CN117512037A - 一种替考拉宁的纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药制备技术领域，特别涉及一种替考拉宁的纯化方法，包括以下步骤：步骤(1)将替考拉宁发酵滤液解析浓缩得解析浓缩液；步骤(2)将乙醇除蛋白液过滤浓缩后得层析上柱液；步骤(3)通过离子交换层析介质NM‑Q进行层析；步骤(4)将步骤(3)得到的层析液进行浓缩，并加入丙酮形成沉淀物，并分离过滤，得到替考拉宁的成品粉。本发明的有益效果在于：替考拉宁是多组分的产品，每个系中含有氨基不同可以跟离子交换树脂结合从而使得替考分离开来，使得其组分可以分开，收集符合要求的部分，将有效部分混合得到有效收集液，再进行最后的结晶得到符合标准的成品粉；既可以提高收率，又能够满足生产的要求。
Description
技术领域
本发明涉及医药制备技术领域，特别涉及一种替考拉宁的纯化方法。
背景技术
替考拉宁(Teicoplanin)为替考游动放线菌发酵产生的一组糖肽类抗生素，是继国际公认的抗耐药菌抗生素万古霉素后开发的另一种抗耐药菌糖肽类抗生素，主要对革兰氏阳性需氧和厌氧菌具有较强的抗菌活性，特别对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的感染有很好的疗效，是目前临床上为数不多的仍具有对多重耐药性金黄色葡萄球菌和肠球菌有抗菌活性的药物之一。
现有的替考拉宁主要的提纯方法有萃取法、吸附法、离子交换法和色谱层析法等。在这些方法中，最常用的是树脂吸附法，在现有
技术中替考拉宁将发酵液碱化后过滤，用大孔吸附树脂吸附后，用氨水作为解析剂进行解析，解析液进行活性炭脱色、过滤，后通过聚合物色谱填料层析，浓缩后加入溶剂得到替考拉宁粗品。
在上述的方法中，所制备得到的成品粉颜色偏深，杂质偏高，澄清度在合格边缘，因此，亟需开发一种可有效稳定生产替考拉宁的工艺。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种使替考拉宁的杂质、澄清度以及颜色达到更好水平的替考拉宁的纯化方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：提供一种替考拉宁纯化的方法，包括以下步骤：
步骤(1)将替考拉宁发酵滤液通过大孔吸附树脂吸附解析，将解析液浓缩赶醇得解析浓缩液；
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，控制乙醇溶液质量浓度为35％-80％，并用NaOH调节pH＝9.0-12.0，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，将乙醇除蛋白液过滤浓缩后得层析上柱液；
步骤(3)将步骤(2)得到的层析上柱液通过离子交换层析介质-NM-Q进行层析，得高纯度低杂质的层析液；
步骤(4)将步骤(3)得到的层析液进行浓缩，并加入丙酮形成沉淀物，并分离过滤，得到替考拉宁的成品粉。
优选的，上述的替考拉宁纯化的方法中，所述步骤(1)具体为：将替考拉宁发酵滤液通过大孔吸附树脂吸附解析，先用溶质质量百分数为10％-30％的乙醇溶液进行预洗2BV，再用溶质质量百分数为30％-75％的乙醇溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为20-60g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
优选的，上述的替考拉宁纯化的方法中，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇溶液的溶质质量百分数为35％-80％，并用NaOH调节PH＝9.0-12.0，搅拌0.5-2.0h，静置5-15h，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，调节pH＝6.0-9.0，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为5-20g/L，停止浓缩得料液，调节料液的乙醇的质量百分数为20-45％得到上柱液。
优选的，上述的替考拉宁纯化的方法中，所述步骤(3)具体为：将步骤(2)得到的层析上柱液上柱NM-Q离子交换树脂，用含有0.1-2.0％氯化钠20-45％乙醇溶液进行洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
优选的，上述的替考拉宁纯化的方法中，所述步骤(4)具体为：将步骤(3)得到的层析液用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩层析液的含量为100-180g/L，停止浓缩，加入体积比1.3-1.8bv丙酮，调节pH＝8.0-12.0，搅拌0.5h，静置1-4h，过滤，滤液调节pH＝3.5-5.0，加入活性炭，搅拌0.5h过滤，调节pH＝6.5-8.0，加入5-10bv丙酮结晶，得到成品粉。
