖芯片检测试剂是多糖芯片检测技术使用的试剂。多糖芯片检测技术是一种快速、高效、高通量获取糖-生物大分子相互作用信息的生物检测技术，其原理是将特定结构的糖分子作为探针通过共价或非共价作用固定在基质上形成芯片，检测时与芯片上特定结构的糖分子探针有特异作用的样品分子会被吸附，其他无特异作用的分子则在清洗液的冲洗下被洗掉，再利用荧光染色等检测方法就可以将这些有特异作用的分子简单、快速地筛选出来。本申请中固定了多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的多糖芯片，可与吸附样品中的多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2配体相结合，进而达到有效检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2配体水平的目的。
进一步地，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂是检测人血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
本发明还提供一种子宫脱垂筛查试剂盒，其特征在于，它包括用于检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
进一步地，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂包括多糖芯片检测试剂、色谱质谱联用试剂、亲水作用色谱串联质谱试剂。
进一步地，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂为GA-Glycan-100。
进一步地，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂是检测人血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
本发明将检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂用于制备子宫脱垂筛查试剂盒，能够实现子宫脱垂的有效筛查。
实验结果表明，本发明提供了一种子宫脱垂检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒可以通过检测血清中的多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平，可以筛选待检人群子宫脱垂的风险程度，若多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平低，其患子宫脱垂的可能性大，多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平高，其患子宫脱垂的可能性小，该试剂盒可用于妇科检查、手术前评估、疗效监测等方面，为子宫脱垂的诊断和治疗提供新的工具，临床应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为子宫脱垂患者与健康人ROC分析图。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平与子宫脱垂的关系
一、实验方法
(一)临床治疗
研究对象为收集12名子宫脱垂症患者，12名子宫健康对照者的血清样品。子宫脱垂的诊断由临床诊断确认，上述子宫脱垂患者均招募自四川大学华西第二医院，健康对照者的样品来四川大学华西第二医院。受试者的基础信息见表1：
表1受试者的基础信息
基本信息 子宫脱垂患者 健康对照
人数(n) 12 12
年龄(Y) 63.17±9.23 44.17±6.29
获取所有对象的静脉血(肘正中静脉)5ml，置于抗凝管中，随后室温下3000rpm/min离心15min，取血清并分装冻存于-80℃冰箱。
(二)检测试剂及步骤
本发明使用多糖芯片进行检测：
使用试剂盒，购买自RayBiotech货号为GA-Glycan-100，其上固定了多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2。
1、GA-Glycan-100试剂盒主要成分如表1：
表1GA-Glycan-100试剂盒主要成分
2、检测步骤：
(1)样品透析
取待检血清样品在生物素标记前需要利用透析管进行透析(Item A)。取样品80ul分别加入到透析管中，然后在3000ml的1×PBS(pH＝8)中4℃边搅拌边透析。间隔3小时更换透析液一次。
注：1×PBS的配制：1.0g KCl,40g NaCl,1.0g KH2PO4,5.75g Na2HPO4用4,500ml去离子水溶解，用1M NaOH调节pH＝8.0，最后用去离子水定容至5,000ml。
(2)生物素标记样品
2.1使用标记试剂前，将标记试剂小管快速离心后，管中加入100μL1×PBS溶解粉末，上下吹打将生物素标记试剂混匀，制备成1×标记试剂溶液；
2.2向装有样本的离心管中加入的1×标记试剂，快速混匀，摇床上室温孵育30min，每5min轻弹离心管，混合反应试剂；
2.3在上步反应液中加入3μL终止液，然后用透析管去除未结合生物素，得到生物素标记样品液；
2.4取得到的生物素标记样品液200μL加入到透析管中，加入透析管中，然后在3000ml的1×PBS(pH＝8)中4℃边搅拌边透析。间隔3小时更换透析液一次。得到透析后的生物素标记样品液。
(3)芯片检测
3.1每个孔中加400μl的缓冲液，室温摇床上孵育1h，封闭多糖芯片；
3.2抽去每个孔中的缓冲液，添加400μl透析后的生物素标记样品液到孔中，在摇床上4℃孵育过夜；
3.3抽去样品，每个孔中加入约1mL的1×洗液I室温振荡，洗玻片4次，每次5min；抽去1×洗液I，加入1×洗液II室温振荡，洗玻片4次，每次5min；
3.4清洗，同步骤3.3；
3.5Cy3-链霉亲和素的孵育
离心Cy3-链霉亲和素小管，然后加入1ml的样品稀释液，混合均匀后5倍稀释，添加400μl稀释的Cy3-链霉亲和素到每个孔中，用铝箔纸包住玻片避光孵育，室温摇床上孵育1个小时；
3.6清洗，同步骤3.3；
3.7荧光检测
1)将玻片放置在玻片清洗管中，添加约30ml的1×洗液I，能整个覆盖住玻片，在室温摇床上震荡15min，弃去1×洗液I，添加约30ml的1×洗液II，在室温摇床上震荡5min；
2)去除玻片的残留洗液
将玻片放置在玻片清洗管/干燥管中，不盖盖子，在1000rpm离心3min；
3)采用激光扫描仪例如InnoScan 300扫描信号，采用Cy3或者绿色通道(激发频率＝532nm)扫描；仪器型号：InnoScan 300Microarray Scanner厂家:Innopsys；产地：Parcd'Activités Activestre；31 390Carbonne–France；扫描参数：WaveLengh：532nm；Resolution：10μm
3.8采用GA-Glycan-100的数据分析软件来进行数据分析。
二、实验结果
GA-Glycan-100的数据分析结果如表2。
表2平均表达水平结果
子宫脱垂患者血清中的多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的平均水平，配体相对定量对数值为10.309842，健康对照血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的平均水平，配体相对定量对数值为12.39844，子宫脱垂组与健康对照组(p<0.01)相比均有统计学意义(p为7.47e-05)。
子宫脱垂组与健康对照ROC分析结果AUC为0.924；表明血清中GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2可特异地区分子宫脱垂与健康人群，并且特异性、敏感性高，如图1。
表明血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平可特异地区分子宫脱垂与健康人群。
综上，本发明提供了一种包含多糖芯片试剂盒及其用途。本发明的试剂盒可以通过检测血清中的多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2，的配体水平，可以筛选待检人群子宫脱垂的风险程度，若多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平低，其患子宫脱垂的可能性大，多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平高，其患子宫脱垂的可能性小，该试剂盒可用于妇科检查、手术前评估、疗效监测等方面，为子宫脱垂的诊断和治疗提供新的工具，临床应用前景良好。

Claims (9)

1.检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂在制备子宫脱垂筛查试剂盒中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂包括多糖芯片检测试剂、色谱质谱联用试剂、亲水作用色谱串联质谱试剂。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多糖芯片检测试剂包含固定了多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的多糖芯片。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述多糖芯片为GA-Glycan-100多糖芯片。
5.如权利要求1～4任一所述的用途，其特征在于，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂是检测人血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
6.一种子宫脱垂筛查试剂盒，其特征在于，它包括用于检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
7.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂包括多糖芯片检测试剂、色谱质谱联用试剂、亲水作用色谱串联质谱试剂。
8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂为GA-Glycan-100。
9.如权利要求6述的试剂盒，其特征在于，所述检测多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂是检测人血清中多糖GlcNAc-β-1,2-Man-α-OCH2CH2CH2NH2的配体的水平的试剂。
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