本发明的有益效果在于：本发明利用离子交换层析介质的方式来提纯替考拉宁，主要是因为替考拉宁是多组分的产品，每个组分中含有氨基不同，可以跟离子交换树脂结合从而使得替考分离开来，使得其组分可以分开，收集符合要求的部分，将有效部分混合得到有效收集液，再进行最后的结晶得到符合标准的成品粉；既可以提高收率，又能够满足生产的要求。使用该工艺能够得到符合要求的替考拉宁成品粉，同时收率明显的提高，提高产能。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
实施例1
一种替考拉宁纯化的方法，包括以下步骤：
步骤(1)50L替考拉宁发酵液经陶瓷过滤后得滤液，含量3g/L上柱大孔吸附树脂5L，配置10％乙醇浓度的预洗液进行预洗2BV，配置30％乙醇度溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为20g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇度35％，用NaOH调节pH＝9.0，搅拌0.5h，静置5h，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，乙醇除蛋白液调节pH＝6.0，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为5g/L，停止浓缩，调节乙醇度为20％，控制pH＝6.0，得上柱液；
步骤(3)将上述步骤(2)得到的上柱液按20g/L上柱离子交换层析介质NM-Q，配置20％浓度的乙醇溶液进行预洗2BV，配置0.1％氯化钠20％乙醇溶液进行洗脱，洗脱至尾样无含量停止洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
步骤(4)将步骤(3)得到的有效收集液用300分子量纳滤膜浓缩，压缩有效收集液的含量为100g/L，停止浓缩，加入体积比1.3bv丙酮，调节pH＝8.0，搅拌0.5h，静置1h，过滤，滤液调节pH＝3.5，加入活性炭，搅拌0.5h过滤，调节pH＝8.0，加入5bv丙酮结晶，得到成品粉。
实施例2
一种替考拉宁纯化的方法，包括以下步骤：
步骤(1)50L替考拉宁发酵液经陶瓷过滤后得滤液，含量3g/L上柱大孔吸附树脂5L，配置15％乙醇浓度的预洗液进行预洗2BV，配置30％乙醇度溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为45g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇度50％，用NaOH调节pH＝10.0，搅拌1h，静置10h，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，乙醇除蛋白液调节pH＝7.0，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为10g/L，停止浓缩，调节乙醇度为35％，控制pH＝7.0，得上柱液；
步骤(3)将上述步骤(2)得到的上柱液按20g/L上柱离子交换层析介质NM-Q，配置35％浓度的乙醇溶液进行预洗2BV，配置0.8％氯化钠30％乙醇溶液进行洗脱，洗脱至尾样无含量停止洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
步骤(4)将步骤(3)得到的有效收集液用300分子量纳滤膜浓缩，压缩有效收集液的含量为150g/L，停止浓缩，加入体积比1.6bv丙酮，调节pH＝10.0，搅拌0.5h，静置2h，过滤，滤液调节pH＝4.0，加入活性炭，搅拌0.5h过滤，调节pH＝7.0，加入7bv丙酮结晶，得到成品粉。
实施例3
一种替考拉宁纯化的方法，包括以下步骤：
步骤(1)50L替考拉宁发酵液经陶瓷过滤后得滤液，含量3g/L上柱大孔吸附树脂5L，配置30％乙醇浓度的预洗液进行预洗2BV，配置30％乙醇度溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为60g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇度80％，用NaOH调节pH＝12.0，搅拌2.0h，静置15h，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，乙醇除蛋白液调节pH＝9.0，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为20g/L，停止浓缩，调节乙醇度为45％，控制pH＝9.0，得上柱液；
步骤(3)将上述步骤(2)得到的上柱液按20g/L上柱离子交换层析介质NM-Q，配置45％浓度的乙醇溶液进行预洗2BV，配置2.0％氯化钠45％乙醇溶液进行洗脱，洗脱至尾样无含量停止洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
步骤(4)将步骤(3)得到的有效收集液用300分子量纳滤膜浓缩，压缩有效收集液的含量为180g/L，停止浓缩，加入体积比1.8bv丙酮，调节pH＝12.0，搅拌0.5h，静置4h，过滤，滤液调节pH＝5.0，加入活性炭，搅拌0.5h过滤，调节pH＝8.0，加入10bv丙酮结晶，得到成品粉。
对比例1
一种替考拉宁纯化的方法，包括以下步骤：
步骤(1)50L替考拉宁发酵液经陶瓷过滤后得滤液，含量3g/L上柱大孔吸附树脂5L，配置0.1mol/L氨水溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为20-60g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇度35％-80％，用HCl调节pH＝3.0-4.0，加入质量比1.0bv活性炭，搅拌0.5-2.0h，过滤得碳脱滤液，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为5-20g/L停止浓缩，控制pH＝6.0-9.0，得上柱液；
步骤(3)将上述步骤(2)得到的上柱液按20g/L上柱聚合物色谱填料，配置20-45％浓度的乙醇溶液进行洗脱，洗脱至尾样无含量停止洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
步骤(4)将步骤(3)得到的有效收集液用300分子量纳滤膜浓缩，压缩有效收集液的含量为100-180g/L，停止浓缩，加入体积比1.3-1.8bv丙酮，调节pH＝8.0-12.0，搅拌0.5h，静置1-4h，过滤，调节pH＝6.5-8.0，加入5-10bv丙酮结晶，得到成品粉。
上述实施例1-3(新工艺)和对比例1(旧工艺)使用的替考拉宁发酵液为同一发酵液，将实施例1-3和对比例1中上柱液和替考拉宁产品分别以高效液相色谱进行杂质分析，结果如表1为新旧工艺纯度对比表，表2为新旧工艺浊度值对比表。
表1
表2
| 1号浊度值 | 对比例成品 | 实施例1成品 | 实施例2成品 | 实施例3成品 | |
| 浊度值 | 3.01 | 2.96 | 2.56 | 2.53 | 2.50 |
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (5)
1.一种替考拉宁纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)将替考拉宁发酵滤液通过大孔吸附树脂吸附解析，将解析液浓缩赶醇得解析浓缩液；
步骤(2)将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，控制乙醇溶液质量浓度为35％-80％，并用NaOH调节pH＝9.0-12.0，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，将乙醇除蛋白液过滤浓缩后得层析上柱液；
步骤(3)将步骤(2)得到的层析上柱液通过离子交换层析介质-NM-Q进行层析，得高纯度低杂质的层析液；
步骤(4)将步骤(3)得到的层析液进行浓缩，并加入丙酮形成沉淀物，并分离过滤，得到替考拉宁的成品粉。
2.根据权利要求1所述的替考拉宁纯化的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：将替考拉宁发酵滤液通过大孔吸附树脂吸附解析，先用溶质质量百分数为10％-30％的乙醇溶液进行预洗2BV，再用溶质质量百分数为30％-75％的乙醇溶液进行解析，收集的解析液用300分子量的纳滤膜浓缩，压缩解析液的含量为20-60g/L，停止浓缩得到解析浓缩液。
3.根据权利要求1所述的替考拉宁纯化的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：将步骤(1)中得到的解析浓缩液加入乙醇溶液，调节乙醇溶液的溶质质量百分数为35％-80％，并用NaOH调节pH＝9.0-12.0，搅拌0.5-2.0h，静置5-15h，搅拌静置后形成含蛋白的杂质，过滤掉含蛋白杂质，得乙醇除蛋白液，调节pH＝6.0-9.0，用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩有效收集液的含量为5-20g/L，停止浓缩得料液，调节料液的乙醇的质量百分数为20-45％得到上柱液。
4.根据权利要求1所述的替考拉宁纯化的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体为：将步骤(2)得到的层析上柱液上柱NM-Q离子交换树脂，用含有0.1-2.0％氯化钠20-45％乙醇溶液进行洗脱，收集有效组分得高纯度低杂质的层析液。
5.根据权利要求1所述的替考拉宁纯化的方法，其特征在于，所述步骤(4)具体为：将步骤(3)得到的层析液用300分子量的纳滤膜浓缩体积，压缩层析液的含量为100-180g/L，停止浓缩，加入体积比1.3-1.8bv丙酮，调节pH＝8.0-12.0，搅拌0.5h，静置1-4h，过滤，滤液调节pH＝3.5-5.0，加入活性炭，搅拌0.5h过滤，调节pH＝6.5-8.0，加入5-10bv丙酮结晶，得到成品粉。
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